“Universidad Tecnológica de Tecámac”

UTTEC

Análisis Instrumental.

7IBT2- 1er Parcial

Cuatrimestre. Enero-abril

PRÁCTICA No. 2 CURVA TIPO.

Profesor: ING. Esquinca Canseco Carlos Adulfo.
Alumnos.
 Ávila Ruiz Pastrana Braulio
 Fuentes Santos Vanessa Ivonne
 Sánchez Pineda Ángel Eduardo
 Tafolla Pardo Juan Diego
 Trejo Vera Ángel Augusto

05 de febrero de 2023
Objetivos.

1. Determinar la concentración de un analíto en una muestra por

espectrofotometría UV-Vis.
2. Realizar los cálculos necesarios para la obtención de la curva patrón.
3. Obtener la ecuación de regresión de la Curva Patrón.
4. Determinar las concentraciones de un analíto por los tres métodos analíticos.

Introducción.

La espectroscopia es el estudio de la interacción de la luz y la materia. Muchos tipos

de espectroscopia se basan en la capacidad de los átomos y las moléculas de
absorber o emitir radiación electromagnética (EM).

El espectrofotómetro es un instrumento utilizado rutinariamente en la investigación

científica. Espectrofotometría es la medición cuantitativa de la cantidad de una
sustancia química absorbe la luz al pasar un haz de luz a través de la muestra
usando un espectrofotómetro. En este vídeo se repasan los conceptos básicos de
la espectrofotometría, como transmitancia, absorbancia y la ley de Beer-Lambert
además de los componentes del espectrofotómetro. Estos conceptos constituyen
una base para saber cómo determinar la concentración de un soluto en solución
que es capaz de absorber luz en el rango ULTRAVIOLETA y visible. Además, se
demuestra un procedimiento de cómo operar el espectrofotómetro, incluyendo
instrucciones sobre cómo blanco y medir la absorbancia de una muestra a la
longitud de onda deseada. El video incluye también cómo hacer una curva estándar
para la determinación de la concentración de analito. Se discuten las varias
aplicaciones del espectrofotómetro en la investigación biológica, tales como
medición de la densidad celular y la determinación de las tasas de reacción química.
Por último, se introduce el espectrofotómetro microvolume, así como su ventaja en
la medición de la calidad y cantidad de proteínas y ácidos nucleicos.
Las técnicas espectrofotométricas son métodos de análisis químico instrumental
basados en las propiedades del espectro electromagnético, donde este es descrito
por el comportamiento de la energía como onda. Como tal, la radiación
electromagnética está caracterizada por una longitud de onda (en cm o nm), energía
(joule o ergios) y la frecuencia dada en Hertz o Hz (o 1/cm).

La región del espectro electromagnético útil en la identificación y cuantificación de

analítos está comprendida dentro de una longitud de onda 750-2500 nm para el
Infrarrojo Cercano (NIR), 400-750 nm para la región Visible y 10 hasta 380 nm para
la región ultravioleta (UV).

Marco teórico.

La Espectrofotometría es una de las

técnicas experimentales más utilizadas
para la detección específica de
moléculas. Se caracteriza por su
precisión, sensibilidad y su aplicabilidad
a moléculas de distinta naturaleza
(contaminantes, biomoléculas, etc.) y
estado de agregación (sólido, líquido,
gas). Los fundamentos físico-químicos
de la Espectrofotometría son
relativamente sencillos (Domínguez, 2020). Las moléculas pueden absorber
energía luminosa y almacenarla en forma de energía Interna. Esto permite que se
inicien ciclos vitales de muchos organismos, entre ellos el de la fotosíntesis en
plantas y bacterias. La Mecánica Cuántica nos dice que la luz está compuesta de
fotones cada uno de los cuáles tiene una energía.
Absorción y Color
La absorción de las radiaciones ultravioleta, visibles e infrarrojas depende de la
estructura de las moléculas, y es característica para cada sustancia química,
cuando la luz atraviesa una sustancia, parte de la energía es absorbida.
El color de las sustancias se debe a que éstas absorben ciertas longitudes de onda
de la luz blanca que incide sobre ellas y solo dejan pasar a nuestros ojos aquellas
longitudes de onda que no son absorbidas.
La espectrofotometría proveniente del sol, está se refiere a la radiación ultravioleta-
visible está usa haces del espectro electromagnético y radiaciones del campo UV
de 80 a 400 nm, principalmente de 200 a 400 nm y usa haces de luz visible de 400
a 800 nm , por lo que es de gran utilidad para caracterizar las soluciones en la región
ultravioleta y visible del espectro.
Al campo de luz UV de 200 a 400 nm se le
conoce también como rango de uv cercano,
la espectrofotometría visible solamente usa
el rango del campo electromagnético de la
luz visible, de 400 a 800 nm (Barbosa,
2019). A este tipo de técnicas se le conoce
como técnicas físico-bioquímicas , en
relación a la espectrofotometría se tiene
una ley muy importante la cual se basa a la
ecuación de beer-lambert it/io=10-klc
donde it , es la intensidad de luz que sale de la cubeta y que va a llegar a la celda
fotoeléctrica o detector donde es captada, medida y transformada en unidades de
absorbencia o de densidad óptica, io es la intensidad incidente , k es la capacidad
de la muestra para la captación del haz del campo electromagnético, l es la longitud
de la cubeta de espectrofotometría en cm, y c es la concentración de la muestra ya
ubicada en la cubeta. La ecuación simplificada de la ley de Beer-Lamber comprende
a la mínima ecuación que relaciona la concentración , la absorbancia de la muestra
y el factor de calibración. El factor de calibración relaciona la concentración y la
absorbencia de los estándares (Instrumet, 2020).
Tipos de espectrofotometría
 Espectrofotometría de Absorción
La espectroscopia de absorción es utilizada en análisis químico, como en el análisis
de proteínas donde ser prueba la luz visible ultravioleta contra una solución acuosa
para encontrar la concentración de proteína. Funciona porque todas las proteínas
absorben luz a longitudes de onda específicas y, con el uso de fórmulas específicas,
se puede calcular la cantidad de luz que es absorbida al detectar la cantidad de luz
que es reflejada en la solución.
 Espectrofotometría Ultravioleta
La espectrofotometría visible ultravioleta se relaciona al espectro de luz visible y
es usada ampliamente en las industrias de recubrimientos y pinturas, entre
muchas otras. Estas industrias, que dependen mucho en datos precisos y
específicos de color, utilizan espectrofotómetros y colorímetros para producir
variaciones y sombras de color junto con amplios rangos de colores. Debido a que
hay muchos factores que pueden influenciar las propiedades de reflectancia y
transmisión de un pigmento, se utilizan rutinariamente los datos de color para
cuantificar e igualar los colores de materiales.

Materiales y reactivos.
 Espectrofotómetro
 Celda para espectrofotómetro
 Glucosa
 Agua desionizada
 Gradilla
 Tubos de ensaye de 15 x 200 mm.
 Pipetas de 1, 5 y 10 mL
 Acido 3,5 dinitro salicílico (DNS) (disolver 4 g de Hidróxido de Sodio y 75 g
de Tartrato de Sodio y Potasio en 250 mL de
 agua. En baño maría a 50oC disolver 2.5 g de ácido 3,5 DiNitroSalicilico y
aforar a 500 mL)
 Probeta de 100 mL
 Vaso de precipidados de 250 mL
 Parrilla
 Baño de hielo

Metodología.

Espectrofotometría

Curva tipo
 Realizar los cálculos pertinentes para establecer el sistema d dilución de la curva patrón
con un intervalo de concentración de 0 a 200 mg/dL de glucosa.

Preparar 20 mL de una solución concentrada de 2 g/L de glucosa, para después hacer

diluciones binarias de 4 puntos a partir de la solución conentrada, esto se realiza en
tubos de ensaye

Prepara 5 ml de solución de cloruro de cobalto al 1 %, calibrar espectofotometro a

470nm- 550 nm con incrementos de 10 nm y registrar la abs máxima de la solución antes
mencionada

Tomar 1 mL de cada dilución de glucosa y la muestra problema .

Adicionar a cada uno de los tubos incluyendo el de la muestra problema y el blanco reactivo (sin
glucosa) 1 mL de la solución ácido 3,5 DNS y ebullir de 5 a 10 min hasta que estos cambien su
color.

Adicionar 2.5 mL de agua y dejar enfriar, Leer los tubos de curva tipo (empezando de la
concentración más diluida a la más concentrada) y la muestra problema a 540 nm,
enjuagando en cada lectura la celda con agua destilada.

Obtener la ecuación de regresión de la curva patrón a partir de los datos experimentales.

Calcular la señal de respuesta SC de la curva de calibración.

Calcular la concentración de la muestra a partir de:a. Curva Patrón b. Ley de Beer c.

Comparación patrón. Y graficar los resultados de la curva patrón

Por ultimo calcular precisión y repetibilidad.

Análisis de resultados.

Como se puede analizar, los resultados dieron erróneos o negativos a excepción de

una de las muestras (estaba mal calibrado), y con ello podemos decir que los
factores y resultados fueron los adecuados en la práctica vista ya que con ellos se
puede ver el cambio de coloración e incluso se aprecia la dilución de DNS.

Conclusión.
Cuestionario.
1. ¿Cómo se podría determinar la sensibilidad y selectividad del método de
azúcares reductores por el método del 3,5 DNS?
R. Mediante la concentración del analito, la reproducibilidad del método y/o
mediante espectrofotometría.
2. ¿Cuál es la relación entre la sensibilidad del método y el límite de detección?
R. La sensibilidad del método es la pendiente de la curva de calibración; el límite de
detección es la señal más pequeña que va a poder ser detectada y para poder hacer
una curva de calibración necesitamos todas las señales que pueden ser detectadas
a diferentes concentraciones.
3. ¿Cuál es el significado de la absortividad molar? Determine las unidades de la
absortividad molar.
R. Es una propiedad química que indica cuánta luz puede absorber una especie en
solución. Es decir, es una unidad que mide la capacidad de una disolución de
absorber luz.
Unidades:𝐿 𝑚𝑜𝑙 −1 𝑐𝑚−1
4. ¿Por qué es importante la concentración de la muestra en una determinación
espectrofotométrica?
R, Mientras mayor sea el número de moléculas, hay una mayor interacción de la luz
con ellas.
5. Para que sea válida la determinación de la concentración de un analito por un
método espectrofotométrico. ¿En qué intervalos de absorbancia debe de caer las
lecturas?
R. 0.000 a 1

Referencias.
Domínguez, R. (2020) CONOCIMIENTO DE TÉCNICAS ANALÍTICAS PARTE I:
FUNDAMENTOS DE ESPECTROFOTOMETRÍA
https://amyd.quimica.unam.mx/mod/resource/view.php?id=4819
Instrumet (2020) Espectrofotometría
http://www.calibracion.com.mx/espectrofotometro.html
Barbosa, O. (2019) La luz blanca y el espectro electromagnético
http://institutoculturaldeleon.org.mx/icl/story/6748/La-luz-blanca-y-el-espectro-
electromagn-tico#.ZATpzsZtVkw
Sierra, C. A. S., & García, H. G. (2013). Verificación analítica para las
determinaciones de cromo hexavalente en aguas por espectrofotometría.
Ingenierías USBMed, 4(1), 22-26.

Murillo, Y. S., Giraldo, L., & Moreno, J. C. (2011). Determinación de la cinética de

adsorción de 2, 4-dinitrofenol en carbonizado de hueso bovino por
espectrofotometría UV-VIS. Revista colombiana de química, 40(1), 91-103.

González, E., Ahumada, R., Medina, V., Neira, J., & González, U. (2004).
Espectrofotometría de absorción atómica con tubo en la llama: aplicación en la
determinación total de cadmio, plomo y zinc en aguas frescas, agua de mar y
sedimentos marinos. Química Nova, 27, 873-877.