Determinación de la concentración de proteínas
mediante métodos espectrofotométricos
Avellaneda Karol, Gomez Camila, Gonzalez Haner, Lopez Lizbeth, Saavedra Nicoll
{Avellaneda.karol, Gomez.maria12, González.haner, Lopez.lizbeth, Saavedra.nicoll }@uniagraria.edu.co
Fuentes Giovanna b
FUNDACIÓN UNIVERSITARIA AGRARIA DE COLOMBIA
DEPARTAMENTO DE CIENCIAS BÁSICAS
www.uniagraria.edu.co
Resumen— En este informe se observa como el
espectrofotómetro con los componentes dentro de cada recipiente y
usando el Método de Bradford nos ayuda a calcular la longitud de
onda y la absorbancia que tiene cada uno de los recipientes.
En las gráficas (1) se observa la calibración que se tiene en las
sustancias que son: pNF y H2O. En la gráfica (2) se observa el
barrido de longitud de onda de las mismas sustancias. determinando
la transmitancia que nos indica la cantidad de energía que logró
atravesar el medio absorbente, por lo tanto se puede deducir como
dependiendo de una longitud la cual se aplique a un rayo, puede
alcanzar un punto máximo de absorción.
Palabras Clave— Absorbancia, espectrofotómetro,
concentración, proteínas, cromóforos.
Abstract— In this report it is observed how the spectrophotometer
with the components inside each container and using the Bradford
Method helps us to calculate the wavelength and absorbance that
each of the vessels has.
In the graphs (1) the calibration that is in the substances that are:
pNF and H2O is observed. Graph (2) shows the wavelength sweep of
the same substances. determining the transmittance that indicates the
amount of energy that managed to pass through the absorbent
medium, therefore it can be deduced as depending on a length which
is applied to a ray, it can reach a maximum point of absorption.
Keywords—Absorbance, spectrophotometer, concentration,
proteins, chromophores
I. INTRODUCCIÓN
La radiación electromagnética es una variedad de
emisiones de energía que viajan a una velocidad a través del
espacio. La radiación que llamamos luz, contiene todas las
longitudes de onda del espectro electromagnético siendo la
región visible, la que va de 400 nm a 700 nm de longitud de
onda (todo lo que el ojo humano puede observar está dentro de
este parámetro)pero, ¿qué pasa con los espectros que no
percibimos a simple vista?. Pues existen varios instrumentos
que son sensibles a dichas regiones: Radio, microondas,
infrarrojo, visible, ultravioleta, rayos X y rayos gamma.
Los métodos espectroscópicos son aquellos que se utilizan
para determinar la concentración de las proteínas en ciertas
soluciones.
II. OBJETIVOS
OBJETIVO GENERAL: Analizar el resultado de la
concentración de las proteínas de acuerdo con su importancia
biológica.
OBJETIVOS ESPECÍFICOS :
1. Encontrar la longitud de onda más adecuada para la
lectura espectrofomètrica posterior de las proteínas
que se van a procesar mediante el uso del método
Bradford.
2. Preparar las diluciones necesarias de las soluciones de
proteína necesarias para desarrollar color y
concentración adecuada para la lectura en el
espectrofotómetro.
3. Encontrar la concentración de la muestra problema de
proteína, a partir de la curva de calibración realizada.
a
Estudiantes de Núcleo común de ingenieria
b
Docente Giovana Fuentes de Departamento Ciencias Básicas.
III. ASPECTOS TEÓRICOS
1. Que es espectrofotometría. Cuál es el rango del espectro
que se utiliza, Cuáles son los componentes que tiene un equipo
de espectrofotometría. Cuál es la ley de lambert beer, cual es
el principio de lambert beer que es una proteína Bradford,
para que se utiliza y qué tipo de cromóforos (especie que.
tiene color-como se desarrolla el color) utiliza. Marco teórico
1. En los métodos espectrofotométricos se mide la intensidad
de la luz (energía radiante o radiación electromagnética) para
determinar la concentración del analito presente en una
muestra Se dividen en dos grupos de gran profundidad. -
Espectrofotometría de absorción. En casos de este tipo se mide
la Absorbancia(A) de analito, esto es la luz absorbida por el
analito, y esta magnitud se relaciona con la concentración(C).
A ∞ c (la absorbancia es directamente proporcional a la
concentración) - Espectrofotometría de emisión. En estos
casos se mide la luz emitida por un analito
(concentración/estructura que se desea medir) previamente
excitado, la señal emitida se relaciona con la concentración de
la especie que emite luz cuando vuelve desde un estado
excitado (estado de mayo energía al que llego absorbiendo
energía) a su estado basal (estado de menor energía posible tal
como se encuentra naturalmente). Señal emisión ∞ C (la
emisión es directamente proporcional a la concentración)
Equipo de espectrofotometría (utilizado en la práctica) - De
ABSORCIÓN MOLECULAR UV-VISIBLE.
expresa la ecuación de Lambert y Beer como una función de la
longitud de onda: A (λ) = ε (λ) x b x c.
La ley de Lambert Beer es una ley límite, es decir que sólo se
cumple en determinadas condiciones: luz monocromática y
soluciones diluidas.
La determinación de proteínas por el método de Bradford
consiste en la cuantificación (expresar numéricamente una
magnitud) de la unión de un colorante, el Azul de Coomassie
G-250, a la proteína, comparando esta unión con la de
diferentes cantidades de una proteína estándar (Albúmina de
Suero Bovino (BSA)).
La cuantificación se hace midiendo la absorbancia en un
espectrofotómetro, a 595 nm, y graficando la absorbancia vs la
concentración de proteínas, obteniendo una curva de
calibración de la proteína estándar. Con esta curva de
calibración, se puede interpolar la concentración de proteínas
en una muestra al medir su absorbancia a 350 nm.

IV. ASPECTOS EXPERIMENTALES

En este procedimiento se utilizó un espectrofotómetro, y en
Fig1. este se utilizaron las siguientes sustancias H2O y pNF los
Es un instrumento que mide la absorbancia (A) de una cuales se combinaron de la siguiente manera:
solución. Por lo tanto, para medir la concentración de un Cubeta 1= 2 mL de H2O con 1 mL de pNF
analito(componente) por este método es necesario que el
componente (producto de radiación) tenga la propiedad de Cubeta 2= 1 mL de H2O con 2 mL de pNF
absorber radiación electromagnética (luz) en la región del Cubeta 3= 0 mL de H2O con 3 mL de pNF
UV-Visible. Que el analito absorbe la luz, significa que cuando
un haz de luz cae sobre la solución del analito(componente),
este absorbe energía la que utiliza para pasar de su estado
basal de energía a su estado excitado. A continuación se grafican los datos reportados en la tabla 1.
Energía absorbida por átomos = E de transiciones electrónicas
Energía absorbida por moléculas = E de transiciones
rotacionales, vibracionales y electrónicas.
ECUACIÓN DE LAMBERT Y BEER. Cuando un haz de luz
monocromática (de determinada longitud de onda) atraviesa
una solución, la ABSORBANCIA es directamente
proporcional a la distancia recorrida por la luz atravesando la
solución absorbente y a la concentración del analito en la
solución. La distancia recorrida por la luz atravesando la
solución se denomina camino óptico y se mide generalmente
en cm Esquema que representa el fenómeno que describe la
ley de Lambert y Beer. P0 es la potencia de la luz
monocromática incidente; P es la potencia de la luz luego de
atravesar la solución de concentración c y b es el camino
óptico. A = ε x b x c.
A: absorbancia de la disolución a una longitud de onda
dada(adimensional) En esta gráfica se observa la calibración que tiene cada cubeta
ε: coeficiente de extinción molar (es una constante definida con sus respectivas sustancias ya antes mencionadas.
que depende de la solución y la longitud de onda, en general .
su unidad es la inversa de la molaridad por la inversa de cm,
A continuación se grafican los datos reportados en la tabla 2.
es decir (M x cm)-1 o L/mol x cm)).
b: es el camino óptico, en general se mide en cm.
c: es la concentración del analito expresada en molaridad (M).
Dado que la Absorbancia y la absortividad molar dependen de
la longitud de onda de la luz incidente, muchas veces se

En esta gráfica se realizó de lo siguiente:
Colocamos 2 pNF y 1mL de H2O, se calibró el espectrofotómetro
a 0, pusimos una longitud de onda desde 350 nm desde este punto
tomamos los valores de cinco en cinco hasta 700 nm y se
obtuvieron los resultados que se observan en la tabla.
V. ANÁLISIS
fig 2.
El resultado se halla de: la multiplicación del concentrado del
diluido por el volumen del diluido, dividido por el volumen
del concentrado y el resultado de multiplica por 3.
𝐶𝑑𝑥𝑉𝑑
𝐶𝑐 = 𝑉𝑐
Por lo tanto basándose en esta ecuación se obtiene el resultado de
la concentración del concentrado, esta imagen está asociada a las
gráficas anteriores ya que, en las gráficas se utilizaron las mismas
sustancias que en la imagen ahora presentada y que como
resultado da: Cc= 101,71 µ𝑚
VI. CONCLUSIONES
1. Se pudo analizar la concentración de proteínas,
utilizando un espectrofotómetro, el cual al colocar las
sustancias requeridas en este instrumento, se pudo
hallar el valor de la concentración de cada una.
2. La determinación de proteínas por Bradford se logró
ya que gracias a la cuantificación de la unión de un
colorante, comparando esta unión con diferentes
cantidades de una proteína estándar. Esta
cuantificación se hace midiendo la absorbancia en el
espectrofotómetro.
3. Preparando las diluciones necesarias, para obtener la
concentración de las proteínas de cada solución, se
pudo determinar un color por cada una de ellas.
4. Se encontró la concentración de la muestra problema
de la proteína, en base a la curva de calibración
realizada, la cual nos arrojó un resultado con el valor
de 101,71 que es correcto.
VII. REFERENCIAS
WEBSITE
● BIOMODEL Versión 2021.09 (S/F). BIOMODE.
http://biomodel.uah.es/lab/abs/espectro.htm
● WIKIPEDIA. (2021,18 de Febrero) Método de bradford.
Wikipedia la enciclopedia libre. Consultado el 23 de de abril de
2022.https://es.wikipedia.org/wiki/M%C3%A9todo_de_Bradford#
Desarrollo_del_M%C3%A9todo_de_Bradford
● WINKLER. (S/F) Kit para determinación de proteínas Método de
Bradford. WINKLER. Consultado el 22 de abril de 2022.
http://winklerltda.cl/quimicav2/wp-content/uploads/2017/04/kit-pr
oteinas-bradfor.pdf
● Métodos espectrofotométricos- Teoría y Práctica (s/f) Consultado
el 22 de abril de 2022.
https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43546/mod_reso
urce/content/3/Espectrofotometr%C3%ADa%202019%20versi%C
3%B3n%20final.pdf#:~:text=En%20los%20m%C3%A9todos%20
espectrofotom%C3%A9tricos%20se,analito%20presente%20en%2
0una%20muestra