Bioquímica II

Practica # 3
Acción De La Lipasa Pancreática Sobre La Leche
Homogenizada

Objetivo. - Demostrar La Actividad De La Lipasa Pancreática.

Nota. -El alumno traerá la leche que sea homogenizada de la

normal. (no deberá de traer leche light, descremada ni ninguna que
sea de este tipo).

Material
5 tubos de ensaye de 18x150mm (para 10 ml)
1 gradilla
5 vasos de precipitados de 250 ml
1 bureta para titulación de 25 ml o de 50 ml
Soporte
Pinzas
Parrilla eléctrica
Termómetro
Embudo chico

Reactivos
Pancreatina al 1% (200 ml)
(para disolver la pancreatina hay que usar agitación suave y es
preferible disolverla en buffer de fosfatos pH 7.4)
Fenolftaleína 50mg
Hidróxido de potasio 8.4 gr.
Agua destilada 3l
Alcohol etílico de 95% (1.5L)

Procedimiento
1.-Coloque en su gradilla 5 tubos de ensaye y numérelos
2.-Añada 10ml de leche homogenizada a cada uno de los 5 tubos.
3.-Añada 3ml de pancreatina al 1% a cada uno de los 5 tubos de
ensaye y agítelos.
4.-Inmediatamente vacié el contenido del tubo 1 a un vaso de
precipitados de 250ml que ya contenga 25ml de alcohol etílico de
95 grados.
5.- Lleve los demás tubos a un baño de agua a 37 grados
centígrados anotando la hora exacta.
6.-Agite bien el contenido del primer vaso de precipitados.
Añádale 0.5 ml de fenolftaleína y titule con KOH 0.05n hasta un
color rosa permanente.
7.-A los 10 minutos saqué el tubo 2 del baño, vacié su contenido a
otro vaso de precipitados con 25 ml de alcohol etílico. Añádale
0.5ml de fenolftaleína y titule de la misma manera que en el caso
anterior.
8.-A los 20 minutos saque el tubo número 3, a los 30 minutos el
tubo número 4 y a los 40 minutos el tubo número 5. A todos los
tubos se les da el mismo tratamiento que al tubo número 1.
9.-El tubo numero 1 es el control, por lo tanto, para obtener los
valores que va a reportar tiene que restarles a todos los tubos el
valor obtenido en el tubo 1.
10.-Calcule los ml de KOH consumidos en cada tubo.

Revisión
1.- Que función realiza la lipasa pancreática?
Son las encargadas de la digestión de los triglicéridos consumidos
en la dieta, produciendo ácidos grasos libres y glicerol.

En otras palabras, son enzimas que digieren grasas, especialmente

las grasas neutras, que son las más abundantes en los alimentos
(triglicéridos). Estas grasas consisten en un núcleo de glicerol
al cual están esterificadas tres moléculas de ácidos grasos.

2.- Para qué sirve la fenolftaleína?

3.- Porque se utiliza en esta práctica una temperatura 37 grados

centígrados?

4.- Que es la pancreatina?

Pancreatina es una combinación de enzimas digestivas (proteínas).
Estas enzimas son normalmente producidas por el páncreas y son
importantes en la digestión de grasas, proteínas, y azúcares. La
pancreatina se usa para reemplazar las enzimas digestivas cuando
el cuerpo no produce lo suficiente.

5.- Para que sirve en esta práctica el KOH?

Para que los ácidos se hidrolicen, pues cada vez que dejamos
avanzar más la reacción mediante el calor del baño de agua, más
triglicéridos había en la disolución.

Los triglicéridos de cadena larga a los cuales hidroliza rompiendo

la unión éster en la posición alfa.

6.- Para qué sirve el alcohol etílico en esta práctica?

Para que los ácidos reaccionan con la base en presencia del
alcohol y el producto es glicerol y sales de potasio de los ácidos
grasos.
7.- Cuántos aminoácidos conforman a la lipasa pancreática?
La actividad funcional de las lipasas se sustenta en la tríada de
aminoácidos clásica: nucleófilo–ácido-histidina, dilucidada
inicialmente para las proteasas serínicas. Los elementos de la
tríada se ubican en lazos muy bien conservados del dominio
catalítico.
El nucleófilo, generalmente una serina, se localiza en un giro que
conecta una cadena β con una hélice α, en el contexto secuencial
pequeño-x-nucleófilo-x-pequeño-pequeño; donde x es cualquier
aminoácido y “pequeño” se refiere a un aminoácido poco voluminoso.
Solo la histidina está completamente conservada en la tríada de
las lipasas, cuyo arreglo topológico y secuencial es la imagen
especular de la tríada de las proteasas serínicas.

8.- En donde se produce la lipasa pancreática?

Las lipasas pancreáticas (triacilglicerol acil-hidrolasas) son
enzimas secretadas por el páncreas hacia el intestino delgado.

9.- Qué pasaría si utilizáramos una temperatura de 47 grados

centígrados?