UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE AGRONOMÍA

PROGRAMA EDUCATIVO
LICENCIATURA EN AGRONOMÍA

EXPERIENCIA EDUCATIVA
BIOQUÍMICA

DOCENTE
CORIA GIL NORMA ANA BELI

PRACTICA DE LABORATORIO 2
“ACCIÓN HIDROLÍTICA DE LAS
LIPASAS DE SEMILLAS DE
OLEAGINOSAS”

ESTUDIANTES:

NRC

PEÑUELA, VER MARZO 2023.

 Introducción

Las enzimas lipasas han sido descritas desde hace algunos siglos, sin
embargo, en décadas recientes los investigadores han descubierto nuevas
propiedades y aplicaciones de estas enzimas.

Es notable el impacto que han tenido las lipasas en la producción de

fármacos más selectivos y efectivos, con efectos secundarios menores y en la
obtención de pesticidas de menor toxicidad, todo ello mediante la síntesis de
compuestos ópticamente puros y la resolución de mezclas racémicas.1,2

Las lipasas hidrolizan triglicéridos a ácidos grasos y glicerol y bajo ciertas

condiciones catalizan la reacción inversa. Algunas de estas enzimas son también
capaces de catalizar reacciones de transesterificación e hidrólisis
enantioselectivas. Estas enzimas hidrolíticas se encuentran ampliamente
distribuidas en la naturaleza y están presentes en los procesos metabólicos
degradativos de algunas plantas y animales. Son producidas por un gran número
de microorganismos, a partir de los cuales se obtienen usualmente para fines
comerciales, un ejemplo típico lo son las lipasas producidas por los hongos
Aspergillus niger y A. fumigatus.

Las enzimas lipasas son de gran interés biotecnológico y biomédico, ya que

no generan subproductos indeseados y además pueden ofrecer ventajas
económicas frente a la utilización de métodos químicos tradicionales en la
producción de fármacos. El mercado de las enzimas fue de 3300 millones de
dólares en el 2010 y tiene un crecimiento anual mayor al 6 %, alcanzando un
movimiento de 4400 millones de dólares en el 2019.

Actualmente, en la mayoría de los procesos en que se utilizan enzimas,

estas se encuentran en estado soluble y su recuperación en el producto final es
tediosa y genera costos adicionales.

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 2. Revisión de literatura.

Las grasas, al igual que el almidón son sustancias de reserva de las plantas
y se almacenan principalmente en las semillas.
Cerca del 20 % de las plantas contienen grasas en las semillas como
principal sustancia de reserva. Entre estas se encuentran el girasol, maní,
palmiche, soja, en las cuales puede acumularse del 20 al 60 % del peso seco.
Para su utilización como fuente de energía, los mismos deben experimentar
hidrólisis por acción de las lipasas presentes en las semillas por cuya acción se
convierten en ácidos grasos y glicerol, siendo su pH óptimo entre 4,7 y 5,0. H 2 O
triacilglicérido ácido graso + glicerol lipasa
La actividad de las lipasas se puede determinar por la valoración con
alcohol de los ácidos grasos producidos.

Fundamento de la actividad enzimática de la lipasa

Las lipasas son enzimas que catalizan la hidrólisis de los enlaces éster
presentes en los acilgliceroles in vivo. Además, pueden catalizar la hidrólisis o
síntesis de un grupo amplio de ésteres carboxílicos (González, 2010).Las
condiciones óptimas de pH dependen, entre otros factores, del sustrato y del
tampón empleado. El pH óptimo para las lipasas se encuentra generalmente en el
intervalo entre 7,0 y 9,0 cuando la actividad enzimática se ensaya frente a sus
sustratos específicos, como el aceite de oliva, la tributirina, otros triacilglicéridos
pequeños y la trioleína. (Lindenmeyer, 2020).

También puede suceder que se obtenga más de un valor de pH óptimo,

manteniendo invariables las demás condiciones del ensayo. El método de pH-stat,
que se fundamenta en la valoración de la disminución del pH en el tiempo, es una
de las técnicas más utilizadas bajo este principio. Los ácidos grasos liberados por

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la actividad de la lipasa se ionizan en solución acuosa mediante la pérdida de
protones y la mezcla de reacción tiende a acidificar.

En la digestión de los carbohidratos intervienen diferentes enzimas que

desempeñan funciones diferentes y que, por tanto, tienen especificidades
diferentes. Para romper las ramificaciones se necesita a la amilo-1,6 glucosidas a.
Laαamilasa cataliza la hidrólisis de los enlaces α-1,4 del almidón, produciéndose
azucares reductores. La reacción puede seguirse midiendo el incremento de
azucares reductores mediante el reactivo 3,5dinitrosalicilato en solución alcalina
de ácido 3,5dinitrosalicilico que se reduce a ácido 3-amino-5-
dinitrosalicilicoproduciendo una coloración que se mide a 540 nanómetros.

La mayoría de los carbohidratos en los mamíferos se obtienen de la dieta,

la cual Incluye polisacáridos como el almidón y sus componentes (amilosa y
amilopectina), la celulosa y dextrinas (productos de la hidrolisis incompleta del
almidón) y disacáridos como la sacarosa que está formada por una molécula de
glucosa (una piranosa) y otra de fructosa (una furanosa).La función más
importante de la saliva es humedecer y lubricar el bolo alimenticio, desde el punto
de vista digestivo es importante por contener a la amilasa salival, enzima que
hidroliza diversos tipos de polisacáridos. (Universidad Nacional Autonoma de

México, 2017)

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 Figura 1.- Hidrólisis del almidón por alfa amilasa

3.- Objetivos

1. El alumno descubrirá uno de los métodos para la determinación de

triglicéridos y analizara el resultado obtenido en base al metabolismo de los
lípidos.
2.- Represente mediante una ecuación química la hidrólisis de los
triacilglicéridos.

4.- Materiales

• 3 Matraces

• 1 Pulverizador o mortero

• HCl 0,1 mol/L.

• Fenolftaleína.

• Cristalería.

• Semillas de higuereta, maní o soja.

• Etanol.

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 • NaOH 0,1 mol/L.

5. Métodos.

1. Disponga de tres frascos Erlenmeyer numerados e introduzca en cada

uno 3 g de semillas oleaginosas desprovistas de sus cubiertas y trituradas. Añada
a cada uno 10 ml de agua destilada.

2. En el frasco 1 añada 2 ml de HCl 0,1 mol/L. En el frasco 2 hierva su

contenido durante 5 minutos y luego agregue 2 ml de HCl.

3. Para eliminar los procesos de putrefacción añada 2 gotas de tolueno en

los tres frascos, tape y coloque en un termostato a 35 - 37 grados hasta el día
siguiente.

4. Al día siguiente añada a cada frasco 10 ml de etanol para eliminar la

disociación hidrolítica del jabón que se forma durante la valoración y en el frasco 3
agregue 2 ml de HCl 0,1 mol/L para igualar las condiciones del ensayo.

5. Valore con NaOH 0,1 mol/L los ácidos grasos producidos en los tres
frascos por acción de las lipasas. Anote el volumen gastado en cada caso y
analice lo ocurrido.

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 6.- Resultados y discusión

AGREGEN FOTOS

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 7.- Conclusiones

En esta práctica, se mostró como es un proceso que involucra la acción

catalítica de Hidrolasas, las cuales rompen uniones covalentes y saturan las
valencias libres aprovechando los componentes de la molécula de agua. Así,
reducen los compuestos orgánicos que recibimos en la dieta, hasta moléculas
pequeñas que pueden ser absorbidas por las células del epitelio intestinal. Se
pudo captar la reacción química que se produce con el almidón y Lugol, ya que
éstas al ser añadidas a la par, hace que la muestra se tiña de un color violeta
intenso. Esto es debido a que los átomos de yodo se introducen en las
espirales(amilosa), dándole esa coloración. El color desaparece al calentar la
disolución volviéndose transparente, porque los átomos de yodo se salen de la
espiral. Al enfriar la disolución retorna el color violeta.

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 Fuentes de Información
Universidad Nacional Autonoma de México. (2017). Portal Académico CCH.
Obtenido de
https://e1.portalacademico.cch.unam.mx/alumno/quimica2/unidad2/grasas/
trigliceridos

Lindenmeyer, C. C. (2020, marzo). Generalidades sobre la función biliar.

MANUALMSD. URL: https://www.msdmanuals.com/es-mx/professional/trastornos-
hep%C3%A1ticos-y-biliares/trastornos-de-la-ves%C3%ADcula-biliar-y-los-
conductos-biliares/generalidades-sobre-la-funci%C3%B3n-biliarDescargado