Curso: PRÁCTICA DE QUÍMICA ORGANICA III

DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA POR

MÉTODOS ESPECTROSCÓPICO

Profesor: Ronal López Parra

 Práctica de Química Orgánica III
 Determinación de la glucosa por métodos
espectroscópico.
 Determinación de la glucosa por métodos
espectroscópico.

Uno de los métodos más comúnmente usados para cuantificar azúcares totales
es el de la Antrona. Este procedimiento nos permite determinar
cuantitativamente hexosas, aldopentosas, ácidos uránicos ya sea en forma libre
o formando parte de polisacáridos.
Para que la medición sea digna de confianza, deben controlarse cuidadosamente
las concentraciones de antrona y de ácido en el reactivo así como el tiempo y la
temperatura de reacción. Es aconsejable que la muestra se encuentre libre de
proteínas ricas en triptófano para evitar interferencias en la reacción colorida.
 Determinación de la glucosa por métodos
espectroscópico.
Fundamento.
En presencia del ácido sulfúrico del Reactivo de Antrona, los carbohidratos
experimentan deshidratación convirtiéndose en furfural o hidroximetilfurfural.
Estos productos pueden condensarse con aminas aromáticas, fenoles, antrona,
etc.; produciendo compuestos coloreados. La formación del furfural o sus
derivados acomplejados con estas sustancias puede utilizarse como método
cualitativo o cuantitativo para estimar azúcares, ya que la intensidad de color
desarrollado durante la condensación va a estar en función de la concentración
de carbohidrato presente en la muestra.
Espectrofotometría.
La cuantificación de azúcares se hace en base al color desarrollado por la muestra,
utilizando espectrofotómetros o fotocolorímetros para de terminar la intensidad o la
energía de la luz que ha pasado a través de la celda o tubo de fotocolorímetro
conteniendo la solución coloreada. Para esta determinación se debe fijar un valor de
longitud de onda que es donde el complejo colorido muestra su máxima absorción, y
además disponer de un blanco para calibrar el aparato, esta solución solamente contiene
agua destilada y reactivo de antrona sometido al protocolo indicado.
Absorbancia y Transmitancia
La cantidad de luz que absorbe la muestra se denomina ABSORBANCIA, y la luz que
pasó a través de la solución se llama TRANSMITANCIA. Existe una fórmula la que nos
relaciona a ambas:
Cuantificación.
Para cuantificar la cantidad de azúcar presente en una muestra, primeramente se
prepara una curva de calibración con los valores de absorbancia mostrados por distintas
soluciones de concentración conocida. Estos valores se ajustan a una recta usando
Regresión Lineal , y con la ecuación de la recta se determina la concentración de azúcar
según haya sido el valor de absorbancia que mostró.
Procedimiento:
Antrona tiourea: Solución stock 66% V/V de H2SO4 disolver 10 g de tiourea y 0,5 g de
antrona en un litro de H2S04 calentando a 80 - 90°C. Conservar el reactivo entre 0-4°C,
glucosa estándar: rango 25 -200 µg/mL. Hacer una curva de calibración: Poner 0,2 mL de
la solución problema más 2 mL del reactivo de antrona agitar, poner en un baño de agua a
T° ambiente y luego en un baño de agua a ebullición por 15 minutos, enfriar guardar en la
oscuridad.
Medir la absorbancia de 620 nm después de 20 – 30 minutos.

Preparación de la solución “Madre”.

1. Pesar 0,5 g de glucosa y enrasar en uma fiola de 1L.
2. De la solución “madre” , coger:
a) 5 mL f) 22,5 mL
b) 7,5 mL g) 30 mL
c) 10 mL h) 32,5 mL
d) 15 mL i) 35 mL
e) 20 mL j) 40 mL
Preparación de las diluciones
3. Cada uma de las mediciones anteriores enrasar en uma fiola de 100 mL
4. De cada dilución coger 2 mL de muestra y agregar 0,5 mL de antrona.
5. Luego llevar a baño maria por aproximadamente 10-15 minutos.
6. Medir la absorbancia de 620 nm después de 20 – 30 minutos.
 CUESTIONARIO
1. Describa los métodos que se utilizan para determinar la concentración de azúcares
en líquido biológico.

2. Graficar la curva de calibración en papel milimetrado desarrollado en la practica

teórica.

1. ¿De qué manera reacciona la antrona con los azúcares?

4. ¿Por qué es necesaria la presencia de ácido sulfúrico en la reacción?

5. ¿Qué es la Ley de Lambert-Beer?

¡Muchas gracias!