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Carreras del área de Salud

BIOLOGÍA CELULAR CCB1103

LABORATORIO Nº6

Actividad enzimática

El conjunto de las reacciones metabólicas que se realizan en un organismo,

ocurren gracias a la presencia de ciertas macromoléculas, las llamadas
enzimas. Estas son de naturaleza química compleja, elaboradas por el
organismo y su acción cumple un rol fundamental en el mantenimiento de los
roles vitales.

Un hecho notable, que permite que permite diferenciar los procesos químicos
biológicos de los que ocurren en el ambiente de la materia inanimada,
consiste en que los procesos se realizan en una secuencia perfectamente
establecida y a temperaturas relativamente bajas, compatibles con la
estabilidad del protoplasma.

Las enzimas aumentan considerablemente, la rapidez de casi todas las

reacciones que se efectúan en los organismos vivos, ya sea que éstas se
realicen tanto dentro, como fuera de la célula. Por consiguiente, existen
tantas enzimas como reacciones metabólicas, lo cual significa, que cada
reacción sea catalizada por una enzima determinada.

Al igual que los catalizadores inorgánicos, su estructura persiste

al final de la reacción, razón por la cual se les denomina
“biocatalizadores”. Atendiendo a su composición química, se les define
también como “catalizadores proteicos”, dada su naturaleza.

La o las sustancias sobre las cuales actúa una enzima, se denomina

sustrato, y a la olas sustancias resultantes productos.

La actividad enzimática puede ponerse de manifiesto en forma

experimental, mediante la identificación y cuantificación de los productos
resultantes, bajo las condiciones ambientales adecuadas (temperatura, pH,
concentración, tanto de la enzima como del sustrato, etc.).

Características de la acción enzimática.

a) Actúan en muy bajas concentraciones.

b) Funcionan entre límites de temperaturas. Temperaturas bajas inhiben su
acción y las temperaturas muy altas paralizan su efecto.
c) Su acción se manifiesta, únicamente a cierta concentración de protones
(pH). Su condición proteica
presenta un punto isoeléctrico fijo.
d) Son específicas en su acción, es decir, cada una actúa sobre un
determinado sustrato.
e) Su acción varía de acuerdo a la concentración del sustrato.
f) Sólo acelera las reacciones sin que intervengan en su dirección ni en su
intensidad, pues éstas características están determinadas por la ley de
acción de masas.
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ACTIVIDADES PRACTICAS

Realiza las actividades señaladas a continuación y considera la siguiente

lista de materiales.

Materiales de laboratorio:
1.- Mechero, rejilla y trípode
2.- Pinzas anatómicas
3.- Tubos de ensayo
4.- Pipetas graduadas
5.- Agua destilada
6.- Gradillas
7.- Pinzas de madera

Material biológico:
1.- Higado fresco
2.- Trozos de papa de 1 cm2

Soluciones:
1.- NaCl 0,25%
3.- Almidón 0,3%

Reactivos:
- Buffer fosfato pH 7,0
- Peróxido de hidrógeno de 100 vol.

Actividades

1. Determinación de la presencia de enzima en tejidos vivos.

Enumere 6 tubos de ensayo. Corte previamente 3 trozos de hígado de igual

tamaño.

Tubo 1: con una pinza, tome un pequeño trozo de hígado fresco y deposítelo
en el fondo del tubo de ensayo. Agregue sobre él 1,5 ml. de peróxido de
hidrógeno. Agite y observe detenidamente la reacción. Anote sus
observaciones.

Tubo 2: tome un otro trozo de hígado y macérelo en un mortero hasta obtener

una pasta acuosa. Deje escurrir el líquido turbio obtenido, en un tubo de
ensayo limpio, cuidando dejar el residuo grueso en el mortero, a fin de
repetir la extracción por unas dos veces más. Agregue 1,5ml de peróxido de
hidrógeno sobre el líquido hepático extraído. Agite, observe y compare con
el tubo anterior. ¿Qué ocurre?

Tubo 3: en un tubo de ensayo, deposite un trozo de hígado con 5 ml. de agua

destilada y sométalo a ebullición por 10 minutos directamente a la llama de
un mechero. Deseche el agua por escurrimiento y deje enfriar. Agregue 1.5
ml de peróxido de hidrógeno, sobre el trozo de hígado hervido. Agite, observe
y compare con los tubos anteriores, ¿aprecia reacción en este caso?
Para los tubos 4, 5 y 6 respectivamente, efectúe el mismo procedimiento
realizado con los tubos anteriores. Reemplace el hígado por trozos de papa,
trabajando con ellos en las mismas condiciones.
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Tubo 4: papa cruda entera + peróxido de hidrógeno. Anote sus observaciones.

Tubo 5: papa cruda molida (extracto) + peróxido de hidrógeno. Anote sus

observaciones.

Tubo 6: papa cocida + peróxido de hidrógeno. Anote sus observaciones.

2. Efecto de la temperatura sobre la actividad bio-catalítica de una enzima.

Obtenga como enzima amilasa salival, a partir de 2ml. de saliva

depositada en un tubo de ensayo (habiéndose enjuagado previamente la boca
con agua destilada). Prepare una dilución de saliva 1:20 (use agua destilada
a 37ºC) y como sustrato utilice una suspensión de almidón al 0,3% en NaCl
0.25% (a 37ºC).
Incube 6 tubos de ensayo, conteniendo el sustrato y la enzima a
distintas temperaturas durante un tiempo fijo.

Preparación de los tubos:

Tubos Enzima Sustrato Buffer(fosfato

(37ºC) pH 7.0) (37ºC)
1 1.0 ml - 0.5
ml
2 - 1.5 ml -
3 - 0.5
1.0 ml ml
4 - 1.5 ml -
5 1.0 ml - 0.5
ml
6 - 1.5 ml -

Luego, coloque los tubos: 1 y 2 a 0ºC (en hielo)

3 y 4 a 37ºC (baño maría)
5 y 6 a 100ºC (baño maría)

Luego de ambientar los tubos por 5 minutos, vacíe el contenido de los tubos 1,
3 y 5 sobre aquel de los tubos 2, 4 y 6 respectivamente. Retorne
inmediatamente los tubos a sus respectivos ambientes, y déjelos en incubación
por 20 minutos.

Una vez cumplido el tiempo de incubación, a los tubos 2, 4 y 6 agregue

una gota de lugol. Observe y anote los resultados obtenidos en la tabla y tome
como referencia el diagrama 1. ¿Qué concluye del experimento?

Temperatura Color con lugol Tasa de reacción

0 ºC
37 º C
100 ºC
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CUESTIONARIO

1.- De sus observaciones ¿ A qué atribuye lo ocurrido cuando se agrega

peróxido de hidrógeno sobre trozos de hígado y papa respectivamente?

2.- ¿Qué puede inferir de los resultados obtenidos sobre la actividad de la

catalasa en tejidos hervidos y sin hervir?

3.- ¿Cómo detectar la formación de oxígeno como producto de la descomposición

del peróxido de hidrógeno? ¿Cómo podría comprobar que se trata de oxígeno
y no de otro gas?

5.- ¿Cuál es la finalidad de primero preparar una batería de tubos para

luego mezclarlos en forma sistemática y tener sólo tres?

6.- ¿Cómo se comportaron los tubos experimentales, en relación al color con

lugol y la tasa de reacción al someterlos a temperaturas diferentes?