Laboratorio

Enzimas

Objetivos

Definir qu es una enzima y cmo estas actan en reacciones dentro de la clula. Identificar diferentes factores que pueden afectar la actividad enzimtica.
Diferenciar entre inhibicin competitiva y no-competitiva.

Enzimas
En su mayora protenas o RNA (riboenzimas) Catalizadores qumicos que agilizan una reaccin qumica formacin o rompimiento de enlaces qumicos Al finalizar la reaccin la enzima se libera y queda disponible para otra reaccin

Enzimas
No se consumen en las reacciones y no se alteran Pueden ser reusadas y no se necesitan en grandes cantidades Actan sobre un sustrato formando un complejo enzima-sustrato al unirse en un lugar especfico del sustrato el sitio activo de la enzima Las enzimas son selectivas, pocas molculas pueden interactuar con el sitio activo y formar el complejo

Reaccin con enzima

Reaccin con y sin enzima

Cuando se forma esta interaccin baja la energa de activacin necesaria para poder llevar a cabo la reaccin.
Sin enzima Con enzima

Energa de activaci n

Curso de la reaccin

Enzimas en una reaccin

Funcionan mejor bajo condiciones especficas (optimas) que incluyen

Temperatura pH

Los cambios pueden alterar el desempeo de la enzima, desactivarla o destruirla Algunas enzimas necesitan activadores para poder formar el complejo enzimasustrato

Cofactores e Inhibidores
Activadores (cofactores)- cambia la forma de la enzima para formar el complejo enzima-sustrato pueden ser iones metlicos de origen orgnico se llaman coenzimas

Cofactores e Inhibidores
Inhibidores- impiden la actividad de la enzima, puede ser de dos formas

bloquea el sitio activo- competitiva altera la forma del sitio activo pegandose a la enzima en otro lugar y cambia la forma de la enzima- no competitiva

Inhibicin Competitiva

Inhibicin No Competitiva

Catalasa
se encuentra en casi todas las clulas aerbicas acta rompiendo el perxido de hidrgeno en agua y oxgeno que se produce en las clulas

catalasa

2 H2O2

2 H2O + O2

Procedimiento

Preparacin de homogenados Para preparar el homogenado, a partir de pedazos de papa, hgado, y espinaca por separado en una licuadora o mortero y moler con un poco de agua hasta diluir parte de la muestra. Poner cada homogenado en un tubo de ensayo.

1.

2.

3. Con gotero, ponga 5 gotas de cada homogenado en las fosas de la placa de porcelana; aada 3 gotas de perxido de hidrgeno a cada muestra. 4. Observe y anote los resultados en la siguiente tabla

Tabla de resultados
Tabla 4.1 Resultados homogenado con perxido de hidrgeno
Homogenado
Agua

Reaccin al aadir gotas del perxido

Papas
Hgado Espinaca

Preguntas
5. Qu ocurri al aadir el perxido? 6. Ocurri lo mismo para todas las muestras? 7. Por qu se forman las burbujas? 8. Qu otros organismos se podran probar?

Procedimiento
1. Identifique 5 tubos de ensayo. 2. Ponga 3 mL de cada homogenado en los tubos como sigue: A - Hgado B - Papa C - Setas D - Espinaca E - Agua 3. Haga una marca hasta donde llega cada homogenado.

Procedimiento
4.Ponga 3 mL de perxido de hidrgeno en cada tubo de ensayo. 5.Observe la reaccin por tubo y marque el cambio en lquido. 6.Tabule los resultados en la Tabla siguiente tabla

Procedimiento
Tabla 4.2 Resultados homogenado con perxido de hidrgeno Tubo Cantidad de burbujas Cunto homogenado se consumi?

7. Qu organismos produjo ms gas? 8. Qu gas se est produciendo? 9. Qu sugiere la evidencia o los resultados de los experimentos realizados? Contienen catalasa?

Efecto de la temperatura
Influye en la actividad. El punto ptimo representa el mximo de actividad. A temperaturas bajas, las enzimas se hallan "muy rgidas" y cuando se supera un valor considerable la actividad cae bruscamente porque, como protena, la enzima se desnaturaliza.

Procedimiento
1. Rotular 5 tubos de ensayo, y calentar bao de H20 hasta 80C, y otro hasta 37C. 2. Aadir 5 mL de hgado homogenado a cada uno. 3. Colocar los tubos en las siguientes condiciones:

Tubo 1 = 80C (poner tubo por 5 minutos) Tubo 2 = 37C (poner tubo por 5 minutos) Tubo 3 = Temperatura ambiental Tubo 4 = En hielo (dejar por 30 minutos) Tubo 5 = En congelador / 4C (dejar por 30 minutos)

Procedimiento
4. Aada 2 mL de perxido al tubo 1. Observe los resultados y el tiempo que tarda en producirse las burbujas. 5. Tome el tiempo inicial al aadir el perxido y el tiempo cuando empiece a producirse las burbujas. 6. Repetir con los dems tubos. 7. Grafique sus resultados (tiempo de reaccin vs. temperatura) en la siguiente Tabla

Efecto del pH
Todas las enzimas presentan un pH ptimo de actividad. El pH puede afectar de varias maneras: El centro activo puede contener aminocidos con grupos ionizados que pueden variar con el pH.

El sustrato puede verse afectado por las variaciones del pH.

Algunas enzimas presentan variaciones peculiares. La pepsina del estmago, presenta un ptimo a pH=2, y la fosfatasa alcalina del intestino un pH= 12

Procedimiento
1. Rotular 3 tubos de ensayo A C. 2. Aada 1 cm de homogenado de hgado a cada tubo. 3. Aada 3 cm de HCL 3M al tubo A 4. Aada 3 cm de NaOH 3M al tubo B 5. Aada 3 cm de agua al tubo C agite suavemente hasta mezclar

6. Aada 3 cm de perxido de hidrgeno a cada tubo. 7. Observe y anote las reacciones

Efecto de la T y el pH

Preguntas para el pensamiento

Cul es la relacin entre el pH y la actividad enzimtica? Las enzimas del estmago funcionan mejor con un pH de 2. Cmo afectara un pH de 4 en el estmago a la digestin? De qu otras maneras se le ocurrira se podra probar el funcionamiento o no funcionamiento de las enzimas estudiadas en el laboratorio? Puede mencionar ejemplos de otras enzimas que acten en nuestro cuerpo? Qu efecto podra tener una fiebre alta prolongada sobre el funcionamiento de las enzimas? Puede mencionar alguna condicin mdica que se deba al malfuncionamiento o no funcionamiento de una enzima?

Preguntas para el pensamiento

Qu sucede cuando se pone perxido de hidrgeno en una herida? Qu sugiere la evidencia? Explique porque tantas especies producen la enzima catalasa. En qu otras maneras las enzimas son importantes para nosotros? Mencione ejemplos de cosas en nuestro diario vivir que envuelven algn uso de enzimas.