MICROBIOLOGA I

LAB.N3 Determinacin de la calidad del agua por su contenido

bacterial
1- DETERMINACION DE LA CALIDAD DEL AGUA POR SU CONTENIDO
BACTERIAL.
OBJETIVO
Objetivo general

Evaluar la calidad sanitaria de 3 tipos de muestras de agua.

Objetivo especifico

Aprender la correcta manera de obtener muestras de agua.

MARCO TERICO
La calidad del agua se define como: el conjunto de caracteres fsicos qumicos y
biolgicos que deben satisfacerse con el fin de que el agua que se suministra sea
segura para el fin destinado (DGCOH, 1982).
Para que el agua sea de calidad potable debe de reunir ciertos factores:
a) Fsicos. Color, olor, sabor, temperatura, conductividad especfica, slidos, pH.
b) Qumicos. Alcalinidad, metales, nutrimentos, sulfatos, OD (Oxgeno Disuelto), DBO
(Demanda Bioqumica de Oxgeno).
c) Biolgicos. El mtodo microbiolgico para detectar la presencia de
microorganismos coliformes en el agua contempla tres fases: Prueba Presuntiva,
Prueba Confirmativa, Prueba Completa.
Los parmetros fsico-qumicos dan informacin extensa de la naturaleza de las
sustancias qumicas del agua y sus propiedades fsicas, sin aportar informacin de su
influencia en la vida acutica; los mtodos biolgicos aportan esta informacin pero no
sealan algo acerca del contaminante o contaminantes responsables.
ENFERMEDAD

AGENTE
ORIGEN BACATERIANO

Fiebres tifoideas y paratifoideas

Disentera bacilar
Clera
Gastroenteritis agudas y diarreas

Salmonella typhi, Salmonella ,Paratyphi A y B.

Shigella
Vibrio cholerae
Escherichia coli,Campylobacter
Yersiniae nterocolitica, Salmonella sp,Shigellas.

El inters se centra en los microorganismos patgenos, que son los

diferentes tipos de bacterias, virus, protozoos y otros organismos, que
transmiten enfermedades.

Bacterias del grupo coliforme

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Conceptos:

Coliformes totales (bacterias del grupo coliforme) : Bacilos gram-negativos,

aerobios o anaerobios facultativos, no formadores de esporos, oxidase-negativos,
capaces de desarrollarse en presencia de sales biliares o agentes pensativos que
fermentan la lactosa con produccin de cido, gas y aldehdo a 35,0 0,5 C en
24-48 horas, e que pueden presentar actividad de la enzima galactosa. La
mayora de las bacterias del grupo coliforme pertenece a los gneros Escherichia,
Citrobacter, Klebsiella y Enterobacter.

Coliformes termotolerantes : Subgrupo de las bacterias del grupo coliforme que

fermentan la lactosa a 44,5 0,2 C en 24 horas; teniendo por principal
representante la Escherichia coli, de origen exclusivamente fecal.

Escherichia coli bacteria del grupo coliforme que fermenta la lactosa y manitol,
con produccin de cido y gas a 44,5 0,2 C en 24 horas, produce indo a partir
del triptfano,oxidase negativa, no hidroliza la urea y presenta actividad de las
enzimas galactosa y glucuronidase, que es considerado el ms especfico
indicador de contaminacin fecal reciente y de eventual presencia de organismos
patognicos.

CARACTERES DE LAS AGUAS POTABLES

1. Organolpticos: sabor color, olor, turbidez
2. Fsico-qumicos:
pH de 7 a 8.
Oxgeno disuelto hasta5 mg/l de agua.
Residuo seco a 110C hasta 750 mg/l de agua.
Dureza total mnima 150 mg carbonato clcico por litro de agua.
Cloruros hasta 25 mg/l de agua.
Calcio hasta 100 mg/l de agua.
Magnesio hasta 30 mg/l de agua sulfatos hasta 25 mg/l de agua.
Aluminio hasta 50 microgramos/litro de agua.
Hasta 100 bacterias aerobias/ml de agua a 22C.
Hasta 10

bacterias aerobias/ml de agua 37C.

3. Microbiolgicos
Ausencia total de bacterias coniformes, Streptococus faecalis, clostridios sulfito.
Ausencia total de elementos formes.
Un mximo de 200 bacterias aerobias/ml de agua a 37C.
RECUENTO DE COLONIAS EN PLACA

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Es un mtodo muy utilizado cuando se necesita determinar el tamao de la poblacin
bacteriana de una muestra.
El recuento de microorganismos, en este caso, se basa en que cada uno desarrollar
una colonia visible. Pero debido a que una muestra no es totalmente homognea con
respecto a su composicin microbiolgica, es posible que una colonia se origine de
un microorganismo o de cientos de ellos, dando en este ltimo caso un recuento
menor del real.
Tambin es posible que muchas de las bacterias presentes en la muestra no puedan
crecer en las condiciones elegidas (pH, temperatura, medio de cultivo, tiempo, etc.).
En este caso el recuento tambin ser inferior al real. Lo que s se sabe es que cada
colonia observada se form a partir de por lo menos un microorganismo.
Esta es una condicin necesaria y suficiente. Entonces la colonia es considera una
unidad formadora de colonia (U.F.C.) a los efectos de los clculos. Se admite, por lo
tanto, que en los mtodos de recuento de microorganismos vivos, son inevitables los
errores. Especialmente cuando se examinan muestras pequeas, es posible cometer
grandes errores.
BACTERIAS COLIFORMES
- Mtodo de los tubos mltiples (NMP nmero ms probable).
Este mtodo podr utilizarse para cualquier tipo de agua y ser el
procedimiento oficial obligatorio en casos de litigio.
Determinacin del nmero de coliformes mediante siembra de distintos
volmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de cultivo
liquido lactosado y resiembra en medios de cultivo selectivos con incubacin a
temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva,
de confirmacin de coliformes totales y de confirmacin de coliformes fecales.
- Mtodo del filtro de membrana (mtodo alternativa).
Determinacin del nmero de coliformes mediante filtracin de volmenes
determinados del agua a analizar por filtros de membrana e incubacin sobre
medios de cultivo a temperaturas adecuadas. El procedimiento comprende las
determinaciones de coliformes totales y de coliformes fecales.
ESTREPTOCOCOS FECALES
- Mtodo de las tubos mltiples (NMP nmero ms probable).
Este mtodo podr utilizarse para cualquier tipo de agua y ser el
procedimiento
oficial obligatorio en casos de litigio. Fundamento.
Determinacin del nmero de estreptococos mediante siembra de distintos
volmenes del agua a analizar en series de tubos conteniendo medio de
cultivo liquido glucosado con agentes inhibidores selectivos e incubacin a
temperatura adecuada. El procedimiento comprende las pruebas: presuntiva y
de confirmacin de estreptococos fecales.
- Mtodo del turro de membrana (mtodo alternativo)

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Determinacin del nmero de estreptococos fecales mediante filtracin de
volmenes determinados del agua a analizar por filtros de membrana e
incubacin sobre medio de cultivo selectivo a temperatura adecuada.
Toma de muestras para anlisis microbiolgico
Las muestras que se tomarn para el anlisis deben ser representativas para poder
determinar as su calidad microbiolgica. Hay normas para la toma de muestras de
aguas segn sus distintas procedencias (grifos, pozos, depsitos, lagos, ros,
manantiales, etc.). Para su recogida debe utilizarse frascos estriles y debe
recolectarse cantidades comprendidas entre 500 y 1000 ml.

Agua de los grifos: Se tiene que dejar correr el agua durante un periodo de 1 a
2 minutos. Destape el frasco esterilizado con los cuidados necesarios a modo
de no contaminar el medio y luego cirrelo.
Si el agua estuviera clorada (piscinas) el frasco con el que se tomara la
muestra de 100 ml deber contener 0.1 ml de solucin de tiosulfato de sodio al
3% para neutralizar el cloro residual.
Pozos: Cuando no hay grifos u otro tipo de conduccin, amarre una cuerda
esterilizada al frasco de toma de muestras y recolecte la muestra. El frasco
debe estar lleno hasta sus 4/5 de su volumen.
Agua de superficie: Recolecte la muestra contra la corriente, lo ms distante de
la orilla y siempre bajo la superficie (ms o menos a 30 cm de profundidad).

Su anlisis debe comenzar antes de que hayan transcurrido 6 h desde el momento de

la toma de muestras. En circunstancias excepcionales, las muestras pueden
conservarse a una temperatura de 4C durante un periodo mximo de 24 h antes de
su anlisis.

Lectura e interpretacin de los resultados

Transcurrido el tiempo de incubacin pertinente se cuentan todas las colonias crecidas
en las placas. Se elige aquella dilucin en la que el nmero de colonias por placa se
encuentre entre 30 y 300 descartando las otras diluciones para el recuento. Solo se
contaran las colonias de aquellas placas que posean menos de 30 en el caso de que
sea una muestra sin diluir.
El resultado se expresara en unidades formadoras de colonias (UFC) por ml A la hora
de obtener este resultado hay que tener en cuenta que se han sembrado 0.1 ml y el
factor de dilucin.

Veamos un caso prctico: Se han contado las tres placas sembradas de la dilucin 10-4
y se ha obtenido un recuento de 43, 45 y 47 colonias respectivamente en las tres
placas. Para expresar el resultado del recuento, primeramente se hace la media de las
tres placas (43+45+47:3=45) que sera de 45 colonias. Puesto que se ha sembrado
0.1 ml. para saber el nmero de colonias por mililitro ser necesario multiplicar por 10,
por tanto ser 45x10=4.5X102 en el mililitro de la dilucin 10 -2. As, en la muestra
original el nmero de unidades formadoras de colonias por mililitro (UFC /ml) ser de
4.5x102 x104 es decir, 4.5x106 UFC/ml
PROCEDIMIENTO

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Recoger en 3 frascos esterilizados muestras de agua de distintos lugares.
Coger cierto volumen de agua de cada muestra y diluirlo con agua destilada
hasta tener las siguientes concentraciones: 1 ml; 0,1ml, 0,01ml
Preparar el agar nutritivo y vertirlo en 3 placas Petri esterilizadas.
Verter 1 ml de cada una de las nuevas concentraciones en las placas.
Incubar las placas con muestra de agua durante 50 horas variando la
temperatura de 22 - 28C segn sea el lugar del muestreo.
Despus de haber transcurrido las 48 horas realizar el respectivo conteo de
colonias. Si el recuento debe ser postergado temporalmente, guardar las
placas a 5 10C por un perodo no mayor de 24 horas, pero evitar que sea
sta una prctica de rutina
RESULTADOS
Muestras de agua

Muestra
Estanque de
Arquitectura
Estanque de pabelln
central
Grifo FIA

Fecha
19/04/16

Hora
5:30 pm

Temperatura
22C

19/04/16

5:34 am

22C

19/04/15

12:08 pm

22C

Caractersticas de las colonias

Muestra
1mL
227

Dilucin
10-1mL
47

10-2mL
12

Estanque de
pabelln central

177

Grifo Baos
Varones FIA

180

49

Estanque de
Arquitectura

U.F.C
177
-

Observaciones
Tamao de la colonia:1-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:
Tamao de la colonia:2-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:
Tamao de la colonia:1-5 mm
Color: Cremas
T.OBS:72 horas
Tiempo de incubacin:

Para realizar el contaje se escogen las placas que muestren entre 30 y 300 colonias.
Para visualizar mejor es conveniente ubicar la placa sobre una caja con tapa de vidrio
y luz. Dar el resultado en ufc/ml (no en bacterias por gramo):

CONCLUSIONES

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No se puede determinar las unidades formadoras de colonias (UFC) por

mililitro de muestra, pues los datos obtenidos estn muy dispersos y si
se calcula as los resultados obtenidos no son viables.
Se puede precisar que el agua del estanque de arquitectura est mucho
ms contaminada que el agua de la FIA; pero no se puede precisar qu
nivel de contaminacin que tiene cada muestra.
Los resultados obtenidos no son fiables; y se debe realizar nuevamente
el laboratorio.
Existe una inconsistencia entre los datos obtenidos a partir del agua del
grifo FIA y los estanques de arquitectura y pabelln central; ya que este
presenta en varias de las muestras valores que no guardan relacin con
cantidad de colonias en agua potable que por norma de ser 0 U.F.C.

RECOMENDACIONES
Se recomienda hacer una limpieza constante del estanque del pabelln central.
Se debe realizar un monitorio constante del grifo de FIA a fin de eliminar las
colonias de bacterias.
Se sugiere realizar adicional a la prueba realizada la prueba de coliformes
totales a fin de obtener una base referencial de la calidad bacteriolgica.
Se recomienda mantenimiento de reservorios de agua de la FIA a fin de evitar
posibles infecciones gastrointestinales; ya que las muestras presentaron
presencia de colonias en registro.
ANEXOS

1. Lmites mximos permisibles de parmetros

microbiolgicos.

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BIBLIOGRAFA

Food and Drug Administration (2003) Bacteriological Analytical Manual. 9th ed.
Arlington, VA: AOAC.
Madigan, M T y Martinko, J M., Brock, Biology of Microorganisms, 11a ed. 2006, pp
935-936.
Brooks, Geo F., Batel, Janet S. y Morse, Stephen A., Microbiologa Mdica de Jawetz.
Manual Moderno 17a Edicin 2002, pp 274-275
Kornacki J.L. & Johnson J.L. (2001) Enterobacteriaceae, Coliforms, and Escherichia
coli as Quality and Safety Indicators. In: Compendium of Methods for the
Microbiological Examination of Foods. 4th ed. Downs F.P. & Ito K. (Eds.) APHA.
Washington. 69-82.
International Commission on Microbiological. Specifications of Foods (2005)
Microorganisms in Foods 6 Chapman & Hall. 2nd ed.
http://www.digesa.minsa.gob.pe/publicaciones/descargas/reglamento_calidad_agua.pd
f.