Manual Completo de Practicas de Laboratorio

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FACULTAD DE FARMACIA Y
BIOQUIMICA
BIOQUIMICA
MANUAL DE PRACTICAS DE LABORATORIO.
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CONTENIDO:
• DETERMINACION DE Magnesio
• DETERMINACION DE CALCIO TOTAL
• DETERMINACIÒN CUANTITATIVA DE FÒSFORO
• DETERMINACIÓN DE SODIO Y CLORUROS EN SUERO (TÉCNICA DEL

IÓN SELECTIVO)
• ESTUDIO DE LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO
• DETERMINACIONES HORMONALES
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PRACTICA NO. 1
Magnesio
FUNDAMENTO:
Los iones magnesio reaccionan en medio alcalino con el colorante
metalocromo calmadita, para formar un cromóforo, el cual absorbe luz
a 520 nm. El calcio es excluido de la reacción al formar un complejo
con EGTA.
ANTECEDENTES
Las determinaciones de magnesio son clínicamente importantes. El

magnesio, al igual que el potasio, es el catión intracelular más
abundante. El magnesio es una coenzima requerida en el
metabolismo de los carbohidratos, lípidos y proteínas. Una
disminución en los niveles de magnesio en el organismo,
hipomagnesemia, puede causar temblores, irritabilidad muscular y
aumento de la presión sanguínea y de la frecuencia cardiaca. Los
niveles elevados de magnesio, hipermagnesemia, pueden causar
problemas respiratorios, coma y paro cardiaco si dichos niveles no se
corrigen.
El método de elección para la determinación de magnesio es la

espectrofotometría de absorción atómica. Este método no es práctico
para los laboratorios clínicos, de manera que en su lugar se utilizan
métodos de fijación con un colorante que emplean azul de metiltimol,
amarillo de titanio, calmagita y azul de xilidilo-1. Este método
emplea azul de xilidilo-1 el cual permite el uso de un solo reactivo
de manera rápida y precisa.
El Magnesio es el quinto mineral para su abundancia en el organismo y

el segundo catión celular. El cuerpo contiene un total de 24 gramos;
el 60% se localiza en el esqueleto y el 405 restante en los tejidos
blandos.
La deficiencia se ve en alcohólicos, pacientes afectos de cirrosis

hepática, tras tratamiento diurético y en enfermedades renal.
Los síntomas son:
- Debilidad muscular
- Déficit de Calcio secundario
- Confusión, alucinaciones, convulsiones y otro síntomas
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neurológicos.
El exceso de Magnesio es extremadamente raro.

Funciones
- Estructural, en huesos y dientes.

- Cofactor de más de 300 enzimas del organismo, las que catalizan las
reacciones ATP- dependientes. El Magnesio se liga al ATP, formando un
complejo Magnesio- ATP que es el sustrato de enzimas tales como las
cinasas.
- Interacciona con el Calcio para afectar a la permeabilidad de las
membranas excitables y la transmisión neuromuscular.
Alimentos fuentes
Cereales integrales, frutas secas, lácteos, chocolate, verduras de

hoja verdes, pan, soya y banana.
Valores normales
Los valores normales en adultos promedio es de 1.25 a 2.5
miliequivalentes (mEq) por litro.
ESTABILIDAD:
Estos reactivos son estables a temperatura ambiente (< 25
ºC) hasta la fecha de vencimiento indicada en la caja. Se recomienda
no exponer a temperaturas elevadas durante tiempos
prolongados.
OBSERVACIONES:
* Todo el material a usar debe estar escrupulosa- mente limpio,
utilizando detergentes no iónicos, soluciones de acido clorhídrico al
25 % y agua destilada.
* Se recomienda el uso de micropipetas con constricción, a los fines

de obtener una mejor reproducibilidad.
* Se recomienda separar pipetas y tubos de fotocolorímetro para uso
exclusivo de esta determinación.
* No deben utilizarse anticoagulantes que complejen o

precipiten el magnesio (EDTA, oxalato).
MUESTRA:
Suero, plasma heparinizado, orina o LCR.
No debe utilizarse plasma preparado utilizando anticoagulantes como
EDTA, citrato u oxalato.
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La orina de 24 horas podrie contener sedimentos que absorben

magnesio. Añadir unas gotas de acido clorhidrico concentrado hasta
alcanzar un pH entre 3-4 para disolver el sedimento.
Diluir la orina 1+4 con agua bidestilada y multiplicar el resultado

por 5.
REACTIVOS:
COMPONENTES
CONECTRACIONES
1.- Reactivo de color Calmagite
0.2 mmol/L
EGTA
Dimetilsulfóxido
2.- Tampon
Tampon Dietanolamina
1mol/L, pH 12.50
Surfractantes
3.- Patron Magnesio

1.0mmol/L (2.43mg/dl)
PREPARACION DE LAS SOLUCIONES:
1.- REACTIVO DE COLOR

Listo para usar. Estable hasta la fecha de caducidad cuando se
conserva entre +15 y +25°C.
2.- TAMPON
3.- PATRON
REACTIVO DE TRABAJO
Mezclar volúmenes iguales de reactivo de color 1 y de tampón 2. Usar
inmediatamente.
PROCEDIMIENTO:
Longitud de onda:
520 nm; 546 nm
Cubeta:
1 cm de espesor
Temperatura:
20-25°C
5
Medición:
frente al aire
Pipetear en las cubetas:
Reactivo Patron Muestra

Blanco
React. de 1.0 ml 1.0 ml 1.0 ml
trabajo
Agua 10 ul
destilada
Patron 10 ul
Muestra 10 ul
Mezclar, incubar durante 3 min a temperatura ambiente, leer la

absorbancia del patron (Apatron) y de la muestra (Amuestra) frente al
reactivo blanco, antes de 30 minutos.
CALCULOS:
(Amuestra)
Concentración de magnesio (mmol/L) = (Apatron) x 1.0
(Amuestra)
Concentración de magnesio (mg/dl) = (Apatron) x 2.43
VALORES NORMALES:
ADULTOS
SUERO/PLASMA 0.7-1.1 mmol/l
(1.70-2.70mg/dl)
CSF 0.98-1.27 mmol/l
(2.40-3.10 mg/dl)
ORINA 2.1-8.22 mmol24 hrs
(50-200 mg/24hrs)
RESULTADOS:
.063
Concentración de magnesio(mg/dl) =.040 x 2.43 =1.542 mg/dl
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ESQUEMAS:
CONCLUSIONES:
Concluyo que el magnesio es el cuarto catión más abundante en el

líquido extracelular y el segundo en el intracelular. El 20% del
magnesio sérico esta unido a proteínas, su absorción se hace
fundamentalmente en yeyuno e íleon, y el balance diario se hace a
través de los riñones ya que por vía fecal se elimina el 1 a 2%. Se
ha observado un aparente umbral renal para la excresión de
magnesio para valores séricos cercanos a los normales, por lo
que una pequeña modificación de los niveles séricos,
alterará rápidamente la excresión de magnesio. En la práctica
clínica la deficiencia de magnesio es más común que el exceso y puede
deberse a distintas causas tales como: cetoacidosis
diabética, alteraciones intestinales, hiperparatiroidismo,
alcholismo, enfermedades renales.
Bibliografía:
Nutrar prevención y salud plena. Minerales. Magnesio.

http://www.nutrar.com/detalle.asp?ID=146 12/01/08
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PRACTICA 2
DETERMINACION DE CALCIO TOTAL
INTRODUCCION
Más del 99 % del calcio corporal existe en los huesos y en la

dentadura. El 1 % restantes esta presente en la sangre y en el tejido
conjuntivo y sirve como cofactor en la coagulación sanguínea, en
metabolismo y fisiología neuromuscular. El calcio en el suero esta
presente en tres formas diferentes:
1. 45% unido a proteínas

2. 5% en forma no iónica
3. 50% en forma ionizada.
La ionizada es la fracción fisiológicamente activa y la mas

importante en términos de función biológica.
Son muchos de los factores que influyen al nivel del calcio:

hipercalcemia (nivel elevado de calcio) que se observa en
hiperparotiroidismo, hipervitaminosis, sarcoidosis, mieloma y en
ciertos canceres oseos.
La hipocalcemia (bajos niveles de calcio) se encuentra en

hipoparatiroidismo, raquitismo, nefrosis, nefritis, esteatorrea y
pancreatitis. Cualquier disminución en el nivel de las proteínas
sanguíneas resulta en una disminución del nivel total de calcio en
suero. De igual forma cualquier aumento en el nivel de proteínas como
el mieloma resulta en un aumento del nivel de calcio.
También parece haber una relación reciproca entre el calcio y el

fósforo. Los aumentos de fósforo inorgánico en suero están asociados
con disminución del calcio en suero.
Los primeros procedimientos para la determinación de calcio en suero

involucraban precipitación del calcio y determinación subsiguiente
del anion del agente precipitado. Más recientemente, los compuestos
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de calcio han sido determinados con espectrofotometría de absorción

atómica, que ha sido recomendado como método de referencia para la
determinación de calcio tota. Con el desarrollo de los reactivos
quelonios y los indicadores metal cromáticos, la absorción atómica se
reemplazo rápidamente por los procedimientos complexo métricos, los
cuales pueden medir el calcio directamente en suero.
Este macromineral es el mineral con mayor presencia en el organismo y

el cuarto componente del cuerpo después del agua, las proteínas y las
grasas. El calcio corporal total, se aproxima a los 1200 gramos, lo
que es equivalente a decir 1,5 a 2% de nuestro peso corporal. De
esto, casi un 99% se concentran en los huesos y dientes el 1%
restante se distribuye en el torrente sanguíneo, los líquidos
intersticiales y las células musculares.
Tanto su carencia como su exceso son perjudiciales para la salud, ya

que participa en la coagulación, en la correcta permeabilidad de las
membranas y a su vez adquiere fundamental importancia como regulador
nervioso y neuromuscular, modulando la contracción muscular (incluida
la frecuencia cardíaca), la absorción y secreción intestinal y la
liberación de hormonas.
Los alimentos con mayor contenido de calcio son los productos

lácteos, los frutos secos, las sardinas y las anchoas; ya en menor
proporción en legumbres y vegetales verdes oscuros (espinaca, acelga,
broccoli).
El calcio está vinculado a la presencia de fósforo. La falta o exceso

de cualquiera de estos dos macrominerales puede afectar la absorción
del otro.
A su vez, la absorción del calcio se ve dificultada ante consumos de
café, alcohol, falta de Vitamina D, falta de ácido clorhídrico en el
estómago, falta de ejercicio y el estrés. Un obvio indicador de
carencia de calcio es la osteoporosis.
Una de las grandes ventajas que presenta el calcio refiere a su

invariabilidad en el tiempo desde el momento en que es envasado hasta
el momento de consumo, podemos decir que el contenido de calcio de
los alimentos no se altera en ninguna etapa.
Funciones:
• Provee rigidez y fortaleza a huesos, dientes y encías.

• Ayuda en la regularidad de la frecuencia cardíaca, y en la
transmisión de impulsos nerviosos.
• Previene enfermedades cardiovasculares, ya que disminuye los
niveles de colesterol en sangre.
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• Previene los calambres en la musculatura corporal, debido a que

el músculo utiliza el calcio para realizar sus movimientos y
contracciones.
• Es fundamental para que la sangre coagule adecuadamente.
• Es preventivo ante enfermedades como el cáncer.
• Contribuye a reducir la tensión arterial en personas con
hipertensión arterial.
• Previene la osteoporosis (perdida de masa ósea).
• Es activador de diferentes enzimas.
• Mantiene la permeabilidad de las membranas celulares.
• Es un coadyuvante de la actividad neuromuscular.
• Mantiene la piel sana.
• Durante el embarazo reduce la incidencia de la preeclampsia
(hipertensión gestacional o aumento de la presión arterial con
edema y/o protenuria, proteínas en orina, que ocurre después de
la 20 semana de gestación).
Deficiencia de Calcio
La ingesta inadecuada, la disminución de la absorción a nivel
intestinal como la excreción (en orina) aumentada del calcio conduce
a una disminución total del mismo en nuestro organismo.
La carencia de calcio está caracterizada por:
• dolores en las articulaciones

• hormigueos y calambres musculares
• un ritmo cardíaco anormal, palpitaciones
• convulsiones y deterioro cerebral
• depresión
• fragilidad en las uñas, uñas quebradizas.
• alteraciones cutáneas
• dientes defectuosos
• aumento del colesterol sanguíneo
• hipertensión
• entumecimiento de miembros superiores e inferiores
• raquitismo
• osteoporosis
Algunas enfermedades también determinan la falta de calcio en el

organismo, como son las alergias, la insuficiencia renal, colitis y
diarreas, y trastornos hormonales (mal funcionamiento de la glándula
paratiroides).
En esos casos puede procederse a la administración de suplementos de
calcio, bajo estricta supervisión médica, y su eficacia es mayor
cuando los suplementos son tomados en varias tomas a lo largo del
día, y antes de acostarse.
Las personas que han padecido cálculos renales deberán abstenerse de
tomar suplementos.
• Factores que favorecen la absorción:

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o Vitamina D: la forma activa de la vitamina D es

determinante en la asimilación de este mineral. Si está
presente en las cantidades adecuadas favorece la absorción
del calcio.
o Bajo consumo de calcio: la cantidad de calcio absorbido por
el organismo será menor cuando lo consumimos de una sola
vez en grandes cantidades. Es preferible tomarlo en dosis
menores durante el día así se favorecerá la absorción. No
se recomienda tomar más de 500 mg de calcio de una sola
vez.
o Bajo nivel sanguíneo de calcio: si el nivel de calcio en
sangre baja, se activa una hormona, la paratiroidea que
estimula la conversión de la vitamina D en el riñón a su
forma activa favoreciendo la absorción intestinal de
calcio.
o Ejercicio moderado: favorece la asimilación del calcio.
o Edad: la absorción del calcio es de alrededor del 60 % en
infantes y niños ya que el organismo necesita el calcio
para el desarrollo normal de huesos y dientes.
• Factores que afectan la absorción de calcio
o La correcta absorción del calcio es fundamental ya que
existen factores que la favorecen y otros que la impiden.
o La absorción de calcio se refiere a la cantidad de calcio
que es absorbida desde el tracto digestivo hacia nuestra
circulación sanguínea.
• Factores que impiden la absorción:
o Ejercicio vigoroso: dificulta la absorción de calcio
o Edad: la absorción de calcio disminuye durante la adultez
en un 15-20%. Por ello las recomendaciones diarias aumentan
para compensar.
o Fósforo (en exceso): Las bebidas gaseosas con alto
contenido en fósforo no resultan beneficiosas. Es de gran
preocupación hoy en día que más allá que las gaseosas
contengan alto contenido en fósforo, la leche sea
reemplazada por las mismas ocasionado la carencia de calcio
entre los niños y adolescentes.
o Magnesio y fósforo (en exceso): la absorción de estos dos
minerales también requieren de vitamina D. por ellos si se
consumen en exceso, habrá menor cantidad de vitamina D
disponible para que el calcio se absorba.
o Zinc: consumido en exceso también obstaculiza la correcta
absorción de calcio
o Alcohol: reduce la absorción intestinal de calcio. Inhibe
ciertas enzimas en el hígado que convierten a la vitamina D
en su forma activa reduciendo así la absorción.
o Cafeína: el café tomado en alta cantidades puede aumentar
la excreción de calcio y dismimuir la absorción. Una taza
de café causa una pérdida de calcio de 2-3 mg que es
fácilmente compensada agregándole 1 cucharada de leche. El
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consumo moderado de cafeína (1 taza de café o 2 tazas de te

por día) tiene muy pocos efectos negativos siempre y cuando
la ingesta de calcio sea la adecuada.
o Hierro: Si consumimos calcio junto con hierro, ambos
compiten en la absorción, así que el efecto de ambos se ve
muy reducido. Conviene no mezclarlos.
o Proteínas y sodio: a medida que aumentamos la cantidad de
sal y proteinas a nuestra dieta, aumenta la cantidad de
calcio que se excreta.
o Ácido oxálico: presente en almendras, soja, cacao,
espinacas y acelgas, se une al calcio de esos alimentos, y
forman un compuesto muy difícil de ser absorbido por el
intestino. La absorción de calcio de otros alimentos que
sean consumidos en la misma comida no se vera afectada.
Estos alimentos que contienen ácido oxálico resultan
perjudiciales, siempre y cuando su consumo se realice en
cantidades elevadas.
PRINCIPIO: MEDIO ALCALINO

Cálcio + o- cresolftaleina complexona
Cálcio- cresolftaleina complexona (color púrpura)
El calcio reacciona con cpc en un medio alcalino para tomar un color

púrpura que absorbe a 570nm (550 – 580nm). la intensidad del color es
proporcional a la concentración del calcio. para evitar la
interferencia de otros iones metálicos se agregan estabilizadores e
intensificadores de color.
REACTIVOS:
1. reactivo colorimetrico: o- cresoftalema complexona 0.14mm, 8 –

hidroxiquinolona 13.0mm.
2. buffer de calcio diaetilamina 0.63mm cianuro de potasio 2.0 mm ,
ingredientes no reactivos y estabilizadores.
3. estandar de calcio: carbonato de calcio en acido clorhidrico
diluido (10mg/dl).
PRECAUCIONES:
1. este reactivo es para diagnostico “in vitro” unicamente.
2. reactivo (a y b) son irritantes para la piel. evite el
contacto.
3. el reactivo (b) contiene veneno y no debe ser pipeteado con la
boca.
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PREPARACION DEL REACTIVO:

1. combine volumenes iguales del reactivo a y b mezcle y deje
reposra por 10 min. a temperatura ambiente.
2. los reactivos se deben combinar en recipientes plasticos
limpios. el agua y los recipientes de vidrio contienen calcio,
reaccionan con el reactivo. el equipo de vidrio se enjuagar en
acido clorhidrico diluido antes de usarse.
ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO:

1. todos los reactivos se deben almacenar refrigerados 2-8 ºc .
2. el reactivo de trabajo combinado (combinado a y b) es estable
por 2 semanas refrigerado, y una semana a temperatura ambiente.
mantenga los botes hermeticamente cerrados para prevenir
evaporacion.
DETERIORO:
1. el reactivo debe estar claro. la turbiedad indica deterioro y no
debe ser utilizado.
2. el reactivo no da los resultados de control o no llega a la
linearidad estipulada.
COLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

(SUERO)
1. el suero no hemolizado es la muestra recomendada.
2. no utilice otro anticuagulante que no sea heparina.
3. separe el suero del coagulo tan pronto como sea posible, ya que
las celulas rojas absorben el calcio.
4. no se deben utilizar muestras viejas que contienen precipitado.
5. no se deben utilizar tubos con tapones de corcho.
6. el calcio en suero es estable por 24 horas a temperatura
ambiente y a 1 semana refrigerado (2 – 8 ºc).
(ORINA)
1. colocar orina de 24 horas en un recipiente limpio y seco
conteniendo 20 – 30 ml de 6n hcl.
2. usar 1 – 2 ml de hcl 6n en orina al azar.
INTERFERENCIAS:
1. las sustancias que contienen complejos de calcio o calcio no
deben entrar en contacto con la muestra en prueb. ejemplo: EDTA,
citrato, oxalato, fluoruro.
2. los especimenes de pacientes que han recibido bromosulfoftaleina
(bsp) o edta no deben ser utilizados.
3. vea las referencias para obtener una lista de sustancias que
afectan la determiancion precisa del calcio.
MATERIALES REQUERIDOS:
1. los instrumentos precisos de pipeteo.
2. tubos de ensayo/gradilla
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3. espectrofotometro 570nm
4. reloj
INSTRUCCIONES GENERALES:
El reactivo se puede usar en procedimeintos manual como automatico.
PROCEMIENTO MANUAL:
1. preparar el reactivo. ver preparacion del reactivo.

2. etiquete los tubos blanco, estandar controles, pacientes, etc.
3. pipetee 1.0ml de reactivo de trabajo a cada tubo.
4. agregue 0.02ml de muestra en los tubos respectivos y mezcle.
5. deje por lo menos 1 minuto a temperatura ambiente.
6. ponga en ceros el espectrofotometro con el blanco a 570nm.
7. lea y anote la absorbancia de todos los tubos. el color final es
estable por 20 minutos.
VOLUMEN ALTERNO:
1. para espectrofotometros que requieran mas de 1 ml. para la
lectura, se deben utilizar 3.0ml del reactivo y .05ml de la
muestra.
orina:
2. use 3ml de reactivo y .05ml de muestra.
NOTAS DEL PROCEDIMIENTO:

1. las muestras con valores sobre 20 mg/dl deben ser diluidas 1:1
con solucion salina, corra de nuevo y el resultado multipliquelo
por dos.
2. las muestras lipemicas o hemolizadas requieren un blanco de
suero. para prepararlo agregue 0.05ml de muestra 0 3.0ml de agua
destilada. mezcle y lea contra agua a 570nm. reste la
absorbancia y realice los calculos.
3. la contaminacion con calcio del equipo de vidrio afectan la
prueba, utilice equipo de cristal lavado con acido o tubos de
plastico.
CALIBRACION:
Utilice el estandar acuoso de calcio (10mg/dl) o un calibrador
apropiado.
CALCULOS:
Abs. desconocido / estandar ( conc. del estandar) =_______

CONTROL DE CALIDAD:
La validez de la reaccion debe ser monitoreada por el uso de suero
control normal y anormal. con concentraciones de calcio conocidas. el
valor asignado a la reaccion se debe confirmar con la aplicacion
elegida. si no se obtiene el rango de valores apropiado en la prueba,
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puede ser indicador de deterioro del reactivo, falla en los

instrumentos o errores en el rpocedimiento.
VALORES ESPERADOS:
8.5 – 10.5 mg/dl
Niños menores de 12 usualmente tienen valores normales elevados que
disminuyen con la edad.
se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.
ESQUEMAS Y OBSERVACIONES:
CALCULOS Y RESULTADOS:
CALCIO TOTAL: 8 mg/dl
CONCLUSION:
He concluido que el examen de sangre para medir el nivel de calcio en la sangre se hace
para examinar o controlar enfermedades de los huesos o trastornos de la regulación del
calcio (enfermedades renales o de la glándula paratiroides). Una deficiencia de calcio en los
líquidos corporales produce una hiperexcitabilidad en los nervios y músculos, y su exceso
tiene un efecto opuesto.
BIBLIOGRAFIA:
(1) Breslau, N.A., Brinkley, L., Hill, K.D. & Pak, C.Y.C. (1998) Relationship of animal–protein rich diet to kidney
stone formation and calcium metabolism. J. Clin. End. 66:140-146.
(2) Linkswiler, H.M., Zemel, M.B., Hegsted, M. & Schuette, S. (1981). Protein–induced hypercalcuria. Fed. Proc.
40:880-883.
http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003477.html ,
http://www.zonadiet.com/nutricion/calcio.htm,
http://www.ivu.org/ave/calcio.html
15
PRACTICA NO. 3.
BIOQUIMICA CLINICA ESPECIALIZADA.
DETERMINACIÒN CUANTITATIVA DE FÒSFORO
GENERALIDADES:
Efectos del Fósforo sobre la salud
Los fosfatos son substancias importantes en el cuerpo de los humanos

porque ellas son parte del material de ADN y tienen parte en la
distribución de la energía. El fosfato era también añadido a un
número de alimentos, como quesos, salsas, jamón. Demasiado fosfato
puede causar problemas de salud, como es daño a los riñones y
osteoporosis. La disminución de fosfato también puede ocurrir. Estas
son causadas por uso extensivo de medicinas. Demasiado poco fosfato
puede causar problemas de salud.
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El Fósforo en su forma pura tiene un color blanco. El fósforo blanco

es la forma más peligrosa de fósforo que es conocida. Cuando el
fósforo blanco ocurre en la naturaleza este puede ser un peligro
serio para nuestra salud. El fósforo blanco es extremadamente
venenoso y en muchos casos la exposición a él será fatal. En la
mayoría de los casos la gente que muere por fósforo blanco ha sido
por tragar accidentalmente veneno de rata. Antes de que la gente
muera por exposición al fósforo blanco ellos a menudo experimentan
náuseas, convulciones en el estómago y desfallecimiento. El fósforo
blanco puede causar quemaduras en la piel, dañar el hígado, corazón y
riñones.
PRINCIPIO DEL METODO
Método directo para la determinación de fósforo inorgánico.

El fósforo inorgánico reacciona en medio de ácido como molibdato
amònico
Formando un complejo fosfomolibdico de color amarillo.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de
fósforo inorgánico presente de a muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLINICO
El fósforo, es esencial para la formación de tejido óseo y el
metabolismo energético celular. Aproximadamente un 85% se encentra en
el hueso y en los dientes.
Niveles bajos son atribuidos a las dieta, metástasis de huesos,
alteraciones en el hígado, alcoholismo, diarreas y comitos.
El diagnostico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los
datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS:
Molibdico Molibdico amònico

0,40mM
Ácido sulfúrico (SO4H2)
210 mM
PHOSPHORUS CAL Patrón primario acuoso de
Fósforo 5mg/dl
MATERIAL ADICIONAL
• Espectrofotómetro analizador para lectura a 340nm.

• Cubetas de 1,0 cm de paso de luz.
• Equipamiento habitual de laboratorio
MUESTRAS
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• Suero plasma
Libre de hemólisis. El suero o plasma debe separarse lo antes
posible de los eritrositos con el fin de evitar la liberación de
fósforo de los hematíes. Estabilidad: 7 días a 2-8 ºC.
• Orina
Recoger la orina en los recipientes 10 mL de ácido clorhídrico
(CIH) al 10% (v/v) para evitar la precipitación de fosfatos.
Ajustar pH 2 diluir la muestra 1/10 con agua destilada. Mezclar
multiplicar el resultado por 10 (factor de dilución).
Estabilidad:10 días a 28 ºC.
PROCEDIMIENTO
1.-Condiciones del ensayo:

Longitud de onda: ………………………………………….340nm
Cubeta: …………………………………………..1cm paso de luz
Temperatura……………………………………………37/30/25ºC
2.-Ajustar el espectrofotómetro a cero frente agua destilada.
3.-Pipetear en una cubeta:
Blanco Patrón Muestra

R(mL) 1,0 1,0 1,0
(Nola 2,3 )
Patrón - - - 10 - - -
(LLL)
Muestra (LLL) - - - - - - 10
4.-Mezclar e incubar 5 minutos.

5.-Leer absorbancia (A) del Patrón y la muestra, frete al Blanco del
reactivo.
CALCULOS
Suero: (A) Muestra X 5 (Conc. Patrón)= mg/dL de fósforo en la muestra

(A) Patrón
Orina 24 h: (A) Muestra X 5 vol.(dL)orina 24h= mg/24 h de fósforo

(A) Patrón
Factor de conversión: mg/dL X0.323= mmol/L st.371

p.347
CONTROLO DE CALIDAD.
Es conveniente analizar junto con las muestras sueros control

valorados:
SPINTROL H Normal y Patológico (Ref. 1002120 y 1002210).
Si los valores hallados se encuentran fuera del rango de la
tolerancia, revisar el instrumento, los reactivos y el calibrador.
18
Cada laboratorio debe disponer su propio Control de Calidad y

establecer correcciones en el caso de que los controles no cumplan
con las tolerancias.
VALORES DE REFERENCIA
Suero o plasma:
Niños 4,0-7,0 mg/dL= 1,29-2.26 mmol/L

Adultos 2,5-5,0 mg/dL= 0,80-1.61 mmol/L
Orina:
Adultos 0,4-1,3 g /24h
Estos valores son orientativos. Es recomendable que cada laboratorio

establezca sus propios valores d referencia.
RESULTADOS:
PACIENTE 1.
FOSFORO: 3.8 mg/dL
Se procede a realizar la técnica para posteriormente hacer la lectura de absorbancia del problema y
finalizar con los cálculos.
CONCLUSIONES:
He concluido que el fósforo intervienen en funciones vitales para los

seres vivos, por lo que está considerado como un elemento químico
esencial. El fósforo, por ejemplo, como molécula de Pi («fosfato
inorgánico»), forma parte de las moléculas de ADN y ARN, las células
lo utilizan para almacenar y transportar la energía mediante el
adenosín trifosfato. Además, la adición y eliminación de grupos
19
fosfato a las proteínas, fosforilación y desfosforilación,

respectivamente, es el mecanismo principal para regular la actividad
de proteínas intracelulares, y de ese modo el metabolismo de las
células eucariotas tales como los espermatozoides.
BIBLIOGRAFIA:
Enciclopedia médica en español. Fósforo en la dieta.

http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/002424.htm
PRACTICA # 4
DETERMINACIÓN DE SODIO Y CLORUROS EN SUERO

(TÉCNICA DEL IÓN SELECTIVO)
INTRODUCCION:
La medición de ion selectivo
20
La medición de ion selectivo es un método para la determinación de

las concentraciones de iones disueltos. Entre los ejemplos de
cationes y aniones que pueden medirse directamente en las soluciones
se encuentran los del potasio, sodio, flúor o cloruro. Mediante
procedimientos indirectos, por ejemplo la titulación, es posible
determinar los iones de aluminio, níquel o sulfato. La medición con
electrodos de ion selectivo es un procedimiento potenciométrico como
la medición de pH.
En este campo hay dos clases de medición:
1. Electrodo de ion selectivo separado y electrodo de referencia

2. Electrodos combinados de ion selectivo con electrodo de referencia
incorporado.
Dependiendo del tipo de ión que se desee medir, la membrana del

electrodo de referencia puede consistir en una sal difícilmente
soluble de ese ión (electrodo de estado sólido), en una membrana de
PVC modificada con un intercambiador iónico o un portador de iones
(electrodo de matriz), en una membrana de vidrio (electrodo de
vidrio) o en una membrana permeable a los gases (electrodo sensible a
los gases).
La actividad de los iones a ser medidos determina el potencial del

electrodo combinado. Al aumentar la actividad de los aniones la
tensión se vuelve más negativa y se hace más positiva con los
cationes. Un medidor de pH e iones calcula el valor de concentración
de la solución a partir de la señal del electrodo combinado.
Esto tiene múltiples aplicaciones: las concentraciones de fluoruro se

determinan según la norma DIN 38405, el contenido de cloruro en
asfalto o las concentraciones de nitrato en los zumos de verduras son
otros ejemplos de la aplicación de las técnicas de medición por el
método de ion selectivo.
REACTIVOS:
Al parecer los reactivos se encuentran incluidos en el

ionómetro.
No se necesita un reactivo adicional.
COLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA (SUERO):
7. El suero no hemolizado es la muestra recomendada.

8. No utilice otro anticoagulante que no sea heparina.
9. Se necesita por lo menos 3 ml. de suero para la muestra.
10. No se deben utilizar muestras viejas que contienen
precipitado.
21
MATERIALES REQUERIDOS:
5. Los instrumentos para la extracción del suero.
6. Tubos de ensayo/gradilla
CALIBRACION:
Utilice el estándar acuoso de calcio (10mg/dl) o un calibrador

apropiado.
CALCULOS:
ABS. DESCONOCIDO / ESTANDAR (CONC. DEL ESTANDAR) =__________
CONTROL DE CALIDAD:
La validez de la reacción debe ser monitoreada por el uso de suero

control normal y anormal. Con concentraciones de calcio conocidas. El
valor asignado a la reacción se debe confirmar con la aplicación
elegida. Si no se obtiene el rango de valores apropiado en la prueba,
puede ser indicador de deterioro del reactivo, falla en los
instrumentos o errores en el procedimiento.
VALORES ESPERADOS:
8.5 – 10.5 mg/dl
Niños menores de 12 usualmente tienen valores normales elevados que
disminuyen con la edad.
Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal.
OBSERVACIONES Y ESQUEMAS:
Se introduce una pequeña cantidad de plasma al ionometro para que

este por medio de una serie de mecanismos y electrodos específicos
realice la cuantificación de de sodio y cloro.
CONCLUSIONES:
22
He concluido que por medio de esta técnica se puede cuantificas con

mayor rapidez y precisión sodio y cloro en una muestra sanguínea, así
como también facilita la carga de trabajo en un laboratorio donde se
tengan que procesar varias muestras a la vez, ya que por métodos
colorimetricos requieren tiempos mas prolongados, que métodos de ion
especifico.
BIBLIOGRAFIA:
Ionometros. http://wtw.de/media/ES_L_05_ISE_024_029_I.pdf
PRACTICA # 5
ESTUDIO DE LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO
23
INTRODUCCION:
LÍQUIDO CEFALORRAQUÍDEO
El líquido cefalorraquídeo o cerebroespinal, conocido como LCR, es un

líquido que baña el cerebro y la médula espinal. Circula por los
ventrículos cerebrales y el canal medular y se almacena en las
cisternas cerebrales.
El líquido cefalorraquídeo puede enturbiarse por la presencia de

leucocitos o la presencia de pigmentos biliares. Numerosas
enfermedades alteran su composición y su estudio es importante y con
frecuencia determinante en las infecciones meníngeas, carcinomatosis
y hemorragias. También es útil en el estudio de las enfermedades
desmielinizantes del sistema nervioso central o periférico.
Función del LCR
El líquido cefalorraquídeo tiene tres funciones vitales importantes:
1. Mantener flotante el encéfalo, actuando como colchón o

amortiguador, dentro de la sólida bóveda craneal. Por lo tanto,
un golpe en la cabeza moviliza en forma simultánea todo el
encéfalo, lo que hace que ninguna porción de éste, sea
contorsionada momentáneamente por el golpe.
2. Servir de vehículo para transportar los nutrientes al cerebro y
eliminar los desechos.
3. Fluir entre el cráneo y la medula espinal para compensar los
cambios en el volumen de sangre intracraneal, manteniendo una
presion. (la cantidad de sangre dentro del cerebro).
24
Formación del LCR
El LCR es producido en un 70% en los plexos coroideos de los cuatro

ventrículos cerebrales, sobre todo los laterales y 30% del ependimo a
razón de 0.35ml/minuto o 500 cc/24 horas. El drenaje del líquido
cefalorraquídeo se lleva a cabo a través de las vellosidades
aracnoideas, proyección de las células de la aracnoides sobre los
senos vasculares que alberga la duramadre. Estos senos desembocarán
directamente en el torrente sanguíneo, en la región más anterior del
cerebro está el espacio subaracnoideo de los lóbulos olfatorios; que
se continúa con un espacio alrededor de los nervios olfatorios (por
lo tanto, queda muy cerca de la mucosa olfatoria y el espácio aéreo
de la nariz); desde esta region pasa a nódulos linfáticos.
Circulación del LCR
La circulación del líquido cefalorraquídeo comienza en los

ventrículos laterales, continúa hacia el tercer ventrículo y luego
transcurre por el acueducto cerebral hasta el cuarto ventrículo.
Desde allí fluye, a través de un conjunto de orificios (uno central y
dos laterales), al espacio subaracnoideo, que cubre el sistema
nervioso central. Por último, el líquido se incorpora al torrente
sanguíneo.
Todas las superficies ependimarias de los ventrículos y las membranas

aracnoideas secretan cantidades adicionales de líquido y una pequeña
cantidad proviene del propio encéfalo, a través de los espacios
perivasculares que rodean los vasos sanguíneos que ingresan en el
encéfalo. El líquido secretado en los ventrículos laterales y en el
tercer ventrículo se dirige a lo largo del acueducto de Silvio hasta
el cuarto ventrículo, donde se agrega otra pequeña cantidad de
líquido. Luego abandona el cuarto ventrículo a través de tres
25
pequeñas aberturas laterales, dos agujeros de Luschka laterales y el

agujero de Magendie en línea media, que ingresan en la cisterna
magna, un gran depósito de líquido ubicado por detrás del bulbo
raquídeo y por debajo del cerebelo.
La cisterna magna se continúa con el espacio subaracnoideo que rodea

todo el encéfalo y la médula espinal. Luego, casi todo el líquido
encefalorraquídeo fluye a través de este espacio hacia el cerebro.
Desde los espacios subaracnoideos cerebrales, el líquido fluye en las
múltiples vellosidades aracnoideas que se proyectan en el gran seno
venoso sagital y otros senos venosos. Por último, se vacía la sangre
venosa a través de las superficies de las vellosidades.
Obtención de LCR
Se puede obtener, por punción lumbar, por punción cisternal, o por

punción ventricular. La obtención de este líquido es importante
debido a que es un importante elemento de diagnóstico de enfermedades
neurológicas, como ser síndromes meníngeos, hemorragias
subaracnoideas, tumores cerebro-espinales, etc. Para la punción
lumbar se utiliza una aguja de aproximadamente 10 cm. con mandril. El
paciente puede estar sentado o acostado. La punción se la realiza
entre la cuarta y la quinta vertebras lumbares, y tan solo se espera
a que comience a gotear este líquido. Además, mientras el paciente se
encuentra punzado, es posible medir la presión de este líquido con la
utilización de un manómetro. Para la punción cisternal, lo único que
debe cambiarse es la posición del paciente, el cual sí o sí debe
estar sentado, y además con hiperflexión cervical, ya que la aguja se
introduce en el espacio accipito-atloideo.
26
Razones por las que se realiza el examen
Este examen se hace para medir las presiones en el líquido

cefalorraquídeo y para recoger una muestra de éste con el fin de
realizar pruebas adicionales. El LCR se puede utilizar para
diagnosticar ciertos trastornos neurológicos, particularmente
infecciones (como meningitis) y daño cerebral o daño a la médula
espinal.
Valores normales
Los valores normales varían de un laboratorio a otro, pero

típicamente fluctúan de la siguiente manera:
• Presión de 50 a 180 mm H20

• Apariencia: transparente, sin color
• Proteína total en LCR: 15 a 45 mg/100 mL
• Gamma globulina: 3 a 12% de la proteína total
• Glucosa en LCR: 50 a 80 mg/100 mL (o aproximadamente 2/3 del
nivel de azúcar en la sangre)
• Conteo de células del LCR: 0 a 5 Glóbulos Blanco, ausencia de
Glóbulos Rojos.
• Cloruro: 110 a 125 mEq por litro
Nota: mg/mL = miligramos por mililitro; mEq/L = miliequivalente por

litro
Significado de los resultados anormales
Si el LCR luce turbio, eso podría significar que hay una infección o
una acumulación de glóbulos blancos o proteína.
27
Si el LCR luce sanguinolento o rojo, puede ser un signo de sangrado u

obstrucción de la médula espinal. Si es marrón, naranja o amarillo,
puede ser un signo de aumento de la proteína en el LCR o un sangrado
previo (hace más de 3 días).
El aumento de la presión en el LCR puede deberse al aumento de la

presión intracraneal (presión en el cráneo); mientras que la
disminución en la presión del LCR puede deberse a un tumor de médula
espinal, shock, desmayo o coma diabético.
El aumento de la proteína puede deberse a sangre en LCR, diabetes,

polineuritis, tumores, lesión y cualquier afección inflamatoria o
infecciosa; mientras que la disminución de la proteína es un signo de
producción de LCR rápida.
El aumento de los niveles de gamma globulina pueden deberse a

enfermedades tales como esclerosis múltiple, neurosífilis o síndrome
de Guillain-Barré.
El aumento de la glucosa es un signo de azúcar elevado en la sangre;

mientras que la disminución de la glucosa puede deberse a:
hipoglicemia (azúcar bajo en la sangre), infección bacteriana o
micótica (como meningitis), tuberculosis o ciertos tipos de
meningitis.
El aumento de los glóbulos blancos en el LCR puede ser un signo de

meningitis, infección aguda, inicio de una enfermedad crónica, tumor,
absceso, accidente cerebrovascular, enfermedad desmielinizante (como
la esclerosis múltiple).
La presencia de glóbulos rojos en la muestra de LCR puede ser un signo de sangrado en

dicho líquido o el resultado de una punción lumbar traumática.
METODOLOGÍA:
CARACTERÍSTICAS FÍSICAS
Volumen:
Aspecto: Valores de Referencia: Transparente.
ANORMALIDADES TURBIDEZ:
Cuando menos 200
leucocitos/µl causan
turbidez ligera.
Presencia de
Microorganismos.
Medios de contraste.
28
Grasa epidural.
Color: Valores de Referencia: Incoloro
ANORMALIDADES Blanco ó Turbio:

Cuenta alta de
Leucocitos.
Aumento en los Valores
de Referencia de
Proteínas.
Xantrocrómico:
Incremento en
eritrocitos y presencia
de xantocromía que se
deben con mayor
presencia a hemorragia
Subaracnoidea.
Presencia de
Bilirrubina.
Presencia de
Carotenoides.
Lactantes Prematuros.
Obscuros:
Melanosarcoma meníngeo.
Aumento de Proteínas.
Inmadurez
hematoencefálica.
PH: Valores de Referencia: 7.32 - 7.35
ANORMALIDADES Cambios en el pH
sanguíneo.
Acidosis en Meningitis
purulentas.
Hemorragias
subaracnidea
postcirugías
cerebrales.
Red de Fibrina: Valores de Referencia: Negativo.
ANORMALIDADES Aumento de Proteína del

LCR (100 mg%).
Muestras refrigeradas.
Concentraciones de
29
fibrinógeno causado por

punciones traumáticas.
Ciertos tipos de
Meningitis ó
Neurosífilis.
CARACTERÍSTICAS QUÍMICAS.
PROTEÍNAS TOTALES: Valores de Referencia: 15 – 45 ml/dl.
Metodología:
1. Medir 0.5 ml. de LCR, añadir 1.5 ml. de Ac. Sulfosalicílico al
3%. Mezclar y pbservar la turbidez, dependiendo del grado de
turbidez hacer las diluciones requeridas (1:2, 1:4, a 10, 25, 50
o hasta 100 según sea necesario.
2. Medir:
PROBLEMA (ml) BLANCO (ml)

LCR 2.0
Solucióon Salia 2.0
Ácido 6.0 6.0
Sulfosalicílico
3. Mezclar y dejar reposar por 10 minutos.

4. Efectuar las lecturas contra su blanco a 440 nm (%T).
5. Si se realizó dilución el resultado se multiplica por ella.
Aumenta en: Disminuye en:

Normalmente en el neonato Pérdida de LCR por escape
y en el adulto de edad como el desgarre por
avanzada. traumatismos, rinorrea,
Presencia de sangre. otorrea, en algunos
Aumento en la incrementos de la filtración
permeabilidad de la a través de la aracnoides.
barrera hematocefálica: Hipertiroidismo.
infecciones bacterianas, Mecanismo desconocido.
micóticas, TB, meningitis,
Hemorragia intracraneal.
Obstrucción de la
circulación del LCR como
en casos de tumor.
Aumento e la síntesis de
IgG, enfermedades del
colágeno, esclerosis
múltiple.
30
GLUCOSA: Valores de Referencia: 50-75 mg/dl.
Metodología:
Seguir la técnica anexa en el reactivo que se utiliza en
el laboratorio.

Algunos casos de El 50% de los casos con
Meningitis aséptica ó Meningitis bacteriana.
viral. El 25% de los pacientes
Aumento falso con con Meningoencefalitis
hiperglucemia sérica variable en meningitis.
Disminución variable en
meningitis (TB, hongos,
virus).
Hemorragia subaracnoidea.
Algunos casis de
neurosífilis.
Disminución falsa
secundaria a
hipoglucemia.
CLORUROS: Valores de Referencia: 118-128 mEq/l.
Metodología:
el laboratorio.

Aumento en la retención Neumonías neumocococicas.
renal de Cloruros. Estenosis pilórica y
Nefritis con insuficiencia duodenal.
renal e hipercloremia. Meningitis tuberculosa.
Deshidrataciones sin Su ascenso a la normalidad
pérdida de electrolitos. puede significar mejoría.
Neurosífilis.
DESHIDROGENASA LÁCTICA (DHL): Valores de Referencia: 1-25 U:I/37°C.
Útil para identificar enfermedades del SNC
Metodología:
el laboratorio.
31

Padecimientos en los que De poca importancia
disminuye el flujo clínica.
sanguíneo cerebral,
disminución de la
oxigenación del encéfalo,
convulsiones, alcalosis
respiratoria, hemorragia
intracraneal,
hidrocefalia, esclerosis
múltiple, meningitis
bacteriana.
PRUEBAS INMUNOLÓGICAS.
Determinación de VDRL: Valores de Referencia: Negativo
RECUENTO CELULAR.
Valores de Referencia:
Células 0-5/µl
Linfocitos 100%
Neutrófilos 0%
Células Ocasionales
Endoteliales
Macrófagos 0%
Eosinófilos 0%
Eritrocitos Muy escasos
Metodología:
En una pipeta de Thoma se aspira líquido de Türk hasta la marca

y se lleva a la marca 1.1 con LCR. Agitar bien, desechar las primeras
gotas y llenar la Cámara de Neubauer, dejar reposar pro 2 minutos.
Efectuar el conteo en los 9 cuadros.
Número de Leucocitos/mm3 = conteo en los 9 cuadros dividido

entre 9 y multiplicado por 10.
Para Líquidos con alto conteo Llenar la pipeta hasta 0.5 con LCR
y hasta 11 con liq. De Türk. Contar los cuatro cuadros de los
extremos
Calculo: el No. de eritrocitos contados se multiplica por 50.
32
De 10-200 células, Meningitis viral.

principalmente linfocitos. Neurosífilis tardía.
Escerosis múltiple.
Tumores.
Trobosis cerebral.
De 200-500 células, Meningitis tuberculosa.
linfocitos o granulocitos. Coriomeningitis.
Infecciones en el SNC.
Sífilis meningovascular.
Más de 500 células, Meningitis bacteriana
principalmente granulocitos. aguda.
Presencia de Células Leucemia meníngea

inmaduras Meningitis carcinomatosa.
EXAMEN MICROSCÓPICO.
TINCION DE GRAM:
TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN: Valores de Referencia: Negativo
PREPARACIÓN CON TINTA CHINA:
Metodología:
Colocar en un tubo de ensayo de 2-4 ml. de LCR, centrifugar a
1500 rpm durante 15 minutos, decantar y hacer preparación con tinta
china y extensiones en laminillas, dejar secar al aire y al calor.
Para la preparación se coloca una pequeña cantidad de sedimento
en un portaobjeto, se mezcla cuidadosamente con una gota de tinta
china, se coloca un cubreobjetos y se observa al microscopio con
objetivo seco débil y fuerte.
En las extensiones de laminillas realizar tinciones de Gram y
Ziehl Neelsen.
RESULTADOS:
Nombre del paciente: Hijo de Gabriela Zavaleta
CARACTERÍSTICAS FÍSICAS
Volumen: aproximadamente 2 ml.

Aspecto: Incoloro transparente.
Color: Incoloro.
CARACTERÍSTICAS QUIMICAS
Glucosa: 64 mg/dl
33
Deshidrogenasa Láctica: 30.384 ml/dl
Se procede a ejecutar el procedimiento como lo indica la técnica para glucosa y deshidrogensa láctica
para posteriormente realizar la lectura de absorbancia en el espectrofotómetro y por ultimo se realizan
los cálculos pertinentes para obtener los resultados requeridos.
CONCLUSIÓN:
He concluido que es de suma importancia el análisis de líquidos

corporales, es por ello que su análisis se debe realizar como lo
indica la técnica, para obtener resultados precisos que le faciliten
al medico el diagnostico oportuno en un tiempo corto.
BIBLIOGRAFIA:
Nathan, BR. Cerebrospinal Fluid and Intracranial Pressure. In: Goetz,

CG, ed. Textbook of Clinical Neurology, 2nd ed. Philadelphia, Pa:WB
Saunders Company; 2003:511-524.
34
DETERMINACIONES HORMONALES
Los análisis básicos para detectar compuestos químicos en materiales biológicos son tres:
biológicos, fisicoquímicos y de unión. Los análisis o técnicas de unión se han definido como
aquellos que utilizan moléculas que se enlazan específica y reversiblemente a las sustancias
que interesen detectar o cuantificar. Estas técnicas se utilizan frecuentemente para
cuantificar moléculas que están presentes en fluidos biológicos, en concentración de
nanogramos por mililitro (10-9 g/mL) o de picogramos por mililitro (10-12 g/mL).
En la actualidad, mediante las técnicas de unión se realizan cotidianamente la detección de

hormonas que se encuentran en cantidades muy pequeñas en fluidos biológicos. Son varias
las técnicas de unión, algunas de éstas son: los inmunoanálisis, el ensayo de enlace
competitivo con proteína transportadora y el ensayo de unión con receptor. La técnica que
frecuentemente se ha utilizado es el radioinmunoanálisis.
Los inmunoensayos (IE).

Un IE se define como una técnica analítica que usa anticuerpos (Ac), para la determinación
selectiva de compuestos presentes en muestras biológicas. Las principales ventajas de los IE
consisten en que son altamente selectivos, tienen bajos límites de detección. Por su alta
selectividad los IE pueden ser usados en muestras complejas, como orina o sangre, con
poca o ninguna preparación de la muestra. Estos métodos son, también, relativamente
económicos y una vez puestos a punto fáciles de realizar. Todas estas características hacen
que los IE sean los métodos de elección para múltiples aplicaciones endocrinológicas
PRINCIPIO Y CLASIFICACIÓN
El principio de todas estas pruebas consiste en la combinación de proteínas de alta

sensibilidad y especificidad (Ac) con los ligandos (antígenos [Ag]) a dosar.
Los IE se pueden clasificar de acuerdo a:

35
1.- El tipo de marca (sustancia que se incorpora a una molécula a fin de poder identificarla)
en:
• Radioinmunomarcados: los dos más frecuentemente usados son el

radioinmunoensayo (RIE) de competición y los ensayos inmunoradiométricos (IRMA)
que utilizan isópotos radioactivos.
• Enzimáticos: en este caso la marca es una enzima. Ejemplos de estos ensayos son
el enzimoinmunoensayo de competición (EIA), el ensayo inmunoabsorbido a enzimas
o enzyme linked immunosobent assay (ELISA), el inmunotest-enzimomonitoreado
(EMIT) y los test inmunoenzimométricos (IEMA)
• De fluorescencia: basados en marcas fluorescentes, por ejemplo el
fluoroinmunoensayo (FIA) y el inmunofluorométrico (IFMA).
2.- La concentración de sus reactivos en:
• IE de competición: en los cuales los Ac son usados en una concentración limitada

con un antígeno (Ag) marcado.
• Inmunométricos: en los cuales los Ac están marcados y en exceso.
El radioinmunoanálisis (RIA)
El RIA, como un ejemplo de los ensayos de unión, también se le ha denominado ensayo de
saturación, análisis de desplazamiento, análisis de enlace insaturado, análisis de fracción no
enlazada, radioensayo de dilución, análisis competitivo, radioensayo de enlace competitivo y
ensayo inmunoradiométrico.
Todos los ensayos de unión, se caracterizan por estar constituidos por tres componentes
básicos, la molécula enlazadora (ligador o unidor), la molécula que se desea enlazar (analito
o ligando) y otro ligando marcado (trazador).
La molécula ligadora debe ser capaz de unirse únicamente con aquella que interesa medir.
Es decir debe ser específica. Además la unión tiene que ser suficientemente estable,
propiedad que se le denomina afinidad. Esto permite al unidor enlazarse con un tipo de
molécula a pesar de existir varias moléculas estereoquímicamente semejantes.
CINETICA DEL INMUNOANALISIS.

Se tomará como modelo de la cinética de los ensayos de unión al RIA que utiliza anticuerpos
que se comportan como si presentaran un sitio de unión. El análisis consiste en colocar
conjuntamente el anticuerpo (Ac), el antígeno (Ag) y trazador (Ag*) en tubos de ensayo bajo
condiciones fisicoquímicas controladas, como son: temperatura, volumen, acidez y
concentración, para que el Ac se una con el Ag y con el Ag*. Se forma así el complejo de
unión Ag:Ac, como se muestra a continuación:
36
Ag + 2 Ac + Ag* < > Ag:Ac + Ag*:Ac
Formado el complejo, se procede a mantener constantes la cantidad de Ac y Ag*, pero

variará la cantidad de Ag
REACTIVOS
Se necesitan 3 reactivos específicos para realizar un IE. Para el caso del RIE es un Ag
marcado, el Ag en concentración conocida (estándar de referencia) y un Ac específico capaz
de reaccionar contra dicho Ag. También es necesario tener un método de separación entre la
fracción unida al Ac y el Ag libre marcado.
MÉTODOS DE SEPARACIÓN DE LA FRACCIÓN LIBRE DE LA UNIDA
El clásico método inmunológico para separar la fracción unida al Ac del Ag libre consistía en
la precipitación espontánea de los complejos Ag-Ac. No obstante, con el uso generalizado de
los RIE de alta sensibilidad se requiere que la concentración molar de los reactivos sea tan
baja que la precipitación espontánea no se produce y los complejos Ag-Ac permanecen
solubles.
Se han usado una amplia variedad de métodos para la separación: precipitación de complejo
Ac-Ag con un segundo Ac dirigido contra el complejo (Método del doble Ac) o bien con
proteína A (compuesto en suspensión que se une a la porción Fc de las inmunoglobulinas),
uso de solventes orgánicos o la precipitación salina para precipitar los complejos, adsorción
de complejos al material de fase sólida y adsorción del Ag libre a material de fase sólida tal
como celulosa, carbón activado, silicatos, o resinas de intercambio.
El método del doble Ac es el de elección en el desarrollo de nuevos procedimientos del RIE.

No obstante, el costo del segundo Ac puede convertirlo en excesivamente caro cuando miles
de muestras deben a ser analizadas. El método acuoso de polietilenglicol para la
precipitación de los complejos puede ser usado luego de que un ensayo haya sido validado
con la metodología del doble Ac.
La adsorción o la formación de complejos Ac-Ag en una fase sólida es un método

generalmente aplicado en los kits comerciales ya que brinda una alta sensibilidad, precisión y
reproducibilidad; no obstante, presenta la limitación de su costo.
ENSAYOS INMUNORADIOMÉTRICOS
Como alternativa para los ensayos de saturación de equilibrio donde se produce una
competición entre el ligando marcado y el no marcado por un limitado número de sitios de
unión, quedando algo del ligando “desconocido” sin reaccionar (no unido), existe otra técnica
en la cual todo el Ag desconocido reacciona con un exceso de Ac marcado.
37
Esta última técnica se llama inmunométrica. En teoría como todo el Ag desconocido ha

formado complejos con el Ac marcado, el Ag es directamente detectable con este método,
por eso se obtiene mayor sensibilidad que con los métodos convencionales de equilibrio.
INMUNOENSAYOS ENZIMÁTICOS
Probablemente el desarrollo más significativo en IE en los últimos años ha sido la sustitución

de los radioisótopos por enzimas. En diferentes variaciones de esta técnica tanto el Ag, el Ac
primario, o incluso el segundo Ac pueden ser marcados enzimáticamente. En los
enzimoinmunoensayos (EIE) homogéneos, no es necesaria una separación física de la
fracción unida de la libre. También el Ag marcado con la enzima y el Ag no marcado (analito)
compiten por un número limitado de sitios de unión al Ac. El marcador enzimático puede
estar inactivo o contrariamente tornarse activo cuando se une al Ac. El cambio en la actividad
enzimática, evidenciado por la adición de un sustrato cromogénico y expresado en
variaciones de absorbancia a una determinada longitud de onda (Ä Abs), es función del
marcador enzimático unido.
Una segunda categoría de los EIE esta representada por el ELISA, donde los
inmunoreactantes están inmovilizados en soportes de fase sólida y tanto el Ag, el Ac
primario, el segundo Ac pueden estar marcados con la enzima. Los EIE tienen la ventaja de
poder ser realizados en forma inmediata en un laboratorio convencional químico, ya que no
requieren personal especialmente entrenado, precauciones del manejo de radioactivos ni
equipos caros de detección. No obstante, los EIE no tienen la misma aplicabilidad para medir
moléculas grandes como la de las hormonas polipeptídicas. Uno de los principales
problemas potenciales el impedimento estérico en los sitios de unión a la enzima cuando
moléculas grandes se unen a las enzimas. La sensibilidad de los EIE puede no ser suficiente
para medir concentraciones extremadamente bajas en las cuales algunas hormonas
polipeptídicas circulan; además la medición de la actividad enzimática está sujeta a factores
medioambientales (pH, temperatura, etc.) en adición a la interferencia de estos a la reacción
Ag-Ac.
38
FLUOROINMUNOENSAYO
El fluoroinmunoensayo (FIA) emplea los mismos principios comunes descriptos, usando un
marcador fluorescente sobre la molécula marcadora (Ag, Ac, o segundo Ac). Los ensayos
pueden ser competitivos o no y después de la separación de la fracción unida de la libre la
cuantificación se realiza con técnicas fluorométricas. Se incluyen también en esta categoría
los ensayos inmunofluorométricos (IFMA) y los IE basados en la polarización fluorescente.
BIBLIOGRAFIA:
Iovine, E; Selva, A.A. El Laboratorio en la Clínica. 3ra. Ed. Médica Panamericana, Buenos
Aires 1985
39

Manual Completo de Practicas de Laboratorio

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• DETERMINACION DE CALCIO TOTAL

• DETERMINACIÒN CUANTITATIVA DE FÒSFORO

• DETERMINACIÓN DE SODIO Y CLORUROS EN SUERO (TÉCNICA DEL

• ESTUDIO DE LÍQUIDO CEFALORAQUÍDEO

Las determinaciones de magnesio son clínicamente importantes. El

El método de elección para la determinación de magnesio es la

El Magnesio es el quinto mineral para su abundancia en el organismo y

La deficiencia se ve en alcohólicos, pacientes afectos de cirrosis

Los síntomas son:

El exceso de Magnesio es extremadamente raro.

- Estructural, en huesos y dientes.

Cereales integrales, frutas secas, lácteos, chocolate, verduras de

* Se recomienda el uso de micropipetas con constricción, a los fines

* No deben utilizarse anticoagulantes que complejen o

La orina de 24 horas podrie contener sedimentos que absorben

Diluir la orina 1+4 con agua bidestilada y multiplicar el resultado

3.- Patron Magnesio

PREPARACION DE LAS SOLUCIONES:

1.- REACTIVO DE COLOR

Pipetear en las cubetas:

Reactivo Patron Muestra

Mezclar, incubar durante 3 min a temperatura ambiente, leer la

Concluyo que el magnesio es el cuarto catión más abundante en el

Nutrar prevención y salud plena. Minerales. Magnesio.

DETERMINACION DE CALCIO TOTAL

Más del 99 % del calcio corporal existe en los huesos y en la

1. 45% unido a proteínas

La ionizada es la fracción fisiológicamente activa y la mas

Son muchos de los factores que influyen al nivel del calcio:

La hipocalcemia (bajos niveles de calcio) se encuentra en

También parece haber una relación reciproca entre el calcio y el

Los primeros procedimientos para la determinación de calcio en suero

de calcio han sido determinados con espectrofotometría de absorción

Este macromineral es el mineral con mayor presencia en el organismo y

Tanto su carencia como su exceso son perjudiciales para la salud, ya

Los alimentos con mayor contenido de calcio son los productos

El calcio está vinculado a la presencia de fósforo. La falta o exceso

Una de las grandes ventajas que presenta el calcio refiere a su

• Provee rigidez y fortaleza a huesos, dientes y encías.

• Previene los calambres en la musculatura corporal, debido a que

• dolores en las articulaciones

Algunas enfermedades también determinan la falta de calcio en el

• Factores que favorecen la absorción:

o Vitamina D: la forma activa de la vitamina D es

consumo moderado de cafeína (1 taza de café o 2 tazas de te

PRINCIPIO: MEDIO ALCALINO

Cálcio- cresolftaleina complexona (color púrpura)

El calcio reacciona con cpc en un medio alcalino para tomar un color

1. reactivo colorimetrico: o- cresoftalema complexona 0.14mm, 8 –

PREPARACION DEL REACTIVO:

ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO:

COLECCION Y ALMACENAMIENTO DE LA MUESTRA:

1. preparar el reactivo. ver preparacion del reactivo.

NOTAS DEL PROCEDIMIENTO:

Abs. desconocido / estandar ( conc. del estandar) =_______

puede ser indicador de deterioro del reactivo, falla en los

CALCIO TOTAL: 8 mg/dl

Efectos del Fósforo sobre la salud

Los fosfatos son substancias importantes en el cuerpo de los humanos

El Fósforo en su forma pura tiene un color blanco. El fósforo blanco

PRINCIPIO DEL METODO