UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

FACULTAD DE: Ciencias de la Salud - Medicina Humana

CURSO: Bioquímica

PROFESOR(A): Sergio Quevedo

TEMA: Técnicas básicas de identificación de biomoléculas

INTEGRANTES:

Apellidos y Nombres Participación

Lozada Chavez, Abigail 100%

Rojas Barrera, Anabel 100%

Ñaupari Cruz, Maria Elena 100%

Yataco Sandoval, Axel 100 %

SECCIÓN: 3J1
FECHA DE REALIZACIÓN DE LA PRÁCTICA: 30/09/2023

FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 11/10/2023

1. INTRODUCCIÓN:

Las técnicas fundamentales para detectar biomoléculas pueden ser de

naturaleza cuantitativa o cualitativa, pero comparten el mismo propósito: la
identificación de biomoléculas como proteínas, carbohidratos, lípidos y
ácidos. Esto es especialmente relevante en el ámbito de la investigación
biomédica y los exámenes clínicos, donde la presencia o ausencia de ciertas
biomoléculas puede indicar la presencia de enfermedades o condiciones
específicas. (1)

Algunas de estas técnicas básicas, como el método de Biuret para la

detección de proteínas y el uso de enzimas como la glucosa oxidasa para
identificar carbohidratos. También, la importancia de las pruebas de
solubilidad en la identificación de lípidos, destacando cómo la solubilidad
depende de las fuerzas intermoleculares entre solutos y solventes.

Un ejemplo es el método de Biuret, que se basa en la formación de un

complejo coloreado entre el Cu2 + y los grupos NH de los enlaces peptídicos
en un entorno alcalino, donde 1Cu2 + se enlaza con 4 NH. Sin embargo, este
método tiene una sensibilidad limitada y se recomienda principalmente para
la cuantificación de proteínas en muestras altamente concentradas, como el
suero.

En el caso del método de la glucosa oxidasa, la glucosa reacciona con un

reactivo que contiene una mezcla de las enzimas Glucosa oxidasa y la
Peroxidasa.

Para identificar los lípidos, que son insolubles en agua, se puede realizar una
prueba de solubilidad. La solubilidad depende de las fuerzas intermoleculares
entre el soluto y el solvente. Cuando un soluto se disuelve en un disolvente,
sus moléculas o iones se separan y se distribuyen al azar, rodeadas por las
moléculas del disolvente en un proceso llamado solvatación. (2)

2. OBJETIVOS:

● Identificar biomoléculas como proteínas, carbohidratos, lípidos y

ácidos nucleicos.
3. MATERIALES:
a. Materiales del estudiante:
● 01 gradilla
● 05 tubos de ensayo 13x100mm
● 10 tubos Eppendorf 1.5 mL
● 01 piseta con agua destilada
● 07 pipetas graduadas 1 mL
● 01 cronómetro o temporizador
●
b. Materiales del profesor:
● 01 Thermo Scientific™ Espectrofotómetro visible GENESYS™ 30
● 01 micropipeta 10 μL, 20 μL, 100 μL, 1000 μL
● Puntas descartables respectivas
● 20 cubetas para espectrofotometría
● 01 estuche de glucosa oxidasa
● 01 muestra de suero
● Muestra de suero o plasma sanguíneo 3 mL
● 01 reactivo EDTA/Cu frasco 11 mL
● 01 Thermo Scientific™ Espectrofotómetro visible GENESYS™ 30
● 01 baño maría 37°C
● 01 micropipeta 100-1000 μL y/o de 5-50μL
● 12 puntas descartables respectivas
● 12 cubetas para espectrofotometría
● 01 vórtex
● 01 muestra de aceite
● 01 benceno

4. MÉTODO

- Método glucosa oxidasa:

La glucosa reacciona con el reactivo enzimático que contiene una mezcla de

las enzimas Glucosa Oxidasa (GOD) y Peroxidasa (POD). En la primera
etapa la Glucosa es oxidada a Ac. Glucónico por la acción de la enzima
GOD, liberándo se como producto H2O2, el cual en una reacción mediada
por la enzima POD, reacciona con el Ac. p-Hidroxibenzoico y 4-
Aminoantipirina produciendo un compuesto coloreado con un máximo de
absorción a 505 nm., en cantidad proporcional a la cantidad de Glucosa
presente en la muestra
 - Método de Biuret para la detección de proteínas:
La determinación de las proteínas totales se realiza utilizando iones cúpricos
que en medio alcalino reacciona con las proteínas formando compuestos de
coordinación de color violeta, cuyo pico de máxima absorción es de 540 nm y
su intensidad es proporcional a la concentración de proteínas.

- Método de solubilidad para lípidos:

Se basa en la diferente solubilidad de los lípidos en el agua y en solventes
orgánicos. Los lípidos son solubles en solventes orgánicos como el benceno,
éter, cloroformo; pero son insolubles en el agua. Al mezclar aceite con agua
se forman dos fases o capas. Al agitar la mezcla, se forma una emulsión de
aspecto lechoso. Al cesar la agitación, luego de unos minutos, el agua y el
aceite se separan nuevamente en dos fases o capas.

5. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

● Método de la glucosa oxidasa

- Mezclar e incubar 5 minutos a 37°C o temperatura ambiente (20° a 25°C).
Leer las absorbancias ajustando a cero el espectrofotómetro con el blanco de
reactivo. El color resultante es estable por lo menos treinta minutos.
- Calcular el factor de calibración y la concentración de glucosa en el suero
● Método de biuret
- Incubar durante 15 minutos a 37ºC y leer en el espectrofotómetro a 540 nm.
- Utilizar el método del FC para calcular la concentración de proteínas en la
muestra (suero).
● Método de la solubilidad
- Marcar dos tubos de ensayo A y B respectivamente.
- En el tubo A colocar 3 mL de éter y en el tubo B 3 mL de agua.
- Luego, agregar 3 mL de aceite a cada uno de los tubos, observar la
solubilidad del aceite en éter y en agua y registrar sus observaciones.
- Luego, agitar los tubos y observar la formación de una emulsión en el tubo B.
Registrar sus observaciones.
- Colocar los tubos en la gradilla (sin agitación) e incubar por unos minutos a
temperatura ambiente.
- Observar la solubilidad del aceite en ambos tubos y registrar sus
observaciones
6. RESULTADOS

Método de biuret

Blanco Estándar Muestra

problema

Tubos Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Contenido 20 μL de agua 20 μL de Standard 20 μL de suero

destilada de proteínas +
+ + 1 mL de reactivo
1 mL de reactivo 1 mL de reactivo EDTA/Cu
EDTA/Cu EDTA/Cu

Absorbancia 0.033 0.319 0.353

Método de glucosa oxidasa

Blanco Estándar Muestra

problema

Tubos Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Contenido 1 mL de reactivo 0.01 mL de 0.01 mL de

enzimático estándar muestra
 (glucosa oxidasa y + +
peroxidasa) 1 mL de reactivo 1 mL de reactivo
enzimático enzimático
(glucosa oxidasa y (glucosa oxidasa y
peroxidasa) peroxidasa)

Absorbancia 0.0931 0.955 0.024

Método de solubilidad de los lípidos

Tubos Tubo 1 Tubo 2

Contenido 3 mL de H2O 3 mL de éter

+ +
3 mL de aceite 3 mL de aceite

Fases 2 fases (polar - apolar) 1 fase (apolar - apolar)

Resultado Se observa que se han Se observa que al agitar,

formado 2 fases se ha formado 1 sola fase
HETEROGÉNEAS HOMOGÉNEA
(sustancias inmiscibles), (sustancias miscibles),
esto se debe a que el esto se debe a que tanto
 aceite es apolar y el agua
es polar. La sustancia de
mayor densidad irá hacia
la base y la de menor
densidad irá hacia la
superficie.
el aceite como el
disolvente son sustancias
apolares, por lo tanto el
aceite será soluble en
esta.

7. DISCUSIÓN:

La identificación de biomoléculas es crucial para comprender los procesos metabólicos en

las células. Utilizaremos la espectrofotometría para analizar las biomoléculas lo cual nos
permitirá descubrir cambios en la expresión de proteínas y metabolitos relacionados con
enfermedades o condiciones especiales. En nuestro caso se dio una hipoglucemia esto
debido a que las muestras estuvieron guardadas a temperatura ambiente recibiendo una
variación de constante de la misma lo cual desnaturaliza las proteínas y por ende afectó
nuestros resultados.(3)
Según los datos recopilados de nuestra mesa, en proteínas séricas totales (V.N.= 6.0-8,3
g/dL), en nuestro paciente presenta un valor de 6.19 g/dl, lo cual es normoproteinemia, y no
tiene nada de malo ya que se encuentra en los valores normales. Sin embargo, en el
resultado de la glucosa en sangre (V.N.= 60-110 mg/dL), nuestro paciente tiene 2.51
g/dl es un valor extremadamente bajo, que indica una hipoglucemia severa, debido
a los niveles por debajo de 50 mg/dl, La hipoglucemia severa ocurre cuando el nivel
de azúcar en la sangre de un individuo disminuye significativamente, lo que puede
llevar a confusión y pérdida de la conciencia. Normalmente, este problema afecta a
personas con diabetes que están bajo tratamiento con insulina. También da a las
personas que tienen un desequilibrio entre dosis o tipo de insulina administrada y la
cantidad de calorías aportadas en la dieta, realización de ejercicio físico excesivo o
desacostumbrado.
Ingesta de alcohol o medicamentos, como salicilatos, clofibrato, fenilbutazona y
sulfinpirazona, debido a la interacción farmacológica con los antidiabéticos orales.
(4)

8. CONCLUSIÓN:
- Se concluye que existen diversas técnicas de identificación de biomoléculas y que
cada una de ellas tiene un fundamento diferente y específico para el tipo de
biomolécula a identificar, como por ejemplo, en la identificación de proteínas, se
cuenta con métodos cualitativos y cuantitativos: electroforesis (cuantitativo) y método
de Biuret (cualitativo).
- Se concluye que en base a la interpretación de los resultados obtenidos de las
diferentes técnicas para la identificación de biomoléculas podemos determinar la
concentración de proteínas o glucosa en las personas y con ello definir si un
paciente en el caso de proteínas puede tener hiperproteinemia o hipoproteinemia.

9. RECOMENDACIONES:
 ● Llevar a cabo análisis estadísticos adecuados en función del tipo de datos
generados es esencial.
● Realizar cálculos precisos al determinar las cantidades o proporciones a
incorporar en las muestras con el propósito de prevenir errores que tengan un
impacto en los resultados finales.

10. REFERENCIAS:

1. 1.9: Detección de biomoléculas [Internet]. LibreTexts Español. Libretexts;

2022 [citado el 10 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://espanol.libretexts.org/Biologia/Biotecnolog%C3%ADa/Manual_de_Lab
oratorio%3A_Introducci%C3%B3n_a_la_Biotecnolog%C3%ADa/01%3A_T%
C3%A9cnicas/1.09%3A_Detecci%C3%B3n_de_biomol%C3%A9culas

2. 9.2: El proceso de solución [Internet]. LibreTexts Español. Libretexts; 2022

[citado el 10 de octubre de 2023]. Disponible en:
https://espanol.libretexts.org/Quimica/Qu%C3%ADmica_Introductoria%2C_C
onceptual_y_GOB/Mapa%3A_Fundamentos_de_Qu%C3%ADmica_General_
Org%C3%A1nica_y_Biol%C3%B3gica_(McMurry_et_al.)/09%3A_Soluciones/
9.02%3A_El_proceso_de_soluci%C3%B3n
3. Di LorenziBruzzone Roberto Milton, Bruno Lorena, Pandolfi Marcelo, Javiel
Gerardo, Goñi Mabel. Hipoglucemia en pacientes diabéticos. Rev. Urug. Med.
Int. [Internet]. 2017 Dic [citado 2023 Oct 12] ; 2( 3 ): 51-60. Disponible en:
http://www.scielo.edu.uy/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S2393-
67972017000300051&lng=es.
4. 3. Hipoglucemia [Internet]. https://www.cun.es. [citado el 11 de octubre de
2023]. Disponible en: https://www.cun.es/enfermedades-
tratamientos/enfermedades/hipoglucemia