Validación técnica de una PCR: Reacción en cadena de la polimerasa para

la detección de Chlamydia trachomatis

INTRODUCCION

Chlamydia:Palabra del griego khlamýs, khlamýdös que significa "capa"

o"encapotado". La Chlamydia es una bacteria Gram negativa, no móvil, de
vida parasitaria intracelular obligada porque carece de habilidad para
sintetizar ATP, son parásitos energéticos, no tienen vida libre y colonizan
el citoplasma de las células susceptibles. 

 La PCR es un método enzimático in vitro que permite la amplificación de

una secuencia específica del ADN.

Esta técnica se basa en el uso de dos oligonucleótidos que luego de

reconocer la secuencia complementaria en la molécula de ADN, son
alargados cíclicamente mediado por la acción de la ADN Polimerasa. Cada
ciclo de la técnica generalmente 20 ó 30 en total, implica la
desnaturalización del ADN, el apareamiento de los oligonucleóticos y la
síntesis del nuevo fragmento de ADN a partir del oligonucleótido, lo que
resulta en un crecimiento exponencial de millones de copias del fragmento
seleccionado.

METODOLOGÍA

CARACTERISTICAS DE Chlamydia  trachomatis 

En un microorganismo intracelular obligado que infecta a las células

del epitelio plano, glandular y especialmente el de reparación o de
metaplasia.
Es una bacteria Gram-negativa, aerobia y no móvil.
 La Chlamydia es reconocida como el patógeno de transmisión sexual
más común en el mundo.
Tiene propiedades similares a los VIRUS , ya que contienen DNA Y
RNA.
Se comporta como PARASITO intracelular ya que utiliza las
proteínas celulares para su crecimiento y multiplicación.

Chlamydia trachomatis características

No pueden sintetizar ATP *, por lo que requieren un hábitat
intracelular.
Inhibición de fusión de los lisosoma
Se dividen por fisión binaria.
Son esféricas u ovaladas observándose como cocos.
Morfológicamente presenta dos estructuras diferentes que son los
llamados Cuerpos Elementales (CE) y los Cuerpos Reticulados (CR).
la Chlamydia se adhiere a la base de los micro vellos de la célula y
de allí se interna por un mecanismo de endocitosis. *Trifosfato de
adenosina (ATP), molécula que se encuentra en todos los seres vivos
y constituye la fuente principal de energía utilizable por las células
para realizar sus actividades.

La diferencia de la Chlamydia de otras bacterias y de los viruses que

presentan dos estructuras morfológicas diferentes. Cuerpos Elementales.
Cuerpo Reticulares.

Estudio experimental en el que se optimizaron las condiciones de PCR para

la detección in vitro de C. trachomatis. Se utilizó ADN de C. trachomatis y
los cebadores, que amplificaron un segmento de 201 pb del plásmido
clamidial. Se realizaron diluciones logarítmicas de ADN clamidial y fueron
empleados para determinar la sensibilidad analítica expresada como copias
de plásmidos y/o de cuerpos elementales. La especificidad analítica de la
prueba se evaluó usando los cebadores CtP1 y CtP2 y ADN de
microorganismos colonizadores y/o patógenos urogenitales. La variabilidad
intraensayo fue evaluada sobre muestras por triplicado, mientras que la
variabilidad interensayo se determinó mediante comparación de los
resultados obtenidos por tres técnicos en diferentes días. Resultados: Las
condiciones de PCR para la amplificación del gen de interés fueron
establecidas. La sensibilidad analítica de la PCR fue de 10-17 g de ADN,
equivalentes a una copia del plásmido o menos de un cuerpo elemental de
C. trachomatis. Los cebadores CtP1 y CtP2 amplificaron específicamente el
ADN de C. trachomatis bajo las condiciones experimentales evaluadas. La
repetitibilidad y reproducibilidad de la PCR se determinó con experimentos
de variabilidad intra e interensayo respectivamente. Conclusiones: La
estandarización de esta PCR es el primer paso para su utilización en el
diagnóstico de infecciones por C. trachomatis. Se requieren estudios
adicionales de validación clínica de esta prueba.

Chlamydia trachomatis es el patógeno que causa el mayor número de

infecciones urogenitales en el mundo cada año, produciendo enfermedades
de tipo agudo como uretritis y cervicitis e infecciones persistentes que
frecuentemente son asintomáticas y pueden llegar a producir
complicaciones crónicas. La infección natural con C. trachomatis no
protege contra la reinfección y actualmente no existe una vacuna contra
esta bacteria, por lo tanto, el diagnóstico y tratamiento oportuno de los
individuos infectados es la principal herramienta para el control de la
transmisión.

INTERACCIÓN HUÉSPED
 Parásito La característica más notable de la infección por Chlamydia
trachomatis es el equilibrio que con frecuencia se alcanza entre el huésped
y el parásito, y que resulta en una infección prolongada persistente. La
propagación de una especie a otra conduce con frecuencia a la enfermedad.
El huésped infectado regularmente produce anticuerpos a varios antígenos
de Chlamydia que tienen escaso efecto protector contra la reinfección. Por
lo general, el agente infectante persiste en presencia de títulos aumentados
de anticuerpo.

https://core.ac.uk/download/pdf/322588843.pdf

http://www.scielo.org.co/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S0120-
55522016000300004

http://www.scielo.org.co/pdf/sun/v32n3/v32n3a04.pdf

https://www.seimc.org/contenidos/documentoscientificos/procedimientosm
icrobiologia/seimc-procedimientomicrobiologia44.pdf

https://www.medigraphic.com/pdfs/reproduccion/mr-2011/mr112e.pdf