ANÁLISIS INSTRUMENTAL

CROMATOGRAFÍA LIQUIDA Y DE GASES

Estudiante:
Curso: 5-1
Universidad de Guayaquil. Facultad de Ingeniería Química, Carrera de Ingeniería
Química.
Guayaquil, Ecuador.

BANCO DE PREGUNTAS

1. ¿En qué consiste la cromatografía liquida?

Es una técnica utilizada para separar los componentes de una mezcla. Consiste en una
fase estacionaria no polar (columna) y una fase móvil. La fase estacionaria es sílica
que se ha tratado con RMe2SiCl. La fase móvil actúa de portador de la muestra.

2. ¿Cómo se divide la cromatografía liquida?

La cromatografía líquida ésta puede aún ser dividida en cromatografía líquida clásica
(CLC) y cromatografía líquida de alta eficiencia (CLAE) o HPLC del inglés High
Performance Liquid Chromatography.

3. ¿En que consiste la cromatografía clásica?

En la cromatografía líquida clásica, se utilizan columnas con diámetros relativamente
grandes, empaquetadas con fases estacionarias finamente divididas, donde la fase
móvil es arrastrada a través de la columna apenas por la fuerza de la gravedad y las
fracciones individuales de la muestra son colectadas manualmente o a través de un
colector de fracciones.

4. ¿Qué es la HPLC?
HPLC significa Cromatografía Líquida de Alto Rendimiento. Antes de que la HPLC
estuviera disponible, el análisis LC se llevó a cabo mediante flujo gravitatorio del
eluyente (el disolvente utilizado para el análisis LC) requirió así varias horas para que
el análisis se completara. Incluso las mejoras añadidas en el tiempo posterior fueron
capaces de acortar ligeramente el tiempo de análisis. Aquellos sistemas clásicos / LC
iniciales se denominan “cromatografía de baja presión” o “cromatografía en
columna”.
5. ¿Cómo funciona la técnica de cromatografía columna líquido-sólido?
La técnica de cromatografía más popular incluye una fase móvil líquida que filtra
lentamente a través de la fase estacionaria sólida, lo que lleva los componentes
separados.

6. ¿Dónde es aplicada la cromatografía liquida?

Esta técnica está indicada para la separación de compuestos orgánicos semivólatiles.
 Hidrocarburos Poliaromáticos (PAHs), Aminoácidos: OTA, Ácido Fólico,
Herbicidas,
 Vitaminas, Acido tenuazonico, Formaldehído…etc.
 Rango de trabajo para muestras líquidas: µg L-1 - mg L-1
 Rango de trabajo para muestras sólidas: µg Kg-1 - µg g-1

7. ¿De que equipo depende la cromatografía liquida para la separación

de componentes?
Depende de bombas para pasar un solvente líquido presurizado que contenga la
mezcla de muestra a través de una columna llena de un material adsorbente sólido.

8. ¿Cuáles son los componentes de la HPLC?

El sistema consta de lo siguiente: Bomba, inyector, columna, detector, grabador,
degaseador y calentador de columna,

9. ¿Cómo interactúan los diferentes componentes de la muestra?

Cada componente de la muestra interactúa de forma ligeramente diferente con el
material adsorbente, generando distintas velocidades de transporte para los distintos
componentes y provocando la separación de los componentes a medida que salen de
la columna.

10. ¿Cuáles son las fuerzas elementales que actúan sobre las moléculas cuando
las soluciones son separadas?
Las fuerzas elementales que actúan sobre las moléculas son de cinco tipos: 1) Fuerzas
de dispersión de London o fuerzas de Van der Waals; 2) Interacciones de dipolo
inducido; 3) Enlaces de hidrógeno; 4) Interacciones dieléctricas; 5) Interacciones
electroestáticas y coulombianas.
11. ¿Cuál es la posibilidad de utilizar diversos procesos de interacción entre
analitos y distintas columnas cromatográficas?
Junto con la opción de seleccionar diferentes detectores (algunos de ellos en serie),
hace que sea posible la extracción de un gran volumen de información
permitiendo abordar un amplio abanico de necesidades analíticas.

12. ¿Cuáles son los tipos de técnicas que se aplican en la cromatografía liquida?

 Cromatografía de adsorción (liquido – solido)

 Cromatografía de reparto/adsorción (fases ligadas físicamente)
 Cromatografía de intercambio iónico
 Cromatografía de exclusión molecular
 Cromatografía de fase normal
 Cromatografía de fase reversa
13. ¿La cromatografía es un método físico que se utiliza para separar y
analizar ?
a) Mezclas simples
b) Mezclas complejas
c) Mezclas viscosas
d) Metales
14. ¿En qué tipo de cromatografía, la fase estacionaria se mantiene en un tubo
estrecho y la fase móvil es forzada a través de él bajo presión?
a) Cromatografía en columna
b) Cromatografía planar
c) Cromatografía líquida
d) Cromatografía de gases
15. En cromatografía, la fase estacionaria puede ser apoyada en un
sólido.
a) Sólido o líquido
b) Líquido o gas
c) Sólo sólido
d) Sólo líquido
16. En la cromatografía, ¿de qué material puede estar compuesta la fase móvil?
a) Sólida o líquida
 b) Líquida o gaseosa
c) Sólo gas
d) Sólo líquido
17. ¿Cuál de los siguientes no puede utilizarse como adsorbente en la cromatografía
de adsorción en columna?
a) Óxido de magnesio
b) Gel de sílice
c) Alúmina activada
d) Permanganato de potasio
18. Escribe 4 detectores adecuados para la HPLC. ¿Qué sustancias pueden ser
detectadas por ellos?
- Detector UVVIS: capaz de detectar compuestos activos por UV
- Detector FTIR que es capaz de detectar compuestos activos en el IR
- Detector de dispersión de luz: que detecta la dispersión de luz de toda la mezcla
- Detector de fluorescencia: capaz de detectar compuestos fluorescentes
19. ¿Qué componentes del sistema necesita para un aparato de HPLC? Dibuje un
diagrama esquemático del aparato cromatográfico.
Bomba de disolvente con depósito de disolvente, válvula de inyección para la
muestra, posiblemente una columna de guarda, luego la columna cromatográfica
propiamente dicha y, por último, el sistema de registro del detector. En el caso de un
proceso preparatorio, también se necesitan válvulas para guiar el flujo y tanques de
recogida de producto.
20. La cromatografía no puede utilizarse para separar productos delicados.
a) Verdadero
b) Falso
21. ¿Cuál de los siguientes tipos de cromatografía implica el proceso en el que la fase
móvil se mueve a través de la fase estacionaria por la influencia de la gravedad o
la acción capilar?
a) Cromatografía en columna
b) Cromatografía líquida de alta presión
c) Cromatografía de gases
d) Cromatografía planar
22. ¿Cuáles son las razones del ensanchamiento de la banda?

-Distribución del flujo

-Procesos de difusión

-La transferencia de masa de los solutos entre las fases móvil y estacionaria

El ensanchamiento de la banda se produce debido a la distribución desigual del flujo en el

lecho, a la difusión y a la transferencia de masa entre la fase móvil y la estacionaria

23. ¿Qué fenómenos no tiene en cuenta el modelo ideal de cromatografía?

-La difusión
-Cinética de transferencia de masa
-Dispersión
24. ¿Cuál de las siguientes formas se puede realizar la cromatografía de gases?
a) Sólo en columnas
b) Sólo en superficies planas
c) Tanto en columnas como en superficies planas
d) Ni en columnas ni en superficies planas
25. ¿Qué es la cromatografía en capa fina?

Cromatografía en papel y electro cromatografía. En todos los casos se emplea una

capa plana y relativamente delgada de una materia que a la vez es el soporte o bien

que recubre una superficie de vidrio, plástico o metálica. La fase móvil se mueve a
 través de la fase estacionaria por capilaridad, a veces ayudada por gravedad o por

aplicación de un potencial eléctrico.

26. ¿Qué se debe hacer para tener buena eficiencia en las

columnas cromatográficas?

 Capilares de diámetro pequeño

 Largos con bajas altura equivalente

27. ¿Por qué no es tan recomendable que las columnas cromatográficas sean

tan largas?

Porque tienen tendencia al sangrado de columnas.

28. ¿Por qué son mejores las columnas apolares que las polares?

Porque tienen un más tiempo de vida útil.

29. ¿Cómo puedo confirmar la presencia de determinados compuestos en

mi muestra?

Con un análisis HPLC-EM se confirma su presencia de componentes en la muestra.

30. ¿Qué pasa si 2 compuestos tienen el mismo tiempo de retención?

Se debe utiliza un detector de diodo, o cambiar la columna.

31. ¿Si el peak sale MUY grande, q se puede hacer?

Se debe cambiar la longitud de onda, se puede aumentar o disminuir

32. ¿En HPLC para que sirve el lavador de sellos?

Para eliminar impurezas de compuesto orgánicos

33. ¿Cuándo sangra más una columna?

Cuando se aumenta mucho la temperatura o cuando se utilizan columnas polares

de gas a alta temperaturas. Se compensa disminuyendo la temperatura y

corrigiendo la línea base con un blanco.

34. ¿Cuándo sangra más una columna cromatográfica?

 Cuando se aumenta mucho la temperatura o cuando se utilizan columnas polares lar

gas a alta temperatura. Se compensa disminuyendo la temperatura y corrigiendo la

línea base con un blanco.

35. ¿Como se prepara el capilar para aplicar la muestra en la cromatoplaca?

Se le aplica calor para así poder romperlo, pero esto hace que n nos quede un orificio

muy grande.

36. ¿Cuáles son las fases móviles más utilizadas?

Fase Normal y Fase Reversa.

37. ¿Cómo se selecciona la fase móvil y la fase estacionaria?

Se seleccionan las fases dependiendo de lo que se desea separar y de acuerdo con la

muestra que se obtiene para ya sea purificar o separar. Pero siempre recordando que

la afinidad de la columna depende de: “Lo polar disuelve a lo polar y lo apolar

disuelve a lo apolar”.

38. ¿Cuáles son las características de un detector?

Los detectores empleados en HPLC se han diseñado y perfeccionad con el fin de

incorporar celdas de flujo que permitan medir las bajas concentraciones de analito que

hay en el líquido. Los distintos detectores se clasifican según se encarguen de medir

una propiedad ya sea del soluto o de la disolución

39. ¿Qué es un HPLC UV?

La cromatografía líquida de alto rendimiento (HPLC) es una técnica usada para

separar las moléculas basadas en talla y la carga superficial, entre otras propiedades.

La incorporación de la espectroscopia (UV) ultravioleta con CLAR permite que la

concentración de moléculas sea determinada después de la separación.

40. ¿Cuál es su uso más común el uso más común de la cromatografía de gases?
 Empleado para determinar la composición de una mezcla de productos químicos

(muestra), un cromatógrafo de gases utiliza diversos gases en su operación en función

del analizador y del tipo de detector concretos.

41. ¿Qué diferencia existe entre la cromatografía de gases y la

cromatografía líquida?

Cromatografía líquida Cromatografía de gas

La fase movible es un líquido La fase movible es un gas

La separación se basa en la acción recíproca del La separación se basa sobre todo en los
soluto con el ambiente de la cromatografía puntos de ebullición de las moléculas del
soluto

Puede ser realizado en una hoja o una columna Puede ser realizado solamente en una
columna

Puede ser utilizado para separar cualquier
composición soluble, eg aminoácidos , proteínas,
drogas, ácidos nucléicos, lípidos, antioxidantes,
hidratos de carbono, y polímeros naturales y
artificiales
Puede ser aplicado en la separación de
composiciones volátiles y de mezclas
gaseosas

Realizado generalmente en las composiciones tan Realizado en substancias inestables más

sensibles al calor de la temperatura ambiente altas de las temperaturas pudo conseguir
puede ser analizado con seguridad usando la tan térmicamente desnaturalizado
técnica

La retención del soluto aquí se basa en la acción La separación se basa en los puntos de
recíproca de solutos con las fases movibles y ebullición de las moléculas del soluto así
estacionarias así que es fácil optimizar resultados que no es muy flexible en términos de
separación óptima
 Esto es una técnica relativamente más lenta El análisis se mide más rápidamente y
generalmente en minutos, aunque pueda
tomar tan poco como un par de segundos

Da un mayor pico o una banda más amplia dando Ofrece una resolución comparativamente
por resultado una resolución generalmente más mejor
inferior

Los disolventes polares de las aplicaciones tienen Utiliza cualquier disolvente que se
gusto del agua o del metanol vaporice

42. ¿Qué tipo de mezclas se pueden separar con la cromatografía?

La cromatografía es un procedimiento que se emplea para separar los distintos

componentes de una mezcla homogénea aprovechando su diferente afinidad por un

disolvente.

43. ¿Cuándo usar HPLC?

La HPLC es particularmente útil para la separación de materiales con grandes pesos

moleculares que presentan una volatilidad muy baja y no pueden separarse mediante

cromatografía de gases. Se usa principalmente en la biotecnología, en ciencias y la

industria farmacéutica.

44. De un ejemplo de cromatografía en la vida cotidiana

Para revisar escenas del crimen, en un examen de orina, para separar tintas. El

método cromatográfico consiste en la separación de los componentes de una mezcla

utilizando la diferente afinidad de cada uno por una fase estacionaria y una fase

móvil. A la sustancia que se desea separar se le llama analito.

45. ¿Qué es fase móvil y estacionaria en cromatografía?

 La cromatografía es un método físico de separación en el cual los componentes a

separar se distribuyen entre dos fases, una que es estacionaria (fase estacionaria)

mientras que la otra, (la fase móvil) se mueve en una dirección determinada. Este

sólido puede o no contribuir al proceso de separación.

46. ¿Qué propiedades debe tener una fase estacionaria líquida en cromatografía

de gas-liquido?

En una columna cromatográfica de gas-líquido las propiedades deseables para una

fase líquida inmovilizada incluyen: (1) baja volatilidad (idealmente, el punto de

ebullición del líquido debe ser al menos 100ºC mayor que la temperatura de trabajo

máxima de la columna); (2) estabilidad térmica; (3) químicamente inerte; (4)

características de disolvente tales que los valores de k' y α de los solutos a resolver

estén dentro de un intervalo conveniente.

47. ¿Cuántos tipos de columnas se utilizan para cromatografía?

En cromatografía de gases se usan dos tipos generales de columnas, las

empaquetadas, o de relleno y las tubulares abiertas, o capilares.

48. ¿Qué longitud tienen las columnas cromatográficas?

Las columnas cromatográficas varían en longitud desde menos de 2 hasta 50 m.

49. ¿De qué material están hechas las columnas cromatográficas de gas?

Se construyen de acero inoxidable, vidrio, sílice fundida, o Teflón.

50. ¿Cómo están configuradas las columnas cromatográficas de gas?

Normalmente se configuran como helicoides con diámetros de 10 a 30 cm, a fin de

poder colocarse en el interior de un termostato.