Introducción energía interna (∆E) es característico de

cada sustancia, lo que nos proporciona un

El análisis a nivel bioquímico y
análisis cualitativo de cada uno de los
físico-químico de diversas moléculas
analitos. Además, la cantidad de energía
requieren de técnicas analíticas que
que absorbe o emite es proporcional a la
permitan una determinación cualitativa y
concentración de X donde se puede lograr
cuantitativa de estas. Uno de los métodos
un análisis cuantitativo en las tres
más accesibles y de gran utilidad a nivel
soluciones. La medida de absorbancia de
industrial es la espectroscopia
la luz por las moléculas presentes en las
ultravioleta-visible (uv-vis) el cual se basa
muestras se realiza por medio de un
en el análisis de cierta cantidad de
espectrofotómetro, en donde se mide
radiación electromagnética que puede
primero la absorbancia del disolvente
absorber o emitir una muestra en función
(conocido como blanco) y al que se le
de la cantidad de sustancia presente. En
asigna el valor de cero mediante el ajuste
la práctica se analizó una solución de
del mando. De forma que, la intensidad
para-nitrofenol (pNF), una solución de
incidente y transmitida sean iguales (Io=It)
proteínas y hemoglobina las muestras
y por tanto, la absorbancia es cero. A
absorben una radiación parcial que
continuación, se pone en la celdilla la
genera una transición entre los niveles
cubeta con la muestra y se lee la
energéticos del átomo, molécula o ion
absorbancia de las soluciones, la cual es
pasando a un estado excitado y el resto de
directamente proporcional a su
radiación es transmitida en donde
concentración pues a mayor número de
podemos relacionar la cantidad activa
moléculas mayor será la interacción de la
presente en la solución. El cambio de
luz con las mismas, lo que permite
 cuantitativa de
observar la λ con el valor máximo de

absorbancia según el analito, ayudando

con su análisis cualitativo y cuantitativo. estas. Uno de

El análisis a los métodos
nivel más accesibles
bioquímico y y de gran
físico-químico utilidad a nivel
de diversas industrial es la
moléculas espectroscopia
requieren de ultravioleta-
técnicas visible (uv-vis)
analíticas que el cual se basa
permitan una en el análisis
determinación de cierta
cualitativa y cantidad de
radiación
electromagnétic
a que puede
 absorber o proteínas y
emitir una hemoglobina las
muestra en muestras
función absorben una
de la cantidad radiación
de sustancia parcial que
presente. En genera una
la práctica se transición entre
analizó una los niveles
solución de energéticos del
para átomo,
 molécula o ion
-nitrofenol pasando a un
(pNF), una estado excitado
solución de y el resto de
Metodología
Relación entre absorbancia y diferente de proteína hasta completar un

concentración: Se utilizó una disolución de volumen total de 3 mℓ. Se calibro el

para-nitrofeno (pNF) con una concentración espectrofotómetro con la primera cubeta a

de 80 µM y un pH de 10; primero se una longitud de onda de 595 nm, después

calibró el equipo con una cubeta se procedió a medir la absorbancia de las

de agua con 3 mℓ a una longitud demás cubetas y por último se halló la

de onda de 405 nm. Después se concentración de cada una de ellas, para

prepararon 3 cubetas de distintos posteriormente realizar una curva de

volúmenes de pNF, siempre con un calibración de la absorbancia frente la

volumen total de 3 mℓ. Una vez listas las concentración. En la segunda parte, se

soluciones se introdujeron al tomaron 3 cubetas, cada una de ellas

espectrofotómetro para medir la con 1 mℓ del reactivo de Bradford

absorbancia. Por último se halló la concentrado y un volumen total de 3

concentración de cada una de las cubetas, mℓ. En la primera cubeta no se

y se hizo una curva de calibración de la agregó proteína, mientras que a las

absorbancia frente la concentración. - otras dos cubetas se les agregó

Fundamento de un ensayo de cantidades diferentes de disolución de

cuantificación de proteínas: Se usó una proteína, usando agua para completar el

solución de una proteína con volumen. Luego se calibró el equipo con la

concentración de 800 mg/ℓ. En la primera cubeta a una longitud de onda de

primera parte de este experimento se 595 nm, después se le midió la

utilizaron 3 cubetas, la primera se llenó absorbancia de las otras dos cubetas. Por

únicamente con el reactivo de Bradford y último, se halló la concentración de cada

las otras dos se llenaron con volúmenes cubeta, para posteriormente realizar una
curva de calibración de la absorbancia Materiales de la aplicación

frente la concentración. -Espectro de

Gotero
absorción de la hemoglobina: Se

preparó una solución de hemoglobina a

una concentración de 200 mg/ℓ. Se Vasos precipitados

tomaron 3 cubetas, se llenó una cubeta

con hemoglobina y en las otras dos

cubetas se prepararon mezclas diferentes

de hemoglobina con agua. Todas las cubetas

tenían un volumen total de 3 mℓ. Se

introdujeron al espectrofotómetro las

cubetas, de una en una, se registró el

espectro entre 200 y 800 nm. Después, se

eligieron dos longitudes de onda de la

región visible en las que haya un pico y se

midió la absorbancia de las 3 cubetas a

cada una de esas dos longitudes de onda.

Por último, se halló la concentración de la

Sustancias que te dan el programa
hemoglobina en cada cubeta, y se hizo
Figure
una curva de calibración con respecto a la pNF Y H2

absorbancia.
 que puede echar es de 3ml así que aremos

varias pruebas con diferentes cantidades de

agua y pNF.

Como se puede ver en la imagen el pNF se

Espectrofotómetro
empieza aclarar debido a que a cada

recipiente se le hecha agua menos en el

último recipiente donde no tiene agregación

de agua.

Tabla 1 Absorbancia 405 nm vs Concentración de pNF

para cada cubeta.

Cubeta 1 2 3

pNF(ml) 1ml 2ml 3ml

Agua(ml) 2ml 1ml 0ml

Resultados

Para el desarrollo de este trabajo de la De ahí veremos de cada cubeta con las

actividad 1 donde echaremos pNF en los cantidades de pNF diferentes s vera en qué

recipientes de la aplicación y también punto se dará la mayor absorción de cada

echares agua (H2O) en los mismos cubeta y se observará según a las funciones

recipientes, pero los contenedores lo máximo que nos votará el programa mismo.
 Cubeta1
En la primera cubeta guiándose a la tabla
tiene 1ml de pNF y 2ml de agua.
Figure 2Cubeta 1
Como se observa en la imagen da entender
que en los 400 nanómetros llega su mayor
puto de absorbancia que es de 1.0
Cubeta 3
En la última cubeta tiene los 3ml de pNF y

ningún ml de agua.

Figure 4Cubeta 3

Como se puede ver en la imagen se puede

deducir que en 400 nanómetros la cubeta 1

llega a su mayor absorbancia que es de 0.5

Cubeta 2

En la cubeta 2 se le hecho 2 ml de pNF y

1ml de agua. Como se puede observar en la imagen en los

Figure 3Cubeta 2
400 manómetros llega a su punto mayor de

absorbancia que es de 1.5 es el mayor entre

las tres cubetas

Para la segunda parte de la actividad 1, a las

tres mezclas que hemos realizado lo

meteremos en el espectrofotómetro y
realizares un cuadro de la absorbancia que En la cubeta 2 se observa un amarillo palido,

bote cada mezcla que se ha realizado. se registra la segunda absorbancia mas alta.

Por último, la cubeta 1 con la menor

cantidad de pNF presentó la absorbancia más

Tabla 2resultado de las cubetas
baja.
Cubeta 1 2 3

A(405) 0.631 1.203 1.719 Por otro lado, se hizo un análisis cuantitativo

de los resultados, los cuales se pueden

relacionar con el análisis cualitativo, pues si

Como se puede ver en el cuadro la cubeta
se observa la tabla 1 y 2 se comprueba la
tiene mayor absorbancia debido que no está
veracidad de estos. En este mismo sentido,
mezclado por agua.
con la ecuación 1 se logró hallar la
Tabla 3concentración de pNF
concentración de pNF de cada cubeta, como
Cubeta C(μM A405
) se muestra en la tabla 2. Cabe destacar el

1 26.667 0.631 comportamiento presentado por la figura 1

2 53.3334 1.203 obtenida de la regresión por mínimos

3 80 1.719 cuadrados al resultar un coeficiente de

correlación de 0.9994 el cual establece un

grado de correlación entre las variables,

Para el análisis cualitativo de los resultados
tanto la dependiente como la independiente;
obtenidos se observa una relación entre el
según esto, este valor entre más tienda a la
color de las cubetas y el valor de absorbancia
unidad, mejor correlación habrá. Dado el
en 𝛌=405 nm. La cubeta 3 contenía mayor
grado de relación se puede concluir que la
cantidad de pNF, presentaba el color más

fuerte e igualmente la absorbancia más alta.

 concentración de pNF es directamente 1)- Análisis Instrumental. Youtube.

proporcional a la absorbancia. https://www.youtube.com/watch?v=lu5b-

lY93dQ
Figure 5 grafico del resultado de cubetas

Conclusión

En conclusión, como se ha visto en los

gráficos y en las tablas en donde las cubetas

donde tiene agua tiene un bajo nivel de

absorbancia y la cubeta que no tiene ninguna

gota de agua presenta un mayor nivel de

absorbancia.

Referencias

Gonzalez, J. P. F.

[@jheanpierrefuentesgonzalez8284]. (2020,

mayo 20). Curvas de calibración (Práctica