CUANTIFICACION DE D-GLUCOSA EN UNA MUESTRA DE MIEL

DE ABEJA ARTESANAL E IDENTIFICACION CUALITATIVA

DE CARBOHIDRATOS

Sarahí D. Ocanto1 & Génesis A. González2

Laboratorio de Bioquímica, Unidad de Biología Celular y Biotecnología,
Departamento de Biología, Facultad Experimental de Ciencia y Tecnología,
Universidad de Carabobo, Carabobo, Venezuela.
1
ocantosarahi96@gmail.com 2v29750256@gmail.com

RESUMEN
La miel es el producto alimenticio que se obtiene generalmente de las abejas Apis sp. Entre
sus principales constituyentes se destacan los azúcares como la glucosa. La caracterización
de la miel por medio de la cuantificación de glúcidos es importante debido a que para su
comercialización se debe garantizar su autenticidad, pues es posible la práctica de su
adulteración, por lo que el objetivo del estudio fue el análisis cuantitativo de la glucosa
presente en la miel artesanal y la identificación de carbohidratos presentes en siete
muestras. Se realizó una curva de calibración, luego se aisló la glucosa de la muestra de
miel utilizando etanol 95% y centrifugación, con la glucosa aislada se prepararon tres
muestras; S1, MP1 y MP2, las últimas dos por dilución 1/10 y 1/100. Se les agregó DNSA
y se les midió la absorbancia. Se realizaron las pruebas de Molish, Lugol, Bial, Seliwanoff
y Bardfoed a siete muestras problemas rotuladas de A-G, donde se identificó la presencia
de los carbohidratos: Xilosa, Glucosa, Fructosa, Sacarosa, Lactosa y almidón. Se obtuvo
que la cantidad de D-glucosa promedio por cada 100 g de la miel artesanal es de 3,961 g ±
0,633. Se logró identificar que la muestra (G) era urea, la (C) era aldopentosa xilosa, la (E)
era fructosa y la (D) era sacarosa, se identificaron tres monosacárido (A, C, E), la muestra
(B) era el polisacárido almidón y la (A) era aldohexosa Glucosa. La cantidad de glucosa por
cada 100 g de miel fue baja con respecto a lo esperado, esto pudo ser ocasionado por
humedad en la miel, adulteración, el polen, o la aceleración de la reacción de
deshidratación de azucares a HMF. Todas las pruebas realizadas se basan en el principio de
que los furfurales y derivados reaccionan con compuestos fenólicos para formar productos
coloreados, esenciales para la identificación cualitativa de carbohidratos.
Palabras Claves: glúcidos, absorbancia, furfural, pruebas colorimétricas, DNSA.
INTRODUCCION seis carbonos, es el más simple de los
carbohidratos (Ptiño, 2006), siendo éstos
La miel es el producto alimenticio que se
últimos las biomoleculas más abundantes
obtiene generalmente de las abejas Apis
de la Tierra, glúcidos como la sacarosa y
sp. Partiendo del néctar de las flores,
el almidón son fundamentales en la dieta
entre sus principales constituyentes se
humana y son la principal ruta de
destacan los azúcares, en especial la
obtención de energía en la mayoría de las
glucosa (Conti, 2012). La glucosa o
células no fotosintéticas (Lehninger,
dextrosa es un una aldosa, un azúcar de
Nelson & Cox, 2008). De acuerdo con las
unidades que los constituyen se clasifican
en, monosacáridos, disacáridos,
oligosacáridos y polisacáridos (Quesada,
2007). Algunas reacciones químicas
permiten identificar determinados
carbohidratos, mediante el resultado
positivo o negativo de la prueba realizada,
en algunos casos se originan productos
diferentes, según el azúcar del que se trate
(Macarulla & Goñi, 1994).
Una de las propiedades más
significativas de los carbohidratos es la
capacidad reductora que presentan
algunos azúcares, la cual se utiliza para
detectarlos mediante pruebas cualitativas.
También tiene gran relevancia en la
Industria Alimenticia ya que a partir del
carácter reductor se logran cuantificar
azucares en determinados alimentos y
bebidas (Quesada, 2007).
El objetivo del presente artículo fue
determinar la cantidad de D-glucosa en
una muestra de miel de abeja artesanal,
empleando la espectrofotometría como
método de cuantificación, y la
caracterización cualitativa de los
carbohidratos, por medio de la
identificación de siete muestras problema,
en base a la coloración de las reacciones
químicas aplicadas y el poder reductor de
los azúcares.
MATERIALES Y METODOS
I. Determinación cuantitativa de D-
Glucosa en muestra de miel de Abeja
artesanal
Se pesó 6,0027g de miel artesanal,
seguidamente se midieron 15 mL de
etanol al 95% y ambas sustancias se
calentaron a 70 ºC, y cuando la miel paso
a su estado líquido y el etanol llego a su
punto de ebullición, se añadió el etanol a
la muestra de miel y se mezclaron.
Cuando se observó la formación de
precipitado qué correspondía a la D-
glucosa, se trasvaso toda la mezcla
anterior a un tubo de centrífuga de
plástico de 10 mL y se centrifugo a 2000
rpm por 5 min. Se descartó el
sobrenadante y se resuspendió el
precipitado obtenido en 5 mL de agua
destilada, se rotulo denominándolo (S1).
De la fracción S1 realizo una dilución
1/10 y una 1/100 para un volumen final
de 2 mL.
Para la dilución 1/10 se tomó una alícuota
de 0,2 mL de S1 y se le añadió 1,8 mL de
agua destilada y se rotulo como Fracción
(MP1). Para la dilución 1/100 se tomó
una alícuota de 0,02 mL de S1 y se le
añadió 1,98 mL de agua destilada y se
rotulo como Fracción (MP2).
Se Tomó una alícuota de 15 μL de S1, 25
μL de MP1 y 100 μL de MP2, se trasvaso
cada una a tubos de ensayo diferentes y se
aforaron con agua destilada hasta llegar a
un volumen final de 300 μg. Se tomaron
cinco tubos de ensayo, se rotularon y se le
añadió a cada tubo, la cantidad de
reactivos correspondiente de acuerdo con
la tabla 1:
Tabla 1. Cantidad de reactivos de cada
fracción para la determinación de
absorbancia.
Solución patrón de
Fracción Agua (μL)
glucosa (μL)
1 0 300
2 50 250
3 100 200
4 150 150
5 200 100
Luego se adiciono 300 μL de DNS a cada
uno de los tubos, y se incubaron en baño
térmico a 100 ºC por 5 min.
Consecutivamente se agregó 300 μL de
agua destilada a cada tubo, se midió la
absorbancia a 540 nm a las primeras cinco
fracciones desde la menos concentrada
hasta la más concentrada y por ultimo a las
fracciones S1, MP1 y MP2 de la misma
forma. Posteriormente se realizó la curva de
calibración de Concentración vs
Absorbancia de la glucosa, utilizando las
primeras cinco fracciones cuya
concentración inicial era de 800 μg⁄mL.
Después a las absorbancias obtenidas se les
restó la absorbancia de fracción blanco y se
procedió a graficar.
II. Reacciones cualitativas de los
carbohidratos.
Se emplearon alícuotas de muestras cuya
composición se desconocía, sabiendo que
podían ser glucosa, fructosa, sacarosa,
xilosa, lactosa, almidón o urea. Se le
aplicaron las siguientes pruebas a cada
una de las muestras problemas
suministradas:
Reacción de Molish: se añadió 1 ml de la
muestra problema, se procedió a agregarle
3 gotas de Naftol (reactivo de Molish) y
tras agitar se le incorporo 1 ml de H2SO4
por las paredes de cada tubo tratando de
formar una interface.
Reacción de Lugol: Teniendo 1 ml de
cada muestra se adicionaron 2 gotas de la
solución de Lugol.
Reacción de Barfoed: A cada tubo con 1
ml de muestra problema se le agregaron 2
ml del reactivo de Barfoed y
seguidamente se colocaron en baño
térmico, esperando que los
monosacáridos dieran positivo de 2 a 5
min y los disacáridos reductores
reaccionaran de 5 a 10 min. Se anotó el
tiempo de aparición de los cambios. La
prueba fue realizada en campana.
Reacción de Bial: Teniendo 1 ml de la
muestra problema se le agregaron 2 ml
del reactivo de Bial y se sumergieron los
tubos en un baño maría hasta que se
notaron cambios.
Reacción de Seliwanoff: Empleando 0,5
ml de la muestra problema se le adicionó
1 ml del reactivo Seliwanoff, se procedió
a colocar los tubos en baño térmico y se
anotó el tiempo de aparición de la
coloración. La prueba fue realizada en
campana
RESULTADOS
I. Determinación cuantitativa de D-
Glucosa en muestra de miel de Abeja
artesanal.
Los valores de absorbancias de las cinco
fracciones de las soluciones patrón (Tabla
2) arrojaron una ecuación de Lambert-
Beer para la D-glucosa de A = 0,0033C
con un R2 = 0,9227.
Tabla 2. Concentración y Absorbancia de
fracciones patrón.
Conc. de D-glucosa
Fracción Absorbancia
(μg/mL)
1 0 0
2 133,33 0,15
3 266,67 0,988
4 400 1,65
5 533,33 2,003
A partir de esa ecuación se obtuvo que la
concentración final y la absorbancia de
las muestras problemas fueron: S1-
702,72 μg/mL y 2,19; MP1- 146,97
μg/mL y 0,485. En el caso de MP2 se
obtuvo una absorbancia de −0,045. La como puede observarse en la figura 2. No
cantidad de D-glucosa promedio por cada se identificó ningún disacárido reductor
100 g de miel de abeja artesanal fue de
3,961 g ± 0,633 con un porcentaje
estimado 3,961 %.
II. Reacciones cualitativas de los
carbohidratos.
Prueba de Molish: Para esta prueba se
esperaba una coloración morado intenso
en las muestras positivas para
carbohidratos y carencia de tonalidad en
la muestra negativa, como fue el caso del
tubo G (positivo para urea), de esta forma
se logró determinar que 6 de las 7
muestras son carbohidratos.
Figura 2. Positivo para Barfoed para la
Prueba de Lugol: Al adicionarle el
muestra A, C y E (Monosacáridos).
reactivo a cada tubo pudo observarse una
coloración entre azul-violeta inmediata, Prueba de Bial: Para esta prueba se
solo un tubo dio positivo para almidón, esperaba identificar la xilosa que es una
como puede observar en la figura 1 aldopentosa. Debió evidenciarse una
coloración verde-azulado intenso al estar
en contacto con el agua hirviendo. Se
determinó que la muestra C contiene la
xilosa
Prueba de Seliwanoff: Los resultados de
esta prueba arrojaron una coloración
distinta a la roja esperada, en el tubo E,
que dio positivo para fructosa, se
presenció una tonalidad amarillo intenso
(como se muestra en la figura 3), la cual
apareció 10 min después de haber
sumergido los tubos en agua hirviendo,
mientras que el tubo D dio positivo para
Figura I. Positivo para Lugol para la
sacarosa, y se logró identificar debido al
muestra B (Almidón).
mayor tiempo que requirió para tomar
Prueba Barfoed: Luego de sumergir en una coloración amarilla. A partir de esta
agua hirviendo se esperaron 2 minutos muestra se logró identificar las últimas
con 49 segundos hasta la aparición de la dos faltantes, glucosa (A) y la lactosa (F).
coloración rojo ladrillo en tres de las
muestras, positiva para monosacáridos,
 El coeficiente de correlación R2 obtenido
indica que el modelo predictor con el que
se obtuvo las concentraciones de D-
glucosa en las muestras problemas, tiene
un ajuste y confiabilidad media. Un
coeficiente de correlación cercano a 1
indica adecuada correlación entre los
datos, ya que al relacionar la
concentración con respecto a la
absorbancia se tiene alta confiabilidad en
los datos obtenidos (Burgos, 2020).
Figura 3. Positivo para cetosas para la Esta dispersión alrededor de la línea de
muestra E (Fructosa) y D (Sacarosa) calibración (Apéndice II) pudo deberse a
variaciones en las mediciones de los
El análisis cualitativo de las siete
reactivos para la preparación de las
muestras problemas se resume en la tabla
3, donde se lograron caracterizar cada uno muestras patrón. Las limitaciones de la
de los carbohidratos identificados en base Ley de Lambert-Beer pueden deberse a
cambios químicos asociados con cambios,
a sus propiedades, estructura química y
las reacciones evaluadas. y también en la forma en que se hacen las
mediciones de absorbancia (Castellanos
Tabla 3. Análisis cualitativo de las et al. 2018).
muestras problema
Sin embargo en la fracción S1 se estimó
una concentración mayor a la estimada en
Tubo Compuesto Clasificación Carácter MP1, lo cual era lo esperado ya que MP1
Reductor
estaba más diluida; como la absorbancia
A Glucosa Monosacárido Si de una solución es directamente
B Almidón Polisacárido Si
C Xilosa Monosacárido Si proporcional a su concentración, esto
D Sacarosa Disacárido No quiere decir que a mayor número de
E Fructosa Monosacárido Si moléculas mayor interacción de la luz con
F Lactosa Disacárido Si ellas (Nieves et al. 2008). Por lo tanto, la
G Urea No No
Carbohidrato curva de calibración lograda
experimentalmente si logro determinar
Los monosacáridos presentes a su vez se concentraciones en las muestras
clasifican en: aldohexosa (glucosa), problemas inferidas teóricamente.
aldopentosa (xilosa) y cetohexosa En el caso de MP2 nos dio una
(fructosa) absorbancia negativa, esto se debió a que
DISCUSIÓN el blanco era mayor a la absorbancia
arrojada por el espectrofotómetro, este
I. Determinación cuantitativa de D- resultado pudo ser ocasionado por el
Glucosa en muestra de miel de Abeja operador que realizo la experiencia. Ya
artesanal. que el operador influye en los resultados
de una medición por la imperfección de
sus sentidos, así como, por la habilidad
que posee (Caula, 2014). La cantidad de
glucosa por cada 100 g de miel artesanal
analizada fue mínimo en comparación
con lo que se estima teóricamente, ya que
en la miel la composición de glucosa es
de glucosa (30-35 g/100 g) (Chaviano et
al. 2022).
Por consiguiente el porcentaje de D-
glucosa estimado por cada 100 g de la
miel artesanal estudiada fue bajo, ya que
la composición de la miel en términos
generales es la siguiente: glucosa (30-
35%), fructosa (35-45%), sacarosa (1-
3%), contenido de humedad entre15-21%
(Mohtar et al. 2011). Estos resultados
pudieron deberse al tiempo de
maduración, ya que esto genera un alto
grado de humedad en la miel, la
humedad es un factor que condiciona la
concentración y variedad de los azucares
que componen la miel (Crane, 1975).
La cantidad de glucosa estimada pudo ser
ocasionada porque la especie de abeja, el
néctar, el tipo de planta y el polen varían
las composiciones de la miel, ya que
según el tipo de plantas, el tipo de áfido
que producen excreciones de las
plantas succionadas, el tipo de abeja que
recolecta los diferentes néctares, el origen
geográfico y topográfico donde crecen las
plantas, hacen variar a la composiciones
químicas y físicas de la miel (Vit, 2004).
Otro factor podría haber generado la
disminución de D-glucosa en la miel
artesanal fue la adulteración, La
adulteración de la miel de abeja se logra
con la adición de edulcorantes de bajo
costo que merman su calidad nutricional
y sus propiedades (Ríos, 2010). Esto se
logra añadiendo melaza, sacarosa, yeso,
agua, entre otras. Lo que podría explicar
el resultado obtenido, sin embargo hay
otra posibilidad que podría ser la
temperatura y tiempo de almacenamiento
que aceleran la transformación de
azucares en Hidroximetilfurfural (HMF).
El HMF aparece en forma espontánea y
natural en la miel debido a las altas
temperaturas del interior de la colmena,
aumentando su concentración con el
tiempo de almacenamiento (Ruiz et al.
2020). Esto podría explicar la cantidad
tan baja de D-glucosa en la miel
analizada, ya que como fue sometida a
altas temperaturas esto pudo ocasionar la
aceleración de HMF, dando como
resultado un porcentaje tan bajo de D-
glucosa.
II. Reacciones cualitativas de los
carbohidratos.
Los ácidos con una fuerza similar a la del
ácido sulfúrico concentrado hidrolizan los
enlaces glicocídicos de los polisacáridos y
así liberan los monosacáridos que los
forman. Por otra parte estos ácidos
deshidratan las moléculas de
monosacáridos que presenten más de
cinco carbonos y como resultado se forma
un compuesto denominado furfural o sus
derivados los cuales se pueden condensar
con fenoles y ainas aromáticas y el
producto es un complejo coloreado
(Quesada, 2007).
De acuerdo a este fundamente se logró
identificar cada uno de los carbohidratos
presentes en las muestras, mediante el
periodo de reacción y la temperatura de
calentamiento (aplicada o no en cada
caso) se pudo determinar un color
asociado a un carbohidrato específico.
Prueba de Molish: En esta prueba los
compuestos se deshidratan con ácido
sulfúrico para formar furfural o
hidroximetil furfural que reacciona con 𝛼-
naftol para dar productos de condensación
de color púrpura (Doria, Ibañez &
Mainero, 2009). Esta reacción al permitir
identificar de forma generalizada los
carbohidratos indica que cualquier
resultado distinto al esperado representa
un compuesto que no corresponde a los
glúcidos, como fue en el caso de la
muestra problema identificada como urea
(G).
Prueba de Lugol: El reactivo de Lugol
se puede utilizar para reconocer la
presencia de almidón, porque esta
sustancia adsorbe el yodo produciendo
una coloración azul intensa, coloración
que desaparece al calentar, porque se
rompe la estructura que se ha producido,
pero vuelve a aparecer al enfriar. (Martín
et al. 2012). Es por esto que para
visualizar la coloración de la prueba
realizada no se colocó en agua hirviente a
diferencia de las otras reacciones,
efectivamente se obtuvo un color azul
intenso (figura 1) identificándose como
almidón una sola muestra.
Prueba de Barfoed: El carbohidrato
reductor, al contacto con el reactivo, da el
característico precipitado de color rojo
ladrillo (Véjar, 2005). Mediante esta
prueba se identificó la presencia de tres
monosacáridos, al trascurrir 2 minutos
con 49 segundos se evidenció la
coloración rojo ladrillo que se debe a que,
en este reactivo el ion cúprico se
encuentra en una disolución débilmente
ácida y la velocidad de reacción de la
reducción en caliente da lugar a iones
cuprosos que precipitan en forma de
óxido cuproso (Doria, Ibañez & Mainero,
2009).
Dado que lo que permite la identificación
del monosacárido es su carácter reductor,
es posible también identificar disacáridos
reductores, los disacáridos que tengan el
hidroxilo del carbono anomérico de
alguno de los dos monómeros libres
también serán reductores (Véjar, 2005).
Como es el caso de la lactosa identificada
al final de la experiencia pero, en
condiciones ácidas los disacáridos
reaccionan más lentamente que los
monosacáridos, lo que permite
diferenciarlos (Doria, Ibañez & Mainero,
2009). Al no someter la reacción a más
tiempo en el agua hirviendo la prueba
realizada dio negativo al disacárido
reductor lactosa.
Prueba de Bial: Al reaccionar una
alopentosa con ácido clorhídrico, pierde
moléculas de agua y produce la sustancia
conocida con el nombre de furfural, el
furfural puede reaccionar en medio ácido
con el orcinol (Véjar, 2005). Mediante
esta reacción se esperaba identificar la
aldopentosa xilosa, la cual da positivo a la
prueba cuando adquiere una coloración
verde, que se debe a la adición de FeCl3,
si en estas condiciones se agrega una
pequeña cantidad de cloruro férrico se
formara un complejo verde (Véjar, 2005).
Prueba de Seliwanoff: Esta es una
prueba cualitativa (el medio pasa de
incoloro a rojo) para las cetohexosas y las
aldohexosas (Quesada, 2007) En la
experiencia no se obtuvo la coloración
roja, la cetohexosa fructosa reflejo un
color amarillo intenso, observado a los 10
minutos de estar en agua hirviente. El
tratamiento prolongado de más de 15
minutos de duración provoca la
ismoerización de la glucosa (aldohexosa)
en fructosa, por lo que también la glucosa
puede dar prueba positiva (Quesada,
2007).
Pero en este caso, mediante esta prueba
no se logró identificar glucosa sino el
disacárido sacarosa (ya que solo se
calentó durante los 10 min), la cual da
una reacción positiva debido a la
hidrólisis ácida de su enlace glicosídico,
cuyos productos son D-glucosa y D-
fructosa (Quesada, 2007).
CONCLUSION
A pesar de que el coeficiente de
correlación R2 que se obtuvo indico que
el modelo realizado de la ecuación de
Lambert-Beer no podía predecir valores
para las muestras problemas con alta
confianza, las concentraciones estimadas
S1 y MP1 estaban dentro de lo esperado,
ya que MP1 estaba más diluida.
El porcentaje de D-glucosa determinado
por cada 100 g de la miel artesanal
estudiada fue bajo con respecto a lo
esperado; estos resultados pudieron ser
ocasionados por un alto grado de
humedad en la miel, adulteración o la
aceleración de la reacción de
deshidratación de azucares a HMF por el
aumento de temperatura durante el
experimento.
Los furfurales y sus derivados que se
forman por deshidratación de glúcidos
son esenciales para la identificación
cualitativa de carbohidratos, ya que todas
las pruebas realizadas se basan en el
principio de que los furfurales y
derivados reaccionan con compuestos
fenólicos para formar productos
coloreados. Los compuestos que no son
carbohidratos como en el caso de la
muestra (G) dan negativo a la prueba de
Molish debido a que en presencia del
reactivo no se deshidratan a un derivado
de furfural y 𝛼-naftol.
En la prueba Lugol solo en la muestra (B)
se observó una coloración azul-intensa,
concluyéndose que se trataba del
almidón, ya que era el único polisacárido
que presentaba el polisacárido amilosa en
su composición, y este absorbe al Yodo
dando la coloración característica. Al
aplicar la prueba Barfoed si se logró
observar un precipitado rojo ladrillo,
concluyéndose que en las muestras (A, C
y E) habían monosacáridos reductores ya
que estos reaccionaron más rápido que los
disacáridos reductores.
En el caso de la prueba Bial aunque no se
hizo experimentalmente, se esperaba
identificar a la xilosa que era la muestra
(C), la cual como es una aldopentosa
debió producir una coloración azul
verdoso por el producto que se genera por
la reacción del furfural con el reactivo.
Además la muestras de hexosas (A y E)
debieron formar un viraje marron, como
resultado de la reacción entre el HMF y el
reactivo.
La prueba de Seliwanoff produce virajes
amarillo intenso, la cual fue una
coloración distinta a la roja esperada, sin
embargo si se logró determinar que la
cetosas (E y D) reaccionan más rápido
que las aldosas, pero las disacáridos con
estos grupos cetonicos tardan más que los
monosacáridos cetonicos, no obstante
tardan menos tiempo en reaccionar que
los monosacáridos aldonicos.
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(2):
35
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arttext&pid=S0798-04772004000200006
 APENDICE I

CALCULOS TIPICOS

Calculo de las concentraciones finales de las fracciones de la solución patrón de

glucosa.
Mediante la ecuación 1:

𝑪 𝐢 𝒊 × 𝑽𝐢 𝒊 = 𝑪 𝐟 𝒊 × 𝑽𝐟 𝒊 (1)

donde:
𝑪𝐢 𝒊 = concentración inicial de la fracción.
𝑽𝐢 𝒊 =volumen inicial de la fracción.
𝑪𝐟 𝒊 = concentración final de la fracción.
𝑽𝐟 𝒊 = volumen final de la fracción.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

800 μg⁄𝑚𝐿 × 0 μL
𝐶i𝑓1 = = 0 μg⁄𝑚𝐿
300 μL

Calculo de las Absorbancias real de las fracciones.

Mediante la ecuación 2:

𝑨𝐫𝒊 = 𝑨𝐚𝒊 − 𝑨𝒇𝟏 (2)

donde:
𝑨𝐫𝒊 = absorbancia real de la fracción.
𝑨𝐚𝒊 = absorbancia aparente de la fracción.
𝑨𝒇𝟏 = absorbancia de la fracción blanco.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

𝐴r 𝑓1 = 𝐴a − 𝐴𝑓1 = 0,613 − 0,613 = 0

𝑓1

Calculo de las concentraciones finales de las muestras problemas.

Mediante la ecuación 3:

𝑨𝐫 𝒊
𝑪𝐟 𝒊 = (3)
𝜺𝒍
donde:
𝑪𝐟 𝒊 = concentración final de la fracción problema.
𝑨𝐫 𝒊 = absorbancia.
𝛆 = coeficiente de absortividad en mL/μg × cm−1 .
𝐥 = longitud de la celda en cm.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

2,319
𝐶f𝑆1 = = 702,72 μg⁄𝑚𝐿
0,0033

Calculo de la cantidad de glucosa en las fracciones problema.

Mediante la ecuación 4:

𝒙𝟎 𝒊 = 𝑪𝐟 × 𝐕𝐟 𝒊 (4)

donde:
𝒙𝟎 = cantidad de glucosa en la fracciones problema.
𝑪𝐟 𝒊 = concentración final de la fracción problema.
𝑽𝐟 𝒊 = volumen final de la fracción problema.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

702,72 μg
𝑥0𝑆1 = × 900 μL = 632,448 μg
1000 𝜇𝐿

Calculo de la cantidad de glucosa en la muestra de miel de abeja artesanal a partir de

la alícuota S1.
Mediante la ecuación 5:
𝒙𝟎 𝑺𝟏 × 𝟓𝟎𝟎𝟎 𝝁𝑳
𝑿𝑺𝟏 = (5)
𝐕𝐢 𝑺𝟏

donde:
𝑿𝑺𝟏 = cantidad de glucosa en la muestra de miel de abeja artesanal a partir de S1.
𝒙𝟎 𝑺𝟏 = cantidad de glucosa inicial en la fracción S1.
𝐕𝐢 𝑺𝟏 = volumen inicial de la fracción S1.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

 632,448 𝜇g ×5000 𝜇𝐿
𝑋𝑆1 = = 210816 𝜇g
15 𝜇𝐿

Calculo de la cantidad de glucosa en MP1 de la dilución 1/10.

Mediante la ecuación 6:
𝒙𝟎 𝑴𝑷𝟏 × 𝐕𝐟 𝒅
𝒙𝟏 𝑴𝑷𝟏 = (6)
𝐕𝐢 𝑴𝑷𝟏

donde:
𝒙𝟏 𝑴𝑷𝟏 = cantidad de glucosa en MP1 de la dilución 1/10.
𝒙𝟎 𝑴𝑷𝟏 = cantidad de glucosa en la fracción MP1.
𝐕𝐢 𝑴𝑷𝟏 = volumen inicial de la fracción MP1.
𝐕𝐟 𝒅 = volumen final de la dilución.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

132,273 μg × 2000 μL
𝑥1 𝑀𝑃1 = = 10581,84 μg
25 μL

Calculo de la cantidad de glucosa en la muestra de miel de abeja artesanal a partir de

alícuota MP1.
Mediante la ecuación 7:
𝒙𝟏 𝑴𝑷𝟏 × 𝟓𝟎𝟎𝟎 𝝁𝑳
𝑿𝑴𝑷𝟏 = (7)
𝐕𝐚 𝑴𝑷𝟏

donde:
𝑿𝑴𝑷𝟏 = cantidad de glucosa en la muestra de miel de abeja artesanal a partir de MP1.
𝒙𝟏 𝑴𝑷𝟏 = cantidad de glucosa en MP1 de la dilución 1/10.
𝐕𝐚 𝑴𝑷𝟏 = volumen de la alícuota tomada de S1.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

10581,84 𝜇g ×5000 𝜇𝐿
𝑥𝑆1 𝑀𝑃1 = = 264546 𝜇g
200 𝜇𝐿

Calculo de conversión de microgramos a gramos de la cantidad de glucosa en la

muestra de miel de abeja artesanal a partir de las alícuotas.
Mediante la ecuación 8:
 𝑿𝒊 𝝁𝐠 × 𝟏×𝟏𝟎−𝟔 𝐠
(8)
𝟏 𝝁𝐠
Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

264546 𝜇g × 1 × 10−6 g
= 0,264546 g
1 𝜇g

Calculo de la cantidad de glucosa por cada 100 gramos de miel de abeja artesanal a
partir de las muestras problema.
Mediante la ecuación 9:
𝑿𝒊 × 𝟏𝟎𝟎 𝐠
𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖 = (9)
𝟔𝐠

donde:
𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖 = cantidad de glucosa por cada 100 g de miel de abeja artesanal.
𝑿𝒊 = cantidad de glucosa en la muestra de miel de abeja artesanal.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

0,264546 g × 100 g
𝑋100 𝑀𝑃1 = = 4,4091 g
6g

Calculo del porcentaje de glucosa por cada 100 g de miel artesanal a partir de las
muestras problema.
Mediante la ecuación 10:
𝟏𝟎𝟎 × 𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖
%𝟏𝟎𝟎 𝒊 = (10)
𝟏𝟎𝟎 𝐠

donde:
%𝟏𝟎𝟎 𝒊 = porcentaje de glucosa en miel artesanal por cada 100 g.
𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖 = cantidad de glucosa por cada 100 g de miel artesanal.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

100 × 4,4091 g
%100 𝑆1 = = 4,4091 %
100 g

Calculo del porcentaje de glucosa promedio por cada 100 g de miel artesanal.
Mediante la ecuación 11:
 ∑ %𝟏𝟎𝟎 𝒊
̅ 𝟏𝟎𝟎 =
% (11)
𝐧

donde:
̅ 𝟏𝟎𝟎 = porcentaje promedio de glucosa por cada 100 g de miel.
%
%𝟏𝟎𝟎 𝒊 = porcentaje de glucosa en miel artesanal por cada 100 g.
𝐧 = número total de las réplicas.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

4,4091 + 3,5136
̅ 𝟏𝟎𝟎 =
% = 3,961 %
2

Calculo de la cantidad de glucosa promedio por cada 100 g de miel artesanal.

Mediante la ecuación 12:
∑ 𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖
̅ 𝟏𝟎𝟎 =
𝑿 (12)
𝐧

donde:
𝑿̅ 𝟏𝟎𝟎 = cantidad promedio de glucosa por cada 100 g de miel artesanal.
𝑿𝟏𝟎𝟎 𝑖 = cantidad de glucosa por cada 100 g de miel artesanal.
𝐧 = número total de las réplicas.

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

4,4091 + 3,5136
𝑋̅100 = = 3,961 g
2

Calculo de la desviación típica de la cantidad promedio de glucosa por cada 100 g de

miel artesanal.
Mediante la ecuación 13:

̅ − 𝜷𝒊 )𝟐
∑( 𝜷
𝛔= √ (13)
𝐧−𝟏

Sustituyendo los datos correspondientes en la ecuación anterior:

(3,961 −4,4091)2 + (3,961 −3,5136)2

𝛔= √ = 0,633
1
 APENDICE II
CURVA DE CALIBRACION DE D-GLUCOSA

2,5

2 A = 0,0033C
Absorbancia a 540 nm

R² = 0,9227

1,5

0,5

0
0 100 200 300 400 500 600 700 800
Concentracion de D-glucosa (µg/mL)