TRABAJO EVALUATIVO

LABORATORIO QUÍMICA ORGÁNICA

APELLIDO Y NOMBRE:

FECHA:

En la cotidianidad se puede observar una gran cantidad de eventos relacionados con las técnicas
de separación de mezclas. Definir que técnicas de separación emplearían en cada caso.

⮚ En la preparación de un café en granos. Describir brevemente cómo lo haría.

⮚ Si se tiene un vaso de precipitado con una mezcla de agua y aceite. Describir brevemente.
⮚ Hay una mezcla de arena y clavos cómo los separarían.
⮚ En una construcción se desea separar la arena y harina explicar brevemente que método
se debe emplear.
⮚ ¿Qué método utilizaría para separar los componentes del agua de mar?

2) Determinar cada una de las partes del siguiente informe de laboratorio.

TRABAJO PRACTICO Nº1. DETERMINACIÓN DE GLUCIDOS…………..1

TRABAJO PRACTICO Nº2. LIPIDOS………………………………………………5

TRABAJO PRACTICO Nº3………………………………………………………………7

CUANTIFICACIÓN DE PROTEINAS…………………………………………………9

TRABAJO PRACTICO Nº4. OBTENCIÓN DE ADN …………………………..11

TRABAJO PRACTICO Nº5. ENZIMAS……………………………………………..15

TRABAJO PRÁCTICO Nº 2

LIPIDOS: ACCIÓN HEMOLÍTICA DE LISOFOSFOLÍPIDOS

Comprobar la acción hemolítica de los lisofosfolípidos 

Los lípidos complejos que participan en la constitución de membranas celulares están en 
permanente recambio. El proceso de degradación es cumplido por enzimas específicas
que  catalizan la hidrólisis de las uniones entre los componentes de la molécula. Los
glicerofosfolípidos requieren un conjunto de enzimas para su total degradación. La 
fosfolipasa A cataliza la hidrólisis de la unión éster del ácido graso en posición 2, con lo
2

cual se  forman un lisofosfolípido y un ácido graso libre, generalmente insaturado. Otras
fosfolipasas,  A , C y D, son responsables del clivaje de otros enlaces éster de la molécula
1

del  glicerofosfolípido.  
Las fosfolipasas A (PLA ), están ampliamente distribuídas, habiéndose encontrado en
2 2

casi  todos los tipos celulares. Las más estudiadas son las de origen pancreático y las
presentes en  venenos de serpientes. 
En este trabajo práctico se estudiará la acción de la PLA presente en veneno de yarará
2

grande  (Bothrops alternatus) sobre fosfolípidos presentes en yema de huevo (rica

especialmente en  lecitinas), se comprobará su acción hemolítica “indirecta”, cuando se
enfrentan estas enzimas a  una suspensión de GR y yema de huevo, donde los
lisofosfolípidos generados de su acción son  capaces de lisar los hematíes por su acción
detergente. 

✔ Veneno de Bothrops alternatus 

✔ Yema de huevo 
✔ Solución fisiológica 
✔ Glóbulos rojos 

⮚ Tubos de ensayo
⮚ Centrifugadora
⮚ Propipetas
⮚ Balanza

▪ Solución de Veneno de B. alternatus: se pesan 10 mg de veneno☠ y se

disuelven en 10 mL de solución fisiológica (concentración final: 1mg/mL) * 
▪ Solución de yema: se disuelven 4 mL de yema de huevo en 12 mL de solución
fisiológica  (NaCl 0.15 M) 
▪ Solución de glóbulos rojos: Lavado de los glóbulos rojos: a 2 mL de sangre
anticoagulada  con citrato 3.8%, se le agregan 5 mL de solución fisiológica.
Se homogeniza en forma suave  y luego se centrífuga durante 5 minutos.
 Repetir este procedimiento 3 veces. Al pellet de  glóbulos rojos obtenido de la
última centrifugación se lo resuspende con 4 mL de solución  fisiológica. 
☠: manipular con guantes, usar barbijo. 
* Soluciones a preparar para uso de todas las comisiones. 

ACCIÓN HEMOLÍTICA DE LISOFOSFOLÍPIDOS 

Preparar 3 tubos de centrífuga y en ellos colocar:  

1. Tubo 1: 2.8 mL de la solución de yema + 0.2 mL de solución de veneno + 1

mL de la  suspensión de glóbulos rojos. 
2. Tubo 2: 2.8 mL de la solución de yema + 0.2 mL de solución fisiológica + 1
mL de la  suspensión de glóbulos rojos. 
3. Tubo 3: 2.8 mL de solución fisiológica + 0.2 mL de solución de veneno + 1
mL de la  suspensión de glóbulos rojos. 
4. Homogeneizar e incubar los tres tubos durante 30 minutos a 30ºC. 
5. Centrifugar durante 5 minutos y observar el sobrenadante. 

→ Todo el material biológico debe ser debidamente descartado en

solución de lavandina /  bolsas rojas correspondientes. Utilizar guantes 
Se comprueba la acción hemolítica indirecta de la fosfolipasa A2 (presente en el veneno de
yarará)de actuar sobre la lecitina que se encuentra en la yema de huevo liberando lisolecitina;
capaz de lisar los glóbulos rojos por su acción detergente.

⮚ Química Biológica Antonio Blanco 8a Edición. Samanta Palmeri.

⮚ Ministerio de Educación, Ciencia y Tecnología de la Nación, 2007. Química-1ª Ed. Buenos
Aires.

3) determinar que material de laboratorio utilizaría en cada caso.

a) Verter 200ml de agua en un vaso de precipitado.

b) Pesar 30 gramos de naftalina, moler y disolver lo en agua contenida en el vaso de
precipitado. Luego calcular gramos de soluto por cada 1000gramos.
c) Medir exactamente 10 ml de etanol y luego colocarlo en un vaso precipitado. Añadir 25 ml
de agua. Revolver.