ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

VICERRECTORADO ACADÉMICO
DIRECCIÓN DE DESARROLLO ACADÉMICO

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Facultad
FACULTAD: CIENCIAS
CARRERA: BIOQUÍMICA Y FARMACIA

GUÍA DE LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA APLICADA

PARALELO: QUINTO A

PRÁCTICA No. …5..DETERMINACIÓN DE BACTERIAS PROTEOLÍTICAS

1. DATOS GENERALES:

NOMBRE: (estudiante(s) CODIGO(S): (de estudiante(s)

…………………………………… ………………………………….

…………………………………… ………………………………….

GRUPO No.: ………….

FECHA DE REALIZACIÓN: FECHA DE ENTREGA:

2018-05-30 dd/mm/aa

Los micoorganismos proteolíticos producen exoenzimas con capacidad para hidrolizar las
proteínas hasta péptidos y aminoá cidos ocasionando defectos en el olor y sabor de los
alimentos. En este grupo se encuentran varias especies de bacterias que pertenecen a los
géneros Bacillus, Clostridium, Proteus y Pseudomonas. La actividad proteolítica se puede
evidenciar in vitro usando como substratos caseína, leche descremada, gelatina y otros.

2. OBJETIVO:

Enumerar bacterias proteolíticas mediante la inoculació n de muestras apropiadas

en placas de agar leche e incubació n en condiciones apropiadas.

3. INSTRUCCIONES
 Inocular por duplicado 1 mL. de las diluciones seleccionadas
 Agregar aproximadamente 15 mL. de agar ( PCA + 5% de leche descremada) estéril
y enfriado a 45 °C
 Mezclar el inó culo má s el agar
 Invertir las placas e incubarlas a 21°C durante 72 horas
 Selecccionar las cajas que presenten entre 20 a 200 colonias
 Para leer, agregar al medio de cultivo unos mililitros de una solució n acuosa de HCl
al 1 % o á cido acético al 10 % durante 1 minuto.
  Eliminar el excedente de á cido y contar las colonias que presenten un halo claro
producido por la proteó lisis
 Calcular el resultado
 Reportar como nú mero de microorganismos proteolíticos por gramo o mL. de
muestra.

4. ACTIVIDADES POR DESARROLLAR

 Preparació n de los materiales de vidrio, tubos con diluyente y pipetas estériles.

 Preparació n de las placas de agar-leche, para lo cual se debe rehidratar el medio
PCA en el volumen de agua apropiado, después esterilizar en el autoclave a 121°C
durante 15 minutos y cuando el medio de cultivo estéril se encuentre a 55°C se
adicionará la leche descremada estéril en proporció n del 5%, esto es 5 mL de leche
a 95 mL de medio de cultivo.
 Las placas preparadas se dejan solidificar, se invierten y se deja secar su superficie a
temperatura ambiente.
 Las placas de agar leche se rotulan y se guardan en refrigeració n hasta el momento
de usarlas
 Un grupo debe preparar el agar leche, por componentes. La fó rmula para un litro es:
 Leche descremada estéril 10 mL
 Extracto de levadura: 0.5 g
 Sulfato de amonio: 0.5 g
 Cloruro de calcio. 0.5 g
 Fosfato monobásico de potasio: 0.1 g
 Fosfato dibásico de potasio: 0.1 g
 Agar 15 g

5. RESULTADOS OBTENIDOS
Las bacterias proteolíticas aparecerá n en las placas de agar leche, rodeadas de zonas
con aclaramiento del agar

6. CONCLUSIONES

Describir en forma ló gica las conclusiones a que conlleven la prá ctica

7. RECOMENDACIONES

Describir en forma ló gica las recomendaciones que sean pertinentes

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Dra. Janneth Gallegos N. Ph D