REPORTE DE PRÁCTICA

LABORATORIO DE ABASTECIMIENTO DE
AGUA POTABLE

DEPARTAMENTO DE INGENIERÍA SANITARIA Y AMBIENTAL

Caracterización Microbiológica.

PRÁCTICA NÚMERO: 2

Alumno:

Profesor:

Grupo: 04

Ciudad Universitaria, Cd.Mx, a Friday, 4 de November de 2022

 Objetivo

Comprender por qué se utilizan los organismos coliformes como indicadores de la

calidad del agua, y determinar los coliformes totales y fecales en diferentes
muestras de agua.

Introducción

Análisis bacteriológico

Examen bacteriológico de abastecimiento de agua no implica la búsqueda directa

de los gérmenes patógenos.

Se basa en el supuesto de que todas las aguas contaminadas

con desechos humanos o animales son potencialmente
peligrosas.

Ensayo 1: Estimación del número de Ensayo 2: Determinación, más

bacterias de acuerdo con el conteo significativa, de la presencia o ausencia
total en placa. de miembros del grupo coliforme.

El número de organismos coliformes en el excremento humano es muy grande; la excreción diaria por
habitante varía entre 125x109 y 400x109 número de unidades formadoras de colonias

Técnica del Filtro de Membrana

La cantidad ideal de muestra que se ha de filtrar debe ser aquella que produzca un crecimiento de
máximo 30 colonias de coliformes.

 Los filtros preparados se colocan directamente sobre el medio nutriente y se incuban,

normalmente, durante 24 horas, a 37 [ºC] ó 35 [ºC].
 El procedimiento consiste en hacer pasar a través de un filtro de membrana, aplicando vacío, un
volumen medido de muestra de agua.
 En cada punto del filtro en el que durante la filtración se capta una bacteria coliforme, se
desarrollará una colonia de bacterias coliformes. Se enumeran las colonias bacterianas,
practicándose un cálculo simple para determinar el número de colonias de bacterias en 100 ml de
muestra.
Determinación de coliformes a través de tubos múltiples de fermentación.

La determinación de microorganismos coliformes totales por el método del

Número más Probable (NMP), se fundamenta en la capacidad de este grupo
microbiano de fermentar la lactosa con producción de ácido y gas al incubarlos a
35°C ± 1°C durante 48 h., utilizando un medio de cultivo que contenga sales
biliares. Esta determinación consta de dos fases, la fase presuntiva y la fase
confirmativa.

En la fase presuntiva el medio de cultivo que se utiliza es el caldo lauril sulfato de

sodio el cual permite la recuperación de los microorganismos dañados que se
encuentren presentes en la muestra y que sean capaces de utilizar a la lactosa
como fuente de carbono. Durante la fase confirmativa se emplea como medio de
cultivo caldo lactosado bilis verde brillante el cual es selectivo y solo permite el
desarrollo de aquellos microorganismos capaces de tolerar tanto las sales biliares
como el verde brillante.

La determinación del número más probable de microorganismos coliformes

fecales se realiza a partir de los tubos positivos de la prueba presuntiva y se
fundamenta en la capacidad de las bacterias para fermentar la lactosa y producir
gas cuando son incubados a una temperatura de 44.5 ± 0.1°C por un periodo de
24 a 48 h.
La búsqueda de Escherichia coli se realiza a partir de los tubos positivos de caldo
EC, los cuales se siembran por agotamiento en medios selectivos y diferenciales
(Agar Mac Conkey, Agar eosina azul de metileno) y posteriormente realizando las
pruebas bioquímicas básicas (IMViC) a las colonias típicas.

Para análisis de agua

Para la preparación del medio de cultivo utilizado en la prueba presuntiva de
muestras de agua o hielo, consultar el cuadro 1.
• 5 ó 10 tubos de 22 x 175 mm con 10.0 mL de caldo lauril sulfato de sodio
o caldo lactosado concentración doble o triple con campana de Durham.
 • 5 ó 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo bilis verde brillante con
campana de Durham.
• 5 ó 10 tubos de 16 x 150 mm con 10.0 mL de caldo EC y campana de
Durham o caldo EC MUG con campana de Durham.
• 2 cajas Petri con agar para métodos estándar
• 2 cajas Petri con agar Eosina azul de metileno
• 6 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo RM-VP
• 3 tubos de 13 x 100 con 3.0 mL c/u de caldo triptona o agar SIM
(opcional)
• 3 tubos de 13 x 100 con 3.5 mL c/u de caldo citrato de Koser o citrato de
Simmons (opcional)

Desarrollo
 Muestra de 100mL. Colocar matraz Kitasato.
Conectar y hacer funconar la bomba de vacio
En caja Petri añadir el cultivo coli blue.
Act. 1 Retirar el filtro del equipo con pinzas estériles, colocar en la caja Petri con cuadricula hacia arriba.
Cerrar la Petri, colocarla en la incubadora con el cojin y filtro hacia arriba a 35°C.

Observe las cajas Petri después de 24 horas de haber hecho la filtración, y

cuente las colonias que se formaron, en caso de que así sea.
Act. 2

1) Investigue y describa como se realiza la técnica de tubos múltiples de fermentación.

2) Explique, ¿por qué se consideran a los microorganismos coliformes fecales como indicadores
Act. 3 de la calidad bacteriológica del agua para uso potable?
Resultados

Muestra 1: Iztapalapa

En la foto no es tan perceptible el color de cada

círculo pero haciendo zoom, el color de los
círculos de la parte superior (encerrados) es rojo
sin embargo el color de círculos que más
predomina en la muestra es el azul.

Coliformes fecales (azul)= INCONTABLE UFC

Coliformes de otro tipo (rojo)=INCONTABLE UFC

Por lo tanto, coliformes totales=INCONTABLE

UFC

Muestra 2: Álvaro Obregón

En la foto no es tan perceptible si el circulo
representa alguna unidad formadora de colonia,
en caso de que fuera éste es de color azul.

Coliformes fecales (azul)= 1 UFC

Coliformes de otro tipo (rojo)= 0 UFC

Por lo tanto, coliformes totales= 1 UFC

Muestra 3: Copilco

Se alcanza a percibir solo un círculo rojo

muestras que predominan los coliformes
fechales representados como círculos
azules.

Coliformes fecales (azul)= INCONTABLE

UFC

Coliformes de otro tipo (rojo)= 1 UFC

Por lo tanto, de coliformes totales=

INCONTABLE UFC

Análisis de resultados

Muestra 1: esta muestra fue traída de la toma directa de una casa ubicada en la
alcaldía Iztapalapa y como ya se observó, el resultado de la prueba reveló que si
tenía contenido de coliformes fecales, esto se pudo deber a diversos factores ya
que en principio si no se desinfectó de la manera adecuada la llave antes de tomar
la muestra entonces ya hubo una contaminación.

Al investigar un poco más sobre las fuentes de suministro de las que dispone
Iztapalapa me encontré con una nota en la que se habla de que en 2010 se hizo
un estudio de la calidad del agua y se encontró la presencia de coliformes fecales,
entonces también se podría concluir que desde el proceso de tratamiento algo
está mal.

También encontré otra nota un poco más reciente de la anterior y menciona que,
dado el sismo del 19 de Septiembre de 2017 hubo contaminación de algunos
pozos que surten las alcaldías de Iztapalapa y Xochimilco,y que en las pruebas
realizadas a las muestras de agua se detectó Escherichia coli y Enterococos
fecales.
Link de las noticia mencionada: http://wradio.com.mx/radio/2010/10/18/nacional/1287449640_373022.html
https://lasillarota.com/especialeslsr/19s-el-sismo-causo-contaminacion-del-agua-contamino-2017-sismos-xochimilco/276047

Muestra 2: la muestra fue tomada al igual que la 1 de la toma directa de una casa
en la alcaldía Álvaro Obregón y en esta, aunque la norma no permite ni una sola
unidad a diferencia de la muestra de Iztapalapa, tiene una calidad muy por arriba.

Se podría decir que al tomar la muestra de agua, esta se tomó con más cuidado e
incluso buscando las fuentes de abastecimiento que posee la alcaldía algunas
colonias se abastecen de manantiales los cuales presentan un nivel aceptable en
cuestión de calidad.

Muestra 3: Esta muestra fue tomada desde el grifo de la cocina de una casa
ubicada en Copilco de la alcaldía Coyoacán y así como en la practica 1 la calidad
está por arriba de la de Iztapalapa pero, está muy por debajo de la de Álvaro
Obregón. No habría tanta justificación de que la muestra se pudo contaminar con
la llave ya que está dentro de la casa donde se supondría no está tan expuesta.

Leyendo el Programa Delegacional de Desarrollo Urbano de Coyoacán se dice

que los reportes de mala calidad del agua se deben en general, a un inadecuado
manejo del líquido por parte de los usuarios como es la falta de lavado y
desinfección de tanques y cisternas.

Explique, ¿por qué se consideran a los microorganismos coliformes fecales

como indicadores de la calidad bacteriológica del agua para uso potable?

Los coliformes fecales y E. coli en particular, se han seleccionado como

indicadores de contaminación fecal debido a su relación con el grupo tifoide-
paratifoide y a su alta concentración en diferentes tipos de muestras.

Los coliformes fecales son un subgrupo de los coliformes totales, capaz de

fermentar la lactosa a 44.5ºC. Aproximadamente el 95% del grupo de los
coliformes presentes en heces fecales, están formados por Escherichia coli y
ciertas especies de Klebsiella. Ya que los coliformes fecales se encuentran casi
exclusivamente en las heces de animales de sangre caliente, se considera que
reflejan mejor la presencia de contaminación fecal.

Los coliformes fecales se denominan termotolerantes por su capacidad de

soportar temperaturas más elevadas. Se diferencia de los coliformes totales por la
característica de crecer a una temperatura superior.

Se busca en las pruebas la presencia de coliformes fecales porque si hay

unidades de estas bacterias muy probablemente habrá de otros organismos
infecciosos.
Conclusiones

Se cumplió el objetivo ya que se conocieron las razones por las cuales se miden el
tipo de coliformes fecales y esto es porque sirve como indicador para saber si en
el agua no existe otro agente infeccioso, es decir, los coliformes fecales son
agentes infecciosos y si estos están presentes en las muestras muy
probablemente hay otro tipo de agentes. Así como también el cómo se hace la
prueba para saber si hay presencia de estos en el agua y como se logra el
ambiente estéril que se requiere para hacer esta prueba. También se conocieron
algunas características de los coliformes fecales como por ejemplo que son
termotolerantes y se presentan en las heces fecales de animales de sangre
caliente.

Fuentes de información

Manual de prácticas AAP. (2018). Practica 2. Caracterización microbiológica. [En

línea]. [Citado 2020-02-29]. Disponible en:
http://dicyg.fi-c.unam.mx:8080/labsanitaria/contenidos/manuales/mados_2019/
mado-75-aap

Camacho, A., M. Giles, A. Ortegón, M. Palao, B. Serrano y O. Velázquez. 2009.

Técnicas para el Análisis Microbiológico de Alimentos. 2ª ed. Facultad de Química,
UNAM. México.