Estudio de algunos factores que afectan al establecimiento de un

método espectrofotométrico
Metodos Numericos (M315)

Instituto Politécnico Nacional

Escuela Nacional de Ciencias Biológicas
Laboratorio de métodos de análisis

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Alumna: Arriaga Estrada Ailyn Cytlalli

Profesora: Lorena Rodríguez Páez

5IV1

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Objetivos

 Aprender a usar los tubos comunes que se encuentran en los laboratorios

de la escuela para usarlos como “cubetas” en el espectrofotómetro.
 Conocer términos básicos y sus diferencias para la correcta comprensión
de la practica.
 Diferenciar algunos de los parámetros que intervienen en el establecimiento
de un método espectrofotométrico.
 Conocer el procedimiento para obtener el limite de detección.
 Aprender a interpretar las diversas graficas y que datos podemos obtener
atraves de ellas.
 Establecerá las condiciones óptimas de los parámetros probados para la
aplicación del método.

Resultados y discusión

Tabla 1. Selección de tubos comunes para usarlos como celdas.

Tubo No %T 400 (H2O) %T 400 (NiSO4)

1 95 100
2 95.8 24.9
3 95.9 24.9
4 95.6 24.6
5 95.1 24.6
6 95.1 24.5
7 95.5 24.7
8 95.8 24.9
9 96.2 24.7
10 95.4 24.8
11 95.3 24.4
12 95.5 24.9
13 95.8 24.8

Para hacer la selección de tubos como cubetas se tuvo que buscar una seri de tubos con
superficies equivalentes, que no tuvieran ninguna imperfección y que el grosor de su pared fuera
similar, esto con el fin de evitar variaciones en los resultados obtenidos durante la practica.

Con respecto al diámetro interno equivalente, se seleccionaron tubos con un paso de luz con una
variación no más de 2% para así reducir un poco algunos errores que se pueden presentar en los
resultados

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Curva de calibración

Tabla 2. Curva de calibración de fe3+ por el método del NH4SCN

Tubo No Fe3+ (μg/mL) A480 y A ajustada ŷ y-ŷ (y - ŷ)^2

1 0.116 0.018 0.0483 -0.030 0.000916
2 0.349 0.054 0.0798 -0.026 0.000666
3 0.698 0.114 0.1271 -0.013 0.000172
4 1.164 0.193 0.1902 0.003 0.000008
5 1.745 0.279 0.2690 0.010 0.000100
6 2.327 0.337 0.3478 -0.011 0.000117
7 2.909 0.428 0.4266 0.001 0.000002
8 3.491 0.511 0.5055 0.006 0.000030
9 4.072 0.618 0.5843 0.034 0.001135
10 4.654 0.673 0.6631 0.010 0.000097
11 5.818 0.863 0.8208 0.042 0.001781
12 8.145 1.161 1.1361 0.025 0.000619
13 12.799 1.719 1.7668 -0.048 0.002281

Grafica 1 curva de calibración de Fe3+ por el método del NH4SCN

2
y = 0.1355x + 0.0325
1.8
R² = 0.9972
1.6

1.4
ABSORBANCIA

1.2

0.8

0.6

0.4

0.2

0
0.000 2.000 4.000 6.000 8.000 10.000 12.000 14.000
CONCENTRACION (ΜG/ML)

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Pregunta:

¿Sigue esta reacción la Ley de Bouger y Beer? Explique.

Si ya que como podemos ver en la grafica la relación que hay entre la absorbancia
y la concentración es lineal, y la ley de Bouguer y Beer dice que la absorbancia y
la concentración son directamente proporcionales.

DETERMINACIÓN DEL LIMITE DE DETECCIÓN

Se define como la concentración mínima de sustancia que puede ser detectada

con fiabilidad por un método analítico determinado (Boqué, n.d.).
3(0.025)
𝐿𝐷𝐷 = = 0.5773
0.1345
El valor obtenido es la mínima cantidad que puede detectar este método
espectrofotométrico. Conocer el límite de detección nos sirve para establecer la
concentración de nuestro analito y la elección de nuestro blanco.

GRÁFICA DE RINGBOM

TABLA 3. DATOS PARA APLICAR EL MÉTODO DE RINGBOM EN LA

DETERMINACIÓN DE Fe3+ POR EL MÉTODO DEL SCN-
Tubo No. Fe3+ Log[Fe3+] A480 %T Absortancia
(μg/mL)
1 0.116 -0.936 0.018 95.94 4.06
2 0.349 -0.457 0.054 88.3 11.692
3 0.698 -0.156 0.114 76.91 23.087
4 1.164 0.066 0.193 64.12 35.879
5 1.745 0.242 0.279 52.6 47.398
6 2.327 0.367 0.337 46.025 53.974
7 2.909 0.464 0.428 37.32 62.675
8 3.491 0.543 0.511 30.83 69.168
9 4.072 0.610 0.618 24.09 75.901
10 4.654 0.668 0.673 21.23 78.768
11 5.818 0.765 0.863 13.7 86.291
12 8.145 0.911 1.161 6.9 93.098
13 12.799 1.107 1.719 1.9 98.09

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Grafica 2 Grafica de Ringbom

120

100

80
ABSORTANCIA

60

40

20

0
-1.5 -1 -0.5 0 0.5 1 1.5
LOG FE3+

230.3
%𝐸𝑃 = = 2.579
89.302
La gráfica de Ringbom nos permite evaluar la sensibilidad y el margen de error del
método ya que para que haya una medida de concentración del analito con un
error mínimo, la concentración de este debe ser ajustada a un intervalo. En este
caso el intervalo de la es en las concentraciones de 2.327 a 4.072 (µ/mL) ya que

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aquí podemos ver un comportamiento lineal y estos corresponden a los valores de

absorbancia desde 0.337 a 0. 618.

ESTABILIDAD DEL COLOR CON RESPECTO AL TIEMPO

Tabla 4. Estabilidad de color con respecto al tiempo

Tiempo A480
(min)
0 0.524
30 0.49
60 0.454
90 0.433
120 0.406
0.6

0.5

0.4
A480

0.3

0.2

0.1

0
0 20 40 60 80 100 120 140
TÍEMPO (MIN)

Grafica 3 estabilidad del color con respecto al tiempo

Pregunta:¿Es estable el color? ¿Cuál es el tiempo óptimo para hacer las lecturas?

Podemos decir que el color no es estable ya que en la grafica después del tiempo
0 empieza a variar la lectura de absorbancia.
Y el tiempo óptimo para hacer las lecturas seria en el tiempo 0 una vez que hemos
agregado el NH4SCN.

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EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL CROMÓGENO EN LA

DETERMINACIÓN DE Fe 3+

Tabla 5 efecto de la concentración del cromógeno en la determinación de Fe 3+

Tubo FeCl3 Agua NH4SCN [SCN-] [Fe3+] SCN- A480

/Fe3+
No 0.00025 M destilada(ml) 0.5 M (ml) (μg/mL) (μg/mL
(ml)
Blanco 0 4.85 0.15 871.23 0 0 0
1 1.5 3.45 0.05 290.41 4.189 69.33 0.253
2 1.5 3.35 0.15 871.23 4.189 207.99 0.38
3 1.5 3 0.5 2904.1 4.189 693.31 0.508
4 1.5 2.5 1 5808.2 4.189 1386.62 0.581
5 1.5 2 1.5 8712.3 4.189 2079.93 0.641
6 1.5 1.05 2 11616.4 4.189 2773.24 0.67
7 1.5 1 2.5 14520.5 4.189 3466.55 0.706

Grafica 4 efecto de la concentración del cromógeno en la determinación de Fe 3+

0.9
0.8
0.706
0.67
0.7 0.641
0.581
0.6 0.508
0.5
A480

0.38
0.4
0.3 0.253

0.2
0.1
0
0
0 500 1000 1500 2000 2500 3000 3500 4000
SCN-/FE3+

Pregunta: De acuerdo a la gráfica, ¿qué concentración de tiocianato se

recomienda?
14520.6(µ/mL)

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EFECTO DEL pH EN EL DESARROLLO DEL COLOR

Tabla 6 efecto del pH en el desarrollo del color

Tubo No. pH A480

1 0 0.82
2 1 0.935
3 2 0.975
4 7 0.023
5 8 0.016
1.2

0.8

0.6
A480

0.4

0.2

0
0 2 4 6 8 10
-0.2
PH

Grafica 5 efecto del pH en el desarrollo del color

Pregunta: ¿De qué manera influye el pH en el sistema colorido?

En medios ácidos el sistema es colorido pero al pasar a medio alcalino disminuye la

absorbancia y esto indica que el color disminuye.

Pregunta: ¿Cuál es el pH recomendado para que se efectúe la reacción Fe3+-SCN-?

2pH

Efecto de aniones en la reaccion Fe3+ - SCN-

Tabla 7 E
Efecto
fecto de aniones en la reaccio
reaccionn Fe3+ - SCN
SCN--

ANIÓN A480 inicial A480 final

Floururo 0.827 0.152
Oxalato 0.815 0.144

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Tartrato 0.805 0.79

Fosfato 0.807 0.799

0.9

0.8

0.7

0.6

0.5

0.4

0.3

0.2

0.1

0
Floururo Oxalato Tartrato Fosfato

Grafica 6 Efecto de anion

aniones
es en la rea
reaccion
ccion Fe
Fe3+
3+ - S
SCN-
CN-

Pregunta: ¿Cuál es el efecto de los diferentes aniones sobre la reacción entre el

ión férrico y el tiocianato? ¿A qué se debe este efecto?
Según los datos analizados en la practica los aniones que afectan de una manera significativa el
desarrollo del color son el fluoruro y el oxalato. Esto debido a los aniones que poseen las cargas
positivas del hierro. Tambien debido a que forman compuestos estables, más que con los fosfatos.

Conclusiones

Podemos concluir con base a los datos obtenidos que el pH óptimo para esta
reacción es el ácido que se necesita una curva de calibración para todo método
espectrofotométrico sabemos también que los tubos utilizados deben de tener un
diámetro interno y superficies ópticas equivalentes para utilizarse como celdas de
análisis espectrofotométricos y que a medida que pasa el tiempo la observancia
disminuye y provoca una disminución en el color estas reacciones se basan en un
complejo de transferencia de carga por la excitación de los electrones y la
electronegatividad de los diferentes acciones influyen por el complejo.

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Parámetro Valor óptimo

pH 2
Tiempo 0
Concentración de SCN- 14520.6 (µ/mL)

Límites de concentración con % Ep Concentración: 2.327 (µ/mL)- 4.072(µ/mL)

mínimo %Ep=2.579

Aniones que interfieren (en orden Fluoruro, oxalato, tartrato y fosfato.

creciente)

Límite de detección del método 0.5773

EJERCICIO

Error predeterminado del 4%

230.3 230.3
𝑚= = = 57.57
%𝐸𝑝 4%

R= intervalo de concentraciones entre -0.55 µg/mL y 1.2 µg/mL

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Bibliografía

 “ESTUDIO DE UN MÉTODO ESPECTROFOTOMÉTRICO PARA LA DETERMINACIÓN DE HIERRO Y

COBRE EN AGUARDIENTE” ROSA IDALIA DUARTE BARRAZA MILDRED LILIETH GONZÁLEZ
RODRÍGUEZ FIDEL LÓPEZ GÓMEZ MONOGRAFÍA DE LICENCIATURA. (n.d.).
http://riul.unanleon.edu.ni:8080/jspui/retrieve/3725
 Boqué, R. (n.d.). EL LÍMITE DE DETECCIÓN DE UN MÉTODO ANALÍTICO.
http://www.quimica.urv.cat/quimio/general/lod.pdf

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