TALLER (6) DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE ADN

PRESENTADO POR:

ANGIE PAOLA CASTILLO MOTTA

JEAN CARLOS CERON MOLINA

UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN MATEMATICAS

POPAYAN (CAUCA)

2021

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 TALLER (6) DE PRÁCTICA DE LABORATORIO DE ADN

PRESENTADO A:

NELSON BOLIVAR ROJAS MARTINEZ

UNIVERSIDAD DEL CAUCA

FACULTAD DE CIENCIAS NATURALES, EXACTAS Y DE LA EDUCACIÓN

LICENCIATURA EN MATEMATICAS

POPAYAN (CAUCA)

2021

1. Preparación de un amortiguador

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 La preparación de un amortiguador a partir de una solución patrón y la conversión de
unidades para preparar 1 litro de solución. Se preparará a partir de un amortiguador 20X,
una solución que está 20 veces más concentrada que aquella que podría normalmente
usar para una solución de trabajo. Para conseguir la cantidad final de solución de trabajo
se mezclará alguno de los amortiguadores con agua destilada. ¿Qué volúmenes de
amortiguador patrón y agua destilada deberían mezclarse? Presente los cálculos para esta
preparación.

2. Conversión de porcentaje de solución

Se requiere preparar 5 ml de una solución de NaCl 2% . Previamente ha preparado una

solución patrón de NaCl 10%. Cuántos microlitros de la solución NaCl 10% se

requerirían para preparar 5 ml de una solución NaCl 2%? Indique las operaciones

pertinentes.

RTA:

5 mL 10%
X=1 mL 2%

De este modo se debe agregar 1 mL de solución de NaCl al 10% y aforar a 5 mL, para

obtener una solución de NaCl 2%.

3. Datos de absorbancia obtenidos en la práctica de aislamiento y purificación de ADN:

Longitud Grupo 1 Grupo 2 Grupo 3 Grupo 4 Grupo 5

de onda
220 nm 0,156 0,122 0,076 0,077 0,141

230 nm 0,213 0,149 0,138 0,126 0,181

240 nm 0,224 0,146 0,126 0,183 0,178

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 250 nm 0,228 0,176 0,154 0,145 0,200

260 nm 0,300 0,292 0,207 0,211 0,265

270 nm 0,353 0,268 0,205 0,237 0,291

280 nm 0,674 0,496 0,506 0,400 0,569

290 nm 2,59 0,0066 1,619 1,718 2,282

300 nm 2,81 1,353 0,759 0,849 1,683

310 nm 2,56 1,245 0,719 0,786 1,554

320 nm 2,148 1,153 0,701 0,757 1,432

a. Elabore una gráfica ubicando en el eje de  la longitud de onda y en el eje de y

los valores de absorción. Calcule el error estándar de cada punto con los datos de cada
grupo y coloque la barra de error estándar para la media de cada medición de
absorción. Utilice el programa estadístico de su preferencia. (Excel, Origin, Stat
Graphics, Sigma Plot, SPSS, etc.). Saque conclusiones del análisis de los datos.

Análisis espectrofotométrico de ADN

La concentración de ADN en una muestra generalmente se estima mediante el corrimiento de
una muestra en un gel de agarosa. Tales cuantificaciones son semi-cuantitativas, requieren
mucho tiempo y no son confiables cuando se observan numerosas bandas borrosas. Para una
determinación más exacta de la concentración de ADN se utiliza un espectrofotómetro que lea
UV o un fluorómetro si la solución conocida de ADN es pura.

La pureza de una solución de ADN puede determinarse usando una comparación de los
valores de densidad óptica (absorbancia) de varias longitudes de onda. Para ADN puro la
relación 260/280 observada será aproximadamente de 1.8. Tasas elevadas usualmente indican la
presencia de ARN el cual puede probarse corriendo una muestra de ~1 mg, en un gel de agarosa,
tasas 260/280 anteriores a 1.8 a menudo indican la presencia de contaminación con proteínas o
fenol.

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 Alternativamente, la contaminación por proteínas o fenol se indica por las tasas 230/260,
mayores que 0.5. Una vez que Ud. se ha asegurado que su muestra contiene ADN puro, puede
realizarse una determinación exacta de la concentración de ADN.

1. Con los parámetros establecidos anteriormente analice los resultados obtenidos y

explíquelos.
RTA: El valor en las absorbancias de longitud de onda de 260 nm son menores de 1.8.
quiere decir que es un fuerte indicativo de que la muestra del ADN al estar extraída y
purificada, no es pura. Por consiguiente, su contaminación está influida por proteínas y fenol
del protocolo de extracción.

2. Los datos resaltados con amarillo corresponden a la absorbancia del ADN. ¿Explique por
qué el ADN absorbe a 260 nm?
RTA: Ya que el valor obtenido en las absorbancias de longitud de onda de 260 nm es
menor de 1.8, es un fuerte indicativo de que la muestra de ADN, extraída y purificada, no es
pura, y su contaminación se puede estar influida por proteínas y fenol, del protocolo de
extracción. 

3. Cuando las barras de error “estándar” son inusualmente grandes, ¿qué significa?
RTA: Las barras de error son representaciones gráficas de la variabilidad de los datos, y se
usan en gráficos para indicar el error o la incertidumbre en una determinada medida, por tal
motivo, tener un sesgo de valores y outliers es un fuerte indicio de la falta de pureza en las
muestras, teóricamente si la proporción entre la absorbancia a 260nm y 230nm es menor a 2.0,
existe contaminación por carbohidratos en el extracto.