GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO, TALLER O CÓDIGO DE

CAMPO DOCUMENTO:
DCIV-GUI-2019-V1-008

CIENCIAS DE LA VIDA Y LA ☐ Ing. Agropecuaria ☒ Ing.

DEPARTAMENTO: AGRICULTURA
CARRERA:
Biotecnología
PERíODO Mayo –
ASIGNATURA: Microbiología Aplicada NIVEL: V
LECTIVO: Septiembre 2022
DOCENTE: Ing. Andrés Izquierdo, Ph.D. NRC: 7003, 7158 PRÁCTICA N°: 6

LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA PRÁCTICA Laboratorio Interdisciplinario 04, docencia de Microbiología.

TEMA DE LA
Aislamiento de bacterias de suelos contaminados con hidrocarburos.
PRÁCTICA:
INTRODUCCIÓN:

La información disponible hasta el momento sugiere que en la degradación de mezclas ambientales de hidrocarburos intervienen
una gran cantidad de microorganismos, muchos de los cuales todavía no han podido ser aislados, y cuya función en
consecuencia sigue siendo una incógnita. Para comprender los procesos y comunidades microbianas implicadas en la
degradación ambiental de hidrocarburos se hace necesario por lo tanto, el estudio de la estructura-función de dichas
comunidades.

En ese sentido, la mejora de los métodos de cultivo tradicional y su correlación con las nuevas metodologías independientes de
cultivo basadas en los estudios moleculares de las comunidades microbianas, ha de permitir establecer cuál es el rol de cada
una de las poblaciones implicadas asociando cada población con su función dentro de la comunidad.

Las bacterias degradadoras pueden utilizar los hidrocarburos como fuente de carbono y energía, en agua y suelos contaminados,
para poder aislarlos se debe utilizar medios de cultivo con nutrientes como medio mineral o LB, suplementado con hidrocarburos,
como HAPs, o crudo de petróleo, de esta manera pueden los microorganismos pueden utilizar estos hidrocarburos como fuentes
de carbono y energía, para su crecimiento.

OBJETIVOS:

• Aislar bacterias degradadoras de suelos contaminados con hidrocarburos.

MATERIALES:

REACTIVOS:

Cajas Petri con medio mineral o LB 1/10 suplementado con

INSUMOS:
crudo petróleo o fenantreno.
Pipetas de 1 mL, probetas, asas bacteriológicas, Frascos
- Acetona.
Boeco, tijeras, gradillas, Parafilm, agitadores magnéticos,
- Solución salina al 0.9%
fosforera larga.
- Cloroformo

Si no se posee los medios requeridos en la práctica, se

reemplazaran por otros que posea el laboratorio.

EQUIPOS:
Incubadora a 37°C, Mecheros bunsen, Autoclave, Plancha caliente con agitación, Refrigeradora.

MUESTRA:
Muestras de suelos contaminados con hidrocarburos, suelos de mecánicas, de gasolineras, etc.

CODIGO: FRM 6.3 REV. UPDI: 2019-nov-21

 GUÍA PARA LAS PRÁCTICAS DE LABORATORIO, TALLER O CÓDIGO DE
CAMPO DOCUMENTO:
DCIV-GUI-2019-V1-008

INSTRUCCIONES:

- Utilice ropa de protección: mandil, guantes, gafas, cabello recogido, zapatos cerrados.
- Verifique la disponibilidad de los insumos, reactivos, muestras y equipos a usar en la práctica

ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

1. Pesar 10 gramos de suelo contaminado.

2. Colocar el suelo en un frasco, Boeco autoclavado que contenga 90 ml de solución salina al 0.9% y un agitador magnético.
3. Agitar durante 30 minutos con el agitador magnético.
5. Decantar por 30 minutos, para la precipitación de las partículas del suelo.
6. Inocular 100 ul del sobrenadante en cajas petri con medio mineral o LB1/10 con petróleo, con el triángulo de vidrio
7. Incubar a temperatura ambiente durante 48 horas o más hasta observar crecimiento.
8. Observar las colonias formadas, describirlas, morfología y realizar tinción Gram.

RESULTADOS OBTENIDOS:

Anote sus observaciones del crecimiento bacteriano en cada caja Petri, y en conjunto, relacionando en el procedimiento
realizado en su bitácora de laboratorio. Describa mediante párrafos o haga tablas. Si es necesario, haga dibujos y tome fotos.
En resultados solamente van sus datos analizados. Refiérase a los objetivos e hipótesis para elaborarlos en concordancia.

CONCLUSIONES:

Se pudo aislar bacterias degradadoras de suelos contaminados con hidrocarburos.

RECOMENDACIONES:

Siga el procedimiento sin cambio alguno. Trabaje con precaución y aplicando normas de bioseguridad. Si no se posee los
medios requeridos en la práctica, se reemplazaran por otros que posea el laboratorio.

FIRMAS

Firmado electrónicamente por:

ANDRES RICARDO
IZQUIERDO ROMERO

F: ……………………………………………. F: ………………………………………………. F:
…………………………………………………
Nombre: Andrés Izquierdo, Ph.D. Nombre: Claudia Segovia, Ph.D. Nombre: Patricia Jiménez, Ph.D.
COORDINADOR DE ÁREA DE JEFE DE LABORATORIOS
DOCENTE CONOCIMIENTO MULTIDISCIPLINARIOS

CODIGO: FRM 6.3 REV. UPDI: 2019-nov-21