UNIVERSIDAD CIENTÍFICA DEL SUR

FACULTAD DE: CIENCIAS AMBIENTALES

LABORATORIO DE QUIMICA 1

CURSO: QUIMICA ORGÁNICA

PROFESOR: Fritz Choquesillo Peña

INFORMES DE PRÁCTICAS

PRACTICA N°: 4
TITULO: LA CROMATOGRAFIA
INTEGRANTES:

MESA: 02
HORARIO DE PRÁCTICAS
DIA: JUEVES
HORA: 11:10am – 1:10pm
FECHA DE REALIZACION DE LA PRÁCTICA: 30-04-18
FECHA DE ENTREGA DEL INFORME: 07-09-17

LIMA - PERU
 1. INTRODUCION
La cromatografía es una técnica de separación que se basa una fase estacionaria y
una móvil (Harris, 2003). Con el fin de que los diversos componentes de una
mezcla se separen a través de la fase móvil, la cromatografía logra la separación
de diversos compuestos en diferentes estados de agregación, ya sea sólido-líquido,
gaseoso-gaseoso entre otros. La cromatografía es de suma importancia debido a
su gran uso tanto en la industria como en el campo de la salud y la biología, por
lo que se busca con esta práctica enseñar algunos tipos de cromatografía (como la
de capa fina y columna. También puede definirse como un método de separación
basado en la distribución o en la diferencia velocidad con que se desplazan los
compuestos entre 2 fases.
En la separación cromatografía, la fase móvil (disolvente o eluyente), la fase fija
y los componentes de la mezcla que se está separando o analizando, interaccionan
entre sí constituyendo un sistema cromatográfico

2. OBJETIVOS

Separar e identificar los principales compuestos de la mezcla

Comprender los principios generales de la cromatografía
Aprender a realizar montajes sencillos de cromatografía

3 FUNDAMENTO TEÓRICO

DEFICION DE CROMATOGRAFÍA
La cromatografía es una de las técnicas más usadas para separar los distintos
componentes de una mezcla para su posterior estudio. Esta forma de separar
componentes de una mezcla se llama separación cromatografía.

Se utiliza tanto para lograr la separación de los componentes de una mezcla como
para medir la proporción de cada elemento en la mezcla.

Algunos de los ejemplos en los que se usa la cromatografía a diario son:

Se suele usar para tomar pruebas de la escena de un crimen (el análisis de

muestras de sangre o de telas).

Verificación de incendios provocados (identificación de las sustancias

químicas responsables de un fuego).
 Análisis de sangre después de la muerte o en vida para determinar los
niveles de alcohol, drogas o sustancias venenosas en el cuerpo.

¿Por qué se separan los componentes?

Dejamos que se mueva la mezcla por un soporte y los componentes se separan

por que se mueven a diferentes velocidades debido a las diferentes fuerzas de
adsorción que ejerce el soporte sobre cada elemento, así de fácil. Ahora veamos
la diferencia entre absorción y adsorción.

 La absorción es cuando una sustancia se introduce en la estructura de otra,

ejemplo: una esponja absorbe agua, entonces si cortamos la esponja en
pedazos vamos a encontrar agua en todas partes de la estructura de la
esponja

 La adsorción es un fenómeno superficial, la sustancia adsorbida no se

introduce en el volumen del cuerpo, sino solo se adhiere a su superficie.

FASES DE LA CROMATOGRAFÍA

Son estática y otra móvil.

 En la fase estática o estacionaria, la mezcla se coloca sobre un soporte

fijo, por ejemplo papel.

En esta fase tenemos ya la mezcla sobre un soporte, en nuestro ejemplo un papel.

 En la fase móvil se hace mover otra sustancia sobre la mezcla que ya está
sobre el soporte de la fase estática, por ejemplo un líquido que se mueve
por el papel con la mezcla. En la fase móvil empezará el proceso de
separación de los componentes de la mezcla al moverse a distintas
velocidades por el líquido los distintos componentes de la mezcla sobre
el papel.

CLASIFICACIÓN DE LAS TÉCNICAS CROMATOGRAFÍAS

De acuerdo con la forma del lecho cromatográfico:

 Cromatografía plana, se realiza sobre papel u otro material sólido. Suele

llamarse “en capa fina” o “en capa delgada” porque la fase estacionaria
recubre un soporte plano y rígido.
 Cromatografía en columna

Dependiendo de la naturaleza de la fase y de la fase móvil se pueden distinguir

distintos tipos de cromatografía.
 a) Cromatografía sólido-líquido: La fase estática o estacionaria es un sólido y la
móvil un líquido.

b) Cromatografía líquido-líquido: La fase estática o estacionaria es un líquido

anclado a un soporte sólido.

c) Cromatografía líquido-gas: La fase estática o estacionaria es un líquido no

volátil impregnado en un sólido y la fase móvil es un gas.

d) Cromatografía sólido-gas: La fase estacionaria es un sólido y la móvil un gas.

Según el tipo de interacción que se establece entre los componentes de la mezcla

y la fase móvil y estacionaria podemos distinguir entre.

a) Cromatografía de adsorción: La fase estacionaria es un sólido polar capaz de

adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar.

b) Cromatografía de partición: La separación se basa en las diferencias de

solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que
son ambas líquidas.

c) Cromatografía de intercambio iónico: La fase estacionaria es un sólido que lleva

anclados grupos funcionales ionizables cuya carga se puede intercambiar por aquellos
iones presentes en la fase móvil.
4. DESARROLLO EXPERIMENTAL

1. CROMATOGRAFÍA SOBRE PAPEL

Sobre una cinta de papel Whatman N°1 de 3 x 10 cm se realizan las siguientes
operaciones:
A 1,5 cm de un extremo de la tira de papel de filtro, marque una tenue línea
recta con lápiz (línea de partida). No usar tinta.
En cada mitad, y sobre la línea de partida, señale el punto medio o lugar de
siembra.
En uno de estos puntos y con la ayuda de un capilar, deposite unas gotitas (2
ó 3) de la mezcla a analizar (azul de metileno y anaranjado de metilo). En el
otro punto sembrar, uno de los colorantes (cualquiera) en solución. Espere
que cada gota seque antes de sembrar la siguiente.

Deje unos minutos para que se evapore el solvente de siembra (puede

ayudarse con corriente de aire) y luego introduzca la tira en un tubo de ensayo
de 2 x 15 cm en cuyo interior se ha colocado el solvente de desarrollo (1-
propanol - butanona - Agua 4:1:1) (La zona de siembra no debe quedar
sumergida en el solvente). No mueva hasta que haya terminado el desarrollo.

Cuando la fase móvil haya ascendido unos 8-10 cm, retire el papel, marque
el frente del solvente (con lápiz) y déjelo secar.
Observe y compare las 2 muestras sembradas y calcule el Rf de cada
sustancia.
 2. CROMATOGRAFÍA EN CAPA FINA

Las placas se preparan introduciendo 2 láminas portaobjeto (juntas) en una

suspensión preparada al agitar 35g de Silicagel G. (ó 60 g de alúmina) en 100
mL de una mezcla cloroformo-metanol (2:1). Esta suspensión puede conservarse
en recipientes bien cerrados.

Se separan los portaobjetos, se dejan secar y se señalan 2 puntos (equidistantes

de los bordes y del centro) que se encuentren en una imaginaria "línea de partida"
a 1 cm del borde inferior (Use únicamente lápiz).

En uno de los puntos se siembra (en solución y con un capilar) unas 2 ó 3 gotas
de la mezcla anaranjado de metilo-azul de metileno y en el otro uno de ellos.
Dejar secar el solvente.

Introducir la placa en una cámara de desarrollo que contiene la fase móvil (1-
Propanol-butanona-Agua 4:1:1).

Cuando el solvente esté por llegar al borde superior de la plaquita, retire ésta,
marque el frente del solvente, dejar secar y calcule el Rf.

3. CROMATOGRAFIA EN COLUMNA
Aplicaremos esta técnica para separar la misma mezcla (Azul de metileno-Anaranjado de
metilo) que utilizamos para la Cromatografía sobre papel y en capa fina.

Preparación de la Columna. - Introducir un trozo de algodón hasta el fondo de la

columna. Adicionarle unos 10 cc de etanol y luego agregar una suspensión formada
al agitar 10 g de Silicagel (o alúmina) en unos 20 mL de etanol. Abrir la llave de la
columna hasta que la altura del solvente sea de 1 mm por encima de la superficie
del adsorbente.
 Siembra: Depositar 1 ó 2 mL de la mezcla de colorantes a separar (en solución
alcohólica), abrir la llave hasta que todo el colorante sea adsorbido por la fase fija.

Elución: Adicionar más etanol (eluyente) y observar que uno de los colorantes se
desplaza más que el otro. Ir agregando etanol hasta que se eluya este colorante.
Cambie de recipiente y eluya el segundo colorante. Si fuera necesario, cambie el
etanol por agua acidulada para eluir este segundo colorante.

Análisis de los eluatos por Cromatografía en capa fina al portaobjetos.

Para este análisis se aplicará la técnica de la c.c.f. al portaobjeto, sembrando los
eluatos. El sistema de desarrollo será el mismo que se empleó en c.c.f. o
cromatografía sobre papel.

5.MATERIAL y REACTIVOS

MATERIALES:

01 piseta con agua destilada

04 portaobjetos
01 cámara cromatografía de capa fina
01 soporte Universal
01 pinza con nuez
03 Tubos capilares
08 tubos de ensayo
01 bagueta
02 Cintas de Papel Whatman (3x10cm)
01 gr Algodón
01 beaker 250m

REACTIVOS:

Gotero (25 mL) de anaranjado de metilo

01 Gotero (25 mL) azul de metileno + anaranjado de metilo
1. CUADRO DE DATOS y RESULTADOS
 2. CONCLUSIONES

La cromatografía en papel, es uno de los métodos más usados, por lo cual es

necesario aprender y entender cómo realizarlo correctamente, ya que son
separaciones muy complejas y lentas de realizar de realizar debido a que se
tienen que elegir sustancias específicas.

La cromatografía por columna de una mezcla de azul de metileno y el

anaranjado de metilo para obtener la elución va a depender de la cantidad del
efluente para lo cual es importante tener el diámetro y la longitud adecuada.

La cromatografía en capa fina es más rápida, debido a que se puede utilizar una
amplia variedad de sustancias, pero posee baja resolución.

8. RECOMENDACIÓN

Para realizar la cromatografía en papel se debe tener cuidado con el sistema ya

que no puede estar expuesto a movimiento porque generaría un retraso en los
resultados y en otros casos no se obtiene lo que se espera.
Se recomienda que para realizar cromatografía en capa fina se tenga cuidado con
los portaobjetos y el sistema en el que se desarrolla la experimentación debe estar
cerrado.
Se recomienda ser precisos y revisar el equipo de columna cromatografía antes de
realizar la experimentación, además la capa de algodón que se añade no debe ser
presionada ya que impediría el paso del eluyente, al final para revisar los datos se
puede realizar una comparación con los dataos de capa fina.
9. BIBLIOGRAFÍA

Toledo, M (2015) Desarrollo de procesos de la cromatografía eficace, artículo técnico:

Departamento de Química Orgánica I (2010). Prácticas de Química Orgánica I:
Cromatografía en columna Video [Vídeo]. Disponible en:
https://www.youtube.com/watch?v=rHeH3cOm_nI&t=332s

Steven, J. (15 de noviembre de 2010). Cromatografía en papel. [Blog]. Recuperado de

http://jhonatansencro.blogspot.pe/2010/11/cromatografia-del-papel.html
10. CUESTIONARIO
Rf 0,05: la distancia recorrida por la sustancia es la 20ava parte de la distancia
recorrida del solvente.

Rf 0,6: la diferencia de las distancias recorridas entre las sustancias y el disolvente

es mínima y muy cercana.

Rf 0,98: la distancia recorrida de la sustancia es cercana a la del disolvente.

7. sí al realizar el desarrollo de un cromatograma y encuentra el Rf de 0,1, lo

escogería como un buen solvente de desarrollo. ¿Por qué?

si ya que sus distancias de recorrido entre el disolvente y la sustancia estarían más

cercanas.

8. Explique algún método para localizar las bandas de adsorción cuando se

trabaja con sustancias incoloras en una columna.

 técnica de la franja: este método consiste en pintar una franja delgada de

un reactivo adecuado, a lo largo de la columna después de que ha sido
extraído del tubo de ensayo.

9. ¿Dé algunas aplicaciones prácticas de la cromatografía en columna?.

 separaciones de componentes de plantas medicinales.

 separación de componentes de una síntesis orgánica.
 separación de colorantes.
 separación e identificación de hioscina y de morfina.

10. Haga un breve resumen de la Cromatografía líquida de alta performance.

En la cromatografía líquida, la fase móvil es un líquido que fluye a través de una

columna que contiene a la fase fija. La separación cromatográfica en HPLC es el
resultado de las interacciones específicas entre las moléculas de la muestra en
ambas fases, móvil y estacionaria. Es la técnica escogida para aislamiento y
purificación de productos de valor en las industrias químicas y farmacéuticas, así
como en la biotecnología y la bioquímica.
11. ANEXOS:

 Alistando para el proceso sobre el papel y la capa fina.

 Se hecha 3 gotas de azul de metileno con 3 gotas de naranja de metilo en un

tubo de ensayo.

 Se vierte el liquido del tubo de ensayo(azul de metileno y naranja de metilo)

mediante un capilar sobre el papel ya medido.

 Colocamos cloroformo metanol en un biker mientras que vertimos etanol

mediante una pipeta en un tubo de ensayo.
 Se obtiene los resultados de la muestra para obtener la relación de
frente(RF) en la imagen de la izquierda.

 En la imagen del lado derecho vemos el proceso de cromatografía en

columna.