Manuales de Prácticas de Ciencias de la Salud

PRÁCTICA 2

EFECTO DE LA TEMPERATURA, PH DE
LA ACTIVIDAD ENZIMÁTICA DE LA
CATALASA EN ALGUNOS ORGANISMOS.

CONTENIDO
Actividad enzimática de la catalasa.

OBJETIVO DE APRENDIZAJE

Determinar el efecto de las variaciones de temperatura y de pH en la actividad

enzimática de la catalasa.

Actividad enzimática
La catalasa enzima está presente en todos los tejidos animales y vegetales, se
encuentra en casi todas las células aeróbicas, donde acelera el rompimiento de
peróxido de hidrógeno (producto tóxico de las células). A veces, la reducción de
oxígeno al agua es incompleta y se produce “superóxido”, una sustancia
sumamente tóxica. Una enzima rompe el “superóxido” y forma agua y peróxido de
hidrógeno, que es menos tóxico. La catalasa entonces rompe el peróxido de
hidrógeno para producir agua y oxígeno.
A. Factores que afectan el funcionamiento de la catalasa. En los ejercicios
siguientes se estudiará el cómo algunos factores pueden afectar funcionamiento
de la catalasa. Esta enzima está presente en casi todas las células aeróbicas y
actúa descomponiendo peróxido de hidrógeno (agua oxigenada) en agua y
oxígeno, según la siguiente reacción: A.1. Funcionamiento de la enzima catalasa
en varios organismos.

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EQUIPO NECESARIO POR EQUIPO DE ALUMNOS

● Peróxido de hidrogeno
● Gasa
● 4 Placas de porcelana
● Goteros
● Mortero
● Embudo
● 5 vasos de precipitado de 50 ml
● 2 vasos de precipitado de 100ml
● Baño de agua
● 8 tubos de ensayo grandes
● Gradilla de tubos de ensayo
● Termómetro
● Agarradera de tubo
● Hielo
● Mechero
● Rejilla
● Solución 3M de HCL
● Solución 3M de NaOH
● Probeta

MATERIALES PARA LA PRÁCTICA PROPORCIONADO POR EL ALUMNO.

● 1 papa cruda picada

● 1 hígado de pollo crudo macerado
● 1 taza de setas crudas picadas
● 1 taza de espinacas o cebolla picadas

PROCEDIMIENTO DE LA PRÁCTICA

A) FUNCIONAMIENTO DE LA ENZIMA CATALASA EN VARIOS

ORGANISMOS.
En este ejercicio se preparará una solución homogénea de hígado para
obtener partículas pequeñas y uniformes y mezclarlas con el agua.
1. Para preparar la solución homogénea, corte en pedazos por separado la
muestra de hígado.
2. Usando una licuadora o mortero, muela el material con un poco de agua
hasta diluir parte de la muestra; no muela excesivamente para que no
queden pedazos muy pequeños del material.
3. De ser necesario, filtre el macerado con una gasa.
4. Coloque el homogenado en un crisol de porcelana.

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5. Usando un gotero, coloque cinco gotas del homogenado de hígado en

una de las fosas de la placa de porcelana y añada tres gotas de peróxido
de hidrógeno.
6. En otro crisol coloque un pedazo pequeño de una seta. Rompa este
pedazo con un bisturí en pedazos más pequeños. Añada tres gotas de
peróxido de hidrógeno.
7. Haga el mismo procedimiento que e n el #6, en otro crisol con un pedazo
de espinaca o cebolla.
8. A un recipiente añada cuatro gotas de agua y tres gotas de peróxido de
hidrógeno.

Actividad enzimática

Anote los resultados en el siguiente cuadro

Sustancia Reacción al añadir gotas de peróxido
Agua Al mezclar no se observó actividad, pero después de unos
minutos se formaron burbujas adheridas al recipiente

Setas Tomo un segundo poder observar el burbujeo

Hígado Al mezclar fue instantáneo el burbujeo

Espinacas

Cebolla Transcurrieron 10 mins y no se observó actividad

Papa

Responde lo siguiente:

1. ¿Qué ocurre al añadir peróxido?

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Comienza la actividad enzimatica

2. ¿Ocurrió lo mismo con todas las muestras?

No,
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3. ¿Por qué se forman burbujas?

Las burbujas representan la actividad enzimática producida

__________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________
_

4. ¿Por qué se preparó una sustancia homogénea o se picaron las muestras? ¿Por qué no
se añadió el peróxido directamente a los tejidos sin macerarlos?
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__________________________________________________________________________
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__________________________________________________________________________
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5. ¿Qué indica los resultados sobre la fisiología de estos organismos?

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B) EFECTO DE LA TEMPERATURA SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS

ENZIMAS

1. Rotule 4 tubos de ensayo del 1 al 4 y caliente un baño de agua hasta 37

°C y otro hasta 80°C.
2. Añada 5 mL de hígado homogenado a cada tubo.
3. Mantenga los tubos a las siguientes temperaturas:
● Tubo 1 = 80 °C por 15 minutos
● Tubo 2 = 37 °C por 15 minutos
● Tubo 3 = Temperatura ambiente
● Tubo 4 = Hielo por 30 minutos
4. Añada 2 mL de peróxido de hidrógeno al tubo 1.
5. Mida el tiempo transcurrido desde que se añadió el peróxido hasta que
se comienzan a producir burbujas, y anótelo en la Tabla siguiente
6. Repita con los demás tubos.
7. Compare sus resultados en término de tiempo de reacción vs.
Temperatura

Tubo Temperatura Tiempo en que Observaciones

tardó en comenzar
una reacción
1 80°C
2 37°C
3 Ambiente
4 Hielo

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Responde el siguiente cuestionario.

1. ¿Cómo se relacionan la temperatura y la actividad enzimática?

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___________________________________________________________
___________________________________________________________

2. ¿Qué les sucede a las enzimas cuando se exponen a

temperaturas extremas (muy frías o muy calientes?
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C) EL EFECTO DEL PH SOBRE EL FUNCIONAMIENTO DE LAS ENZIMAS

1. Rotule tres tubos de ensayo A, B y C

2. Añada 3 mL de homogenado de hígado a cada tubo.
3. Añada soluciones 3M de HCl o 3M de NaOH a los tubos como se
indica a continuación, y agite suavemente hasta mezclar:
● Tubo A – 3 ml de 3M HCl
● Tubo B – 3 ml de 3M NaOH
● Tubo C – control (no ácido ni base)
4. Añada 3 mL de peróxido de hidrógeno a cada tubo.
5. Observe y anote las reacciones en la Tabla siguiente:

Tubo Tiempo en que tarda en Observaciones

reaccionar
A

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B
C

Responda lo siguiente:

1.- ¿Cómo afecta el ph la actividad enzimática?

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_______________________________________________________________

2.- Las enzimas del estómago funcionan óptimamente a un pH de 2. ¿cómo se

afectaría la digestión si el pH aumenta a 4?
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___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
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3.- ¿De qué otras maneras se podría explorar el funcionamiento de las enzimas
estudiadas en el laboratorio?
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___________________________________________________________________________
___________________________________________________________________________
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4.- ¿Puede mencionar otras enzimas que actúan en nuestro cuerpo?

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5.- ¿Qué efecto podría tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las
enzimas?
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6.- Busque un ejemplo de una condición médica que se deba al mal funcionamiento
de una enzima.
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REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS

● Harper. Bioquímica ilustrada Murray, Robert K; Bender, David A, et. al.

McGraw-Hill 2015
● Bioquímica médica Baynes, John W; Dominiczak, Marek H. Elsevier 2015
● Bioquímica básica Herrera, Emilio; Ramos, María del Pilar, et. al. Elsevier
2014

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