TECNOLÓ GICO N CION L

DE MÉ XICO
INSTITUTO TECNOLÓGICO DE LOS MOCHIS

Análisis

Práctica de Laboratorio: Determinación

cuantitativa de azul de timol.

o LICENCIATURA:
INGENIERIA BIOQUÍMICA

o DOCENTE:
DRA. MONROY GARCIA IMELDA NOEHMI

o ALUMNO:
CASTRO VALLE BRANDON JESÚS (20441099)

o GRUPO:
T1N

LOS MOCHIS, A MARTES 03 DE MAYO DEL 2022.

 -Introducción-
El uso de curvas de calibración para la cuantificación de analitos es un recurso de
gran importancia en la Química Analítica; sin embargo, existen varios tipos
de curvas dependiendo de las características particulares del problema a tratar.
El método o curva de adiciones patrón se utiliza particularmente para analizar mezclas
complejas, cuando es difícil suprimir interferencias físicas o químicas en la matriz
de la muestra problema; o bien, cuando la respuesta en la propiedad es baja y no
es posible concentrar la muestra. El método consiste en hacer adiciones
de estándar a una cantidad fija de la muestra problema y medir la respuesta (P)
para cada adición. De esta forma, cada solución contendrá una proporción
constante del analito proveniente del problema (Cx = constante) y una proporción
variable proveniente del estándar (Cs = variable). Puesto que el medio químico es
el mismo para todos los sistemas, se puede suponer que la constante de
proporcionalidad, K, es invariante y, por lo tanto, es posible construir la función: P
= K [Cx + Cs] (1). Entonces, si se mide la respuesta en la propiedad para cada
sistema se obtiene una serie de valores con los que se construye el gráfico de P
en función de Cs.
Cuando en la cuantificación de un analito se utiliza un método gráfico, la validez y
calidad del resultado está relacionado con la dispersión de los datos obtenidos,
donde una mayor dispersión implica menor precisión. Para evaluar la dispersión y,
por lo tanto, la calidad del valor que se reportará, se hace uso de los parámetros
estadísticos como lo son la desviación estándar o el coeficiente de variación, entre
otros. Finalmente, para medir la respuesta de la propiedad P en este
caso, se utilizará espectrofotomería de ultravioleta-visible (UV/Vis).
En base a cada uno de los conceptos anteriores, se realizó una práctica en el
laboratorio la cual tenía por nombre “Determinación cuantitativa de azul de timol
mediante una curva de adición patrón”, a partir de la cual se ha realizado el
presente reporte, en el cual se muestran los materiales y procedimientos que se
realizaron, además de los resultados obtenidos y más aspectos importantes. Todo
esto con el fin de ampliar nuestros conocimientos sobre el tema.
 -Desarrollo-
PRÁCTICA #1
Determinación cuantitativa de azul de timol mediante una curva de adición patrón.
OBJETIVOS
 Cuantificar azul de timol en una muestra mediante una curva de adición patrón.
 Evaluar la calidez y validez de los resultados experimentales mediante
parámetros estadísticos.
EQUIPOS, MATERIALES Y REACTIVOS
EQUIPOS/ftATERIALES REACTIVOS
 1 Gradilla.  ftuestra problema de azul de timol.
 7 Tubos de ensaye.  H2O destilada.
 3 Vasos de PP. de 50 mL.  Estándar de azul de timol.
 1 Pipeta de 5 mL.  NaOH 0.1 ft.
 1 Pipeta de 10 mL.
 1 Prepipeta.
 1 Piceta.
 1 ftatraz volumétrico de 50 mL.
 1 Espectrofotómetro.
MÉTODOS

1) Preparación de soluciones y sistemas.

1.1 Preparación de soluciones:
 Solución de NaOH 0.1 ft: Pesar 0.5 g de reactivo analítico y aforar a 100 mL
(por equipo) R-1.
 Solución estándar: Se prepara una solución concentrada por grupo con 20 mg
del estándar de azul de timol, disolver y aforar a 50 mL con agua destilada
(Sol. 1). Se hace la dilución (Sol. 2) por equipo: tomar 5 mL de Sol. 1 y aforar 50
mL con agua destilada.
 Solución problema: Se proporcionará por el profesor (a). Este sistema se
prepara aproximadamente a 20 ppm.
1.2 Preparación de los sistemas. (No olvide etiquetar adecuadamente cada uno).
Para construir la curva de adición patrón se preparan 6 sistemas de acuerdo con la
tabla 1. Cada sistema se prepara con el volumen constante de la solución problema
más el volumen indicado de solución estándar (Sol. 2) y completando el aforo a 10
mL con agua destilada. Si se desea, se pueden incluir más sistemas.
Tabla 1. Preparación de los sistemas para la curva de adiciones patrón.
Núm. De sistema/
volúmenes de las 0 1 2 3 4 5 6
soluciones en mL
Solución problema. 0 2 2 2 2 2 2
Solución estándar de azul
de timol (Sol. 2). 0 0 1 2 3 4 5
Solución de NaOH 0.1 ft. 3 3 3 3 3 3 3
H20 destilada. 7 5 4 3 2 1 0
2. Lectura de la propiedad por cada sistema utilizando el espectrofotómetro.
2.1 Calibración del instrumento.
Realizar la calibración del instrumento de acuerdo con el instructivo anexo y
siguiendo las indicaciones del profesor.
2.2 Obtención del espectro de absorción.
Determinación de la longitud de onda (l)
óptima.
Tomar el sistema más concentrado en relación con la solución estándar. Tomar
lecturas de absorbancia y porcentaje (%) de transmitancia en el espectrofotómetro
en el intervalo de 500 a 700 nm a intervalos de 20 nm.
Nota: por cada cambio de λ se debe calibrar el equipo. Con los datos obtenidos,
llenar la tabla 2 y construir la figura 2.
 Lectura de absorbancia para cada sistema a la longitud de onda óptima.
Tomar lectura de la absorbancia para cada uno de los sistemas a la longitud de
onda óptima (por triplicado). Las lecturas se realizan del sistema más diluido al
más concentrado, enjuagando la celda. Llenar la tabla 3.

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Tabla 2. Datos experimentales del espectro de absorción.

Longitud de onda (nm) 505 525 545 565 585 605 625 645 665 685 705
Absorbancia 0.202 0.363 0.540 0.778 1.02 1.16 0.832 0.323 0.047 -0.067
Transmitancia 0.628 0.434 0.288 0.167 0.095 0.069 0.147 0.475 0.897 1.167
%T 62.80 43.4 28.8 16.7 9.5 6.918 14.7 47.5 89.7 116.7
Con los datos obtenidos se realizó la gráfica de las absorbancias con respecto a los
intervalos de longitud de onda establecidos, analizando de manera gráfica que la
longitud de onda óptima es de 605 nm como se muestra abajo, dado que es el
punto más alto observado en la curva.

Datos experimentales del espectro de

absorción (para la
1.4 longitud de onda óptima)
1.2
1 1.16
0.8 1.02
0.6 0.832
Absorbanci

0.4 0.778
0.2 0.540
0
-0.2 0.363 0.323
0.202
0.047
60 -0.067
0 100 200 300 400 500 0700 800
Longitud de onda (nm)

Figura 1. Determinación de λ óptima.

Longitud de onda óptima determinada: 605 nm.
 Tabla 3. Datos de la curva de adición patrón para cada sistema a 605 nm de
longitud de onda.
Sistemas Absorbancia
0 0
1 0.319
2 0.455
3 0.767
4 0.908
5 1.11
6 1.40
Calculando las concentraciones para graficar la curva de adición tenemos lo
siguiente:
 Concentración de la solución 1:
Tenemos 20 mg del estándar de azul de timol, aforado en 50 mL de
agua destilada, que se resume a:
20 𝑚𝑔 𝑑𝑒 𝑎𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙 𝑚𝑔
50 𝑚𝐿 𝑑𝑒 𝑎𝑔𝑢𝑎 𝑑𝑒𝑠𝑡𝑖𝑙𝑎𝑑𝑎 = 0.4
𝑚𝐿

 Concentración de la solución 2:
De la fórmula: 𝐶1 ∙ 𝑉1 = 𝐶2 ∙ 𝑉2
Tenemos que C1 = 0.4 mg/mL, V1 = 5 mL, C2 = x, V2 = 50 mL.
𝑚𝑔
(0.4 )(5 𝑚𝐿)
𝑚𝐿
𝐶1 = = 0.4 𝑚𝑔 = 40 𝑚𝑔 = 40 𝑝𝑝𝑚
50 𝑚𝐿
𝑚𝐿 𝐿

 Concentraciones de las soluciones estándar:

Se parte de que el volumen de cada uno de los sistemas (tubos de ensayo) es de
10 mL. Tomando en cuenta que V0 = mL de solución 2 en cada sistema, Vf = 10 mL,
Concentración = 40 ppm, Cs = concentración de las soluciones (lo que buscamos):
 𝐶1 ∙ 𝑉1 = 𝐶2 ∙ 𝑉2

Que se traduce en: 40 𝑝𝑝𝑚 ∙ 𝑉0 = 𝐶𝑠 ∙ 10 𝑚𝐿

Consiguiendo así las siguientes concentraciones que le corresponden a cada uno de
las absorbancias, ya ajustado al blanco:
Tabla 4. Curva de adiciones patrón.
Sistema 1 2 3 4 5 6
Concentración de azul de timol (mg/L) 0 4 8 12 16 20
Absorbancia 0.319 0.455 0.767 0.908 1.11 1.40

Curvas de adición patrón

1.6y = 0.0537x + 0.29
1.4R² = 0.9888
1.2
1
0.8
Absorban

0.6
0.4
0.2
0

-5 0 5 10 15 20 25
Concentración de los sistemas

Figura 2. Gráfica de la concentración con respecto a la absorbancia.

Teniendo la curva de adiciones patrón y la ecuación de la recta, se procede a
realizar los cálculos para la obtención de concentración de azul de timol:
𝑦 = 0.0537 𝑥 + 0.29

𝐴 = 0.0537 (𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙) + 0.29

𝐴 − 0.29
(𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙) =
0.0537
𝑚𝑔 𝑚𝑔
(𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙) = [−5.4004 ] = 5.4004 → 𝑆𝑒 𝑎𝑝𝑙𝑖𝑐𝑜 𝑣𝑎𝑙𝑜𝑟 𝑎𝑏𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡𝑜
𝐿 𝐿
 𝑚𝑔
(𝐴𝑧𝑢𝑙 𝑑𝑒 𝑡𝑖𝑚𝑜𝑙) = 5.4004 𝐿 = 5.4004 𝑝𝑝𝑚

Teniendo en cuenta que 5.4004 ppm es la concentración del estándar diluido,

obtenemos la concentración de la muestra problema aplicando la fórmula utilizada
antes:
 C1 = Estándar diluido = 5.4004 ppm.
 V1 = Volumen en cada sistema = 10 mL.
 C2 = Incógnita (concentración que buscamos).
 V2 = ftuestra problema en los sistemas = 2 mL.
Despejamos y sustituimos los datos obtenidos en la fórmula, obteniendo:
𝐶1 ∙ (5.4004 𝑝𝑝𝑚)(10 𝑚𝐿) 𝑚𝑔
𝐶2 = = = 27.002
𝑉1 2 𝑚𝐿 𝐿
𝑉2

Después el resultado obtenido se expresa en ft (moles de soluto/litro de

disolución):
𝑀𝑎𝑠𝑎
Obteniendo primero que nada los moles de soluto: 𝑛 =
𝑃𝑒𝑠𝑜 𝑚𝑜𝑙𝑒𝑐𝑢𝑙𝑎𝑟

Utilizando una base de cálculo de 1 litro de disolución, obtendríamos que la masa en

gramos de azul de timol es de 0.027002 g y el peso molecular de azul de timol =
466.6 g/mol:
0.027002 𝑔
𝑛=
466.6 𝑔/𝑚𝑜𝑙 = 5.7870 𝑥 10 𝑀
−5

Obteniendo así que, 5.7870 𝑥 10−5 𝑀 corresponde a la concentración molar.

OBSERVACIONES

Tras finalizar la práctica me percaté de que en la figura 1, se graficó la

determinación de longitud de onda óptima a través de la medición del sistema más
concentrado en la relación solución estándar, para poder observar que el punto
máximo de absorbancia con respecto a la longitud de onda fue nada más y menos
que 605 nm.
De igual manera cuando en la figura 2 se graficó la curva de adiciones patrón de
azul de timol, observe una tendencia lineal con un poco de dispersión entre las
absorbancias, pero en general, muy apegado a la línea de tendencia.
También mientras realizaba los cálculos me di cuenta de mi deficiencia en este
tipo de ejercicios, por lo que observo que hay necesidad de practicar un poco más.
De manera general puedo decir que observe que los resultados obtenidos tienen
posibles márgenes de errores, esto debido a que era nuestra primera práctica de
manera presencial, por ende la preparación de los tubos de ensayo
(sistemas) pueden que no hayan sido tan exactos arrojando ligeras diferencias
entre los resultados esperados, aun así nada fuera de lo normal.

CONCLUSIONES

Concluida la práctica puedo decir que fue una experiencia muy general la que
obtuve, puesto que abarca desde cosas buenas hasta malas, por ejemplo aprendí
que el mantenimiento y lavado de los instrumentos de laboratorio de manera
profunda es importante, puesto que si queda una sustancia ajena de anteriores
prácticas, alteran a las sustancias agregadas de las prácticas actuales, terminando
en un resultado no esperado y consumiéndose así reactivos en la nada. De igual
manera como ya lo había mencionado anteriormente me di cuenta de que me falta
ampliar mis conocimientos y dominar un poco más esos cálculos, para
futuras prácticas.
En conclusión para ser mi primera práctica, puedo decir que las cosas resultaron
mejor de lo que esperaba, ya que más que nada iba con la intención de observar y
aprender cómo se utilizan todas las cosas. En sí pude ampliar un poco más mis
conocimientos en el área de la bioquímica, lo cual me servirá para mi desarrollo
profesional en el futuro.
ANEXOS

 Preparación de las muestras y sistemas:

 Detección de la presencia de azul de timol:

 Resultados (un ejemplo) y aparato utilizado:

 -Fuentes Bibliográficas-
Gil, ft. (2019). Lifeder. From Azul de timol: Características, preparación y
aplicaciones: https://www.lifeder.com/azul-de-timol/
Padial, J. (2016). Curiosoando. From ¿Qué es una curva de calibración?:
https://curiosoando.com
Skoog, D., Holler, F., & Crouch, S. (2008). Principios de análisis instrumental. ftéxico
D.F.: Cengage Learning.
Wilson, J. (2010). Laboratorio de experimentos físicos. Séptima edición: ftc Graw
Hill.
Zapata, F. (2020). Lifeder. From Curva de calibración: para que srive, cómo hacerla,
ejemplos: https://www.lifeder.com/curva-de-calibración/