GUIA PARA LAS PRÁCTICAS DE Código de documento:

DCVI-GUI-V1-2020-010
LABORATORIO, TALLER O CAMPO.

DEPARTAMENTO: CIENCIAS DE LA VIDA CARRERA: ☐ Ing. Agropecuaria ☐ Ing. Biotecnología

PERíODO MARZO-JULIO
ASIGNATURA: BOTÁNICA NIVEL: II
LECTIVO: 2019
DOCENTE: Dr. FERNANDO HURTADO NRC: 12160 PRÁCTICA N°: 2

LABORATORIO DONDE SE DESARROLLARÁ LA PRÁCTICA LABORATORIO HERBARIO

TEMA DE LA ANATOMÍA Y MORFOLOGÍA DE LA RAÍZ EN MONOCOTILÉDONEAS Y EUDICOTILEDÓNEAS, Y SUS
PRÁCTICA: MODIFICACIONES: MICORRIZAS Y NÒDULOS BACTERIANOS
INTRODUCCIÓN:
La raíz en las plantas tiene como principal función el anclar el vegetal, absorber y conducir agua y sustancias nutritivas desde el
suelo hacia el tallo y hojas, a la vez que esta recibe moléculas orgánicas que proceden de éstos. Además la raíz produce hormonas
vegetales y otras sustancias que regulan el desarrollo y funcionamiento de la planta (Nabors, 2006).
Las raíces establecen relaciones de mutuo beneficio con otros organismos en el suelo. Estas asociaciones mutualistas se realizan
entre la planta y hongos o bacterias. Las micorrizas, son asociaciones entre las raicillas del vegetal y ciertas especies de hongos
del suelo. Los dos tipos de micorrizas son: Endomicorrizas, en la cual las hifas del hongo penetra en la raíz de la planta y producen
estructuras denominadas arbúsculos, y las Ectomicorrizas, en las cuales las hifas del hongo no penetran a los tejidos de la raíz,
sino que forman un manto o red fúngica que rodea a las raicillas estableciendo esta asociación. Numerosos estudios han
demostrado que las micorrizas ofrecen muchos beneficios a las plantas, especialmente en el campo de la agricultura.
Algunas plantas establecen también asociaciones con especies de bacterias que fijan nitrógeno, es decir que estos organismos
convierten el nitrógeno del aire en amoníaco, es así que la planta en asociación con estas bacterias puede obtener el nitrógeno
fijado por estas a sus aminoácidos, nucleótidos y otros compuestos vitales que contienen nitrógeno. Los nitratos son liberados
desde estos nódulos hacia el suelo. Existen actualmente industrias que producen y comercializan tanto micorrizas como las
bacterias fijadoras de nitrógeno como bioproductos inocuos con el ambiente (Rueda, D 2012; Nabors, M. 2006)

OBJETIVOS:
Tomar muestras vegetales respetando normas de bioseguridad.
Identificar y clasificar morfológicamente los elementos estructurales de la raíz en monocotiledóneas y en dicotiledóneas.
Identificar anatómicamente las partes estructurales de una raíz primaria en monocotiledóneas y una raíz secundaria en
dicotiledóneas.
Identificar endomicorrizas, ectomicorrizas y nódulos bacterianos.
Redactar un informe con correcto uso de método científico en base a la práctica de laboratorio.

MATERIALES:
REACTIVOS:
Colorantes: Azul Tripan 0,05% en
lactoglicerol, Peróxido de hidrógeno
H2O2 al 3%, KOH al 10 %, HCl 0.1N,
Lactoglicerol, metanol, violeta de INSUMOS:
genciana, lugol, alcohol, safranina, Material protección personal: Mandil, guantes, mascarillas, gorra o malla para estudiantes de
agua, alcohol de mechero, aceite de cabello largo.
inmersión. Material de laboratorio: 15 Placas cubre objetos, 15 porta objetos, 12 pinzas, 12 aguja de
Solución de azul tripán al 0.05% disección, 20 hojas de bisturí, 20 mangos de bisturí, 6 cajas de Petri de vidrio, 20 pipeta plástica,
(p/v) en lactoglicerol 12 tijeras punta fina, 2 gradillas de tubos, 20 tubos de ensayo medianos, 2 vasos de precipitación
500 mL, 2 lámpara de alcohol, bandejas metálicas o plásticas para colocar muestras de tierra,
100 gramos de algodón hidrófilo, caja de fósforos, 2 rollos de masking tape, dos rollos de papel
Preparación de azul tripán toalla. (este material por cada laboratorio o grupo estudiantil)
Compuestos Volumen ó peso
Azul tripán en polvo 0.5 g
Ácido láctico 333 mL
Glicerol 333 mL
Agua destilada 333 mL
EQUIPOS:
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Estéreos microscopios, microscopios, baño maría a 90ºC, Hot Plate, termómetro.

MUESTRA:
Material vegetal:
Laboratorio 1: Raíces de eudicotiledóneas y monocotiledónea tiernas y maduras entres estas zanahoria, rábano, pasto elefante,
nabo, fréjol, haba, cebolla, trébol, rosa, perejil, culantro, etc.
Laboratorio 2: Muestras de micorrizas de varios cultivos y de asociación con pino o ciprés; muestras de nódulos bacterianos
formados en raíces de la planta de haba, fréjol, trébol.

PRECAUCIONES / INSTRUCCIONES:
- Cada estudiante debe llevar su guía de laboratorio, mascarilla y material de protección personal.
- El curso es responsable de llevar el material vegetal a cada clase práctica.
- Se mantendrá un correcto comportamiento en el espacio asignado a la práctica.
- Cada estudiante debe consultar la función de colorantes utilizados en la tinción de tejidos vegetales de la raíz y sus
modificaciones en base a bibliografía científica.
- Seleccionar con criterio científico, protocolos para tinción de tejidos en la práctica de raíz.
- Escribir correctamente los nombres científicos y comunes de las plantas utilizadas en la práctica.
- Emplear correctamente colorantes, reactivos y materiales para fijación y tinción de tejidos vegetales, respetando normas de
bioseguridad y el medio ambiente.
- Manipular correctamente un microscopio óptico de campo claro y estereomicroscopio, respetando normas de uso.
- Manejar correctamente las bitácoras y cuadernos de laboratorio.
- Utilizar correctamente el material de protección personal en cada práctica: mandil cifrado, guantes, mascarilla, gorra de cabello o
su equivalente.

PROCEDIMIENTO / ACTIVIDADES POR DESARROLLAR:

Actividades previas:
a) Mantener el material de la actividad de germinación viable, para poder seleccionar material fresco en la práctica de anatomía y
morfología de raíz.
b) Definir: hipocótilo, radícula, axonomorfo, seminal.
Realizar la actividad No. 2 Recolección de Raíces micorrizadas en varios cultivos y en pino o ciprés; recolección de nódulos
bacterianos en plantas de haba, fréjol o trébol (Guardar las muestras en frascos estériles y refrigerar hasta el día de laboratorio).

1. MORFOLOGÍA Y ANATOMÍA DE LA RÁIZ:

1.1 ESTRUCTURA DE LA RAÍZ
1.1.1 Sistemas Radicales
En las plantas de fréjol y maíz (material de germinación) estudie su sistema radical. Note que el fréjol presenta una raíz principal, la
cual es continuación del tallo. A partir de la raíz principal (pivotante), se derivan las raíces secundarias.

1.2 MORFOLOGÍA EXTERNA DE LA RAÍZ

Bajo el estéreo microscopio examine una plántula de rábano ( Raphanus sativus L.). Retirando tan solo la tapa de la caja de Petri,
ya que los pelos radiculares son muy sensibles a la sequedad. Determine:
Cofia: la parte más apical de la raíz.
Meristemo Apical: protegido por la cofia
Zona de alargamiento
Zona de los pelos radicales
Cuello

1.3 ANATOMÍA DE LA RAÍZ

Tome una raíz de cualquier especie, colóquela y realice varios cortes longitudinales. Al microscopio determine cofia o piloriza y
meristemo apical.
1.3.1 Crecimiento Primario de Eudicotiledóneas. Realice varios cortes transversales en la zona más joven de raíz de fréjol
(Phaseolus vulgaris) determine: disposición radial del xilema, región del cambium, floema, endodermis y periciclo.
1.3.2 Crecimiento Secundario de Eudicotiledóneas. En cortes transversales de raíz de fréjol en la región más vieja, observe:
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médula, xilema secundario, región del cambium vascular, floema secundario, etc.
1.3.4 Raíces Secundarias. En el estereomicroscopio observe en cualquier especie eudicotiledónea la raíz principal y raíces
secundarias.
1.3.5 Crecimiento Primario en Monocotiledónea. Realice cortes transversales de la raíz de maíz, y observe: xilema y floema
primarios, periciclo, y la endodermis.

MODIFICACIONES Y ADAPTACIONES DE LAS RAÍCES

MICORRIZAS
Preparación de las raíces:
1. Se lavan las raíces de la planta con el fin de eliminar los restos suelo que aún permanece unidos a ellas.
2. Se cortan las raíces en fragmentos de 1 cm de longitud y se introducen en el tubo de ensayo.
3. Para favorecer la visualización de las hifas, vesículas y arbúsculos del hongo micorrizógeno, se debe someter a la raíz a un
proceso de aclarado que deberá durar más o menos tiempo en función del tipo de raíz (más cuanto más vieja sea, mayor cantidad
de materias tánicas contenga etc.)
4. Cubrir las raíces con una solución KOH al 10%.
5. Calentar los tubos con las raíces durante 20 minutos (más tiempo si éstas son gruesas o tienen mucho tanino, ya que
necesitarán un mayor aclarado).
6. Una vez enfriados los tubos se elimina la solución y se vuelven a lavar las raíces con agua sobre un tamiz.
7. Echamos nuevamente en el tubo, cubriendo las raíces, una solución alcalina H2O2 al 3% hasta que las raíces queden blancas.
8. Las raíces se extraen de la solución y se enjuagan tres veces con agua destilada sobre un colador o tamiz para evitar la pérdida
del material.
9. Las raíces se trasladan a los tubos y se cubren con una solución de HCl 0.1N por 5 min. para acidificarlas.
10. Se elimina el HCl y se sumerge la muestra en la solución de azul tripán al 0.05% en lactoglicerol. Los tubos se colocan en el
baño maría a 90ºC por 15 minutos a una hora. Al finalizar, las raíces deben estar azules
11. Las raíces se transfieren a una solución de glicerol al 50% para eliminar el exceso de colorante y conservarlas.
12. Observar.
NÓDULOS BACTERIANOS
1. Se lavan las raíces de la planta con el fin de eliminar los restos suelo que aún permanece unidos a ellas.
2. Separar todos los nódulos de la raíz, y presionar el porta objetos.
3. Hacer el extendido en espiral
4. Dejar secar a temperatura ambiente
5. Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado 3 veces aprox.)
6. Agregar violeta de genciana y esperar 1 min. Todas las células Gram positivas y Gram negativas se tiñen de color azul purpura.
7. Enjuagar con agua.
8. Agregar lugol y esperar entre 30 segundos y 3 minutos
9. Enjuagar con agua.
10. Agregar alcohol y esperar entre 15 y 20 segundos
11. Enjuagar con agua.
12. Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar 1-2 min Este tinte dejará de color rosado-rojizo las
bacterias Gram negativas.
13. Enjuagar con agua.
14. Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Cuestionario:
a) La planta de maíz presenta un sistema radical denominad fibroso, analice las diferencias con el sistema pivotante.
b) Que reactivos reemplazaron a los señalados en los procedimientos de tinción, ¿Cuáles son sus observaciones al respecto?
c) Investigue sobre los tipos de micorrizas y nódulos bacterianos y su aplicación en la agricultura y el desarrollo de Bioproductos en
relación a estos organismos.
d) Señale dos aplicaciones biotecnológicas en el desarrollo de inoculantes de Rhizobium.

RESULTADOS OBTENIDOS:
Resultados primarios Laboratorio 2:
-Identificación morfológica y anatómica de una raíz en monocotiledóneas
-Identificación morfológica y anatómica de una raíz en eudicotiledóneas
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Resultados primarios Laboratorio 3:

- Identificación de micorrizas en sistemas radiculares.
- Identificación de nódulos bacterianos en sistemas radiculares.
Reporte de resultados:
Gráficos o fotografías debidamente rotulados con cada elemento estructural identificado en la clase práctica, con la finalidad de
determinar la morfología y anatomía de las raíces primarias y secundarias en monocotiledóneas y eudicotiledóneas.
Gráficos o fotografías debidamente rotulados con cada elemento estructural en micorrizas y nódulos bacterianos.
Presentación de un informe de laboratorio con el tema: Morfología, anatomía y modificaciones de la raíz en las angiospermas.

CONCLUSIONES:
El estudiante reconoce la morfología de una raíz monocotiledónea y una raíz en eudicotiledónea.
El estudiante Identifica los elementos estructurales de una raíz de crecimiento primario y de crecimiento secundario.
El estudiante reconoce micorrizas y sus elementos estructurales en asociación con raicillas de material vegetal.
El estudiante Identifica los elementos estructurales de un nódulo bacteriano en asociación con raíces de material vegetal de la
familia Fabaceae.
Cada estudiante redacta un informe de laboratorio, con correcto uso de método científico, y poniendo énfasis en la escritura de
nombres científicos, en base a la práctica de laboratorio ejecutada.

RECOMENDACIONES:
Se recomienda el dotar del espacio necesario a cada estudiante en los laboratorios de docencia, a fin de dar cumplimiento con la
planificación de clase, las exigencias de bioseguridad y acatamiento a los indicadores de acreditación.
Es decir que en el caso de tener más de 12 estudiantes por NRC, se brinde las facilidades de infraestructura, equipos y personal de
apoyo para poder dividir a los grupos en dos laboratorios.
FIRMAS

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Dr. FERNANDO HURTADO Ing. JAVIER ROMERO Dr. FERNANDO HURTADO

COORDINADOR DE ÁREA DE COORDINADOR/JEFE DE LABORATORIO
DOCENTE CONOCIMIENTO