“Año del Fortalecimiento de la Soberanía Nacional”

UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE QUÍMICA

CURSO: BIOQUÍMICA PESQUERA – LABORATORIO

Informe N° 8: “Determinación Espectrofotometría de Glucosa en Sangre”

  Grupo N° 5:

Apellidos y nombres de integrantes  Código

Huamani Quispe, Elizabeth 20200500
Lara Aguirre Anthony D’angelo 20191465
Marcelo Contreras, Luz Esmeralda 20191468
Rojas Galindo, Sandra Shirley 20191479
Sánchez Damián, Elicielo Mía 20191481

Facultad y especialidad: Pesquería - Pesquería

Horario de práctica (día y hora): Jueves 2 p.m - 4 p.m
Apellidos y nombres del profesor de laboratorio: Espinoza Córdova, Gaby
Fecha del laboratorio: 01/12/2022
Fecha de entrega del reporte: 08/12/2022

LA MOLINA - LIMA – PERÚ

2022
1. INTRODUCCIÓN:

La función de la determinación de la glucosa es muy importante ya que nos ayudará a poder

dar un diagnóstico correcto y así descartar algún trastorno metabólico como lo es la diabetes
mellitus cuales son los niveles de glucosa en estos casos.
La glucosa es una hexoaldosa, ya que posee seis carbonos y el grupo funcional aldehído en el
extremo anomérico de la molécula.
Este monosacárido es la principal fuente de energía para el metabolismo celular de los
animales, el cual ingresa a nuestros organismos mediante la alimentación y se almacena
principalmente en el hígado, que se encarga de la regulación de los niveles de glucosa en la
sangre en conjunto con las hormonas glucagón e insulina, producidas por el páncreas.
Normalmente, la insulina se encarga de reducir los niveles de glucosa en la sangre cuando sus
niveles son muy altos, permitiendo que la glucosa entre a las células y que estas utilicen la
glucosa para generar energía y, además, estimula la formación de glucógeno en el hígado y la
corteza renal.
La función de la hormona glucagón es la opuesta a la que realiza la insulina, estimulando la
degradación del glucógeno y la liberación de glucosa a la sangre en los momentos en que los
niveles de este azúcar sean bajos. Sin embargo, existen afecciones que afectan el normal
funcionamiento del ciclo de la glucosa.
Uno de estos males es la diabetes tipo 1, enfermedad hereditaria en la que el páncreas es
incapaz de producir insulina. En el caso de la diabetes tipo 2, el páncreas no es capaz de
producir suficiente insulina y/o las células del cuerpo son resistentes a la acción de esta
hormona.
Es importante conocer la cantidad de azúcar que tienen los productos que consumimos
diariamente, esto para poder prevenir algunas enfermedades peligrosas como lo es la diabetes
o para mantener controlados los niveles de glucosa sanguínea.

2. OBJETIVOS:
● Determinar la concentración de glucosa en sangre total empleando el método de
Nelson-Somogyi.
● Construir la curva de calibración para hallar la concentración de glucosa en la
muestra.
● Ejercitarse en el uso de factores de calibración promedio para cálculos de
concentraciones en espectrometrometría.
 3. PARTE EXPERIMENTAL

Materiales:
Parte experimental
 4. RESULTADOS Y CÁLCULOS:

Blanco tubo 1 tubo 2 tubo 3 tubo 4 Muestra

Absorbancia 0.003 0.004 0.005 0.010 0.011 0.156

Diferencia - 0.001 0.002 0.007 0.008 0.153

Concentración - 5.3x10^-3 4.8x10 6.4x10^-3 8x10^-3 117.5 mg

mg/L ^-3

Hallando el factor de calibración:

Fc=
c
Fc= 1.879

● CtM=Fc x AbsM
● CtM=0.287 mg/mL

0,287mg---1ml
3,3875mg---12,5mL

3,3875mg---12,5mL
179,375mg----5ml

179,375mg----5ml
3587,5mg-----100ml

717500mg----1000mL
717,5mg----1mL
● 0.7175g----1mL

T1:
1g---100mL
10mg-1ml
10mg--100ml
0.08mg--0.8mL

0.08mg--12.5mL
6.4x10^-3--1mL

T2:
1g---100mL
10mg-1ml

10mg--100ml
0.06mg--0.6mL

0.06mg--12.5mL
4.8x10^-3--1mL

T3:
1g---100mL
10mg-1ml

10mg--100ml
0.08mg--0.8mL

0.08mg--12.5mL
6.4x10^-3--1mL

T4:
1g---100mL
10mg-1ml

10mg--100ml
0.01mg--1mL

0.01mg--12.5mL
8x10^-3--1mL
5. DISCUSIÓN:
Se halló la concentración de cada uno de los tubos de ensayo, lo cual a partir de ello se
procedió a realizar una curva de calibración para obtener la proporcionalidad de la
concentración y absorbancia. Como resultado de este gráfico, se observa una pendiente
positiva, lo cual nos indica que ambos componentes son directamente proporcionales.
El reactivo a utilizar fue el de Nelson Somogyi, este determina el contenido de azúcares
reductores, el método se fundamenta en la oxidación primaria cualitativa de los azúcares
reductores y que el compuesto oxidado puede llevar a obtener una concentración relativa de
los productos. Esta oxidación se realiza con el reactivo de Somogyi en su medio básico (pH
9), formando un hidróxido de cobre. En estas condiciones se oxidan en su medio ácido (pH
1,2 - 2,0) el arsenato y molibdato del reactivo de Nelson, dando origen a la formación de
molibdeno azul, coloración que se mantiene estable por 24-36 horas y que puede leerse
mediante un espectrofotómetro (González & Castellano, 2003).
Al final de la práctica se obtuvo el resultado, que en una caja de frugos (1L) se halla 717,500
mg o lo que aproximado sería 717,5 g de glucosa.
Normalmente en una caja de frugos se usan 20 g de azúcares, lo cual podemos deducir que el
35.38% es glucosa pura, esto se debe a que no se preparó de manera correcta el reactivo de
Nelson Somogyi para poder calcular las concentraciones, dándonos un error grande al que
normalmente se presenta.

6. CONCLUSIÓN:
- Se determinó la concentración de glucosa en sangre, aplicándose mediante el método
de Nelson-Somogyi lo cual consiste en azúcares reductores, teniendo en cuenta que el
método aplicado se fundamenta en la oxidación primaria cualitativa de los azúcares
reductores y que el compuesto oxidado se pueda llevar a obtener una concentración
relativa de los productos trabajados.
- Se construyó la curva de calibración para luego hallar la concentración de glucosa en
la muestra.
- En todo momento del laboratorio se tuvo cuidado en el uso de los reactivos, una
buena homogeneización y la realización del baño Maria de 10 min. Siempre
siguiendo las pautas de las buenas prácticas de laboratorio y siguiendo los consejos de
la docente a cargo.
7. BIBLIOGRAFÍA:
● González Blair, G. H., & Castellanos Dominguez, O. F. (2003). Alternativas de
modificación del método de Somogyi-Nelson para la determinación de azúcares
reductores a partir de posibilidades químicas. Revista ingeniería e investigación,
1-13. Obtenido de:
file:///C:/Users/20191/Downloads/Dialnet-AlternativesForModifyingTheSomogyiNel
sonMethodForD-4902374.pdf
8. CUESTIONARIO:
1) ¿En qué momento se realiza la precipitación de las proteínas y por qué?
La muestra problema utilizada es sangre con anticoagulante, la precipitación de la
proteínas se daría un tiempo después de agregar la solución de hidróxido de bario y
sulfato de zinc, aproximadamente 10 minutos, esto se debe al uso de metales pesados.

2) ¿Cuál es el papel del oxalato de amonio?

Fabricado a partir de la neutralización del ácido oxálico por el amoníaco, el oxalato de
amonio corresponde a un elemento químico en forma de polvo que se caracteriza por su
transparencia y su ausencia de olor. Simbolizado por la fórmula bruta C2H8N2O4 tiene
una masa molar de 124,1 gramos por mol. También denominado sal de di amonio del
ácido oxálico, el oxalato de amonio es utilizado en los laboratorios de química para
identificar los iones calcio.
Se agrega la solución caliente del oxalato de amonio, si se forma un precipitado se tiene
que disolver añadiendo unas gotas de ácido clorhídrico. Neutralizar muy lentamente
junto a la solución de amoniaco, hasta alcanzar un pH de 4.4 a 4.6. Colocar en el vaso
de precipitado en baño maria y mantenerlo ahí por 10 minutos. Retirar el vaso de baño
maria y dejarlo en reposo por 5 minutos y enfriar con agua.
3) ¿Cuál es el fundamento del método de Somogyi-Nelson? Explique si se produce una
reacción de oxidación o reducción
El método Somogyi-Nelson determina el contenido de azúcares reductores (como la
glucosa) en una muestra, valiéndose de las propiedades reductoras de ciertos tipos de
carbohidratos.
El fundamento es: cuando se calienta un azúcar reductor junto con el tartrato de cobre
alcalino (reactivo de Somogyi), el azúcar reduce el cobre, formando óxido cuproso. Al
ser tratado el óxido cuproso con arseno-molibdato (reactivo de Nelson), el
arseno-molibdato se reduce a azul de molibdeno.
Se producirá una reacción redox, ya que mientras el azúcar se oxida, el cobre y el
arseno-molibdato se reducen durante la determinación del azúcar.
4) En el método de Folin para determinación de azúcar en la sangre, se añade a 0.1 mL de
sangre, 10 mL de ácido túngstico a fin de eliminar las proteínas. Una alícuota de 2 mL de
filtrado exento de proteínas se coloca en tubos para producir reacción de color, cuyo
volumen final es 25 mL. La intensidad de color se compara con la que produce 4 mL de
estándar de glucosa de concentración 1 mg%. Al ser procesado con los mismos reactivos,
éste estándar produce un color 1,05 veces más intenso que el producido por la sangre
filtrada. ¿Cuál es la concentración de azúcar en esta muestra de sangre?
● Para la muestra:
0.1 mL sangre + 10 mL de ác. Túngstico = 10.1 mL total
0.1 mL sangre -> 10.1 mL
x -> 2 mL
x = 0.0198 mL
0.0198 mL sangre -> 2 mL filtrado -> 25 mL
y -> 1 mL
y = 0.000792 mL sangre
● Para el estándar:
1 mL glucosa -> 100 mL
x -> 4 mL
x = 0.04 mL
0.04 mL glucosa -> 2 mL filtrado -> 25 mL
y -> 1 mL
y = 0.0016 mg glucosa
Ast = 1.05 A mp

5)El coeficiente de extinción molar de una sustancia es de 3257 cm-1mol-1 en una celda de 1
cm y con una longitud de onda de 280 nm. ¿Cuál será la concentración en mg o en g si se
obtuvo una absorbancia de 0.215, sabiendo que el peso molecular es 328?
A= ɛ * b * M
A: Absorbancia = 0.215
−1 −1
ɛ: Absorbancia = 3257 𝑐𝑚 𝑚𝑜𝑙
b: longitud de trayectoria = 1cm
M: Concentración
𝐴
M= ɛ*𝑏

0.215 −5
M= −1 −1 = 6.60*10 𝑚𝑜𝑙 * 328g/mol = 21.65 mg
3257𝑐𝑚 𝑚𝑜𝑙 * 1𝑐𝑚
9. REPORTE: