UNIVERSIDAD NACIONAL

AUTONOMA DE NICARAGUA,
PRODUCTOS NATURALES
FACULTAD DE CCQQ,
FARMACIA

PRACTICA N° 5

Cuantificación de cafeína en muestras vegetales

INTODUCCIÓN
La cafeína es un compuesto químico que se encuentra de forma natural en algunos vegetales
como los granos de cacao y café, las hojas de té, las bayas de guaraná y la nuez de cola.
También se añade a gran una variedad de alimentos como pasteles, helados, dulces, bebidas
energéticas y bebidas de cola. Se encuentra, asimismo, en combinación con la p-sinefrina en
una serie de suplementos alimenticios que se comercializan con fines adelgazantes y para
mejorar el rendimiento deportivo. Algunos medicamentos y cosméticos contienen también
cafeína. Según las encuestas cubiertas por la base de datos de consumo de alimentos de la
EFSA el café constituye la fuente más importante de cafeína de los adultos, y representa entre
el 40 % y el 94 % de la ingesta total. En Irlanda y en el Reino Unido, el té es la fuente
principal, y representa el 59 % y el 57 % respectivamente de la ingesta total de cafeína. En la
mayoría de países, el chocolate y las bebidas de cacao es la fuente predominante de cafeína en
niños de entre 3 y 10 años, seguida del té y las bebidas de cola.

Competencia

Aplica técnicas para el control de calidad, validación de métodos y la estabilidad do de los

productos fitofarmacéuticos.

Alcance

Esta práctica se realizará en las instalaciones del Departamento de farmacia industrial

Responsabilidades.

Es responsabilidad del instructor, dirigir, designar y evaluar a los estudiantes

Es responsabilidad de los estudiantes, asistir, elaborar y entregar el informe en tiempo y forma
al instructor responsable de cada grupo de laboratorio.

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Desarrollo.

PREPARACIÓN DE MUESTRAS PATRÓN PARA ELABORAR LA RECTA DE

CALIBRADO

Preparación de las muestras patrón

Primero se ha preparado la disolución patrón de cafeína, a partir de 40 mg de cafeína
(previamente secada que se disuelven, en matraz aforado de 100 ml, en agua Milli-Q
(400ppm). Seguidamente, se traspasan, con ayuda de pipeta aforada, 10 ml de esta disolución
a otro matraz aforado de 100 ml y se lleva a enrase con la misma agua Milli-Q (40 ppm). A
partir de esta última solución patrón de c0

1afeína de 40 ppm, se preparan 5 soluciones más diluidas de concentraciones de 4, 8, 16, 24 y

32 microgramos de cafeína por mililitro:

(5 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+2 ml HCl 0,01 M)/50 ml de agua (4 ppm)

(5 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+1 ml HCl 0,01 M)/25 ml de agua (8 ppm)

(10 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+1 ml HCl 0,01 M)/25 ml de agua (16 ppm)

(15 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+1 ml HCl 0,01 M)/25 ml de agua (24 ppm)

(20 ml de solución patrón de cafeína de 40 ppm+ 1 ml HCl 0,01 M)/25 ml de agua (32 ppm)

MUESTRAS DE CAFEÍNA DE CAFÉ

PROCEDIMIENTOS DE SEPARACIÓN DE LA
CAFEÍNA DEL CAFÉ

1. Se pesan aproximadamente 300 mg y se ponen a reflujo con 200 ml de Agua Milli-Q

durante 15 minutos.
2. Seguidamente, se filtra la solución en caliente y se añaden 5 g de Na2CO3 hasta la
total disolución.
3. Se deja enfriar y se agregan 15 ml cloroformo que se extraen agitando suavemente
durante unos minutos y se repite esta operación una vez más.
4. Después de la separación de las dos fases, se añaden pequeñas cantidades de Na2SO4
para absorber el agua.
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5. Se filtra la fase clorofórmica haciéndola pasar por papel filtro hacia un matraz
erlenmeyer o balón, y se deja evaporar hasta sequedad.
6. Una vez eliminado el cloroformo, se añade al mismo matraz o balón, 50 ml de Agua
Milli-Q y se agita bien hasta perfecta disolución.
7. Posteriormente, mediante un embudo se enrasa a 100 ml en un matraz aforado.
8. Finalmente, se toman 10 ml de esta última solución, se añade 1 ml de la solución de
ácido clorhídrico 0,01 M y se enrasa a 25 ml con Agua Milli-Q.
9. Lecturas en HPLC

Condiciones cromatograficas
Fase Movil: Agua; Acetonitrilo (20:80)
Columna: Nucleosil 100 C18, 5 micrómetros, 100 x 4,6 mm.
Detector: UV (273 nm).
Flujo: 1 mL/min
Volumen de inyección: 20 μL

Lecturas en espectrofotometro UV-vis

Agilent 8453 Sistema de Espectroscopía UV-Visible

Cubeta de cuarzo de 10 mm
Reactivos: Cafeína anhidra
Agua Milli-Q (Millipore).
Ácido clorhídrico 0,01 M
Longitud de onda: 271 nm -273 nm

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FUNDAMENTO TEORICO

 Cafeína anhidra

El término anhidra significa que no contiene agua. La cafeína anhidra es la cafeína

deshidratada.

A diferencia de la cafeína tradicional encontrada frecuentemente en el café o el té, la

cafeína anhidra se encuentra en los productos de nutrición deportiva en tabletas, píldoras,
etc. Este tipo de cafeína es absorbida más rápidamente que la cafeína de origen natural,
pudiéndose sentir sus efectos en tan solo 5 minutos después de su consumo. La acción de
este tipo de cafeína suele durar de 20 a 60 minutos aproximadamente.

La cafeína anhidra parece ser más efectiva en la mejora del rendimiento que si se
suministra en forma de cafeína natural.

 Calibración
El método de calibración es un procedimiento analítico muy utilizado en análisis
cuantitativo en química analítica que implica la construcción de una “curva de
calibración” para determinar la concentración de una sustancia (analito) en una muestra
problema. Una curva de calibración es la representación gráfica de una señal que se mide
en función de la concentración de un analito. Conociendo esta relación funcional, será
posible conocer la concentración en una muestra dada mediante la medida de esa señal.

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INSTRUMENTOS

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REACTIVOS

Fórmula: Na₂CO₃
Masa molar: 105.9888 g/mol
Densidad: 2540 kg/m³; 2,54 g/cm³
Solubilidad en agua: 30.7 g por cada 100 g de agua (25 °C)
Punto de fusión: 1124 K (851 °C)
Acidez: 10,33 pKa

Fórmula: CHCl₃
Densidad: 1.49 g/cm³
Masa molar: 119.38 g/mol
Punto de ebullición: 334,2 K (61 °C)
Solubilidad en agua: 0,8 g/100 ml 293,15 K (20 °C)
Acidez: 15.7 (20 °C) pKa
Apariencia: Incoloro

Fórmula: Na2SO4
Masa molar: 142.04 g/mol
Solubilidad en agua: 4.76 g/100 mL (0°C) 42.7 g/100 mL (100°C)
Densidad: 2.664 g/cm³ (anhidro) kg/m³; 1.464 g/cm³ (decahidrato) g/cm³
Punto de fusión: 1157,15 K (884 °C)

Fórmula molecular HCl

Apariencia líquido incoloro o
levemente amarillo
Densidad 1190 (solución 37 %)
1160 solución 32 %
1120 solución 25 % kg/m³; 1,12 g/cm³
Masa molar 36.458 g/mol

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Punto de fusión 247 K (−26 °C)

Punto de ebullición 321 K (48 °C)
Viscosidad 2,259

Formula Molecular: C8H10N4O2

Peso Molecular: 194,19

Registro

El instructor de cada grupo, registrará en formato Excel la nota correspondiente del informe a
cada estudiante asignado. El informe se entregara por vía electrónica dos días hábiles después
de haber finalizado el laboratorio teniendo como hora límite 6 pm, en caso contrario este
informe no será revisado.

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