3.3.4.

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DETECTORES
CATALINA PAMANES
FERNANDEZ
DETECTORES

A diferencia de la cromatografia de gases, en la cromatografía de

líquidos no hay detectores tan aplicables universalmente ni tan fi
ables como los detectores de ionización de llama y de conductivi
dad térmica.

Uno de los mayores retos en el desarrollo de la cromatografía de

líquidos ha sido el perfeccionamiento de los detectores.
Los
.
detectores en cromatografia de
líquidos son de dos tipos básicos
Los detectores basados en una propiedad de la disolución responden
a una propiedad de la fase móvil, tal como el índice de refracción, la
constante dieléctrica, o la densidad, que se modifica por la presencia
de los analitos.

Por contraste, los detectores basados en una propiedad del soluto r

esponden a alguna de las propiedades del soluto, como la absorbanc
ia UV, fluorescencia, o intensidad de difusión, que no son propias de
la fase móvil.
Tipos de DETECTORES
Detectores de absorbancia
Tiene una cubeta de flujo en forma de Z para la medida de la absorbancia
de los efluentes de una columna cromatográfica. A fin de minimizar el
ensanchamiento de banda extracolumna, el volumen de estas cubetas ha d
e ser lo menor posible,
de modo que los volúmenes se limitan por lo común de 1 a 10 µL y las
nlongitudes de la cubeta de 2 a 10 mm. La utilización de cubetas de este
tipo está restringida a presiones no mayores de unos 50 kg/cm2 .
Muchos detectores de absorbancia son
dispositivos de doble haz, en los que un
o de los haces pasa por la cubeta de fluj
o y el otro a través de un filtro que redu
ce su intensidad. Para comparar las inten
sidades de los dos haces se utilizan dete
ctores fotoeléctricos contrastados. Tambi
én se utilizan instrumentos de un solo h
az.

En este caso, las medidas de intensidad

del disolvente se almacenan en la memo
ria de un ordenador y al final se recuper
an para el cálculo de la absorbancia
DETECTOR PARA UV/VISIBLE
l flujo de líquido que sale de la columna pasa a través
de una pequeña celda, de pequeño volumen (entre 1
a 10 μL), para minimizar el ensanchamiento de banda.
La medida de la absorbancia del líquido que la
atraviesa en función del tiempo constituye el cromat
ograma. Su límite de detección oscila entre 0’1 y 1 ng
y puede emplearse en cromatografía de elución en
gradiente.
DETECTOR DE ABSORCIÓN INFRARROJA

Las celdas empleadas en estos detectores son similares a las emple

adas en los detectores de absorción UV-vis, excepto por las venta
nas ópticas, que en este caso son de cloruro de sodio o de fluoruro
de calcio.
Se emplea en aquellos analitos que absorben radiación infrarroja 
(IR, cuya longitud de onda supera los 700 nm), por lo que se debe p
restar atención al disolvente utilizado, ya que muchos de ellos tambi
én absorben estas radiaciones.

Los detectores más sofisticados se basan en instrumentos de transf

ormada de Fourier (FTIR). El límite de detección es de 1.000 ng y ta
mbién pueden emplearse en cromatografía de elución en gradiente
 Detectores de absorbancia

Ultravioleta Absorbancia en el
Absorbancia ultravioleta
con filtros infrarrojo.
con monocrornadores
La mayoría de los fabricantes
de instrumentos de HPLC Los instrumentos de
Por medio de filtros; ofrecen detectores que infrarrojo más sencillos
en algunos equipos consisten en un pueden trabajar a una o
también se pueden espectrofotómetro de barrido más longitudes de
con óptica de red. Algunos se
utilizar las líneas a onda; alternativamente,
limitan a la radiación
250, 313, 334 y 365 ultravioleta; mientras que otros
se pueden obtener los
nm empleando otros abarcan la radiación espectros de los picos
ultravioleta y la visible. Se parando el flujo en su
filtros. tiempo de elución
pueden elegir varios modos
operacionales
Detectores de fluorescencia
Los detectores de fluorescencia para HPLC son semejantes en dise
ño a los fluorímetros y espectrofluorímetros. En la mayoría de ello
s, la fluorescencia se detecta por medio de un detector fotoeléctric
o colocado perpendicularmente respecto al haz de excitación.

Los detectores más sencillos utilizan una fuente de excitación de

mercurio, y uno o más filtros para aislar la radiación fluorescente. L
os futuros desarrollos en los detectores de fluorescencia probable
mente se basarán en el uso de fuentes de láser sintonizables, las c
uales permiten una mayor sensibilidad y selectividad.
Una ventaja inherente a los m
étodos de fluorescencia es su
alta sensibilidad, que resulta s
er más de un orden de magni
tud mayor que la de los siste
mas de absorbancia. En croma
tografía de líquidos se ha apr
ovechado esta ventaja para la
separación y determinación d
e los componentes fluorescen
tes de las muestras.
Detectores de índice de refracción
Estos detectores miden la diferencia de índice de refracción, entre
el disolvente que en su camino hacia la columna pasa a través de
una mitad de la cubeta y el efluente de la columna que pasa por
la otra mitad.

El desplazamiento del haz con respecto a la superficie fotosensibl

e del detector provoca una variación de la señal de salida, la cual,
una vez amplificada y registrada, proporciona el cromatograma.
Los dos compartimentos
están separados por una
placa de vidrio montada
a un ángulo de modo qu
e si las dos disoluciones
difieren en el índice de r
efracción se produce una
desviación de un haz de
luz incidente.
 Detector de dispersión de luz
Recientemente, se ha comercializado un nuevo tipo de detector
general para la HPLC, el detector de dispersión de luz (ELSD).
En este detector, el efluente de la columna se pasa a un nebuliza
dor donde se convierte en una fina niebla mediante un flujo de
nitrógeno o aire.

Las finas gotitas se llevan a través de un tubo de conducción a t

emperatura controlada donde tiene lugar la evaporación de la fa
se móvil, lo que origina unas finas partículas de analito.

La nube de partículas de analito pasa a través de un haz láser. M

ediante un fotodiodo de silicio se detecta la radiación dispersada
perpendicularmente al flujo.
DETECTOR DE DISPERSIÓN DE LUZ
La dispersión se produce por la interacción
.
de la radiación electromagnética con la mat
eria. El eluato que abandona la columna se
nebuliza mediante un flujo de nitrógeno o d
e aire y se vaporiza la fase móvil, quedando
únicamente unas finas gotitas de soluto sin
evaporar. La nube de partículas de analito p
asa a través de un haz de láser y la dispersi
ón producida es detectada por un fotodiod
o de silicio.
Este detector responde a todos los solutos
menos volátiles que la fase móvil y su límite
de detección se encuentra entre 0’1 y 1 ng
Detectores electroquímicos

Los fabricantes de instrumentos proporcionan en la actualid

ad varios tipos de detectores electroquímicos. Estos dispositi
vos se basan en cuatro métodos electroanalíticos que incluy
en la amperometría, la voltamperometría, la coulombimetría
y la conductimetría.
Este tipo de detectores responden
a analitos susceptibles de reducir
se u oxidarse, como fenoles, amin
as aromáticas, peróxidos, cetonas,
aldehídos, compuestos halogenado
s, nitroderivados…
Un ejemplo de detector electroquí
mico es el detector amperométric
o, basado en la oxidación o reducc
ión del eluato en un electrodo de t
rabajo:
 DETECTOR DE CONDUCTIVIDAD

Estos detectores se basan en los cambios de conductividad d

e la fase móvil en presencia de moléculas de analito. Están f
ormados por una celda asilada que contiene dos electrodos so
bre los que se aplica una diferencia de potencial, de manera q
ue se mide la resistencia que ofrece la mezcla eluida, la cual
está relacionada con su concentración.
Este detector es útil para la determinación de analitos iónicos.
Su límite de detección se encuentra entre 0’5 y 1 ng. es sensib
le a los cambios de temperatura y no puede emplearse en elu
ción en gradiente.
DETECTOR ACOPLADO A ESPECTRÓMETRO DE MASAS

El principal problema que surge al acoplar un espectrómetro de masas al cro

matógrafo HPLC es la enorme cantidad de disolvente que acompaña al analit
o, para lo cual se han desarrollado diversas interfases:
Termovaporizador (termospray): con esta interfase se vaporiza el eluato y se
forma un aerosol, formado por moléculas de disolvente y de analito. Mediant
e un mecanismo de ionización química, se ioniza el analito y los iones son c
onducidos hacia el espectrómetro y el disolvente es expulsado mediante una
bomba. Los analitos deben ser termoestables y polares.
Interfase de ionización química a presión atmosfé
rica (APCI): utiliza calefacción y nitrógeno para conv
ertir el eluato en aerosol, del que se evapora el disol
vente. Mediante una descarga eléctrica el analito se
convierte en iones que son conducidos hacia el esp
ectrómetro de masas.
Fin