Facultad de Medicina.

Carrera - Bioquímica .

DETECCION DE ENFERMEDAD DE CHAGAS POR MÉTODO

PCR

Mirna Isabel Aranda

Maria Cecilia Sosa

Laura Carolina Fleitas

Leidy Fernández

Martha Camila Velázquez Fernández

Micaela Benítez

Biología Molecular

Séptimo Semestre

Encarnación-Paraguay
Introducción

La enfermedad de Chagas es una enfermedad parasitaria su vector son las chinches, al

picar infectan a las personas y también al depositar sus heces infectadas en heridas de la
piel o sobre mucosas, el protozoario Trypanosoma cruzi es el causante de la
enfermedad. https://www.paho.org/es/temas/enfermedad-chagas#:~:text=La
%20enfermedad%20de%20Chagas%20es,deficitarios%2C%20consider
%C3%A1ndosela%20una%20enfermedad%20desatendida.
El presente trabajo pretende explicar porque en algunos casos se utiliza la reacción en
cadena de la polimerasa para la enfermedad de chagas, siendo que los métodos
tradicionales para su detección son los métodos serológicos.
Se opto por trabajar con esta enfermedad ya que es una de las enfermedades
desatendidas del mundo, no obstante, para su confirmación requiere de un mecanismo
desarrollado por biología molecular, una de las ramas de las ciencias más dinámicas y
jóvenes.
https://www.anmm.org.mx/GMM/2013/n3/GMM_149_2013_3_363-365.pdf
En Paraguay la mayoría de los casos por Chagas no se da por la infección de los
vectores sino por el contagio transplacentario, en nuestro país la enfermedad se
distribuye por lo largo y ancho del país presentando diferentes niveles de endemicidad.
https://www.mspbs.gov.py/senepa/chagas.html
En el mes de Abril del 2023 bioquímicos paraguayos obtuvieron conocimientos
actualizados en el diagnostico molecular de Chagas , dicha actualización se debe al
proyecto denominado “CUIDA Chagas”, coordinado por el Servicio Nacional de
Erradicación del ´Paludismo del país,.
https://www.mspbs.gov.py/portal/27234/bioquimicos-actualizan-conocimientos-en-
diagnostico-molecular-de-chagas.html
Considerando que Chagas es una enfermedad mortal y por ello se le debe dar la
importancia que requiere, además de que los avances de la ciencia permiten su
diagnostico de forma certera a través de métodos convencionales y más sofisticados, el
trabajo aspira a explicar de forma clara y concisa los conceptos, tratamientos y la forma
de diagnóstico, de la mencionada enfermedad, explicando la importancia de la biología
molecular para su diagnostico confirmatorio.
Justificación
La biología molecular es una ciencia dinámica que en Paraguay tuvo su auge durante la
pandemia del COVID-19, sin embargo una de sus técnicas desarrolladas como lo es la
reacción en cadena de la polimerasa (PCR) se utiliza en la detección y confirmación de
la enfermedad de Chagas, una de las enfermedades desatendidas del mundo
En Paraguay la enfermedad de Chagas es considerada una enfermedad endémica, los
métodos para su diagnóstico son serológicos, sin embargo, este método presenta una
desventaja ya que a veces puede no ser concluyente, en estos casos se emplea el uso de
la PCR.
La investigación intenta explicar de forma clara y concisa el tipo de muestra que se
emplean para el diagnostico por medio de PCR, exponiendo además que es lo que
necesario para la identificación para que una muestra tenga como resultado un
confirmatorio por Chagas.
Si bien el uso de PCR para Chagas es costoso, es importante recalcar que su empleo no
es de rutina, sino se da en casos en los que la serología sale inconclusa además de usarse
en mujeres embarazadas para no infectar al bebé durante el parto.
Objetivo General
Describir el funcionamiento de la reacción en cadena de la polimerasa para el
diagnostico confirmatorio de la enfermedad de Chagas.
Objetivos específicos:
Compartir información acerca de la enfermedad de Chagas en Paraguay.
Explicar la importancia del empleo de técnicas desarrolladas por la biología molecular.
Indicar la importancia de las constantes actualizaciones científicas.
Marco Teórico
Enfermedad de Chagas
https://www.paho.org/es/temas/enfermedad-chagas#:~:text=La%20enfermedad%20de
%20Chagas%20es,deficitarios%2C%20consider%C3%A1ndosela%20una
%20enfermedad%20desatendida.
El Chagas es una enfermedad parasitaria, sistémica y crónica, su transmisión esta ligada
a vectores y su agente causal es el protozoario Trypanosoma cruzi, que lleva una alta
relación con aspectos socio-economicos-culturales, por ello es considerada una
enfermedad desatendida.
Diagnostico
https://www.cancer.gov/espanol/publicaciones/diccionarios/diccionario-cancer/def/
diagnostico
El diagnóstico es según el instituto nacional del cáncer es el proceso en el que se
identifica una enfermedad, afección o lesión por sus signos y síntomas.
Reacción en cadena de la polimerasa (PCR)
https://www.genome.gov/es/genetics-glossary/Reaccion-en-cadena-de-la-
polimerasa#:~:text=La%20reacci%C3%B3n%20en%20cadena%20de,podr
%C3%A1%20estudiar%20en%20mayor%20detalle.
La PCR es una técnica de laboratorio que permite la producción rápida de millones a
miles de millones de un segmento específico de ADN, que así se podrá estudiar en
mayor detalle. El PCR utiliza los cavadores para seleccionar un segmento del genoma
que se amplificará, así poco a poco para amplificar el segmento.
Tratamientos

Tratamiento para la enfermedad de Chagas

 Benznidazol o nifurtimox

 Tratamiento de sostén

El tratamiento del estado agudo de la enfermedad de Chagas con antiparasitarios hace lo

siguiente:

 Reduce rápidamente la cantidad de parásitos en sangre

 Acorta la enfermedad clínica

 Reduce el riesgo de muerte

 Disminuye la probabilidad de enfermedad crónica

El tratamiento antiparasitario está indicado para todos los casos de enfermedad de Chagas
aguda, congénita o reactivada y para la infección crónica no diagnosticada en niños de hasta
18 años

https://www.msdmanuals.com/es/professional/enfermedades-infecciosas/
protozoos-extraintestinales/enfermedad-de-chagas.
Prevención
Sintomas
 Ronchas.
 Fiebre
 Dolor de cabeza
 Náuseas, diarrea o vómitos.
https://www.paho.org/es/temas/enfermedad-chagas
Población afectada
La enfermedad de Chagas afecta a personas en México, en centro y el sur de América,
principalmente en zonas rurales donde la pobreza es generalizada. Estas áreas ofrecen
un entorno favorable para las vinchucas, que transmiten Trypanosoma cruzi. La
vinchuca se desarrolla en grietas y hendiduras en las paredes de barro, en los techos de
paja de las casas, en las granjas y en los montones de rocas o madera, los gallineros y
las perreras.
En todo el mundo, alrededor de 8 millones de personas están infectadas por
Trypanosoma cruzi. Esta cifra incluye a más de 300 000 personas que habitan en
Estados Unidos tras haber emigrado de regiones de Latinoamérica donde han contraído
infección. Entre ellas se estima que hay unas 40 000 mujeres en edad fértil, el 1 al 5%
de sus hijos nacen con la infección. Los inmigrantes a Europa también han llevado
consigo la enfermedad. Afortunadamente, las medidas para controlar la propagación de
la infección están reduciendo el número de casos de Chagas
En Paraguay la enfermedad se distribuye en todo el territorio pudiendo presentarse
casos de Chagas en personas procedentes o con antecedentes maternos de habitar
departamentos de alta endemicidad. En la región oriental del país, persisten tres
departamentos de alto riesgo de infestación triatóminica: Concepción, Cordillera y
Paraguarí; considerándose de medio riego los departamentos de San Pedro, Caazapá,
Caaguazú, Guairá, Misiones y Ñeembucú. En la región occidental-Chaco: son de riesgo
alto Boquerón y Pte. Hayes, Alto Paraguay es de mediano riego.
Chagas (mspbs.gov.py)

Diagnostico
El diagnostico puede realizarse por pruebas parasitológicas, serológicas y moleculares.
El problema con las pruebas parasitológicas y serológicas es que, en la fase crónica de
la infección, la sensibilidad de estos métodos se reduce a un grado exponencial debido a
la escasa parasitemia. Las pruebas serológicas presentan una importante problemática
ya que no brindan información acerca de la presencia activa del parásito, sino más bien
indica la presencia de anticuerpos contra el parasito, que pueden ser una reacción de
memoria inmunológica es por ello que se para reducir las probabilidades de reacción
cruzada, se han desarrollado antígenos recombinantes, sintéticos o bioquímicamente
puros con el fin de hacer las técnicas serológicas más específicas. Otra opción es el uso
de métodos moleculares.
PCR para la detección de Chagas
https://www.anmm.org.mx/GMM/2013/n3/GMM_149_2013_3_363-365.pdf
El PCR para la detección de Chagas cuenta con indicadores específicos para amplificar
una región del ADN de T. cruzi, indica la presencia del parásito en la sangre, así como
en tejidos infectados, para el examen se necesita de la sangre del paciente, para la
extracción del ADN total. El PCR puede amplificar las secuencias de ADN nuclear del
T. cruzi así como una estructura extra nuclear llamada cinetoplasto, esta estructura esta
formada por material genético encargados de codificar el ARN ribosomales y algunas
proteínas que participan en la generación de adenosina trifosfatos.
Es importante mencionar que en cuanto a sensibilidad la amplificación de ADN del
cinetoplasto es mayor que la amplificación de ADN nuclear, posibilitando la detección
de hasta un parasito en 100 ml de sangre, permitiendo un diagnóstico diferencial de
otros tripanosomátidos.
El método de PCR es utilizado mayormente en casos de mujeres embarazadas y en
bancos de sangre.
Fundamento del PCR en Chagas
https://ve.scielo.org/scielo.php?script=sci_arttext&pid=S1315-01622015000300002
La reacción en cadena de la polimerasa lo que hace es detectar fragmentos específicos
de ADN del genoma del parásito, y luego lo amplifica varas veces un pequeño
fragmento del ADN, para así lograr la amplificación del mismo, la prueba de PCR
emplean iniciadores, cebadores para delimitar la amplificación de un fragmento de
ADN específico.
https://www.seqc.es/download/tema/7/3322/2134753548/1217704/cms/tema-7-
diagnostico-de-laboratorio-de-la-enfermedad-de-chagas.pdf/
El tipo de muestra puede ser sangre, suero, plasma, LCR y a partir de tejido cardiaco en
fase aguda, y en fase crónica se puede usar sangre y la capa leucocitaria. Es importante
mencionar que en el caso de la sangre total se debe mezclar con tampón guanidina 6M-
EDTA 0.2 M para preservar el ADN, además resulta vital la conservación en
temperatura ambiente o nevera.
Conclusión
La técnica PCR es un método confirmatorio sensible que permite prevenir contagios a
recién nacidos, iniciar el tratamiento a tiempo para prevenir descenlaces fatales, pese a
que es un método costoso su ventajas son muy importantes.
Paraguay pese a ser un país en desarrollo invierte en capacitaciones y actualizaciones
para el personal de blanco encargado de realizar los diferentes estudios para el
diagnostico certero de esta enfermedad considerada endémica.
Si bien la técnica no es muy compleja de realizar, la verdadera complejidad es la forma
en que identifica a las secuencias de ADN nuclear del T. cruzi así como una estructura
extra nuclear llamada cinetoplast.