Laboratorio N°5: Determinación

Espectrofotométrica UV de cafeína en
bebidas gaseosas
I. OBJETIVOS:
• Extraer la cafeína de bebidas gaseosas.
• Determinar la Concentración de cafeína en bebidas gaseosas
tipo cola.
• Determinar la absortividad molar específica y determinar si
cumple o no con la Ley de Lambert y Beer.
• Con la absortividad molar específica determinar la
concentración de cafeína en las bebidas gaseosa , según
primer objetivo.
• Realizar la curva de calibración e interpolar la absorbancia
que corresponde a la muestra para encontrar su
concentración.
• Realizar el mismo cálculo por regresión lineal.
 II. Fundamento Teórico:
Las bebidas gaseosas son un factor de
riesgo importante para la salud en
general, ya que contribuyen con el
sobrepeso y la obesidad. A su vez,
aumentan el riesgo de osteoporosis,
problemas dentales, renales y cardiacos
entre otras enfermedades.
Contienen agua, azúcar, edulcorantes
artificiales, ácidos (fosfórico, cítrico,
málico, tartárico), CAFEÍNA, colorantes,
saborizantes, dióxido de carbono,
conservantes y sodio.
La cafeína es un alcaloide natural (1, 3, 7 trimetilxantina) de sabor
amargo, que se encuentra en hojas, frutos y semillas de un amplio
grupo de plantas como los granos de café y cacao, mate, guaraná,
hojas de té, nueces de cola, etc. Además de su presencia en
muchas bebidas hechas a partir de componentes naturales, como
los ya nombrados, la cafeína, se adiciona a bebidas gaseosas
siendo una sustancia usada en la industria alimentaria,
principalmente como aromatizante para aportar sabor y olor a los
refrescos de cola.
Las bebidas con cafeína son consumidas diariamente, no sólo por el
atractivo que causan para muchos consumidores sino también por
los efectos estimulantes
Y psicoactivos que produce (disminuye la sensación de fatiga,
combate la somnolencia, etc.)
Desde el punto de vista de la seguridad alimentaria ha sido calificada por la
Food and Drug Administration (FDA) como sustancia GRAS (Generally
Recognized As Safe), es decir, que bajo las condiciones de uso habituales
es segura. A pesar de ello, la UE, en el Reglamento (CE) 872/2012 de 1 de
octubre, establece un límite máximo de cafeína en bebidas refrescantes de
150 mg/L.
Una vez ingerida, la cafeína, se distribuye a la mayoría de los tejidos del
organismo, incluyendo el cerebro. Como ya se ha comentado, provoca
una estimulación del sistema nervioso que puede resultar beneficiosa,
no obstante, un exceso en la dosis (más de 500-600 mg diarios) puede
producir reacciones adversas como nerviosismo, ansiedad, irritabilidad,
insomnio, dolor de cabeza, taquicardia, arritmia y problemas
gastrointestinales. Se ha estimado una dosis mortal media de 10 g de
cafeína para adultos
La determinación de cafeína ha adquirido mucha
importancia, debido a su uso en la industria farmacéutica
y en la industria de alimentos; ya sea como ingrediente en
la elaboración de refrescos y bebidas energéticas o por su
presencia en productos como el té, el mate, el cacao y el
café. En todos estos casos, el control de calidad del
parámetro cafeína es necesario en los productos que la
contienen. Por esta razón, resulta importante el desarrollo
de métodos instrumentales para su determinación en
diversas matrices, especialmente en alimentos.
En estado puro la cafeína es un sólido cristalino blanco inodoro en
forma de agujas blancas o polvo, con un gusto muy amargo, que tiene
una densidad de 1,23 g/ml, un punto de fusión de 237 °C, su peso
molecular es 194,19 y es eflorescente en contacto con aire. A presión
atmosférica sublima sin descomponerse por calentamiento a 178ºC.
 
En cuanto a su solubilidad, esta sustancia es soluble en agua y es
función directa de la temperatura. Sin embargo, También tiene afinidad
por algunos disolventes orgánicos, como el cloroformo (CHCl3) y el
diclorometano (CH2Cl2), que a su vez son casi inmiscibles en agua.
Por ello en la presente determinación se extrae el café de la bebida
gaseosa mediante cloroformo.
Trabajos de investigación como el de los siguientes autores Ana
Belén González Reyes1, Arturo Hardisson de la Torre1, Ángel
José Gutiérrez Fernández1*, Carmen Rubio Armendáriz1,
Inmaculada Frías Tejera2 y Consuelo Revert Gironés3; reportan
los siguientes resultados :
 
DETERMINACIONES ANALITICAS DE CAFEÍNA
 
En la actualidad, las técnicas analíticas más utilizadas para la
determinación de cafeína en alimentos y bebidas son la cromatografía
líquida de alta resolución (HPLC), la electroforesis capilar y la
espectrofotometría UV a una longitud de onda 272-274 nm. Entre estas
técnicas, destaca la cromatografía líquida de alta resolución (HPLC) por
ser muy selectiva, sensible y versátil. Sin embargo, la elección de una
técnica u otra para cuantificar el contenido en cafeína de un producto va
a depender además de otros aspectos como son la disponibilidad de
equipamiento adecuado, el volumen de muestras a analizar, el rango de
concentraciones de trabajo, etc.
Por ejemplo en un espectrofotómetro UV-.Vis 8453 Agilent
Technology se recoge el siguiente espectro de absorción
molecular correspondiente a la cafeína , que presenta 2
picos : 206 y 273 nm
En las siguiente figura se presentan los espectros de absorción molecular
correspondientes a la cafeína para estándares de 4;8;16;24 y 32 ppm .

Espectro de absorbancia de los patrones de cafeína

En la tabla siguiente se presentan las absorbancias a las concentraciones

señaladas
  Concentraciones patrón de cafeína y absorbancias
El gráfico siguiente presenta la curva de calibración externa en función a los
estándares preparados con el objeto de determinar la concentración de cafeína en
muestras de café

Curva de calibrado obtenida con espectrofotómetro UV-Vis

III.- MATERIALES Y MÉTODOS:
3.1.- Equipos y Materiales:

• Balanza Analítica
• Espectrofotómetro HP 8452
• Plancha de calentamiento
• Equipó de filtración
• Matraces Aforados 100 ml
• Vasos de Precipitados
• Probeta de 50 ml
• Pipetas de 2; 5 y 10ml
• Matraces
• Picetas
• Papel filtro
3.2. Reactivos:
• Cafeína anhidra
• Carbonato de sodio
• Cloroformo
• Sulfato de sodio
• Acido clorhídrico
• Agua Destilada
• En un vaso de precipitados de 50ml pesar la cantidad de
0,100 g de cafeína.
• Agregar agua destilada para disolver.
• La solución colocarla en una fiola de 1000ml, enrazar con
agua destilada y rotular.

Solución de Cafeína
1000ppm
4. Preparación de la Curva de Calibración:
a. Preparar estándares, correspondientes a 4; 8; 12; y 16
ppm de cafeína a partir de la solución stock de 100 ppm,
para un volumen final de 100ml. Utilizando la fórmula de
dilución: C1V1 = C2V2

b. Medir las Absorbancias a 272nm, previa calibración con

el blanco (agua destilada).
 
Preparación de la Curva de Calibración:
Preparar estándares, correspondientes a 4, 8, 12 y 16 ppm a
partir de la solución stock de 100 ppm de cafeína

Cafeína 100ppm Blanco y soluciones estándar de

4,8,12 y 16 ppm cafeína
II. Tratamiento de la Muestra:
a. Considerar como muestra refrescos de Coca Cola, Pepsi, Black desgasificados.
b. En un vaso de precipitados calentar suavemente aproximadamente 100ml de refresco,
agitando para desgasificar.

c. Extraer 10 ml de la gaseosa desgasificada y pasarla a un beaker de 150 ml, añadir.

aproximadamente 50 ml de agua destilada y 5 g de Na2CO3 luego calentar suavemente
hasta disolución
d. La solución anterior trasvasar a un matraz aforado y diluir hasta 100 ml.
e. Trasvasar la muestra a una pera de decantación de 250 ml, se agregan 15 ml cloroformo y se agita
durante unos minutos para la extracción de la cafeína que se extrae por su solubilidad en el
cloroformo y se repite esta operación una vez más.

f. Después de la separación de las dos fases, se añaden pequeñas cantidades de Na2SO4 para
absorber el agua, se filtra la fase clorofórmica haciéndola pasar por papel filtro hacia un matraz
erlenmeyer o balón, y se deja evaporar hasta sequedad.
g. Una vez eliminado el cloroformo, se añade al mismo matraz o balón, 50 ml de agua destilada ,
se agita bien hasta perfecta disolución, se añade 4 ml de HCl 0,01 M.

h. Colocar la solución anterior mediante un embudo a una fiola de 100ml, llenar con agua
destilada hasta la línea de aforo, tapar y homogenizar.

i. Tomar lectura de la absorbancia en el espectrofotómetro seleccionando la longitud de onda de

272 nm.
V.- TABLA DE PRESENTACIÓN DE RESULTADOS

Estándar Concentración Concentración Absorbancia ℰ

cafeína cafeína λ = 272nm Lmol-1cm-1
(ppm) (mol/Lt)
1 0,2010
4
2 0,4040
8
3 0,6050
12
4 0,8020
16
0,5040
Muestra

b = 1.00cm PMcafeína = 194,19gr/mol

Determinar la Concentración de la muestra con la ecuación de
Lamber y Beer:

Expresión de resultados:
Mediante ley de Lamber y Beer y mediante Curva de
calibración.
Realizar los cálculos para expresarlos en ppm o mg/Lt y
porcentaje de cafeína en las gaseosas
VI. ANÁLISIS DE RESULTADOS

VII. OBSERVACIONES

VII. CONCLUSIONES

VIII. RECOMENDACIONES
CUESTIONARIO
• Por referencias bibliográficas seleccione un método para la
determinación de cafeína entre la espectrofotometría UV,
HPLC-UV y HPLC-SM. Explique por qué.

• Con sentido crítico y reflexivo mencione ¿Cuál es su

opinión respecto al contenido y consumo de bebidas
gaseosas con cafeína?