PRÁCTICA N° 7

DETERMINACION ENZIMATICA DE ACIDO URICO EN SUERO, PLASMA Y

OTROS FLUIDOS BIOLOGICOS (VALTEK)
1. OBJETIVOS

 Determinar las concentraciones de Ácido Úrico en Suero o Plasma.

 Interpretar las diferentes alteraciones que pueden presentarse en el Dosaje del
Ácido úrico.

2. FUNDAMENTO

El Acido Urico es el producto final de la degradación de las Purinas – Adenina,

Guanina e hipoxantina - procedentes del catabolismo de los Acidos Nucleicos (DNA
y RNA), por acción de las enzimas Xantinaoxidasa.

En el Organismo existen alrededor de 1200 mg de Acido Urico, de los cuales son

eliminados diariamente unos 700 mg. El 60% lo hace a través de la Orina, mediante
Filtrado Glomerular. Posteriormente es reabsorbido en los Túbulos Renales del 90 %
del total. El resto es eliminado con la Bilis -Vía Hepática - y los Jugos Pancreáticos y
Gástricos.

El Acido Urico es Oxidado por la enzima específica Uricasa generándose alantoina y

H2O2, el cual en una reacción mediada por la enzima PAD, reacciona con el Ac. 3-5
Dicloro-2-Hidroxi-Bencensulfonico y 4–AAP produciéndose un compuesto
coloreado con un máximo de absorción a 520 nm, en cantidad proporcional a la
cantidad de Acido Urico presente en la muestra.
Á𝑐𝑖𝑑𝑜 ú𝑟𝑖𝑐𝑜 + 𝑈𝑂𝐷  𝐴𝑙𝑎𝑛𝑡𝑜𝑖𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂2

𝐻2𝑂2 + 𝐷𝐻𝐵𝑆 + 4 − 𝐴𝐴𝑃 + 𝑃𝐴𝐷  𝐻2𝑂 + 𝐶𝑜𝑚𝑝𝑢𝑒𝑠𝑡𝑜 𝐶𝑜𝑙𝑜𝑟𝑒𝑎𝑑𝑜

3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.1. DETERMINACIÓN DE ACIDO URICO

a. Reactivos: El reactivo se provee listo para su uso

 COMPOSICIÓN:
Buffer Pipes PH 7.5 50 mM
Uricasa > 100 U/L
Peroxidasa > 1000
U/L
Ascorbato Oxidasa > 200 U/L
4 Aminoantipirina 0.5 mM
1.5 DMBS 1 mM
Ferrocianuro 10 mg/L
Acido Sódico 0.1 gldl
Agentes Tensioactivos C.S.
SOLUCIÓN STANDARD
Ácido Úrico en solución estabilizada 10 mg/dL

b. Equipos

 Espectrofotómetro o fotocolorímetro de filtros capaz de leer absorbencias

a 520 nm. (Rango 505 a 550 nm).
 Pipetas
 Baño termorregulador

c. Muestra

 SUERO, PLASMA U ORINA DILUIDA

En el caso de Orina, precalentar la muestra a 60°C para disolver los

posibles uratos precipitados y diluir 1:10 con Agua Destilada. El resultado
en este caso, se multiplica por 10.

d. Procedimiento

Mezclar 1 ml de Reactivo Salicilato + 1 gota (50ul) de suspensión de Ureasa.

Preparar el volumen de reactivo necesario manteniendo la proporción (por
ejemplo 30 ml Reactivo Salicilato + 30 gotas “1.5ml” de suspensión Ureasa).

Blanco Estándar Muestra

Muestra (mL) -- -- 0.025
Estándar (mL) -- 0.025 --
Reactivo de trab. 1.00 1.00 1.00
(mL)

Mezclar e incubar 5 minutos a 37° C a temperatura ambiente (> 20° C).

Leer las absorbancias llevando a cero el Espectrofotómetro con el Blanco de
Reactivo.

e. Cálculos

10
𝐹𝐴𝐶𝑇𝑂𝑅 =
𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑠𝑡𝑎𝑛𝑑𝑎𝑟𝑑

𝐴𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑈𝑟𝑖𝑐𝑜 (𝑚𝑔/ 𝑑𝐿) = 𝐹𝐴𝐶𝑇𝑂𝑅 𝑋 𝐴𝐵𝑆𝑂𝑅𝐵𝐴𝑁𝐶𝐼𝐴 𝑀𝑈𝐸𝑆𝑇𝑅𝐴

f. Rango de referencia

 Suero o Plasma
 Hombres: 3.4 a 7.0 mg/dl
  Mujeres: 2.4 a 5.7 mg/dl

 Orina
 Normal: 250 – 750 mg/24h.
 Libre de purinas: < 420 mg/24h.
 Pobre de purinas: < 480 mg/24h.
 Rica en purinas: < 1500 mg/24h.
4. RESULTADOS
4.1. DETERMINACIÓN DE ÁCIDO ÚRICO
Tubo Abs. Concent. Ác.
urico
Calibrador 0.163
Muestra 0.185 6.8

Cálculos
6
𝐹𝐴𝐶𝑇𝑂𝑅 = = 36.8
0.163

Á𝑐𝑖𝑑𝑜 𝑈𝑟𝑖𝑐𝑜 (𝑚𝑔/ 𝑑𝐿) = 0.185 𝑋 36.8 = 6.8

5. CONCLUSIONES

 Los niveles normales de ácido úrico en Suero o Plasma son de 3.4 a 7.0 mg/dl, en
el caso de hombres y 2.4 a 5.7 mg/dl, El valor determinado en mujeres fue de 6.8
mg/dl.en tanto los valores indicados nos muestra que el buen funcionamiento a
nivel del riñon en caso de los varonos en las ddamas fue lo contrario.
 CUESTIONARIO Nº 7
1. Definir ácido úrico.
El ácido úrico es un químico que se crea cuando el cuerpo descompone sustancias
llamadas purinas. Las purinas se producen normalmente en el cuerpo y también se
encuentran en algunos alimentos y bebidas. Está formado por carbono, nitrógeno, oxígeno
e hidrógeno que se forma cuando el metabolismo desintegra las purinas, unas sustancias
que se encuentran en algunos alimentos y bebidas como el hígado, las anchoas, las judías,
la caballa o la cerveza, entre otros.
2. Mencionar la concentración de ácido úrico en el plasma, la cantidad filtrada en el
glomérulo, lo reabsorbido y excretado.
 En la porción recta del TCP vuelve a reabsorberse un 80% del secreteado.
 El ácido úrico excretado es aproximadamente, el 10 % de la cantidad de urato
filtrado.
 El urato filtrado es reabsorbido en el TCP en un 99-100%, con un remanente
en el lumen tubular de 0-2% del urato filtrado.
 La fase de secreción tubular activa de alrededor del 50% de la cantidad del
urato inicial filtrado.
3. Describir el filtrado glomerular y la reabsorción del ácido úrico.

El filtrado absorbido en el glomérulo fluye por el túbulo renal, donde los nutrientes y el
agua se reabsorben por los capilares. Al mismo tiempo, iones residuales e iones de
hidrógeno pasan de los capilares al túbulo renal. Ese proceso se llama secreción. Los
iones secretados se combinan con el resto del filtrado y se transforman en orina. La orina
sale del túbulo de la nefrona a un conducto colector. La orina sale de los riñones por la
pelvis renal, pasa a los uréteres y luego a la vejiga.
4. Definir uricosuria, uricemia.
 La uricosuria es el aumento del ácido úrico en la orina.
 Uricemia, es una alto nivel de ácido úrico en la sangre.

5. Menciona las causas de la hiperuricemia metabólica.

Hiperuricemia primaria
 Aumento en la producción de ácido úrico por la degradación de purinas.
  Los niveles aumentan porque los riñones no pueden eliminar eficientemente ácido
úrico de la sangre.
Hiperuricemia secundaria
 Muerte celular por ciertos cánceres o agentes quimioterapéuticos
 Después de la quimioterapia.
 Enfermedad renal.
 Medicamentos: pueden causar niveles altos de ácido úrico en la sangre
 Condiciones endocrinológicas o metabólicas: ciertas formas de diabetes o
acidosis pueden causar hiperuricemia
6. ¿Cuáles son las causas de hiperuricemia renal?
 Insuficiencia renal.
 Consumo de diuréticos.
 Hipertensión
7. Menciones las consecuencias de padecer hiperuricemia renal.
 Problemas renales o artritis gotosa.
 Problemas renales, formación de cálculos renales.
 Problemas al orinar.
8. Causas de hipouricemia
Síndrome de Fanconi, es un trastorno de los túbulos renales en el cual ciertas sustancias
normalmente absorbidas en el torrente sanguíneo por los riñones son liberadas en su lugar
en la orina.
Enfermedad de Wilson.
9. Definir la enfermedad de Wilson
La enfermedad de Wilson es un trastorno hereditario poco frecuente que hace que el
organismo no pueda deshacerse del cobre adicional. El cuerpo necesita un poco de cobre
para mantenerse sano pero tener demasiado puede ser tóxico. Normalmente, el hígado
libera el cobre que no necesita en la bilis, un líquido digestivo
10. Definir la gota
La gota es un tipo de artritis. Ocurre cuando el ácido úrico se acumula en la sangre y
causa inflamación en las articulaciones. La gota aguda es una afección dolorosa que
normalmente afecta solo una articulación. La gota crónica se refiere a episodios
repetitivos de dolor e inflamación.