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Casa: Separación de
pigmentos vegetales por
Cromatografía Plana –
Técnica Cromatografía en
Papel
5/Junio/2020
Estudiantes
GENERAL
ESPECIFICOS
La cromatografía en papel es un
proceso muy utilizado en los
laboratorios para realizar análisis
cualitativos ya es sencilla de
implementar y no requiere de
equipamiento sofisticado. En esta
técnica la fase estacionaria está
constituida simplemente por una tira
o circulo de papel de filtro.
La muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de una solución de la
muestra y evaporando el disolvente luego de cada aplicación. Luego el disolvente o mezcla
de disolventes empleada como fase móvil (eluyente) se hace ascender por capilaridad.
Para esto se coloca una porción del papel en contacto con la fase móvil dentro de un
recipiente que la contiene (cámara de desarrollo). Después de unos minutos, cuando el
disolvente deja de ascender o ha llegado al borde extremo del papel, se retira el papel y seca.
Es importante que la cámara de desarrollo permanezca bien tapada durante el proceso de
ascenso capilar de la fase móvil (desarrollo cromatográfico), pues de lo contrario no se
alcanza el equilibrio necesario entre el líquido (fase móvil) y el vapor del líquido. Si el
disolvente elegido fue adecuado y las sustancias tienen color propio se deberán ver manchas
de distinto color separadas a lo largo del papel. Cuando los componentes no tienen color
propio el papel se somete a procesos de revelado.
P a r a la p r e p a r a c ió n d e la s o l u c io n e s , S e p ic a n fi n a m e n t e lo s t e j id o s
v e g e t a le s
P a r a la p r e p a r a c ió n d e la in f u s i ó n e n a g u a s u m e r j a e l t e ji d o e n a g u a a
1 0 0 ° C t a p e e l r e c ip i e n t e y d e j e r e p o s a r h a s t a q u e la in f u s i ó n a lc a n c e
t e m p e r a t u r a a m b ie n t e .
P a r a l a r e p a r a c i ó n d e in f u s i ó n e n a l c o h o l ( 1 0 m l) a g r e g u e e l t e ji d o
p ic a d o a u n r e c ip ie n t e c o n a lc o h o l y d e j e r e a c c io n a r h a s t a q u e e l
a l c o h o l t o m e c o lo r ( 0 . 5 h a p r o x i m a d a m e n t e ) . S e r á n e c e s a r io p r e p a r a r
2 0 m l d e c a d a u n a d e la s s o l u c io n e s .
A c o n ti n u a c ió n , c o r t e ti r a s d e p a p e l d e 0 . 5 c m y 2 0 c m d e l a r g o
E n u n r e c i p ie n t e d e v id r io v ie r t a u n p o c o d e a lg u n a d e la s s o lu c i o n e s d e t e jid o
v e g e t a l y d is p o n g a u n a ti r a d e p a p e l q u e a p e n a s t o q u e e l líq u id o . T a p e y d e je
q u e s e e q u i lib r e n ( t e m p e r a t u r a y p r e s ió n d e v a p o r ) a t e m p e r a t u r a a m b ie n t e
U n a v e z t e r m i n a d a la s e p a r a c ió n e s n e c e s a r i o r e ti r a r la ti r a d e p a p e l y d e ja r q u e s e s e q u e
c o m p le t a m e n t e : e n t o n c e s lo s c o lo r e s s e r á n m á s e v id e n t e s . E l ti e m p o p a r a l o g r a r la
c o l o r a c ió n f u e d e 2 d ía s p a r a t o d a s la s m u e s t r a s . P o r u lti m o , s e m i d ie r o n l a s d is t a n c ia s d e
c a d a c o lo r a c io n e n s u s f a s e s .
Figura 2b. Esquema cromatografía de papel (Guia de laboratorio)
RESULTADOS
Factor de Retardo (RF): El factor de retardo es el cociente entre la distancia (b) recorrida por
el centro de la mancha y la distancia (a) recorrida simultáneamente por la fase móvil y se usa
en cromatografía planar. Usando los símbolos de la ecuación 1.
ANÁLISIS
El cromatograma obtenido, revela la existencia de compuestos coloreados en el
extracto, dado que la mancha superior es Violeta y de acuerdo a la clasificación por
color esta mancha cromatográfica pertenece a las antocianinas. Así lo asegura,
[ CITATION Ram06 \l 3082 ] quienes obtuvieron un resultado similar con extracto crudo
de mora de castilla pues en el cromatograma se evidenciaron manchas
cromatográficas de antocianinas de color violeta por cromatografía de capa delgada y
dedujeron que las manchas correspondían a antocianinas flavonoides que son los
responsables del color de las frutas y las flores.
ANÁLISIS
En este caso, el cromatograma obtenido resultó tener 4 manchas o fases diferentes
siendo la superior de color violeta, dos de color lila y una de color morado. Y muestra
dos metabolitos de la mora que debido a la coloración presentada pertenece a la
antocianina y la cianidina las cuales son hidrosolubles y crean puentes con la parte
soluble de la fase estacionaria de tal manera que se observa el color lila en mayor
proporción. La [ CITATION Uni15 \l 3082 ] señala que la elución a velocidades diferentes
de los compuestos por la fase móvil es la que permite dicha separación.
Se infiere que, las fases presentadas en este caso se dan porque hay diferentes
pigmentos vegetales y las moléculas son de tamaño diferente, es por eso, que se
presenta una separación diferenciada entre las fases y unas pueden ser más veloces
que otras.
Además, los resultados obtenidos coinciden con el estudio de [ CITATION Lóp07 \l 3082 ]
dado que indican que la mora tiene tres productos coloreados siendo el menos polar el
más abundante que corresponde a un derivado de la cianidina.
ANÁLISIS
Los resultados obtenidos fueron para este caso similares, ya que la caracterización por
color del pigmento resulta ser de antocianinas presentes en cualquier tipo de mora. Así
lo afirma [ CITATION Ram06 \l 3082 ] pues indican que esta coloración es presentada por
las antocianinas en las moras pero tiene variaciones en el contenido total o
concentración en frutos de mora que se deben al clima, la altura, el área de producción
y la especie que se trabaje.
Por otro lado, [ CITATION Lóp07 \l 3082 ] en un estudio llevado a cabo con frutos
colombianos entre ellos la mora, el mortiño y en menor medida el tomate de árbol
afirma que para identificar antocianinas en estos cultivos se encuentran muy pocos
estudios porque corresponden a germoplasma del cual no se ha hecho una exhaustiva
tipificación acerca del contenido y tipo de antocianinas, lo que genera material de
composición variable y calidad no homogénea.
Para la cromatografía de mora los factores de retardo Rf, son mayor que los presentados en
las muestras de higo y se debe a que las coloraciones de las antocianinas son más intensas y
en la medición los valores de distancia son más precisos. Además, estos factores de retardo
se consideran únicos experimentalmente dado que no se encuentra en la literatura estudios
cromatográficos de papel realizados con mora y que los pigmentos de las frutas pueden
estar en diferente concentración en el territorio colombiano dado sus diferentes pisos
térmicos que infieren en los datos para compararlos con otros estudios llevados a cabo en
cromatografía de capa fina (TLC).
ANÁLISIS
ANÁLISIS
Por otro lado, la mancha de color ocre no es muy notoria a simple vista por lo cual no es
del todo cierto que se encontró un pigmento de este color si se tiene en cuenta el
criterio de aptitud del sistema cromatográfico en capa delgada pues así lo describe la
[CITATION Guí20 \l 3082 ] “el poder de detección es adecuado si la mancha o la banda es
claramente visible en el cromatograma obtenido con la solución de referencia más
diluida”.
CONCLUSIONES
Al principio pensamos que todos los experimentos nos darían resultados similares,
pero después de realizarlos, notamos que en la cromatografía hecha en papel los
pigmentos del HIGO se desplazaron más rápidamente en tonos de amarillo y tonos
ocres ligeramente distintos alcanzando mayores distancias que las manchas de mora.
Comparando los colores con los pigmentos conocidos deducimos que su orden fue
de: carotenos, xantofilas y para la muestra combinada fue xantofila y antocianina;
esto nos lleva a que gracias a la naturaleza apolar de nuestra fase móvil, éstos
compuestos fueron eludidos de manera directamente proporcional a su apolaridad.
En la cromatografía sobre papel, las interacciones del soluto con el papel hacen que
los compuestos se desplacen a velocidades diferentes y esto lo observamos
especialmente en las muestras de higo y mora. Además, como las moléculas no son
iguales en tamaño ni en composición, no viajarán a la misma velocidad y de ahí que
se separen y se observen diferentes fases.
Cuando el papel es expuesto por acción capilar se inicia una competencia de enlaces
entre los sitios activos de adsorbente (papel) y la sustancia con el solvente (higo/mora
con agua/alcohol).
Los resultados indican que, la mejor separación se presenta con una fase móvil de
alcohol, porque el eluyente se desplaza mejor, alcanza mayores distancias y se
identifican las fases porque se observan los pigmentos bien definidos y coloreados.
Mientras que en agua, los tejidos no tienen coloración intensa y en agua-alcohol no se
identifican los pigmentos a simple vista por lo que se hace necesario la aplicación de
una técnica más compleja.
REFERENCIAS
- López Ramìrez, R., Quiñonez, W., & Echeverri, F. (2007). PERFIL CROMATOGRÁFICO DE LAS
ANTOCIANINAS PRESENTES EN ALGUNOS FRUTOS COLOMBIANOS. Dialnet, 1-2.
- Ramírez, M., Rojas Aguilar, N. Y., & Correa Higuera, L. J. (2006). The Extraction of a Foodstuff
Natural Coloring out of Blackberries. Revista Ciencia en Desarrollo , 7- 9. Obtenido de 260-Texto
%20del%20artículo-444-1-10-20130430.PDF
ANEXOS