UNIVERSIDAD PRIVADA NORBERT WIENER

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUIMICA

Curso : Química orgánica III

Docente : López Parra Ronal Rosendo

Estudiante : Pérez Vega Williams Jesús

Lima, Perú

2022- II
 Práctica N° 04 de Química Orgánica III

Determinación de la glucosa por métodos espectroscópico

PROCEDIMIENTO

Antrona tiourea

 Solución stock 66% V/V de H2SO4 disolver 10 g de tiourea y 0,5 g de antrona en un litro
de H2S04 calentando a 80-90 °C
 Conservar el reactivo entre 0-4 °C, glucosa estándar rango 25-200 µg/mL
 Hacer una curva de calibración poner 0,2 mL de la solución problema más 2 mL del
reactivo de antrona agitar.
 Poner en un baño de agua a T° ambiente y luego en un baño de agua a ebullición por
15 minutos, enfriar guardar en la oscuridad.
 Medir la absorbancia de 620 nm después de 20-30 minutos
 Preparación de la solución “Madre”.
 Pesar 0,5 g de glucosa y enrasar en una fiola de 1 L
 Preparación de las diluciones.
 De la solución “madre” coger:

a)5 Ml; b)7.5 mL; c)10 mL; d)15 mL; e)20 mL; f)22.5 mL; g)30 mL; h)32.5 mL; i)35 mL; j)40 mL.

 Cada una de las mediciones anteriores enrasar en una fiola de 100 mL para cada una
de las muestras.
 Preparación de las diluciones
 Luego llevar a baño maría por aproximadamente 10 a 15 minutos.
 Un lugar oscuro para no altear la muestra
 Medir la absorbancia de 620 nm después de 20 a 30 minutos.
CONCLUCIONES

 Mediante los valores de absorbancia obtenidos mediante el espectrofotómetro y el

cálculo de la concentración madre se obtuvo los datos para elaborar grafica de la curva
de calibración.
 Cuando la reacción se lleva a cabo con carbohidratos con enlaces glicosídicos, estos se
hidrolizan y los azúcares simples se deshidratan a furfural o hidroximetilfurfural. La
reacción de la antrona se basa en la acción hidrolítica y deshidratante del ácido
sulfúrico concentrado sobre los carbohidratos.
 Se tienen diferentes tipos de métodos para cuantificar y cualificar para la
concentración de los azúcares en los líquidos biológicos.
CUESTIONARIO

1.Describa los métodos que se utilizan para determinar la concentración de azúcares en líquido
biológico.

El Método de la Espectroscopía: El fundamento de la espectroscopía se debe a la capacidad de

las moléculas para absorber radiaciones, entre ellas las radiaciones dentro del espectro UV
visible. Las longitudes de onda de las radiaciones que una molécula puede absorber y la
eficiencia con la que se absorben dependen de la estructura atómica y de las condiciones del
medio (pH, temperatura, fuerza iónica, constante dieléctrica), por lo que dicha técnica
constituye un valioso instrumento para la determinación y caracterización de biomoléculas.

El Método Enzimático-colorimétrico De La Glucosa: La técnica se fundamenta en el uso de dos

reacciones acopladas catalizadas por las enzimas glucosa oxidasa y peroxidasa que convierten
la glucosa en quinoneimina, compuesto que absorbe a 500 nm.

El Método Dubois: El método de fenol-ácido sulfúrico fue ideado por Dubois (1956) es un
método colorimétrico eficaz y confiable. La reacción es sensible y el color es estable; el fenol
en presencia de ácido sulfúrico puede utilizarse para la determinación colorimétrica
cuantitativa de azúcares y sus derivados metílicos, oligosacáridos y polisacáridos. La adición de
ácido sulfúrico causa una deshidratación de las pentosas a furfural y las hexosas a hidroximetil
furfural; el resultado de la catálisis ácida de los azúcares tiene como producto varios derivados
del furano que se condensan con fenoles y desarrollan un color amarillo-naranja. La glucosa se
utiliza para crear la curva estándar, y la absorción se mide a (λ=540 nm). La precisión del
método está dentro del 2% en condiciones adecuadas.
2. Graficar la curva de calibración en papel milimétrico desarrollado en la práctica teórica.

A1=0.05; A2=0.07; A3=0.15; A4=0.18; A5=0.22; A6=0.25; A7=0.31; A8=0.35; A9=0.40; A10=0.48
3. ¿De qué manera reacciona la antrona con los azúcares?

Los azúcares pueden reaccionar con antrona en ácido sulfúrico para dar un producto de
coloración verde-azulado dependiendo de su concentración para cuantificar el contenido de
azúcares totales expresados como glucosa en la investigación de azúcares totales se basan
principalmente en la hidrólisis o digestión de compuestos orgánicos mediante tratamiento con
ácidos, generalmente ácido sulfúrico, produciendo colores debido a la reacción. Este es el caso
de los métodos de antrona, la cuantificación con antrona es limitada puesto que este reactivo
es inestable; debido a su degradación y el consecuente oscurecimiento de la solución que
altera su lectura colorimétrica, además de poseer una menor capacidad en el análisis de
polisacáridos conformados por mezclas de azúcares.

4. ¿Por qué es necesaria la presencia de ácido sulfúrico en la reacción?

Al reaccionar los azúcares con el ácido sulfúrico se deshidratan y forman anillos de furfural, las
pentosas y de metil furfural las hexosas; estos anillos reaccionan con la antrona dado lugar a la
formación del color. La presencia de ácido sulfúrico de reactivo de antrona los carbonos
hidratos experimentan deshidratación convirtiéndose en furfural o hidroximenoles estos
productos pueden condensarse con aminas aromáticas, fenoles, antrona produciendo
compuestos coloreados. El método de Antrona tiene una medida colorimétrica a una longitud
de onda de 620 nm es producto de la condensación del grupo carbonilo del furfural e
hidroximetilfurfural con un compuesto fenólico.

5. ¿Qué es la Ley de Lambert Beer?

Muestra cómo la absorbancia es directamente proporcional a la longitud de la trayectoria a

través de la solución y a la concentración del analito o especie absorbente.
La solución contiene solo un cuerpo o problema capaz de absorber la longitud de onda
particular.

Un problema es una forma sencilla de un ion o una molécula.

Únicamente la luz transmitida a través de la solución se mide como luz emergente. No debe
haber fluorescencia, difusión por partículas suspendidas o fugas del instrumento.

El enunciado de la Ley de Beer dice: "La intensidad de un haz de luz monocromática, que incide
perpendicularmente sobre una muestra, decrece exponencialmente con la concentración de la
muestra", según esta ley : A = KC.