Rivera Baibuena Gerardo

1.- ¿Qué es en cromatografía de líquidos una separación por técnica de fase inversa y por
fase normal?

R: La cromatografía líquida es una técnica utilizada para separar los componentes

individuales de una muestra. Esta separación se produce mediante las interacciones químicas
o físicas de la muestra con las fases móvil y estacionaria. Existen muchas combinaciones de
fases móvil/estacionaria que se pueden emplear cuando se separa una mezcla, hay varios
tipos diferentes de cromatografías que se clasifican según los estados físicos de esas fases.

En la fase inversa se combinan una fase móvil polar, normalmente una mezcla de agua o
solución tampón con eluyentes polares como el metanol, el acetonitrilo o el tetrahidofurano, y
una fase estacionaria no polar como hidrocarburos de cadena larga unidos a un soporte de
sílice o híbrido.

En la fase normal utiliza una fase estacionaria polar y una fase móvil apolar, y se utiliza
cuando el compuesto de interés es bastante polar. El compuesto polar se asocia y es retenido
por la fase estacionaria. La fuerza de adsorción aumenta a medida que aumenta la polaridad
del compuesto y la interacción entre el compuesto polar y la fase estacionaria polar (en
comparación a la fase móvil) aumenta el tiempo de retención.

2.- ¿Cuál es el principio de operación de un detector UV-VIS para CLAE y qué

características importantes presenta?
R: La CLAE técnica analítica de separación más ampliamente utilizada por su alta sensibilidad,
tiene la ventaja de que las separaciones pueden tener lugar a temperatura ambiente para
muchas sustancias. Por lo tanto, las sustancias no volátiles o térmicamente inestables, se
pueden cromatografiar sin descomposición o necesidad de hacer derivados volátiles.

El fundamento de los detectores se basan en hacer pasar una radiación electromagnética a

través de compuestos que presentan determinados grupos funcionales, éstos experimentan
una excitación electrónica a causa de la absorción de energía, a una longitud de onda que
será específica para cada grupo funcional. A su vez esta energía, provoca el paso de un
electrón desde el estado fundamental hasta un nivel de energía superior. La absorción de
energía, se traduce en una disminución de la intensidad del haz luminoso que se ha hecho
pasar a través de la muestra, pudiéndose medir esta disminución de intensidad haciendo
incidir el haz sobre una fotocélula.

Hay básicamente tres tipos de detectores UV:

a) Detector de Longitud de Onda Fija: . La mayoría de los detectores que trabajan con
longitud de onda fija, utilizan la línea de 254 nm, que presenta una gran estabilidad y
de emisión y permite obtener una alta sensibilidad, pudiéndose medir incluso
cantidades por debajo del nanogramo en sustancias que presenten una gran
absorción
 b) Detector de Longitud de Onda Variable:
Los detectores de longitud de onda variable son particularmente útiles en tres casos:

● En el caso de que pueda obtenerse una mejor sensibilidad a una longitud de

onda distinta de 254 nm o de otras longitudes de onda para las que existen
filtros.
● En el caso de que los distintos componentes de la muestra presentan gran
absorción a diferentes longitudes de onda y, por tanto, el trabajo a una única
longitud de onda reduce la sensibilidad e incluso pueda resultar imposible la
detección de algunos de los componentes de la muestra.
● En el caso de que se desee una operación con paro del flujo combinada con un
registro del espectro completo de los picos.

c) Detector de Arreglo de Diodos: El haz de

radiación que ha atravesado la columna
cromatografía, es dispersado por medio de
radiación que ha atravesado la columna
cromatografía, es dispersado por medio de una
red de difracción fija, siendo recogidas
simultáneamente todas las longitudes de onda
una red de difracción fija, siendo recogidas
simultáneamente todas las longitudes de onda
dispersadas mediante una matriz de fotodiodos.

3- ¿Qué tipo de bombas se utilizan en los Cromatógrafos de Líquidos?

R: Se utilizan tres tipos de bombas, cada una con sus propias ventajas y desventajas: bombas
recíprocas, bombas de jeringa o de desplazamiento y bombas neumáticas o de presión
constante.

4.- ¿Cuáles son las partes que constituyen al

aparato empleado en cromatografía líquida de
alta presión?
R: Está compuesto por una bomba, un inyector, la
columna, un contenedor de fase móvil, y un
detector. Como se muestra en la imagen.
5.- ¿Qué tipo de detectores pueden emplearse? ¿Qué características deben tener?
R: Un detector ideal para
cromatografía de líquidos debería
poseer todas las propiedades
listadas en relación con la
cromatografía de gases, excepto que
para cromatografía de líquidos no es
necesario que sea sensible en un
intervalo tan grande de temperaturas.
Un detector de HPLC debe tener un
volumen interno mínimo a fin de
reducir el ensanchamiento de banda.

Los detectores en cromatografía de

líquidos son de dos tipos básicos:
● Los detectores basados en
una propiedad de la disolución
responden a una propiedad de la
fase móvil, tal como el índice de refracción, la constante dieléctrica, o la densidad, que
se modifica por la presencia de los analitos.
● Los detectores basados en una propiedad del soluto responden a alguna de las
propiedades del soluto, como la absorbancia UV, fluorescencia, o intensidad de
difusión, que no son propias de la fase móvil.

Referencias

● Métodos de separación: Cromatografía. Fecha: 11/Mayo/2022. Revisado en:

https://www.waters.com/waters/es_ES/Modos-de-Separaci%C3%B3n/nav.htm?cid=1000
9385&locale=es_ES.
● Cromatografía Líquida de Alta Eficiencia. Fecha: 11/Mayo/2022. Revisado en:
https://www.mncn.csic.es.
● Cromatografía de líquidos de alta resolución. Fecha: 11/Mayo/2022. Revisado en:
https://rua.ua.es.