INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

Escuela Superior de Ingeniería Química e

Industrias Extractivas
Ingeniería Química Industrial

Laboratorio de Química Analítica

OPTATIVA II
ESPECTROSCOPÍA MOLECULAR Y ATÓMICA

PRACTICA 1
“RUTINAS DE DIAGNOSTICO”

Integrantes:
➢ Lara Martínez Cinthya Karen
➢ Lopez Cortes Jose Fernando
➢ Luis Morales Ximena

Grupo: 3IV57
Profesora: Sara Patricia Santillán Ortiz

Periodo: 2022-1
 Introducción Teórica
Los espectrofotómetros son instrumentos de
medición del color que se usan para capturar y
evaluar el color. Como parte de un programa de
control del color, quién tiene una marca y
diseñadores los usan para especificar y comunicar el
color, y fabricantes los usan para supervisar la
precisión del color en toda la producción.
Figura 1: Espectrofotómetro
usado en laboratorio La curva de reflectividad espectral proporcionada por
un espectrofotómetro se suele conocer como la “huella
digital” del color. Sin duda el espectrofotómetro es el instrumento más usado para
realizar las investigaciones químicas y biológicas en diferentes ramas de la
industria. Debe estar perfectamente bien calibrado y verificado por algún laboratorio
de metrología acreditado ante organismos confiables como EMA (ENTIDAD
MEXICANA DE ACREDITACIÓN).
La exactitud fotométrica es el grado de
concordancia entre la absorbancia real y la
absorbancia medida. El error cometido al leer una
absorbancia respecto de una de referencia se
denomina entonces “inexactitud fotométrica”. Su
estudio consiste en la medición de absorbancias de
soluciones certificadas y en la comparación de los Figura 2: Imagen de una curva
de reflectividad como ejemplo.
valores hallados con los de referencia. Mientras que
la linealidad fotométrica es la capacidad de respuesta lineal de un espectrofotómetro
a diferentes concentraciones de una sustancia que cumpla la ley de Beer. Nos
permite establecer el rango de absorbancias en el que el instrumento tiene
respuestas proporcionales a los cambios de concentración.
El control se podrá realizar en espectrofotómetros con selector continuo de
longitudes de onda, no así en fotocolorímetros de filtro ni en autoanaliza dotes, ya
que en estos no se pueden realizar espectros de barrido. El espectrofotómetro utiliza
el método del punto isosbéstico: el rojo Congo tiene la particularidad que los
espectros de las formas ácida y básica del colorante en igual concentración
presentan la misma absorbancia a una longitud de onda denominada “punto
isosbéstico”.
Un punto isosbéstico es un valor de la longitud de onda para el que la absorbancia
se mantiene constante, aunque se modifiquen algunas variables como la
temperatura, el pH, etc. Estos puntos corresponden a una longitud de
onda determinada, cumpliéndose que para esa longitud de onda la absorbancia
total de la muestra no cambia, aunque esta experimente una reacción química o
cambio físico.

2
 Objetivo
Conocer las partes principales, el manejo de un espectrofotómetro UV-Visible y verificar
las condiciones actuales del equipo.

Manual de operación del equipo

I. Revisar que los equipos estén conectados a un regulador
II. Encender la impresora
III. Se recomienda prender el pc el monitor del software
IV. Encender el equipo (espectrofotómetro)
V. abrir el software en la computadora
VI. abrir el programa y elegir el método ya predestinado
VII. editar los parámetros
i) seleccionas Scan posteriormente fijas las longitudes de onda
ii) seleccionas los ejes a graficar
iii) seleccionas el número de muestras que desean analizar
iv) dentro de la pestaña instrumento, selecciona el modo Absorbancia y
posteriormente encendemos las lámparas
v) selecciona Muestra
vi) selecciona Start
vii) coloca el blanco
viii)introduce al equipo la muestra que contiene oxido de holmio
ix) cierra el compartimiento donde se introdujo la muestra y selecciona
Aceptar
VIII. Finalmente, las lecturas realizadas por el equipo se verán reflejadas

DESARROLLO EXPERIMENTAL
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES

para la solucion de para la solucion de

preparamos las
H2SO4 0.2N medimos K2Cr2O7 100ppm
soluciones una de
2.69 mL de H2SO4 y pesamos 0.01g de
H2SO4 0.2N y otra
aforamos a 500ml con dicromato y aformaos a
de K2Cr2O7 100ppm
agua destilada 100ml con H2SO4 0.2N

Preparar a partir de la
pasamos las muestras a la
solucion madre tres
celda y realizamos la
soluciones de 25,50 y
medicion con el espectro
75 ppm

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CORRIDA DEL VAPOR DEL BENCENO

• EDITAR LOS PARAMETROS DEL PROGRAMA PARA LA NUEVA

1 SUSTANCIA

• PESTAÑA SCAN LONGITUD MAXIMA 230NM

• INTERVALO DE TRABAJO 0.1NM
2 • ORDENADA MAX=1 ORDENADA MIN=0

• PESTAÑA INSTRUMENTO MODO DE ORDENADA =ABSORBANCIA

3 • APAGAR LA LAMPARA

• INTRODUCIR LAS DOS CELDAS VACIAS AL EQUIPO Y PRESIONAR

4 STAR

• ESPERAR QUE TERMINE LA CORRECCION DE LINEA BASE O

5 BARRIDO DE FONDO

• ACEPTAR EL BLANCO QUE SON LAS DOS CELDAS VACIAS

6

• AL TERMINO, INSERTAR LA MUESTRA PROBLEMA BENCENO DOS

7 GOTAS

• PRESIONAR ACEPTAR UNA VEZ INTRODUCIDA LAS CELDAS

8

• SACAMOS LAS MUESTRAS ESTANDAR UNA VEZ FINALIZADO EL

PROCESO
9 • SE OBSERVA QUE SOLO EL VAPOR SE HIZO ESPECTRO

4
CORRIDA DEL DICROMATO DE POTASIO

• EDITAR LOS PARAMETROS DEL PROGRAMA PARA LA NUEVA

1 SUSTANCIA

• PESTAÑA SCAN LONGITUD MAXIMA 450NM

• LONGITUD MINIMA 250NM
2 • INTERVALO DE TRABAJO 1NM
• ORDENADA MAX=1.5 ORDENADA MIN=0

• PESTAÑA INSTRUMENTO MODO DE ORDENADA

=ABSORBANCIA
3 • ENCENDER AMBAS LAMPARAS

• EN LA PESTAÑA MUESTRA MPODIFICAR EL NOMBRE DEL

ARCHIVO RD RUTINA DE DIAGNOSTICO
4 • MODIFICAR NOMBRES DE LAS MUESTRAS

• LAVAR CELDAS CON EL DILUYENTE H2SO4

5

• LIMPIAR LAS CARAS CRISTALINAS EXTERNAS DE LA CELDA

6

• REALIZAR LA LINEA BASE CON LAS CELDAS SIN MUESTRA

7

• LAVAR LAS MUESTRAS CON LA SOLUCION MADRE E

8 NTRODUCIR AL ESPECTROFOTOMETRO

• UNA VEZ FINALIZADO Y OBTENIDO EL ESPECTRO

9 OBSERVAMOS QUE APARECEN LAS CURVAS

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 Cálculos y resultados
a) Filtro de óxido de holmio
Datos teóricos
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
Longitud de 279 287 333.5 360.5 418 445 453 459.5 536 637 648.5
onda nm

Datos experimentales
No 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
nm 279.05 287.35 333.6 360.87 418.97 445.85 453.75 460.06 536.76 637.94 649.41

Formula para calcular el % de desviación

𝒅𝒕 − 𝒅𝒆
%𝒅 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒅𝒕
𝑫𝒐𝒏𝒅𝒆
𝒅𝒕 = 𝑫𝑨𝑻𝑶 𝑻𝑬𝑶𝑹𝑰𝑪𝑶
𝒅𝑬 = 𝑫𝑨𝑻𝑶 𝑬𝑿𝑷𝑬𝑹𝑰𝑴𝑬𝑵𝑻𝑨𝑳
279 − 279.05 453 − 453.75
%𝑑1 = ∗ 100 = −0.179 %𝑑7 = ∗ 100 = −0.1655
279 453

287 − 287.35 459.5 − 460.06

%𝑑2 = ∗ 100 = −0.121 %𝑑8 = ∗ 100 = −0.1218
287 459.5

333.5 − 333.6 536 − 536.76

%𝑑3 = ∗ 100 = −0.0299 %𝑑9 = ∗ 100 = −0.1417
333.5 536

360.5 − 360.87 637 − 637.94

%𝑑4 = ∗ 100 = −0.102 %𝑑10 = ∗ 100 = −0.1475
360.5 637

418 − 418.97 648.5 − 649.41

%𝑑5 = ∗ 100 = −.2320 %𝑑11 = ∗ 100 = −0.140
418 648.5

445 − 445.85
%𝑑6 = ∗ 100 = −0.1910
445

6
 b) Vapor de benceno

Datos teóricos
No 1 2 3 4 5 6
Longitud de 237 242.2 247.8 253.6 259.6 266.8
onda nm

Datos experimentales
No 1 2 3 4 5 6
Longitud de 236.84 241.98 247.59 253.44 259.64 266.42
onda nm

Fórmula para calcular el % de desviación

𝒅𝒕 − 𝒅𝒆
%𝒅 = ∗ 𝟏𝟎𝟎
𝒅𝒕
𝑫𝒐𝒏𝒅𝒆
𝒅𝒕 = 𝑫𝑨𝑻𝑶 𝑻𝑬𝑶𝑹𝑰𝑪𝑶
𝒅𝑬 = 𝑫𝑨𝑻𝑶 𝑬𝑿𝑷𝑬𝑹𝑰𝑴𝑬𝑵𝑻𝑨𝑳
237 − 236.84 253.6 − 253.44
%𝑑1 = ∗ 100 = 0.0675 %𝑑4 = ∗ 100 = 0.0631
237 253.6

242.2 − 241.98 259.6 − 259.64

%𝑑2 = ∗ 100 = 0.0908 %𝑑5 = ∗ 100 = −0.0154
242.2 259.6

247.8 − 247.59 266.8 − 266.42

%𝑑3 = ∗ 100 = 0.08474 %𝑑6 = ∗ 100 = 0.1424
247.8 266.8

7
 c) Linealidad Fotométrica usando 𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕
PREPARACIÓN DE SOLUCIONES:
➢ Preparar una solución de 𝐾2 𝐶𝑟2 𝑂7 de 100 ppm usando como solvente
𝐻2 𝑆𝑂4 0.2 𝑁.
Pesar 10 mg de dicromato de potasio y aforar a 100 mL con 𝐻2 𝑆𝑂4 0.2 N:
10 𝑚𝑔 1000 𝑚𝐿
𝑝𝑝𝑚 = ∗ = 100 𝑝𝑝𝑚
100 𝑚𝐿 1𝐿
➢ Preparar a partir de la solución madre tres estándares de 25, 50 y 75 ppm
usando al 𝐻2 𝑆𝑂4 0.2 N como solvente.
Usando la formula 𝐶1 𝑉1 = 𝐶2 𝑉2. Preparamos los estándares. Comenzamos por
el estándar 1°:
▪ Estándar 1°:
𝑚𝑔
𝐶2 𝑉2 (10 𝑚𝐿)(25 𝑚𝐿 )
𝑉1 = = 𝑚𝑔 = 2.5 𝑚𝐿
𝐶1 (100 𝐿 )
▪ Estándar 2°
𝑚𝑔
𝐶2 𝑉2 (10 𝑚𝐿)(50 𝑚𝐿 )
𝑉1 = = 𝑚𝑔 = 5.0 𝑚𝐿
𝐶1 (100 𝐿 )

▪ Estándar 3°
𝑚𝑔
𝐶2 𝑉2 (10 𝑚𝐿) (75 𝑚𝐿 )
𝑉1 = = 𝑚𝑔 = 7.5 𝑚𝐿
𝐶1 (100 𝐿 )
➢ Aforamos y cubrimos el matraz con papel aluminio para evitar la
descomposición fotométrica de la sustancia y etiquetamos.
VALORES OBTENIDOS DE LAS λmax DE CADA BANDA ESPECTRAL:

C (ppm) A (𝝀𝟑𝟓𝟎 )
25 0.21
50 0.4
75 0.6
100 0.8

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GRAFICA DE LINEALIDAD FOTOMÉTRICA DE 𝑲𝟐 𝑪𝒓𝟐 𝑶𝟕

Linealidad fotométrica
0.9 0.8
0.8 y = 0.0079x
0.7 R² = 0.9998
0.6
0.6
A (Λ350)

0.5 0.4
0.4
0.3 0.21
0.2
0.1 0
0
0 20 40 60 80 100 120
C (PPM)

Figura 3: Grafica de la linealidad fotométrica del equipo usando dicromato de potasio a 4

diferentes concentraciones.

Se sabe que la ecuación general de una recta es:

𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Y en espectrofotometría:
𝑦 = 𝑚𝑥
Haciendo una analogía:
𝐴𝑏𝑠 = 𝑘𝐶𝐴
𝑦 = 0.008𝑥
Entonces se obtiene un valor de 𝒌 = 𝟎. 𝟎𝟎𝟖 con una aproximación a la línea recta
de 𝑅 2 = 0.9998 representándonos una linealidad fotométrica.

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 Cuestionario
1. ¿Cuál es el fundamento de los métodos espectroscópicos de análisis?
El fundamento de los métodos espectroscópicos se enfoca en la química analítica
son basados en la interacción de la radiación electromagnética, considerando la
absorción que se genera por las radiaciones emitidas.
2. ¿Qué se entiende por transición electrónica?
Se producen saltos de electrones entre niveles de energía de un átomo.
3. ¿Cuáles son las transiciones electrónicas que se presentan en
compuestos orgánicos?
Dependen de la estructura de la molécula:
Cuando solo hay enlaces : Transiciones  → * (Alta Energia)
Cuando hay enlaces múltiples () además de  son posibles otras transiciones:
Transiciones  →  *
Transiciones  → *
Transiciones  → *
(de menor energía que la  → *)
Cuando hay electrones no enlazantes (pares de e - no compartidos) se pueden
producir otros dos tipos de transiciones:
Transiciones n → *
Transiciones n → *
4. ¿Qué tipos de compuestos se pueden analizar por esta técnica?
Los compuestos que presenten enlaces dobles conjugados, sulfatos, colorantes.
5. De dos ejemplos de compuestos que absorban en la región uv-vis.
Proporcione la formula desarrollada.
Etanol (débilmente) CH3-CH2-OH y acetaldehído C2H4O
6. Describa brevemente, ¿Cuál es el objetivo de la práctica?
Obtener los conocimientos necesarios acerca del equipo de espectrofotómetro UV-
VIS y sus grandes aplicaciones.

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7. Mencione, ¿Cuáles son las partes que constituyen un espectrofotómetro
UV-vis? Fuente, dos lámparas una de UV-Visible y otra de ultravioleta,
monocromador UV- vis 190-780 nm, compartimiento de celdas de doble haz,
detector
8. Explique cuál es el propósito de verificar los equipos antes de realizar
cualquier análisis instrumental.
Conocer las condiciones del equipo con el propósito de obtener los resultados
esperados, sabiendo que el equipo está en óptimas condiciones.
9. ¿Qué se entiende por barrido espectral?
La variación de la longitud de onda, utilizada para la búsqueda de una λ Max que
indica cuando el analito absorbe más luz.
10. ¿Qué información analítica proporcionan los resultados de un
espectrograma?
La concentración del analito, frecuencias de señales audiovisuales, representa la
energía del contenido frecuencial de la señal según va variando a lo largo del
tiempo.
11. ¿En qué tipo de industrias se puede aplicar la técnica uv-vis??
En la industria química, alimenticia, farmacéutica, eléctrica, etc.

11
 Observaciones
Se observo como se utiliza el equipo del espectro UV-VIS con la intención de que
se realice un uso adecuado del aparato y poder determinar la información requerida
del analito.
Se observaron las condiciones actuales del espectrofotómetro UV-VIS Perkin
Elmer, Lambda 25 para poder utilizarlo, sin embargo, nos permite realizar la
medición de la concentración de los analitos al conocer la absorbancia que
producen dentro del equipo.
El equipo tiene sus partes internas las cuales trabajan con ciertas sustancias que
tienen la capacidad de absorber luz, la absorción de esa luz incrementa la energía,
los cromóforos absorben la luz diferente al que nosotros podemos observar.
La luz ultravioleta es absorbida por los cromóforos y el ojo humano no lo puede
detectar, pero el equipo si, contiene un monocromador que hace que se divida la
longitud de onda para que llegue a la muestra y se realice la medición.
La muestra se coloca donde esta una tapita para protegerlo de la luz exterior, el
detector hace la medición de la luz que absorbió la muestra, siempre la luz es menor
en el detector que la que le envía la lampara.
La muestra después de pasar por las lámparas, pasan por el monocromador y con
el detector sabemos cuanta luz llega, la señal llega a un procesador y finalmente
llega a una computadora para recibir los datos.
Con la transmitancia sabemos que es la cantidad de intensidad que mide el detector
entre la cantidad de luz que emite la lampara.

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 Conclusión
Conocer el manejo y sus principales partes que conforman a un espectrofotómetro
UV-Visible es de suma importancia para poder medir la energía que irradia en forma
de luz al pasar por la muestra problema. Previamente a esto, se debe de realizar un
diagnóstico al equipo para tener un porcentaje menor de incertidumbre al realizar la
medición, para generar el diagnostico en esta práctica se analizaron 3 formas
diferentes (empleando el filtro de óxido de holmio, empleando vapor de benceno
y por medio de dicromato de potasio se verifico la linealidad fotométrica) para
poder verificar las conficiones actuales del equipo.
En cuanto a los cálculos del porcentaje de desviación aplicando el filtro de holmio
se obtienen resultados negativos debido a que la medida experimental de los puntos
máximos de absorción, pero entra dentro del rango ±𝟏𝟎 % de error, por lo tanto, los
datos obtenidos son correctos, y de la misma forma sucede en el cálculo del
porcentaje de desviación aplicando vapor de benceno. Los datos recopilados
experimentalmente no exceden del rango de error del ±𝟏𝟎 %.
Para el inciso d, se muestra la linealidad fotométrica del equipo. Por medio de la
figura 3, se puede demostrar que el equipo utilizado en laboratorio tiene la
capacidad para darnos una relación lineal de la potencia radiante incidente a
su detector y la lectura. Por lo tanto, el espectrofotómetro trabaja linealmente, es
decir, recibiremos lecturas lineales al cambiar solo la concentración de los
estándares, en este caso del dicromato de potasio.
Finalmente, se cumplió el objetivo propuesto por la práctica, se aprendió y entendió
el manejo de un espectrofotómetro UV-Visible, se localizaron sus principales partes
que lo conforman y como realizar una verificación del estado del equipo a utilizar
por medio de 3 métodos.

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 Referencias Bibliográficas:
1. x-rite. (2022). ¿Qué és un espectrofotómetro?. 18-02-2022, de x-rite Sitio
web: [Link]
resources/what-is-a-spectrophotometer
2. InstruMET. (2022). Calibración espectrofotómetro. 18-02-2022, InstruMET
de Sitio web:
[Link]
espectrofotometro
3. Duymovich, Claudio & Acheme, Rosana & Sesini, Sandra & Mazziotta, Daniel
(2005). Espectrofotómetros y Fotocolorímetros Guía práctica de
actualización. Acta Bioquímica Clínica Latinoamericana, 39 (4),529-
539.[fecha de Consulta 18 de Febrero de 2022]. ISSN: 0325-2957. Disponible
en: [Link]
4. JMGAV. (2013). Qué es un punto isosbéstico en espectroscopía y qué revela.
18-02-2022, de triplenlace Sitio web: [Link]
es-un-punto-isosbestico-en-espectroscopia-y-que-revela/

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