Universidad Nacional Autónoma de México

Facultad de Estudios Superiores Cuautitlán

Campo 1

Laboratorio de Química Analítica IV

Informe de laboratorio
_________________________________________________________
Práctica No. 1

“Determinación de azul de timol por espectroscopía UV-Vis”

_________________________________________________________

Integrantes del Equipo No 3:

Galindo López Samuel Iván

Romero Carreño Emmanuel
Santana Contreras Francisco Javier

Grupo: 2701A

Profras.: M.Q. Ruth Martínez Reséndiz / Q. Mariana Dolores Hernández

Semestre 2020-II

Objetivo general
Cuantificar Azul de Timol en una solución problema por espectrofotometría visible usando la curva de
calibración por estándar externo.

Objetivos particulares:
● Determinar la longitud de onda óptimo para cuantificar Azul de Timol en una muestra
problema.
● Determinar el coeficiente de absortividad molar para el Azul de Timol a la longitud de onda
óptima.
● Analizar la utilidad de la curva de calibración por estándar externo como método de análisis
químico en la determinación de Azul de Timol.

Introducción:
La espectroscopia es el estudio de la reacción de los materiales a la energía irradiada como la luz. La
luz blanca visible se descompone en colores separados y únicos: rojo, naranja, amarillo, verde, azul,
índigo y violeta. Estos colores, y lo que puede ver el ojo humano, son un rango muy pequeño y
limitado del espectro electromagnético de energías irradiadas.
La ley en que se basa la espectroscopia se llama ley de Beer y se expresa de este modo:

A = ε*l*c

Donde "A" significa absorbancia, “ε” es capacidad de absorción molar (también llamado coeficiente
de absortividad molar), "l" es la longitud de la trayectoria y "c" es la concentración.

Visible y ultravioleta (espectrómetros UV-VIS)

La fuente de energía irradiada de varios espectrómetros es la luz visible, o bien, la luz visible y la
ultravioleta. Generalmente, la ultravioleta (UV) cubre el rango de longitud de onda de 190 a 400 nm y
la visible (VIS) cubre el rango de 400 a 800 nm. Algunas moléculas reaccionan a la luz dentro del
rango UV o tienen enlaces que reaccionan a la luz en el rango de luz UV, por lo que necesitan el
rango UV adicional del espectrómetro.

Azul de timol

Todas las moléculas orgánicas son capaces de absorber la radiación electromagnética en la región
visible del espectro, la gran mayoría también absorben en la región de infrarrojo (IR). Las energías de
excitación relacionadas con los electrones que forman los enlaces más sencillos son muy elevadas
de forma que su absorción se restringe a la zona del UV de vacío (<185 nm), lo que conlleva
problemas de trabajo experimental. Por encima de 185 nm la absorción se restringe a enlaces más
complejos o ciertos grupos funcionales (cromóforos) con electrones de valencia con energías de
excitación más bajas.

El azul de timol es un compuesto orgánico usado en laboratorio como indicado de pH. Es un polvo de
color verde insoluble en agua, soluble en alcohol etílico y ácido acético, tiene un olor característico.
Se descompone en ebullición, su densidad a 20°C es de 1,19 kg/L, su punto de fusión está en el
rango de 221-224 °C. Es irritante y levemente nocivo.

Su fórmula química es 𝐶27 𝐻30 𝑂5 𝑆y tiene un peso molecular de 466.60 g/mol

Vira en el intervalo de 1,2 a 2,8. Presenta coloración roja en un medio más ácido y amarilla en un
medio menos ácido. La coloración amarilla la mantiene de 2,8 hasta el intervalo 8,0-9,6 que vira a
azul.

Procedimiento experimental:
ppp

Resultados experimentales:
Tabla 1.- Espectro de absorción para el azul de Timol en medio ácido.
Longitud de onda (𝜆) Absorbancia Longitud de onda (𝜆) Absorbancia
(nm) (nm)

440 0.298 530 0.92

450 0.270 540 1.02

460 0.265 550 0.784

470 0.253 560 0.552

480 0.282 570 0.538

490 0.358 580 0.336

500 0.444 590 0.197

510 0.596 600 0.092

520 0.748
 Gráfica 1.- Espectro de absorción para el Azul de timol en medio ácido.

Tabla 2.- Espectro de absorción en medio básico equipo “1”

Longitud de onda (𝜆) Absorbancia Longitud de onda (𝜆) Absorbancia
(nm) (nm)

550 0.582 610 0.935

560 0.690 620 0.768

570 0.812 630 0.560

580 0.920 640 0.368

590 1.025 650 0.232

600 0.995

Tabla 3.- Espectro de absorción en medio básico equipo “2”

Longitud de onda (𝜆) Absorbancia Longitud de onda (𝜆) Absorbancia
(nm) (nm)

550 0.42 610 0.612

560 0.492 620 0.467

570 0.569 630 0.304

580 0.641 640 0.182

590 0.691 650 0.101

600 0.693
 Tabla 4.- Resultados de absorbancia para la curva de calibración y la muestra
problema a 540 y 490 nm respectivamente
Matraz Concentración Absorbancia Absorbancia
(1𝑥10−5 ) (𝜆 = 540 𝑛𝑚) (𝜆 = 490 𝑛𝑚)
(M)

1 3.64 1.02 0.325

2 2.9 0.855 0.272

3 2.18 0.626 0.200

4 1.46 0.416 0.131

5 0.7286 0.212 0.062

6 0.36 0.109 0.028

muestra problema 𝜆(540 𝑛𝑚) = 1.8373 0.528 0.176

𝜆 (490 𝑛𝑚) = 1.9469

Análisis de resultados:
Espectro de Absorción.
Con la intención de observar el efecto del medio en el sistema se comparan los
espectros obtenidos en medio básico (2) y en medio ácido (1), siendo que se traslapan
en una sola gráfica, la cual nos muestra los diferentes valores de absorbancia al
modificar la longitud de onda; de tal modo que se puede realizar la selección de
longitud de onda óptima para la posterior cuantificación de la solución problema.
Debido a que el espectro de absorción es una huella digital de cada sustancia en
particular y que al estar sometido el azul de timol en un medio ácido y básico, éste
cambia su estructura al desprotonarse o protonarse, lo que se ve reflejado en las dos
curvas en los espectros de absorción recorridas que a pesar de ser la misma
sustancia sufre un cambio por el medio disuelto y por lo tanto el espectro también.
 Gráfica 2.- Espectro de absorción de Azul de Timol para diferentes medios.

Al observar el espectro, se nota en un principio que el medio influye de tal modo que
la longitud de onda de máxima absorbancia se ve desplazada, esto debido a que los
colores de la sustancia son diferentes (en medio básico el color del analito es color
azul y en medio ácido el color es rojo), esto es, la longitud de onda varía de acuerdo
al color que presenta la sustancia en cuestión.
Se seleccionó, la longitud de onda de máxima absorbancia para el medio ácido,
encontrándose ésta a 540 nm. Además, se consideró tomar un valor diferente a éste
para poder comparar los resultados posteriores al momento de realizar la
cuantificación siendo el valor seleccionado a 490 nm. Sin embargo es preciso aclarar
que de acuerdo a el comportamiento de los diferentes medios seria mejor partir del
medio básico como medio para la curva de calibración esto debido a que como
podemos notar los valores de absorbancia maximos no se encuentran tan lejanos
cuando se compara el medio ácido y el medio básico, siendo que esto no sea un factor
a considerar; sin embargo, en el caso del medio básico vemos que el pico resultante
de los diferentes valores de absorbancia nos muestran una mayor anchura, es decir
que comparado con el medio ácido, existen menos variaciones de absorbancia
cuando se esta cercano a la longitud de onda de maxima absorbancia, caso contrario
a lo sucedio en el medio ácido que cuando se modifica un poco la longitud de onda,
la absorbancia decae de manera significativa, de modo que el medio básico nos
otorgaria la posibilidad de minimizar el error si la longitud de onda varia un poco.
Siendo por ello que de acuerdo a los pka´s=2.7 y 8.6 la especie que tiene mayor
absorbancia y cuyo valor de absorbancia no varia mucho al modificar la longitud de
onda cercano al valor maximo de absorbancia seria la especie de el azul de timol
cuando se encuentra sin sus dos protones acidos.

Curvas de calibración
Una vez seleccionados los valores de longitud de onda de trabajo, se procede a
realizar las respectivas gráficas correspondientes a la curva de calibración del
experimento. (Los valores fueron tomados de la “Tabla 4”, siendo que la respuesta
fuese la absorbancia cuando se modifica la concentración del sistema).

Grafica 3.- Curva de calibración para la longitud de onda de máxima absorbancia

Gráfica 4.- Curva de calibración para una longitud de onda máxima seleccionada de
490 nm

El propósito de las gráficas anteriores es obtener la ecuacion de la recta que nos

permita obtener la concentración de azul de timol de una muestra problema,
apoyandonos para ello en la ecuacion de Lambert Beer a modo que:
𝐴 = 𝜖𝑏𝑐
𝑦 = 𝑚𝑥 + 𝑏
Observando de este modo que la pendiente de la ecuación es el producto del
coeficiente de absortividad molar (𝜖) y la longitud del paso óptico (1 cm), la
respuesta analitica es la variable dependiente (y) y la concentración del sistema es
la variable independiente (x); de este modo basta con despejar la concentración de
la especie para poder obtener este valor, como se muestra a continuación:
 𝐴𝑏𝑠𝑜𝑟𝑏𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 − 𝜖(1 𝑐𝑚)
[𝐶𝑜𝑛𝑐𝑒𝑛𝑡𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 (𝑀)] =
𝑜𝑟𝑑𝑒𝑛𝑎𝑑𝑎 𝑎𝑙 𝑜𝑟𝑖𝑔𝑒𝑛
Y obteniendo los siguientes valores (por calculadora):
● Longitud de onda de 540 nm
𝑟 2 = 0.99836; m=𝜖 = 28,337.42172 𝑀−1 𝑐𝑚−1 ; 𝑏 = 7.2726𝑥10−3
● Longitud de onda de 490 nm
𝑟 = 0.9981; m=𝜖 = 9,240.2423 𝑀−1 𝑐𝑚−1 ; 𝑏 = −3.9359𝑥10−3
2

Siendo que al momento de sustituir los respectivos valores de absorbancia para las
dos diferentes longitudes de onda seleccionadas (mostrados en la “Tabla 4”), se
logró obtener la concentración de la muestra para cada valor de longitud de onda,
como se muestra a continuación:

Tabla 5. Valores obtenidos de concentración de la especie en molaridad y de

coeficiente de absortividad molar para los dos valores diferentes de longitud de onda
seleccionados
Longitud de onda Concentración de Azul de Valor de coeficiente de
(nm) Timol (1𝑥10−5 ) absortividad
(M)

540 1.8375 28,337

490 1.9469 9,240.2

Asi mismo, la tabla anterior nos muestra los dos valores obtenidos de coeficiente de
absortividad molar para las dos longitudes de onda seleccionada siendo que para
obtenerlas basta con tomar el valor de la pendiente que nos otorga el programa de
excel para las graficas “3” y “4”, de tal modo que la longitud del paso optico es 1 cm,
el valor de la pendiente es directamente el coeficiente de absortividad molar,
obteniendose en unidades de 𝑀−1 𝑐𝑚−1 y notando que existe una clara diferencia al
momento de cambiar la longitud de onda de trabajo. Para poder explicar esto nos
apoyamos en el concepto de coeficiente de absortividad molar que se define como
la característica de una sustancia que nos dice cuanta luz absorbe a una longitud de
onda determinada (Harris,2007); es decir, una constante propia de cada sustancia y
que varia al momento que la longitud de onda se ve modificada debido a que al
momento de seleccionar una longitud de onda de trabajo, esta especie cuenta con
una absorbancia, de modo que si no es la longitud de onda de máxima absorbancia
(𝜆 = 490 𝑛𝑚), el valor de 𝜖 se verá disminuido, debido a que la absorbancia y la
longitud son directamente proporcionales. Es por ello que generalmente se hace uso
de la longitud de onda cuyo valor tenga la mayor absorbancia de la especie en
cuestión.

Cuantificación
Una vez obtenida la concentración molar del sistema problema es decir la solucion
original una vez que se le hizo un tratamiento en este caso un aforo a 25 mL con
HCl [0.1 M] tomando para ello una alicuota de 0.5 mL de la solucion original siendo
los resultados los mostrados en la “Tabla 5” y convirtiendo las unidades a mg/mL y
ppm se llega a:
● Longitud de onda de trabajo de 540 nm
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 466.6 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 1,000 𝑚𝐿
1.8375𝑥10−5 𝑥 = 8.5737𝑥10−3 𝑥
𝑚𝐿 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 𝑚𝐿 1𝐿
= 8.5737 𝑝𝑝𝑚
Por lo tanto para obtener la concentración de la muestra original basta con invertir el
factor de dilución utilizado obteniendo la concentración que se muestra a
continuación:
25 𝑚𝐿 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇
1.8375𝑥10−5 M x 0.5 𝑚𝐿 = 9.1875𝑥10−4 𝑚𝐿
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 466.6 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 1,000 𝑚𝐿
9.1875𝑥10−4 𝑥 = 0.4286 𝑥 = 428.6 𝑝𝑝𝑚
𝑚𝐿 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 𝑚𝐿 1𝐿

● Longitud de onda de trabajo de 490 nm

Sistema problema:
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇 466.6 𝑚𝑔 𝐴.𝑇 𝑚𝑔 𝐴.𝑇 1,000 𝑚𝐿
1.9469𝑥10−5 𝑥 = 9.0842𝑥10−3 𝑥 = 9.0842 𝑝𝑝𝑚
𝑚𝐿 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇 𝑚𝐿 1𝐿

Solucion problema (muestra original):

25 𝑚𝐿 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇
1.9469𝑥10−5 M x 0.5 𝑚𝐿 = 9.7345𝑥10−4 𝑚𝐿
𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 466.6 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 𝑚𝑔 𝐴. 𝑇 1,000 𝑚𝐿
9.7345𝑥10−4 𝑥 = 0.4542 𝑥 = 454.2 𝑝𝑝𝑚
𝑚𝐿 1 𝑚𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 𝑚𝐿 1𝐿

Como podemos notar la variación de la longitud de onda de trabajo para la

cuantificación de un producto es un factor clave, ya que apesar de que los
resultados queden en el mismo orden, existe una variacion de aproximadamente 25
ppm en la muestra original, lo que a simple vista no es una cantidad muy elevada,
sin embargo en otras cuestiones podria representar una variacion significativa que
nos lleve a un error de determinación. Por esto mismo es preciso aclarar que la
cuantificación, nos dara valores mas certeros generalmente cuando se trabaje con
la longitud de onda de maxima absorbancia de la especie.

Conclusiones:

Cálculos
 ● Solucion “A”
Para preparar la solucion stock se preparo una solución previa a la que se etiquetara
como sustancia “A” siendo que el Azul de Timol unicamente era soluble en soluciones
basicas, se disolvio con NaOH [0.1 M] a un volumen de aforo de 10 mL como se
muestra a continuación
A.T: Azul de Timol
1 𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇 1 𝑚𝑜𝑙 𝐴.𝑇
0.017 𝑔 𝐴. 𝑇 𝑥 𝑥 = 3.64𝑥10−3 𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻 ó 𝑀 Solucion “A”
466.6 𝑔 𝐴.𝑇 0.01 𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻

● Solucion madre o stock

Para preparar la solucion madre se tomo una alicuota de la solucion anterior con el
indicador ya disuelto aforandola con ácido clorhídrico [0.1 M] para imponer el medio,
obteniendo lo siguiente:
𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇 0.5 𝑚𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻 1,000 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 1 𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻
3.64𝑥10−3 𝑥 𝑥 𝑥
𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻 25 𝑚𝐿 𝐻𝐶𝑙 1 𝐿 𝐻𝐶𝑙 1,000 𝑚𝐿 𝑁𝑎𝑂𝐻
𝑚𝑜𝑙 𝐴. 𝑇
= 7.2867𝑥10−5 ó𝑀
𝐿 𝐻𝐶𝑙

● Sistemas para la curva de calibración (matraces)

Número Solución Factor de dilución Concentración

sistema Stock (M)

1 5 3.64𝑥10−5
( )
10
2 7.2867𝑥10−5 4 2.9𝑥10−5
x ( )
M 10
3 3 2.18𝑥10−5
( )
10
4 2 1.46𝑥10−5
( )
10
5 1 7.2867𝑥10−6
( )
10
 6 0.5 3.64𝑥10−6
( )
10

Referencias: