BIOLOGÍA CELULAR BIO1149

LABORATORIO Nº 2: RECONOCIMIENTO DE BIOMOLECULAS

INTRODUCCIÓN
Las biomoléculas inorgánicas son aquellas que no son formadas por los seres vivos, entre
estas se encuentran el agua, los gases y las sales y por el contrario las biomoléculas
orgánicas son las elaboradas en los diferentes procesos fisiológicos de un organismo como
carbohidratos, lípidos, proteínas y ácidos nucleicos.
El reconocimiento de biomoléculas requiere previamente su extracción de los tejidos y
células mediante métodos que pueden ser físicos y/o químicos. Esos métodos se incluyen
dentro de lo que se conoce como fraccionamiento celular. En esta actividad práctica se
realizará el reconocimiento molecular en material biológico previamente fraccionado, así
como en soluciones preparadas con antelación.
OBJETIVOS GENERAL: Reconocer biomoléculas en diferentes tejidos y establecer el rol
que desempeñan en el funcionamiento celular.

MATERIALES Y MÉTODOS
De laboratorio
- Pipetas de Pasteur plásticas
- Micropipetas 500-1000mL.
- Tubos de ensayo
- Mortero
- Gradillas
- Espátula
- Bisturí con mango o escalpelo.
- Placa de Petri
- Pinzas de laboratorio
- Baño maría
- Papel absorbente
-Puntas azules.
-Caja para puntas.
Reactivos
- Suspensión de almidón
- Suspensión de albúmina
- Solución de glucosa al 1%
- Solución de maltosa al 1%
- Solución de sacarosa al 1%
- Solución de hidróxido de sodio al 10%
- Solución de sulfato de cobre al 1%
- Reactivo de Lugol
- Reactivo de Fehling.
- Ensayo de Barfoed

- Reactivo de Sudán III

- Agua destilada
- Acetato de sodio (3M)
- Inhibidores RNasa (Invitrogen)
- Etanol (70%)
- Fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (25:24:1, Sigma).
- Buffer de lisis celular (10mM Tris-base; 100mM EDTA; 0.5% (v:v) SDS; proteinasa K
(1mg/ml), pH: 8).
- Fenol-cloroformo-alcohol isoamílico (25:24:1, Sigma ).
- Buffer de mantención (100mM Tris-base; 10mM EDTA; pH 8)

Muestras biológicas
- Leche líquida
- Macerado de papa
- Macerado de hígado de pollo
- Solución de miel.
- Aceite de maravilla o soya
 ACTIVIDADES PRACTICAS

I.- Reconocimiento de hidratos de Carbono.

1.- Monosacáridos reductores mediante reactivo de Fehling (o mediante reactivo de
Benedict).
Reactivo de Fehling: Solución ácida (A)= Sulfato cúprico disuelto en agua. Solución básica
(B) = Citrato de sodio y tartrato de sodio y potasio.
- Tubo control: Coloque 1 ml de solución de glucosa en un tubo de ensayo. Agregue 2 ml
de solución A y luego 2 ml de solución B. Caliente 10 min en un baño de agua en ebullición
/baño maría hasta que se observe el cambio de color de la solución.
El color rojo-naranjo o color cobre desarrollado indica reacción positiva y presencia
de azúcares reductores como la glucosa.
- Tubo de muestra 1: Coloque 3 ml de suspensión de agua con miel en un tubo de ensayo.
Luego, agregue 2 ml de solución A y luego 2 ml de solución B. Caliente 10 min en un baño
de agua en ebullición/baño maría hasta que se observe el color característico de la reacción.
a) ¿Cuál es el resultado de la reacción? Fundamente su respuesta.
- Tubo de muestra 2: Coloque una pequeña cantidad de macerado de hígado en un tubo
de ensayo. Adicione 2 ml de agua destilada y agite hasta homogenizar el contenido. Luego,
agregue 2 ml de solución A y 2 ml de solución B. Caliente 10 min en un baño de agua en
ebullición/baño maría y observe.
b) ¿Cuál es el resultado de la reacción? Fundamente su respuesta.

2.- Identificación de monosacáridos mediante Reactivo de Barfoed

- Tubo de muestra 1: Coloque 2 ml de solución patrón de glucosa en un tubo de ensayo y

agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en baño maría a ebullición.
- Tubo de muestra 2: Coloque 2 ml de solución patrón de maltosa en un tubo de ensayo y
agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en baño maría a ebullición.
- Tubo de muestra 3: Coloque 2 ml de solución patrón de sacarosa en un tubo de ensayo y
agregue 2 ml del reactivo de Barfoed, caliente en baño maría a ebullición.
El color rojo-naranjo o color cobre desarrollado indica reacción positiva.
a) ¿Cuáles de los 3 tubos de muestras dieron negativos? Explique porqué dio negativo.
3.- Polisacáridos (almidón) mediante Test de lugol.
- Tubo control: Coloque 2 ml de suspensión de almidón en un tubo de ensayo. Luego
agregue gota a gota el reactivo de lugol. Registre el color obtenido que indica una reacción
positiva.
El color azul oscuro desarrollado indica reacción positiva y presencia de
polisacáridos vegetales.
- Placa de muestra: En una placa de Petri coloque una pequeña cantidad de macerado de
papa. Agregue 2 gotas de lugol y observe lo que ocurre.
a) ¿Cuál es el resultado de la reacción? Fundamente su respuesta.

II.- Reconocimiento de proteínas

1.- Proteínas mediante Test de Biuret.
- Tubo control: Coloque 2 ml de suspensión de albúmina de huevo en un tubo de ensayo.
Agregue 3 ml de hidróxido de sodio al 10%. Luego, gota a gota incorpore al tubo control
sulfato de cobre al 1%. La solución se torna de un color violeta claro.
El color violeta claro desarrollado indica reacción positiva y presencia de proteínas.
- Tubo muestra 1: Coloque 2 ml de leche líquida en un tubo de ensayo. Agregue 3 ml de
hidróxido de sodio al 10%. Luego, gota a gota incorpore al tubo de muestra sulfato de cobre
al 1%.
a) ¿Cuál es el resultado de la reacción? Fundamente su respuesta.
- Tubo muestra 2: Coloque una pequeña cantidad de macerado de hígado en un tubo de
ensayo. Adicione 2 ml de agua destilada y agite hasta homogenizar el contenido. Agregue
3 ml de hidróxido de sodio al 10%. Luego, gota a gota incorpore al tubo de muestra sulfato
de cobre al 1%.
b) ¿Cuál es el resultado de la reacción? Fundamente su respuesta.
III.- Reconocimiento de lípidos
1.- Lípidos mediante Test de Sudán III
- Tubo control: Coloque 2 ml de aceite en un tubo de ensayo. Luego, gota a gota incorpore
al tubo control solución alcohólica de Sudán III y agite hasta homogenizar el contenido. La
solución se torna de un color rojo-naranjo.
El color rojo-naranjo desarrollado indica reacción positiva y presencia de lípidos.
- Tubo muestra 1: Coloque 3 ml de agua en un tubo de ensayo y adicione 2 ml de aceite.
Posteriormente agregue 4-5 gotas de Sudán III y agite hasta homogenizar el contenido.
- Tubo muestra 2: Coloque 3 ml de agua en un tubo de ensayo y adicione 2 ml de aceite.
Posteriormente agregue 4-5 gotas de tinta roja y agite hasta homogenizar el contenido.
a) ¿Cuál es el resultado de la reacción del tubo de muestra 1? Fundamente su respuesta.
b) ¿Por qué la tinta roja no colorea el aceite en el tubo de muestra 2?

IV.- Reconocimiento de Ac. Nucleicos.

1. Extracción de ADN de una muestra biológica

- Incubar las muestras biológicas que le entregue el profesor (MB) en buffer salino a 56ºC
de temperatura.
- Colocar 4 mL de la solución MB en un tubo de ensayo y adicionar 4 mL de buffer de
lisis celular (falcon BL).
- Aplicar Vortex x 10 minutos y adicionar 4 mL de etanol (70%) al tubo de ensayo.
- Recuperar la inter-fase con una micropipeta y pasarlo a un tubo eppendorf de 2 ml.
- Resuspender la inter-fase adicionando buffer de mantención (TE) y almacenar el ADN a
4º o -20ºC de temperatura.

a) ¿Para qué se utiliza el alcohol en este protocolo?

b) El ADN de una célula se encuentra enrollado a proteínas formando la cromatina. ¿En

qué etapa del experimento se separa el ADN de las proteínas?

c) ¿En qué parte exacta del tubo se observan los filamentos de ADN?