LABORATORIO DE BIOQUÍMICA (QM.

363)
EXPERIMENTO #___
DIGESTIÓN PANCREÀTICA

I. Objetivos:
1. Estudiar los procesos que involucran la digestión pancreática.
2. Demostrar las condiciones ideales para la digestión pancreática.
3. Demostrar los parámetros que afectan la naturaleza proteica de las enzimas digestivas.

II. Principio.

Luego de la digestión gástrica, continúa la digestión pancreática donde actúan una serie de
enzimas y factores que optimizan la digestión del alimento. Esas fases de acciones digestivas
es la preparación del alimento para la ruta metabólica. La fase digestiva se lleva a cabo por la
acción del jugo pancreático que contiene las enzimas digestivas tripsina y quimotripsina.

Fuera de las enzimas, el jugo pancreático también contiene algunas proteínas y otros
compuestos inorgánicos, entre estos tenemos pequeñas cantidades de sales de K, Ca, Zn,
fosforo y sulfatos. También contiene albúminas, globulinas, proteasas y peptonas, así como
trazas de nucleoproteínas (4).

La secreción pancreática normal contiene una gran variedad de diferentes enzimas como la
tripsina, quimotripsina, peptidasas, α-amilasa, lipasa, RNasa, DNasa y colagenasa. Algunas de
estas enzimas se secretan en forma de precursores inactivos o zimógenos, como el
tripsinógeno y el quimotripsinógeno, que se activan al entrar en contacto con la mucosa
intestinal (1).

La acción proteolítica del jugo pancreático se debe a la tripsina y a la quimotripsina, las

cuales convierten a las proteínas naturales y a las proteosas y peptonas de la digestión gástrica
en polipéptidos. La quimotripsina tiene poder coagulante sobre la leche, superior al de la
tripsina (1). Ambas se han clasificado como endopeptidasa por actuar sobre uniones
peptídicas de la porción central y terminal de cadenas polipeptídicas. Se ha encontrado que la
tripsina actúa sobre aquellas uniones peptídicas que envuelven a los grupos carboxílicos de la
lisina o de la arginina, en tanto que la quimotripsina actúa sobre aquellas en que participan los
grupos carboxílicos de la tirosina y de la fenilalanina. Parece que estas enzimas atacan uniones
peptídicas específicas (4).

Los polipéptidos se desdoblan por la acción de una mezcla de la carboxipeptidasa del jugo
pancreático con la aminopeptidasa y la dipeptidasa del jugo intestinal. La α-amilasa
pancreática es de acción similar a la amilasa salivar, pues convierte al almidón en maltosa a un
pH óptimo de 7.1.

1
 La lipasa pancreática o esteapsina hidroliza las grasas en ácidos grasos, glicerol y
monoacilgliceroles. Esta enzima parece que es activada por las sales biliares, que activan la
colesterolesterasa, esterifica el colesterol facilitando su absorción en el intestino. Tenemos la
colagenasa, que hidroliza al colágeno y por último la DNasa y RNasa que actúan sobre los
ácidos nucleicos.

El jugo intestinal o succus entericus se secreta en las glándulas de Brunner y de Lieberkühn

del intestino delgado que se estimulan de forma nerviosa o mecánica. Contiene 1.5% de
sólidos, la mitad correspondiente a elementos inorgánicos, principalmente bicarbonato,
cloruro, fosfato, sodio, potasio y calcio. Sus componentes orgánicos principales son: la mucina,
enzimas y diversos lípidos y varios metabolitos de la urea. Mientras algunas de sus enzimas
son verdaderamente extracelulares, otras probablemente son intracelulares y llegan al
intestino en las células mucosas que se desprenden como las fosfatasas, nucleotidasas y
nucleosidasas. Esto y otros factores hacen que el jugo intestinal tenga una composición
variable y que no sea tan precisa como el jugo gástrico o el jugo pancreático. Su pH varía
dependiendo de la porción de intestino delgado según la acidez gástrica y la cantidad de
alcalinidad del jugo pancreático y de la bilis. El pH duodenal en ayunas es de 5.5 a 6.0 y
disminuye luego de la ingesta de alimentos, para aumentar gradualmente hasta 6.0 ó 6.5 en la
porción terminal del íleon. También lo afectan la composición de la dieta y la actividad
bacteriana (1, 2).

En el jugo intestinal se hallan presentes numerosas enzimas digestivas. Las peptidasas

intestinales son de tres clases: aminopeptidasas, dipeptidasas y tripeptidasas. Las disacarasa
que se secreta indirectamente incluyen a la sucrasa o invertasa, maltasas y lactasa, así como
otras enzimas. La falta de alguna disacarasas provoca intolerancia congénita hacia un
disacárido. Existe por lo menos una fosfatasa que separa fosfatos de ciertos fosfatos orgánicos
como los fosfatos de hexosas, glicerofosfatos y los nucleótidos derivados de la dieta. La
digestión de los ácidos nucleicos se da por las polinucleotidasas. También se hallan presentes
en el jugo intestinal lecitinasas, que convierten a las lecitinas en glicerol, ácidos grasos, ácido
fosfórico y colina (1, 2).

En resumen, se puede concluir que el propósito final de la acción de las enzimas digestivas
es el convertir los alimentos presentes en la dieta en formas que se puedan absorben y
asimilar, lo cual constituyen la primera etapa del metabolismo (1).

III. Parte Experimental.

Prueba #1: “Efecto del pH sobre la digestión tríptica.”

Materiales y reactivos:

a) Extracto de polvo comercial de tripsina: Se disuelven 0.25g de un polvo comercial de

tripsina en 100 ml de agua destilada y se centrifugan de ser necesario. Se toma el
líquido claro sobrenadante para las posteriores pruebas.

b) Polvo de cuero teñido.

2
 c) Soluciones amortiguadoras de fosfato.

pH Na2HPO4 0.067M NaH2PO4 0.067M

5.4 3.0 ml 97.0 ml

6.0 12.0 ml 88.0 ml

7.0 61.1 ml 38.9 ml

8.0 94.5 ml 5.5 ml

Procedimiento

Rotula 4 tubos de ensayo y en cada uno se ponen 3 ml de la solución de tripsina y 3 ml

de solución amortiguadora de pH 5.4 al primer tubo; de pH 6.0 al segundo tubo; de pH 7.0
al tercer tubo y de pH 8.0 al cuarto tubo. A continuación, se añaden unos gránulos de
cuero teñido y se incuban en un baño a 37°C. Agite ocasionalmente, observa cuando haya
evidencia de una reacción y anota los cambios dados.

Todas las tripsinas se sintetizan como un precursor inactivo, el tripsinógeno ,

presumiblemente como un mecanismo protector para evitar la actividad prematura del
páncreas, que podría conducir a la enfermedad inflamatoria pancreatitis

https://scrippslabs.com/trypsin/

Prueba #2. “Efecto de los inhibidores sobre la actividad tríptica”.

Materiales y reactivos.

a) Extracto de polvo comercial de tripsina.

b) Solución amortiguadora de pH 8.
c) Solución de HgCl2 0.2M.
d) Polvo de cuero teñido.

Procedimiento.

Rotula 3 tubos y agrega los siguientes reactivos como se muestra en el siguiente

cuadro:

Tubos Tripsina Amortig. pH 8 HgCl2 0.2M

1 3 ml 3 ml
2 3 ml 3 ml 2 gotas
3 6 ml

3
 Una vez colocados todos los reactivos, añade unos trocitos de polvo de cuero teñido,
agita, y los incuban en un baño a 37°C. Observa cuando haya evidencia de una reacción y
anota tus resultados.

Prueba #3. “Acción de la amilasa pancreática”.

Materiales y reactivos.

a) Extracto pancreático al 0.5%: disuelve 0.5 g del polvo pancreático comercial en

100 ml de Na2CO3 0.05M. Esta preparación debe ser preparada al momento de su
empleo (5).
b) Solución de yodo 0.01M.
c) Solución de almidón al 1%.
d) Reactivo de Benedict o Fehling.

Procedimiento.

Rotula 3 tubos y agrega los siguientes reactivos como se muestra en el siguiente cuadro:

Tubo Extracto pancreático Solución de almidón al 1%.

1 2 ml 5 ml
2 2 ml hervidos por 3 min. 5 ml
3 2 ml Agua 5 ml

Una vez servidos todos lo reactivo, incube los tubos a 37°c por espacio de 30 minutos.
Al finalizar el tiempo, enfría los tubos y divídelos en dos partes la solución de cada tubo,
a una parte se le realiza prueba de yodo (añada 2 gotas y agite) y a la otra parte la
prueba de Benedict (añada 2 ml y calienta el mismo). Observa y anota tus resultados.

Prueba #4. “Acción de la lipasa pancreática”.

Materiales y reactivos:

a) Emulsión de grasa: En un vaso químico mezcla 1 ml de aceite de oliva con 5 ml de

alcohol etílico. Agrega igual volumen de agua (6 ml) y agita bien. Adiciona 10 gotas de
rojo de fenol y suficiente Na2CO3 0.1M hasta que la solución se torne rosado
permanentemente (5).
b) Extracto pancreático al 0.5%.
c) Indicador rojo fenol.

Procedimiento.

4
 Neutraliza una porción del extracto pancreático hasta que sea rosado al rojo fenol. A
continuación, se dispone de dos tubos de ensayo, en el primero de los cuales se colocan 6
ml de la emulsión de grasas y 3 ml del extracto pancreático neutralizado. Al segundo tubo
se añaden 6 ml de la emulsión de grasa y 3 ml del extracto pancreático hervido,
previamente por 2 min y luego enfriado. Se incuban los tubos por 20 min a 37°C y se
observa el color del indicador. En lugar de emulsión se puede empelar crema dulce (5).
Anota y explica tus resultados.

Cuestionario.

1. ¿Cuál es el pH óptimo para la digestión tríptica? ¿Podría algún otro tubo mostrar actividad si
se incuban por más tiempo? ¿Por qué?

2. ¿Cuál es la naturaleza de la acción del HgCl 2 sobre la triptica? ¿Cuáles otros inhibidores se
podrían probar?

3. ¿Cuál es al azúcar que se forma que da positiva la prueba de Benedict?

4. ¿A que pH se encuentra el viraje el rojo de fenol? ¿Es óptimo para la acción de la lipasa
pancreática?

5. ¿qué tipo de alimentos se digieren en esta etapa de la digestión? Mencione algunos y que
producto final se derivan de la digestión de los mismos.