Protocolo para un Hemocultivo- Sistemas comerciales de un Hemocultivo

 Hemocultivo es un método diagnóstico realizado para la detección de

microorganismos en la sangre, y así, posteriormente, realizar la identificación y
determinación de sensibilidad.
 Existen una gran cantidad de situaciones en las que es necesario realizar un
hemocultivo, pero antes debe tratarse una administración de terapia
antimicrobiana sistémica, siempre que exista sospecha clínica de sepsis,
meningitis, pielonefritis, infección intraabdominal, infecciones graves de la piel y
tejidos blandos, neumonía, endocarditis. 
Lugar de extracción:
Si la extracción es a través de catéter venoso central (CVC), se debe realizar:
desinfección previa del
puerto por donde se extrae la muestra con alcohol 70º, desechar 10 ml de sangre,
realizar la extracción y lavar la vía con 10 ml de suero fisiológico.
Preparación de la piel:
Muy importante realizar lavado de manos antiséptico con solución hidroalcohólica.
Limpiar la piel en el área de inserción de la aguja con clorhexidina 2% (acuosa
en niños y alcohólica en adultos) haciendo un círculo de 3 a 5 cm del centro a la
periferia. Evitar tocar con los dedos el lugar de la venopunción una vez
desinfectada la zona de punción. Si fuese necesario tocar, desinfectar el dedo
igual que la zona de punción.
NOTA: La clorhexidina acuosa al 2% necesita un tiempo de secado aproximado de 2
minutos, mientras que la clorhexidina con base alcohólica al 2%, entre 15-30
segundos.
Desinfección de los tapones:
Retirar las protecciones de plástico de los frascos y limpiar con gasa impregnada en
alcohol de 70º los tapones de goma de los frascos, dejándolos secar.

La muestra de sangre para hemocultivo debe extraerse de una vena, utilizándose

generalmente las del antebrazo:

 Tener los materiales a disposición como jeringas, gasas, agujas, y colocar sobre el
campo estéril ya preparado.

 Realizar la extracción manteniendo la técnica aséptica. Volumen de sangre a

extraer 20 ml adultos, 4 ml niños de mayores de 1 año, y 2ml Neonatos y niños
hasta 1 año.

 Seguido aflojamos el compresor y colocamos esparadrapo con gasa.

 Despegar el código de barras de las botellas y pegar a la petición del hemocultivo.

 Pegar la etiqueta identificativa del paciente en los frascos de hemocultivos.

 Después de cada extracción, enviar de inmediato al laboratorio de Microbiología.

ORDEN DE LLENADO.
PRIMERO: Con aguja y jeringa: Inocular primero la botella anaerobia y después la
botella aerobia.
SEGUNDO: 2º Con palomilla: Inocular primero la botella aerobia y después la
anaerobia

Intervalo de tiempo entre tomas:

Realizar las tomas de forma consecutiva, sin esperar tiempo entre ellas, pero siempre de
vías diferentes.
Orden de llenado de hemocultivos

1. Con aguja y jeringa: Inocular primero la botella anaerobia y después la botella

aerobia.
2. Con palomilla: Inocular primero la botella aerobia y después la anaerobia.

 No cambiar la aguja para inocular la sangre en los frascos de

hemocultivo.
 Invertir varias veces los frascos para mezclar la sangre con el medio de
cultivo.

¿Cuándo realizar la extracción?

se deben extraer antes de iniciar la terapia antimicrobiana sistémica, es decir que se
recomienda que la extracción se haga lo antes posible al comenzar la fiebre.

Número de series
El uso de set de hemocultivo:

 Incluye 4 frascos (2 para cultivo aerobio y otros 2 para anaerobio)

 Eleva la sensibilidad >90%.

Ante sospecha de bacteriemia por catéter central:

 Se recomienda la extracción de 3 sets (2 por vía periférica y la tercera por el

catéter).

HEMOCULTIVOS POSITIVOS:

Tinción de Gram y otras tinciones:

-Método convencional: si se observan signos de crecimiento, o los sistemas automáticos

lo señalan como positivo, inmediatamente deben aspirarse asépticamente de 3 a 5 ml de
caldo del frasco. // introducirlos en un tubo estéril y depositar una gota en un
portaobjetos para realizar una tinción con la técnica de Gram. Si no se observan
microorganismos: puede ser útil realizar una segunda tinción con naranja de acridina
que es capaz de detectar un número menor de bacterias. Esta técnica ha demostrado su
utilidad en bacteriemias por Brucella y Campylobacter.

Métodos manuales
-Convencional
Observación macroscópica de los signos de crecimiento de una pareja de frascos con
medio de cultivo líquido.

-Bifásico
Un frasco con un medio compuesto de una fase sólida y otra líquida. Al inclinar el
frasco, el medio líquido cubre totalmente el medio sólido.

-Manométrico.
Sistema Signal (Oxoid)Consta botella con caldo de cultivo a la que, se le acopla una
pequeña cámara con una aguja que llega hasta el fondo del medio líquido.
La presencia de medio de cultivo en la cámara indica crecimiento bacteriano de manera
rápida y sencilla

-Lisis-filtración:

Después de la lisis de las células sanguíneas, se procede a filtrar la sangre para

retener las bacterias. El filtro o fragmentos del mismo, se siembra en distintos medios de
cultivo.

-Lisis-centrifugación. Sistema Isolator:

Consta de un tubo que contiene un agente lisante, agente antiespumante, anticoagulantes

y un líquido fluoroquímico inerte. Objetivo tras inoculación de la sangre, lisar las
células, centrifugar el tubo. Después se desecha el sobrenadante y se siembra el
sedimento en distintos medios de cultivo.

Sistemas comerciales automáticos de hemocultivos:

-Bactec-9240 (Becton Dickinson)

Es un sistema totalmente automático, no invasor, de agitación continua, que se compone

de un incubador, un detector y un ordenador.

-BacT/Alert (Organon Teknica)

Primer sistema comercial no invasor de agitación y

monitorización continua de cada frasco. Detecta el aumento y/o nivel total de CO2
producido por el crecimiento microbiano utilizando un sensor colorimétrico interno
pegado al fondo de los frascos.

-El ESP (Difco Laboratories):

Sistema automático no invasor en el que los frascos se colocan en cajones y los de
anaerobios no se agitan.
Monitoriza cada frasco cada 12 minutos y el crecimiento se mide por un método
manométrico que detecta el consumo y/o la producción de gas.

-El sistema Vital (bioMerieux):

Difiere de los anteriores, incorpora un indicador fluorescente en el medio de cultivo.
Como consecuencia del metabolismo microbiano se producen cambios en el pH, en el
potencial redox o en el nivel de CO2 que provocan una disminución de la fluorescencia
del indicador.