Parte I

Capítulo 1 Introducción
El cultivo de células con el objeto de obtener productos útiles, es una actividad que ha realizado el hombre prácticamente durante toda su historia. Recientemente a esta actividad se le ha denominado Biotecnología. Esta ha evolucionado a partir de los conocimientos generados en diversas disciplinas, tanto del área de las ciencias básicas como de las ingenierías. Hoy la Biotecnología puede ser definida como la colección de procesos industriales que involucran el uso de sistemas biológicos (Wang, 1988). Las operaciones que comprenden los procesos biotecnológicos a escala comercial, se han dividido tradicionalmente en operaciones previas (procesos "upstream") y operaciones posteriores o bioseparaciones (procesos "downstream"). Dentro de las primeras se considera la preparación del medio, la esterilización y el funcionamiento del biorreactor (Cooney, 1990). Los procesos de bioseparación como se muestra en la Figura 1.1, involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para la obtención del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas. En un proceso dado, la parte correspondiente a las bioseparaciones puede representar hasta un 60% del costo total de producción sin considerar las materias primas (Kalk, 1986). Debido a lo anterior, exite una relación inversa entre el precio de venta de un producto biotecnológico y la concentración de éste en el caldo del biorreactor (Figura 1.2). Puede decirse entonces que el éxito comercial de un proceso biotecnológico

6

CAPÍTULO!. INTRODUCCIÓN

depende en gran medida de la adecuada selección del proceso de bioseparación.

1.1

Evolución de los Bioprocesos

Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones de procesos biotecnológicos, en relación al tipo de bioseparaciones que éstos involucran. La primera generación comprende el conjunto de procesos desarrollados mediante cultivos de organismos no recombinantes, cuyos productos se obtienen en forma activa tanto si son intracelulares o si son secretados al medio de cultivo. En esta generación se encuentran los procesos de la Biotecnología tradicional como los de la producción de etanol, enzimas, ácido cítrico, y antibióticos. Los productos de estos procesos se presentan en concentraciones altas al inicio de la etapa de separación y no requieren de una extremada pureza para su venta. Los descubrimientos asociados con la Biología Molecular y la Ingeniería Genética logrados particularmente en las últimas dos décadas, han ampliado las capacidades biotecnologías del hombre. En esta etapa podemos situar una segunda generación de productos de la Biotecnología como la insulina humana, la hormona de crecimiento, y alfa interferón, entre otros. Estos son producidos intracelularmente utilizando células recombinantes de Escheríchia coli. Se caracterizan por encontrarse en bajas concentraciones dentro de la célula, son de elevado peso molecular, tienen propiedades similares a los contaminantes y requieren un alto grado de pureza. Ademas, generalmente al producirse en la célula no poseen actividad biológica por tratarse de cadenas peptídicas sin la conformación o estructura apropiada; lo que se traduce en la necesidad de aplicarles tratamientos fisicoquímicos adicionales para lograr el producto en su estado activo. La tercera generación de la Biotecnología, la podemos caracterizar por procesos mediante los cuales se obtienen productos extracelulares en células recombinantes, la mayoría de las cuales son eucarióticas. En estos sistemas se ha observado la capacidad no sólo de producir exógenamente el producto deseado, sino que éste se obtiene en forma activa. El factor VIII de la sangre y el agente trombolítico Activador

1.1. EVOL UCIÓN DE LOS BIOPROCESOS

Inoculo

Esterilización y preparación del medio

Producto intracelular

Esterilización del caldo si es recombinante

Producto extracelular

Rompimiento celular

' Remoción de desechos celulares

Separación celular

Recuperación y concentración del producto

Purificación del producto

Figura 1.1: Operaciones de un proceso biotecnológico: a). Operaciones previas b). Operaciones posteriores o bioseparaciones. Adaptada de: Bujurstrom, 1985.
Reproducida reservados. con el permiso de Me Graw Hill. Copyright © 1985. Todos los derechos

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

(g/i)
.Etanol .Acidocítrico MSG , Penicilina ,Treonina > Cefalosporína k—Gentamioina . Acido Giberflico . Enzimas a granel . Glucosa oxidas» Anticuerpos Enzimas d« investigación y diagnóstica Glio»roHosíatodeshidrogenas* LucHerasa Factor VIII Urakinasa Enzimasterapéuticas^"^

«O

1

»"* 10*

wr«

IOZ »' K)° I01 K)2 I03 K>4 K)5 «O6 KJ7 K)" «O9

Precio

de

venta

$/Kg

Figura 1.2: Relación entre la concentración inicial del producto en el caldo y el precio final de venta del producto. Fuente: Dwyer, 1984.
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright © 1984. Todos los derechos reservados.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS
Tabla 1.1: Características de los Procesos Biotecnológicos.
Característica Período Tipo de células Fortaleza de las células Conocimiento de propiedades básicas Conocimiento Tecnológico Primera
- 1975 No recombinantes Alta

Generación Segunda

Tercera

1975Recombinantes Alta
Bajo Bajo

1985Recombinantes Baja
Bajo Bajo

Alto Alto

Tabla 1.2: Características de los Productos Biotecnológicos
Característica Producto tipo Idealización Tamaño Actividad al secretarse Pureza deseada Similitud con contaminantes Valor Primera Antibióticos Aminoácidos Extracelular e intracelular Intermedio
Si

Generación Segunda Insulina humana
HC

Tercera Factor VIII
tPA

Intracelular Macromoléculas
No

Extracelular Macromoléculas
Si

Alta Baja Bajo

Muy alta Alta Alto

Muy alta Alta Alto

del Plasminógeno tisular (t-PA de sus siglas en inglés) son productos característicos de esta generación. Debido a su empleo con fines terapéuticos, estos productos deben ser obtenidos con un alto grado de pureza (Datar et a/, 1993) .

1.2

Características de los Bioprocesos

En la Tabla 1.1 y en la Tabla 1.2 se presentan algunas características asociadas a los procesos y a los productos de las tres generaciones de la Biotecnología, aquí descritas.

10

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

Los procesos biotecnológicos tanto de la segunda como de la tercera generación, se encuentran en una etapa de desarrollo que requiere ampliar el conocimiento de las propiedades fisicoquímicas de los productos y sus contaminantes, con el objeto de seleccionar las operaciones de separación adecuadas debido al alto grado de pureza requerido por los productos. Los aspectos de rendimiento y pureza del producto son básicos para determinar la viabilidad de un bioproceso, debido a que para lograr el grado de purificación requerido por este tipo de productos, generalmente la purificación debe realizarse en varios pasos. Un ejemplo de lo anterior se muestra en la Figura 1.3 con un diagrama de flujo del proceso para la obtención de insulina humana a partir células de E. coli recombinante. Las operaciones de bioseparación para un proceso deben seleccionarse cuidadosamente con el fin de que el costo sea mínimo. Es decir, si el rendimiento por paso de purificación es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un proceso no viable económicamente debido a su aún más bajo rendimiento global. La Figura 1.4 muestra como decrece el rendimiento global en función del número de pasos de purificación, considerando rendimientos por paso de 95 %, 90 %, 80 % y 60 %. Por ejemplo, si el rendimiento promedio por paso en un proceso de purificación de 10 pasos es de 60 %, el rendimiento global del proceso de purificación es de 0.6 %. Si debido a la desnaturalización del producto el rendimiento desciende a 30 % por etapa, el rendimiento global del proceso es 0.0006%. Esto significa que se require 1000 veces más cantidad de materia prima para lograr la misma masa de proteína purificada. Por otra parte si el rendimiento promedio por paso fuese de 95 %, el rendimiento total alcanzado sería del 60 % (Hearn y Anspach, 1990). Ejemplo 1.1: Estimación de la pureza y el rendimiento de una enzima en un proceso de purificación. En el desarrollo de un proceso para la obtención de una enzima a partir de E. coli, se sabe que ésta tiene un 80 % de humedad y que el 60 % de su peso seco es protema. El proceso de purificación de la enzima consta de 4 pasos (Figura 1.5). En la tabla siguiente se presenta

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

11

Salida delire este'ril

Esterilizador continua (A)

i

uu
. i[ J

Tanques de m

l±LJJ

Sedimentador 1 Sedimentador2 o*1 (B) » ' filtra de aire esteVH

TSrfii r tííH i hi
I •** t Fermentadorde producción (O) Centrifugas

Tanque de almacenamiento

intercambiador de calor

e
(E)

'—.

Compresor Tratamiento de i* desechos Tanque de
* 4•sterilizaáon

^ t t
1 1 1

otras corrientes de desecho CNBr formato

nn i_r
.f , 1

Reactor para eliminación de CNBr (H)

Reactor de solubilización

Figura 1.3: Representación esquemática del proceso para la obtención de Insulina Humana. Fuente: Datar y Rosen, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

12

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

Del tratamiento d«CNBr

bufer tris

enzimas

Reactor de cuMonaáón (K) bufer bufer Iris tris*NaCt _,;•?

ü?
T
d**«eho i HiPLC (O) enzimatico (NJ

^
desecho (M) acetato de amonio

Reactor de renaturalización (L)

3r
1

IjU
Uhrafihraeión vapor PRODUCTO Reactor de cristalización (Q) Centrifugación Evaporador instantáneo

Figura 1.3: Continuación.

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

13

Rendimiento ( % )
100 _

95%

90%

4 6 8 Número de pasos

Figura 1.4: Representación gráfica del rendimiento global de un proceso de purificación de un producto biotecnológico en función del número de pasos. Fuente: Hearn y Anspach, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

14

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

la cantidad de enzima y de proteína total al final de cada paso. Proteína Enzima Fracción total (g) total (g) enzima xlO~ 3

Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Crom atografía gel

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

Se desea obtener el factor de purificación de la enzima en cada paso, el rendimiento por paso y el rendimiento global.
/-'

Solución:
El factor de purificación, el rendimiento por paso y el rendimiento global del proceso se presentan junto con los datos del problema en la tabla siguiente:
Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Cromatografía
gel

Prot. tot. (g)

Enzima tot. (g)

Fracción enz. XlO~ 3

Factor de purific.

% Recup* ración Por etapa Global

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

1 5 30 150

100 75 80 75

100 75 60 45

a). El factor de purificación se obtiene mediante el cociente de la fracción de enzima en cada paso, entre la fracción de enzima inicial. b). El rendimiento en cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en cada paso, entre la cantidad total de enzima al inicio del paso. c). El rendimiento global al final de cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en ese paso entre la cantidad total de enzima inicial.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS

15

Rompimiento celular con sulfato de amonio

i Precipitación

Fracción colectada

35

40

45

50

55

60

70

100

% de saturación Cromatografía de intercambio iónico

Carga

Elución Número de fracción

Cromatrografia de filtración por gel

Producto

Número de fracción

Figura 1.5: Proceso hipotético de cuatro pasos para la purificación de una enzima.

16

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

El conocimiento tecnológico de los procesos biotecnológicos de segunda y tercera generación es limitado. Actualmente es necesario profundizar en los métodos de escalamiento de algunas operaciones, ya que generalmente se han adaptado a escala comercial a partir del laboratorio. En el proceso de escalamiento es necesario considerar los volúmenes y normas del mercado para el producto (Nuil, 1987). La Biotecnología ha adoptado con éxito operaciones de la Ingeniería Química, en la purificación de productos biotecnológicos tradicionales. Sin embargo, existen limitantes para lograr ésto cuando se trata de obtener productos característicos de la segunda y tercera generación. Existe una necesidad real de desarrollar procesos de bioseparaciones apropiados, con la participación de bioquímicos y biólogos con el propósito de lograr, tanto la pureza deseada del producto, como la eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).

1.3

Sumario

Los procesos de bioseparación involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Las bioseparaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para obtener un producto biotecnológico en las condiciones de pureza y actividad requeridas. La economía de los procesos biotecnológicos depende en gran medida de las operaciones de bioseparación que involucran, de tal manera que la correcta selección de estas operaciones tiene un fuerte impacto en el éxito del proceso.

1.4.

PROBLEMAS

17

1.4

Problemas

1.1 .-Efectuar un análisis comparativo en relación a las operaciones de separación que utilizan, de los procesos para la producción de ácido cítrico, penicilina e insulina. 1.2.- Un proceso para la recuperación de hidroxibutirato deshidrogenasa consta de tres pasos: Un rompimiento de las células para liberar la enzima intracelular, seguido de dos pasos de adsorción/ desorción por afinidad. En la siguiente Tabla se presentan los datos obtenidos de actividad de enzima y proteína total al final de cada paso. Calcular la actividad específica, el índice de purificación y el % de recuperación. Paso Rompimiento Ads/Des (1) Ads/Des (2) Actividad Total Proteína Total (Unidades) (mg) 6,860 6,800 5,380 76,200 2,200 267

1.3.- Completar la siguiente tabla relacionada con la purificación de una enzima:
Vol.
Material Extracto ler. piso
mi
500
50

Conc. prot. mg/ml
14 10

Prot. total "IR
7 60

Act. enzim. U/ml

Act. total U

Act. esp. U/mg

Rend. Total Etapa

Fac. purif.

1.4.- En un proceso biotecnológico para producir una enzima que se encuentra en desarrollo, se obtiene una concentración de 0.1 mg/ml de la enzima en el caldo inicial. Si a los proyectos se les exige un margen sobre ventas del 50 %, estime el costo de producción máximo del producto utilizando la Figura 1.2

18

CAPÍTULO!.

INTRODUCCIÓN

1.5

Bibliografía

Bujurstrom, E. 1985. Biotechnology. Chem. Eng. Feb. 18. Me Graw Hill. New York. 126-158. Cooney, C. L. 1990. Separations for biotechnology. Trends in Biotechnology. 8, 338-340. Datar, R.V., Cartwright, T. y Rosen, C.G. 1993. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. Bio/Technology. 11, 349-357. Datar, R. y Rosen C. G. 1990. Downstream process economics. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 741-793. Dwyer, J. 1984. Scaling up bioproduct separatíon with high performance liquid chromatography. Biotechnology. 2, 957-964. Hearn, M. T., y Anspach, B. 1990. Chemical, physical and biochemical concepts in isolation and purification of proteins. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 17-63. Kalk, J. P. y Langlykee, A. F. 1986. Cost estimation for biotechnology projects. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. Demain, A.L. y Solomon, N. (Eds.). American Society for Microbiology. New York. 363-384. Nuil, H. R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook of Separation Process Technology. Rousseau, R.W*, (Ed.). John Wiley & Sons. New York. 982-995. Wang, D. I. C. 1988. Biotechnology: Status and perspectives. AIChE, 84-18, 1-21.

aún cuando la factibilidad técnica de un proceso dado pueda ser atractiva.3.2 se presenta los principales aspectos económicos y técnicos a considerar para la selección de un proceso biotecnológico. es la especificación de la secuencia de operaciones de separación que se requieren. Las metodologís utilizadas para 19 . (Kelly. 1990). bajo las restricciones presupuéstales establecidas. fundamentalmente los económicos relacionados con el mercado y los técnicos que involucran el diseño del proceso . el valor esperado del producto pudiera no justificarlo (Knight. El estudio de mercado permite evaluar el potencial económico del proceso y es requisito indispensable para la formulación del proyecto a desarrollar. debido al alto costo que éstas representan. En el diseño de un proceso es necesario un trabajo completo y cuidadoso que permita desarrollar y evaluar varios esquemas de operación con el propósito de aproximarse al diseño óptimo. Un aspecto central en el diseño de un bioproceso.1 Introducción El desarrollo de un proceso biotecnológico para la obtención de un producto de interés comprende varios aspectos. Los equipos más comunes para realizar dichas operaciones se describen en la sección 2. particularmente en su secuencia de operaciones de bioseparación.Capítulo 2 Selección del Proceso 2. Por ejemplo. 1987). En este capítulo en la sección 2.

Operaciones y secuencia -Escala • Etapas o tiempo por operación -Costo PRODUCTO Figura 2.1): • Económicos: Relacionados principalmente con el mercado y las especificaciones del producto. 2.5. la selección apropiada de la secuencia de bioseparaciones para un proceso se establecen en la sección 2.1: Elementos para la selección de un bioproceso.2 Fundamentos Los factores que intervienen en la selección de un proceso biotecnológico son de dos tipos (Figura 2.20 MERCADO CAPÍTULO 2. SELECCIÓN DEL PROCESO ESPECIFICACIÓN DEL PRODUCTO PROCESO . • Técnicos: Relacionados directamente con el el proceso. .

2. pero existe una tendencia hacia un incremento en la competitividad del mercado. si el mercado del producto aumenta y aparecen nuevos competidores. Caso tipo Compañía Producto Precio por dosis Demanda Anual (USA). es posible que se seleccione el primer proceso exitoso que se logre en el laboratorio. FUNDAMENTOS Tabla 2.000 5 X 10* 10 Kg 100 Tons. El mercado de los productos biotecnológicos puede enmarcarse entre dos casos extremos (Tabla 2. No.2. de Dosis Masa 21 1 2 GENENTECH Diversas t-PA BST* $ 2000.1 Mercado y Especificación del Producto El mercado es un factor muy impoortante para el establecimiento de un bioproceso. ya que determina el precio del producto. 0.2. En los productos libres de competencia. en mercados muy competitivos. * Somatotropina de Bovino 2. especificando claramente la pureza y recuperación que se desea obtener. 2. bajo volumen de producción y libres de competencia. Con frecuencia las especificaciones sobre pureza .1): 1. la economía del proceso cobra especial importancia (Spalding.50 Datos de: Spalding. como el t-PA. Sin embargo. Productos de alto volumen de producción. Productos de alto valor. El primer paso en la selección de un proceso es la definición del objetivo del mismo. Es en esta transición donde el diseño adecuado de los bioprocesos presenta especial relevancia. Actualmente varios productos biotecnológicos modernos están libres de competencia. 1991.00 $ 100. como la BST. 1991).1: Influencia del mercado en el precio del producto.

así como su pureza y la recuperación deseada. Número de etapas por operación. SELECCIÓN DEL PROCESO del producto son establecidas por regulaciones legales o por el mercado. La escala del proceso. y tiene como objetivo definir las principales características del proceso como: La secuencia de operaciones de proceso. Idealmente la recuperación debe ser una variable dependiente del diseño de proceso. se observa que hay una secuencia preferencial aunque no estricta.2 El Proceso El diseño de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que es necesario realizar antes de construir una planta productiva. en la búsqueda de la optimización del mismo. El objetivo del diseño de un proceso de separación es explotar esta diferencia en las propiedades en la forma mas económica. 1987). Los métodos de separación usados con más frecuencia.22 CAPÍTULO 2. En la práctica. debido a limitaciones de tiempo esta fase no siempre se concluye (Nuil. Generalmente existe una propiedad diferente que es la base primaria para la separación. Tal y como se observa en la . 1986). En este trabajo sólo se abordan estas últimas. Operaciones de Separación y su Secuencia Una vez definido el producto (o productos) que se desea obtener. así como la propiedad en que se basan.2 En un análisis realizado con datos de 100 artículos publicados sobre purificación de proteínas. Las especificaciones de recuperación son fijadas para asegurar la economía del proceso. El costo del proceso.2. con la cual se desarrollan las operaciones de separación (Bonnerjea y Hoare. el siguiente paso es determinar que operaciones son capaces de realizar la producción y la separación del producto. 2. se muestran en la Tabla 2. Las operaciones de separación se basan en las diferencias que existen entre las propiedades físico-químicas de los componentes presentes en el caldo de cultivo.

2: Operaciones de separación y su propiedad básica.2. FUNDAMENTOS 23 Tabla 2. Método (Operación) Propiedad Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Ultrafiltración Intercambio Iónico Diálisis Electrodiálisis Membranas Líquidas Electroforesis Cromatografía Filtración por Gel Presión de vapor Distribución entre fases b'quidas inmiscibles Punto de fusión o solubilidad Sorción superficial Difusividad y solubilidad Tamaño molecular Equilibrio Difusividad Carga eléctrica y movilidad iónica Difusividad y equilibrio Carga eléctrica y movilidad iónica Depende del tipo de fase estacionaria Tamaño y forma molecular .2.

SELECCIÓN DEL PROCESO i 2 a 4 s Afinidad e __ Homogmizactón Intercambio iónico Filtración «n G«l PrecipiUción Figura 2. Escala de Operación Frecuentemente la escala de operación es el factor económico determinante en la selección entre procesos de separación alternativos. Todos los derechos reservados. la realidad es que cada producto presenta una secuencia de separación óptima diferente.2: Secuencia de operaciones utilizadas en un proceso de purificación de proteínas. 1986. después la cromatografía de intercambio iónico. Esta secuencia es valida generalmente en el caso en que el producto sea una proteína.24 CAPÍTULO 2. la separación por afinidad y finalmente la filtración por gel. Figura 2. Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Fuente: Bonnerjea et al. Esto es importante porque varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte . Copyright ©1986.2 frecuentemente la homogeneización va seguida de una precipitación. deberá ser compatible con la escala industrial a la cual se va a diseñar. Cualquier proceso de separación que se escoja.

todas las operaciones deben ser incluidas en la planta piloto aún cuando no se requieran pruebas individuales de confiabilidad de cada una de ellas. siempre y cuando no haya formación de mezclas azeotrópicas entre los componentes que serán separados. Así se tiene que la destilación es la operación más confiable de los procesos de separación por el conocimiento que de ella se tiene. Así por ejemplo. es el número de etapas de contacto que se realizan por operación. es una operación que se realiza a pequeña escala. Debido a consideraciones de confiabilidad del diseño. puede ser necesaria una planta piloto para probar la operación integrada del proceso. La extracción requiere de al menos dos etapas de contacto para separar un flujo de alimentación en dos corrientes y obtener el producto en condiciones aceptables.1 tienen diferente habilidad para realizar una separación en una sola etapa. Cada operación de separación tiene en sí misma una determinada confiabilidad que es producto de la experiencia y conocimiento de la misma.2.2. Las operaciones de separación que aparecen en la Tabla 2. FUNDAMENTOS 25 industrial. mientras que en otros casos el límite superior se debe simplemente a las limitaciones que ofrece la fabricación de equipo comercial. Número de Etapas por Operación Otra variable importante en la selección de un proceso de separación (Figura 2. En la mayoría de los casos una operación de una sola etapa es más económica que una operación de etapas múltiples. En la Tabla 2. En algunos casos. este límite superior se debe a una restricción impuesta por un fenómeno físico inherente a la operación de separación. La electroforesis en cambio. En tal caso. La adsorción es una operación que consiste de . Muchas operaciones de separación tienen un límite respecto de la capacidad máxima que pueden manejar y esto limita la escala de producción para la cual esa operación puede ser considerada. la destilación es una operación capaz de separar una mezcla binaria en una sola etapa.1).3 se pueden observar las capacidades máximas en una sola etapa de algunas operaciones de separación. entonces la única forma de tener confiabilidad a gran escala es usando múltiples unidades en arreglo paralelo.

3: Capacidades máximas por operación. Todos los derechos reservados.45x106 kg/año de flujo de agua 1000 kg/año de producto O.26 CAPÍTULO 2.OQxlO6 kg/año de líquido 100 kg/año de producto Ultrafiltración Intercambio Iónico Electrodiálisis Electroforesis Separaciones Cromatográficas Filtración por Gel Fuente: Nuil.45xl06 kg/año de flujo de agua por módulo. Operación de Separación Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Límite Comercial por Operación Simple Sin límite Sin límite 10-70xl06 kg/año Sin límite 0. con varios módulos por unidad 450xl06 kg/año de ' flujo de agua 0.45xl06 kg/año flujo de agua por módulo. 1987. Copyright ©1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2. con varios módulos por unidad 0. .

que se ha identificado el producto que se desea obtener y se ha establecido el proceso. en caso de que esto no sea así. Esto comprende la estimación del costo total del producto y del capital necesario para la inversión. Costo Total del Producto. Ambos parámetros. En los costos de fabricación se ubican los costos de operación. se debe estimar el costo del mismo. esto es. 1986). Teóricamente la ultrafiltración puede separar dos solutos de alto peso molecular si la diferencia en tamaño molecular es del orden de 10. cromatografía. determinan la rentabilidad del proceso. requieren etapas de concentración posteriores.. Costos Una vez que ha sido definido el objetivo de la separación. En el caso de las operaciones de electroforésis. mientras que en los convencionales sólo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke. sino que .2. la adsorción en si misma. el costo total del producto se divide comunmente en dos partes: costos de fabricación y gastos generales. Los costos de las materias primas son más relevantes en sistemas de producción basados en procesos biológicos que en plantas químicas convencionales. y la regeneración del adsorbente.4. debido a que éstas constituyen la'mayor parte de estos costos.Como se muestra en la Tabla 2. FUNDAMENTOS 27 dos etapas. se requieren etapas de procesamiento adicionales para obtener el producto con la pureza deseada. dado que separan el producto por dilución. no solamente las materias primas principales (aquellas que se convierten directamente a producto) tienen un impacto significativo sobre la economía del proceso. los costos fijos y la parte proporcional de los gastos generales de la planta. En los procesos de producción biotecnológicos. En los primeros las materias primas pueden representar del 30 al 80 % del costo de producción. conjuntamente con los ingresos esperados. Dentro de los costos de operación directos se puede resaltar los costos de las materias primas que son consumidas directamente en el proceso de producción del producto o que son usadas en la recuperación del mismo. la separación requiere varias etapas.2. En cualquier caso de los señalados anteriormente. y la filtración en gel.

Mano de obra y supervisión a. Costos Fijos A. Depreciación B. vapor electricidad agua tratamiento de desechos II. Impuestos C. salarios y estímulos b. fletes d. V. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2.4: Factores que intervienen en el costo total del producto. Servicios a. Costos de Operación Directos A. Seguros D. Proporción de Gastos Generales de la Planta Administración Mercadotecnia Investigación y Desarrollo Para estimación de costos: Costo de Fabricación (CF) = I+II+IH Gastos Generales (GG) = IV+V+VI Costo Total del Producto =CF-f GG - . c. materia prima secundaria c. operación e. IV. I. d.28 CAPÍTULO 2. Renta III. Materias primas y suministros a. mantenimiento f. horas extras C. materia prima primaria b. otros B. laboratorio g. VI. b.

Estimación del Capital de Inversión. Costos de Operación Directos (59 % ) II. En la Figura 2. FUNDAMENTOS 29 I. esto es. Los sueldos y salarios representan una fracción importante del total de los costos de fabricación..2. influyen considerablemente en los costos de producción. Costos Fijos ( 1 1 % ) III.El capital de inversión total se conforma del capital fijo y del capital de trabajo.3 se presenta una estructura de costos típica para un producto biotecnología). ' La parte proporcional de los gastos generales de la planta que se le asignan al producto.2. Proporción de Gastos Generales de la Planta ( 1 0 % ) IV. del 10 al 40 %. son aquellos que se requieren para la operación eficiente de la planta pero no son asignables directamente al producto y se estiman entre el 10 y 50 % de los sueldos y salarios (Kalk y Langlykke. construcción y . El capital fijo se refiere a todos los fondos necesarios para el diseño. enzimas inductores y materiales de recuperación. Gastos Generales (20 % ) de °0stos ?ara un Producto biotec- también las materias primas secundarias como cofactores. Los costos fijos comprenden la depreciación de maquinaria y equipo impuestos y seguros principalmente.

SELECCIÓN DEL PROCESO arranque de la planta. Es en este punto donde se hacen las estimaciones de escala del proceso y la estimación del costo de los equipos necesarios para las operaciones previas y las bioseparaciones.Producción de somatotropina porcina. y comprende los requerimientos de sueldos e inventarios. Técnicos: Concentración celular al final de la fermentación en peso seco 35 g/i Peso proteína/peso celular: 57 % Proteína SP/proteína total : 20 % Recuperación total esperada: 25 % Duración del ciclo de fermentación: 30 h Días de operación anual: 330 días . se escoge el que requiere mayor capital solamente si la rentabilidad generada es tan grande que justifica la diferencia de requerimientos de capital entre ambas alternativas.000 Kg/año Precio por dosis de 200 mg = $6. como son los proyectos biotecnológicos. Para producir SP mediante un cultivo de células recombinantes. Ejemplo 2. (base: 1988) 2. hasta más del 50 % del capital fijo para nuevas tecnologías donde no se tiene experiencia.30 CAPÍTULO 2. Cuando se comparan dos procesos de separación alternativos. Mercado: Producción estimada = 6. El capital de trabajo es la inversión necesaria para la operación normal de la planta una vez contruída.1. se cuenta con los siguientes datos: 1. Los costos de arranque son difíciles de estimar y pueden ir desde menos del 5 % del capital de inversión fijo para una planta basada en una tecnología ya establecida.00 dlls. Cada cerdo requiere de una sola dosis de 200 mg. Cuando se administra a cerdos la hormona somatotropina porcina (SP) se incrementa la velocidad de su crecimiento hasta en un 30 % y disminuye su contenido de grasa.

57 (b) Volumen de fermentación total (Vt): 210. „ x ___ ? x * 0.784 I ¡ciclo Este volumen de 22. entonces el volumen de fermentación V/ es: Vj = 32.037 / dias x ciclo x "24 h ^ ~ ~ .2 Kg 0. FUNDAMENTOS Impuesto sobre la renta (ISR): 45 % 3.015..500 Kg/año 1 Kg 1 Kg 1 Kg x .2.784 I/ciclo puede ser manejado por un solo fermentador.015. .2.000 Kg * 35 f = 6.037 / ~ (c) Volumen por ciclo de fermentación Vc = Vc 6. Si se considera el volumen de fermentación como el 70 % del volumen total del fermentador. . = 22. Estimados: (a) Producción de peso seco celular: 31 ™™ = 6000 — año 0.25 Kg = 210.500 / Considerando este fermentador se realizan las siguientes estimaciones de costos.

500.00 7.00 1. SELECCIÓN DEL PROCESO 4. instalación e instrumentación: (B) Instalaciones eléctricas: (C) Edificios: (D) Instalaciones: Inversiones diferidas.939.420. Mercadotecnia: VI.00 2.518.873.469. Costos de operación directos.00 Subtotal: 5.976.00 5. Costos (dlls.191. Gastos generales de planta: IV.00 Subtotal: 1.32 CAPÍTULO 2.579.00 85.00 Subtotal: 13. Capital de inversión: Inversiones fijas.420.579.756.949.585.100.00 1. 2.951.00 13.00 000.00 1.141. (A) Ingeniería.00 Subtotal: Total: 1.880.141.975.864.00 293.00 Estimar para este proceso: 1.00 2. (A) Equipo de proceso. Costos fijos. Investigación y Desarrollo: Total: 6.592.600.00 580.153. (A) Depreciación: (B) Impuestos: (C) Seguros: (D) Renta: (E) Mantenimiento: III.00 $ 17.054. vapor.780. servicios e investigación y desarrollo: 10.236.679. electricidad y tratamiento de desechos): II.00 2.581.000.720.00 587. Administración: V.165.756.315.950. construcción y contratos: Capital de trabajo.848. 2 meses de materias primas.746.00 Subtotal: 2. .00 487. El costo promedio del producto.00 000 000. El retorno sobre la inversión.618. (A) Materias primas y suministros: (B) Mano de obra y supervisión: (C) Servicios (agua.050. base 1988) I.763.00 15.00 $ 31.680.

264016 3.016 El retorno sobre la inversión RSI expresado en porcentaje.592.083.264. Costo promedio del producto: El costo promedio del producto se obtiene mediante el cociente del costo anual y la producción estimada del producto. 2. por lo tanto: RSI $3115300 RSI = 296% Esto significa que el proyecto es muy atractivo bajo las condiciones establecidas. El costo porcentual de cada concepto del producto. Cálculo del retorno sobre la inversión: Ingreso anual: 6.000 17. 33 Solución: 1.236/ano G ost o F promedio = --6.939.764 73.2.324.2. 000 Kg/año Costo promedio = 2. está dado por el cociente del flujo efectivo neto y el capital de inversión por 100.236 162. FUNDAMENTOS 3.000 £j£ x ^92 Menos costo anual Utilidad bruta Menos 45 % ISR Utilidad neta Mas depreciación 180. esto es: $17.000.494 89.746 Flujo de efectivo neto $ 92.270 2.592. Costo porcentual del producto por concepto. .407. 932 $/Kg = $92.

236 1. Algunos de los equipos más usados en cada una de esas etapas son los siguientes: 1.592.1 D .00 % 2.864 . de discos con descarga intermitente o de canasta.34 CAPÍTULO 2.469.000 .315.592.763.500.592.592.592.236 X 1UU ~ O. sistemas de filtración intermitentes.236 X 2.8 4% 17.581 17.236 1. 17. 17.1VO 2.8% 100 16 7% x iuu .236 X 8.848 17./0 ~ ' Total: 100. Varios tipos de equipos pueden ser empleados para una misma operación y la selección depende en gran medida del tipo de producto que va a obtenerse. .054..3 Equipo Parte importante en la selección de un proceso biotecnológico consiste en determinar el equipo necesario para realizar una determinada operación.873 y 1 00 . La Tabla 2.939.236 X 1. Remoción de insolubles: Con frecuencia se usan sistemas de filtración al vacio. .592. así como centrífugas tubulares.746 17.5 muestra las operaciones más comunes por etapa en función de las características de los procesos y productos biotecnológicos. SELECCIÓN DEL PROCESO Este costo está dado por el cociente del costo de cada concepto entre el costo de operación: Concepto Materias primas y suministros Servicios Depreciación Mantenimiento Gastos generales Inversión y desarrollo Otros Costo porcentual 6.

Adsorción .5: Operaciones de bioseparación empleadas de acuerdo a las características del proceso Generaciones Etapa Primera Segunda Tercera Remoción de Insolubles Filtración Centrifugación - Filtración Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Rompimiento .Ultrafiltración . EQUIPO 35 Tabla 2.Permeabilización Concentración .Electroforesis .Extracción por solventes .Abrasión .2.Destilación Extracción en dos fases acuosas Adsorción Precipitación Ultrafütración Purificación .3.Cromatografía .Adsorción .Homogeneización .Cromatografía .

dependiendo de la presentación con que se va a lanzar el producto al mercado. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. 2. Purificación: En esta etapa se emplean diversos sistemas cromatográficos que se traducen en la utilización desde equipos muy sencillos como puede ser una simple columna. Rompimiento celular: En esta etapa los equipos que más se manejan son los homogeneizadores y los molinos de perlas.36 CAPÍTULO 2. seguridad y confiabilidad del proceso. 5. hasta equipos muy sofisticados como los utilizados en cromatografía liquida de alta resolución. evaluación y optimización. Acabado: En la etapa de acabado. Entre estas actividades podemos destacar las siguientes: Síntesis: Establecimiento de las operaciones del proceso o diagrama de flujo. así como también tanques agitados y lechos empacados con diversos tipos de adsorbentes. 4. También son utilizados en esta etapa sistemas de electroforésis. la teoría y el apoyo computacional disponible. Concentración: En la concentración del producto se emplean extractores que pueden funcionar en forma continua o intermitente.4 Diseño El diseño de un proceso biotecnología) comprende diversas actividades basadas en la experiencia. El éxito de un diseño depende fuertemente de la síntesis del proceso ya que las tres actividades restantes: análisis. se derivan del diagrama de flujo seleccionado. . Evaluación: Economía. pueden utilizarse liofilizadores secadores y cristalizadores. Análisis: Modelación y establecimiento de los valores de las variables del proceso. 3. Optimización: Determinación de las condiciones para lograr el valor óptimo de una función objetivo.

• Síntesis de procesos.2. Sin embargo.1 Desarrollo de un Caso Base En la práctica normal el caso base representa el juicio cualitativo del ingeniero de diseño y presupone ser el proceso de separación más económico que pueda ser desarrollado dentro de las restricciones que en tiempo y dinero tiene el proyecto (Nuil. Cuando el caso base ha sido evaluado.4. entonces éste nos lleva a un nuevo caso base de diseño. En la práctica los procesos rara vez se seleccionan de esta manera. dado que ni los algoritmos computacionales. ni las descripciones cuantitativas de los métodos de separación están suficientemente desarrollados. DISEÑO 37 Actualmente existe un gran interés por el desarrollo de métodos computacionales para el diseño de procesos que incluyan la síntesis de los mismos y que permitan el análisis y la evaluación de diversas alternativas. Si el proceso modificado tiene costos de operación y capital más bajos. Una vez que el caso base ha sido seleccionado. lí)87). para encontrar en forma rápida el diseño óptimo. Este nuevo caso base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base óptimo. — Método heurístico — Método algorítmico — Sistemas expertos 2. . El proceso alternativo se evalúa con las mismas restricciones que el caso base. el diseñador de proceso determinará los costos de operación y capital con el mayor detalle posible.4. estos métodos cada vez son más utilizados como apoyo en algunas fases de la selección del proceso. En esta sección se describen los dos enfoques complementarios utilizados para la selección de un proceso: • Desarrollo de un Caso Base. se hace un juicio sobre el más próximo proceso económicamente competitivo.

son producto de este tipo de trabajos. 2. el método algorítmico y los sistemas expertos. 4. 3. El método heurístico. la aproximación heurística no garantiza la solución óptima. se llama síntesis de proceso. se requiere romper la célula. Primero remover el componente más abundante. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. el producto es extracelular. Cuatro de tales reglas heurísticas son (Petrides et a/. se requiere precipitar los ácidos nucleicos. Si el producto es intracelular. Si el rompimiento de la célula se lleva a cabo por métodos mecánicos. Primero remover lo que sea mas fácil. Existen reglas heurísticas más específicas que las mencionadas anteriormente. es decir la secuencia de operaciones para transformar una serie de materias primas en productos. Si la célula cultivada es de mamífero. Seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes. . estos métodos han probado ser una herramienta valiosa en la optimización de la estructura del proceso.38 CAPÍTULO 2. Aún así. Al basarse en la experiencia. Algunas de estas reglas heurísticas son generales y aplicables para la síntesis de procesos de bioseparación. 3. como las usadas en el diseño de procesos de purificación de proteínas a gran escala: 1. el sentido común y la intuición del ingeniero.2 Síntesis de Proceso La investigación que se realiza para seleccionar un proceso. 2. Método Heurístico El método heurístico trata de limitar las alternativas posibles para un proceso usando reglas desarrolladas a través de diseños previos y la experiencia. Hacer las separaciones mas caras y difíciles al final.4. 1989): 1.

4 1. en el desarrollo de bases de conocimientos para sistemas expertos (Prokopakis y Asenjo. 6. es necesario distinguir entre productos extracelulares e intracelulares.4. Aproximación Heurística para la Selección de un Proceso de Bioseparación. 1990). se requiere un pretratamiento. Etapas de Recuperación Primarias: Productos Intracelulares.2. debe escogerse el intercambio iónico.Se presenta en esta sección una aproximación heurística de la síntesis de un proceso de bioseparación de materiales biológicos típico (Petrides et a/. consiste en desarrollar un diagrama de bloques de sus principales etapas. La recuperación y purificación de los productos extracelulares es comparativamente más fácil de realizar que la de los productos intracelulares. En el caso de los productos intracelulares. DISEÑO 39 4. 8. El desarrollo del diagrama de bloques está basado en la estructura general que se prqsenta en la Figura 2. El primer paso en la síntesis de un proceso.. 7. se requiere concentrar el producto. Si la concentración de la proteína total al final de la recuperación y antes de la purificación. Si uno o dos pasos de intercambio iónico producen una pureza similar a la de cromatografía de afinidad. 5. las operaciones que se utilizan son las siguientes: . se seleccionan para cada etapa las operaciones alternativas posibles. es menor que 60 g/l. La filtración en gel se puede utilizar como una etapa de separación intermedia sólo para la eliminación de sales. La filtración por gel se puede utilizar como un paso de acabado sólo para separar fracciones proteicas. En el desarrollo de un diagrama de bloques para un nuevo proceso. Este tipo de reglas son utilizadas conjuntamente con otras aún más específicas. Posteriormente. Si la alimentación para la purificación por cromatografía no es un caldo claro. 1989).

1989. Fuente: Petrides et al.40 CAPÍTULO 2. Copyright ©1989 AIChE. Reproducida con el permiso de American Institute of Chemical Engiixeers. SELECCIÓN DEL PROCESO BtORREACTOR Producto intracelular COSECHA DE CÉLULAS Centrifugación Microfirtración UKrafütración Producto extraoelular REMCOON DE BIOMASA Filtración al vacío Centrifugación Microfiltración Ultrafiltradón Filtración en prensa Filtración en cámara Rotación ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Homogenización Molino d« perlas Choque osmótico EXTRACCIÓN DELPROOUCTO Solventes orgánicos REMOCIÓN DE DESECHOS Centrifugación Micfufilb ación Filtración al vacío Filtración por presión Polímero -s Ruidos supx Adsorción Micelas inv« Destilación RENATURAUZACION Solubilización Reoxidación CONCENTRACIÓN Ultrafiltradón Evaporación Osmosis inversa Precipitación Cristalización Extracción Adsorción Destilación Especificaciones de afta pureza Especificaciones de baja pureza PURIFICACIÓN FINAL Adsorción Filtración gei Eledrodialisis Diafiltración Electroforesis DESHIDRATAOON Secado por aspersión Secado por Ikrfilizaoón Secado en lecho fluidizado Figura 2.4: Diagrama de flujo de un proceso de bioseparación. Todos los derechos reservados. .

La filtración por membrana tiene ventajas para cosechar células pequeñas como la de E. Con filtración por membrana se recuperan todas las células. Dentro de éstos se puede destacar el uso de la digestión enzimática para liberar proteína intracelular de bacterias gram-positivas. Para altas capacidades (varios m3/h) solamente se puede disponer de homogeneizadores. Remover primero el líquido extracelular. la centrifugación y la filtración por membrana son las únicas técnicas usadas para cosecha de células a gran escala. también se utilizan métodos químicos. Cuando el flujo es mayor que 20 //m 2 — h. (c) Remoción de Desechos Celulares: Una vez que la célula se rompe y el producto es liberado. Otra ventaja de la filtración por membrana es la recuperación del producto.4. así como el choque osmótico que puede utilizarse para liberar proteínas del espacio periplásmico. La centrifugación tiene ventajas para microorganismos grandes (diámetro mayor que 2 mieras y densidad mayor que 1030 kg/m3). El rompimiento de bacterias y levaduras es realizado por homogeneizadores a alta presión o con molinos de perlas. Para microorganismos más pequeños pueden usarse técnicas de coagulación para aumentar el tamaño de la partícula que sedimentará. microfiltración o filtración por presión. . Como se establece en la Figura 2. Para el rompimiento celular. DISEÑO 41 (a) Cosecha de Células: El primer paso en un proceso para la recuperación de productos intracelulares es la cosecha de células. coli.2. está en completa concordancia con la primera regla heurística: primero remover el componente más abundante.4. siempre que no se presente rompimiento o lisis. Con la centrifugación siempre se pierden de 1 a 5 % de las células. (b) Rompimiento de Células: Con frecuencia el segundo paso en la obtención de productos intracelulares es el rompimiento de la célula. los desechos son eliminados por medio de una o varias operaciones como: centrifugación. la filtración por membrana es la que produce mejores resultados. la disolución lipídica para el caso de bacterias gram-negativas.

debe ser separado primero de otras partículas y posteriormente tratado para que adquiera su forma activa. SELECCIÓN DEL PROCESO Cuando el producto es soluble.42 CAPÍTULO 2. debido a que éstas pueden ocasionar problemas en etapas de bioseparación posteriores. por ejemplo la hormona de crecimiento producida por E. Posteriormente sigue un paso de lavado en el cual muchos de los desechos y contaminantes son eliminados. se requiere posteriormente realizar una diafiltración. Las centrífugas son eficientes para la separación de partículas grandes como los restos celulares. Posteriormente se pueden usar detergentes para remover otros contaminantes. Cuando se usan microfiltros para remover los desechos. Las proteínas recombinantes forman cuerpos de inclusión dentro de la célula huésped. las células rotas y el producto son mezclados en un tanque agitado con un adsorbente. coli. Cuando el producto es insoluble (por ejemplo los cuerpos de inclusión). principalmente en las de cromatografía. En este proceso. Este es un problema común de muchas proteínas eucarióticas producidas por microorganismos procariotes. de tal manera que cuando se usen para este efecto. deben ser acompañadas de una operación de filtrado para eliminar las partículas más pequeñas. La purificación es realizada por resuspensión y recentrifugación de la fase pesada en 2 o 3 pasos. La separación del producto de los desechos y su concentración simultánea puede ser alcanzada utilizando técnicas de extracción-adsorción utilizando ya sea adsorbentes de afinidad o de intercambio iónico. La separación del producto de los desechos puede ser llevada a cabo también por extracción con solventes orgánicos o con algunas soluciones de polímeros. Los sistemas de dos fases acuosas han sido aplicados para la recuperación de proteínas. . Estos pueden ser separados de los restos celulares con una centrífuga de discos. éste es recuperado en la fase ligera de una centrífuga o en el filtrado de un filtro.

para su concentración las operaciones alternativas son: Ultrafiltración. Precipitación y Destilación. Extracción. Si el producto es soluble.2. Una vez realizada la separación primaria del producto ya sea éste intracelular o extracelular. Extracción: La extracción con solventes es una operación ampliamente usada en la concentración de productos biotecnológicos. (a) Concentración.5 MPa y el flujo promedio entre 20 y 50 l/m2 . . los filtros prensa y los filtros con membranas. Osmosis inversa. La presión de operación típica varía entre 0. Operaciones de Alta Resolución. 2. i. Si el producto es insoluble y se encuentra desnaturalizado. primero es necesario concentrarlo. Cada uno de ellos tiene ventajas y desventajas según el tipo de producto y tipo de célula. ii.4. Se requiere que el coeficiente de partición del sistema sea alto para poder llevar a cabo la concentración del producto en el menor número de etapas de contacto.h. haciendo de la selección un problema difícil. DISEÑO Etapas de Recuperación Primaria: Productos Extracelulares. Después de una primera clarificación del caldo obtenido del biorreactor o una vez rota la célula. 43 (a) Eliminación de Biomasa: La eliminación de biomasa es el primer paso que se realiza en un proceso de separación cuando el producto es extracelular. Ultrafiltración: Es una operación usada ampliamente para la concentración de proteínas. Evaporación. entonces primero se renaturaliza y después se purifica. particularmente en la obtención de antibióticos. el producto se encuentra diluido. la purificación es llevada a cabo mediante operaciones de alta resolución. Este paso se ajusta a la segunda regla heurística. No hay una alternativa única para todos los productos. En esta operación los equipos más empleados son: la centrífuga decantadora.2 y 0.

Estas unidades compiten en el mercado con la ultrafiltración y la osmosis inversa para la concentración de compuestos tanto de alto como de bajo peso molecular. SELECCIÓN DEL PROCESO iii. Las proteínas eucarióticas producidas por organismos procarióticos. v. las operaciones de purificación finales son normalmente la cromatografía y la ultrafiltración. Precipitación: Es una operación usada para concentración y purificación. . frecuentemente forman cuerpos de inclusión en la célula recombinante. Para productos de pureza relativamente baja como las enzimas para detergentes. Operan a altas presiones (4 a 6 MPa) y a bajas temperaturas. iv. se eliminan los solubilizantes utilizando cromatografía o diafiltración. 3. Para productos de alta pureza. (b) Renaturalización. Destilación: En los procesos de bioseparación esta operación se utiliza generalmente para la recuperación de solventes orgánicos. solventes y polímeros para la precipitación selectiva de compuestos de interés. vi. Al final se obtiene una solución de proteína diluida. Osmosis Inversa: Se usan unidades con membranas de tamaño de poro pequeño para la concentración de soluciones de productos con bajo peso molecular.44 CAPÍTULO 2. Estos cuerpos de inclusión pueden ser solubilizados mediante el uso de sales y agentes reductores. Comúnmente se usan sales. Purificación. Evaporación: Se utilizan evaporadores de películas delgadas los cuales operan a bajas temperaturas (40—50°(7) al vacío. Las operaciones para la purificación final dependen fuertemente de la pureza requerida del producto. La precipitación es usada para remover contaminantes. Después que la proteína desnaturalizada es solubilizada. distinguiéndose los productos farmacéuticos por su alta pureza en comparación a la de los productos industriales. la operación de purificación final consiste sólo en la eliminación del solvente.

. En la práctica sin embargo. Puesto que el la carga depende del pH y la fuerza iónica. Es una operación apropiada en cualquier etapa de la purificación del producto y particularmente lo es para el manejo de grandes volúmenes de material con baja concentración de producto y gran cantidad de contaminantes. la de filtración por gel y la de afinidad. DISEÑO 45 (a) Cromatografía: Es una operación que se realiza al final de un proceso. Su limitante es el alto costo de los materiales (ligandos) involucrados. tiene dos aplicaciones principales: remoción de pequeñas moléculas de las proteínas y remoción de proteínas contaminantes de la proteína producto.2. En el fraccionamiento de proteínas. Cromatografía de Intercambio Iónico: Esta separación se basa en la diferencia de la carga molecular de las biomoléculas. cualquier anión o catión en un soporte puede ser usado para realizar la separación. están basadas en las interacciones específicas entre biomoléculas. Es una operación altamente eficiente ( más del 90 % ). Existen diferentes tipos de cromatografía como la de intercambio iónico. Cromatografía de Afinidad: Las separaciones por afinidad o reconocimiento molecular. En la selección de la secuencia de estas operaciones debe observarse la cuarta regla heurística: "seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes. i. Normalmente se requiere de una secuencia de varias operaciones cromatográficas para alcanzar la pureza deseada del producto. en concordancia con la regla heurística "hacer las separaciones más difíciles y caras al final". ii. entre otras. iii. Cromatografía de Filtración en Gel: Este tipo de cromatografía separa moléculas en base a su tamaño molecular.4. la filtración por gel es lenta comparada con otras técnicas cromatográficas. la selección normalmente está determinada por el pH al cual es estable el producto que se desea purificar.

La síntesis consiste en obtener la . Las técnicas más comunes de deshidratación para productos inestables son la liofilización y la cristalización. cloruro de calcio o cloruro de sodio. La idea principal de estas técnicas es la formulación de una superestructura que consiste en un diagrama de flujo que contiene todas las posibles alternativas de diseño. Algunos productos son más estables como sólidos. y esta separación puede ser realizada mediante M métodos de separación. CAPÍTULO 2. A cada operación unitaria de la superestructura se le asocia una variable binaria (una variable que sólo puede tomar los valores O ó 1) y se construye una formulación óptima. El desarrollo de estos algoritmos se lleva a cabo mediante técnicas de programación matemática. SELECCIÓN DEL PROCESO Las operaciones de acabado comprenden aquellas que se realizan para la esterilización y estabilización del producto. Método Algorítmico El uso de algoritmos matemáticos para desarrollar la síntesis de un proceso. Los microfiltros de membrana son utilizados para esterilizar soluciones biofarmacéuticas. removiendo cualquier contaminación bacteriana. se basa en el uso de la programación lineal (o no lineal) entera mixta (MILP o MINLP de sus siglas en inglés). A continuación se presenta una descripción de estas técnicas para una situación particular. Actualmente la línea principal de investigación en técnicas de programación matemática. . es en teoría el único camino válido para desarrollar un proceso óptimo. Esto se basa en el hecho de que todas las secuencias posibles para el procesos pueden considerarse rigurosamente. Acabado. aplicadas a la optimización estructural de un proceso. Generalmente el problema consiste en separar una mezcla que tiene TV componentes: /4.46 4. Para minimizar el riesgo de contaminación el agua utilizada deberá estar libre de pirógenos. Una limitante de estas membranas es la incapacidad para la remoción de pirógenos y virus. Para incrementar la vida del producto se utilizan como agentes estabilizadores algunas sales como sulfato de amonio. B. .. (7.

En la parte superior de dicha figura se muestra el proceso utilizando como operación de separación la destilación y en la parte inferior se muestra la separación por extracción. (AB). En el caso de la extracción el orden en el cual se encuentran los componentes de la mezcla es (BAC). (BC\ 4. (C) 2. Los métodos de separación son: 1.2. lo que significa que el compuesto A tiene mayor volatilidad que el compuesto C. .4. Se parte de una mezcla ternaria (ABC) y como resultado de una separación o varias separaciones de la mezcla se obtienen los subgrupos: 1. Los componentes en cualquier mezcla están colocados en orden descendente con respecto a la propiedad característica en la que se basa el método de separación. 4. Para desarrollar este problema se hacen las siguientes consideraciones: 1. extracción 3. (A). lo que significa que el componente B tiene mayor solubilidad que el componente C. DISEÑO 47 secuencia óptima de separación utilizando el costo total como función objetivo. En el extractor las separaciones que tienen lugar son: (B/AC) o (BA/C). De esta manera pueden tener lugar dos separaciones en la columna de destilación: (A/BC) o (ABIC). La función primaria de una etapa de separación es separar los dos componentes adyacentes. 2.5. (AC). se muestra a superestructura que origina el problema de separación de la mezcla ternaria considerando sólo los métodos de separación alternativos: destilación y extracción. (£). 6. destilación y 2. Se denominan fase ligera y fase pesada a los componentes adyacentes entre los cuales tiene lugar la separación. En el caso de la destilación el orden de los compuestos de la mezcla es (ABC). 3. La destilación o la extracción pueden ser usadas en cualquier nivel de la separación. 5. (ABC). 7. En la Figura 2.

48 CAPÍTULO 2. Fuente: Prokopakis y Asenjo. Copyright ©1990 .5: Superestructura de todas las secuencias de separación alternativas para una mezcla ternaria. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Todos los derechos reservados. SELECCIÓN DEL PROCESO (ABC)] ->(AB/C) DESTILAaON EXTRACCIÓN -H (B/A) -H (A/B) -4(BAq -J (A/C) Figura 2. . 1990.

1. M N-l £ £ y^k = l j=l k=\ Para « = 1. Cualquier subgrupo que haya sido procesado no puede aparecer nuevamente en otra separación. 3. Se definen los siguientes índices: i: subgrupo j: método de separación empleado k: fase ligera obtenida en la separación 2. Se introduce una variable binaria 3/í. Por ejemplo la variable binaria 3/1. La función objetivo está sujeta a las siguientes restricciones: 1.1 se asocia a la separación que se realiza en el grupo ABC '.1 (2. para la obtención de la secuencia de separación de costo mínimo.¿. Se define la variable costo C¿. 4.2.jk para cada operación. Para cualquier subgrupo. cuando mucho una separación que involucre a ese subgrupo puede existir en la secuencia. DISEÑO 49 Para sistematizar el análisis se emplean las convenciones siguientes: 1. por medio de la destilación y cuya fase ligera es A.4.2) 2. Una y solamente una separación que involucre al subgrupo con N componentes (mezcla original) de. presión (P) y flujo (F). • .¿. . Esta función puede puede formularse como: i 3 k de tal manera que el costo total CT sea mínimo. Se establece la función objetivo que permite la optimización del proceso.jt. • 2" . Esta variable es función de parámetros operacionales como : temperatura (T). para cada operación.be existir en la secuencia.

g=l g=l M Nn-l p=l Resolver el sistema de ecuaciones a que da lugar la ecuación (2. Sistemas Expertos Un sistema experto es un programa de computadora diseñado para tomar decisiones fundamentadas en una base de conocimientos y en un sistema de inferencia.1) no es fácil.50 CAPÍTULO 2. Por ejemplo: nunca usar la cromatografía de afinidad en presencia de partículas celulares o no usar la centrifugación después de la filtración. En particular. 1990). y su complejidad aumenta conforme aumenta el número de métodos de separación considerados y el número de componentes de la mezcla respectiva. SELECCIÓN DEL PROCESO M Ni-1 Z/ZX¿fc = 1 P<*™¿ = 3.j. Sean m y n dos subgrupos. . . (2.es el número de componentes en el subgrupo.k) produce dos subgrupos...k) existe. En algunos casos la formulación matemática de un problema de secuenciación de operaciones de separación puede simplificarse. entonces: M p=l Nm-l E *«*. Si la separación (i.j. Una vez que el diseñador ha alimentado al sistema experto (SE) con datos relativos al producto y a la fuente de . Cualquier separación (i. garantizan la viabilidad de la solución (Prokopakis y Asenjo. entonces existe una y solamente una separación para para cada uno de los dos subgrupos. J V . .1 j=i k=i donde TV.3) 3. los tres conjuntos de ecuaciones de restricción dados en la formulación anterior conjuntamente con las restricciones de los parámetros operacionales. dando indicaciones al programa que le permitan la eliminación de algunas operaciones de separación.

Este diagrama contiene una descripción de aquellas operaciones en la secuencia de separación que deben ser llevadas a cabo para para obtener el producto con el rendimiento y pureza deseada por el usuario.6: Diagrama de operación de un sistema experto. Una vez que se ha alimentado la información básica al sistema. DISEÑO Parámetros generales Parámetros específicos Base de datos 51 Sistema Experto .2. donde se va a obtener. el sistema debe ser capaz de generar un proceso de recuperación. localización dentro de la célula y concentración. el diseño de la secuencia de las operaciones de recuperación y purificación utilizando un sistema experto. éste genera el diagrama de bloques de todas las etapas del proceso. Una pregunta típica es la siguiente: ¿Qué tipo de célula está siendo crecida para generar la proteína en cuestión? ó ¿cual es la concentración?.4.6 se muestra un diagrama de operación de un SE. peso molecular. como son: punto isoeléctrico. se inicia con la respuesta del usuario a preguntas básicas sobre el producto y sobre la célula de la cual se va a obtener. hidrofobicidad superficial. En los procesos biotecnológicos para obtención de proteínas. Posteriormente el sistema decide sobre la operación unitaria particular que . Se preguntará también sobre algunas propiedades de la proteína de interés que puedan afectar el proceso de separación. En la Figura 2.Base de conocimientos • Sistema de inferencia Secuencia de Proceso Figura 2.

1990). para la obtención de insulina pura a partir de un caldo de E.. Deben alimentarse al SE los parámetros que caracterizan al proceso que en este caso son: Parámetros Generales Tipo de célula: E.Funcionamiento de los sistemas expertos. SELECCIÓN DEL PROCESO debe emplearse en cada etapa. Datar y Rosen. coli recombinante Producto de interés: proteína Localización celular: intracelular Nombre: insulina Presentación en el mercado: cristales de insulina Parámetros Específicos Peso molecular Hidrofobicidad Punto isoeléctrico Curva de titulación Base de datos sobre liberación diferencial del producto Base de datos de equilibrio en dos fases . coli recombinante que produce TrpE-Met-proinsulina intracelularmente (Prokopakis y Asenjo. Ejemplo 2. Solución: 1.52 CAPÍTULO 2.2.ENTONCES". Se desea seleccionar un proceso mediante un sistema experto. En este tipo de sistemas la información cualitativa se proporciona mediante conjuntos de reglas inferenciales «SI . 1990.

Cuando existen equipos alternativos para realizar la misma operación. 4. coli y al conocimiento experimental que se proporciona al SE. 3. SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Levadura Centrífuga de Discos Microfiltración 0. El SE decide sobre las operaciones siguientes en base a la información que le proporcione el usuario sobre la localización del producto. el sistema cuenta con ponderaciones heurísticas que auxilian la selección. usando las siguientes reglas: . El SE consulta al usuario sobre estos parámetros ya sea que hayan sido medidos o estimados estimados. como son: concentración. DISEÑO 53 2. viscosidad.2.5 0. El sistema experto revisa las reglas de la base de conocimientos para seleccionar el equipo de cosecha (EC).5 En este caso debido a las características de la E.4. éste elige la opción "centrífuga de discos" para la operación de cosecha de células. Una vez que se ha definido el equipo de cosecha deberán establecerse los parámetros de la corriente de salida de la unidad. densidad y otro¡s.6 0.4 SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Bacteria Centrífuga de Discos Microfiltración 0.

En el caso de la operación de rompimiento celular. Posteriormente el SE selecciona el equipo requerido para cada una de las operaciones. SELECCIÓN DEL PROCESO Microorganismo = El Producto es Extracelular Mamífero SI ENTONCES El Producto es Intracelular Se Requiere Rompimiento Se Requiere Separación de Desechos Se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos El Producto es Extracelular No se Requiere Rompimiento No se Requiere Separación de Desechos No se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos 5. 1.54 SI ENTONCES CAPÍTULO 2. . En este caso como la proteína de interés es intracelular. utiliza las siguientes reglas para seleccionar el equipo de rompimiento celular (ER). el SE establece la necesidad de realizar operaciones de rompimiento celular y separación de desechos.

DISEÑO 55 SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Bacteria Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = y las proteasas son altas Agregue un inhibidor de proteasas al medio Bacteria SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Levadura Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Hongo Molino de Perlas Medio 2.2.4. El sistema decide la separapación de los cuerpos de inclusión del homogeneizado utilizando el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha celular. .

para obtener una solución de TrpEMet-proinsulina. SELECCIÓN DEL PROCESO Con las letras a. c se muestran en la Figura 2. el equipo más adecuado será aquel que se haya utilizado experimentalmente Alta Alta SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = EC = Alta Mediana o Baja Separación en Dos fases . Se establece la necesidad de solubilizar los cuerpos de inclusión con una solución de ácido clorhídrico-guanidina (GuHCl) y ¡3— mercaptoetanol en un reactor químico. 7.56 CAPÍTULO 2. Se establece la necesidad de concentrar la solución de TrpE-Metproinsulina.7 las tres primeras operaciones generadas con el SE. Para decidir sobre el método de concentración y el equipo (EC) el SE utiliza las siguientes reglas: SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = IMPRIME: Debido a que ambas operaciones tienen una eficiencia alta. 6. 6. Hasta este punto del proceso la TrpEMet-proinsulina obtenida se encuentra formando cuerpos de inclusión.

La solución obtenida en g está compuesta de proinsulina. DISEÑO SI Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = y la Eficiencia de la Interacción Hidrofóbica = ENTONCES EC = 57 Baja Baja Baja Precipitación (sulfato de amonio) En los procesos establecidos para la obtención de insulina. 9. 8. Se decide utilizar el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha de células para separar el precipitado de la solución anterior. 10. Una vez renaturalizada la proinsulina debe ser purificada en una operación de alta resolución. El SE cuenta con reglas para la selección del equipo de alta resolución (EAR) como las siguientes: SI ENTONCES Bioespecificidad es posible EAR = EAR = EAR = Cromatografía Cromatografía Iónico de Alta Cromatografía Hidrofóbica de Afinidad de Intercambio Resolución de Interacción 0.7).3 0. fragmentos de TrpE y residuos de metionina.1 . la concentración se realiza mediante una precipitación.2. que podrán separarse por un proceso de ultrafiltración para obtener un concentrado de proinsulina cruda (operación h de la Figura 2. La concentración de proinsulina se incrementa mediante una evaporación. 11.4. El concentrado de proinsulina cruda se renaturaliza en un reactor químico. El concentrado se somete a un tratamiento en un reactor químico para liberar la proinsulina.6 0.

Cuando el usuario responde "sí" a la pregunta del SE. 13. operaciones /.7 y que producen la insulina humana recombinante.. para poder determinar la operación más apropiada. SELECCIÓN DEL PROCESO SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = IgG Monoclonal Cromatografía de Afinidad Bioespecífica Cromatografía de Intercambio Iónico (1 o 2 etapas) 0. Una pregunta puede ser: "¿Tendrá el producto usos terapéuticos?". entonces éste decide que la operación de purificación de insulina proveniente del reactor enzimático (en el cual la proinsulina se transformó en insulina) debe ser una cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). m de la Figura 2. el sistema responderá: "Si el producto va a tener uso médico la proteína debe tener una pureza de 99. De lo antes expuesto se desprende que los sistemas expertos pueden ser una herramienta muy útil en la síntesis de procesos de bioseparación. Al llegar a ciertos puntos de la secuencia el SE puede hacer preguntas adicionales al usuario. de la Figura 2.7.9%. seleccionando para ello las operaciones o. p. </.2 0. purificada al 99.58 CAPÍTULO 2.8 12. Finalmente se puede mencionar que para la selección de las operaciones de acabado el sistema toma en cuenta la presentación del producto en el mercado. lista para su comercialización.4 SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = No está Definido Cromatografía de Afinidad Cromatografía de Intercambio Iónico 0.6 0. .98% y debe estar libre de pirógenos". Si el usuario a su vez pregunta "¿por qué?".

DISEÑO 59 Fermentador (a) Cosecha de Células con centrifuga de discos Células de E. .2.4. cotí (b) Rompimiento de Células con homogeneizador Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina + desechos (c) Separación por Centrifugación con centrífuga de discos Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina (d) Solubilización en reactor químico con GuHCI Solución de TrpE-Met-Proinsulina (e) Precipitación en reactor Precipitado de TrpE-Met-Proinsulina Figura 2.7: Diagrama de bloques para el proceso de obtención de insulina humana.

..60 CAPÍTULO 2.7: Continuación. SELECCIÓN DEL PROCESO (f) Concentración por Centrifugación con Centrífuga de Discos i Concentrado de Trp E -Met-Proinsulina (g) Separación Química de Trp-Met-Proinsulina en Reactor Químico Proinsulina + TrpE + Metionina \r (h) Separación por UHrafittración Concentrado de Proinsulina cruda 1r Secado con Evaporador Centrífugo ir Concentrado de Proinsulina cruda (i) Renaturalización en Reactor Químico Proinsulina activa en solución \r Purificación en Columna de Intercambio iónico Proinsulina activa 1'2 Figura 2..

.2..7: Continuación.4. DISEÑO 61 (i) Transformación en Reactor Enzimático ir Purificación > 99 % con HPLC Insulina Insulina Pura \r (n) Concentración por UKrafiltraáón Concentrado de Insulina ir (o) Cristalización en Reactor Químico Cristales de Insulina6-Zn2 ir (P) Concentración con Centrífuga de Discos Pasta cristalina de Insulina6-Zn2 \r (q) Secado con Evaporador instantáneo Insulina Humana Recombinate 99.9 % de pureza Figura 2. .

SELECCIÓN DEL PROCESO 2.5 Sumario La selección de un proceso de separación para la obtención de un producto biotecnológico se basa fundamentalmente en el mercado del producto y en sus especificaciones. sin embargo el proceso final generalmente es obtenido mediante una combinación de la teoría y la experiencia de que se dispone. .62 CAPÍTULO 2. Existen varios métodos que contribuyen a seleccionar el proceso de bioseparación óptimo.

6 Problemas 2.3.Se cuenta con los siguientes datos para producir insulina recombinante: (A) Mercado: Producción (B) Costos anuales: año 1: año 2-10: 1. PROBLEMAS 63 2.000 kg/año $34.877.664.00 (C) (D) (E) (F) Depreciación: Inversión fija y diferida: Capital de Trabajo: ISR: 45% Estimar el precio de venta para obtener un Retorno Sobre la Inversión (RSI) de 40%.2.El proceso de obtención de una enzima consta de cuatro operaciones de separación.525.00 $2.00 $31.468. 2. $53.. cada una de ellas presenta una eficiencia de recuperación del 80 %.6.Desarrollar un diagrama de flujo de un proceso para la obtención de un producto biotecnológico.00 $2.00 $30. Estime la recuperación global del proceso...742. 2.2. Resp.766.1.00/Kg .

571-601. Cost estimation for biotechnology projects. 197-225. Marcel Dekker Inc. A. Downstream processing: Key to slashing production cost 100 fold. J. John Wiley & Sons. (Eds. Synthesis of downstream processes. Nuil. R. An introduction to biochemical process design. R.). R. Bio/Technology. y Solomon. y Langlykee. C. 8. Biotechnology. L. R. (Ed.. 22. 363-384. AIChE. 1990. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo. (Ed. New York. Demain. Rousseau. 9. 229-240. Downstream process economics. R. Rousseau. J.. C. 351-391.64 CAPÍTULO 2. B.). Bioseparations: Media and modes. A. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. 982-995. M. Asenjo. J. Datar. New York. 1990. A. W. 954-958. 1990.200-201. Spalding. 1987. Bio/Technology. P. Prokopakis. P. New York. M. A. (Ed. (Ed. R. J.). Marcel Dekker Inc. D. 1986. W. M. Cooney. En: Handbook of Separation Process Technology. L. 1987. En: Separation Processes in Biotechnology. John Wiley & Sons. P. 1986. (Ed. A. Shuler. 4. New York. Protein purification: The right step at the right time. 1989. y Rosen. y Evans. J. 1991. Knight.7 Bibliografía Bonnerjea. Oh. Kalk. Selection of a separation process. H. . New York. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology.). Petrides. y Asenjo. y Hoare. New York. SELECCIÓN DEL PROCESO 2.). 4. B. S. 741-793. L. G. American Society for Microbiology. N.). Kelly. General processing considerations. F. En: Handbook of Separation Process Technology. J.

Parte II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular. .

restos celulares y cuerpos de inclusión. que son utilizadas en las primeras etapas de recuperación del producto de acuerdo a las tres primeras reglas heurísticas de la selección del proceso de separación. Las operaciones típicas de remoción de insolubles son la filtración tradicional. Para la remoción de insoluoles de un caldo pueden ser utilizados diversos tipos de equipos. la disponibilidad de equipos. En las operaciones de remoción los principales insoluoles que se consideran son células enteras. y la centrifugación. Estas operaciones se tratan en los capítulos 3 y 4. empleada en la separación de levaduras. la selección depende de varios factores como el tipo de célula. Cuando el producto de interés es intracelular después que las células han sido separadas del caldo es necesario romperlas. . bacterias y células de mamíferos. respectivamente. muy utilizada para la separación de hongos filamentosos. en esta parte se revisan las relacionadas con la remoción de insoluoles y la ruptura celular.67 Del conjunto de operaciones que integran normalmente un proceso de bioseparación. En el capítulo 5 se presentan los principales equipos que se emplean en esta operación a nivel industrial y los principales factores para su diseño. eficiencias y costos.

En la filtración de lecho profundo los sólidos se depositan dentrc del medio filtrante. La filtraciói por membrana se realiza utilizando membranas especiales de tamaru de poro muy pequeño.1 Introducción La filtración consiste en la separación de un sólido de un fluido por acción de un medio filtrante y un gradiente de presión. Normalmente en los procesos biotecnológicos se utilizan tres tipos de mecanismos de filtración (Figura 3. dos son de partícula interés en las bioseparaciones sólido-líquido: La filtración convencionc y la filtración con membranas. . membrana (cruzado). que generalmente operan con flujo paralelo a 1. .1): .Filtración con formación de torta o filtración convencional. se depositan sobre el medio filtrante formando una pasta. de tal manera que no hay un depósito de sólido sobre la membrana sino una concentración del caldo.Filtración por membranas (Microfiltración y Ultrafiltración).Filtración de lecho profundo. De los tres mecanismos de filtración descritos.Capítulo 3 Filtración 3. En la filtración con formación de torta los sólido. .

70 CAPÍTULOS.1: Mecanismos de filtración. Filtración con membrana Figura 3. . Filtración de lecho profundo ll ii Suspensión Suspensión Medio filtrante b). FILTRACIÓN Suspensión a). Filtración con formación de torta f\ > Retenido Membrana Filtrado c).

• El pretratamiento de caldos biológicos. • La teoría de la filtración convencional. Un aspecto fundamental en el tratamiento de la operación de filtración es la teoría básica existente. En base a lo anterior. De particular interés es observar como esta teoría puede ser utilizada en la filtración de caldos biológicos. En la sección 3. Debido a la naturaleza de los caldos que se manejan en bioseparaciones. FUNDAMENTOS 71 El objetivo este capítulo es presentar los aspectos fundamentales de la filtración convencional y su aplicación a la filtración de caldos biológicos. la cual contribuye al diseño. 3. selección y operación racional de los diferentes equipos de filtración.4 se dedica a presentar los aspectos más relevantes del diseño de filtros convencionales.2 Fundamentos La filtración convencional forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones Sólido-Líquido (BSL). La filtración por membranas se revisa en el capítulo 10. La sección 3.3.2.3. . Los principales equipos que se utilizan en este tipo de filtración se presentan en la sección 3. es común que éstos sean pretratados mediante agentes físicos o químicos para mejorar su comportamiento en las operaciones de separación sólido-líquido a que van a ser sometidos. Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente es necesario seleccionar entre una operación de filtración y una operación de sedimentación (como la centrifugación). y frecuentemente la decisión es instrumentar una combinación de estos dos tipos de operaciones.2 de este capítulo se centra la atención en los fundamentos de la filtración convencional. esta sección se ¿entra en tres aspectos fundamentales: • La filtración como parte de los sistemas de BSL.

Concentración.Pretratamiento. FILTRACIÓN líquido liquido Figura 3. reservados.Postratamiento. . 1974 ). Copyright ©1974.1 La Filtración corno parte de los Sistemas de BSL Un proceso de separación sólido-líquido (Figura 3.72 Caldo CAPÍTULOS. Adaptada de Tiller. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. . entre las que destacan las siguientes: .2. . y puede disminuir los . Todos los derechos 3. El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la separación.2: Etapas y métodos de las BSL.2) consta generalmente de una o más etapas (Tiller. La concentración de sólidos permite una separación gruesa de sólidos que disminuye el volumen a manejar.Separación de sólidos. . 1974.

líquido. La mayor parte de los sólidos es obtenida en la etapa de separación .1: Factores para el diseño y selección de procesos de BSL. las propiedades del caldo y los equipos disponibles.3. En el diseño y selección del proceso de BSL es necesario considerar varios factores de orden técnico que deben conjuntarse para una adecuada decisión. 1979) que dan origen a las operaciones de: .2. . máxima Capacidad de lavado Esterilidad Claridad descarga costos del proceso global de separación sólido.Filtración. Requerimientos del Proceso Flujo Intermitente o continuo % Separación Postratamientos Esterilidad Propiedades del Caldo Tamaño de partícula densidades Viscosidad Tiempo sedimentación % Sólidos Tipo de torta Espumeo Toxicidad Labilidad Características del Equipo Capacidad Intermitente o continuo Tamaño de partícula Conc.Sedimentación. En general todos los sistemas mecánicos de BSL están basados en dos principios (Svarovsky. En el proceso de sedimentación la separación se basa en una diferencia de densidad entre la fase sólida y la fase líquida. Cuando esto no ocurre. Los principales equipos utilizados en BSL que se basan en el principio de sedimentación. Entre mayor sea esta diferencia la separación es más fácil. Los sólidos recuperados pueden requerir un postratamiento de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso. En la Tabla 3.1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los requerimientos del proceso. son los sedimentadores por gravedad y las centrífugas. FUNDAMENTOS 73 Tabla 3. . la diferencia puede ser aumentada aparentemente aplicando una fuerza centrífuga o incrementando la densidad de la partícula por medio de una coagulación o una floculación.

Sin embargo. .Varias combinaciones de equipos pueden ser técnicamente factibles para lograr una determinada separación .). En el caso de centrífugas es generalmente necesario realizar pruebas a nivel piloto o a escala industrial. . etc. juegan un papel muy importante. . aún cuando el sedimentador no alcance la separación deseada. está en manos de las compañías fabricantes y/o distribuidoras del equipo. pero no recuperan el 100% de los sólidos. 3.El análisis teórico que se dispone de las BSL es limitado.74 CAPÍTULOS. En general los sistemas de sedimentación son más baratos y pueden operar continuamente. así como el conocimiento de las propiedades básicas de los medios (porosidad. tratándose de materiales biológicos el número de posibilidades se reduce considerablemente. es posible utilizarlo conjuntamente con un filtro como una operación de concentración previa a la de acabado que realiza la filtración. dentro de los cuales se puede destacar los siguientes: .2. En el diseño de filtros puede ser suficiente los datos obtenidos en el laboratorio. y la experiencia. químicos o biológicos con el objeto de . de tal manera que en el diseño y selección del equipo las pruebas experimentales directamente con el material.La escala de experimentación varía con el tipo de operación. tiempo de sedimentación. FILTRACIÓN En la filtración la separación se logra utilizando un medio físico que no permite el paso de sólidos a través del cual el fluido se hace pasar por medio de un gradiente de presión. la experiencia y los equipos para pruebas experimentales. Sin embargo.2 Pretratamiento de Caldos para BSL Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por medio de pretratamientos físicos. permeabilidad. En el diseño y selección de sistemas para BSL es necesario considerar algunos factores de orden práctico que permiten complementar los análisis que se efectúan en cada uno de los capítulos de esta parte del libro.Parte considerable de la información.

Por otro lado. que permiten formar partículas más grandes y densas.3. En el proceso de floculación se utilizan sustancias químicas sintéticas de alto peso molecular llamadas polielectrolítos.Van Der Waals entre ellas. En el proceso de coagulación se emplean electrolitos simples que neutralizan las cargas repulsivas superficiales de las células o partículas.2. Los electrolitos más empleados son derivados de iones polivalentes positivos como fierro. su volumen y romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores. a diferencia de las suspensiones formadas por partículas de mayor tamaño que sedimentan con relativa facilidad. lo cual genera fuerzas de atracción del tipo de London.3) ya que actúan neutralizando las cargas superficiales de las partículas y provocan su atrapamiento por medio de las redes que forman. Coagulación y Floculación Debido a que los caldos biológicos sujetos a BSL presentan partículas muy pequeñas (0. La coagulación también puede ser efectuada empleando sustancias que varíen el pH del caldo y por lo tanto la carga superficial de las partículas. Los . Las partículas coloidales (tamaño en el rango de una miera) no sedimentan fácilmente debido a que por acción de sus cargas superficiales forman suspensiones muy estables llamadas soles. Pretratamiento Térmico El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad. aluminio y calcio. A continuación se describen tres tipos de pretratamientos comúnmente empleados para caldos biológicos. FUNDAMENTOS 75 facilitar estas operaciones. Estos producen un efecto combinado (Figura 3. los pretratamientos para incrementar el tamaño de partícula facilitan su manejo. esta operación es de uso limitado cuando se manejan productos termolábiles. catiónicos o neutros. Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes químicos. En el caso de caldos de células recombinantes esta operación es obligada por cuestiones de seguridad ambiental. Los polielectrolítos pueden ser aniónicos.5 a 100 /¿m).

y mejorando la incompresibilidad y permeabilidad de los sólidos. Estas sustancias se adicionan al caldo antes de la filtración y/o se utilizan como precubierta del filtro. que permite romperlos por acción térmica o de presión. formando un polvo con características apropiadas como AF. Las tierras diatónicas son restos de esqueletos de pequeñas plantas acuáticas prehistóricas que se obtienen de depósitos naturales. Las perlitas se obtienen de vidrios volcánicos que contienen de 2 a 5% de agua. Los AF actúan como adsorbentes de las partículas coloidales mejorando el tamaño de partícula. . Es importante señalar que los pretratamientos químicos son de uso limitado dado que implican la adición de sustancias al caldo que pueden agregar toxicidad o impurezas a éste. materiales disponibles comercialmente son derivados de la poliacrilamida.3: Mecanismo de floculación. Uso de Ayudas-Filtro En las operaciones de filtración convencional se emplean sustancias sólidas llamadas Ayudas-Filtro (AF). FILTRACIÓN Figura 3. polietilenimina y la poliamina. de tal manera que se facilite su filtración. 1990) y las perlitas. Los AF mas utilizados son las tierras diatónicas (Rees.76 CAPÍTULOS.

la dosis necesaria es mayor. La filtración convencional (Figura 3. La ecuación que describe el movimiento de fluidos newtonianos a través de medios porosos. La aplicación de . facilita su limpieza.2. entre más rápido se desee efectuar la filtración.3 Teoría de la Filtración. La teoría de la filtración convencional se deriva de los estudios de la mecánica de fluidos en medios porosos. ya que para aumentar la velocidad de filtración se requiere un mayor gradiente de presión. Los de partículas más grandes facilitan la filtración pero producen filtrados más turbios. La selección implica un compromiso entre el flujo deseado y la claridad aceptable.2. fue formulada en 1856 por el geólogo Francés D'Arcy. Esta se efectúa haciendo pasar una suspensión a través de un medio permeable que retiene los sólidos utilizando un gradiente de presión. Asimismo. . Esto permite que las características de la superficie de filtración se mantengan uniformes. lo que hace necesario aumentar la incompresibilidad y porosidad del material sólido. FUNDAMENTOS 77 Con el uso de los AF la filtración se convierte en una operación de tres pasos: . disminuye la caída de presión y produce un filtrado de calidad uniforme. La dosis de AF que es necesario agregar continuamente es función directa de la concentración y compresibilidad de los sólidos del caldo. La adición continua de AF al caldo es uno de los métodos más efectivos para minimizar los costos de filtración.Primero se forma una precubierta de AF sobre el medio filtrante haciendo reciclar sobre éste una lechada de AF. Existen diversas marcas comerciales de AF que difieren básicamente en el tamaño de partícula. al cual se le agrega continuamente una dosis de AF.Al final del ciclo la precubierta de AF debe ser removida. 3.Una vez formada la precubierta se inicia la alimentación del caldo a filtrar.3.4) puede ser definida como la separación de los sólidos de un líquido. . La precubierta de AF permite retardar el taponamiento del filtro.

1 . esta ecuación al caso particular donde se desprecian los efectos gravitacionales (lechos cortos).78 CAPÍTULOS. puede ser escrita como: v= donde 1 : kAP V* (3. M: Masa.1) Las unidades de los miembros de las ecuaciones se presentan en términos de dimensiones fundamentales y entre paréntesis cuadrados. L: Longitud. °: Temperatura.4: Concepto de filtración. í: Tiempo. 0 * 0 0 o°o0¿o°o0o0c?o0o0cP Medio filtrante •i lll lflll • r Filtrado EQUIPO DE FILTRADO Figura 3. Las dimensiones fundamentales se representan como: F: Fuerza. Las unidades básicas empleadas en la mayor parte del texto corresponden a las del Sistema Internacional de medidas (SI). FILTRACIÓN • «/ i O Fuerza impulsora Presionó Vacío N 4> Suspensión • o« .

Combinando la ecuaciones (3.3) R es la resistencia total a la filtración. cuando el número de Reynolds modificado es menor a 5. FUNDAMENTOS 79 v: Velocidad superficial de líquido (flujo volumétrico por área de filtración). [Z/2]. [L]. se puede obtener la ecuación diferencial básica de la filtración convencional: »íí A dt En la ecuación (3. [L/t]. ó: .3) y (3. Esta resistencia puede expresarse como la suma de dos resistencias en serie: R = Rt + Rm (3. [M/L — t].4) se obtiene: } A dt ^ ' Las ecuaciones (3. k: Permeabilidad del lecho.4) donde Rt es la resistencia de la torta y Rm es la resistencia del medio filtrante. fj.3) y (3. AP: Caída de presión a través del lecho.3.: Viscosidad del fluido. La velocidad de filtración puede ser descrita en términos del volumen de filtrado y el área de filtración (dos parámetros más fácilmente medibles) como: Combinando las ecuaciones (3. [F/L2].2.2) y expresando la relación i/k como una resistencia /?. i\ Profundidad del lecho filtrante.5) sólo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas en régimen laminar.1) y (3.

En general las biofiltraciones cumplen con esta condición.5: Clasificación de filtros. p es la densidad del fluido y e es la fracción de espacio vacío del lecho.1 Filtros Intermitentes a Presión En los filtros intermitentes a presión la solución que contiene el sólido a separar. es alimentada continuamente al filtro. 3. 1982). 3.80 CAPÍTULOS.3. FILTRACIÓN Lecho Marcos y Placas Batch a presión < Elementos Filtros Torta Charolas Hojas 1 Continuos al vacio Uttrafiltradón Membrana Microfiftractón Figura 3. Una vez que se acu- .6) donde dp es el diámetro de partícula o diámetro del poro en la torta. Filtros continuos al vacío. <5 (3.5) cuyo mecanismo de filtración es la formación de torta (Moir.3 Equipo de Filtración Existe una gran variedad de filtros (Figura 3. Estos tipos de filtros se pueden dividir en dos grandes grupos: Filtros intermitentes a presión.

La unidad de filtración está formada por un marco que contiene dos placas formando una cámara de filtración. son los tipo tambor rotatorio al vacío (Figura 3. Los filtros constan de varias de estas unidades que operan en paralelo produciendo un sólido bastante seco. charolas o tubos). recomendables sólo para bajas escalas de producción. por lo que este tipo de equipos puede tipificarse como de mano de obra intensiva. tienen una relación de área/volumen relativamente alta y son utilizados cuando los volúmenes de filtración son bajos. Los filtros de marcos y placas normalmente operan en contacto con el ambiente y no son recomendables para cuando se trabaja con sustancias tóxicas. la operación es interumpida para descargar la torta. de tal manera que pueden operar continuamente por períodos largos de tiempo con flujos entre 200-1000 //m 2 — h (Petrides et a/.3. Operan en ambientes cerrados. limpiar el filtro e iniciar un nuevo ciclo. Este tipo de filtros pueden ser agrupados en dos categorías (Figura 3.6): . Normalmente utilizan ayudas-filtro en dosis equivalentes a la concentración de sólidos del caldo que origina un problema de deseche de sólidos.Filtros de cámara con elementos filtrantes (hojas.3. EQUIPO DE FILTRACIÓN 81 muía una determinada cantidad de sólido sobre el medio filtrante.3.Filtros prensa de marcos y placas. 1989). . Los filtros intermitentes de uso más amplio son los filtros de marcos y placas. .7). Este tipo de filtros se distinguen de los intermitentes por el hecho de que al girar permiten una descarga continua de la torta. Los filtros de cámara con elementos filtrantes toman su nombre del tipo y orientación de los elementos filtrantes.2 Filtros Continuos al Vacío Los filtros continuos más utilizados en las bioseparaciones. En los filtros intermitentes al finalizar cada ciclo de filtración la torta debe ser descargada manualmente. principalmente en la producción de antibióticos. 3.

Copyright ©1979. 1979.6: Filtros intermitentes. .82 CAPÍTULOS. Tomada de: Svarouvsky. FILTRACIÓN Placas Marcos + Filtrado Suspensión Filtro de placa y marcos Tela Placas Suspensión Marcos Mecanismo de filtrado Espacio torta Figura 3. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Todos los derechos reservados.

3. EQUIPO DE FILTRACIÓN 83 Mecanismo de descarga de torta Suspensión nitro horizontal con hojas verticales Venteo nitrado Tubos Formado de torta e lápade extema del tubo Suspensión Filtrado Suspensión Filtro tubular Filtro de hojas Figura 3.3.6: Continuación... .

En segundo término se revisa este mismo desarrollo pero para el caso donde la torta es compresible. • Filtros Continuos. se aborda el diseño de los filtros continuos con tortas compresibles que es el caso más común para las filtraciones de caldos biológicos a gran escala. .84 CAPÍTULOS.7: Vista lateral de filtro continuo tipo tambor.4 Diseño de Equipo de Filtración En esta sección se centra la atención en el uso de la teoría fundamental de la filtración en el diseño de dos tipos de filtros: • Filtros Intermitentes. En primer término se revisa el caso de la filtración intermitente donde la torta es incompresible y la filtración se realiza con un gradiente de presión constante. Finalmente. 3. FILTRACIÓN Rotación Sistema de ' aspersión Descarga torta Caldo Figura 3. que es el tipo de filtración más comúnmente empleada en bioseparaciones a escala moderada.

La filtración intermitente a flujo constante se produce debido a que algunos tipos de bombas producen el mismo flujo a diferentes cabezales.La filtración intermitente a flujo constante.3A. Desde el punto de vista de los parámetros de operación dos tipos particulares de filtración intermitente son industrialmente importantes (Brown. 1982): . el tamaño del poro de la torta. Sin embargo. Tanto en el caso de la filtración intermitente a caída de presión constante. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 85 3. En la filtración intermitente con caída de presión constante. se produce una disminución gradual del flujo conforme aumenta el espesor de la torta. como en la de flujo constante . la resistencia de la torta varía conforme avanza el tiempo de filtración al irse acumulando sólidos. Esto puede expresarse como: . Este tipo de filtración es especialmente útil en la adquisición experimental de datos para diseño. El análisis general de la filtración intermitente que se desarrolla en este capítulo.4. las cuales son características de materiales biológicos. Filtración Intermitente: Tortas incompresibles y AP constante En el caso de tortas incompresibles la resistencia de la torta puede suponerse directamente proporcional a la cantidad de sólidos (peso seco) depositados por unidad de área. . inicia con el tratamiento de tortas incompresibles cuya resistencia específica es constante. el tamaño de la partícula del sólido y la compresibilidad de la torta. ya que el seguimiento del volumen del filtrado con el tiempo es relativamente fácil de medir. Esta variación depende de la naturaleza de la torta. Posteriormente este tratamiento se aplica al caso particular de tortas compresibles. la resistencia específica de la torta puede ser variable o no.1 Filtración Intermitente En la filtración intermitente con formación de torta la separación depende de varios factores dentro de los que destacan la permeabilidad de la torta que forme el sólido que se desea separar.La filtración intermitente con caída de presión constante. Este desarrollo sólo será referido al caso en el cual la caída de presión es constante.

8) se tiene: di ~ p [ap0 (£ La ecuación (3.10) se presenta cuando la resistencia del medio es despreciable. = <*P. La ecuación (3.7) donde w es la cantidad de sólidos secos depositados por unidad de área y a es la resistencia específica de la torta.5) y (3.10) puede ser utilizada para la obtención de parámetros de filtración en equipos intermitentes a presión constante. e integrarla con las siguientes condiciones iniciales: para t =Q V=0 y obtener la siguiente ecuación: M V ta V V2AP/ A + .7) puede ser expresada en términos de parámetros más fácilmente medibles: R. Guando se gráfica At/V vs V/A se produce una línea recta con: pendiente = ordenada en el origen = 2AP AP Un caso particular de la ecuación (3. -r (3-8) donde p0 es la cantidad de masa sólida seca por unidad de volumen libre de sólidos o volumen de filtrado del caldo a separar.9) puede escribirse en su forma recíproca.» l • ' La ecuación (3. Combinando las ecuaciones (3. FILTRACIÓN (3. entonces la ordenada en el origen toma el valor de cero y la ecuacióa se reduce a: V (3J1) .86 Rt = aw CAPÍTULOS.

9) se efectúa en el rango de caída de presión constante. con las condiciones iniciales para t = ts obteniéndose la ecuación: (t-ts)A _ anp0(V + V. Otro caso particular de la filtración intermitente con caída de presión constante se produce cuando se desea asegurar una formación uniforme de la torta evitando flujos altos al inicio de una corrida.3.)A (v-vs) vs A .) i ^rim _ ' V = Vs (V-VS) 2AP A AP v (312) ' la que nos permite calcular parámetros experimentales al graficar: (t-t. que inducen la penetración de sólidos sobre el medio filtrante. Bajo estas condiciones la integración de la ecuación (3.8: Caída de presión contra tiempo en una filtración intermitente.4. En este caso la caída de presión se incrementa gradualmente hasta alcanzar una caída de presión constante (Figura 3.8). DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 87 Cido de Operación Rujo constante Caída de Descarga AP Figura 3.

Filtración de actinomicetos.13) donde a1 es una constante relacionada principalmente con el tamaño y forma de las parículas de la torta. 1972). Combinando las ecuaciones (3.6 y AP > 0. 1974): a = a'(AP)5 (3.. La determinación experimental de 5 y a1 requiere la realización de varias corridas de filtración con caída de presión constante a varios niveles.8 para una torta altamente compresible (la correlación es aceptable para s < 0. en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro. En una filtración intermitente a presión constante con un filtro de laboratorio de 110 era2 de área y una caída de presión de 70.13) se puede obtener la ecuación para describir la filtración intermitente de tortas compresibles con caída de presión constante: Ai = pa>p0 V ^ V 2AP -* A 1 AP V ' ' Ejemplo 3. La mayoría de las tortas de material biológico son compresibles.10) y (3.000 N/m 2 . Es bien conocido que los cultivos de actinomicetos como el Streptomyces griseus presentan una gran resistencia a la filtración (Aiba et a/.88 CAPÍTULOS. Este varía de cero para una torta incompresible a 0. y s es el índice de compresibilidad.2 atmósferas). Entre mayor sea el valor de s el efecto de la presión sobre la resistencia de la torta es más severo. FILTRACIÓN Filtración Intermitente: Tortas compresibles y AP constante La compresibilidad de una torta se caracteriza por un aumento de su resistencia específica al aumentar el gradiente de presión que actúa sobre la torta. En estos casos la resistencia específica puede ser correlacionada con el gradiente de presión mediante la siguiente ecuación empírica (Silverblatt et al. Los datos pueden ser correlacionados en una gráfica log(a) vs log(AP).1. .

DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Tabla 3.30 5.Cálculo de la resistencia específica de la torta.50 4.4.1. Estos cálculos se muestran en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3.55 154.73 77.9 .10) para calcular la resistencia específica de la torta.7 y una temperatura de 10°C).45 179.2: Estimar la resistencia específica de la torta a y la resistencia del medio Solución: En base a la ecuación (3.00 2.2 y se presentan en forma gráfica la Figura 3.91 205.00 5.82 44.90 1. . obteniéndose los datos que aparecen en las primeras dos columnas de la Tabla 3. De acuerdo al resultado del inciso a) se utiliza la ecuación (3.9 la ordenada en el origen es cero y por lo tanto la resistencia del medio no tiene un valor significativo: b).3.10) y los datos que se presentan.2: Datos y cálculos de filtración del ejemplo 3. Datos t ( s ) V(cm 3 ) Cálculos V/A (cm) At/V (s/cm) 0.91 20.Cálculo de la resistencia del medio. .61 89 19 80 210 380 700 978 1215 100 200 300 400 500 600 650 se procesa un caldo de una concentración de 0.. se calculan primeramente los grupos At/V y V/A. De acuerdo a la Figura 3.015 Kg/1 peso seco de células y una viscosidad de 0. a un pH de 3.64 104.00 3. a).0011 N — s/ra2 (el caldo se adicionó con 1% de tierras diatomeas..

9: Datos de filtración ejemplo 3. .1.90 CAPÍTULOS. FILTRACIÓN zoo Figura 3.

En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperación de un antibiótico.. conforme se incrementa el tiempo del ciclo.4.015 cm° a = 2. si cada operación de descarga y limpieza del filtro tiene una duración de 0.5 h y el filtro opera 24 h al día..Cálculo del número de ciclos óptimo para una filtración intermitente.000 a= . en un filtro de laboratorio de 110 cm2 de área a una presión de 19.0011 x . Ejemplo 3. b).. Por otro lado.88-^ x 140. Solución: . i La viscosidad del caldo fue de 2 x 10~3 N-s/m2 y la masa de sólidos secos por unidad de volumen de filtrado de 40 Kg/m3 Estimar: a). En el siguiente ejemplo se aborda este tipo de problema. se obtuvieron los datos que aparecen en las columnas 1 y 2 de la Tabla 3. el tiempo total de descarga y limpieza del filtro se incrementa. la velocidad de filtración promedio disminuye. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 91 pendiente = ——¿ F 2AP /120 -40 _ 2 V4-1..3./ cm " 2x70.3.El número de ciclos del filtro por día.6 x 104 N/rn?.23.La resistencia específica del caldo a.2.45 x 1011 cm Optimización de la Filtración Intermitente.000 $• 28.En la filtración intermitente se presenta un problema de optimización relacionado con el tiempo de duración de cada ciclo o tiempo de procesamiento de un lote de caldo: Si el tiempo de duración de cada ciclo se acorta.

5 + 1 V.7 -V a = ( 2 x II a = 1. a partir de los datos es necesario calcular los grupos At/V y V/A.0 240 4.0 4 3 FILTRACIÓN Cálculos Ai IV (s/m) VI A (m) 990.018 2530. El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado por ciclo Vc mediante la siguiente expresión: 24 h 0..009 0. Mediante una regresión lineal es posible obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuación.0 46 2. Datos t(s) V x 10 m 9 1.0 610 6.3 a).2.3: Datos y cálculos de ejemplo 3.De acuerdo a la ecuación (3. Estos cálculos se presentan en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3. Tabla 3.0 0.0 0.92 CAPÍTULOS.064 13514.036 6600. .10). (pendiente)(2)(AP) x 104 -^ a = (232451.045 0.0 0.055 11183.0 8910.0 126 3.El número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = donde tc es el tiempo de filtración por ciclo.0 860 7.027 4620..3.14 x 1012 m b).3 0.0 0.0 405 5.

El siguiente ejemplo se refiere a este procedimiento. Debido a lo anterior los datos de diseño de este tipo de filtros pueden ser generados en un filtro intermitente de laboratorio.5 /*+ 0. es decir: dVL_d_ I ti dt ~ dt \tc + 0.. cada marco consta de dos caras de filtración.05 de donde se obtiene que el tiempo óptimo t* : f* = 0.Filtración de cristales de un esteroide.3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 93 la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada. La alimentación a cada marco se hace de man'era independiente de tal manera que cada superficie de filtración actúa en paralelo respecto al flujo de alimentación. entonces puede ser utilizada la ecuación (3.3..11) para obtener: v de tal manera que: -v derivando la expresión anterior con respecto al tiempo del ciclo e igualando el resultado a cero.5fc Filtración Intermitente en Paralelo. Ejemplo 3. se obtiene el tiempo de duración del ciclo para el cual el volumen total de filtrado es máximo.En el caso de los filtros de marcos y placas. Con datos de una filtración de laboratorio de una suspensión de un esteroide se desea diseñar un filtro intermitente de marcos y placas.5 h el número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = 24 h . = 24 ciclos 0.4. .

94 CAPÍTULOS.Cálculo del número de marcos necesarios para la filtración de 40 Kg peso seco del esteroide. de tal manera que : .11) arreglada de la siguiente forma: lia _ t&PA2 2p0 ~ W2 donde W = p0V es el peso seco de la torta.01 x 109 s — cm' b).01 Kg/cm2 si Estimar el número de marcos de 430 x 430 x 30 mm y el tiempo de filtrado. Suponer que la bomba de alimentación produce una presión a la entrada del filtro de 0. 253 era3 12.063 Kg)< = 1.Estimación de parámetros a partir de datos de laboratorio. De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuación (3. Los datos de los resultados del laboratorio son los siguientes: Peso seco de los cristales Volumen de la torta Profundidad de la torta Tiempo de filtración Gradiente de presión Torta incompresible 0...5 cm 9780 s 1.0: (0. Solución: a). sustituyendo valores en la expresión anterior se obtiene: Ha (9780 5)(1. para procesar 40 Kg/lote de peso seco de producto.68 Kg/cm2 y que descarga a la atmósfera. El cálculo se basa en el hecho t[ue el volumen de todos los marcos del filtro debe ser suficiente para alojar el volumen de la torta húmeda.063 Kg. FILTRACIÓN Las pruebas de laboratorio se realizan en un tubo de vidrio con una malla en el extremo inferior de resistencia despreciable.

242 era2 d).Q63 (43 x 43 x 3) cm3 Número de marcos = 29 c). DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 95 Número de marcos = Número de marcos = volumen torta húmeda volumen de un marco Ka\( 253 cm3 ^ A Q.4.. El tiempo de filtración puede ser calculado mediante la modificación de la ecuación (3.001 N-s/m 2 10g/l .Cálculo del área de filtración del filtro prensa.68 ^ ) x (107.4...Cálculo del índice eje compresibilidad. Área de filtración Área de filtración Área de filtración — Arta por marco x 2 x Número de marcos = (43 x 43) cm2 x 2 x 29 = 107. Se desea correlacionar la resistencia específica de la torta que forma una levadura con la caída de presión. . El área de filtración para filtros prensa de marcos se calcula tomando en cuenta que por cada marco existen dos placas o superficies de filtración.242 cm2)2 Ejemplo 3.01 x 109 t = 206 s Kg x (40 Kg)< (0.Cálculo del tiempo de filtración en el filtro prensa. t = APA* s — cm t = (1.11).3.3 era2 0. para lo cual se realizan pruebas de filtración bajo las siguientes condiciones: Área de filtración Viscosidad Masa de sólido seco por volumen de filtrado 9.

s/cm2 1 0. pendiente = 2AP Para la primera corrida se tiene: 0.40 5 1.Estos valores son los siguientes: . FILTRACIÓN Las pruebas se realizan a cuatro gradientes de presión diferentes.10) obteniéndose los siguientes resultados: Corrida AP Pendiente Ordenada Num.36 12 2.60 4 3.10 Estimar el índice de compresibilidad s para este material. Solución: El empleo de la ecuación (3. x 10 *f x Ofit x 2 x 0.68 26 3.10). Atm.00 2 1.96 CAPÍTULOS.00 2.13) permite calcular el índice de compresibilidad.04 3 8 1. para lo cual es necesario el cálculo de a para cada corrida mediante la ecuación (3.001 *? x a.68 Atm x '•»'*"< f Atm cm ai =4. Los datos de cada corrida fueron correlacionados mediante la ecuación (3. Origen s/cm.13 x 10 10 De igual manera pueden obtenerse a 2 > «3 y #4.

6 -0. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 97 10.04 3.4 Figura 3.42 .13 5.2 0.2 Log AP 0.7- 10. Se puede estimar con la pendiente de la curva el valor: s = 0.58 xlO 10 xlO10 xlO 10 xlO 10 Los datos de a y AP para cada una de las corridas pueden ser correlacionados de acuerdo con la ecuación (3.36 2.8- 10.10: Resistencia específica contra caída de presión.10.61 7.13) en una gráfica log(AP) vs log(a).51 6.9Log a 10.40 a cm/g 4.4. tal como aparecen en la Figura 3. Corrida Número 1 2 3 4 AP Atmósferas 0.68 1.3.

2 Filtración Continua CAPÍTULOS. La ecuación (3. . Esta ecuación es útil para diseño de filtros continuos a partir de datos de filtración intermitente. [Radianes]. Esta sección enfatiza lo referente a los dos primeros pasos.A donde tj es el tiempo que dura un paso de la formación de la torta y Vf es el volumen de filtrado colectado en ese período. . En la filtración continua se puede suponer que el espesor de la torta es constante y el área de filtración varía con el tiempo. [L3/t].98 3.14) puede ser adaptada a la filtración continua. FILTRACIÓN En un filtro continuo (Figura 3.15) puede ser expresada en términos de los parámetros de diseño siguientes: Q: Flujo de filtrado. Esta ecuación cuando la resistencia del medio es despreciable puede ser expresada como: Vf 2AP1. Formación de la torta En los procesos de filtración intermitente el área de filtración es constante y el espesor de la torta varía con el tiempo de filtrado. Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtración en sí y el tercero es un aspecto de diseño mecánico. .7) el ciclo de filtración consta de tres pasos principales: .Formación de la torta.Lavado de la torta. La ecuación (3.Descarga de la torta.4. A es el área expuesta de filtración por ciclo o por revolución. * (j>: Ángulo de formación de la torta.

17) se obtiene el flujo defiltración: V P<*Po i ) o en términos de la velocidad de formación de la torta W = p0Q : 2 ¡JLOí' (3. R: Radio del tambor. mediante la ecuación siguiente: Combinando las ecuaciones (3. El tiempo que dura cada etapa de filtración se puede relacionar con el ángulo de filtración y la velocidad de giro del tambor. [L]. con el gasto Q : T= Vj Q .18) y (3. [L].3.19) pueden ser utilizadas para predecii cambios de la velocidad de filtración con respecto a cambios de las variables de diseño y operación en filtros continuos al vacío.16) y (3. [ t~1]. L: Longitud del tambor. .9) Las ecuaciones (3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN TV: Velocidad angular del tambor. donde 27rRL = Área lateral del filtro. 99 Entonces es posible relacionar el volumen de filtrado de un ciclo por unidad de área.15). (3.4.

Cálculo del volumen de lavado en función de la recuperación de soluto que se especifique. el cual depende de la naturaleza de la torta. FILTRACIÓN 1.01 volum«n d* liquido d« layado volumen d« liquido retenido Figura 3.00 „_ Caso ideal: desplazamiento hidráulico ~ 0. Lavado de la torta Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro.11: Mecanismos de lavado. En esta técnica el líquido de lavado se aplica directamente sobre la superficie de la torta. siendo la más utilizada la de lavado por desplazamiento. .11).100 CAPÍTULOS. Existen diferentes técnicas de lavado. Debido a lo anterior el análisis de la etapa de lavado se efectúa en dos pasos: 1. mediante un lavado se remueve del soluto retenido en el líquido y en la masa celular de la torta. En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada depende del volumen del líquido de lavado que se emplee. Inicialmente el líquido de lavado produce un desplazamiento hidráulico del filtrado retenido por la torta.10 - Control de la transferencia de masa 0.. Si el lavado continúa parte del soluto contenido en el interior de la biomasa puede pasar al líquido de lavado mediante mecanismos de transferencia de masa (Figura 3. Un factor de diseño es el tiempo requerido para aplicar el líquido de lavado o tiempo de lavado.

Volumen de liquido de lavado n = Volumen del liquido retenido por la torta (3. Una correlación empírica que ha sido utilizada para materiales biológicos está dada por la siguiente ecuación: r = (l-e)n donde: Soluto retenido en torta Soluto inicial en la torta e = Eficiencia de lavado.Si el desplazamiento por lavado del líquido retenido en la torta extrajera todo el soluto. la ecuación (3. Sin embargo. para lograr una determinada extracción del soluto. La operación de lavado sería 100 % eficiente. En base a lo anterior.9) con Rm = O y a = a'APs se escribe: .Cálculo del tiempo de lavado en función del tipo de torta.12). la razón del volumen del líquido de lavado al volumen de líquido retenido se incrementa. Cálculo del tiempo de lavado. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 2. Conforme la eficiencia de lavado disminuye debido a los mecanismos de difusión y mezclado. esto no ocurre en la práctica... Con estas correlaciones es posible calcular el líquido de lavado necesario para lograr un determinado porciento de extracción.20) puede ser utilizada en gráficas semilogarítmicas para correlacionar datos de lavado (Figura 3.3. Este gasto puede igualarse al gasto final de la fase de filtrado.20) La ecuación (3. debido a los fenómenos de difusión y mezclado en el lecho.Para el cálculo del tiempo de lavado. pero debido a lo complejo del fenómeno frecuentemente se utilizan correlaciones empíricas que ofrecen buenos resultados.4. el volumen necesario de líquido de lavado sería equivalente al volumen del líquido retenido por la torta (fracción vacía del lecho). se puede suponer que el gasto durante la fase de lavado es constante dado que el líquido de lavado no tiene sólidos. Existen varios análisis teóricos para correlacionar los parámetros de lavado.. 101 Cálculo del volumen del líquido de lavado.

21) dV_ dt ~ Integrando la ecuación (3.23) .102 LOO CAPÍTULOS.22) donde V¿ es el volumen del líquido de lavado y ti es el tiempo de lavado requerido.0 ! _ Volumen líquido de lavado ~~ Volumen liquido retenido Figura 3. se obtiene la siguiente ecuación: VL = (3. dV_ dt El gasto cuando V = V/ es constante e igual a: (3.22) con los límites: (3. FILTRACIÓN Predomina el desplazamiento hidráulico 3.12: Curvas de lavado.

como la relación de volumen de lavado a volumen retenido n.Filtración continua al vacío. Solución: . Con este filtro se desea separar un caldo de eritromicina. Debido a las características de la torta se espera un 80% de eficiencia en el lavado y que la torta retenga 1% del volumen de filtrado.3 m de largo.3. c).. b). de tal manera que r = 2-^ = 2n/ tf VR Vf Ejemplo 3. I/D (3-26) Se dispone de un filtro tipo tambor rotatorio continuo de 3 m de diámetro y 4.23) se obtiene: 103 VL A = i-3 ii/2 — *L (3-24) Los volúmenes y tiempos.El gasto que puede manejar el filtro.25) en términos de parámetros de diseño. de filtrado y lavado.24) obteniéndose: .2 rpm con un ángulo de filtración efectiva dej65°.4. y la relación de la fracción del líquido retenido con respecto al volumen del filtrado /.5.El tiempo de lavado. el cual puede ser operado a 1. se relacionan directamente mediante las ecuaciones (3.. a). El filtro opera a 51 cm de mercurio de vacío..Estimar el tiempo de filtrado. ir V..15) y (3.25) Es conveniente expresar la ecuación (3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Combinando las ecuaciones (3.= 2^ (3. El caldo pretratado se puede suponer incompresible. La resistencia del medio filtrante es muy pequeña comparada con la resistencia de la torta.15) y (3. Bajo estas condiciones: 2AP era2 Se desea extraer el 99% de los solutos retenidos en la torta.

El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la ecuación (3. De acuerdo a los datos del ejemplo : * r = (1 .17) permite estimar el tiempo de filtrado en base a los parámetros del filtro.20) se calcula n.2 min"l\l/2 Q = 150 C mx430 C T n( -g» _^-J x Q = 4520 cm /5 O = 16.104 CAPÍTULOS. = RL( V>0i'pc por las características de la torta s = O y a' = a.18)... de tal manera que. entonces la ecuación anterior se puede expresar como: sustituyendo valores: /2?r x ^ x 2?r x 1. 2?r x 1.Cálculo del tiempo de lavado. Mediante la ecuación (3.Cálculo del tiempo de filtrado.272 L/h c). La ecuación (3..2 (El ciclo del filtro es de 50 segundos) b). FILTRACIÓN a).e)" 3 cm2 mtn / .

5 Sumario La filtración es ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicc para remover sólidos de líquidos. entonces. La teoría básica conjuntamente co algunos experimentos de laboratorio permiten el diseño y operació racional de los procesos de filtración. 3. SUMARIO^ r O •" J 105 Q O c 0. n = 2.o '- o.86) tL = 0. i Los equipos de filtración empleados en bioseparaciones operan m< diante la formación de una torta sobre una superficie filtrante por accic de un gradiente de presión. Los procedimientos de diseño de filtros que se presentan.5.01)(2. El filtro más empleado en bioseparaciom es el filtro continuo tipo tambor operado mediante vacío.8)* .26) conociendo que el volumen retenido e 0. tanto para la operación intermitente como para la continua .01 volumen del filtrado.5 s 3.. iL = (9 s)(2)(0.86 Volumen de lavado Volumen retenido Aplicando la ecuación (3. y en men< proporción el filtro intermitente de marcos de placas.01 = (1 . -. considere la compresibilidad característica de las tortas que forman los material biológicos.

FILTRACIÓN 3. la solución presentó una viscosidad de 1.5 m2 de área. se ajustan a una recta que pasa por los puntos (V/A. 18 m2 3. si el proceso se realiza con un gradiente de presión igual al empleado en el laboratorio.s/m2 Marcos = 430 x 430 x 30 mm Los datos obtenidos durante el experimento aparecen en las primeras tres columnas de la Tabla siguiente: . Resp.3. Resp. 12 h 3. Calcular el área de filtración necesaria para procesar 1000 1 de este caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.180). At/V) siguientes: (3. Los datos de filtración son los siguientes: Estimar el tiempo de filtrado para procesar 5000 1 de este caldo en un filtro de 1..037 Kg/m3 l¿ = 0.1. donde V/A está en cm y At/V en s/cm.Los datos de filtración de S.8 m de agua.8 y a 2 atm de presión..001 N .106 CAPÍTULOS.70) y (6.2 cp y un contenido de sólidos de 5 g/1. El área de filtración empleada fue de 100 crn2 y el gradiente de presión de 1.Se efectuaron pruebas de filtración con un filtro prensa de marcos y placas bajo las siguientes condiciones: Po = 10. griseu a un pH de 3.2.6 Problemas 3.En la filtración a nivel laboratorio de un caldo para la recuperación de gentamicina..

0 35.5 1.4 0.2 1..5 1.52 0.5 6604..a V m3 (V + V.5 6826.4 4757.5 1.40 0.0 74.)/(V-V.16 0. Rm = 6.1 5244.9 2..5 7274.3 4609.Resp.)/A (t-f.9 1.2 7727.10 0.36 0.22 0.0 45.6 1.4.32 0. PROBLEMAS Datos t s 447 1262 1886 2552 3381 3686 4043 4793 5652 6610 8680 9256 Cálculos 107 P N/m 2 0.Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de ayudas-filtro se procesa en un filtro prototipo de 35 cm2 de área y a una presión de 99.3 1.2 2. 1.069 x 1011 m/Kg b).5 1.8 1.Resp.990 7V/m2.5 1.0 2.1 0:04 0.7 1.8 5642.28 0.4.5 .61 x 1010 m"1 3.54 a).5 1. obteniéndose los datos siguientes: t(s) V x 106 20 40 60 120 180 300 420 (m3) '9.1 1.0 8587.6.5 1.44 0.3 4484.3.) s/m3 m 0.30 0.5 22.5 Estimar: a)..1 1.0 61.7 8399.7 1.5 16. a = 1.

.108 Estimar : a).. La presión a esta escala es la misma. 3.Se desea filtrar un caldo que contiene cristales de un antibiótico.25 x 10n(AP) .. a).500 0...Las levaduras forman tortas compresibles (Gerstenberg y Sitting. Las pruebas de filtración en el laboratorio presentan los siguientes datos: Área = 89 crn2 AP = 2.. a= 1.4. 5367.Calcular el tiempo de filtrado si la descarga del filtro se localiza a 3 m de altura.//a/>0/2AP... FILTRACIÓN 3.6 m de Hg o = 0. 674.866 Estimar el tiempo de filtración si el volumen que se desea filtrar es de 7300 litros en un filtro de 1. 3.34 t(s) 10 20 30 100 era3 V (litros) 0. Resp: 23 horas.Estimar Rm y a' para la filtración del ejemplo 3. 1980) cuya resistencia específica ha sido correlacionada con la expresión empírica . 3.707 0. a).356.Resp.28 g/cm3.3 m2 de área y la solución tiene una p0 de 0.71 s/m CAPÍTULOS.3.Resp.Considerando los datos del ejemplo 3..7.Cuántos marcos se requieren si la dimensión de éstos es de 75 x 75 x 3 crn b).5 s/m2 b).8.6.5.

a).3. produjo los siguientes datos: AP (cm de Hg) tiempo de filtración 10 271 20 191 30 163 40 138 Estimar el índice de compresibilidad de la torta considerando despreciable la resistencia del medio. 109 Estimar el tiempo necesario para procesar 3000 1 de un caldo que contiene 30 g/1 de la levadura y presenta una viscosidad de 1.. Resp. 0.2 cp.Resp.52 3.Se incrementa de 30 a 40 % el porcentaje de área sumergida (área sumergida/ área total de filtración).10. chrysogenum (de 86 h de cultivo) en un filtro utilizado para medición de biomasa en linea.Se incrementa la velocidad del filtro de 0.6 h 3. 15 % .5 rpm... 19.Resp. en un filtro piloto de 5 m2 de área con una caída de presión de 4 atmósferas.. b). 29 % b)..6.El procesamiento de 30 cm3 de un caldo de P. manteniéndose el resto de los parámetros constantes.. Resp.Calcular el incremento en flujo de un filtro continuo tipo tambor giratorio al vacío cuando: a).3 rpm a 0.9. PROBLEMAS donde a tiene unidades de cm/g y AP de atmósferas.

355-356. 19-31. Eng. N. D. M. Chem. R. Petrides. Filtration and allied operations. Moir. Humphrey. Ch. 1972. New York. 1980.L. L. C. Eng. 1979. 1982. Julio 2. 52. Julio 26. Eng. . 58-63.. FILTRACIÓN 3.M. Technol.H. An intoducction to biochemical process design. Eng. F. Chem. Biochemical Engineering. Ch. Julio 26.110 CAPÍTULOS. 63-76 Rees. Eng. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. 1974. L. H. Brown. D. New York. Bench-Scale design of SLS systems. 351-391 Svarouvsky. Shuler.). Eng.P.7 Bibliografía Aiba. Selecting batch pressure filters. 1982.R. 1. W. Abril 29. 76-79. Designing batch pressure filters. Tiller. S. Recovery of fermentation products. 47-57. 117-119. Agosto 30. 1990.. Chem.N. Cooney. A.F. y Mills. Let diatomite enhance your filtration. Chem.B.L. (Ed. Academic Press. y Sitting. y Evans. 1989. Gerstenberg.E. AIChE. T.

o la adición de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o de producción excesiva de desechos contaminantes.2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la centrifugación que se derivan de la Ley de Stokes la cual describe 111 . 1985). La centrifugación es una de las principales operaciones utilizada para la separación de células de caldos biológicos (Wiesmann y Eider. separación de precipitados proteicos (Bell et a/. se incrementa por la acción de las fuerzas centrífugas que se generan por las altas velocidades de rotación de los equipos que se emplean (Bjurstrom. La centrifugación también es empleada en la remoción de desechos celulares de caldos de células que han sido sujetas a rompimiento. En la sección 4. especialmente cuando los caldos no son fácilmente filtrables. Cuando se utiliza la centrifugación la diferencia entre la densidad de los sólidos (células o partículas) y el caldo.3 a 1 /zm) y alta densidad (1. 1983) y para recuperación de productos insolubles como los cuerpos de inclusión. utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la separación. Estos últimos debido a su tamaño (de 0.Capítulo 4 Centrifugación 4.3-1.5 g/cm3) pueden ser separados de los restos celulares por centrifugación en dos o tres pasos.1 Introducción La separación de substancias de diferente densidad mediante movimiento giratorio se conoce como centrifugación. 1982).

• La sedimentación por acción de la gravedad. sino que también ofrece un apoyo adecuado para su correcta operación. hasta que .2. esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales: • La Ley de Stokes.1. En la sección 4. Esta permite desarrollar algunas predicciones del comportamiento de los equipos centrífugos. En base a lo anterior. • La sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. La sección 4.2 Fundamentos de la Centrifugación El estudio de las separaciones sólido-líquido por centrifugación está basado en la teoría de la sedimentación. 4.3 se hace una descripción general de estos equipos. Este movimiento puede ser causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrífuga.112 CAPÍTULO 4. no sólo para poder especificarlos y dimensionarlos. La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partícula en un medio continuo ésta se acelera (F = ma).1 Ley de Stokes La velocidad de sedimentación de una partícula esférica en un medio continuo para Reynolds menores a 1 (región de resistencia viscosa). • El factor G 4.4 se centra en los aspectos básicos del diseño de centrífugas. La teoría de la sedimentación está basada en la Ley de Stokes que establece los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad. Existen diferentes tipos de centrífugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y su aplicación depende de varios factores análogos a los mencionados para la filtración en la Tabla 3. CENTRIFUGACIÓN los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad. está descrita por la Ley de Stokes (Figura 4. Se puede suponer que para las suspensiones diluidas características de los caldos biológicos esta ley es aplicable.1).

.4A i 9^2 3 |Q4 2 5^ O. Copyright ©1964. Todos los derechos reservados.2. 1964. . Fuente: Bird et a/.1 1( 32 3 6^22 9l(J2 9 t 2 9 ^2 Número d« Reynolds Re = Ou.A. 9^22 -> •^1 := •«_> — • ^^ m^m •5: 1 = 0. Reproducida con el permiso de Reverte S. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 11 1O 9 \ \ ir Ie ' a 10 2 S \ l'°: 1 ii "i* 2 9 2 1 2 s \ L \ S k 1 \ ^^* \ Asíntota *=-|¿- SV í •X ís -^ ñ > s v.4.1: Factor de fricción para esferas. /><lí Figura 4.

pp: Densidad de la partícula. Es importante hacer notar que si la partícula parte del reposo en el proceso de sedimentación. CENTRIFUGACIÓN alcanza una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada. . (4. conforme la velocidad de la partícula se incrementa la fuerza de arrastre se incrementa. Velocidad terminal de la esfera. />£. [M/L3]. \í\ Viscosidad del fluido. . [M/L3].1) donde: dp: Diámetro de la partícula. [M/L — t]. VQO'. [L].: Densidad del fluido. Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partículas pueden agruparse en la fuerza de empuje descrita por el principio de Arquímides. a: Aceleración. De acuerdo a lo anterior.114 CAPÍTULO 4. En una sedimentación libre la fuerza que actúa sobre la partícula es la de la gravedad. [L/t]. Al alcanzar el equilibrio de fuerzas la partícula se mueve a la velocidad constante VQQ (velocidad terminal). [L/t2]. el balance de fuerzas para una partícula en equilibrio en un medio continuo se expresa de la siguiente manera: Fuerza de aceleración = Fuerza de flotación -f Fuerza de arrastre Para el caso de partículas esféricas el balance anterior puede expresarse como: . y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de fricción) descrita por la Ley de Stokes. y en una sedimentación centrífuga la fuerza es la del campo centrífugo.

2 Sedimentación por Acción de la Gravedad En varios procesos de separación sólido-líquido la fuerza impulsora de la sedimentación es sólo la de la gravedad.4.1) puede ser modificada para presentarse como una expresión de la Ley de Stokes. .2) es la siguiente: «" = donde: A/> = pp — pL Se puede expresar la velocidad de sedimentación de la partícula en dos casos límites de interés: .2. [L/t].PL) (4. proporciona información básica necesaria para el diseño de cualquiera de los procesos de sedimentación. de la siguiente manera: (pp .Sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. De acuerdo a la Ley de Stokes si la aceleración de la sedimentación es la de la gravedad. [L/t2]. 4.2. La velocidad de sedimentación por gravedad de una sustancia. vg: Velocidad terminal en un campo gravitacional. .3) es: ( (A 4) (4 A\ - donde: a = g: Aceleración de la gravedad. la velocidad de sedimentación que se obtiene por medio de la ecuación (4.2) O La velocidad de sedimentación de una partícula de acuerdo a la ecuación (4.Sedimentación por acción de la gravedad. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 115 La ecuación (4.

[í"1]. por lo tanto el parámetro A/9 puede ser muy bajo.2.3) es: 2 r donde: a =w2r: Aceleración centrífuga. Bajo estas condiciones la velocidad de sedimentación derivada de la ecuación (4. [L]. CENTRIFUGACIÓN 4. Algunos caldos biológicos son muy viscosos propiedad que dificulta la sedimentación. u>: Velocidad de rotación en radianes.116 CAPÍTULO 4. . por lo que su velocidad de sedimentación es cien veces menor. [L/t2]. r: Distancia radial del eje de rotación a la partícula.5). ya que ésta es proporcional al cuadrado del diámetro de la partícula. Las células contienen más del 70 % de agua por lo que su densidad es muy semejante a la de los caldos. La velocidad de sedimentación puede ser incrementada en un equipo centrífugo aumentando la velocidad de rotación o la distancia de sedimentación (diámetro de la centrífuga).3 Sedimentación Centrífuga En las separaciones centrífugas sólido-líquido la velocidad de sedimentación es mayor que la sedimentación libre o gravitacional. debido a que los equipos al girar producen una mayor aceleración de las partículas (Brunner y Hemfort. Varias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios inherentes a las ecuaciones (4. 1988).4) y (4. a continuación se presentan algunas de ellas: El diámetro aparente de las bacterias es del orden de diez veces menor que el de las levaduras.

En el caso de hornogeneizados biológicos las diferentes partículas celulares suelen ser separadas por centrifugación diferencial. [L2]. la velocidad de sedimentación está dada por: dr v. = — = dt 18/i . K: Energía por unidad de volumen. suponiendo que ambas tienen la misma densidad y están sujetas al mismo campo centrífugo1 en una centrífuga de tubos (Figura 4. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 117 Para obtener una expresión para flujo no laminar la ecuación (4... Estimar el tiempo de sedimentación relativo de una partícula celular de diámetro 5 /zm (núcleo) con respecto al de una de diámetro de 1 fim (mitocondria).2) puede ser expresada como: 24 o donde: = AKf A: Área característica. El principio de separación por centrifugación diferencial se basa en las diferentes velocidades de sedimentación de las partículas. Ejemplo 4..5) y a la geometría del sistema.2) los cuales giran perpendicularmente al eje . [Adimensional.1.2.] En la Figura 4.Separación centrífuga diferencial.1 también se presentan correlaciones de factores de fricción para casos diferentes a la Ley de Stokes. [M/Lt2]. Solución: De acuerdo a la ecuación (4.4. f : Factor de fricción.

La expresión anterior puede ser utilizada para el cálculo del tiempo de sedimentación integrando entre los límites: una vez realizada la integración se obtiene la expresión siguiente: t= In Ri Aplicando la expresión anterior a cada partícula. 1986 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. (al núcleo N y a la mitocondía M) se pueden obtener las siguientes proporciones: ÍN M ÍN = 25 . CENTRIFUGACIÓN s Fuerza Centrífuga Figura 4. Copyright ©1986. Todos los derechos reservados.118 CAPÍTULO 4. Fuente: Bailey y Ollis.2: Centrifugación diferencial.

La centrífuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar levaduras con diámetro de Stokes de 10 //m y 1. que es una medida relativa de la velocidad de sedimentación de una partícula en un campo centrífugo con respecto a su velocidad de sedimentación en el campo gravitacional. >< h f (10 x 10. Las propiedades del caldo se pueden suponer iguales a las del agua.) cm' x (1.4 Factor G En la caracterización y escalamiento de centrífugas frecuentemente se emplea el factor G.2.2.05 .. La centrífuga gira a 400 rpm .4) y (4.Tiempo de sedimentación. Aplicando la expresión desarrollada para el tiempo de sedimentación en el ejemplo anterior se tiene: _ ~ >< 0-01 l±r.5) se obtiene: .05 g/cm3 de densidad. ÍM es el tiempo que tarda la partícula M en avanzar de R\ a /22Ejemplo 4. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 119 donde tjy es el tiempo que tarda la partícula N en avanzar de R\ a R<¿. Estimar el tiempo para lograr una sedimentación completa de las levaduras de la suspensión. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones (4. es decir en la superficie del líquido del tubo. La distancia del eje de giro a la superficie del líquido en los tubos es RI = 3 cm y la longitud del tubo es de 10 cm .4.2.1) ^3 x = 2471 s 4 2 18 4. Solución: Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estén más apartadas del fondo del tubo. Análogamente.

La suspensión de sólidos es alimentada a la tina que al girar a altas velocidades provoca el depósito de sólidos sobre el medio filtrante y la salida de líquido claro.3 Equipo de Centrifugación La filtración y la sedimentación centrífuga constituyen los principios básicos de los principales equipos de centrifugación que se emplean para separar líquidos. • Equipos de Sedimentación Centífuga: Centrífugas tubulares. de tazón sólido. sólo que la fuerza impulsora del filtrado es la centrífuga y no una diferencia de presión (Figura 4.3.120 CAPÍTULO 4. . 4. y en la forma como se descargan de los sólidos sedimentados (Figura 4.6 x W~7N2D donde N está en rpm. CENTRIFUGACIÓN (4. decantadoras y de discos. La principal clasificación de los equipos de centrifugación se basa en el diseño de su tazón o tina. Esto permite desarrollar expresiones prácticas para estimar la G como la siguiente: G = 5. En esta sección se presentan los principales equipos de centrifugación existentes de acuerdo a su clasificación.4).1 Equipos de Filtración-Centrífuga Los equipos de filtración centrífuga constan de una tina o canasta perforada la cual está recubierta con un medio filtrante (una tela o membrana). el diámetro del tazón de la centrífuga (o punto de interés) D en mm y G es adimensional.6) G puede ser referida a un radio característico el cual generalmente es el radio exterior del campo centrífugo. Estos equipos funcionan como un filtro. en dos grupos: • Equipos de Centrifugación-Filtración.3). 4. o líquidos de sólidos (Svarousky. de cámara múltiple. 1979).

semintermitente o continua.4. la suspensión se alimenta a un tazón que se hace girar provocando que los sólidos se colecten sobre una pared y el sobrenante se recupere por rebosamiento o por acción de un colector de líquido.3.2 Equipos de Sedimentación Centrífuga En los equipos de sedimentación centrífuga también llamados de tazón sólido o canasta no-perforada (para distinguirlos de los de canasta perforada). EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 121 Tubular Cámara múltiple Sedimentadoras « Tazón sólido Decantadoras Discos Centrífugas < Filtrantes Figura 4. En relación a la forma de descargar los sólidos las centrífugas sedimentadoras pueden operar en forma intermitente.3.3: Clasificación de centrífugas. 4. y el objetivo es producir un líquido claro de tal manera que en las operaciones de separación posteriores la interferencia por sólidos sea mínima. En las operaciones de clarificación el caldo a procesar generalmente contiene una baja cantidad de sólidos. del orden del 1 %. En las operaciones de recuperación de sólidos las corrientes de salida pueden . i Las centrífugas sedimentadoras se pueden utilizar en operaciones de separación sólido-líquido tanto para remoción de biomasa (clarificación) como para recuperar sólidos durante la cosecha celular.

Copyright ©1987.4: Centrífuga de canasta perforada. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Jolm Wiloy and Suns. 1987.122 CAPÍTULO 4. Fuente: Jacobs y Penney. CENTRIFUGACIÓN Alimentación -#• nitrado Figura 4. .

1 //m.4. Como se observa en la Figura 4. contener hasta un 40 % de sólidos en volumen.3. El líquido claro se colecta por rebosamiento en la parte superior. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 123 Sobrenadante Alimentación Figura 4. o una turbina de aire o vapor (Figura 4. capaz de separar partículas hasta de 0. La torta tiene que .5: Centrífuga tubular. Este tipo de centrífuga es uno de los mas eficientes y sencillos. Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sólidos en el sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turbidez.5). Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o proteínas. durante la operación de la CT la suspensión es alimentada por la parte inferior y los sólidos sedimentan en la pared del tubo. Centrífuga Tubular Las Centrífugas Tubulares (CT) consisten básicamente de un tubo vertical esbelto que gira a altas velocidades por la acción de un motor eléctrico. Conforme se forma la torta el área de flujo se reduce y el tiempo de residencia del líquido disminuye. A continuación se efectúa una breve descripción de los principales tipos de centrífugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones.5.

con una capacidad de hasta 100 1/h. desarrollando campos hasta de 62.000 y 8. lo cual puede ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se trabaja con sustancias tóxicas o células recombinantes.400 rpm. La capacidad de manejo de sólidos varía entre 2. Este tipo de centrífugas presentan algunos modelos completamente sellados para minimizar problemas de formación de espuma y aerosoles. por lo que su operación es intermitente. Los tipos más comunes constan de 2 a 6 cámaras.000 G. con velocidades de rotación entre 5. .500 1/h. La descarga de sólidos y mantenimiento de estos equipos es más difícil que el de las centrífugas tubulares. Estas centrífugas consisten de una serie de tazones concéntricos con deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensión.5 y 60 litros dependiendo del material y el número de cámaras. Un modelo típico de laboratorio consta de un tubo de 4. Su operación permite la clasificación de las partículas conforme pasan de una cámara a otra.000 y 9.000 rpm.6) fueron creadas para incrementar la capacidad de manejo de sólidos de las centrífugas tubulares. así como mayor capacidad de manejo de sólidos. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en la última cámara.5 cm de diámetro por 76 cm de longitud. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia del líquido. con capacidad entre 500 y 3. produciendo campos entre 5. CENTRIFUGACIÓN ser descargada manualmente.000 rpm desarrollando campos de hasta de 12. La capacidad de sólidos es de 2 a 4 Kg por lote.124 CAPÍTULO 4.5 cm de diámetro por 25 cm de longitud. Este tipo de equipo no permite el lavado de la torta. El diámetro de los equipos de cámara múltiple varía de 335 a 615 mm.000 G.000 G. ya que la centrífuga tiene que ser desmantelada para sacar los sólidos. Centrífugas de Cámara Múltiple Las centrífugas de cámara múltiple (Figura 4. en relación al de la centrífuga tubular. respectivamente. el cual puede girar hasta con 15. Los modelos industriales típicos cuentan con un tubo de 11. el cual puede girar a una velocidad de hasta 50.

Copyright ©1985.4. Fuente: Axelsson.3.6: Centrífuga de cámara múltiple. Reproducida con el permiso de Ekevier Science Inc. 1985. Todos los derechos reservados. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 125 Alimentación Sobrenadante Figura 4. .

6 mientras que el de las tubulares es de 4-8.7) o centrífugas intermitentes son muy similares a las centrífugas tubulares pero menos esbeltas. El líquido residual sobre la torta puede ser removido utilizando un tubo rasador móvil. CENTRIFUGACIÓN Rasador Torta Sobrenadante Figura 4. Centrífugas de Tazón Sólido Las centrífugas de tazón sólido (Figura 4. La alimentación de la suspensión se efectúa en el fondo de el tazón. Las centrífugas de tazón sólido normalmente son operadas con su eje en posición vertical. La forma de descarga de los sólidos depende de su naturaleza. su relación de longitud a diámetro es de alrededor de 0. Los sólidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la centrífuga y los sólidos muy compactos pueden descargarse) utilizando una cuchilla interior de la centrífuga que permite raspar la pared del tazón para des- .7: Centrífuga de tazón sólido.126 Alimentación —»• CAPÍTULO 4. En algunos modelos el ciclo se controla por medio de un detector del espesor de la torta. el cual al girar permite que los sólidos se depositen sobre la superficie de la pared del tazón y el sobrenadante se obtenga por rebosamiento en la parte superior en forma continua.

Un tipo especial de centrífuga intermitentes es la de tazón triple (Figura 4. pero a una velocidad ligeramente superior o inferior que el tazón (entre 5 . Las velocidades de rotación son de 1. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Las industriales tienen tazones entre 95-125 cm con capacidades volumétricas de 100 a 300 litros.7 a 27 litros. Copyright ©1979.4.600 a 6. prender la torta.9) 'se caracterizan por un tazón horizontal con una sección cilindrica y una sección cónica.5. Fuente: Svarousky. Todos los derechos reservados.3. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 127 j Sobrenadante Alimentación Figura 4.8). Centrífugas Decantadoras o de Tornillo Las centrífugas decantadoras (Figura 4. al . En las centrífugas decantadoras la suspensión es introducida a través de perforaciones por un tubo axial concéntrico a la flecha del tornillo.000 rpm por lo que los campos centrífugos son menores que los de los otros equipos. con capacidades volumétricas de 2. 1979.1 0 0 rpm de diferencia).8: Centrífugas de tazón triple.5-3. Las centrífugas intermitentes en su versión de laboratorio presentan tazones de 15 cm de diámetro y las de planta piloto entre 23-53 cm. Ambos tipos de descarga se realizan a través de la parte inferior de la centrífuga. con una relación de longitud a diámetro entre 1. El tazón contiene un tornillo transportador que gira en la misma dirección.

final de la sección cónica o de compresión de sólidos. pero un menor escurrimiento de la torta en la sección cónica. Por otro lado. Existen diversos diseños de centrífugas decantadoras. respectivamente. con alimentaciones entre 3. La disminución de la velocidad de rotación del tornillo transportador aumenta la capacidad de desagüe de la torta . donde escurren antes de salir. Entre mayor sea el nivel de líquido dentro de la centrífuga se obtendrá una mejor clarificación. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en el extremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del líquido en la centrífuga.8 y 1890 1/min. 1985. La descarga de sólidos varía de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h. Todos los derechos reservados. La longitud de la sección cilindrica y la sección cónica pueden variar de acuerdo a las aplicaciones. Fuente: Axelsson. Los diámetros de los tazones varían de 15 a 140 cm para los modelos piloto e industriales. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Los sólidos que se depositan en la pared son transportados y descargados continuamente por el extremo cónico de la centrífuga. Entre más larga sea la sección cilindrica mayor es la clarificación alcanzada. Copyrigllt ©1985. CENTRIFUGACIÓN Alimentación Sobrenadante Sólidos Figura 4. el aumento de longitud en la sección cónica permite la obtención de tortas con menor contenido de agua.9: Centrífuga decantadora.128 CAPÍTULO 4.

Todos los derechos reservados.4.0 mm. pero disminuye la capacidad de manejo de sólidos. a) Retención de sólidos. Centrífuga de Discos La centrífuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en forma de conos truncados. 1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Fuente: Jacobs y Penney.10: Centrífugas de discos. El rotor de la centrífuga provoca el giro tanto de los discos como del tazón de la centrífuga (Figura 4. La centrífuga de tornillo es una de las más utilizadas en bioseparaciones principalmente para manejo de grandes cantidades de sólidos como es el caso del tratamiento de aguas residuales. uno sobre otro. Los discos constan de bordos internos que permiten mantener pequeñas separaciones entre ellos. Las centrífugas de discos son las más utilizadas en BSL. El ángulo que forman los conos con la vertical varía entre 35 y 50° dependiendo de la apli- .10). b) Tazón abierto. del orden de 0. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Alimentación 129 I Sobrenadante t Figura 4.3. Copyright ©1987.5 a 2.

Las de válvula tipo boquilla de descarga intermitente de sólidos. las principales son las siguientes: Las de operación intermitente con respecto a la descarga de sólidos. y fluye hacia arriba entre las placas hacia la salida en la parte central superior del equipo. Las de boquilla para la descarga continua de sólidos..10: Continuación . Durante la operación de la centrífuga de discos la suspensión es alimentada continuamente en el fondo del tazón a través de la parte central de la flecha. Debido a la fuerza centrífuga los sólidos se depositan en la cara interna de los discos. . también llamadas de retención de sólidos. resbalando hacia la cámara colectora debido al ángulo de los discos. Existen diferentes centrífugas de discos en relación a la forma de descarga de sólidos. cación particular. Alimentación CENTRIFUGACIÓN _«. Descarga de sólidos Figura 4.130 CAPÍTULO 4. Entre la pila de discos y el tazón existe un espacio que permite la acumulación de los sólidos. Las de tazón abierto de descarga intermitente de sólidos. o..

El número y el tamaño de las boquillas se ajusta de tal manera que exista un flujo continuo de sólidos. La ventaja de este tipo de centrífugas.07 a 0. En las centrífugas de boquillas con descarga continua éstas se sitúan en la periferia del tazón.10b) constan de dos piezas cónicas unidas horizontalmente por sus caras más grandes.10 segundos de apertura por minuto de operación. debido a que generan campos de hasta 15.500 1/min. El diámetro de los tazones de las centrífugas de retención de sólidos varía de 24 a 44 cm y las fuerzas centrífugas de 5. Sus ciclos varían de 0.000 G y los gastos de 3. Esta frecuencia es controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores de turbidez en el líquido de salida. sin que éstos se acumulen.13 a 0. Las centrífugas de disco de tazón abierto (Figura 4. En las centrífugas con válvulas tipo boquilla la descarga de sólidos se controla con este tipo de válvulas situadas en la periferia del tazón.000 G. Este tipo de centrífugas permite manejar caldos con contenido de sólidos hasta del 10 % . Las suspensiones que pueclen ser manejadas. El espaciamiento de las boquillas debe prevenir zonas muertas de depósitos de sólidos. este tipo de centrífuga es recomendable sólo para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1% en volumen de sólidos.4 a 1.3 segundos de apertura por minuto de operación. alcanzan hasta un 10 % en volumen de sólidos.000 a 8.10a) éstos se acumulan hasta que la cámara se llena.000 G. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 131 En las centrífugas de retención de sólidos (Figura 4. La duración y frecuencia de la apertura de la descarga depende de la cantidad y fluidez de los sólidos. La principal ventaja de este tipo de unidades es que pueden manejar suspensiones más concentradas. es que son especialmente útiles para caldos biológicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la viscosidad alta. Los valores típicos son de 0.000 a 7.8 a 1. Las fuerzas centrífugas varían de 5.3. La capacidad de sólidos varía de 5-20 litros y los flujos de 0. Tal precisión no puede ser lograda por las centrífugas de tazón abierto. La descarga de sólidos se realiza por medio de un sistema hidráulico que permite abrir y cerrar los orificios de descarga entre las piezas. Las centrífugas de discos en general poseen una gran capacidad de .4. La centrífuga tiene que ser detenida y descargada manualmente o con auxilio de un forro que se coloca previamente sobre la pared del tazón. Debido a la forma de su descarga de sólidos.500 1/min.

diferencia de densidad entre el sólido y el líquido.132 CAPÍTULO 4.más fácilmente en el caso de las centrífugas tubulares debido a la sencillez de su geometría. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos : • Diseño de Centrífugas Tubulares.2. 4.1 Diseño de Centrífugas Tubulares En el diseño de los equipos de centrifugación se debe considerar los siguientes hechos: De acuerdo con la teoría de sedimentación desarrollada en la sección 4. 4. Protección contra incendios. y la viscosidad del líquido).4 Diseño de Equipo de Centrifugación El diseño de los equipos de centrifugación está basado en la teoría de sedimentación. a sus cortas distancias de sedimentación y a los altos campos centrífugos que generan. • Diseño de Centrífugas de Discos. Por otro lado. explosiones o diseminación de sustancias tóxicas o contaminantes. Por otro lado. los equipos que operan por filtración centrífuga presentan variantes de diseño respecto a los dos anteriores. • Diseño de Equipo de Filtración Centrífuga. Este análisis puede ser extendido al caso de las centrífugas de discos. requieren de medidas de higiene y seguridad especiales como: Manejo mecánico seguro. • Escalamiento de Centrífugas. Protección contra ruido y daños corporales. . lo cual puede visualizarse . CENTRIFUGACIÓN sedimentación debido principalmente a su gran área.4. las propiedades del caldo (tamaño de partícula.

determinan el tiempo de sedimentación. determinan la velocidad de sedimentación que se puede lograr en un equipo de sedimentación centrífugo. z ** Interfase liquida Alimentación t i Figura 4. Esto constituye una condición de diseño para este tipo de centrífugas. El gasto manejable en una sedimentación centrífuga depende de la geometría específica del equipo. La Figura 4. El gasto determina el tiempo de residencia de las partículas en un equipo dado.11 muestra una centrífuga tubular que al girar forma una capa anular de líquido sobre la pared del tazón. de su velocidad de giro y de las propiedades del caldo. Para producir un líquido libre de sólidos. la velocidad de rotación y el radio del giro de la centrífuga. La posición de las .11: Esquema de una centrífuga tubular.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 133 Torta í Ro m Sobrenadante OOU Trayectoria de^x las partículas u. el tiempo de sedimentación en el equipo debe ser igual o menor al tiempo de residencia de las partículas impuesto por el flujo o gasto volumétrico. La velocidad de sedimentación cojuntamente con la distancia de sedimentación.

R\) donde: (4. En el análisis primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga. Se puede desarrollar un análisis sencillo e ilustrativo de la centrífuga tubular mediante las siguientes suposiciones: . .La alimentación es una solución diluida. .La distancia entre la superficie del líquido y la pared de la centrífuga es constante. posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geomertría de la centrífuga. [L2]. A: Área de flujo.Las partículas se distribuyen uniformemente en la capa anular.134 CAPÍTULO 4.8) . vz: Velocidad de la partícula en el sentido axial. [L/t].Las partículas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes. CENTRIFUGACIÓN partículas en esta capa varía tanto por el flujo convectivo axial como por la sedimentación radial. Tiempo de Residencia La velocidad del fluido en el sentido axial está dada por: dz donde: Q: Gasto volumétrico. El área de flujo es igual a la sección transversal de la capa anular de fluido y está dada por: = 7r(R20 .No existe retroflujo (flujo tapón). . [L3/i\. .

4. tr: Tiempo de residencia de la partícula. Distancia radial del eje de giro a la superficie del líquido. [t]. se consideran dos casos de interés: .10) Tiempo de Sedimentación y Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícula. (4 9) ' La integración de la ecuación anterior permite obtener la expresión para el tiempo de residencia de la partícula siguiente: (4.Tiempo para el 100 % de sedimentación. [L]. esto es: * donde: L: Longitud de la centrífuga.7) y (4.8). Tiempo para el 100% de Sedimentación y Gasto Volumétrico . DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Ri'. o más difícil de sedimentar). [L].4. [Lj. . puede ser obtenido a partir de la Ley de Stokes considerando el movimiento de la partícula en el sentido radial. . R0: Distancia del eje de giro a la pared del tazón.El tiempo de sedimentación ts de una partícula localizada en la superficie de la capa anular del fluido en R\ (que es la más alejada de la pared.. que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular. 135 Con los límites de integración apropiados se puede obtener una ecuación para el tiempo de residencia de las partículas dentro de la centífuga empleando las ecuaciones (4.Tiempo para el 50 % sedimentación.

13) en términos de vg dada por la ecuación (4.4).136 CAPÍTULO 4. el que los equipos se especifiquen para la remoción del 50 % de las partículas de una suspensión de un tamaño dado o tamaño de corte.12) V ' y la expresión para el tiempo de sedimentación de la partícula en este caso es: Es más conveniente expresar la ecuación (4.10) y (4. para obtener: La condición de diseño donde el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual al tiempo de residencia. Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.15) En el resultado anterior es importante hacer notar que el flujo es función de las propiedades del caldo contenidas en vg. Este resultado permite obtener una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular para producir un líquido claro o lograr un 100 % de sedimentación.]• <J (4. y de las características de la centrífuga contenidas en el paréntesis cuadrado de la derecha.11) ' en este caso inicialmente la partícula se localiza en RI y en el momento ta de alcanzar la pared en R01 de tal manera que: ' dr d¿Apu> fts — = * / dt r 18/í J0 (4. puede alcanzarse mediante la igualación de las ecuaciones (4. .. Esta expresión es la siguiente: Q = [«. CENTRIFUGACIÓN dr vr = — = —- dt V (4.14).Es una práctica común en las bioseparaciones sólido-líquido.

(4.2 f t s — = —— / dt r 18/í JQ (4-18) El resultado de la integración anterior expresado en términos de vg es: (4.19) se obtiene la expresión para el tiempo de sedimentación en términos de parámetros medibles. Si se considera que en la capa anular del líquido de una centrífuga tubular las partículas del sólido se distribuyen uniformemente.R250)L = 7r(RlQ .4.17) y (4.16) (4.19) v ' R50 donde ts es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentación. Combinando las ecuaciones (4.20) permite obtener una expresión para el flujo para este caso: .R\)L de tal manera que: (4.10) y (4. éstas se encontrarán en cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual área transversal.20) La igualación de las ecuaciones (4. es la de especificar el tamaño de partícula para el cual todas las partículas mayores sedimentan en mayor proporción y todas las menores de ese tamaño sedimentan en menor proporción. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 137 Otra interpretación del tamaño de corte.4. El radio R50 que divide la capa anular en dos subcapas de igual volumen puede obtenerse de la igualdad siguiente: *(Rl .17) La ecuación (4.11) debe ser integrada para este caso con límites nuevos para expresarla en la forma siguiente: * dr c??0A/9a.

.El concepto sigma ha sido muy utilizado en el campo de la sedimentación centrífuga desde que éste fue desarrollado (Ambler.R\ CENTRIFUGACIÓN 9 ln (4.. .21) donde Q' es el flujo para sedimentar el 50 % de las partículas de diámetro c/so en una centrífuga tubular. . 7TU>2¿ tf2 _ (4. 1957). La ecuación (4.1 ln »~2 RO .24) es la expresión básica del concepto sigma. Sigma es un área característica de cada tipo de centrífuga y se utiliza para efectuar comparaciones y escalamiento de equipo.22) Definición de Sigma. En el caso de la centrífuga tubular el valor de sigma puede ser definido a partir de la ecuación (4.V*) . el cual es una constante que contiene sólo parámetros relacionados a la geometría de la centrífuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo).138 CAPÍTULO 4.22) de la siguiente manera: Q' = donde: E= (4. Por otro laclo vg se relaciona sólo con las propiedades del caldo y es independiente del tipo de centrífuga.24) La ecuación (4.21) puede ser expresada de otra forma considerando la siguiente igualdad: T 2 ln 2 '"/* para obtener: 2 R0 r*¥•) .23) (4.

4) se tiene: (10-6m)2(50) 18 x 0. coli de un caldo diluido en una centrífuga tubular. para lo cual es necesario calcular primero Vg- Sustituyendo datos en la ecuación (4.000 rpm R 0.3. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 139 En la subsección (4. b) Calcular la relación de flujos para claridad completa de sobrenadante con respecto al flujo para 50 % de corte. en la separación de células. Centrífuga N 20.001 vn = x9.022 m Ri 0.4. obteniéndose también una expresión para sigma. 50 Kg/m Carac.s/m2 J* 3 A.004 N—s/m2 al salir del equipo de rompimiento celular.2) se presenta para las centrífugas de discos un desarrollo análogo al efectuado para la centrífuga tubular.5 x 10~6 m. Al separar células de E.4. entonces se utilizará la ecuación (4. La aplicación de este concepto a problemas de escalamiento se revisa en la siguiente sección. Se pide : a) Calcular el flujo manejado en la separación de células.4.. Ejemplo 4.011 m L 0.8^ N —S m-s .001 N .2 m 0 dp 10-6 m Se desea utilizar la misma centrífuga para separar restos celulares de diámetro promedio 0.15). c) Calcular el flujo para separación completa de los restos celulares. Solución: a) Para el cálculo del flujo manejado eri la separación de células se supone que todas las partículas de la suspensión sedimentan. Se estima que la viscosidad del caldo se incrementa a 0. se obtiene un líquido claro bajo las siguientes condiciones: Propiedades del caldo 0.Separación Centrífuga.

31 a b) Para el cálculo del flujo para un corte del 50 % se utiliza la ecuación (4.94 .140 CAPÍTULO 4.l) cm x\ In 5 2(2.= 2.7 X 10~ 6 22.X 7T X (2*X™'°0°Y V 60 / S~2 X 20 C77? Q = — 980 ^ cm x .19 ¿ <9 ~~ 14.7 x 1(T8 s 6 vg = 2.2) -(l.97 <3 = 14.7 x 10. vg = 2. sustituyendo valores se tiene: _ 2 x 2.19 l- por lo tanto: Q' _ 42. \2 2 .22).7 x 1Q-6 aa x TT x (27rx620°'000)%-2 x 20 cm 980 3? 2 2 2 (2.— s CENTRIFUGACIÓN Mediante ecuación (4..15): 2.31 { §.-T5ln rr g = 3.2) 2 Q' = 42.

15) y obtener: Qc & MC Donde el subíndice R se refiere a los restos celulares y el C a las células enteras de tal manera que: acUR 3.01 QR = (1 x 10-4)2 cm2 x 0.97 cm QR = -77 5 16 QR = QR = 0.04 -Jv ' cm—s 3 3.5 x 10-4)2 cm2 x 0. entonces se puede intuir que la expresión para el cálculo del flujo en este caso también es diferente. La geometría del sistema es diferente (Figura 4.12).22) que: Q' 2/ "gf En la expresión anterior es importante hacer notar que cuando la película de fluido al interior de la centrífuga es muy delgada.2 Centrífuga de Discos En esta sección se desarrolla un análisis para la centrífuga de discos análogo al efectuado para la centrífuga tubular.15) y (4.4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 141 También puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.89 [ a La reducción del tamaño de partícula y el aumento de viscosidad reduce dramáticamente la capacidad de la centrífuga.97 2¿ x (0. R\ tiende a R0 entonces: c) Para facilitar los cálculos se puede calcular el cociente de los flujos de cada tipo de caldo empleando la ecuación (4.4. . 4.4.

En el sentido angular se supone que el líquido gira a la misma velocidad que los discos. donde n es el numero de espacios formados entre los discos . El flujo se presenta tanto en la dirección angular como en dirección paralela a los discos. de tal manera que el flujo en cada espacio es Qn = Q/n. posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación.12. el . Tiempo de Residencia en una Centrífuga de Discos En una centrífuga de discos la partícula que se desea sedimentar se mueve por convección y por sedimentación. Si los ejes de referencia se fijan como aparece en la Figura 4. El movimiento convectivo es paralelo a los discos y el movimiento por sedimentación es en sentido horizontal. En el análisis se supone que el flujo global Q se divide equitativamente entre los espacios formados por todos los discos. Primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga.142 CAPÍTULO 4. CENTRIFUGACIÓN Figura 4. y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geometría de la centrífuga.12: Esquema de una centrífuga de discos.

. La velocidad vx también varía en el sentido y formando . de tal manera que la velocidad neta de la partícula en la dirección x. Expresión para vx. Una condición necesaria para alcanzar una separación efectiva.4.13: Perfil de velocidades en una centrífuga de discos.4. vx. movimiento producido por sedimentación tiene componentes tanto en x como en y. es que la velocidad convectiva de la partícula sea mucho mayor que el componente de la velocidad de sedimentación que actúa en sentido opuesto.13. La velocidad vx varía con la distancia x dado que el gasto es constante en toda la sección de cada película y dado que la sección transversal de flujo disminuye conforme x aumenta (se supone que el líquido es incompresible). es la resultante de la velocidad convectiva del fluido (aquí se supone que la partícula se mueve a la misma velocidad que el fluido) y la componente en x de la velocidad de sedimentación que se opone a este movimiento. En el desarrollo de la expresión para vx se supone un arreglo geométrico sencillo como se muestra en la Figura 4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 143 Figura 4.Para obtener una expresión del tiempo de residencia de una partícula en una centrifuga de discos es necesario primero desarrollar una expresión para la velocidad de la partícula en el sentido £. En el siguiente desarrollo se parte de este supuesto cuando se analiza la velocidad de la partícula en el sentido x.

CENTRIFUGACIÓN un perfil de velocidades con vx = O en las superficies de los discos. donde la velocidad vx sólo depende de y pero no de x.28) (4. Considerando que la área de flujo puede ser aproximada por un rectángulo de ancho a y largo 2?rr entonces: dydz (4. cuando se desprecian los efectos inerciales.144 CAPÍTULO 4..25) dx dy2 Esta expresión puede ser integrada dos veces entre los límites: a Para y = . vx = O y obtener la expresión: APa2 (4.29) 47T7Y¿ . la ecuación de movimiento para este sistema puede ser escrita de la siguiente forma: (4.26) —a áp_ donde a es el espesor de la película y P la presión. La integración de la ecuación (4. Si se considera una sección de película de longitud L. vx = O Para y = — .26) y (4.26) se puede expresar en términos de Qn si se integra a lo largo del área de flujo con los límites apropiados. La ecuación (4. donde Qn es el flujo volumétrico entre dos discos de la centrífuga. /2y\] 1-1 7rAP« 3 r Qn = 6/¿L Combinando las ecuaciones (4.27) Jo 7^¿ 8/^L L \a J.28) se tiene que: (4. se considera que el sistema se encuentra en el estado estacionario y el flujo es laminar.27) conduce a: Qn= I Q [*** rf APa 2 [ .

y la parte mas lejana en la que puede sedimentar es en la parte superior izquierda de la película en [x =(R0 — Ri)/senO . La velocidad de sedimentación en el sentido radial está dada por la Ley de Stokes: dr u2r — = vg— dts g por lo tanto: .Tiempo para el 100 % de sedimentación . De la ecuación (4. Tiempo para el 100 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.4.30) se puede obtener una expresión para un diferencial de tiempo de residencia de la siguiente forma: dtr = -p--=) i _ f^) 2 1 ñara / [ dx V .30) describe el perfil de la velocidad de la película así como su comportamiento en diferentes planos en función de la velocidad promedio.32) ..31) V a/ J Cálculo del Tiempo de Sedimentación y el Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícu la. y = |]. y = ^r).Tiempo para el 50 % sedimentación. . al igual que en en las centrífugas tubulares se consideran dos casos de interés: .En este caso la partícula más difícil de capturar se localiza en la parte inferior derecha de la película eni (x = O .4. (4.30) La ecuación (4. (4. que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga de discos. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN o bien en términos del flujo volumétrico total: u = 145 * ( 3Q \ x 4ri7rra (4.

146 CAPÍTULO 4.36) La ecuación anterior también puede ser expresada en función del parámetro E de la siguiente manera: .35) la ecuación (4.33) La condición de diseño que establece que el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igualando las ecuaciones (4.xsenO)2 x cosOdx (4.\(R0 .33) para obtener la expresión: 9dr 4nirra dX I -(**)' V a / (4. y= — senO 2 obteniéndose: ^ Rocoto (4.34) se transforma en: /o \ (2y\ 2 2a l . = -gL (4.31) y (4.34) de acuerdo a la geometría del sistema se puede efectuar el siguiente cambio de variables: dy — cosOdr r = R0 — xsenO con estas nuevas variables la ecuación (4.35) puede ser integrada utilizando el cambio de variable u = (R0 — xsenO) y los límites siguientes: —ü x = O. y — — L¿ x = R0 — RI a .IT) Para rara n Qg . CENTRIFUGACIÓN dt.

36).36).4.05 g/1 número de discos 72 densidad del medio 1.02 g/1 velocidad 1. De acuerdo a la ecuación (4.400 rpm viscosidad ángulo 38° Solución: El gasto de la centrífuga de discos puede ser calculado mediante la ecuación (4.02 xlO'3 8.Separación de E. debido a la separación tan pequeña de los discos una buena aproximación está dada por: Q.38) donde E está dada por la misma expresión que la de la ecuación (4.8 fim 8.= 2vgZ (4.1.8 x 10~4 cm)' (1.02) ¿ x 980 ^ 18 x 1.4).(ver ejemplo 4..05 .37) donde E para este caso está definida por la expresión dentro del paréntesis cuadrado de la ecuación (4.02 x x x . Para aplicar esta ecuación es necesario calcula: primero vg.36).4. 1983) bajo las siguientes condiciones: Datos Centrífuga Datos caldo radio externo diámetro celular 0. vn = (0..6 cm densidad celular 1. Estimar el gasto volumétrico para producir un líquido claro de E.3 inciso b).4. Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico. coli en una centrífuga de discos (Brunner.1 cm radio interno 3. coli mediante una centrífuga de discos.Para calcular el gasto que puede manejar la centrífuga para un corte del 50 %. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 147 Q = vgX (4. Ejemplo 4.

_ — s' 3 x 980 2? j V 6 0 ) ¿í/l /"v I £¿ \ I ¿iH XN <J-±W \ 2 x(S. uno basado en el tiempo equivalente de centrifugación y otro en el área de centrifugación. de tal manera que gran parte del problema de separación centrífuga se reduce a una selección del equipo más que a un diseño específico para un trabajo particular. pero pueden resultar hasta dos veces mayores de las realmente obtenidas en las centrífugas de discos. Este enfoque es debido a que los equipos disponibles se construyen en tamaños específicos. . Por otro lado.39 x 107 cm2 5 <3 = 75..3 Escalamiento En el análisis de la operación de la sedimentación centrífuga se han desarrollado expresiones para el cálculo del gasto manejable por una centrífuga de una geometría particular. CENTRIFUGACIÓN v9 = 1.63) cm3 x co¿ 38 E . En la selección de equipo de centrifugación una combinación adecuada de los principios teóricos con pruebas experimentales directamente con el material. Existen dos enfoques para el escalamiento de datos.7.39 x 107 cm2 El gasto volumétrico que puede manejar la centrífuga es: Q = 1.02 x 10~6 — x 7.35^ S Q = 271 | 4. las velocidades de sedimentación que se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas para el caso de las centrífugas tubulares. L = / x 72 \ /2?r x8400\ 2 .36). .4.02 x 1(T6 — s en seguida se calcula S de la ecuación (4.l3 -3.148 CAPÍTULO 4. es lo más recomendable..

El valor de Gt obtenido se usa para la selección de equipos a escala industrial.000 Tiempo Equivalente Este enfoque consiste en determinar el producto Gt.1 se presentan valores de Gt característicos de algunas partículas biológicas. En Ja Tabla 4. donde G está dado por la ecuación (4.1: Valores de Gt. Los subíndices 1 y 2 se refieren a las escalas estudiadas. Las muestras se hacen girar a velocidades específicas a diferentes tiempos hasta producir un sobrenadante claro.000. Esta área característica o factor S ha sido empleada para escalar equipos con similitud geométrica.000 5 75. Las pruebas de sedimentación sobre las muestras se pueden realizar en el laboratorio en una centrífuga de tubos o en una centrífuga de tazón. Factor Sigrna La expresión para calcular el parámetro Sigma de cada tipo de centrífuga es característica de cada geometría particular (Axelsson.000 100. Partícula Núcleo Mitocondria Ribosomas G t (min) 149 600 15.39) puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. En la Tabla 4. La consistencia de los sólidos puede ser estudiada preliminarmente utilizando una varilla de laboratorio sobre la torta después de decantar el sobrenadante.6) y t es el tiempo necesario para producir una centrifugación aceptable.2 se presentan los rangos de los factores E para diferentes tipos de centrífugas.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Tabla 4. 1985). de tal manera que la igualdad: G& = G2t2 (4. El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una .000 Gt (min) 5 3.000 60 6.

de tal manera que: y utilizando la ecuación (4.65. Para calcular el diámetro equivalente de las partículas de cuarzo. El tamaño de partícula a que se refiere la Tabla 4. Todos los derechos reservados. Centrífuga Intermitente Decantadora Tubular Discos E .200 150 .PA 1/2 (4. m2 20 . la experimentación directa con el material (incluyendo pruebas a nivel piloto) y la experencia (Moir.3 está basado en la sedimentación en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2.120. 1988). En la Tabla 4. Tabla 4.3.150 CAPÍTULO 4.500 2.2: Factores Sigma.2.3 se presenta una guía general para la selección de centrífugas sedimentadoras.41) .23) se obtiene: Oí (4. obteniendo la siguiente expresión: PP ~ PL pe .000 . misma suspensión la velocidad de sedimentación de las partículas es independiente de la escala. se establece que las velocidades de sedimentación son iguales en ambos medios. al de las partículas de interés en una suspensión dada.000 CENTRIFUGACIÓN Fuente: Moir.000 400 .40) Se debe recordar en este punto que la selección del equipo de centrifugación debe combinar la teoría. Copyright ©1988. 1988 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Este supuesto es más utilizado cuando se escalan centrífugas del mismo tipo.

7.5 .1.1 . Todos los derechos reservados.570 0.8.200 0.torta Fuerza g Máxima 12.890 Prueba de Consistencia de los sólidos torta firme torta firme lodo lodo lodo torta firme torta firme lodo .000 .60 Capacidad lavado de torta Ninguna Ninguna Moderada Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Moderada Prueba de Sedimentación a 1.10 0.10 1 .3.10 1 .5.3: Guía para la selección de centrífugas.200 0.500 5.200 0.8.000 5.500 1.120 1.5.250 3.9.5 .000 0. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 151 Tabla 4.800 2. Copyright ©1988. 1988 Reproducida con elpermisode Me Graw Hill Inc.000 G (min) 2 .3 Flujo de la Alimntación 1/min 8. Características manejables de la Alimentación Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tamaño de Partícula mieras 0.000 500 .20 1 .5 .4.000 5.5.25 .200 0.5.335 38 .4.8.000 .8.10 1 .500 3.20 2 .16.000.5 .1. .200 Caractrísticas de Procesamiento Adaptada de: Moir.000 Método de descarga de sólidos Intermitente Intermitente Continuo Intermitente Intermitente Intermitente Intermitente Continuo Contenido Sólidos % < 0.5 .1.000 .000 .8 .000 5.000 2 .3 0.5 1 -5 2-20 < 10 < 10 <1 1-5 2 .15.000.780 3.38.3.000 14.000 .200 2 .

dp: Diámetro partícula. CENTRIFUGACIÓN pe'. [M/L3].1 1/h de una solución diluida de células. PL: Densidad del líquido . [M/L3].000 m 2 (2. HL'. sustituyendo valores.152 donde: CAPÍTULO 4.Viscosidad del agua. [M/L3].000 1/h en una centrífuga similar.1 ///O . HA'. pp: Densidad de la partícula en suspensión. El área característica de la centrífuga es de 233 ra2.Viscosidad del líquido. p¿: Densidad del agua. [L]. dc: Diámetro equivalente de una esfera de cuarzo. [M/L — t].65). Ejemplo 4.5.40) para el caso de manejo de un flujo claro a la salida de la centrífuga: [M/L3]. Una centrífuga de discos de laboratorio produce un sobrenadante claro con una alimentación de 2. 2 nivel industrial.Densidad del cuarzo (2. [M/L — t].Área de centrifugación. [L]. <2 2 £i (1000 ///i)(233 m 2 ) Qi = 111.. Solución: Se puede utilizar la ecuación (4. 1 nivel laboratorio. Estimar el área necesaria para manejar un flujo de 1.

DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 153 Figura 4.14) donde se alimenta la suspensión a tratar.4 Filtración Centrífuga La filtración centrífuga combina los dos principios de separación mecánica: filtración y centrifugación.sólido se localiza en RTGeneralmente el interés de diseño es contar con expresiones para el cálculo del gasto volumétrico manejable por la centrífuga y del tiempo de filtrado para realizar una determinada operación en un equipo dado. la superficie del líquido está localizada en RI y la interfase líquido. En esta sección el tratamiento se limita al de geometría cilindrica. Considérese una tina o canasta de una operación de filtración centrífuga (Figura 4.4. y por acción de la fuerza centrífuga se forma una torta homogénea sobre la pared de la tina. La aplicación de este método ha conducido al desarrollo de diferentes tipos de equipos de diferentes geometrías y formas de descarga de la torta. La canasta perforada tiene un radio R0 y está recubierta de un medio filtrante de resistencia despreciable. 4. En un instante t durante la operación. .14: Filtración centrífuga.4.4.

entonces la ecuación de D'arcy debe expresarse en forma diferencial como: -dP (4.46) donde pi es la densidad del líquido. y se relaciona con la velocidad de filtración (variable a lo largo del espesor de la torta) mediante la siguiente expresión: v = -Q— donde t es la altura de la canasta de la centrífuga. CENTRIFUGACIÓN El gasto volumétrico a través de la torta en una operación de filtración centrífuga.154 Gasto Volumétrico Q CAPÍTULO 4. Combinando las ecuaciones (4.42) ar donde v es la velocidad superficial de filtrado.42) y (4. Integrando la ecuación (4. En el instante t el flujo volumétrico Q en la dirección radial es constante a lo largo del espesor de la torta.43) se obtiene: (4. Debido a que la torta no es plana el área de filtrado varía con r. está relacionado con la ecuación de D'arcy para medios porosos. Esta expresión es: .43) v ' (4 44) - la ecuación (4.44) puede ser integrada entre R0 y RT para encontrar la caída de presión en la torta: El gradiente de presión generado por el movimiento circular del líquido puede ser calculado utilizando la expresión: (4.46) entre R0 y R\ se puede encontrar una expresión para el gradiente de presión generado por la fuerza centrífuga.

obteniéndose: (4. Tiempo de Filtración-Centrífuga La ecuación (4.47) La ecuación (4. El gasto volumétrico Q puede ser relacionado con el volumen de filtrado por la ecuación: (4.48) puede ser utilizada para desarrollar una expresión para calcular el tiempo necesario para procesar un volumen de caldo dado (o una torta de un espesor físicamente alcanzable). Es necesario efectuar primero algunos cambios de variables. A partir de la ecuación (4. - T/ _ _ I" / 02 D2 \ fí\ ÍA CQ\ donde px es la densidad de la torta en peso seco por unidad de volumen.49) dt Por medio de un balance de masa en la película cilindrica que forma la torta se obtiene que: . DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 155 (4. R? disminuye conforme transcurre el tiempo de filtración (al aumentar el espesor de la torta).51. disminuyendo también Q.48) La ecuación anterior concuerda con el hecho que durante una operación de filtración centrífuga.50 ) se puede definir el diferencia de volumen de filtrado siguiente: dV = Po (4.4. .45) para obtener una expresión del gasto volumétrico en cualquier instante ¿.4.47) puede ser sustituida en la ecuación (4.

O RT = O t =• t — RT se obtiene: . CENTRIFUGACIÓN Combinando las ecuaciones (4. Se desea estimar el tiempo de filtración centrífuga de 1.67 x 1010 cm/g y una densidad de 1.R\] (4. Una vez llena la centrífuga y girando puede formar una película de 5.156 CAPÍTULO 4.48). las mediciones de resistencia específica hechas en equipos de laboratorio de filtración intermitente pueden conducir a resultados incorrectos. Debido a que la torta puede sufrir compactación cuando se expone a un campo centrífugo.. Entonces es preferible realizar estas mediciones en equipo de laboratorio apropiado para la filtración centrífuga. Para tal efecto es necesario calcular primero la Idealización . Las pruebas de laboratorio indican que la torta que forma esta suspensión tiene una resistencia específica de 2.49) y (4. tiene un radio de 51 cm y una altura de 45 cm.600 litros de una suspensión que contiene 0.1 g/cm3 de sólidos secos de torta húmeda. Ejemplo 4. (4.5 cm de líquido y torta.Tiempo de Filtración.6. La centrífuga que se va a utilizar gira a 650 rpin.52). Las propiedades del líquido pueden ser consideradas iguales a las del agua.52) donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor (R0 — RT) • De acuerdo a la ecuación (4. Solución: ción (4.02 (//cm3 de una hormona.52) el tiempo de filtrado es función de la resistencia específica de la torta entre otros parámetros.51) e integrando la expresión resultante entre los límites: i .

el gasto manejable en una centrífuga depende de la geometría específica del equipo. desechos. de la velocidad de giro y de las propiedades del caldo que se desea procesar. permite operar y diseñar racionalmente los equipos de centrifugación.. SUMARIO 157 de la superficie de la torta RT mediante la ecuación (4.67 x 1010p x 1.9 era entonces de acuerdo a la ecuación (4.01-^ x 2.50) de tal manera que: 0.1 -^j x TT x 45 era crn1* = 48.92 cm2 (512 -45.6 min La centrifugación se emplea para separar diversos tipos de sólidos (células.02 x 1600 x 103 cm311/2 1.1-Ay ^ cm—o cm 2x X x 48.52) cm2 '_5T 48. Existen varios tipos de equipos para efectuar la operación de centrifugación los cuales pueden operar tanto en forma intermitente como en forma continua. . De acuerdo con la teoría de la sedimentación. La teoría de la sedimentación combinada con la experimentación en equipos pilotos.52) el tiempo de filtrado es: t = -l-21n4? 0.9 é v -l-21n 51 48^9 t = 8. precipitados y cuerpos de inclusión) de caldos biológicos.

158 CAPÍTULO 4.600 G..18 l/h 4. La viscosidad del caldo es de 2.Sedimenta libremente.4 x 72.. cuando: a).845 rpm b).Resp.15 ra y gira a 3.2. La diferencia de densidad entre las partículas y la solución es de 0. estimar: a). 2. Resp. Las células del caldo presentan un diámetro promedio de 1 ¡¿m y una densidad de 1096.000 rpm cuando se alimenta con un caldo de levaduras a razón de 12 1/min. b).100 Kg/m3 de densidad.000 rpm.Una centrífuga tubular de 12.01 x 10~3 N-s/ra2 y una densidad de 1.El flujo que puede ser alimentado a la centrífuga cuando gira a 4.1..25 firn y se encuentran en una solución con 4 cp de viscosidad.Resp.04 x 10"3 m/s 4.Resp.. 1. Resp.6 Problemas 4.03 g/cm3. La película que forma el líquido al girar tiene un espesor de 5 cm.18 l/min . Sabiendo que la recuperación es inversamente proporcional al flujo..000 Kg/m3. 1.4.670 m2 4.3.5 cm gira a una velocidad tal que genera un campo de 15.Se localiza en un punto r = 0.La velocidad a la que debe girar la centrífuga para obtener un 95 % de recuperación. 4. 82.34 x 10~3 m3/s de un caldo de cultivo bacteriano.Resp.. b).. coli que presentan un diámetro promedio de 0. a)....Estimar el área característica de centrifugación para procesar 3..Una centrífuga tubular que gira a 4.. en agua a 20° C con una viscosidad de 1.s/ra2 y su densidad de 997 Kg/m3.35 x lO"6 m/s b).000 rpm y se desea una recuperación del 95 %.7 Kg/m3. Estimar el gasto volumétrico que puede manejar este equipo en la separación de restos celulares de E. a). CENTRIFUGACIÓN 4.682 x 10~3 N .Estimar la velocidad de sedimentación de una partícula de 5 de diámetro y 1. 8. logra recuperar el 60 % de sólidos.

..6. c).25 h c). 2 b). La salida de la fase ligera se localiza en RA — 0.000 rpm.5 ///.000 / de un caldo celular que contiene 0. Los restos celulares obtenidos en este paso tienen la mitad del diámetro de las células originales y el caldo es cuatro veces más viscoso.Estimar el número de centrífugas con capacidad de 400 1/h de homogeneizado para realizar el paso iv).Concentración del caldo hasta 0.15 /// de células (base húmeda de sólidos) es necesario realizarlo de acuerdo a las siguientes tres etapas: i).. ii).2..02 ra.Estimar el tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo..022 ra mediante un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera. a)..6. b).Resp..Resuspensión del caldo en una solución amortiguadora apropiada hasta 0..34 h 4. La salida de la fase pesada en la centrífuga se localiza a una distancia radial RB — 0...Separación de los restos celulares del homogeneizado.Rompimiento de las células mediante un homogeneizador.Resp.El procesamiento inicial de 30.4. Las propiedades de las fases son las siguientes: Fase Ligera (B) Nombre PEG 4000 9 % Densidad 1046 Kg/m3 Viscosidad 0.008 Kg/m-s Temperatura 20°C Fase Pesada (A) Nombre ( Dextrano T 5000 2 % Densidad 1144 Kg/m3 Viscosidad 0.Estimar el tiempo necesario para el paso iv). 11. . iii).En una operación para la obtención de una enzima se utiliza un sistema de extracción de dos fases acuosas inmiscibles. Una vez realizada la extracción las fases se separan mediante una centrífuga tubular. PROBLEMAS 159 4. iv)..9 m. tiene un radio externo R0 = 0.5.Establecer de que otra forma se puede realizar este proceso..008 Kg/m-s Temperatura 20°C La centrífuga gira a 12.05 ra y una longitud L = 0.8 ///. a).. d). Este paso debe ser realizado en menos de 15 horas para evitar degradación del producto.

Calcular la posición de la interfase.. c).8.7. 4 //m 4.06 m. L = 1.Resp. 730 m2 . a). a).. b).5 m y N = 8.Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase pesada al girar.066 m. a)..Desarollar una expresión para el cálculo de la posición de la interfase suponiendo que los gradientes anteriores son iguales..... a).La centrífuga del problema anterior se alimenta con un flujo de 1 x 10~4 m3/s de una mezcla de las fases que se encuentra en una proporción de 3.78 x 10~5 m3/s c). d).76 x 10~2 m 4..5:1 de fase pesada a fase ligera.. d)..La extracción líquido-líquido del ejemplo anterior se desea escalar utilizando una centrífuga más grande donde: RB = 0....Calcular (£5)1 b).Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase ligera al girar.Calcular el día metro mínimo de las gotas de fase pesada para obtener un 100 % de separación de las fases. 7.. RA = 0.Resp. realizar los siguientes cálculos: Sea: 1: Operación en el equipo menor. 2: Operación en el equipo mayor..Calcular (E3)2 d).. CENTRIFUGACIÓN de tal manera que la interfase líquido-líquido se forma a una distancia RÍ mayor que R¿.Resp.Calcular (Ri)2 c).Calcular el gasto total que puede manejar la nueva centrífuga.Resp..Calcular (Qs)2 e).Calcular el flujo de la fase ligera que se alimenta a la centrífuga.000 rpm..160 CAPÍTULO 4.15) calcular la velocidad de sedimentación mínima para la fase pesada en la fase ligera. a).Utilizando la ecuación (4. 3. b). Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 x 10~4 rn3/s en la centrífuga más chica se tiene una separación adecuada de las fases. c).

9.Una centrífuga de discos recupera el 50 % de células a un gasto de 10 l/min.10.. .Se desea procesar una suspensión diluida de levaduras de 10 /zra de diámetro y densidad de 1.4. Las propiedades del líquido pueden ser tomadas como las del agua.Resp. ¿Qué gasto se puede manejar para lograr 80 % de recuperación en la misma centrífuga?. 6. Estimar el tiempo para sedimentar la mitad de las partículas si se supone que éstas se distribuyen en forma uniforme en la suspensión.000 G.Se desea procesar 1.11. 4. En base a los datos anteriores y utilizando la Tabla 4r3 efectúe la selección de una centrífuga.Resp. 4. Cuando la centrífuga está operando los tubos giran perpendicularmente al eje y el fondo de los tubos se localiza a 9 era del eje. La torta que forman los sólidos es bastante fluida. En pruebas de laboratorio la suspensión puede clarificarse en 6 min a 1. Los tubos se llenan con la suspensión hasta una altura de 5 cm.. Se desea descargar los sólidos continuamente. con una centrífuga de tubos que opera a 8.6.000 l/rnin de una suspensión que contiene 20 % de levaduras.01 g/cm3....56 x 10~4 m3/s 4.000 rpm. PROBLEMAS c).782 m 2 161 d). 4.

y Dunnill. 126-158. y Ollis. R. Vol. Axelsson. Oxford. P. 18. Jacobs. 1983.). 1985. Pergamon Press.W. Stewart. 53. K. Sección 2. En: Downstream Process: Equipment and Techniques. Cap. Cussler. W. Eng. Springer-Verlag. E. C..N. New York. R. Brunner. A. En: Comprehensive Biotechnology. 1-72. Alemania. New York. 1988.A. Downstream Processing. (Ed. 1985.H y H. New York. 1964. John Wiley and Sons. 21. y Penney. W. John Wiley and Sons. K. Chem. Ind. Fenómenos de transporte. 10. Moo Young. 3. Bailey.. Centrifugation. En: Handbook of Separation Process Technology. y Lightfoot. (Ed. 1988. J. L.L. 1983. México. Brunner. (Ed. E. 47-75. W.162 CAPÍTULO 4. y Hu. H. Biochemical Engineering Fundamentáis. 1.E. Liss. Reverte. D. Hemfort. Centrifugation equipment: Theory.. P.). Westfalia Separators AG. Bird. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.F. Separators in biotechnology: A new challenge to the centrifuge manufacturer?. 1987. 1961. 1986. Rousseau. Phase segregation. M. Advances in Biotechnological Processes. Vol 8. Mizrahi.).B. 429-433. CENTRIFUGACIÓN 4. 129-196. New York. Eng.7 Bibliografía Ambler. 325-330. Oelde.A. . 1-50. Centrifugal Separation in Biotechnological Process. The formation of protein precipitates and their centrifugal recovery. 3. Segunda Edición. 6.J. Belter. Alan R. S.R. New York. Ed. Hoare. Bjurstrom.H. Me Graw Hill. Bell. D. Chem. 26. Feb. Biothechnology. M. 6-14.E.A.M.J. En: Advances in Biochemical Enginnering /Biotechnology.

4. D. Biochem. Sedimentation centrifugas. Svarousky. BIBLIOGRAFÍA 163 Moir. U y Binder. Marzo 28. Chem. Wiesmann. centrifugaron and flotation.N. 1979. 93-105.7. Chemical. Eng. Adv. 119-171. Sedimentation. 1988. L. H. 24. Eng. 1982. 42-51. Biomass separation from liquids by Sedimentation and centrifugation. Julio 16. Eng. .

Sólo algunas células presentan mecanismos de secreción celular del producto de interés. la. técnica es función del tipo de microorganismo que contiene al producto de interés.1 Introducción El rompimiento celular es una operación unitaria de gran importancia industrial. Algunas proteínas eucarióticas recombinantes producidas por microorganismos procariotes no son secretadas por la célula recombinante y constituyen productos intracelulares. 1989). una vez realizada la cosecha de células una operación necesaria para la liberación del producto es el rompimiento de la célula misma (Petrides et al. Algunos de los productos biotecnológicos producidos a escala industrial son extracelulares y no requieren ser extraídos de la célula. Otras proteínas de interés permanecen en el espacio periplásmico entre la membrana y la pared celular. Cuando el producto de interés es intracelular (Tabla 5. La técnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamaño de los desechos resultantes y la influencia que estos tendrán en las operaciones que se utilicen para su separación. Las proteínas intracelulares desnaturalizadas con frecuencia forman cuerpos de inclusión insolubles. Asimismo. 165 . los cuales pueden estar en forma activa o en forma desnaturalizada. Esto hace necesario contar con técnicas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la producción de proteína intracelular.Capítulo 5 Rompimiento de Células 5.1).

2 se presentan los fundamentos de la operación de rompimiento. Requiere además del conocimiento de los sistemas que permiten a ciertas células secretar los productos de interés en forma activa. los más drásticos involucran el rompimiento completo de la célula.4.2 Fundamentos La recuperación óptima de productos intracelulares requiere del conocimiento de la estructura de las capas externas que protegen a las células: la membrana y la pared celular.1: Productos que requieren de una ruptura celular. Todos los derechos reservados. Los métodos de recuperación menos severos involucran una alteración química de las cubiertas celulares o permeabilización que facilita la salida del producto. Esporas. 5. DNA. 1-Asparaginasa. Invertasa. Esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales para el análisis de la operación de rompimiento: • Estructura de la pared celular.166 CAPÍTULOS. .3 se centra en los equipos de rompimiento que se utilizan a nivel industrial. 1990). ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. Protema A. La sección 5. Ejemplos Insulina. Existen varios métodos para la recuperación de productos intracelulares. En este capítulo en la sección 5. particularmente en relación a su estructura externa (Asenjo. Mitocondrias. HC. Toxinas. Meningitis. Tipo de Producto Proteínas Recombinantes Enzimas Vacunas Otros Adaptada de: Foster. Copyright ©1992. Tétanos. Proteína G. 1992 Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. evitando con ésto la necesidad de romper la célula para recuperar el producto. El diseño de estos equipos se discute en la sección 5. Glucocinasa.

167 5. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la del disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido N-acetilmurámico. En las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. • Métodos de rompimiento celular. • Métodos de permeabilización celular. En las células Gram positivas la enzima lisozirna se u t i l i z a para el rompimiento celular ya que su mecanismo de acción es el rompimiento . debido al relevante papel que tienen las bacterias como la E. El espacio periplásmico está constituido por una sustancia semejante a un gel. Las paredes celulares de las bacterias son rígidas y porosas. 1988).2.5.1 Estructura de la Pared Celular En esta sección se describe brevemente la estructura de las paredes microbianas. La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos. FUNDAMENTOS • Sistemas celulares de secreción. En éstas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. debido a que las bacterias poseen una elevada presión osmótica interna y a que frecuentemente pueden hallarse expuestas a diferentes condiciones ambientales externas. coli como organismos huésped de varios productos biotecnológicos recombinantes (Wang.2. Las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas poseen una característica molecular común: en ambas existe un rígido esqueleto peptidoglucano o mureína. particularmente la estructura de las paredes bacterianas. las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (como D-alanina y Dglutamina). que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte.

2. permaneciendo er .168 CAPÍTULO 5. También se considera corr secreción cuando. Las paredes celulares de las bacterias Gram-negativas que presentan dificultad al rompimiento por la lizosima. En la producción de proteínas de interés comercial los mecanism de secreción y la modificación post-traduccional que sufren algunas < estas proteínas en su ruta de secreción. permite que las células Gram-positivas sean más sensibles a la acción de la lizosima que las Gram-negativas. deben considerarse las caracterís ticas estructurales de la célula para la selección adecuada de la técnic de rompimiento. coli para la producción de proteínas recomí nantes se obtienen rendimientos muy altos. 5. pueden romperse en molinos de perlas de vidrio. la célula se expande con la consecuente ruptura de la membrana y liberación del contenido celular (Lehninger.2 Sistemas Celulares de Secreción Se llama secreción al movimiento de un soluto a través de la men brana celular hacia el exterior de la célula. .o de células se localizan en la parte externa. Una vez roto el esqueleto de esta manera.Las proteínas no son secretadas por las células. La diferencia en el grosor de la capa de peptidoglucano y su ubicación. éstas queda atrapadas en el espacio periplásmico o entre la membrana y la pare celular. como en el caso de algunas proteínas. Cuando es necesario romper completamente la célula recombinant* para liberar el material intracelular.Las proteínas no se producen en forma activa. Cuando se utiliza E. La pared celular de las levaduras consta de dos capas: una capa externa formada de un complejo manano-proteína y una capa interne de glucano. 1989). que en este tip. son de gran importancia en desarrollo de los procesos correspondientes. sin embargo este tipo célula presenta dos problemas característicos : . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de los enlaces glucosídicos del esqueleto polisacárido del peptidoglucano.

1993). y complejas operaciones de recuperación y purificación.2. coli disminuyen el riesgo de transmisión de proteínas carcinogénicas.2) pueden ser divididos en métodos químicos y métodos mecánicos. El hecho de que varias de las modificaciones post-traduccionales sean realizadas en las rutas de secreción de las células que tienen esta capacidad.5. Dentro dé los primeros se encuentra: el choque osmótico.. rompimiento de células por medio de choque osmótico se fundamenta en el conocimiento del fenómeno de osmosis.3 Métodos de Rompimiento Celular Una gran variedad de técnicas de rompimiento celular son usadas en el laboratorio. 5. coli. el proceso para la obtención de la proteína de interés debe incluir operaciones de rompimiento celular. la digestión enzimática y el tratamiento alcalino.2. La pureza y seguridad de los productos de ambos tipos de procesos es de gran importancia. pero sólo algunas de ellas a escala industrial. Los productos de E. Cuando se presentan los problemas mencionados anteriormente. conjuntamente con la eliminación de la operación de ruptura que ésto implica. se emplea para la obtención del agente trombolítico llamado "Activador del Plasminógeno Tisular" (t-PA de sus siglas en inglés) (Datar et a/. la disolución lipídica. pero presentan riesgos potenciales de generación de respuestas inmunológicas. .El. Métodos Químicos Choque Osmótico. Dentro de los segundos se encuentran la agitación con abrasivos y la homogeneización. FUNDAMENTOS 169 protoplasma en forma insoluble formando precipitados llamados cuerpos de inclusión. Los métodos de rompimiento celular (Tabla 5. particularmente en el caso de las proteínas de uso clínico. reacciones equivalentes a las de modificación post-traduccional "in vivo". ha conducido al empleo de otro tipo de células recombinantes diferentes a la E. El primer proceso industrial que utiliza células recombinantes de mamífero (células de ovario de hámster).

. 1994 Reproducida con el pernüso de Spriiiger-Verlag. Digestión de la pared celular Solubilización de membranas por saponificación de b'pidos pequeño Las células son prensadas entre perlas de vidrio Las células se rompen por fuerzas de corte al pasar por un orificio pequeño Ejemplos Ruptura de glóbulos rojos Rompimiento de levaduras por tolueno M.170 CAPÍTULO 5.2: Métodos de rompimiento celular. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. Copyrigllt ©1994. Todos los derechos reservados. Método Químico Técnica Choque osmótico Disolución lipídica Digestión enzimática Tratamiento alcalino Principio Ruptura osmótica de membrana Desestabilización de la pared celular por solventes org. lysodeikticus tratados con lisozima Mecánicos Molido en Molinos de Perlas Homogeneización Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Adaptada de Scopes.

El rompimiento celular por choque osmótico consiste en la carga de un volumen dado de células dentro de agua pura (con frecuencia se utiliza el doble del volumen de las células por volumen de agua).5. Figura 5. = C. FUNDAMENTOS 171 a) 1 = 0 C. En el equilibrio el potencial químico de las soluciones acuosas es igual en ambos lados de la membrana celular.1: Osmosis y presión osmótica. La célula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo osmótico del agua hacísu interior. Cuando una membrana semipermeable separa dos soluciones de diferente concentración de soluto (Figura 5. La factibilidad del uso de este método depende de la resistencia mecánica de las células de interés. de tal manera que: . Se puede desarrollar una expresión para el cálculo de la presión osmótica necesaria para romper una célula a partir de la definición de equilibrio químico. Esta expansión puede conducir a su lisis o rompimiento. depende del número de partículas de soluto por unidad de volumen pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y de la forma de sus partículas. se produce un movimiento neto de agua a través de la membrana hacia el compartimento que contiene el soluto más concentrado.1). H2OJ b) t = t C. La presión osmótica es la fuerza que debe aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo osmótico producido.2. < C2 [conc. La presión osmótica es una de las propiedades coligativas de las soluciones.

sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las actividades biológicas. la ecuación (5. El potencial químico interno involucra un valor de referencia. Disolución Lipídica. [/ /mol]. [/ — atm/mol]. De esta manera se tiene: VH*O y finalmente: — P — —RTr íP e — i j — —/t-í Cj (^ ^} ^ü.) donde: /4o: P°tencial de referencia. La técnica de disolución lipídica es relativamente simple. x\ : es la fracción molar de soluto dentro de la célula.oPe = ¿4o + VHí0Pi + RTln(l . El tolueno es absorbido dentro de los lípidos de . de tal manera que para una solución ideal incompresible. se añade a la suspensión celular un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10% de la biomasa.2) Esta relación es llamada ley de van't HofF y en ella c\ es la concentración del soluto 1.. y Xi es pequeña.Oy (5.172 CAPÍTULO 5. Tomando el contenido celular como una solución diluida. la corrección en la presión y una corrección para la concentración de la solución. Un gran número de solventes orgánicos han sido investigados en el laboratorio para ser utilizados con este fin.x. VH^O' Volumen parcial molar del agua. el volumen parcial del agua VH^O es aproximadamente igual al volumen molar del agua V//2o. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS /¿//2o (externo) = ^H2o(interno) (5-1) El potencial químico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia y una corrección en la presión.La extracción por solventes ha sido usada para la disolución selectiva de ciertos componentes celulares.1) se expresa como: ¿4o + VH.

5. Esto se debe a la baja solubilidad del protoplasma a estos pH's y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la pared celular como de condiciones favorables de solubilidad. El tolueno también es carcinogénico pero es menos volátil. Otros tipos de solventes además del tolueno también son efectivos para este propósito.1a célula.La digestión enzimática consiste en el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompimiento celular. El alto costo de las enzimas no permite que esta técnica sea usada ampliamente en el rompimiento celular a nivel industrial a pesar de ser altamente selectiva (Andrews ti a/. . A pH's menores de 5 las células no se rompen aún cuando la pared celular haya sido destruida por digestión. Esta enzima rompe el enlace (3 1-4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetil glucosamina de la capa de peptidoglucano de la pared celular. Digestión Enzimática. Una de las enzimas más utilizada en la digestión enzimática de bacterias es la lisozima. Para la aplicación de la técnica de disolución lipídica se requiere hacer con anticipación un buen número de experimentos de laboratorio. provocando el rompimiento de la pared y consecuentementemente la ruptura de . Esto casi nunca se conoce entonces es necesario realizar experimentos.2. lo que produce la expansión de la pared y la ruptura de ésta. 1969). 1990). FUNDAMENTOS 173 la pared celular. En la práctica los solventes con similares parámetros de solubilidad atacarán a las células en forma similar. para verificar los parámetros de solubilidad que reflejen las interacciones lípido-solvente. para una liberación eficiente de los materiales intracelulares (Edebo. Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parámetros de solubilidad sean apropiados para los lípidos de la pared celular pero inadecuados para disolver al producto de interés localizado dentro de la célula. El benceno es efectivo pero es carcinogénico y altamente volátil.. El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de interés.

En esta operación es importante controlar el tamaño de los desechos celulares debido a que la separación sólido-líquido posterior depende del tamaño de las partículas. La desintegración celular no es una tarea fácil si se considera la alta resistencia mecánica de las paredes celulares y el tamaño tan pequeño de los microorganismos (1-10 /¿m). ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Métodos Mecánicos En el rompimiento dé células a gran escala se han preferido los métodos mecánicos.174 CAPÍTULOS. Para poder alcanzar rendimientos altos. Existen diversos métodos para realizar la permeabilización celular. Estos equipos han sido adaptados para utilizarse en la desintegración celular.2) consisten en alterar la estructura de la pared y la membrana celular para facilitar la difusión del producto hacia el exterior de la célula. Las técnicas empleadas son: la molienda húmeda en molinos de perlas agitados a alta velocidad y la homogeneización a alta presión (Bjustrom. varios de los cuales son iguales a los empleados en el rompimiento celular . obtener un grado de desintegración celular mayor que 90%. Debido a los problemas asociados con la purificación de productos obtenidos por rompimiento celular. El equipo que se utiliza en estas técnicas originalmente fue diseñado para otros usos. 1987). El uso del molino de perlas se originó en la industria de la pintura por la necesidad de obtener mezclas homogéneas de los pigmentos constituyentes de la pintura. 1985. existe un gran interés en el empleo de estos métodos alternativos a la ruptura mecánica empleada a nivel industrial. extendiéndose hasta por abajo de las 3 fim. con frecuencia se requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino. Kula y Schütte. El uso del homogeneizador se originó en la industria alimenticia.2.4 Métodos de Permeabilización Los métodos de permeabilización (Figura 5. esto es. El paso repetido de la suspensión celular a través de los equipos de rompimiento produce una distribución amplia del tamaño de los residuos de la pared celular. 5. particularmente en la homogeneización de leche y productos lácteos (obviamente la ruptura celular no es una homogeneización).

2. Copyright ©1990. Como resultado de k anterior. Por ejemplo. pero se realizan a condiciones más leves. Varios de los trabajos sobre permeabilización han sido desarrollados en bacterias gram-negativas. agentes caotrópicos come guanidina y urea. detergentes aniónicos y no iónicos como el dodecil sulfato de sodio (SDS) y Tritón X-100. usando solventes como tolueno al 5%. Reproducida con el permiso de Marcel Deker Inc. y agentes quelantes como el EDTA (Naglak et al 1990). La base de una solubilización efectiva radica en la estructura quími ca del detergente o agente solubilizante (Figura 5. 1990. todos los detergentes son anfipáticos. mediante presión osmótica controlada es posible liberar proteínas localizadas en el espacio periplásmico de células Gram negativas.3). coli.5. capaces de interacciona: tanto con el agua como con un lípido. principalmente E. esto permite que sean empleado: para solubilizar la pared de las bacterias Gram negativas. La naturaleza anfipática se mantiene si los detergentes son anió . FUNDAMENTOS 175 Figura 5. Todos los derechos reservados. Estas estructura? tienen una porción hidrofílica (generalmente iónica) y una parte hi drofóbica (generalmente un radical orgánico).2: Comparación conceptual de permeabilización (lado derecho) y rompimiento mecánico (lado izquierdo) Fuente: Naglak et a/.

Fuente: Belter et a/. Todos los derechos reservados.3: Estructuras químicas de agentes solubilizadores. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Dodedl Sulfato de Sodio (SDS) (aniónico) CH3(CH2)nS03Na Sultanato de Sodio (aniónico) CH3(CH2)9- SCf. .100 (no iónico. Copyright ©1988.5N*(CH3)3Br OH Taurocolato de Sodio (aniónico) OH NCH2CH2SO3 Na OH OH Figura 5. Na Bromuro de Cetiltrimetil Amonio (CTAB) (catiónico) Tritón X . poli disperso) CH3(CH2). 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.176 CAPÍTULO 5.

FUNDAMENTOS 177 nicos. arriba de esta concentración la solubilidad de los lípidos varía linealmente con la concentración de detergente como se muestra en la Figura 5. sus costos de operación y de inversión . Las moléculas de este detergente tienen también una porción hidrofóbica y una hidrofílica. El aspecto importante de estos detergentes es su habilidad para solubilizar lípidos de la pared celular y de esta manera modificar la estructura de la célula.4.5. A concentraciones de guanidina cercanas a 2 M. 1990). El sulfato puede estar ligado a un anillo bencénico formando un sulfonato semejante al que se muestra en la Figura 5.lactamasa ha sido recuperada con toda su actividad (de E. Este sulfonato es más efectivo que los sulfates alcalinos en la ruptura de células. Debido a que la permeabilización química puede ser llevada a cabo en un simple recipiente agitado. por esta misma razón los sulfonatos no son fácilmente degradados microbiológicamente.3. Permeabilizando la célula de E.1 M de guanidina y 0. Debido a que los jabones presentan un grupo carboxilico sólo son detergentes efectivos a pH altos. coli) utilizando una solución 0. catiónicos o no iónicos. las proteínas pueden desnaturalizarse aún cuando este proceso sea irreversible. donde este grupo permanece ionizado (los jabones no son efectivos en aguas duras. Existe una concentración a la cual los lípidos repentinamente comienzan a solubilizarse. La parte hidrofílica no es un sulfato sino un alcohol. puede ser evitada reemplazando el grupo carboxílico con un grupo sulfato. donde los iones de calcio pueden reaccionar con ellos para formar precipitados insolubles). En soluciones muy diluidas de detergentes. La proteína recombinante /3 . conservan toda o parte de su actividad biológica. Los detergentes no iónicos comerciales como el Tritón X-100 están menos definidos químicamente.2. Por esta razón. Dentro de los materiales amónicos se encuentran los jabones los cuales son sales de los ácidos grasos. La desventaja de los jabones convencionales como permeabilizantes. en concentraciones de 0. este método de permeabilización celular puede ser muy apropiado para algunos productos recombinantes .5% de Tritón. casi no hay disolución de lípidos. algunas proteínas como las que se encuentran en cuerpos de inclusión. Se ha encontrado que con la permeabilización con guanidina a concentraciones de 6 M. coli con guanidina y Tritón X-100. se libera cerca del 50% de la proteína intracelular (Naglak ti a/.2 M de guanidina.

178 CAPÍTULO 5.5) constan fundamentalmente de un cilindro en posición horizontal (o vertical) llamado .3 Equipo de Rompimiento Celular La operación de rompimiento celular a nivel industrial actualmente se realiza en tres tipos de equipos de rompimiento mecánico: • Molinos de Perlas de Alta Velocidad.3. 5.4: Efecto de la concentración de detergentes sobre la disolución de lípidos. es que libera menos proteína por unidad de tiempo.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad (Figura 5. 5. • Microfluidizadores. son más bajos que los de los métodos de rompimiento celular mecánicos. • Homogeneizadores de Alta Presión. 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. La principal desventaja de la permeabilización con respecto a los métodos mecánicos y a la lisis enzimática. Todos los derechos reservados. Fuente: Belter et a/. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5. Copyright ©1988.

El agitador produce el movimiento necesario de la masa celular y las perlas de vidrio. Los perfiles de velocidad diferencial generan considerables fuerzas de corte dependiendo de la velocidad y el tamaño de las perlas de vidrio.6) que consiste de una flecha giratoria sobre la que se monta un sistema de discos. difieren en la relación de longitud a diámetro de la cámara de molienda. Los volúmenes varían entre 50 mi y 250 litros para equipos de laboratorio. Estos últimos permiten manejar flujos de hasta. conjuntamente con la frecuencia y la fuerza de las colisiones entre las perlas. Ambas relacionadas con el diseño geométrico. barras o anillos que provoca el movimiento del contenido del molino. planta piloto y producción a escala industrial. un agitador (Figura 5. lo que dificulta el escalamiento de datos.000 l/h. Los discos o impulsores pueden montarse sobre la flecha ya sea en forma concéntrica o excéntrica. El tipo de flechas e impulsores que se utilicen depende de la aplicación concreta que se le dará al molino. El tipo de agitador está directamente relacionado con el transporte de energía óptimo de las partes en rotación a las perlas de vidrio.5. Mecanismo de Desintegración Celular El transporte de energía cinética desde el agitador a las perlas de vidrio se efectúa por fuerzas de adherencia en combinación con fuerzas de desplazamiento. Las fuerzas de corte generadas. Los discos presentan perforaciones cubiertas con membranas que permiten el paso del material celular pero no así el de las perlas. Desafortunadamente los modelos de laboratorio no son geométricamente similares a los usados a nivel industrial. y con las propiedades de la superficie y del impulsor. son la causa de la desintegración de . 2. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 179 cámara de molienda.5 y 1:3. Una variante del molino de perlas es el molino de cámara múltiple. La relación óptima se encuentra entre 1:2.5. Los molinos de perlas agitados a alta velocidad que se encuentran disponibles en el mercado. El volumen de la cámara de molienda se activa a través de la aceleración de las perlas en dirección radial formando capas de corriente de diferente velocidad. El material celular se introduce por uno de los extremos de la cámara de molienda . y una gran cantidad de pequeñas perlas de vidrio que son los elementos activos de molienda.3.

b) corte transversal. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Medio (b) Figura 5. Fuente: Schütte y Kula. .180 CAPÍTULO 5. Todos los derechos reservados.5: Esquema del Molino de Perlas: a) vista lateral. Copyright ©1990. 1990 Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

6: Diferentes arreglos de impulsores. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 181 Impulsor Concéntrico Impulsor Excéntrico Figura 5.3. excéntrico. Todos los derechos reservados. 1987 AIChE.5. Fuente: Kula y Schütte. a) concéntrico b) Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Copyright ©1987 .

Copyright ©1987 AIChE.3: Molino de perlas agitado. 1987). Parámetros Operacionales.182 CAPÍTULO 5. las células. se toma un promedio de velocidades periféricas U el cual es calculado cíe acuerdo a la ecuación: —_ Dmirn 60 x 1000 (5. Velocidad del Agitador. Velocidad del agitador Velocidad de alimentación de la suspensión celular Diseño del agitador Tamaño de las perlas de vidrio Carga de las perlas de vidrio Concentración celular Temperatura Adaptada de: Kula y Schütte. La velocidad periférica normalizada de los anillos se utiliza para comparar molinos diferentes. debido a que proporciona mayor información técnica al agrupar varios parámetros relacionados con la velocidad de agitación.4) .3 y algunos de ellos son discutidos a continuación. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Parámetros Operacionales El molino de perlas está caracterizado por un gran número de parámetros (Kula y Schütte. Todos los derechos reservados. El agitador es responsable de la transferencia de energía y de la activación de las perlas en la cámara de molienda. Para impulsores montados excéntricamente. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. Los más importantes para la desintegración celular se muestran en la Tabla 5.

3. El flujo permisible en un molino de perlas es función del volumen del molino.7 muestra el efecto de la velocidad del agitador sobre la desintegración de Sacharomises cerevisiae en un molino de perlas agitado de 4 litros. Se puede observar que a una velocidad periférica de 8 m/s (1500 rpm) se obtiene la velocidad óptima para la desintegración celular (velocidades mayores producen sólo más calentamiento).d2/4 ¿J\/ ^ 1^ ** / donde: Dm: Diámetro promedio de los anillos excéntricos. [mm]. n: Velocidad angular del agitador. [rpm]. la velocidad periférica óptima para este tipo de molino se encuentra alrededor de 10 m/s (1900 rpm). la energía necesaria para manejar el agitador. y con ésta la frecuencia de colisión. d: Diámetro de los anillos del agitador. En microorganismos pequeños como las bacterias. Al incrementar la velocidad periférica la fuerza de corte generada se incrementa. La Figura 5. En el caso de impulsores concénticos en la ecuación (5. de la carga de perlas y de la velocidad del agitador. La erosión de las perlas también se incrementará y con esto. Velocidad de Alimentación de la suspensión celular. Normalmente la velocidad periférica fluctúa entre 5 y 15 ra/s. lo cual puede ser atribuido a los cambios en la distribución del tiempo de residencia con la variación de la velocidad de agitación. Para un flujo de alimentación constante. .5. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR con: •*-^ Yft 183 n ~~~ —(2\/e2 4. no existe una relación lineal entre el grado de desintegración celular y la velocidad periférica. [mm]. e: Diámetro de la flecha del agitador. Paralelamente la temperatura se incrementará dependiendo de la carga de perlas la cámara de molienda. [mm].4) se utiliza directamente el diámetro del impulsor.

Copyright ©1987 AIChE. Todos los derechos reservados.184 CAPÍTULO 5.10 -o 5 ~ 1000 1500 2000 Velocidad del agitador (rpm ) 2500 Figura 5. Molino de perlas: Netzsch LME4. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 20 ^ 20H í . cerevisiae.7: Efecto de la velocidad del agitador sobre la liberación de enzima y proteína intracelular en S. Fuente: Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. .

Considerando los tiempos de residencia y la demanda de energía.R. El patrón se sitúa entre los patrones de mezclado ideal conocidos: el tipo tapón (sin mezclado) y el tipo tanque continuo completamente agitado (100 % agitado). Diseño del Agitador y Efectos del Mezclado. El consumo de potencia del molino depende en primer lugar de la velocidad del agitador y sólo ligeramente del flujo de alimentación.8 muestra la poca influencia del flujo de alimentación sobre el grado de desintegración de Sacharomyces cerevisiae.G) cuyo volumen es de 4 litros. lo que significa idénticas velocidades de transporte axiales a través de la cámara de molienda. la liberación de enzima intracelular a partir de Brevibacterium ammoniagenes disminuye en forma más marcada con el incremento en la razón de alimentación (esto se debe principalmente a la diferencia de tamaño y a la mayor resistencia de la pared de las bacterias Gram positivas). esto no se cumple. Por otra parte. El comportamiento de mezclado en un molino de perlas puede ser determinado mediante técnicas con trazadores (tintas. sales. El comportamiento de un molino de perlas depende en gran medida del patrón de flujo y mezclado que produce el agitador. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 185 El molino Netzsch LME4 (Netzsch-Feinmahltechnik GmbH. es aconsejable operar los molinos de perlas a altos flujos de alimentación y utilizar varios pasos para alcanzar el rendimiento requerido.5. los flujos de alimentación altos pueden ser más económicos. Selb. es inversamente proporcional al flujo de alimentación. El rompimiento celular es función de la velocidad del agitador y del flujo de alimentación de la suspensión. F.3. Esta funcionalidad es lineal sólo si los microorganismos son transportados como flujo tapón (sin mezclado axial). En teoría el grado de desintegración celular alcanzado por paso. desde 10 a 100 l/h produce un decremento en el grado de desintegración del microorganismo de solamente 18%. La Figura 5. Un incremento de un orden de magnitud en la velocidad de alimentación. etc) que permiten establecer la distribución de tiempos de residencia de los elementos del fluido en el molino (Levenspiel. puede ser operado con flujos de alimentación mayores de 100 l/h. Para levaduras sin embargo. en los agitadores de . 1972). Por lo tanto. Sin embargo.

186 CAPÍTULO 5. Copyright ©1987 AIChE. Todos los derechos reservados. ammoniagenes Figura 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS too60 - 60- 40 - 20 - 20 40 60 80 100 Velocidad de Alimentación (l/h) Fumarasa: (o) de S. ammoniagenes. Fuente: Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. cerevisiae y B. cerevisiae: (•) de B.8: Efecto del flujo de la alimentación sobre la liberación de fumarasa en S. .

EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 187 1.9 muestra la distribución dé tiempos de residencia en un molino Netzsche LME 20 en respuesta a un pulso de colorante. a un flujo de alimentación de 180 l/h. un microorganismo a la entrada de la cámara que tiene un tiempo de residencia igual a cero.0 e =-T *R Figura 5.8- E 0.5. Fuente: Kula y Schütte. En general se requieren cuatro o cinco tiempos de residencia ideales para cambiar completamente el contenido de la cámara de molienda. Puesto que la célula está presente en la cámara de molienda con una . Ocasionalmente. Todos los derechos reservados. tendrá la misma probabilidad de dejar la cámara de molienda que un microorganismo que haya entrado en ella previamente.9: Efecto de la geometría del agitador sobre el tiempo de residencia.4- 0. usando tres tipos diferentes agitadores con la misma cámara. La distribución de la concentración de tinta en la corriente de salida puede ser correlacionada directamente con la distribución normalizada de tiempos de residencia.6- A\ **t- 0. La Figura 5. Copyright ©1987 AIChE.20. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers.0- 0.3. los molinos comerciales se presentan efectos que provocan el mezclado de todas las partículas introducidas en la cámara.

ROMPIMIENTO DE CÉLULAS probabilidad y períodos de tiempo diferentes. Carga de Perlas. Esto aumenta la frecuencia de las colisiones entre las perlas y por lo tanto la eficiencia de la ruptura. Con los tres tipos de agitadores a que se refiere la Figura 5.5 mm y para bacterias menores que 0. Algunas observaciones experimentales indican que el tamaño óptimo de las perlas depende del tipo de célula: para levaduras.5 mm. el número de perlas aumenta al disminuir el diámetro de éstas. el tiempo de residencia promedio ¿. Tamaño de las Perlas de Vidrio. mientras que una carga alta genera mayor consumo de potencia y libera más calor. Sin embargo a escala industrial el tamaño de las perlas debe ser mayor 0. 1987).5 mm.4 mm para facilitar su separación continua. Una carga baja de perlas produce una eficiencia baja. la eficiencia de los molinos y explica por que la velocidad de alimentación aparentemente no afecta considerablemente el grado de desintegración alcanzado en un solo paso. La carga de . Existe un diámetro óptimo para las perlas. no es idéntico al tiempo de residencia ideal IR. Las enzimas localizadas en el espacio periplásmico son más fácilmente liberadas utilizando perlas de vidrio mayores en relación a las utilizadas para liberar enzimas protoplasmáticas (Keshavarz et a/. Esto permite incrementar. En molinos de laboratorio pueden utilizarse perlas hasta de 0. Dada una relación de volumen del molino a volumen de perlas. La cantidad de perlas que debe ser cargada al molino depende del tipo de células y del tamaño de las perlas. se requieren diámetros mayores a 0.2 mm.9 se ha observado que un incremento en la velocidad de rotación produce una distribución más amplia de tiempos de residencia. al disminuir el diámetro de las perlas aumenta su tendencia a flotar produciendo el efecto contrario. Empíricamente se ha determinado que la carga óptima de un molino fluctúa entre el 80 y 90 %. Con perlas de 0.5 mm se recomienda una carga del 85 % y de 80 % cuando las perlas son de 1 mm.188 CAPÍTULOS. Se ha observado también que un incremento en la velocidad de alimentación produce una distribución más estrecha de tiempos de residencia con los tres tipos de agitadores. Por otro lado. En la desintegración celular se utilizan perlas de vidrio libres de plomo con un diámetro entre 0.2 y 1.

[L3]. Va'. [L3].. (0.2VC r racción = — — 'C combinando las expresiones anteriores.375.375) + 0.. (VJ)(0.5).Carga de un molino de perlas.8V C )(0.Va. Estimar la fracción de volumen vacío de la cámara del molino cuando la carga es del 80%. Solución: De acuerdo con la ecuación (5.1. Volumen del agitador (discos o barras y flecha). Vc = Vt.5. El lecho formado por las perlas de un molino tiene una porosidad de 0.375)+0. „-* la fracción vacía está dada por: _ . [L3]. 189 (5.5 Cuando la carga de perlas es del 80% el volumen de las perlas es igual al volumen libre total VM- . — r raccion = Fracción = 0. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR perlas se define como: Carga = ^ donde: Vp: Volumen del lecho de perlas.3. Ejemplo 5.2V.5) Vt: Volumen de la cámara de molienda.

La generación de calor disminuye con el decremento de la concentración celular mientras que el consumo de energía por unidad de peso se incrementa. Durante una operación normal. La concentración de células en la suspensión no afecta considerablemente la efectividad de la desintegración celular. sin embargo existen otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidizador. en los equipos de laboratorio las bombas constan de uno o dos pistones.10). Es difícil llevar un control preciso de la temperatura puesto que una gran parte de la energía introducida por el agitador dentro de la mezcla es transformada en calor. La válvula acoplada a la bomba (Figura. Por ejemplo. se abre cuando la presión excede un valor . En general el rompimiento celular se realiza a una temperatura de entre 5 y 15 °C. 5. El homogeneizador de más amplio uso es el Mantón-Gaulin.2 Homogeneizador de Alta Presión Los homogeneizadores de alta presión son los equipos más ampliamente utilizados para el rompimiento celular á gran escala (Keshavarz ti a/. donde la suspensión es comprimida hasta 60 MPa. en un molino Netzsch LME20 que consume una potencia de 7. Un homogeneizador de alta presión del tipo Manton-Gaulin consta de dos partes principales: una bomba de pistón de alta presión y una válvula. Efecto de la Temperatura La temperatura de molienda facilita el rompimiento celular pero puede afectar al producto.190 CAPÍTULO 5.3. Se ha reportado un grado de desintegración idéntico para células de levadura en concentraciones de 4 a 20% de peso seco de células.5 Kwh aproximadamente cerca de 6000 kcal/h tienen que ser removidas por el sistema de enfriamiento. 1987). 5. en un molino Dyno KD5. El peso húmedo de células óptimo para la desintegración celular en un molino de perlas agitado se encuentra entre el 40 y 50% . se utiliza una bomba de alimentación para transportar la suspensión celular con una presión entre 0.1 y 0. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Concentración de la Suspensión Celular.5 MPa (millones de Ráscales) a la bomba de alta presión. El número de pistones de la bomba depende del tamaño del homogeneizador. mientras que las de los equipos industriales tienen de tres a cinco.

5.Unidad de cuchilla. parece razonable suponer que en el homogeneizador de Gaulin.10: Configuración de las válvulas usadas en el homogeneizador: a). Mecanismo de Desintegración Celular La desintegración celular se inicia cuando la suspensión celular pasa a alta presión por la válvula de descarga.. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 191 Válvula plana anillo de impacto suspensión celular producto homogenizado Válvula de cuchilla anillo de impacto \ / • / . i \ í*< producto ) homogenizado Figura 5. y después de cambiar dos veces de dirección choca contra un anillo de impacto. Fuente: Kula y Schütte. Todos los derechos reservados. determinado. La suspensión de células es liberada a través de la válvula con una velocidad muy alta. cavitación y esfuerzos de corte líquido. Copyright ©1987 AIChE. la fuerza del choque sobre el anillo es directamente proporcional a la presión de operación y es la causa principal del rompimiento. En experimentos realizados cuyos resultados se muestran en la Figura 5..11.Unidad plana b). donde las células se someten a turbulencia.3. á í suspensión celular * r. .

Todos los derechos reservados. Enzima glucosa -6-fosfato hidrogenasa. Fuente: Kula y Schütte. ( o ) plana Figura 5.11: Rompimiento de Sacharomyses cerevisiae con homogeneizador a alta presión usando diferentes válvulas. Copyright ©1987 AIChE. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 50- 20 30 40 50 Presión (MPa) Válvula: ( + ) de cuchilla.192 CAPÍTULO 5.

En la Figura 5.4: homogeneizador de alta presión. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR Tabla 5. La homogeneización no es efectiva para la desintegración de algunas bacterias Gram-positivas que presentan una pared celular muy gruesa y aparentemente no pueden ser desintegradas en el homogeneizador de alta presión. Para lograr un rompimiento eficiente de células la presión de operación del homogeneizador debe ser superior a 35 MPa (la industria alimenticia opera sus homogeneizadores a una presión de 35 MPa).4 se listan los parámetros Operacionales que tienen influencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presión (Kula y Schütte. El método de rompimiento por homogeneización no es selectivo. Todos los derechos reservados. se ha realizado con éxito el rompimiento de levaduras y de bacterias Gram-negativas como la Alcaligenes eutrophus (Harrison et a/. al menos a presiones hasta de 55 MPa. Parámetros Operacionales. No existe forma de diferenciar entre la liberación de proteínas del espacio periplásmico y las protoplasmáticas. 1990). Como puede observarse el número de parámetros es menor que los correspondientes al molino de perlas lo que facilita la optimización de este tipo de procesos.5. Copyright ©1987 AIChE. 1987).3. Parámetros Operacionales En la Tabla 5. Presión de Operación.11 se muestra como varía con la presión . por lo que no es recomendable como rompimiento selectivo. 1987 Reproducida con el permiso de el American Instituía of Chemical Engineers. Presión de operación Diseño de la válvula Concentración celular Temperatura 193 — — — Adaptada de: Kula y Schütte. Sin embargo.

194 CAPÍTULO 5. la enzima liberada en un solo paso representa solamente cerca del 45% de la cantidad total presente en la suspensión. Durante la homogeneización la temperatura de la suspensión celular es un parámetro que no se mantiene constante y por lo tanto es difícil correlacionarlo. En la Figura 5. que a 30 MPa. Sin embargo.11 se muestra el comportamiento de los dos tipos de válvulas en el rompimiento celular como una función de la presión de operación. Concentración de la Suspensión Celular y Temperatura. Durante una operación se empieza a observar liberación de proteína soluble a presiones mayores que 10 MPa. Se han observado diferencias de alrededor de 40% en este parámetro en el rango de 5 a 30°C. Aún así. se requieren tres pasos a . la liberación de la enzima D-glucosa-6fosfato-deshidrogenasa de S. sin embargo para liberar ADN se requieren presiones por arriba de 25 MPa.10 se muestran las configuraciones de las válvulas que se usan con más frecuencia en los homogeneizadores: la unidad plana y la unidad de cuchilla. y para una presión dada el incremento es mayor si se utiliza una válvula de cuchilla. La constante específica de la velocidad de homogeneización varía directamente con la temperatura hasta un valor de 30°C. cerevisiae. En la Figura 5. Diseño de la Válvula.12 se presenta el comportamiento de la liberación de una enzima en función del tiempo de recirculación a tres diferentes presiones y para dos tipos de válvula. por abajo de esta presión la cantidad de enzima liberada es aproximadamente igual para ambos tipos de válvulas. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de operación en un solo paso. se puede observar que por arriba de una presión de 20 MPa la válvula de cuchilla libera mayor cantidad de enzima que la válvula plana. se puede observar que la cantidad de enzima liberada aumenta con la presión. Se puede observar que a 55 MPa hay tres veces mas enzima en la fracción libre de células. En general las presiones de operación más usadas son de 55 MPa. La presión de operación del homogeneizador depende del producto que se desee liberar. La desintegración celular es independiente de la concentración de células de levaduras en concentraciones entre 100 y 600 gramos de peso seco por litro. En la Figura 5.

.12: Efecto del tipo de válvula sobre la liberación de enzima Fuente: Kula y Schütte.f / s ^ 0.' // // /•*' s j? I // ''•'' ''•' 0. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 195 1./"' K?*r~"£~*.6- / . 10 o 20 o 30 o 40 : -«« 60 Tiempo de Recirculación ( min ) Válvula: ( o ) de cuchilla: ( * ) plana Presión: ( ) 55 MPa: ( ) 30 MPa.3.0- O / // I 1 0.8- / J / / <" S . 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. ( ) ISMPa Figura 5.4nn 0.2. Todos los derechos reservados. Copyright ©19Í AIChE.r 5."' -o 50 s ss X) A .

Mediante este mecanismo la energía de entrada se disipa casi instantáneamente produciéndose la ruptura celular. 5. la cámara de rompimiento puede colocarse en un baño de hielo. Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presión manejada con aire y una cámara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de contrapresión.3 Microfluidizador El microfluidizador es un homogeneizador de alta_4^esión_que tiene un mecanismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin.13. Seguidamente las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared estacionaria de la cámara de rompimiento (Figura 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS una presión máxima de 55 MPa y a 30°C para alcanzar una desintegración celular mayor del 90%. 1989) son las siguientes: Es muy compacto. las propiedades fisicoquímicas del líquido bombeado y la presión máxima de trabajo permitida que es de 140 MPa. Permite flujos más bajos (2 — 23 l/h con presiones de operación de 10 — 95 MPa] y maneja volúmenes menores (30 m/).196 CAPÍTULO 5. Los límites de operación del microfluidizador están dados por: la presión de aire requerida para manejar la bomba. Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los serpentines de enfriamiento que también presenta el Manton-Gaulin. se puede montar sobre una charola de acero inoxidable de 30 x 35 cm.3. . Puede alcanzarse un rompimiento celular más eficiente (en el caso de bacterias). Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparación con el homogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et a/. La suspensión celular se divide en dos corrientes haciéndola pasar a presión a través de dos microcanales de sección transversal de 2 x 100 //ra. como se muestra en la Figura 5. lo que lo hace compatible con operaciones de flujo continuo.14).

MP: medidor de presión. CR: cámara de rompimiento. Copyright ©1989.13: Diagrama del Microfluidizador. SE: serpentín de enfriamiento. Fuente: Sauer et a/. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. RP: regulador de presión. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 197 Figura 5.5. BA: bomba accionada por aire. CC: cámara de contrapresión. Todos los derechos reservados. C: contenedor.3. V: válvula. .

el tiempo durante el cual las células están expuestas a temperaturas elevadas es muy corto. Copyright ©1989. Generalmente cuando se trabaja con presiones altas es necesario enfriar el sistema. dado que el tiempo de residencia de las células en la cámara de rompimiento es de 0. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. incrementar la eficiencia de la operación. .198 CAPÍTULO 5. Parámetros Operacionales A continuación se describe el efecto de la temperatura. Es relativamente fácil de operar. que es la parte de mayor temperatura. Ambos efectos contribuyen a. Por otro lado. Todos los derechos reservados. Fuente: Sauer et a/. del tamaño de los restos celulares y de la concentración celular en el proceso de ruptura utilizando un microfluidizador. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5. Si el homogeneizador no tiene un sistema de enfriamiento eficiente de la cámara de rompimiento.14: Representación esquemática de la cámara de rompimiento del microfluidizador. Temperatura de Operación. El microfluidizador permite mantener incrementos de temperatura menores a 20°(7 en la cámara de rompimiento.04 segundos. puede presentarse un incremento hasta de 80°C en la temperatura de la suspensión celular. lo cual puede ocasionar la desnaturalización de la proteína de interés.025 a 0.

se enfrió la cámara de rompimiento por inmersión en un baño de agua helada para proporcionar enfriamiento adicional al proporcionado por el serpentín del equipo. coli (Sauer et a/.6 a 174 gramos de peso seco por litro. Este efecto disminuye al aumentar el número de pasos (Agerkvist y Enfors.4. El costo del proceso en forma integral puede ser menor aún cuando las etapas de concentración y purificación posteriores a la ruptura también se vean modificadas. La temperatura de la suspensión a la entrada varió entre 8 y 10°C. se encontró que el microfluidizador puede romper células que se encuentran en soluciones cuyas concentraciones varían de 5. de cerca de 27° C después del segundo y aproximadamente de 28°C después de tres pasos. Después del primer paso la temperatura a la salida fue aproximadamente de 23°C. El hecho de que en el microfluidizador puedan manejarse concentraciones hasta de 5. generándose suspensiones de menor viscosidad. 1989).5. Tamaño de los restos celulares. El microfluidizador produce restos celulares de mayor tamaño que los producidos en el homogeneizador Manton-Gaulin. Concentración Celular. o disminuir el grado de concentración necesario previo a la ruptura. coli (Agerkvist y Enfors 1990). dado que es posible pasar el caldo del fermentador directamente al microfluidizador para efectuar la ruptura celular. 1990). La suspensión celular se alimentó a una presión de 60 MPa y a un flujo de 18 l/h.4 Diseño de Equipo de Rompimiento En esta sección se presentan los principios de diseño de los dos tipos de equipos más empleados en el rompimiento celular a nivel industrial: . DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 199 En estudios sobre el rompimiento de células de E. En investigaciones realizadas con E. De esta manera puede eliminarse la operación de cosecha de células. Ambos efectos facilitan la separación de los restos celulares durante la centrifugación. 5.6 gramos de peso seco por litro tiene implicaciones en el diseño óptimo del proceso de bioseparación.

. El balance de masa de proteína liberada puede ser expresado mediante la ecuación siguiente: dfí (5.6) . En el caso de productos de tipo proteico la determinación de proteína total y/o la actividad enzimática son mediciones comúnmente utilizadas. o cuando se desea efectuar experimentos para generar datos de diseño. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS • Molino de Perlas de Alta Velocidad.Indirectamente: Mediante la medición de un componente liberado durante el rompimiento. inicialmente se carga el molino con las perlas y la suspensión celular.Operación Intermitente. 5. El grado de rompimiento logrado puede ser determinado de dos formas: . Operación Intermitente Los molinos de perlas pueden ser operados en forma intermitente cuando el volumen de la suspensión celular a tratar es bajo.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos formas: . En una operación intermitente. El rompimiento celular intermitente en molinos de perlas agitados a altas velocidades sigue una cinética de primer orden.200 CAPÍTULO 5. .4.Operación Continua. • homogeneizador de Alta Presión.Directamente: Contando el número de células intactas por unidad de volumen. Durante la operación se cierra la salida de suspensión y se agita a la velocidad establecida.

8) /tm ít De acuerdo a la ecuación anterior las gráficas de IníRmHRn-R)] vs t producirán rectas de pendiente k y ordenada al origen cero. [L3] Rm: Concentración máxima de proteína obtenible. del tipo y velocidad del agitador. En la Figura 5. [M/L3] t: Tiempo de operación. [M/L3] R: Concentración de proteína liberada en el tiempo t.15 se muestra la liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae utilizando un molino Netzsch LME20 con diferentes tipos de agitadores. En el caso de la molienda intermitente el tiempo de operación t es igual al tiempo de residencia de las células en el molino. El resultado muestra claramente que la desintegración celular sigue una cinética de primer orden independiente . DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 201 La ecuación anterior establece que la velocidad de liberación de la masa de proteína (células rotas) es proporcional a la masa de proteína presente no liberada. de la carga y tamaño de las perlas.5. de la concentración celular y de la temperatura. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden que depende del tipo de célula. [t'1} La ecuación anterior puede ser integrada arreglándola de la siguiente forma: f O JO I dt m — 0 (5 7) ' Para obtener la ecuación de la operación intermitente: (5. donde: VM.Volumen libre del molino.4.

20. ( a ) excéntrico. Todos los derechos reservados.30.50.15: Liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae en experimentos con recirculación para diferentes tipos de agitadores.70. Copyright ©1987 AIChE.0 S 10 20 30 Impulsores: ( A ) de postes: ( o ) de discos. Fuente: Kula y Schütte. Figura 5.6- _ D? 0. . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.1 0.4 -\ I KW E 0. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engiiieers.202 CAPÍTULO 5.

Observándose también diferentes valores de k para cada tipo de agitador.675 2.9).525 3.Calcular la constante cinética para la liberación de proteína.0000 0.025 2.150 1.9) Ejemplo 5.4193 0.000 0.8) puede ser expresada como: In — A = kt (5.000 1.150 6..2421 0.150 2. Los cálculos necesarios son los siguientes: tiempo (s) 00 15 30 45 60 1n ln rtm Rm-R in A A m—A 4 0.1883 0.700 a). En el rompimiento intermitente para la obtención de una enzima de S.000 Áx 102 (mol/min-Kg) 0.Cinética de rompimiento intermitente.Calcular la constante cinética para la liberación de enzima.2910 0. En el caso que el grado de rompimiento sea seguido mediante la actividad enzimática /I.4.2.3870 .2877 0.0000 0. la ecuación (5. b). DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 203 del tipo de agitador..625 1.0979 0. se utilizó un molino de perlas de alta velocidad de 4 litros obteniéndose los siguientes datos: tiempo (s) 00 15 30 45 60 Max.8) y (5. Rx 102 (Kg/Kg) 0. Solución: Las constantes cinéticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las ecuaciones (5.1081 0..5. cerevisiae.425 10.

VM'.412 x 1(T3 s~l Operación Continua Durante la operación continua del molino de perlas la suspensión celular a tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada continuamente en el extremo opuesto.. En el diseño de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de dispersión de los tiempos de residencia de las células en el molino. para la liberación de enzima la constante es: ib = 6.De igual manera. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a). Mediante el uso de este modelo los experimentos con pulsos de tinta permiten determinar el número . F: Flujo alimentado al molino. ha sido simulado utilizando el modelo de "Reactores continuos en serie tipo tanque perfectamente agitados".Volumen libre del molino.. A diferencia de la operación intermitente.204 CAPÍTULO 5.Mediante un ajuste de los datos por mínimos cuadrados se puede obtener para la liberación de proteína la constante. Grado de Mezclado en un Molino de Perlas. [L3/t]. k = 6. generándose una distribución de tiempos de residencia de la población celular. [L3].984 x 1(T3 s~l b). [t]. El tiempo de residencia medio t de la distribución de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia ideal ÍR dado por: donde: ÍR: Tiempo de residencia ideal. en una operación continua el tiempo de residencia varía para las diferentes células de la suspensión. El grado de desviación del flujo tapón ideal en los molinos de perlas comerciales.

5. Utilizando un tiempo adimensional definido por: (5. Al aplicar un pulso de tinta en la primera etapa de una serie de tanques perfectamente agitados.4. Cn: Concentración de tinta en la etapa n. [M/ L3]. (5.12.10) puede expresarse como: \r1f~i C* \ -TT-.0) la ecuación (5.13. el balance de la masa de tinta para cualquier etapa n está dado por la expresión: -0.YV(C n _i .11J\ con las condiciones: e<o 0=0 d =o d = A^Co <9 > O C0 = Q Para la etapa número 1 la ecuación de balance se reduce a: ¿e y la forma integrada es: I ' ^r = -N ¡ dO JNC0 (5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 205 de tanques perfectamente agitados en serie a que equivale el grado de mezclado que se presenta en el molino (Shütte y Kula. 1990). .) donde: N: Número de etapas de la serie.G n ) n av (tí 1 1 (5.

15) respecto a 6 e igualando el resultado a cero para obtener: N = —I— (5. El balance de proteína liberada en la primera etapa de la serie está dado por: .= Nexp(-N0) (5. El número de etapas de un molino de perlas obtenido mediante experimentos de pulsos. es posible obtener una expresión para la concentración en la segunda etapa. La aplicación práctica del desarrollo anterior puede visualizarse derivando la ecuación (5. etapa y efectuando la integración correspondiente.206 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de tal manera que: Q.16) ] ] j donde 9max es el tiempo adimensional al cual E es máxima. Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa TV se tiene que: CN _N»ffN C0 ~ ( En los estudios de mezclado al cociente CN/CQ se le denota como E y es una medida de la distribución de tiempos de residencia del fluido dentro del recipiente (Levenspiel.14) Co Sustituyendo la expresión anterior en la ecuación de balance para la segunda. 1972). puede ser empleado para calcular la eficiencia de rompimiento esperada. y que el rompimiento sigue una cinética de primer orden. Para relacionar el número de etapas con la eficiencia de rompimiento es necesario realizar un balance de proteína liberada (células rotas) considerando que el molino consta de . Eficiencia de los Molinos de Perlas./V etapas tipo tanque perfectamente mezclados en serie. De tal manera que el número de etapas a que equivale el grado de mezclado de un molino. puede ser determinado a partir de los datos experimentales de concentración contra tiempo que resultan al aplicar un pulso de trazador.

4. -mjt . ¿fí.5. y--~7fi •»•"!/ lm-R\) (5.19) La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: O= O RI = O ú 0=_ E> Rl D = Rl y obtener: / kV\f i \ (5.20) " NF La ecuación anterior también puede ser expresada como: Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa TV se tiene: . [¿-1] La ecuación anterior puede ser expresada en función de un tiempo adimensional dado por: y obtener.* . [M/L3]. t: Tiempo de operación. jn . DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 207 donde: RI: Concentración de proteína liberada en la etapa 1. IcV*. _. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden.

9 1.278 0.908 0. Para determinar el número de etapas del molino de acuerdo al modelo de tanques en serie.3 101.0 220.0 82.27 1.7 85.Determinación del número de etapas equivalentes de un molino de perlas.550 0. .5 27..5 1305.0 135.3 1.046 0.35 2.5 2542.097 0.722 0.185 0.0 352.3 65.45 1.99 2.71 2.442 0.5 32.208 CAPÍTULO 5.5 2132.1 8.17 2.8 21.Calcular el tiempo de residencia ideal.90 1.07 (5) E 0. Los datos de concentración a la salida del molino aparecen en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente : t(s) 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 (1) (2) C(U) 11.63 1.332.6 Suma = (3) CAí 287.48 respecto al volumen de la cámara.0 2325.861 0.0 545.53 2.54 0.5 820.5 15. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Rr = 1 + NF ) — RN kV¡ (5.0 2682.5 47.22) Ejemplo 5.0 107.81 1.36 0.005 a). se carga de perlas de tal manera que la fracción de volumen libre es de 0.0 47.5 1625.009 0.09 1.016 0..89 3.1 0.8 14.787 0.18 0.402 0.0 1187.72 0.119 0. Un molino de perlas tipo piloto con cámara de 4 litros de volumen.8 5.5 (4) e 0.074 0.028 0.0 16.2 93.3.5 52. se introduce un pulso de tinta al molino cuando éste opera en forma estacionaria con un flujo de 50 l/h.4 3.

.El tiempo de residencia ideal está dado por: 209 ÍR = -y/ x 0.... _ 16332.24 s b).4.16 muestra la gráfica de estos datos.Obtener la gráfica de E vs 0.5 ° ~ T38^4~ CQ = 118..93 x 10~2 s~l f).48 x 3600 f 4 VM ** = 50¡ ÍR = 138.Calcular la eficiencia por etapa si k = 1.16 se puede determinar que cuando E presentí un máximo. e).En las columnas (4) y (5) de la Tabla anterior aparecen los cálculos del tiempo adimensional 9 y la concentración adimensional E La Figura 5. c).Calcular la eficiencia global de las N etapas.Estimar el valor de CQ..16) se obtiene: .. d).x = U. Solución: a).El valor de CQ puede ser estimado mediante la expresión: Co= M De acuerdo a los cálculos de la columna (3) de la Tabla anterior.5. I O Utilizando la ecuación (5.15 Unidades C c). Vma.. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO b). d).De la Figura 5.Estimar el número de etapas N..

210 CAPÍTULO 5.5 4.0 0. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.3.0 0. .16: Distribución de tiempos de residencia del ejemplo 5.0 1.5 1.5 2.0 2.0 e =t/t n Figura 5.0 3.5 3.

4 f). N = -—íN = 4 e). ^ Rm — R = (1+0..La eficiencia de rompimiento en cada etapa de acuerdo con la ecuación (5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 211 N = i-o.667 i -t- = 0.20) es: Eficiencia = * ~^ V NF ) el valor del grupo entre paréntesis de la expresión anterior es: WM _ __ _ (1.22).5.°-667 de tal manera que: Eficiencia Eficiencia = 0.87 La eficiencia global de rompimiento en el molino es del 87% .93 x 1Q-2 _ s-l)(m.La eficiencia global puede ser obtenida a partir de la ecuación (5.4..667)" = 7.716 de tal manera que: RN -0.24s) _ .

[M/L3].25) .R) donde: R: Concentración de protema liberada (células rotas) después de N pasos.212 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5. [1/pasos] La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: N =0 N =N R =0 R= R (5. (5. N: Número de pasos a través de la válvula del homogeneizador.24) Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una dependencia con la presión dada por: k' = k"Pa donde: P: Presión de operación. Rm\ Concentración máxima de proteína que puede ser liberada. de tal manera que: ~ = k'(Rm .23) obteniéndose la ecuación: \»~~ = k'N nm — n (5. k : Constante cinética de primer orden.4. [M/L3].2 homogeneizador de Alta Presión La desintegración celular en un homogeneizador de alta presión a una presión fija dada puede ser descrita mediante una cinética de primer orden respecto al número de pasos. [M/t2L}.

la fracción de enzima liberada respecto a la enzima total presente depende de la localización de la enzima particular dentro de la estructura celular (Sauer et a/. 1989).Rompimiento de E. En la recuperación de /3 galactosidasa de E. y de la concentración inicial de células en el caso de levaduras.00 (Sauer et al.25) se obtiene: ln Rm D D Rm — R = k"NPa (5.6 g/l en peso seco. Sin embargo. coli en un microfluidizador. I Ejemplo 5.5..26). La presión de operación utilizada fue de 60 MPa La cantidad de proteína liberada después de cada paso se presentí en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente: .9 y para E. Por otra parte.4. Rm — R donde 6 es un exponente que varía con el tipo de célula y tomí valores entre 0.26) El proceso de rompimiento celular descrito por la ecuación (5. 1989). es independiente de la presión de operación.24) y (5.4. Un valor típico para levaduras es a = 2. se hace pasar poi un microfluidizador tipo M-110 una suspensión celular que contien* 47.28 y 1. se ha reportado que la actividad de enzima liberada en relación a la proteína total liberada. [M~at2aL2a /pasos]. 213 a: Parámetro constante en rangos limitados de presión. Combinando las ecuaciones (5.27. de la temperatura. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO fe": Constante dimensional de rompimiento.2. coli. coli a = 2. es independiente de la concentración celular. Microfluidizador En el caso del microfluidizador la cinética de rompimiento presenta una cierta dependencia no lineal con el número de pasos expresada mediante la ecuación: ln m =k"NbPa (5.

El número de pasos requeridos para una liberación del 93 % de proteína es: ..2 y 6 = 1. Solución: De acuerdo a la ecuación (5.0 88.9 0.-Estimar el número de pasos para liberar el 93 % de proteína en este proceso.Estimar el valor de la constante cinética de rompimiento considerando que para este caso a = 2.688 y para P=60 MPa.214 CAPÍTULO 5.0 99. Mediante un ajuste por mínimos cuadrados de estos datos se obtiene: k P¿'¿ = 0.908 a). k" = 8.0 79.27) el grado de rompimiento para este caso puede ser expresado como: In Rr Rm — R de tal manera que de la pendiente de la gráfica de ln[Rm/(Rm — R)] contra TV es posible estimar k"..219 6. Los cálculos necesarios se muestran en la columna (3) de la Tabla anterior.4 x 10~5 MPa~2'2 b).0 96. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS (1) Paso 1 2 3 5 10 (2) ' (3) % Proteína Liberada ln[Rm/(Rm . b).R)] 63.120 3.560 2.994 1.

La ruptura celular utilizando el molino de perlas permite la obtención de un mayor porcentaje de enzima activa en un número menor de pasos en comparación con el homogeneizador.93 / 0.6 muestra los datos para la liberación de la enzima {3 galactosidasa de células de E. El diseño de los molinos está basado en ecuaciones empíricas y en en experimentos piloto. . un homogeneizador tipo Manton-Gaulin y un Microfluidizador.5. A nivel industrial sólo se emplean los molinos de perlas agitados y los homogeneizadores de alta presión.000084 x 602-2 N = 3. Estos datos muestran que el Microfluidizador permite manejar mayores concentraciones de biomasa y produce un rendimiento mayor de enzima activa. Comparación de los Métodos Mecánicos de Ruptura Celular La Tabla 5.5 muestra datos de producción de algunas enzimas utilizando el molino de perlas y el homogeneizador Manton-Gaulin.88 pasos Se necesitan 4 pasos de molienda.5. La Tabla 5. Sin embargo. SUMARIO 215 yy _ 1. coli utilizando un molino de perlas tipo Dyno Mili. la producción de proteína en el molino es en general menor que la obtenida en el homogeinizador.00-0. el tamaño medio de los restos celulares que se producen en un paso es mayor que el encontrado en las mismas condiciones en el homogeneizador Manton-Gaulin. 5. Existen varios métodos para efectuar esta operación.5 Sumario I El rompimiento celular es una operación necesaria cuando el producto de interés se localiza al interior de la célula. Además.

* No.* No. kg/h 91% 95% 88% 4 60 98% 95% 1 1 70 40 4 3 60 65 84% 85% 95% 92% 2 3 3 2 16 12 7 20 82% 10% 89% 84% 3 4 3 3 67 67 65 * Actividad solubilizada ** Netzsch LME 20 *** Gaulin M3 Adaptada de: Kula y Schütte. solub. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers.216 CAPÍTULO 5. Todos los derechos reservados. . Pasos Prod. Pasos Prod. cercus Brevibacterium ammoniagenes E. kg/h 86% 1 60 homogenei zador * * * Act. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. solub.fosfato deshidrogenasa D-glucosa 6-fosfato deshidrogenasa Formato Deshidrogenasa Leucina deshidrogenasa Fumarasa Penicilina acilasa D-Lactato deshidrogenasa Molino de Perlas** Act.5: Comparación de métodos de rompimiento celular. coli Laclo bacillus confuius Enzima liberada D-glucosa 6. Copyright ©1987 AIChE. Microorganismo Levaduras Saccharomyces carlsbergensis Saccharomyces cerevisiae Candida boidinii Bacterias B.

.6 47.9 73.G alactosidasa tamaño a Pico(s) biomasa Proteína 10 s~l Actividad media 100 s~l (mPa s) (mPa s) (nm) (nm) (9/1) (%) (%) Molino de Perlas* 2 min. 800 468 445 51 35 28 10 6 26 15 10 7 6 *Dyno Mili KDL a diferentes tiempos promedios de residencia ** homogeneizador Adaptada de: Agerkvist y Enfors.5 49.6 47.4 66 76 82 58 75 78 501 414 217 457 180.6 47. 787 471.5. 1990 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. 806 465.5 62 72 79 62 74 79 612 553 529 461. SUMARIO 217 Método Ruptura de células de E.2 47. coli con diferentes métodos.6 62 65 63 79 88 96 100 62 61 61 76 87 97 100 693 693 673 480 451 493. 777 63 38 19 28 19 14 48.4 48. Todos los derechos reservados.5. 457 191 113 8 8 30 6 6 101.6 47.5 49. 3 min. 4 min. 800 486. Copyright ©1990.4 48. MantonGaulin** 1 paso 2 pasos 3 pasos Microflui dizador** 1 paso 1 paso 1 paso 2 pasos 3 pasos 5 pasos 10 pasos 49. 833 489. Peso seco liberación de Distribución de Viscosidad de /3.

Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades superiores a la óptima.94 23.425 20 0. se utilizó una suspensión celular de concentración de 50% (peso/volumen).R)] de residencia (min) 0.160 0.Resp.365 0.300 0.6 Problemas 5.. a).55 y 0.650 30 0. un flujo de alimentación de 50 l/h y una carga de perlas del 85 %.En estudios de liberación de proteína intracelular en función de la velocidad del agitador empleando un molino de perlas tipo Netzsch LME 4.060 3 0.225 10 0.2 .150 5 0.90 22.1.R)] Agitador 2 Tiempo log[# m /(#m .090 0. Estimar la velocidad óptima para el agitador. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5.218 CAPÍTULO 5.. 5.00 a.85 mm .La desintegración celular intermitente con dos tipos de agitadores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes datos: Agitador 1 Tiempo de residencia (min) 3 5 10 15 20 25 30 log[fl m /(# m .437 . Bajo estas condiciones se obtuvieron los siguientes datos: Proteína liberada rpm 1200 1500 1750 2000 2250 (mg/ml) 15.. 1500 rpm b.325 15 0.525 25 0.225 0.35 22. con perlas de diámetro entre 0.037 0.88 22.

Resp. Calcule el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento con cada tipo de agitador. b). 5 pasos.hidroxibutirato (PHB) un termoplástico potencial (Harrinson et al .33 min 5.2 MPa la constante k" del homogeneizador toma un valor 5.Estimar la constante cinética k para cada tipo de agitador. se hace pasar por un homogeneizador APV Gaulin 15M 8BA con el propósito de estudiar la recuperación de poli(3. Calcular cuanto representa este valor del correspondiente al 100 % de conversión trabajocalor.6.. t\ = 53.5.Resp..05 x 10~4 MPa~2-2. PROBLEMAS 219 a)...5..6.. a)..Obtener las ecuaciones (5.Resp.50(7 por cada 6. 1985) que el calor liberado por compresión adiabática durante un proceso de homogeneización puede elevar la temperatura de la corriente que entra al homogeneizador 1. Cuando se opera a una presión constante de 15.En un rompimiento celular utilizando un homogeneizador es posible lograr 80 % de rompimiento bajo las dos diferentes condiciones siguientes: Condición 1 2 Presión (MPa) 90 50 Pasos 1 3 . 91 % 5.Ha sido reportado (Bjustrom.Estimar el número de pasos necesarios para lograr el 63 % de rompimiento.Si la presión de operación se duplica en cuantos pasos se obtendrá el mismo rendimiento.Una suspensión celular que contiene la bacteria gram negativa Alcaligenes eutrophus.16) mediante el desarrollo descrito en el texto.. b. a).4.3. 5.15) y (5. 5. ki = 0.895 MPa de presión de operación. a)..1990) .015 min~l b).. Resp.

Resp.. c).. .Como se explica que C pueda ser mayor que CQ... 10 y 20.22) mediante el procedimiento descrito en el texto . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a).56 x 10~4 MPa~1-87 b).220 CAPÍTULO 5.Graficar la distribución teórica de E vs 9 de un molino de perlas al que se le ha aplicado un pulso de tinta. para valores de TV de 1. 5.7.8...Estimar los parámetros cinéticos del homogeneizador. 67 % de diferencia. 5. jfc" = 3...Comparar la energía por unidad de masa de alimentación necesaria para cada condición.Resp. a).Que condición se recomienda para realizar la ruptura.Obtener la ecuación (5. b). 2. respectivamente.. b). 5. a). 3.Indique la forma que adopta la distribución conforme TV crece.

7 Bibliografía Agerkvist. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. D. 349-357. 1990. Biotechnology: Fermentation and downstream processing. A. D. 1539-1541. En: Separations for Biotechnology. Academic Press. Differential product reléase from yeast cells by selective enzymatic lysis. Elsevier Applied Science. John Wiley &. coli cell desintégrales from a bead mili and high pressure homogenizers. J. 1990. Cell disruption: Breaking up is hard to do. Bio/Technology.. R. y Rosen.L. Hoare. . 38-47. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. E. 36. A. R.). 11-20. Pyle.S. Biotechnology and Bioengineering. London. England. 11. y Dunnill. y Hu. Biochemical engineering aspects of cell disruption.).5.T. (Ed. y Enfors. C. Eng. Bjustrom. Ed.. I. . Wei-Shou. B. P. (Ed. D. Desintegration of cell. New York.). S.V. 2. (Ed. 1990. Belter. J. Pyle. 18. 249-271. 1083-1089. Edebo.).L. 1992. The effect of culture history on the disruption of alcaligenes eutrophus by High Pressure homogenisation. BIBLIOGRAFÍA 221 5. Andrews. H. 21-28. 10. 77-88. Cussler. Cartwright. Cell disruption and removal of insolubles. D. Pyle. 1969. 1990. En: Fermentation Advances. A. En: Separations for Biotechnology. Asenjo. L. D. Dennis. S. y Chase.A. England. P. T. 1987. Elsevier Applied Science. (Ed. Characterization of E.. Huang. Foster. Sons.. L. J. En: Separations for Biotechnology.7. 1988. B. M. 126-159. Biotechnology. Keshavarz. Datar. L. England. E. Perlman. 1993. 1985. y Asenjo. Harrison. En: Separations for Biotechnology. Elsevier Applied Science. Chem.

Marcel Dekker. Scopes. 5. H. 1972. y Wang.18. Lehninger. C. 1-21.). 55-64. Asenjo. D. Biotechnology Progress. Pyle. 1988. Naglak. Protein reléase from the yeast Ichia pastoris by chemical permeabilization: Comparison to mechanical disruption and enzymatic Lysis...Y. Chemical permeabilization of cells for intracellular product reléase. 177-205. Segunda Edición. En: Separations Processes in Biotechnology. 1990. John Wiley and Sons. (Ed. 1990. Protein Purification: Principies and Practice. Sauer. y Evans.A.J. Bead mili disruption. T. L. Springer-Verlag. M. España. Hettwer. Elsevier Applied Science. En: Separations for Biotechnology. M.R. y Schütte. B. England. 62-79.). L. J.). H. New York. J.). AIChE. Disruption of native and recombinant E. Biotechnology: Status and Perspectivas. y Wang. Levenspiel. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Verral. (Ed. O.Y. 107-141. 1. J. New York. y Kula. H. 31-42.L. 1990. R. Naglak. Ediciones Omega. New York. Purification of proteins and the disruption of microbial cells. D. Shuler. 242-308.). 33.222 CAPÍTULO 5. 1989. Asenjo. T. 3. An introduction to biochemical process design. y Glick. coli in a high-pressure homogenizer. Biotechnology and Bioengineering.R.. Schütte. 1994. .P.I. 9. Ellis Horwood Limited. 1987.J. 1989. Barcelona. L. D.A. M. 3. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology. 7. Marcel Dekker.J.R. H. 351-391. Cooney. Robinson. New York.C. 84. Petrides. A. D. M. M.. T. New York.B. 1330-1342. England. Chemical Reaction Engineering. Kula. En: Separations Processes in Biotechnology. Wang. y Hudson. Bioquímica.(Ed. 41-71. 1989. S. (Ed. C. (Ed.

Parte III Concentración del Producto .

la adsorción cuando se realiza por af una técnica de separación altamente selectiva y necesaria en la purificación de productos en los cuales se requiere de una alt< . Sin embargo.Esta parte trata sobre las operaciones de extracción y c que son utilizadas para concentrar los producto diluidos de L biológicos que son obtenidos en la etapa de separación de solide la extracción como la adsorción son técnicas de separación selectivas.

Capítulo 6 Extracción 6. En las operaciones de extracción la solución de la que se va a extraer el soluto se llama alimentación y el líquido con el cual se pone en contacto la alimentación se denomina solvente. . Las sustancias que componen la solución original se distribuyen de diferente forma entre las dos fases líquidas y se logra un cierto grado de separación. El producto de la operación rico en solvente se llama extracto y el líquido residual de donde se separó el soluto es el refinado. En muchos procesos tradicionales de la Ingeniería Química la operación de separación más usada es la destilación debido a su simplicidad. mismo que puede incrementarse mediante el contacto sucesivo entre los dos líquidos.Separación de la mezcla en dos fases líquidas inmiscibles.1 Introducción La extracción líquido-líquido es una operación que permite la recuperación de un soluto de una solución mediante su mezcla con un solvente. La extracción líquido-líquido se realiza básicamente en dos pasos: . .Mezcla íntima del solvente de extracción con la solución a procesar. El solvente de extracción debe ser insoluble o soluble en grado limitado en la solución que se va a extraer y el soluto a extraer debe presentar una elevada afinidad por el solvente de extracción.

así como también la relativa facilidad con que se pueden escalar los procesos extractivos. Los principios básicos de la extracción convencional líquido-líquido pueden ser extendidos a los sistemas de extracción de dos fases acuosas inmiscibles que son más empleados en la recuperación de proteínas y en la separación de algunas sustancias biológicas. particularmente contribuyen a una selección adecuada del solvente de extracción y de las condiciones de operación. Entre ellas se encuentran la vasta experiencia y desarrollo tecnológico alcanzado en muchos años. en muchas bioseparaciones la destilación no puede ser utilizada debido a la sensibilidad de los productos a la temperatura. y los aspectos básicos del diseño de extractores intermitentes y continuos se revisan en la sección 6.2 se abordan los aspectos fundamentales de la extracción. mientras que la extracción que utiliza dos fases acuosas inmiscibles se utiliza para concentrar proteínas y separar componentes biológicos. La extracción es una técnica de separación que posee algunas ventajas que la hacen atractiva para los procesos de bioseparación. El establecimiento de los aspectos termodinámicos básicos de la extracción permiten visualizar algunos caminos que contribuyen a realizar esta operación en forma más racional. Los equipos más utilizados para realizar operaciones de extracción se presentan en la sección 6. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos: . La interacción de estos componentes y/o la presencia de más solutos o solventes genera cierto grado de complejidad de la operación.4. La extracción agua-solvente orgánico se emplea ampliamente en la industria de los antibióticos.3. Sin embargo. La extracción también puede ser usada para remover impurezas de una corriente.228 CAPÍTULO ti. En este capítulo en la sección 6. a su baja volatilidad y a las concentraciones tan bajas que se manejan. La operación de extracción implica el uso de tres tipos de sustancias cuando menos: el soluto de interés y los componentes puros de cada una de las dos fases.

Las fases pueden ser completamente o parcialmente miscibles. . • Selección del solvente. • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar. En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas. i 6. . En este último caso.2. Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicos en soluciones acuosas. . las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos.1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: .La naturaleza de las fases. le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua.• Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés. • Química de la extracción. Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles.2. es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua. 6. En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico. Aún en ausencia de interacciones específicas. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas.

le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua.6. En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico. . Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles. • Química de la extracción.2. .2. es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 229 • Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido. Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicoí en soluciones acuosas. 6. • Selección del solvente. las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos.Las fases pueden ser completamente o parcialmente irascibles. Aún en ausencia de interacciones específicas. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas. • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés.2.La naturaleza de las fases. En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas. . 6. En este último caso.1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: .2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar.

2) donde AE y AR son las actividades del soluto en las fases E y R respectivamente. es decir: K.4) es conocida como Ley de la distribución de Nerst y establece que en el equilibrio existe una relación constante de las actividades del soluto en las dos fases para una temperatura dada.6) .230 CAPÍTULO 6.4) donde: Kp es el coeficiente de partición. EXTRACCIÓN Cuando un soluto es repartido entre dos fases E y R formando soluciones diluidas. o fase correspondiente a la alimentación.3) puede escribirse como: (6.1) El potencial químico de las fases está dado por: H°(R) + RT ln AR = fi°(E) + RT In AE (6. al alcanzarse el equilibrio los potenciales químicos del soluto en ambas fases son iguales. La ecuación (6. = í (6. o fase rica en solvente y y es la concentración de soluto en la fase pesada R.de los gases ideales y T es la temperatura. R es la constante .5) o bien como: (6. En el caso de soluciones diluidas ideales la concentración es una medida apropiada de la actividad. es decir: (6. de tal manera que la ecuación anterior se puede escribir como: /jf(R) + RT ln y = fjf(E) + RT ln x (6. x es la concentración de soluto en la fase ligera J5. La ecuación (6.3) En extracción se define el coeficiente de partición como la relación de las concentraciones de soluto en el equilibrio.

06 12. sino únicamente en el equilibrio verdadero.El coeficiente se define sólo en un punto de equilibrio.00 Adaptada de: Belter ei al.00 0.ermodinámico es conveniente puntualizar las propiedades del coeficiente de partición en la extracción. En este sentido nc debe confundirse con la constante de equilibrio del sistema. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 231 Tabla 6.00 0.00 120. No se aplica a todas las concentraciones posibles de encontrar en un sistema.6.04 100. .10 Observaciones. Glutámico Celesticetina Eritromicina Novobiocina Penicilina F Penicilina K Proteínas Glucosa isomerasa Catalasa Solvente n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua Amil acetato/agua Butil acetato/agua Amil acetato/agua Amil acetato/agua PEG 1550/fosfato de potasio PEG/dextrano crudo Kp 0.0 a pH 4.0 3.0 a p H 10. 1988.01 32.1: Coeficientes de partición para algunos solutos de interés.07 110.01 0. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. En la Tabla 6.00 3. El coeficiente de partición varía con el nivel de concentración de equilibrio. .5 a pH 4. El logaritmo natural del coeficiente de partición Kp es proporcional a la diferencia de los potenciales químicos en los estados estándar de las fases puras. Todos los derechos reservados.00 0.1 se muestran los valores del coeficiente de partición Kp para algunos solutos de interés en sistemas específicos.00 0. 25°C Antibióticos a pH 7. donde AG° es cambio en energía libre en el estado estándar. Copyright ©1988. Compuesto Tipo Aminoácidos Soluto Glicina Lisina Ac.20 0.0 a pH 6. Debido a la importancia del equilibrio }.2.0 a pH 6.

232

CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN

- Para sistemas diluidos el coeficiente de partición puede considerarse constante e igual a la constante de equilibrio. - La constante Kp a una temperatura dada, es independiente de la concentración o presión global del sistema. - La magnitud de la constante Kp, determina la extensión a la cual procederá una extracción particular bajo condiciones establecidas. Un valor alto de Kp indica que en el equilibrio la concentración de soluto en el extracto es mayor que en el refinado. - Los valores de Kp deben ser determinados experimentalmente. Cuando se gráfica el potencial químico \i contra la concentración de soluto en la fase ligera x (Figura 6.1), en condiciones tales que una pequeña cantidad de fase ligera E esté en equilibrio con un exceso de fase pesada R, se tiene lo siguiente: debido a que R está presente en exceso, el potencial químico f¿(R) es constante, mientras que /¿(E) varía con la concentración x. En la intersección de //(-£") y 1¿(R) se puede localizar la concentración x, en equilibrio, de soluto presente en E. Cuando la concentración x aumenta, f¿(E] aumenta y se aproxima a fí°(E). Entonces se puede establecer que los cambios en el tipo de solvente cambian la concentración x en equilibrio. Por ejemplo, para el solvente 1 la concentración de equilibrio es x\ y para el solvente 2 la concentración de equilibrio es #2, entonces se puede concluir que el solvente 2 favorece esta extracción. No sólo los cambios en el tipo de solvente pueden mejorar la extracción, sino también los cambios en el soluto que afecten su potencial químico fj,°(E). Cambios en el Solvente Lo primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extracción es cambiar el solvente de extracción, esto es, elegir uno cuyo potencial químico en el estado estándar esté más próximo a ^°(R). Desafortunadamente esto no es fácil de lograr debido a que la teoría termodinámica

5.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

233

Fracción mol de soluto ( x ) en fase ligera

Figura 6.1: Comportamiento del potencial químico en función de la concentración x de soluto.

234

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

no puede predecir con segundad los potenciales químicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es posible utilizar enfoques aproximados para estimar 1¿°(E) utilizando parámetros de solubilidad, en el cálculo de coeficientes de partición . De acuerdo con esto, el coeficiente de partición Kp dado por la ecuación (6.4) puede ser expresado como:

donde V¿ son los volúmenes molares parciales del solvente pesado /?, el solvente ligero E, y el soluto A respectivamente, y Si son los parámetros de solubilidad correspondientes. El grado de disolución de sólidos en líquidos varía considerablemente con la naturaleza del sólido y del líquido, la temperatura y en grado menor con la presión. En todos los casos el límite de solubilidad es la saturación. En un sistema de un solvente y un soluto particular, la concentración de saturación a una temperatura y presión dadas es constante y no depende de la manera en que se prepara la solución. La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto en un solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayoría de las sustancias absorben calor al disolverse y son más solubles a una temperatura elevada. Para estimar el parámetro de solubilidad del soluto de interés ¿u, es necesario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas solubilidades Si sean conocidas. Una vez determinado 8¿ se pueden estimar los coeficientes de partición para nuevos solventes a partir de los valores Si conocidos. Estas son sólo estimaciones que pueden servir de guía para nuevos experimentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parámetros de solubilidad para algunos solventes.

Cambios en el Soluto Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extracción ya sea por razones económicas o técnicas, entonces es necesario ver la posibilidad de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se desea obtener mediante la extracción, los posibles cambios deben ser de caráter reversible.

FUNDAMENTOS DE LA

EXTRACCIÓN

235

Tabla 6.2: Parámetros de solubilidad para algunos solventes. Solvente Amilacetato Disulfuro de carbono Tetracloruro de carbono Cloroformo Ciclohexano Tolueno Agua 8 (ca/ 1 / 2 era -3/2)
8.0

10.0 8.6 9.2 8.2 8.9 9.4

Cambios en el Soluto por Pares de Iones.- Los cambios en c soluto dependen del comportamiento iónico que éste pueda tener. Si < soluto tiene comportamiento iónico y es posible encontrar un materií que permita suprimir esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces 1 unión del soluto a este material permitirá aumentar la solubilidad d< soluto en el solvente de extracción. Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hech de que un soluto que es iónico en el agua, formará un par-ión sin carg neta en un solvente orgánico. Esta formación de par-ión se puede ejemplificar de la siguiente m, ñera: Si de una solución acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extr; el catión utilizando cloroformo, se tiene: _ [N(C4H9)¿ en cloroformo] g)4 en agua] _
(6.

Si se agrega acetato de sodio a la solución acuosa de cloruro < tetrabutilamonio y se realiza nuevamente la extracción, se encuentra en cloroformo] = 132 en agua]
(6.

Puede observarse que en el primer caso se extrae una solución diluí de par - ion de N(C^H^]\Cl" y que en el segundo caso, se obtiene u

236

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.3: Contraiones típicos usados en extracción por pares de iones.
Ion

Estructura Química CH3COOCH3(CH2)2COO-

Observaciones Simple, no es muy soluble en solventes orgánicos. Más soluble en solventes orgánicos que el Acetato. Sólido Puede formar núcelas. Puede permanecer iónico en solventes orgánicos. Puede formar núcelas. Puede formar cristales líquidos. Puede degradarse en varios solventes.

Acetato Butirato Tetrabutilamonio Hexadeciltributilamonio Perfluoroctanato Dodecanato Linolato Tetrafenilboruro

(C 4 #9)4W-

CH3(CH2)1&(dH9)3N+ CF3(CF2)6COO~ CH3(CH2)10COOCH3(CH2)tCH = CHCH2CH = (CH2)7COOB(C6H5)4~

Adaptada de: Belter ef al, 1988. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

solución más concentrada de par - ion de CH^COO El empleo de pares iónicos, requiere de la selección de contraiones solubles en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como sales grasas y se listan en la Tabla 6.3 Cambios en el Soluto por pH.- Algunos productos que son de interés biotecnológico como las proteínas o los constituyentes de éstas los aminoácidos, son sensibles a cambios en el pH por lo que el conocimiento y comprensión de las propiedades ácido - básicas de los aminoácidos es sumamente importante en las bioseparaciones de proteínas. Muchos de los solutos.que se desean aislar son ácidos o bases débiles, su extracción puede ser fuertemente afectada por cambios en el pH. Un ácido débil puede ionizarse parcialmente en agua y no ionizarse significativamente en un solvente orgánico.

0.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

237

El ácido débil RCOOH, en solución acuosa, se disocia de la siguiente manera: RCOOH ^ RCOO- + //+ así que su constante de disociación Ka está dada por:

[RCOO-)R[H+]R [RCOOH]R

(

'

Cuando este ácido débil se distribuye entre dos fases, una orgánica E y una acuosa R, el coeficiente de partición aparente agrupa las concentraciones de la forma ionizada y no ionizada del ácido en la fase acuosa. Este coeficiente de partición se expresa como:

"

[RCOOH}B [RCOOH}R + [RCOO-]R

(

'

Combinando las ecuaciones (6.10) y (6.11) se obtiene:

donde K{ es el coeficiente de partición intrínseco de las especies no ionizadas definido por:
Ki

_ [RCOOH}E ~ [RCOOH]R

(6J3)

se sabe que pKa — — logA^, entonces si se combinan las ecuaciones (6.12) y (6.13) se obtiene:
log 10

-¿•}-l\=pH-pKa Kr

(6.14)

En la Tabla 6.4 se muestran los valores de pKa para algunos solutos de interés biológico. El desarrollo anterior para el caso de una base débil es análogo y conduce a: (6-15)

238

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Las ecuaciones (6.14) y (6.15) muestran que el coeficiente de partición puede ser alterado cambiando el pH de la solución acuosa. Los cambios en el coeficiente de partición pueden ser usados también para seleccionar el pH al que debe extraerse preferentemente un soluto determinado. Para dos soluto A y B la selectividad de la separación está dada por /?, donde:

Kr(B)
(6.16) es un indicador del grado de pureza que se puede lograr en un sistema de extracción determinado. Ejemplo 6.1.- Disociación de ácido propiónico. El pH de una solución 0.1 M de ácido propiónico es de 2.935. Determinar: a).- La constante de disociación aparente Ka. b). El pKa del ácido. c).- El grado de disociación del ácido. Solución: a).- La constante de disociación de un ácido está dada por la ecuación (6.10), en este caso se tiene que:
í^-a —

_ [//+] (CH3 - CH;\
[CH3 - CH2 - COOH]

dado que la concentración de la solución es de 0.1 M, [C//3 - CH2 - COOH} + [//+] - 0.1 M y a un pH de 2.935, la concentración de H+ es
[//+] = L J
-—^ = 1.16 x 10~3 M

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

239

Tabla 6.4: Valores de pKa para algunos solutos biológicos. Bases y Ácidos Simples Compuesto pKa Acido Acético 4.76 2.14 H3P04 CH3NH+ 10.6 Aminoácidos Compuesto pK-2 pKi COOH aNH+ Leucina 2.36 9.6 1.82 Histidina 9.17 Lisina 2.18 8.95 Péptidos Compuesto pKi pffi COOH aNH+ 3.06 Gly-Gly 8.13 2.34 Ala 9.69 Gly-Asp 2.81 8.60 Ala-Ala-Lys-Ala 3.58 8.01 Antibióticos Compuesto pK'a* Cefalosporina C 3.9 5.3 7.6 Lincomicina (base libre) Penicilamina 1.8 , (carboxil)

+ + +

pKs Grupo R
6.0 10.53 - pK3 Grupo R

+ -f +

+ -I-f -f

4.45 10.58

+ 44-

10.5

Adaptada de Belter, P.A. et a/, 1988.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

240 de tal manera que:

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

[C//3 - CH2 - COOH] = 9.88 x 10~2 M sustituyendo en (6.10) estos resultados se obtiene: (1.16 x 1Q-3 M) (1.16 xlQ- 3 M) ~~ 9.88 x 10-2 M = 1.36 x 10~5 M

a

Ka

b).- De acuerdo a la definición de pKa->

pKa

= log(—-)

pKa =

pKa = 4.87
c).- El grado de disociación es igual a la concentración de ácido disociado entre la concentración inicial de ácido, de tal manera que:

Ejemplo 6.2.- Separación de dos tipos de penicilina. En el sistema agua-amilacetato la penicilina "K" y la penicilina "F" tienen valores de KÍ de 215 y 131, respectivamente. Sus pKa's son de 2.77 y 3.51. Si se desea recuperar penicilina "F", determinar como se alcanza mayor pureza del producto: Si se extrae a pH 3.0 o a pH 4.0. Solución: La selectividad de la extracción está dada por la ecuación (6.16). Para aplicar esta ecuación es necesario calcular primero Kp mediante la ecuación (6.14), para cada penicilina a cada uno de los pH's de interés. Para la penicilina "K" a un pH de 3.0 se tiene:

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA

EXTRACCIÓN

241

log10

- 1 = pH - PKa = 3.0 - 2.77 - 0.23

por lo tanto: Kp(uKn) = 79.68 Para la penicilina "F" a un pH de 3.0 se tiene:
log 10

\

= pH - PKa = 3.0 - 3.51 = -0.51

por lo tanto: KP(«F") = 100.0 se tiene entonces que:
A

KP("F") 100.0 ^("/n 79.68 = L26

El cálculo de /fp para las dos penicilinas a pH = 4.0 se realiza de manera similar, encontrándose para este caso que:
A = 2.67

Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pH's respectivos se muestran en la siguiente Tabla:

PH

3.0 4.0

KP("K») 79.68
12.00

KP(UF») 100.00 32.00

' o_ A'pC'F") P ~ KP("K")

1.3 2.7

Estos resultados indican que si la extracción se realiza a un pH = 4 se obtiene la penicilina "F" en forma más pura, aún cuando la extracción es más difícil dado que el A^C'/7"') = 32 es menor que el correspondiente al pH=3.0.

242

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.5: Criterios utilizados en la selección de solventes. Selectividad. Coeficiente de partición adecuado para el producto. Grado de solubilidad. Facilidad de recuperación. Densidad. Tensión superficial. Estabilidad para el soluto. Inocuo

6.2.3

Selección del Solvente

En la operación de extracción generalmente es posible seleccionar el tip de solvente que se va emplear para realizar la extracción ( Mattiasso y Ling, 1989). Para tomar esta decisión es conveniente considerar h siguientes características (Tabla 6.5) del solvente:

Selectividad.- En el caso de que se desee además de concentrar logn un cierto grado de purificación, el solvente debe ser selectivo pai el soluto de interés. Coeficiente de partición.- Entre mayor sea el coeficiente de partició menor es la cantidad necesaria de solvente. Grado de solubilidad.- Entre más insoluble sea el solvente en la a mentación, la extracción se realizará más fácilmente. Facilidad de recuperación.- Por cuestiones económicas es necesario qi el solvente pueda ser recuperado para su reutilización. Densidad.- La separación de las fases una vez que se efectúa la e tracción, es más rápida entre mayor sea la diferencia de densid. entre las fases.

6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

243

Tensión superficial.- Un solvente con una tensión superficial alta, facilita la coalescencia de las emulsiones, en la separación de las fases. Estabilidad para el soluto.- El solvente no debe alterar al producto. Otras.- El solvente debe ser inocuo, esterilizable, no-inflamable, barato y disponible en las cantidades deseadas.

6.2.4

Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles

Cuando se opera con sistemas biológicos hay un número limitado de solventes que pueden ser usados en los procesos de extracción, esto es debido a que algunas de las biomoléculas de interés como las proteínas, son desnaturalizadas por los solventes orgánicos (Mattiasson y Rajni, 1991). Una técnica de bioseparación que preserva la actividad de las biomoléculas, en este caso de las proteínas, es la extracción en sistemas de dos fases acuosas inmiscibles (SDFA). En la Tabla 6.6 se listan algunos sistemas que pueden ser usados para formar sistemas de dos fases acuosas. En general los sistemas de dos fases acuosas se pueden clasificar en dos tipos: - Los sistemas polímero-polímero. - Los sistemas polímero-sal. Los sistemas de dos fases acuosas inmiscibles polímero-polímero se forman cuando dos polímeros como el polietilen-glicol (PEG) y el dextrano (un carbohidrato) se mezclan en presencia de agua. En el caso de los sistemas polímero-sal, el sistema se forma por la mezcla en agua de un polímero y una sal como el fosfato de potasio. El hecho común de estos sistemas es que ambas fases son acuosas, el contenido de agua de cada fase varía entre 85 y 99 %. Los sistemas de dos fases se caracterizan por presentar una baja tensión interfacial en el rango de 0.0001 a 0.1 dÍ7ia/an. El tiempo de sedimentación (separación de las fases) sólo por acción de la gravedad es

244

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.6: Sistemas de dos fases acuosas. Componente 1 Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Ficoll Componente 2 Dextrano Hidroxipropil de almidón Fosfato de potasio Sulfato de potasio Dextrano Referencia Albertsson (1986) Tjerneld (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986)

Fuente: Albertsson et a/, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

de 5 min a varias horas debido a la pequeña diferencia de densidades y a la relativamente alta viscosidad entre las fases. El tiempo de separación puede reducirse utilizando centrifugación a baja velocidad (Albertsson et al, 1990). El hecho de que ambas fases sean acuosas y tengan una tensión interfacial tan pequeña, proporciona un medio ambiente tal que permite que las biomoléculas y partículas celulares puedan repartirse entre las fases conservando su actividad (Diamond y Hsu, 1990). La extracción en SDFA es un proceso sumamente atractivo para la separación de enzimas y proteínas de interés biotecnológico debido principalmente a que: - El escalamiento es sencillo y puede realizarse a partir de datos de laboratorio en forma confiable, dado que el coeficiente de partición no varía con la escala. - La transferencia de masa es alta y el equilibrio se alcanza con poca energía de mezclado. - Se puede realizar en forma continua. - Los polímeros le confieren estabilidad a las proteínas.

6.2.

FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

245

15-

10.

O

5

10
% (w/w)

15
Dextrano

Figura 6.2: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al, 1991
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1991. Todos los derechos reservados.

- La separación puede ser selectiva y rápida. - La separación puede efectuarse a temperatura ambiente debido a su rapidez. - Es más económica que otros procesos. Diagramas de Fases Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagramas de fases únicos donde se granean la composición de las fases en el equilibrio. La Figura 6.2 muestra un diagrama de fases para el sistema PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. La curva binodal característica de estos sistemas pasa por los puntos DPC.

246

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

- El punto P representa el punto crítico y es el punto donde teóricamente la composición y los volúmenes de ambas fases son iguales. - El punto A se sitúa en una región a la izquierda de la curva binodal donde el sistema consta de una sola fase. - El punto B se localiza en una región donde coexisten las dos fases y representa la fracción peso de cada uno de los componentes de una mezcla formada por fases de composición C y D. - Las lineas como la CBD se conocen como lineas de unión. Si se considera la linea de unión que pasa por los puntos Ql, Q2 y Q3, todos los puntos están formados por fases de igual composición, pero en diferente proporción de volumen. La proporción de volúmenes de las fases conjuntamente con el coeficiente de partición constituyen un factor de diseño fundamental de la extracción. La proporción de volúmenes de las fases puede obtenerse gráficamente utilizando balances de masa. Considérese la linea CBD de la Figura 6.2 y sea: M: Masa total del sistema de dos fases. [M]. ME'- Masa de la fase rica en PEG. [M]. MR: Masa de la fase rica en dextrano. [M]. qE'. Fracción masa de PEG en fase rica de PEG. [Adim.j. PE'- Fracción masa de dextrano en fase rica de PEG. [Adim.]. qpt: Fracción masa de PEG en fase rica de dextrano. [Adim.]. PR: Fracción masa de dextrano en fase rica de dextrano. [Adim.]. entonces el balance de masa total del sistema es: M = ME + MR el balance de PEG es: (6.17)

$.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

247

MqM = MEqE + MRqR

(6.18)

combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:

R

qE - qM

La diferencia de fracciones masa de la ecuación anterior puede encontrarse gráficamente en la Figura 6.2. Asimismo por triángulos semejantes se puede demostrar que:

= BC
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos. Cuando la densidad de las fases es muy próxima, la relación de volúmenes de las fases está dada por:

f = R BC

(6.21)

donde E y R son los volúmenes de la fase superior e inferior, respectivamente. Comportamiento de las Fases El comportamiento de un sistema polímero A-polímero B-agua, depende de las interacciones entre las moléculas presentes. Estas interacciones pueden ser puentes de hidrógeno, fuerzas de van der Waals o iónicas, interacciones dipolo-dipolo e interacciones hidrofóbicas. En un sistema pueden presentarse simultáneamente varios tipos de estas interacciones dependiendo del tipo de polímeros que formen el sistema. Los polímeros que se utilizan para los SDFA se caracterizan por su capacidad para formar puentes de hidrógeno con el agua, de tal manera que las interacciones polímero A- polímero B están en competencia con las interacciones polímero A-agua, polímero B-agua. Si las interacciones polímero-agua son más fuertes que las interacciones polímeropolímero, entonces estas últimas son menos frecuentes. Entonces se for-

23) . Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento teórico de la partición o distribución de las proteínas en los sistemas de dos fases acuosas a partir de considerar una serie de factores que afectan la partición de este tipo de soluto en el equilibrio. El criterio de equilibrio puede ser expresado también en términos de los potenciales químicos //.de los componentes como: ¿ = 1.~ (6.248 CAPÍTULO 6. pH.. Factores que Afectan al Coeficiente de Partición Los estudios empíricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han mostrado que la partición de proteínas es una función compleja que depende de factores tales como: hidrofobicidad. EXTRACCIÓN man regiones en cada uno de los polímeros que están estadísticamente excluidas de interaccionar.. Un estado de equilibrio se caracteriza por presentar energía de Gibss mínima a una temperatura. concentración del buffer. bioespecificidad de la proteína. En un sistema de dos fases acuosas la separación de fases ocurre en aquellas mezclas cuya energía de Gibss es menor cuando el sistema existe como dos fases que cuando permanece como una. temperatura y concentración de la proteína (Baskir et a/. En el caso de los sistemas polímero-sal-agua la segregación de las fases se puede deber al grado de hidratación del grupo éter del PEG. 1989). Este efecto de regiones excluidas de los polímeros produce la separación de fases en la mayoría de los sistemas de dos fases acuosas polímero-polímero.TV (6. fuerza iónica. . y N es el número total de componentes.22) donde la prima (') y la doble prima ("). Los polímeros que se repelen debido a este efecto se denominan polímeros incompatibles. presión y composición dadas. En general la partición de proteínas en sistemas de dos fases está definida por el coeficiente de partición ~ K.. conformación molecular. tamaño molecular.2. electroquímica. representan la fase superior y la fase inferior respectivamente.

2.3).50) misma que se puede escribir como: In Kp = ln K° + In Kelq + In Kh¡ + In Kbioe + In Ktam + ln Kconf (6.polímero. Las moléculas de peso molecular muy grande como el ADN y los virus se reparten casi por completo en una sola fase. ¿am. tamaño y conformación. se distribuyen entre la interfase y una de las fases o pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et a/. tiene influencia sobre el reparto del biomaterial debido a que altera la composición de las fases y cambia el número de interacciones proteína . éste se puede expresar como el producto de varias contribuciones: Kp = K° • Kdq • Khf • Kbioe • Kíam • Kconf (6.25) A continuación se describe el efecto específico de algunos de estos parámetros sobre el fenómeno de partición en dos fases acuosas (Figura 6. El coeficiente de partición de una proteína en un sistema dextrano/polietilen-glicol se incrementará si el peso molecular del polietilen- . y conf. bioe.6.4). de tal manera que las proteínas grandes tienden a repartirse menos uniformemente que las proteínas pequeñas (Figura 6.El peso molecular de los polímeros utilizados en los sistemas de dos fases.. Con las partículas más grandes la partición no es tan uniforme. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 249 donde [P]i y [P]2 son las concentraciones de soluto en este caso proteína en las fases 1 y 2.24) donde los subíndices: elq. indican las contribuciones que sobre el coeficiente de partición tienen las propiedades electroquímicas. hidrofóbicas. Debido a la dependencia del coeficiente de partición Kp de los factores arriba mencionados. /i/. Esta ecuación es equivalente a la ecuación (6. 1989). K° incluye otros factores tales como la solvatación del soluto en las fases. de bioespecificidad. Tamaño de las Biomoléculas. entre el soluto y los polímeros que forman las fases.4). Sin embargo.. las partículas extremadamente grandes como las células.Las moléculas pequeñas como los aminoácidos se distribuyen uniformemente entre las fases. Es útil expresar el coeficiente de partición en la forma logarítmica de la ecuación (6. respectivamente. Peso Molecular de los Polímeros. respectivamente.

Disminuir el número de cadenas laterales carboxilo. Incrementar los residuos hidrofóbicos 2. Incrementar el pH arriba del Pl 2. 3. EXTRACCIÓN Características del Sistema: 1. Disminuir el número de cadenas laterales amino. 3.3: Factores que afectan al coeficiente de partición. Reducir el peso molecular del PEG. Incrementar el número de cadenas laterales amino. Reducir el peso molecular del Dextrano. Se incrementa Kp Disminuye Kp 1. 2. 1991. PEG 1. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Figura 6. Disminuir el pH del sistema abajo del Pl 3. 4. . 2. Incrementar el peso molecular del PEG 1. Promover interacciones específicas. Disminuir los residuos hidrofóbicos. Incrementar el peso molecular del Dextrano.250 CAPÍTULO 6. Todos los derechos reservados. Características de la Proteína de interés. 3. Adaptada de: Huddleston ti a/. Copyright ©1991. Incrementar el número de cadenas laterales carboxilo.

1989.6. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.05 50 PMxIO" Figura 6. Fuente: Baskir.1 0.2.4: Efecto del peso molecular de las biomoléculas en el coeficiente de partición de una enzima. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 251 20Ovalbumina 1. reservados. Copyright ©1989.0- a-Amilasa (bactarial) ABS üsozima (pollo y pavo) Papaína Tripsina a-Quimiotrípsina Transferrina (humana) ft • Galactosidasa (d* EcoiiVM y WL) 0. Todos los derechos .

1989. Las proteínas con peso molecular elevado son más influenciadas por cambios en el peso molecular de los polímeros que las de peso molecular bajo. Cuando la proteína está en su pH isoeléctrico. Fuente: Baskir et a/.500 EXTRACCIÓN 0.5: Efecto del peso molecular de los polímeros en el coeficiente de partición. Estos grupos generalmente tienen diferentes valores de pK. la proteína incrementa su carga negativa y/o reduce su carga positiva. glicol se reduce o el peso molecular del dextrano se incrementa. Consecuentemente. Copyright ©1989. 1990). como se muestra en la Figura 6.5 . la. pueden utilizarse polímeros de diferente peso molecular para optimizar la separación de proteínas de diferente tamaño (Albertsson et al. Inversamente.pH.5 : Composición del Sistema 12 % de Oxido de Polietilen Glicol ( OPE ) 1 X de Dextrano ( Dx ) T. Carga de la Protema.Muchas proteínas y enzimas contienen un gran número de grupos cargados o que pueden cargarse en solución variando el.. 10000 20000 30000 40000 Peso Molecular del OPE Figura 6.252 CAPÍTULO 6. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechos reservados. suma de todas las . la partición de la proteína decrecerá si el peso molecular del polietilen-glicol se incrementa o el peso molecular del dextrano se reduce.5. 1. Cuando el pH de la solución cambia desde valores ácidos a básicos.

a altas concentraciones de proteína es posible que la concentración afecte el coeficiente de partición ya que pueden alterarse significativamente las propiedades del sistema. ésta no afecta significativamente al coeficiente de partición. Modelos para el Coeficiente de Partición en Sistemas de Dos Fases Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir el coeficiente de partición en un sistema dado. Concentración de la Proteína. El pH de la Solución... Las proteínas pueden inclusive formar fases separadas si su concentración es suficientemente alta.El primer modelo sobre la partición de partículas en sistemas de dos fases acuosas fue propuesto por Bronsted (Baskir et a/.6. Esta diferencia de potencial resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la partición de las biomoléculas cargadas . los cambios en el pH pueden inducir también cambios conformacionales en la estructura de la proteína que alteran su partición..2. Con frecuencia se observa que cuando se agregan sales a un sistema de dos fases en concentraciones entre 100 y 200 mM.1989) . FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 253 cargas es cero. de los cuales se presentan tres a continuación.Si la concentración de la proteína permanece baja (un orden de magnitud más baja que la concentración del polímero). Esta relación es: Kp = exp donde: (6.26) . quien desarrolló una relación aproximada para describir el efecto del tamaño de la partícula sobre el coeficiente de partición. Sin embargo.Además de los efectos del pH mencionados en el párrafo anterior. se crea una distribución de diferencia de potencial entre las fases. En todos los demás pH's la proteína tiene una carga neta. Modelo Empírico de Bronsted.

a. . 7: Energía superficial de la partícula en una fase dada. la energía de superficie. /c: Constante de Boltzmann T: Temperatura absoluta.: Actividad. N0: Número de Avogadro.27) donde: /¿?: Potencial químico en el estado estándar. A: Constante que expresa tanto las características de las fases como las de la partícula que se particiona.Los modelos termodinámicos para determinar el coeficiente de partición toman en consideración la influencia de varios factores como la carga. También incluye la diferencia de potencial entre las fases. (6. La ecuación (6. hidrofobicidad de la partícula y composición iónica del sistema. A: Área superficial de la partícula. /z. J-: Constante de Faraday.26) muestra que tan sensible puede ser el coeficiente de partición al tamaño de la partícula. el área y la carga. EXTRACCIÓN M: Peso molecular de la partícula que se particiona. El potencial químico se expresa como una función de factores relacionados con la partícula tales como: la concentración.254 CAPÍTULO 6. (Baskir et al 1989). Zii Carga total sobre la partícula.. = ^ -f KT In di -f /^7 -f 2¿. pero no considera la influencia de otros factores sobre el mismo coeficiente. [M/mol]. Modelos Termo dinámicos Generales. $: Potencial eléctrico en la fase.

En el equilibrio los potenciales químicos de las fases son iguales y la ecuación (6.29) en la ecuación anterior la diferencia en los potenciales químicos del estado estándar es una constante.. Este es un modelo en el cual los potenciales químicos se expresan en términos de la molalidad de los componentes del sistema.6. Modelo de Edmond y Ogston. T} 2 .-)i (/Oí o como: . de tal manera que en una serie de experientos con una misma partícula los cambios en KÍ son resultado de cambios en la energía superficial de la partícula A7.? + «T In ^f + ¿( A7) + '" ~ (6-28) donde A/¿? es la diferencia de potenciales químicos en los estados estándar en las dos fases. En el caso de una solución infinitamente diluida (cuando no hay interacciones partícula-partícula). A7 es la diferencia en la energía superficial de la partícula en las dos fases y A ^ es la diferencia en la distribución de potencial entre las dos fases.A . En este modelo los potenciales químicos de los: solutos 2 y 3 (polímeros) se escriben como: . . la carga de la partícula Z{ y de la diferencia de potencial entre las dos fases A^.Otro modelo que puede ser usado para describir el comportamiento de un sistema de dos fases acuosas.2.27) puede expresarse como: TI '2 A O . la fugacidad se aproxima a la unidad.28) puede ser escrita como: z KÍ = A/¿° + A( A 7 ) + ' ° (6. de tal manera que la ecuación (6.A¿¿. es el coeficiente de fugacidad para la partícula y m t es la concentración molal de la partícula en la fase. -\ (m..-f /C-Tln —— -f A(¿\~f). 1989). FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN En la ecuación anterior la actividad se puede expresar como: 255 donde /.KT In KÍ = A/. -«T In -—— . fue propuesto por Edmond y Ogston (Clark.

Esta interacción se lleva a cabo en el solvente agua.2.32) donde MI es el peso molecular del solvente (agua). m¿ es la concentración molal de soluto. EXTRACCIÓN (¿2 = (¿2 «2. dos moléculas del polímero 3 y una molécula del polímero 2 con una molécula del polímero 3. lo cual puede realizarse sólo por gravedad o por medio de una fuerza centrífuga.7).31) donde R es la constante de los gases ideales.3^2) (6.3 son los coeficientes que caracterizan la interacción de dos moléculas del polímero 2. Los parámetros de interacción a^j de este modelo pueden ser determinados ajustando las ecuaciones a datos experimentales de equilibrio. De acuerdo a la forma en que estos equipos pueden ser operados se dividen en extractores intermitentes y extractores continuos. //° es el potencial químico para el componente i en el estado estándar. . 6. A su vez los equipos de operación continua pueden ser de contacto por etapas o de contacto diferencial. o por mediciones termodinámicas independientes en los sistemas binarios.2^2 + «2.3 y «2. respectivamente.256 CAPÍTULO 6.30) (6.3^3) RT(ln m3 + a3)3m3 + «2. 02.3 Equipo de Extracción Existen diferentes tipos de equipos para realizar una operación de extracción (Tabla 6. Otra característica de los equipos de extracción es la forma en que las fases se separan una vez realizada la extracción. El potencial químico del agua se obtiene aplicando la ecuación de GibbsDuhem. y está dado por: RTMl 1000(m 2 + m3 -f (6. «3. Cuando los parámetros de interacción son conocidos las ecuaciones de Edmond y Ogston pueden ser usadas para describir el comportamiento de las fases.

En esta sección se presentan algunos equipos de extracción agrupándolos en: • Extractores intermitentes • Extractores continuos 6.7: Clasificación y ejemplos de equipos de extracción.1 Equipo de Extracción Intermitente En la extracción itermitente o de una etapa la solución que contiene el soluto de interés se mezcla con el solvente y posteriormente las fases se separan.6(b) se muestra . En la Figura 6. Separación de las fases por: Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Centrifuga Tamaño de gotas Agitación Agitación Gravedad Gravedad Agitación Agitación Agitación Pulsos Deflectores Westfalia y Robatel Podbielniak y Alfa Laval Intermitente Equipo Continuo Etapas múltiples Columnas de contacto diferencial M-S 257 M-S* Aspersor Platos perforados Lecho empacado Aspersión tipo Rushton-Oldshue Discos giratorios Tipo Karr platos y empacadas * M-S Mezclador-Sedimentador En los equipos de extracción el control del tamaño de las gotas de la fase dispersa puede realizarse por medio de agitación mecánica o por pulsaciones.3.6. En la Figura 6. La fase acuosa y la fase orgánica se alimentan al mezclador y las fases mezcladas se separan en el sedimentador.6(a) se muestra un mezclador sedimentador típico donde el mezclador o agitador está completamente separado del sedimentador.3.una combinación . En la Figura 6.6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extracción. EQUIPO DE EXTRACCIÓN Tabla 6.

Este dependerá del flujo a ser procesado y de las propiedades físicas de ambos líquidos. En el diseño de equipo de etapas múltiples hay un compromiso: Si los dos líquidos son mezclados intensamente pueden formar gotas pequeñas las cuales permitirán una extracción rápida pero una separación lenta.Equipos continuos de etapas múltiples.Equipos continuos de contacto diferencial Equipo de Extracción de Etapas Múltiples El equipo utilizado en extracción de etapas múltiples varía ampliamente. Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extracción en etapas múltiples o a contracorriente. En la Figura 6. . pero todas las modalidades involucran extracciones intermitentes repetidas.7 se muestra un sistema de este tipo donde el flujo de alimentación y solvente se suministran a contracorriente en una serie de mezcladores sedimentadores. Cuando la extracción involucra reacciones químicas el tiempo de contacto puede ser muy importante. sin embargo. las gotas no deben ser tan pequeñas como para que el tiempo de sedimentación o coalescencia subsecuente resulte demasiado largo.258 CAPÍTULO 6. En general una de las fases se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas y debe existir un tiempo de contacto suficiente para que se realice la extracción. Las gotas pequeñas producen áreas interfaciales grandes que provocan una extracción más rápida. 6. si los líquidos son mezclados ligeramente se formarán gotas .2 Equipo de Extracción Continua Esencialmente existen dos tipos de equipos para realizar extracciones en forma continua: . Para obtener una transferencia de masa eficiente con frecuencia se usa un mezclador mecánico que proporciona un contacto íntimo entre las dos fases líquidas.3. El tamaño del mezclador debe dimensionarse para proporcionar suficiente agitación y tiempo de contacto para lograr el equilibrio entre las fases. EXTRACCIÓN de mezclador-sedimentador.

mezclador sedimentador separado. X 0 En . mezclador sedimentador integrado. XA E0 .3.jfc E0 . b). x O±D b) Figura 6. x a E. . X.6: Esquema de equipos utilizados en la extracción intermitente: a).6. EQUIPO DE EXTRACCIÓN 259 . ay a) o R.

Tanto el líquido pesado como el líquido ligero se pueden introducir dentro de la columna como la fase dispersa.apa 1 Etapa 2 Etapa 3 E. grandes. Algunos extractores de etapas múltiples como los Westfalia y los Robatel emplean fuerzas centrífugas para separar las fases durante la extracción.t. Las columnas de aspersión presentan por regla general bajas eficiencias debido al poco . habrá menos área de contacto.x ^AT i JL ¿L— U>~ L] ^AJ 1 cJo _ ^AJ 1 A ^ J\ C*0 •A _ñ \ t 'j L] \ \ . El líquido ligero se coliga o junta en la parte superior y sale. ¥ . \ ) L* Figura 6. En la Figura 6. EXTRACCIÓN Et. pero la separación más rápida. mismo que lo dispersa hacía arriba en forma de gotas muy pequeñas. En algunos casos el líquido pesado se dispersa hacía abajo sobre la fase ligera continua que se va elevando. proporcionan contactos diferenciales donde el mezclado y la sedimentación se suceden en forma continua y simultanea. la extracción es lenta. El líquido ligero entra a través de un distribuidor de tovera en el fondo. Equipo de Extracción Diferencial Las columnas de extracción empacadas y las de aspersión.8 se puede observar que en una columna de aspersión el líquido pesado entra por la parte superior y llena la columna formando la fase continua y sale por el fondo.7: Mezcladores sedimentadores conectados a contracorriente en etapas múltiples.t.260 CAPÍTULO 6.

Las gotas dispersadas se juntan debajo de cada plato y vuelven .9 se presentan esquemas de tres diferentes tipos de columnas de extracción. Las columnas empacadas tienen una eficiencia mayor que las de aspersión.EQUIPO DE EXTRACCIÓN salida del líquido ligero 261 coalescenda de la ¡nterfase líquido pesado gotas elevándose líquido ligero tobera de rociado Figura 6. Estos empaques promueven la unión de las gotas y la redispersión de las mismas a intervalos frecuentes a lo largo de la columna. El esquema de la Figura 6. Evidentemente en este tipo de columnas se pierde capacidad debido al espacio que ocupa el empaque. El contacto entre las fases puede mejorarse proporcionando una superficie mayor. sin embargo esto se ve compensado por la gran mejoría que se tiene en la transferencia de masa. mezclado y como consecuencia su uso es reducido en la industria.8: Columna de extracción por aspersión. En la Figura 6.10 muestra una torre de extracción de platos perforados donde se dispersan las gotas del líquido ligero que tienden a elevarse. misma que puede incrementarse aplicando una pulsación oscilante a los fluidos contenidos en la columna.10) proporciona un método seguro y eficiente en los procesos de extracción líquido-líquido. Esta superficie es proporcionada al rellenar la columna con un empaque como los anillos de Rasching o las sillas de Berl. La columna de platos perforados (Figura 6.

x _ñ E. EXTRACCIÓN E.~D discos • E0. R. . x empacado ET.262 CAPÍTULOS. y Figura 6.9: Columnas de extracción: a) Lecho empacado b) Aspersión tipo Rushton-Oldshue c) Discos giratorios.

4 Diseño de Equipo de Extracción Esta sección se centra en los aspectos relevantes del diseño de de tres sistemas de interés en bioseparaciones: • Extracción intermitente. la eficiencia de separación en las columnas con platos perforados puede incrementar mediante pulsaciones que promueven la coalisión y dispersión de la fase dispersa. 6.10: Sección de una columna de extracción de platos perforados. a formarse por encima de éste al pasar a través de las perforaciones.4. • Extracción continua • Extracción fraccionaria . El líquido pesado fluye hacia abajo de los platos donde se pone en contacto con las gotas y después pasa hacia el plato inferior. Algunos equipos de extracción diferencial utilizan la fuerza centrífuga para el manejo de las fases como el extractor Podbielniak y el extractor Alfa Laval. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 263 Liquido pesado O Elevación de gotas del disolvente ligero O O O •O o _Coalescencia del disolvente Figura 6.5. Al igual que en las columnas empacadas.

El proceso de extracción en una sola etapa se presenta en la Figura 6.4. . consiste en poner en contacto íntimo la solución a tratar con el solvente de extracción y formar dos fases.Métodos Analíticos . EXTRACCIÓN Solvente E.x Figura 6. las fases deben separarse.Métodos Gráficos . Existen dos métodos para el cálculo de extractores intermitentes que dependen de la información disponible y de la complejidad de ésta. Después de este contacto y una vez que se ha alcanzado el equilibrio.1 Extracción Intermitente La extracción intermitente. El separador está incluido en la etapa debido a que la extracción del soluto persite en tanto las dos fases se encuentren en contacto y hasta que se alcance el equilibrio. 6. también llamada extracción de una sola etapa.11..11: Esquema de un proceso de extracción en una sola etapa. En este proceso es conveniente que el contacto se realice con un alto grado de turbulencia para obtener altas velocidades de transferencia de masa.264 CAPÍTULO 6.

x0 es la concentración inicial de soluto en el solvente < extracción y generalmente es igual cero. y K es la constante d equilibrio. La segunda relación es un balance de masa que indica que en ( proceso de extracción: el soluto inicial = al soluto final. Como generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúar hasta alcanzar el equilibrio. Cuando la relación de equilibrio es lineal se tiene: x = Ky (6.6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN Método Analítico: Extractores Intermitentes 265 El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. x es la concentración de solu en el extracto al final de la extracción . La ecuación (6. Para encontrar una expresión para calcular la concentración al fin de la extracción o de equilibrio. El valor para y se obtiene manera similar.34). El balance de masa para el soluto. se sustituye el valor de x dado por ecuación (6.3< donde y¿ es la concentración de soluto en la alimentación o fa: pesada. En esta ecuación se supone qi E y R son constantes.33) en la ecuación (6.33 donde x es la concentración del soluto en la fase ligera E] y es 1 concentración del soluto en la fase pesada /?. esto es.12 es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (6. referido a la Figura 6.4. Esta combinación de ecuaciones conduce a: . la coi centración del soluto que permanece en la alimentación después de extracción. la concentración final del soluto puede sei obtenida en algunos casos en forma analítica mediante el empleo de doí ecuaciones. La primera de ellas es una relación de equilibrio para la: soluciones que intervienen en el proceso y la segunda es un balance d< masa para el soluto. y es la concentración de soluto en el refinado.33) es la ecuación de una recta que pasa po el origen.

266

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

. X0

E. x

«o . XA

ay

Figura 6.12: Esquema para el balance de masa del soluto en extracción intermitente.

x=

Ky,

(6.35)

y=

1 +F

(6.36)

donde F es el factor de extracción y está dado por:
171

KE
R

(6.37)

El factor de extracción reúne dos factores de diseño importantes, la constante de equilibrio y la relación de las fases. Es posible desarrollar una expresión para calcular el rendimiento de la operación o la fración extraída p, definida por:
p=
Ex

(6.38)

misma que puede ser escrita en términos del factor de extracción para dar:
F \ +F

(6.39)

6A. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

267

Consecuentemente la fracción de producto no recuperado es igual a uno menos la fracción extraída. Las expresiones desarrolladas son diferentes en el caso que la extracción se realice de la fase pesada a la ligera. Ejemplo 6.3.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldo de fermentación. En la recuperación de productos de fermentación con frecuencia se emplean extractores agitados. En este caso se ponen en contacto 10 litros de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/1 del producto que quiere extraerse con 1 litro de un solvente orgánico. Si el coeficiente de distribución es 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcule la fracción extraída de producto. Solución: El esquema que representa el sistema de extracción es similar al de la Figura 6.12. El balance de masa para el soluto en este sistema es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex como inicialmente en el solvente de extracción la concentración del producto es cero, el balance de masa del soluto queda como: RoVA = Ry + Ex (a)

combinando la ecuación anterior con la ecuación de equilibrio x = Ky y suponiendo R0 = /?, se obtiene la concentración del soluto en el solvente de extracción en el equilibrio. Esta concentración está dada por:

X

=

KyA

con

F=

KE

sustituyendo los datos del problema se tiene:
=

R

_ 10 /

la concentración x es:

268

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

*AS

T ~™~—

KyA = 20(10 g/l) - 66.6 g/l 1 + F 1+2

y la fracción extraída p es:

Ex P = Ry A

F 1 + F

1+2

= 0.666

después de la extracción el porcentaje del producto en el extracto es de 66.6% y en el refinado es de 33.3%. Si se desea extraer casi todo el producto se deberán realizar más etapas de contacto entre las fases 0 aumentar el volumen del solvente de extracción. Ejemplo 6.4.- Sistema de dos fases acuosas para separar virus. Se emplea un sistema de extracción de dos fases acuosas para separar y concentrar virus de un caldo biológico. El volumen inicial V0 de la solución que contiene los virus es de 3 x 10~3 m3 y el volumen inicial V de la solución de polímeros es de 1 x 10~4 m3. El coeficiente de partición Kp es de 4 x 10~4. Una vez que se mezclan ambas soluciones el volumen R de la fase pesada formada es de 5 x 10~5 m3. a).- Estimar las veces que se concentró la solución o grado de concentración obtenido. b).- El rendimiento de la operación. Solución: a).- El grado de concentración GC puede ser expresado como:

GC =

y
C0

donde C0 es la concentración de partículas en la solución original. Mediante un balance de virus se puede obtener la siguiente expresión:

5.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN combinando ambas expresiones se obtiene:
V y ° xE + yR

269

GC = GC =
donde:
F=

V0

R

Para utilizar la ecuación anterior es necesario calcular primero el valor de E mediante un balance,

entonces,

E = (3 x 1(T3 + 1 x 10~4 - 5 x 10~5) m5 E = 3.05 x 10~3 m3
y el grado de concentración está dado por:
3 x 10~3 m3
ín i n *> 1\ )x(3.05xlO(5 x 10~5 m 3 ) (\ + i 1 . (4xlO- -;v;1U 5—3 - 771 ^ ' \ OXn
4 3

GC =

m

GC = 58.57 b).- El rendimiento de la operación puede expresarse como:

y R p= CV 0 0
combinando la expresión anterior con la del balance de virus se obtiene:

270

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

P = xE + yR
y en términos del grado de concentración:

yR

R
sustituyendo valores,

p = (58.57) 0.976 97.6%

5 x 1Q-5 m3 3 x 10~3 m3

Método Gráfico: Extractores Intermitentes En la solución de problemas de extracción intermitente se emplean con mucha frecuencia métodos gráficos. Estos métodos son útiles en situaciones en las que el equilibrio es complejo y no se ajusta a una relación lineal como la ecuación (6.33). Al igual que el método analítico el método gráfico también depende de dos ecuaciones básicas: una relativa al equilibrio y otra al balance de masa del soluto. La relación de equilibrio establece que la concentración x del soluto en el solvente de extracción después de que las fases se ponen en contacto, es una función que depende de la concentración y del soluto en el refinado,
=
f(y)
(6.40)

Atendiendo al esquema de la Figura 6.12 la ecuación para el balance de masa del soluto es:

R0yA = Ry + Ex
consecuentemente:

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

271

línea de equilibrio -

(*.y)

(* - " o )

Fracción mol de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.13: Extracción intermitente: En la intersección de la línea de operación con la de equilibrio se obtienen las concentraciones que se alcanzan al final de la operación.

(6.41) La ecuación anterior es la de una recta llamada línea de operación cuya pendiente es m = —R/E y cuya ordenada al origen es b — Ry¿/ E Si se grafican los datos de equilibrio (ya sea en forma de una ecuación o de datos tabulados) y la línea de operación como se muestra en la Figura 6.13, en la intersección de las curvas se obtienen los valores de equilibrio y y x.
Ejemplo 6.5.- Extracción de un aminoácido.

La relación de equilibrio entre el tolueno y el agua pura en la extracción de un aminoácido no esencial está dada por:

272

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

En = 4.7 0.006 M

E =4.7 I x =

Ro-1

yA=o

R =1 I

Figura 6.14: Esquema de la extracción de un aminoácido en un sistema intermitente tolueno- agua. Ejemplo 6.5.

*> = (0.001 Estimar la fracción de aminoácido extraída al poner en contacto 4.7 litros de solución de tolueno, con una concentración 0.006 M del aminoácido, con un litro de agua. Solución: El esquema del proceso se presenta en la Figura 6.14: El balance de masa para el aminoácido es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (a)

de tal manera que la expresión de linea de operación está dada por:

y = ~^(x0 - x)
sustituyendo valores se obtiene:
y

p

=4.7(0.006 - x

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

273

0.012 -

(0.006 . 0)

Figura 6.15: Curva de equilibrio y línea de operación para el sistema tolueno- agua. Ejemplo 6.5. En la Figura 6.15 se muestra la curva de equilibrio y la línea de operación para este sistema. En la intersección de estas dos líneas se puede encontrar la concentración y de soluto al final de la extracción. Esta concentración en el equilibrio es:

y = 0.012
la fracción extraída p es:

Ex0 _ (LO /) (0.012 2^ P = ~ (4.7 /) (0.006 2^ P = 0.43

P

=

Ry

6.4.2

Extracción Continua

El tratamiento del diseño de extractores continuos puede dividirse en : - Extracción en etapas múltiples - Extracción diferencial

274

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

E, xn

E. xn-i

E.x2

E.x,

En. Xo

n-1
R.y 3

2
R.y 2

1
R.y,

\

Figura 6.16: Esquema de un proceso de extracción a contracorriente en etapas múltiples.

Extracción en Etapas Múltiples
En la extracción intermitente se usa una sola etapa para transferir el soluto de la fase acuosa a la fase ligera. Para transferir más soluto puede repetirse el contacto mezclando la corriente de salida de refinado con disolvente nuevo. De esta manera se logra un mayor porcentaje de extracción del soluto, sin embargo este procedimiento emplea una mayor cantidad de solvente y da lugar a la formación de corrientes muy diluidas. Para emplear menos solvente y obtener una corriente de extracto de salida más concentrada, generalmente se usa un contacto a contracorriente en etapas múltiples como el que se muestra en la Figura 6.16. En este esquema cada etapa está identificada por un número, iniciando con el número 1 a la derecha. La solución pesada R0 (alimentación) entra a la cascada por el lado izquierdo y el solvente puro o fase ligera E0 entra por la derecha. Las concentraciones con las que sale cada uno de los líquidos de cada etapa son las correspondientes al equilibrio. Por ejemplo, el líquido ligero que deja la primera etapa tiene una concentración de equilibrio Xi. El líquido pesado que deja la segunda etapa tiene una concentración de equilibrio y 2 Dos métodos son comúnmente utilizados para analizar este tipo de operaciones: - El método Analítico

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN - El método Gráfico

275

Método Analítico: Extractores Continuos Multietapas.El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. Debido a que generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúan hasta alcanzar el equilibrio, la concentración final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma analítica, mediante el empleo de dos ecuaciones: una relación de equilibrio y un balance de masa. Cuando el equilibrio puede ser expresado por una relación lineal para la etapa n se tiene: xn = Kyn (6.42)

El balance de masa para el soluto debe realizarse en cada etapa. De acuerdo a la Figura 6.16 dicho balance para la primera etapa es: Ry2 + E0x0 = Ryi + EXl (6.43)

Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las de equilibrio y el solvente está libre de soluto x0 = O, las ecuaciones (6.42) y (6.43) se combinan para obtener: 2/2 = (F + l)i/i (6.44)

como se mencionó anteriormente F — EK/ R es el factor de extracción. Para la segunda etapa el balance de masa es: Ry3 + Exl = Ry2 + Ex¿ (6.45)

y de acuerdo a la relación de equilibrio, x\ = Ky\ y x 2 = K y<¿ de tal manera que:

combinando la ecuación anterior con la ecuación (6.44) se obtiene:

276

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

2/3 = (1 -f F + F2)yi

(6.46)

mediante este procedimiento se puede obtener una expresión para el cálculo de la concentración de soluto en la fase pesada a la salida en función de la concentración a la entrada, el factor de extracción y el número de etapas, de la forma: j/n+i - (1 + F + F2 + ... -f F n ) yi que también puede escribirse como: (6.48) La ecuación (6.48) puede ser utilizada de varias formas: - Si se conoce la concentración de la alimentación yn+i, el factor de extracción F y el número de etapas n, entonces se puede calcular la concentración del soluto a la salida t/i, y por lo tanto la fracción extraída. - Si se conoce la concentración de soluto a la entrada en la corriente de alimentación y la concentración deseada a la salida y el factor de extracción F, entonces se puede calcular el número de etapas necesarias para el proceso de extracción. - Si se conoce la fracción que no es extraída yi/yn+i y el número de etapas, se puede conocer el factor de extracción F; esto permite seleccionar flujos adecuados para E y R. El cálculo de las concentraciones de salida permite estimar el rendimiento o la fracción extraída p, que en este caso está dado por : (6.47)

P

Exn

Ryn+i

combinando la ecuación anterior con las ecuaciones (6.42) y (6.48),

De la ecuación (6.49) se desprende que cuando F es muy grande, p se aproxima a 1. Por otro lado, cuando F tiende a cero también p

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE

EXTRACCIÓN

277

tiende a cero. En el caso particular cuando F es igual a la unidad, se cumple que p = n/(n + 1). Ejemplo 6.6.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldb de fermentación en una extracción por etapas. En una operación de extracción se ponen en contacto 10 l/rnin de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/l del producto que se desea extraer, con un flujo de 1 l/min de un solvente orgánico. Si la constante de equilibrio es de 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcular la fracción extraída de producto en un sistema de extracción de tres etapas.

Solución: De acuerdo a los datos yn+i = 10 g/l; K = 20; R = 10 l/min] E = 1 l/min y n = 3. La fracción extraída puede ser obtenida mediante la ecuación (6.49} y es necesario calcular primero el factor de extracción, entonces:

F =
P —

EK
v

(1 min' (20) -4-) v /

10-4mtn
F = 2

la fracción extraída o recuperada en el solvente de extracción es:

F(Fn - 1)
P =
Fn+l
3

_

1

2(2 - 1) 24 - 1 0.93

Otro camino para resolver el problema no tan directamente, consist en utilizar la ecuación (6.48) para calcular la concentración de soluto

278

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

la salida en el refinado y\ . Conociendo este valor se puede encontrar la fracción no extraída y la fracción extraída. Se tiene entonces:

10

n

g

7-

la concentración de salida de soluto en el refinado es:
10 9/1
15

9/1

/7

la fracción no extraída es igual a la concentracón y\ dividida entre concentración de soluto en la alimentación, de tal manera que:
0.66 g/l —-—77- = 0.066 10 g/l
., , fracción no extraída

y la fracción extraída p es: p = 1 - 0.066 = 0.93 Ejemplo 6.7.- Extracción continua de penicilina.Se extrae penicilina de un caldo de fermentación utilizando isoamilacetato como solvente orgánico en un arreglo tipo cascada a contracorriente. Los flujos de la fase orgánica y de la fase acuosa son E — 10 l/min y R = 100 l/min, respectivamente. El coeficiente de partición de la penicilina a pH=3 es K = 50. Si la concentración de penicilina en la alimentación es de 20 g/l, calcular el número de etapas necesarias para obtener una concentración de 0.1 g/l de penicilina en la corriente de salida. Solución: El número de etapas puede ser calculado mediante la ecuación (6.48) y para lo cual primero es necesario calcular el factor de extracción,

.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

279

o

KE

(50)(10 l/m) 100 l/min F = 5
F

el número de etapas puede obtenerse mediante la expresión: /Fn+l

2/1
20 f

V F
5 n+l

_

0.1 f 5-1 n = 3.15 n = 4

Método Gráfico: Extracción continua de Etapas Múltiples.Al igual que en la extracción intermitente, los métodos gráficos son muy usados en ingeniería en la solución de problemas de extracción poi etapas. Se requieren dos tipos básicos de relaciones: una relación d( equilibrio y un balance de masa. La relación de equilibrio se expresa como:
n

= f(yn)

(6.50;

El balance de masa global para el soluto, es decir en todo el equipo es de la forma:
f H = -j¡(yn+i
R

(6.51

las ecuaciones (6.50) y (6.51) pueden granearse sobre el mismo plan< coordenado para obtener las líneas de equilibrio y operación, respecti vamente. En la Figura 6.17 se muestra una gráfica de este tipo. Cuando interesa calcular del número de etapas n requeridas en un operación de extracción, el procedimiento es el siguiente (Figura 6.17"

280

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Línea de operación Línea de equilibrio

8 2
0)

X)

Alimentación

i

II

o 5

<yA)

Concentración de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.17: Análisis gráfico de una extracción a contracorriente en etapas múltiples.

Extracción por etapas de Actinomicina D. Calcular el número de etapas necesarias para lograr el 99% de cuperación del antibiótico. El flujo de la fase acuc R es de 450 l/h y el de la fase orgánica E es de 37 l/h. xn] En este punto la concentración del soluto en el refinado iguala excede la concentración en la alimentación.En la intersección de la linea vertical con la curva de equilibrio se localiza el punto (yi.Para calcular gráficamente el número de eta es necesario obtener una expresión para la curva de operación media . mediante la ecuación (6. .Se repite el procedimiento anterior hasta alcanzar el punto (y n +i. La constante de equilibrio K de este sistema tiene un val de 57 al pH 3. se traza una línea vertical en 7/1. Este punto representa la intersección de la línea de operación con el eje de las abscisas.En la intersección de la linea horizontal con la línea de operación s localiza el punto (1/2. El número de etapas se determina contando el número de escalón* trazados.. x\] de la línea de equilibrio. x\].Se localiza sobre la gráfica el punto (y1? x = 0). ..8. .4. Ejemplo 6.Una vez localizado el punto (y\. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 281 . Solución: Solución gráfica.6.5 al que se realiza la extracción. .Se calcula la concentración de soluto en la corriente de la alimentación en la parte final de la cascada t/i. utilizando butil-acetato cor solvente.En x\ se traza una linea horizontal.51). . Se desea extraer Actinomicina D de un caldo de fermentación q contiene 260 mg/l de este antibiótico. . x — 0).

En este caso es necesario utilizar dos escalas debido al rango tan amplio de variación de las concentraciones. para lo cual es necesario calcular primero la concentración de soluto a la salida en el refinado. Una vez obtenidas las curvas se puede estimar el número de etapas mediante el proceso de trazado de escalones sobre la curva.282 CAPÍTULO 6.01 y n+1 \ F . Las curvas resultantes se muestran en la Figura 6. Se puede estimar que el proceso de extracción se completa en tres etapas.01 x (260 mg/l) = 2.48).01 yn+] = (4.69 . 0) y la pendiente 12.18. EXTRACCIÓN \ la ecuación (6.2 yn+l .69)" +1 .Dado que la relación de equilibrio es lineal.1 4.2.62 [mg/l] la relación de equilibrio para este caso está dada por: Para realizar el cálculo gráfico se traza la curva de equilibrio utilizando el punto (O.y\) = 12.6. Se traza la línea de operación a partir del punto (2.. el cálculo también puede realizarse mediante el método analítico por medio de la ecuación (6. j J yi = 0.0. 0) y la pendiente de 57. Dado que se desea recuperar el 99% del soluto esta concentración es: .31.51).6 mg/l la expresión para la curva de operación es: ¡i• \ 450 xn = —(yn+i . Solución analítica.1 . de tal manera que: 2/n+i = -= r.l J y en este caso el factor de extracción es: _ (57)(37 l/h) _ ~ 450 l/h ~ de tal manera que: yn+i ^ 0.

lm«a de equilibrio b). linea de operación Figura 6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 283 a).18: Etapas requeridas en la extracción de actinomicina de Ejemplo 6.8. .6.4.

el resultado de este proceso es una extracción significativa del soluto deseado. EXTRACCIÓN rearreglando y tomando logaritmos se tiene: In370 = (n + l)ln4. y a la salida es y0.284 CAPÍTULO 6. sin embargo se considera que en el futuro jugará un papel importante en bioseparaciones.53) .Ex (6. En esta figura se puede observar que la concentración de soluto a la entrada en la fase pesada R es y^. Extracción Diferencial Cuando el contacto de la fase pesada y la fase ligera se efectúa en forma continua. Sin embargo. La primera de ellas es una relación de equilibrio similar a las utilizadas en extracción por etapas y está dada por: x = Ky* (6. El soluto se transfiere de una fase a otra a través de un contacto íntimo entre éstas.19. se dice que la extracción se realiza en forma diferencial. La concentración de soluto a la entrada en la fase ligera E es x0 = O y a la salida es XL. El balance de masa que resulta para este proceso a cualquier altura de la columna es: Ry + E(x0) = Ry0 4. Este tipo de extracción no es usado comunmente para el asilamiento de moléculas biológicas importantes. El análisis de la extracción diferencial depende de tres relaciones básicas.52) donde T/* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto x en la fase ligera. pero no se llega a alcanzar el equilibrio. en una altura dada de la columna.8 se requieren tres etapas para esta extracción lo que coincide con el resultado obtenido por el método gráfico.69 por lo tanto n = 2. La segunda relación es un balance de masa tomado en la base de la columna como se muestra en la Figura 6.

y en el volumen A A z o "o Figura 6. .19: Esquema idealizado de una columna de extracción diferencial.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 285 LT "• Xo i r Concentración x.6.

y0) (6. la ecuación (6. Este balance se realiza en un diferencial de volumen AV = AAz.rA&z (6. donde r es la velocidad de transferencia volumétrica. EXTRACCIÓN que también puede ser escrito como: /? x = —(y . La tercera relación es un balance de masa del soluto que expresa la velocidad con que éste se transfiere de la fase pesada a la fase ligera. La velocidad de transferencia de soluto de la fase R a la fase E está dada por rA Az.55) se puede escribir como: ^-.54 ).yz) .286 CAPÍTULO 6. las cuales no están en equilibrio.56) En la extracción diferencial una fase se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas.55) si se divide la ecuación anterior entre AAz y se toma el límite cuando Az —* O. El balance de masa en el diferencial de volumen se puede escribir entonces como: O .54) donde x y y son las concentraciones de soluto en la posición z. La linea de operación del proceso está dada por la expresión ( 6. dz (6.19 se muestra el esquema para el balance de masa en este diferencial de volumen y que se expresa en palabras como: Acumulación de soluto en fase R = Entrada de soluto —Salida de soluto -^-Producción — Transferencia Este balance puede ser simplificado considerando que la acumulación es nula. En la Figura 6. Debido a que no hay producción de soluto el término correspondiente también es nulo.R(y*+*z . La velocidad de transferencia r es proporcional al área superficial de las gotas por unidad de volumen. La velocidad de transferencia /• también es proporcional . y el área de contacto es un factor muy importante para lograr una extracción rápida y eficiente.

56) y (6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 287 a que tan lejos está la concentración y del equilibrio. y* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto en la fase ligera x.57) donde a es el área superficial de contacto por unidad de volumen.54).58) : dz L= R fyL __dl dy íyL kaA Jy0 y x ~K mediante la ecuación (6. La constante k tiene dimensiones de velocidad. densidad y flujo.58) está en función del diferencial dz. Esto permite calcular la longitud del extractor diferencial utilizando para ello laí ecuaciones (6.52) y (6.4. (6. Esta depende de las propiedades físicas de los fluidos en contacto tales como viscosidad. La ecuación (6.f< . .»*) . La longitud del extractor está dada por: rL L = I y de acuerdo a la ecuación (6.0. La tercera relación requerida para el análisis de la extracción diferencial se obtiene combinando las ecuaciones (6.52) se obtiene la expresión. De acuerdo a lo anterior r se puede escribir como: r = ka(y — y*) (6.57).58) Una vez obtenidas estas tres relaciones se puede describir como se relacionan entre si para obtener una ecuación de diseño. á dy (y . por lo tanto: L= R dy (y . y k es una constante de velocidad llamada coeficiente de transferencia de masa.

Separación de una mezcla racémica de leucina.y0 fyL dy dado que F = EK/R.60) La ecuación (6.my . Se utiliza una unidad de fibras huecas operando a contracorriente para separar 1-leucina de d-Ieucina bajo las siguientes condiciones: . La expresión (6. Valores grandes de NTU significan mayor dificultad en la extracción que valores pequeños.(y .59) se puede escribir como: L = (HTU}{NTU] (6.y0} entonces: L= R fyL dy y .288 de la ecuación (6. Los módulos de fibras huecas constituyen una alternativa atractiva respecto aj uso de equipos de extracción convencional debido su alta relación área/volumen (Ding et a/.. la ecuación anterior se puede escribir como: L= R F kaA(F-l) Jy0 y + JÍT (6 59) finalmente integrando se obtiene: R ka A. Ejemplo 6.54) se obtiene. 1992).60) es la base para el diseño de un proceso de extracción diferencial líquido-líquido. » * * ~ » - " ' Al término de la ecuación (6. tiene unidades de longitud y es una medida de la eficiencia del equipo.59) que aparece dentro de los paréntesis cuadrados se le llama en ingeniería "altura de una unidad de transferencia" HTU (de sus siglas en inglés). CAPÍTULO 6. El término que aparece entre llaves es una cantidad adimensional llamado "número de unidades de transferencia" NTU ( de sus siglas en inglés) que permite medir el grado de dificultad de la extracción.9. EXTRACCIÓN R ( ^ x = -j.

ExL Ryi . DISEÑO DE EQUIPO DE Fase extractóla ligera Fase acuosa Longitud de la unidad Diámetro de las fibras Número de fibras Flujo de la fase acuosa R Flujo de la fase orgánica E Coeficiente de partición K EXTRACCIÓN 289 N-n-dodecil-1-hidroxiprolina en octanol Agua (conteniendo 1-leucina y d-leucina) 64 cm 240 /¿m 96 19.y0) combinando las dos ecuaciones anteriores.331 d-leucina Los microporos de las fibras se rellenaron con gel de polivinil-alcoho de tal manera que los solutos difunden a través de los poros sin que la¡ fases se mezclen.59) para estimar el parámetro k y expresarla en términos de la recuperación p que en este caso está dad.8 cm3/h 0.97 %.4.2 cm3/h 76. si bajo las condiciones enunciadas la recuperación de d-leucin. en la fase ligera fue del 99. por la expresión: Ex¡ P = ~Ryi otra expresión necesaria es la del balance global del soluto que es: ExL = R(yL .6. Solución: Se requiere utilizar la ecuación (6. Estimar el coeficiente de transferencia de masa volumétrico ka de sistema.

que es la suma del área transversal de las 96 fibras.324 \ (64 c7/?. (96) ÍTT x (240 x 10~6 m)' l A = 4 A = 4.8 F —_ 19. -' 3 ~^ i / / i _ 0.1 ka \\ .324 el coeficiente de transferencia de masa está dado por: 10 9 cm3 /i /i 3600 5 2 2 £ _ 1 i or.0.34 x 10~2 cm2 también es necesario calcular el factor de extracción F.290 CAPÍTULO 6.)(4. para lo cual es necesario obtener primero el área de flujo A..2 2£Í _ F = 1.324 . .9997^ = 526 x 10 Un método simplificado para el diseño de columnas considera a la columna formada por un conjunto de platos teóricos o etapas ideales.331 x 76.59) puede expresarse como: L L- [kaA\{F-\ \VL(1-P) o bien como: L= ~ R ' kaA La expresión anterior permite calcular fca.9997 \ 1. R 0.43 x 10~ C77i ) 1. EXTRACCIÓN en base a lo anterior la ecuación (6.

61) 25 (fracción libre soluto). de penicilina a la entrada r (6.La fracción de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante la ecuación (6.Extracción diferencial de penicilina. de tal manera que: L = (HETP)(N) Ejemplo 6.El número de etapas teóricas de la operación. P moles de agua enicilina Conc.. b). Este tratamiento da origen al concepto de altura equivalente a un plato teórico HETP (de sus siglas en inglés).. Es recomendable que esta extracción se realice en un tiempo corto debido a que la penicilina es inestable a pH ácido. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 291 El número de platos teóricos N de una columna de contacto diferencial se calcula mediante los métodos empleados para la extracción continua de etapas múltiples.4.3 x 1(T4 moles de .La fracción mol de penicilina en el extracto de salida.5 moles de solvente/min 10 % Calcular: a).10.L ~ yo) . XL = TT (y. Esto puede lograrse en un extractor diferencial centrífugo tipo Podbielniak. Este extractor funciona como una columna de platos perforados enrollada sobre un eje giratorio que favorece el flujo a contracorriente de las fases. penicilina en el solvente Flujo de alimentación Flujo de extracto Pérdidas de penicilina O 70 moles de agua/min 3.. 3.54)..0. La extracción de penicilina a partir de una fase acuosa mediante una fase orgánica debe realizarse a pH ácido. Solución: a). Se cuenta con los siguientes datos de operación de un extractor tipo Podbielniak: Coeficiente de partición Conc.

fase pesada R pura. El resultado de este proceso es la separación de los distintos solutos contenidos en el solvente E.4 -(0.1)(3.25 entonces el cálculo del número de etapas mediante la ecuación (6.48) modificada es: 1.3 Extracción Fraccionaria La extracción fraccionaria es una técnica de separación en la cual una fase ligera E que contiene varios solutos. F = KE R mol 7fl mo min F = 1.El número de etapas teóricas puede ser calculado mediante la ecuación (6.3xlO.C..4.6 6.25.94 x 10 _3 moles de penicilina moles de solvente b). Este proceso de extracción también es conocido como extracción Craig (debido a que fue desarrollado inicialmente por L.48) que en este caso se puede escribir como: Vr. se pone en contacto con una serie de tubos que contienen originalmente.1 = n = 4.3xlO.292 70 CAPÍTULO 6.1 0. F -I se requiere calcular el factor de extracción.4 )] gg o c mol min xL = 5. EXTRACCIÓN [3. Craig como .

El solvente E de la capa superior del tubo 1.Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. . . La extracción fraccionaria se fundamenta en la diferencia del coeficiente de partición de los solutos. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 293 extracción a contracorriente) o como extracción fraccionaria con una fase estacionaria. se transfiere al tubo 2. .Inicialmente los tubos del 2 al 7 contienen volúmenes iguales de disolvente puro R.20 (a). .0. puesto que el coeficiente de distribución KP(Á] = 1.Se agitan los tubos 1 y 2 hasta alcanzar el equilibrio. donde cada fase en ambos tubos contiene 16 unidades de soluto A. . .Inicialmente el soluto A (64 unidades) se encuentra disuelto en un volumen de fase ligera E y se localiza en el tubo 1 junto con un volumen de fase pesada R. donde un soluto A que posee un coeficiente de partición entre los disolventes E y R dado por: KP(A) = í± = 1 yA es extraído por este proceso de la siguiente forma: . es decir 32 unidades en cada una.Se separa la fase ligera de los tubos y se añade al siguiente de la derecha.Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. éstos pueden separarse entre si por medio de la extracción fraccionaria.4. .5.El tubo 1 se agita hasta alcanzar el equilibrio. el resultado es una distribución del soluto A entre las fases E y R en cantidades iguales. La extracción fraccionaria consiste de repartos repetidos de una mezcla de solutos entre dos disolventes inmiscibles. . . El fundamento se muestra en la Figura 6.Se repite el proceso las veces que sea necesario. Cuando se tiene un solvente conteniendo varios solutos que poseen diferentes coeficientes de partición.

.294 CAPÍTULO 6.20: Extracción de Craig: a) Esquema del principio de extracción fraccionaria con una fase móvil. EXTRACCIÓN í Disolvente E Tubo Disolvente R 1 2 3 4 5 6 DDDnn IlaaaaD DDnnHHE nnnn nnn mnnn nn 1 DD n ri no] fio n 2 5 [ M O l [10 H0Bülll3 Total y Tubo 1 6 15 20 15 6 1 1 2 3 4 5 6 7 20 - 3 4 5 Número de tubo Figura 6. b) Gráfica para cada tubo y varios solutos.

lo cual no s presenta en otro tipo de procesos de extracción.0 ye La figura indica que a mayor coeficiente de partición Kp. KP(B) = — = 0. . posee un coeficiente de partición.33 y el soluto C. lípidos y aminoáci dos. en la extracción fraccionaria el soluto desarrolla un perfil d concentraciones distribuido a través de todos los tubos. Debido a que cad< soluto se mueve independientemente del otro de acuerdo a su coeficient< de partición. se emplean 100 o más etapas de distribución para separar mezclas de aminoácidos o de proteínas.20 muestra los resultados de siete transferencias. Este principio también sirve de base para las operaciones croma tográficas que se revisan posteriormente. Otra forma de repre sentar la extracción fraccionaria es mediante el esquema que se muestr en la Figura 6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 295 El esquema de la Figura 6.21. Con el fin de comparar la forma en que se distribuyen varios solutos con diferente coeficiente de partición. La cantidad total de soluto A.20 (b) la distribución de los solutos B y C en concentraciones arbitrarias de 64 unidades cada uno. KP(C) = — = 3. ácidos nucleicos. se puede ver en la gráfica de la Figura 6. Perfil de Concentración A diferencia de los procesos de extracción vistos en las secciones an tenores. mayor es 1< cantidad de soluto desplazada en cada transferencia. Comunmente en la práctica real de laboratorio. también se muestra en la Figura 6. la mezcla de solutos A. B y C se separará por complet< en tres picos después de un número determinado de transferencias. La extracción fraccionaria con una fase móvil es de aplicación ge neral y puede emplearse como técnica de bioseparación para diferente tipos de solutos como: proteínas.4. El soluto B. en cada uno de los siete tubos.20 (b).6.

296 CAPÍTULO 6. pq P2 P2 q2 pq pq pq q2 Equilibrio Transferencia 3 Agitación Equilibrio Transferencia 2pq q3 P2q q3 3pq3 pq3 P 3q 3pq3 J J J J J 4pq 3 Figura 6.21: Representación esquemática de la distribución de la concentración de un soluto en la extración fraccionaria con una fase móvil. . P -•': q w:. EXTRACCIÓN Transferencia 0 Agitación Equilibrio Transferencia 1 Agitación Equilibrio Transferencia 2 Agitación 100 Zmí • q ::.

21 se muestra la distribución de soluto en cada tubo después que se realiza la transferencia y se alcanza el equilibrio.62) se aproxima a una distribución gausiana y se tiene que: (r — np)' exp -: ' v > ' [2*np(l-p)]l»~"f\ 2np(l.3. b). cuando la recuperación en cada etapa es p. El ácido biliar quenodeoxicolico es aislado mediante una extracció de Craig usando 400 transferencias.n+1 Cuando el número de transferencias n es muy grande la ecuaciór (6. Se muestra que al final de la cuarta transferencia.P ) Este perfil tiene un máximo cuando r = np...La concentración de soluto en dicho tubo..El número de tubo de máxima concentración.63 Ejemplo 6.11. la distribución de la concentración en los tubos sigue una forma binomial. 1 (6. (en ambas fases) depués de las n transferencias está dado por: r!(n — r)! pr+l(l-P)n-r (6. Una vez que se realizan las 400 transferencias. la proporción de las fases se ajusta de tal maner que el factor de extracción F sea igual a uno.4. La fase pesada es agua y la fas ligera es n-butanol.Aislamiento de ácido quenodeoxicolico. Cuando la extracción fraccionaria se realiza con n transferencias la fracción / de soluto original que se encuentra en el tubo r.. determinar: a).62) donde: F= EK r= 1.. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 297 En la Figura 6.2.. .

298 Solución: CAPÍTULO 6. Los métodos dé diseño de los extractores pueden ser gráficos o analíticos y están basados en relaciones de equilibrio y balances de masa.5)] 1 /2 /(200. ya que en este punto el valor de la exponencial es máximo e igual a uno.04 esto significa que solamente el 4% de la concentración de soluto original está presente en el tubo de máxima concentración después de 400 transferencias. . EXTRACCIÓN a).47) por: /(r.-De acuerdo a la ecuación (6. Existe una gran variedad de equipos para realizar la operación de extracción y ésta puede realizarse en forma intermitente o continua. En la extracción se emplean diversos solventes que pueden ser seleccionados combinando criterios establecidos y la teoría que se dispone. El tubo que tiene la concentración máxima de soluto es: r = np = 400 = 200 b).n) = /(200. 6.5 Sumario La extracción es una operación que se emplea para concentrar solutos de interés a partir de caldos biológicos.La fracción de soluto en el tubo 200 después de 400 transferencias está dada de acuerdo a la ecuación (6.400)-0. En el caso de productos como las proteínas se utilizan sistemas de dos fases acuosas inmiscibles que permiten el manejo de estos productos en forma más apropiada.400)= [27r(400)(0..63) la fracción de soluto / tiene un máximo cuando r = np. Se basa en la diferencia de solubilidad de los solutos entre dos fases: el caldo biológico y el solvente de extracción.5)(0.

En el caso que el soluto se distribuya preferentemente en la fase superior £".3. . R y Kp. 10 y 12. en un sistema de dos fases acuosas inmiscibles en el cual las enzimas C y D presentan coeficientes de partición de KpC = 0...Una solución de ácido acético al 0.Estimar la proporción E/R para que la masa de C en la fase ligera E sea igual a la masa de D en la fase pesada/?.8. se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de partición intrínseco es igual para ambas especies.3 1. 4. se mezcla con un volumen V de una solución que contiene dos polímeros dando origen a dos fases acuosas inmiscibles (E -f R) entre las cuales se reparte el soluto. 4. 8.Calcular el valor de Kp/Ki para ambas especies a los pH de 2. a). pH 4 2 6 8 10 12 (3 31.621 31. b). a).465 21.2.01 M presenta una disociación del 4 % a 25 °C.4. dos alcaloides vegetales de estructura muy semejante.3 y Serpentina de pKa = 10.? b).5 y KPD = 0..Calcular su pKa b)..6. expresar el grado de concentración (GC) y el rendimiento (p) en función de V0.. b). PROBLEMAS 299 6.Resp.6 Problemas 6. 6. 8. 10 y 12.En la separación de Ajmalicina de pKa = 6. 6..065 620 7. E.1 6..1.Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2. c).. a).Se desea separar una mezcla que contiene igual cantidad de masa de dos enzimas..¿Qué sistema recominda a para realizar la extracción.... 4.77 6.Calcular su constante de disociación.011.6. 6.Resp. respectivamente.Un volumen V0 de solución con una concentración C0 del soluto de interés.

1 etapa: 5 g/l.resp..8..Se extrae estreptomicina de un caldo de cultivo utilizando un solvente orgánico. Los datos obtenidos en cinco etapas de extracción intermitente utilizando extractante fresco (20 g/l de aceite sulfurado de jojoba) en cada una de ellas. en un sistema de extracción a contracorriente de 5 etapas. a).Demostrar que en una extracción diferencial con yi.Una solución que contiene 20 g/l de estreptomicina se procesa en un sistema continuo de etapas múltiples.Calcular la concentración de estreptomicina en el refinado a la salida en los casos que el sistema conste de 1.1 1 in x0.¿Cuántas etapas se recomiendan para realizar esta extracción. 3 y 10 etapas.. se muestran en la Tabla siguiente: .Estimar el rendimiento y la pureza de la extracción de la enzima (7. 7 l/min 6.Ky0 6. EXTRACCIÓN b). Estimar el flujo de fase ligera E para reducir la concentración de estreptomicina en la solución de 10 a 0.. El coeficiente de partición del Hg(IÍ) en el sistema agua-aceite de jojoba (queroseno) varía directamente con la concentración de jojoba en el queroceno e inversamente con la concentración inicial de Hg(II) en la fase acuosa. se emplea como fase extractiva aceite de jojoba sulfurado (acomplejante de Hg II) disuelto en queroseno.4 % y 87 % 6.2 g/l. = O y con extracción de soluto de la fase E a la fase /?. b). El flujo de la fase pesada R es de 150 l/min..Resp.6. Resp... El coeficiente de partición de la estreptomicina en el sistema a un pH de 4 es de 40.? a). en el cual el factor de extracción empleado es igual a 3. 2. si la relación E/R es la determinada en a).5. la longitud de la columna está dada por: Ka A F .7.En el desarrollo de un proceso (Wisniak et al . 6. b).. 1990) para la eliminación de mercurio(II) de corrientes industriales de desecho..300 CAPÍTULO 6. 96.

s.4 54... La resistencia a la transferencia de masa se localiza en la fase ligen dispersa y puede ser caracterizada mediante el coeficiente de transfe rencia de masa dado por: ka = 6 x ID ' donde: 7 I ..600 19.En una columna empacada con anillos rashing se utiliza ur sistema de dos fases inmiscibles PEG 4000 . Respuestas para etapa 3 a).Calcular la cantidad de fase orgánica por litro de fase acuosa utilizada en cada etapa y la cantidad total para las cinco etapas..0 12.Calcular la relación de fase acuosa a fase orgánica empleada en cada etapa (R/E).63 6. La enzima presenta un coeficiente de partición er el sistema de 0. La viscosidad de la fase dispersé es de 24 x 10~3 Kg/m .000.0345 (Patil et a/. d).9.0 a).6 555.Na^SO^ para extrae] amiloglucosidasa de la fase ligera dispersa (PEG 4000) hacia la fase continua (Na^SO^}.499.89.Estimar la cantidad de fase orgánica necesaria para procesar un litro de solución acuosa en una etapa y obtener la misma eficiencia que la alcanzada en las cinco etapas. b).400 146. c)..005 0.000 0.00 146.005 ppm.0 100.99.090 2.40 19.00 0. f).Calcular la eficiencia de recuperación global al final de cada etapa..8 % b).. e).60 2.En base a los resultados anteriores que proceso se recomienda si el límite tolerable de Hg(II) es de 0.PROBLEMAS Fase acuosa ppm de Hg(II) Final Inicial 1091..Calcular la eficiencia de recuperación de cada etapa..09 Coeficiente de partición 301 Etapa 1 2 3 4 5 KP 6. 1991).82 % c)..

...11.En un sistema de extracción fraccionaria tipo Craig los componentes B y C de una mezcla presentan coeficientes de partición de KPB = 0. 60 y 90. La relación volumétrica .302 CAPÍTULO 6. b). alimentada con un flujo de 985 mm3/s de fase dispersa y 68 mm3/s de fase pesada. cuya relación de equilibrio está dada por: x = 2. Debido a que la cantidad de proteína solubilizada depende fuertemente del pH.. 60 y 90. c).Determinar la longitud necesaria de una columna de 56 mrr de diámetro interno... b).2 y número de transferencias 30. Obtener el perfil de concentración de cada uno de los solutos a lo largo de los tubos.¿Cuál de los 9 sistemas recomienda? 6. Las proteínas se solubilizan dentro de las micelas que forma el detergente. Se está estudiando una solución acuosa que contiene 0. [Kg/m — s]. 1053 mm 6. ^: Viscosidad de la fase dispersa.2% en volumen de proteína.E/R = 1 y número de transferencias de 30..E/R = 5 y número de transferencias de 30. para producir una disminución del 20 % de la concentración de enzima de la fase ligera. a). EXTRACCIÓN v: Velocidad superficial de la fase dispersa.Resp.0. las proteínas pueden ser extraídas con el solvente orgánico a un pH dado cercano al punto isoeléctrico. en los siguientes casos: a).9?/* donde x es la concentración de proteína en la fase orgánica y y* es la concentración de equilibrio en la fase acuosa. respectivamente.[m/s].¿Que flujo R recomienda a para esta operación? a)..Obtener una gráfica de la longitud necesaria de la columna en función de R para las condiciones de extracción anteriores. 60 y 90. c).E/R = 0. d)..33 y KPC — 3. [s~1].. y posteriormente desorberse a un pH diferente. ka: Coeficiente de transferencia de masa.10.Las proteínas pueden ser extraídas sin ser desnaturalizadas con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol OT.

8 litros de solución acuosa por cada 3.í . PROBLEMAS 303 entre las fases es de 6. Calcular la concentración del refinado a la salida y la fracción extraída cuando se utiliza una columna de extracción diferencial de 2.6. y = 0. Resp.6.85 m.04 p = O. en la cual el HTU (basado en la concentración acuosa) es 0.8 litros de solución orgánica.0 m.

En: Separations for Biotechnology..).G. 99-143. Johansson.phase systems. T. U. y Cussler E. Extractive bioconversions in aqueous two-phase systems. En: Separation Processes in Biotechnology. Hsu. Verral.. Enfors. New York. B. A. Protein partitioning in two . M.558 Belter. y Joshi J. 1991. Mattiasson. 34. TibTech. O. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Enzime mass transfer coefficient in aqueos tvvo phase system using packed extraction column. 5. K.B.. Carr. (Eds. B.B.A. T. 287-319. 147-181. y Hu. y Tjerneld. y Holst. N. y Hudson.A. (Ed. Kohler.). M.I.. Aqueous two-phase separations. Clark.W. D. J. Extraction in aqueous two-phase systems for biotechnology.. . (Ed. Ellis Horwood Limited. L. J. Eng.L. 1990. of Chem. 1493-1498. 173-188. Suter.7 Bibliografía Albertsson. G. 1988. New York.L. 1991. 270-292.). Mattiasson. 1990. 1989. Flanagan. K. Ding. Mattiasson. P. Veide. W.. 36.S. Shuler. Cussler. EXTRACCIÓN 6. T. A. Huddleston. The molecular basis of partitioning in aqueous two-phase systems. Hatton.B. Diamond. 1992. W. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.. F. New York. 69. Baskir. Biotechnology and Bioengineering. (Eds. Marcel Dekker Inc. R. John Wiley & Sons.). J. Protein partitioning in PEG/Dextran aqueous two . K. S.7. AIChE J. T. 541 . 1017-1024. M. 1987. y Ling.R. A. J.A. Marcel Dekker Inc.. The Canadian J. AIChE J.10. En: Extractive Bioconversions. 1991. 9. S..J. A. Jafarabad. 38.. New York. 381-388. B. H.phase aqueous polymer systems. Patil. New York. E. 548-556. Thermodynamics of protein partitioning in aqueous two phase systems. P. Sawant.304 CAPÍTULO 6. Asenjo J. y Rajni. W. Racemic leucine separation by hollow-fiber extraction. y Lyddiatt. 1989..M.

D. y Belter S.7. Chem. J. Extraction of mercury(II) with sulfurized jojoba oil. 1907-1914.. Schorr. 29. -• • - . 1990. BIBLIOGRAFÍA 305 Wisniak. G.6.. Eng. Zcovsky. Ind. Res.

es análogo. Debidc a la naturaleza de estas fuerzas el fenómeno es fácilmente reversible La adsorción es esencialmente un fenómeno de superficie y debe distinguirse de la absorción la cual implica la penetración de una sustancia en el cuerpo de otra. La concentración de uno o varios solutos de un caldo por medio d( la operación de adsorción requiere cuatro pasos (Figura 7. Finalmente se efectúa la recuperación del soluto uti lizando un fluido que favorezca la desorción. Primen el adsorbente y la solución se ponen en contacto. Al efectuarse la ad sorción el soluto se une preferentemente a la superficie del adsorbent< respecto a otros solutos.Capítulo 7 Adsorción.1). 307 . Mediante la adsorción las moléculas de un soluto se concentran en una superficie sólida por la acción de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el sólido.1 Introducción La adsorción es una de las operaciones más utilizadas en la etapa de concentración de caldos acuosos diluidos. operación conocida com« elución. Una vez concluida la adsorción es necesarií lavar la columna con una solución que no provoque la desorción de soluto de interés. En este capítulo sólo se revisa lo referente la etapa de adsorción por considerarse que los principios aquí expuesto pueden extenderse al análisis de las otras etapas. Es importante resaltar que el análisis de las etapas de adsorción lavado y elución. 7.

Adsorción e Lavado de impurezas Elución de soluto Figura 7.1: Etapas de la adsorción. . Todos los derechos reservados. 1990. Copyright ©1990.308 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN. Fuente: Clonis. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

7. . cada vez existe una maye necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operació (principalmente en el contexto del procesamiento de caldos biológicos de los cuales se pueden destacar cuatro: • Los tipos de adsorción según el tipo de interacción soluto-adsoí bente. v taminas y proteínas. etc.2 de este capítulo se presentan los fundamentos d la operación de adsorción. FUNDAMENTOS 30 En el análisis de la operación de adsorción.2 Fundamentos Las operaciones de adsorción son utilizadas en la obtención de varié tipos de productos biotecnológicos como aminoácidos. o simplemente para la obtención de datos experimentaleí La formulación de algunos de estos modelos requiere: . los tipo de adsorbentes. serie. . . columnas en paralelo) optimización.El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacida de adsorción de los sistemas. como la química de la adsorción. antibióticos. 7.El establecimiento de la rapidez de la adsorción con respecto a lo fenómenos difusivos y cinéticos de superficie.4 se presentan los principie para el diseño de tales equipos. al igual que en otra operaciones de transferencia de masa. En la sección 7. Debido a lo anterior.). paralelo.Los balances de masa y energía del sistema de adsorción específic (intermitente. continuo.2.Las condiciones iniciales y de frontera del sistema.3 se describen los principales equipos' utilizados en la operaciones de adsorción y en la sección 7. • Los tipos de adsorbentes. se utilizan modelos para el diseñe análisis de alternativas (columnas en serie vs. las curvas de equilibrio de los sistemas llamadas isotei mas de adsorción y los aspectos básicos de la cinética de la adsorciór En la sección 7. .

Hidrofóbica . La adsorción por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el adsorbente y el soluto. En este proceso de selección los principales parámetros a considerar son las propiedades físicas del adsorbente. La adsorción hidrofóbica se produce por interacciones entre regiones hidrofóbicas del soluto y el adsorbente. área por unidad de volumen.310 • Las relaciones de equilibrio.1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente De acuerdo al tipo de interacción del soluto con el adsorbente. se pueden distinguir cuatro tipos básicos de adsorción (Figura 7. Actualmente se utilizan:diferentes tipos de adsorbentes en la operación de adsorción.Iónica . tales como: resistencia mecánica.2. el adsorbente . la cual está fuertemente influida por su carga y su relativa hidrofobicidad.2. CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN. En la adsorción iónica la diferencia de cargas entre el adsorbente y el soluto genera atracciones electrostáticas más fuertes y selectivas. • La cinética de la adsorción. es de fundamental importancia la capacidad de adsorción del sólido. Asimismo. forma de la partícula y tamaño.Física . 7. 7. En el caso de la adsorción física. porosidad interna y del lecho. lo que caracteriza a este tipo de adsorción como altamente selectiva.2 Tipos de Adsorbentes En el establecimiento de un sistema de adsorción es necesario seleccionar cuidadosamente el tipo de adsorbente que se va a utilizar.2): .Por afinidad En la adsorción física las fuerzas de atracción entre el soluto y el adsorbente son de tipo London-van Der Waals.

7. . (a) (b) hidrofcibica adsorbente Figura 7. a) Física b) Iónica c) Hidrofóbica d) Afinidad. FUNDAMENTOS 311 interacciones van der Waals interacciones electrostáticas adsorbente /.2.2: Tipos de adsorción.

se efectúa una animación. Las amónicas se producen en dos pasos: Primeramente. Los adsorbentes iónicos sintéticos están formados por matrices de polímeros unidos lateralmente. Los adsorbentes utilizados en intercambio iónico pueden ser inorgánicos o sintéticos (Figura 7.3).6). En la Tabla 7. El ligando se une a la matriz por medio de un brazo que evita impedimentos estéricos en un determinado arreglo (Figura 7. el soporte o matriz y el ligando. Las resinas no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorción de solutos no polares a partir de solventes polares.312 CAPÍTULO 7. Las matrices utilizadas en la adsorción por afinidad son fabricadas de: celulosa. poliacrilamida (o derivados). ADSORCIÓN. se produce una cloro-metilación del benceno.5). Las resinas de estireno-divinilbenceno catiónicas se producen en un paso por acción de un ácido sobre el grupo'benceno. y en menor grado la silica gel (Figura 7. más utilizado en bioseparaciones es el carbón activado (vegetal). Las resinas basadas en esteres acrílicos tienden a ser más efectivas para remover solutos polares de solventes no polares. También son utilizadas como adsorbentes resinas sintéticas. celulosa modificada. dextrano y agarosa (Figura 7. /?\ A /K /N Carbón activado Sílíca gel Figura 7.1 se presentan algunas características de estas matrices. A la matriz se le unen grupos funcionales que le dan la capacidad de intercambio iónico. En la adsorción por afinidad el adsorbente consta de dos partes.3: Adsorbentes físicos.4). Los inorgánicos como las zeolitas son poco utilizados. Las matrices de celulosa activada también son muy utilizadas para adsorción por intercambio iónico. . En el segundo paso.

Base débil Figura 7..H* I Aminación N (CH3)3 N (CH3)2 Resina anión ica CH3 CH2N . b) Adsorbentes de intercambio iónico derivados del estireno-divinil benceno.. -CH-CH.4: Continuación.CHCr CH.2.- CH-CH. -CH-CH. FUNDAMENTOS 313 A A I Zeolitas /\ /\ Figura 7.7.CH3Cr CHN .- i H2S04 Clorometilación I Resina catiónica SO. .4: Tipos de adsorbentes de intercambio iónico: a) Adsorbentes inorgánicos.

CHjOH -O OH °~VOH OH OH x^ O_ CHoOH CH2OR R = -PO 3 H 2 -SO2OCH2CH2NH2 . «.CH2COOH -CH2CH2NR2 -CH 2 CH 2 NR 3 *X' -C-CH 2 -CH 2 -COOH Ó Figura 7. >. 1988. x «. Y NcHr^"LP Figura 7. a) Soporte de sílice b) ligando fijo c) ligando móvil parte hidrofóbica d) ligando móvil parte hidrofílica e) piridina f) protema Fuente: Torres et al. ^. v xá. v N¿. v Nc«. «. derivados de celulosa c) Adsorbentes de intercambio iónico A.5: Adsorción por afinidad. Reproducida con el permiso de Academic Press.. N<í. CH.NCÍ¡.txc«.314 CAPÍTULO 7..4: Continuación. ^. .. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados. ADSORCIÓN.

Todos los derechos res vados. Copyright ©1985. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.7.2. Spherosil) — O — Si — OH — O — Si — OH I O Poliacrilamida rv(CH2 — CH — ) Ofe — CH — C — (CH2 — CH — I C= 0 I NH NH f NH C= 0 Copolímero de Hidroximetil metacrilado CH2 1 -C 1 -CHz COOOH2CH2OH CH» CH3 1 1 C CH2— C CH2 C— 1 1 1 OOOOHZCH2OH CO CO 1 1 0 o 1 CH2 OH2 1 CH2 1 O 1 CO -C 1 -CHz CCH3 COOOH2CH2OH 1 1 CH2 1 0 1 CO CH2 — C CH2 1 COOOH2CH2OH C — CH21 CH3 CH2OH Celulosa OH Figura 7. FUNDAMENTOS 315 Soporte (marca) Matrices comerciales Estructura química CH2OH •O Agarosa OH Materiales silíceos (vidrio de poro controlado. . 1985.6: Matrices de adsorción por afinidad. Fuente: Yarmush Colton.

Pseudoespecíficos biológicos: Aminoácidos. Los ligandos son moléculas de alta afinidad por el soluto de interés y pueden ser de varios tipos (Figura 7. .Bioespecíficos amplios: Cofactores y lectinas. del ligando y de la estabilidad de éstos. Proteínas acarreadoras para obtención de hormonas. Antígenos para adsorción de anticuerpos. Propiedad Estabilidad Reactividad Permeabilidad Especificidad No.8): .Pseudoespecíficos no biológicos: Colorantes y Metales.1: Propiedades de matrices. Inicialmente se activa la matriz con bromuro de cianógeno. Tabla 7. Sondas para obtención de ácidos nucleicos.Bioespecíficos estrictos: Sustratos para adsorción de enzimas.316 CAPÍTULO 7. . Agarosa buena baja buena alta alto alto Existen varios procedimientos para inmovilizar el ligando en la matriz.7 se presenta uno de los procedimientos utilizados para activar una matriz de agarosa. . los cuales dependen del tipo de grupo funcional sobre la matriz. . Posteriormente se puede unir un radical por medio de un grupo amino para formar un derivado de la isourea. de ligandos Costo Sílice buena alta buena baja bajo bajo Material Celulosa | Poliacrilamida buena buena alta alta buena baja baja baja bajo alto medio bajo ADSORCIÓN. En la Figura 7. lo cual se efectúa mediante dos pasos químicos. Generalmente los grupos funcionales utilizados son hidroxilos. aminos y carbonilos.

Todos los derechos reservados. Copyright ©1985.H _ = -° Ester de aanato ¿24.c> C=NH ||_(X> Amidocarbonato o ^-o— c— NH Carbamato b) '/A 3—CN + NHj—R- Figura 7. .7: a) Activación de matrices con bromuro de cianógeno. 1985.I 7. b) Reacción del éster de cianato con un derivado amino para obtener un derivado de isourea.2. Fuente: Yarmush y Colton. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. * . FUNDAMENTOS 317 OH BrCN.

ADSORCIÓN. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.318 CAPÍTULO 7.8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. Adaptada de: Vijayalakshmi. . ugandos Pseudobioespeáficos Figura 7. 1989. Todos los derechos reservados. Copyright ©1989.

Tanto K como n deben ser obtenidas experimentalmente. En este tipo de experimentos generalmente se pone en contacto cantidades iguales del adsorbente con soluciones de soluto de diferentes concentraciones y se mide las concentraciones una vez alcanzado el equilibrio. 1966). la de Langmuir y la irreversible (Hall et a/.2. determinándose K con la ordenada en el origen y n de la pendiente de la recta que se obtiene. Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas por medio de una gráfica log-log de los datos experimentales. pero puede ser utilizada para aproximar las otras isotermas en la región de baja concentración de soluto. y es la concentración de soluto en la solución. cálculo de eficiencias y costos de la adsorción. Las isotermas irreversibles son características de sistemas altamente específicos.9): la isoterma de Freundlich. n es una constante adimensional y K es una constante cuyas unidades dependen de n.3 Relaciones de Equilibrio El análisis de los procesos de adsorción requiere de datos de equilibrio que se expresan normalmente como isotermas de adsorción. la lineal. ya que se puede obtener una buena adsorción aún a concentraciones bajas de .7. la adsorción por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. FUNDAMENTOS 319 7. y la sensibilidad del proceso respecto a la concentración del producto. La isoterma de Freundlich se describe por medio de una ecuación exponencial empírica de la siguiente forma: q = Ky" (7. Las isotermas tipo Freundlich normalmente se presentan en sistemas-' de adsorción por intercambio iónico. Las isotermas nos permiten estimar el grado de purificación que puede ser alcanzado. Cuando las isotermas de adsorción son cóncavas hacia el eje de las abcisas o sea cuando n < 1. Las isotermas son parte esencial para modelar la adsorción y por lo tanto para el diseño.1) donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el líquido de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente. En los procesos de adsorción que se presentan en las bioseparaciones existen cuatro tipos básicos de isotermas (Figura 7. la isoterma se llama favorable. La isoterma lineal es menos común. la cantidad de adsorbente requerido.2.

. Fuente: Belter et a 1988. Copyright ©1988. ADSORCIÓh Freundlich (común ^ empírica) Figura 7.320 CAPÍTULO 7. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechí reservados.9: Isotermas de adsorción más comunes.

se puede obtener una recta de pendiente Kd/q0 y ordenada en el origen l/q0. Un caso particular de la isoterma de Langmuir se presenta cuand< K¿ es muy pequeña y la adsorción es irreversible. En un momento dado durante 1 adsorción. se llaman desfavorables.2. coexisten sitios ocupados por soluto y sitios vacíos. La forma de las isotermas de Langmuir puede explicarse mediant un mecanismo teórico bien fundamentado.La.3: 9 <io y q0 de tal manera que en una gráfica cartesiana de l/q vs 1/y. En este caso q = q para cualquier valor de y. De acuerdo a lo anterior. Las isotermas tipo Langmuir están dadas por expresiones de la siguiente forma: q= V°y i-? Q^ (7 3) - donde q0 es la capacidad máxima del adsorbente y K¿ es la constante de equilibrio de desorción. Se propone que sobre la su perficie del adsorbente existen sitios específicos en los que las partícula de soluto se unen reversiblemente. Estas constantes deben ser obtenidas experimentalmente. La ac sorción en el sentido directo es proporcional a la concentración de solut y a la concentración de sitios vacios.7. En el sentido inverso la adsorció es proporcional a la concentración de sitios ocupados. Las isotermas lineales pueden ser descritas por la ecuación de una recta que pasa por el origen de la forma: 9 = Ky (7. FUNDAMENTOS 321 soluto. Las isotermas concavas hacia el eje de las ordenadas o sea para n > 1. unidades de q0 y K¿ de esta isoterma son las mismas que las de q y y respectivamente. la adsorción puede ser expresada en forrr de una ecuación química de la siguiente forma: .2) en este caso los datos experimentales se grafican en coordenadas cartesianas para determinar K. En este caso es preferible manejar los datos experimentales con la forma reciproca de la ecuación 7.

En el caso de un intercambio monovalente característico de la resinas sintéticas la adsorción puede ser expresada como: Na+ + HR ^ NaR + //+ (7. ADSORCIÓN. la ecuación (7.7) Combinando las ecuaciones (7.8 l debido a que q es proporcional a la concentración de sitios ocupados y q0 a la concentración de sitios totales.-j.9 donde HR representa los sitios de intercambio iónico en estado ñor mal del adsorbente.3) puede ser obtenida a partir de la expresión (7. soluto -f sitios vados ^ sitios ocupados (7-5) En el equilibrio se puede definir una constante de equilibrio de desorción K¿ de acuerdo con la siguiente expresión: k-2 [soluto][sitios vados] I<d .6) El número total de sitios activos para la adsorción es constante e igual al número de sitios vacíos más los sitios ocupados o sea: [sitios totales] — [sitios vados] -j. En equilibrio la constant de desorción está dada por: .. es decir este mecanismc fundamenta la expresión de Langmuir..6) y (7. y NaR representa los sitios de intercambio una ve que ha sido intercambiado el ion de soluto. y—.— KI [sitios ocupados] (7.= —7-rr. Sin embargo.8). en este caso los sitios de adsorción en ur momento dado. o están ocupados por el ion de soluto o están ocupado.[sitios ocupados] (7. Las isotermas de intercambio iónico pueden ser racionalizadas er forma análoga. por el ion que normalmente está unido a la superficie del adsorbente La expresión final depende del número de iones de soluto que se Ínter cambian por ion de adsorbente.322 CAPÍTULO 7.7) se puede llegar a la expresión: .. [sitios total es][soluto] [sitios ocupados]J = — — : 1 F Kd + [soluto] v(7.

10.2. Ejemplo 7. FUNDAMENTOS [Na+][HR] [NaR][H+] 32 (7.1 Combinando las ecuaciones (7.1. entonces la isoterma no es del tipo Freundlich. . como en el caso de que se utilice una soluci< amortiguadora. siempre y cuando la concentración [H+] pe manezca constante.10b) no produce u linea recta. Solución: La solución se presenta en forma gráfica en la Figura 7.2. acuerdo con la Figura 7. La gráfica log-log de los datos (Figura 7. Encontrar la expresión matemática de la isoterma que mejor ajuí los datos.7.Adsorción de Albúmina de Suero de Bovii (ASB) a pH = 7 en un adsorbente aniónico Q-Sefarosa.ñ] y q0 es proporcional a [R ]. adsorción iónica monovalente puede ser descrita por medio de una e presión tipo Langmuir..10) y (7. Los datos de equilibrio de la adsorción de ASB en Q-Sefarosa presentan en la Tabla 7.10a los datos no se ajustan a una isoten lineal. En el caso de adsorciones iónicas no monovalentes el análisis análo frecuentemente conduce a expresiones tipo Freundlich.1: como q es proporcional a [7Va.H La concentración de radicales R totales en la superficie del adso bente está dada por: [R~] = [NaR] + [HR] (7.11) se puede obtener la cuación: [NaR] = [RT][Na +1 Kd[H+] + [Na- (7.

53 -0. Sin embargo.2. Tabla 7.37 0. Todos los derechos reseí vados.85 0. el sistema pe manecerá esencialmente en equilibrio y el modelo se simplifica.868 1. con de la configuración del sistema (intermitente.0135 0.00 73. la velocidad de la adsorción o el tiempo necesari para alcanzar una cierta separación (Figura 7. E la mayoría de los casos las interacciones soluto-adsorbente no ocurre instantáneamente.894 ADSORCIÓN i/y 20.00 78. La velocidad efectiva de la adsorción depende tanto de las cond cienes de operación (flujo.30 4.00 2.00 1. por lo que q0 = 80 mg/ml.05 30.00 -1. el grado de separación que pued ser logrado y la sensibilidad del proceso con respecto a la concentració del soluto. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.30 43. El estudio de an .640 1.0130 0.0375 x 10~3.4 Cinética de la Adsorción El estudio de las isotermas de adsorción nos permite determinar par un sistema soluto-adsorbente dado.60 Log(q) 1.752 1. Los datos ajustan la isoterma de Langmuir (Figura 7.00 0.10 -1.25 i/q 0.11).0229 0. composición y presión).00 5.70 1.70 0.2: Datos de equilibrio.81 0. En el caso que la adsorción sea bastante rápida.477 1.20 56.885 1.00 10. La pendient de la recta es igual a 1. temperatura. Copyright ©1990. 7.00 76. entonces K¿ = 0. y mg/ml q mg/ml Log(y) 0.0333 0. para el desarrollo del modelo de la adsorció es necesario poder establecer.0128 Fuente: Draeger y Chase. mediante el empleo de coeficientes d transferencia de masa.10c). La oí denada en el origen es 0.0177 0.0125.50 0. columna.324 CAPÍTULO 7.00 0.) y d tamaño del equipo donde se realizará la operación. 1990. etc.083 mg/ml.

4 1.10: Continuación.2 1.00 1.00 0. a).00 y (mg/ml) 3. . FUNDAMENTOS 32 80 — 70 — 60 q (mg/ml) 50 40 30 20 10 0.Ajuste de datos...8 log(q) 1.50 log(y) 0.2.00 Figura 7.7.10: Ejemplo 7.50 Figura 7.Isoterma lineal 2.1. b).00 -0....isoterma de Freundlich.0 1.00 2.6 1.0 -1 50 -1.

326 CAPÍTULO 7.c).010 0.015 0...025 0. ADSORCIÓN.005 0.. . 0.030 0.020 1/q 0.Isoterma de Langmuir.10: Continuación.000 I 10 I/y I 15 Figura 7.

Copyright ©1990. FUNDAMENTOS 327 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T. Todos los derechos reseí vados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1990.2.11: Diseño de adsorbedores. de Masa Modelo del Adsorbedor Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 7.7. Adaptada de: Wang. .

. es decir con siderando el comportamiento de una partícula de adsorbente o un ele mentó de volumen de un sistema.El soluto una vez situad en el sitio de adsorción se une a éste por medio de una reaccic de superficie. . ADSORCIOh bos efectos se divide en dos grandes conceptos : .En algunos tipc de adsorbentes el soluto difunde a través del seno del adsorbent< A este fenómeno se le conoce como difusión en la fase del adsoí bente.. .Pr mero el soluto difunde desde el seno del líquido a través de 1 película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente. por lo que el soluto debe difundir a través del líquido i interior de los poros.. el soluto tiene que pasar del seno de la fase líquida a 1 superficie del adsorbente (Figura 7.Resistencia a la difusión en el seno del adsorbente. En los procesos de adsorción se utilizan materiales porosos que ofre cen una gran área por unidad de volumen con el propósito de recupera la mayor cantidad de soluto posible en un volumen dado. Mecanismos de Transporteí El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer la expresiones de la rapidez de la adsorción a nivel local.Debido a que el área de 1 superficie interior del poro es mucho mayor que la superficie ext< rior.Los efectos de mezclado.12).Resistencia de la película del líquido que rodea el adsorbente. generalmente la adsorción se efectúa principalmente denti del poro.328 CAPÍTULO 7. .Resistencia a la reacción en la superficie. Para que un partícula de soluto pueda ser adsorbida en la superficie de un poro de adsorbente. .Los mecanismos de transporte (físicos y químicos). la cual es un proceso finito pero generalmente mí rápido que los procesos anteriores. Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este preces que pueden visualizarse principalmente como: .. .Resistencia a la difusión dentro del poro.

Adaptada de: Levensj 1962.2. FUNDAMENTOS 32 a) Resistencia a la difusión al interior del poro d) Resistencias de la superficie Resistencia de la película de líquido Figura 7.7. . Todos los den reservados. Copyright ©1962. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.12: Resistencias en la adsorción.

[M/L3t]. [M/L3]. la resistencia de la difusión en el por* no puede relacionarse directamente con las otras dos. [M/L3]. resistencia de la película o la del poro o una combinación de ambas controla la velocidad de adsorción local. Cuando la resistencia de la película es mucho mayor que la de poro o la de la reacción de superficie. por volumen del líquido). controlada a nivel local por el flujo del soluto a través de la películ que rodea al adsorbente. (En la literatura también se utiliza R' = R/e velocidad de adsorciór. la velocidad de adsorción est. Particularmente. El parámetro a puede ser correlacionado con la porosidad del leche 6 (volumen del líquido sin incluir el líquido de los poros/volumen de lecho) y el diámetro de la partícula de adsorbente dp de acuerdo a le expresión: (7. y*: Concentración hipotética de soluto en el líquido.13 a: Área de adsorbente por unidad de volumen de lecho (adsorbente 3 líquido). en equilibrio cor la concentración de soluto en el adsorbente.12. En este caso la expresión de la velocidad d< adsorción puede expresarse como: R=kLa(y-y*) donde: &£.330 CAPÍTULO 7.14) «p . R: Velocidad de adsorción referida al volumen del lecho (adsorbente y solución). ADSORCIÓN Control de la resistencia en la película. Generalmente 1.Las resistencias an teriores no actúan sólo en serie o en paralelo como puede apreciarse ei la Figura 7. [L2/L3].. y: Concentración de soluto en el seno de la fase líquida. [M/(T—L2—M/L3 líquido)] (7.: Coeficiente de transferencia de masa.

Difusividad. [m2/s]. [Kg/m — s]. fc¿ generalmente se puede correlacionar con una expresión de la forma: Sh = Cl-i. excepto en los casos en que la partícula de adsorbente es pequeña y la difusividad en el poro grande. : Viscosidad.2C (7.C2(Re)a(Sc)b (7.17 (AB En el caso de proteínas se han utilizado las siguientes correlacione para estimar &£.21 donde: AB'.4 x 1(T15 T (7. y Sh. ^2. Re y Se. a Y b son constantes.2. Para sistemas de adsorción en columnas.: Para tanques agitados: -2/3 7 18 dp Para columnas: ' \PL^AB (7.45/?e1/2Sc1/3 estimándose la difusividad mediante la expresión: = 9.16 (7. FUNDAMENTOS La resistencia de la película por si misma rara vez controla la rapidez de la transferencia de masa.15.19 S/i-2-f 1.7. Reynolds y Schmidt dados por las siguien tes relaciones: Sh = kLdf (7. donde Ci. . son los númeroí adimensionales de Sherwood.

q) ? (7. La ecuación (7.23) or donde Ra es el radio externo de la partícula. r: La coordenada radial al interior de la partícula. o en líquidos utilizados para impregnar la partícula porosa. ADSORCIÓN Control de la difusión del soluto en el seno del adsorbente. [L]. [(L2/t)]. La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: R=-aDs^\r=Ra (7.La difusión en la fase sólida del soluto una vez que ha pasado del sene del líquido a la fase sólida. [M/L3]. ips es un factor de corrección . Considerando una geometría esférica uniforme el balance de soluto en la partícula está dado por: donde: Da: Difusividad efectiva del soluto en la fase sólida. q: Concentración de soluto en la fase sólida.24) q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de la fase líquida.332 T: Temperatura. se presenta en algunos sólidos homogéneos permeables como las resinas que se utilizan en intercambio iónico o en adsorbentes con porosos cubiertos con películas móviles.22) suele ser aproximada utilizando una fuerza impulsora lineal de la siguiente forma: | = ^sksa(q* . CAPÍTULO 7. MA\ Peso molecular soluto. [°K].

el balance de soluto al interior de la partícula está dado por la expresión: o. [L3/Z/3]. ot \ dr2 r or -d-.a = 600.q) k*a se correlaciona con la difusividad mediante la ecuación: (7.)f (7.. [M/L3].25) k<. ks es el coeficiente de transferencia de masa (L 3 (total)/área-tiempo).26) Control de la difusión del soluto en la fase líquida al interior de los poros. qi\ Concentración de soluto en la fase sólida.27) yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro.Cuando la velocidad de adsorción está controlada por la difusión del soluto al interior de los poros de la partícula de adsorbente. FUNDAMENTOS 333 Dimensional que se introduce al linearizar la expresión.e)i¡>sksa(q* . [ L 2 / t ] . (7. Para el caso en que la acumulación del soluto al interior del poro sea mucho menor que la velocidad de la adsorción la ecuación (7.>2.-: Porosidad de la partícula al soluto de interés. [M/L3]. Con la linearización anterior la expresión de la velocidad de transferencia de masa por unidad de volumen de lecho es: R= (1 .28) La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: r=Ra . e. hasta el sitio de adsorción.27) puede ser escrita como: | dt <9r2 2% r dr (7. Dp: Difusividad efectiva del soluto al interior del poro.

r) H= ysp'vp ^*f — *j) (<-! <tc\\ (7.334 CAPÍTULO 7.Generalmente la reacción de adsorción en la superficie del adsorbente es mucho más rápida que los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante.33) Control de la reacción de superficie.28). para líquidos la difusividad Dp puede ser expresada como: Dp = ^^ *o (7.k2q) (7. reversible o irreversible. La ecuación (7. son: Cinética reversible de primer orden: R = e(kiy . Dos expresiones comunmente utilizadas principalmente para sistemas de intercambio iónico. En las expresiones cinéticas más utilizadas la reacción de superficie es tratada como una reacción química. de un cierto orden. kpa puede correlacionarse con la difusividad efectiva del poro mediante la siguiente expresión: f^ (7. q es la concentración promedio de soluto en el adsorbente. ADSORCIÓN.30) donde Y0 es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de los poros) y DAB es la difusión molecular del soluto en un líquido libre de adsorbente. qx es la concentración de la fase sólida en equilibrio con la concentración y A de la solución que se va a tratar y ifrp es un factor de corrección por linearización..34) . puede aproximarse utilizando una fuerza impulsora lineal como la siguiente: VA de tal manera que.32) donde q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de líquido .

Efectos de Mezclado La velocidad de adsorción efectiva también puede disminuir por efecto. [L2/t].13). largas donde se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o ei el mezclado (espacios muertos. Uno de los modelos más utilizados para describir la desviación de comportamiento ideal del flujo al interior de columnas. donde los efectos de la dis persión axial debida a remolinos y de la difusión molecular. debido . de un mezclado imperfecto. En la construcción de algunos modelos de adsorción no se considerai los efectos de mezclado y de flujo no ideal. en función d( cual se puede definir un coeficiente aparente de transferencia de mas dado por: (7.36 donde: E: Es el coeficiente de dispersión axial. que en el proceso de escalamiento de columnas este efecto puede se importante. es necesario considerar algunos aspectos fundamentales d este fenómeno. Sin embargo. donde k\ y k% son las constantes cinéticas de adsorción y desorción respectivamente.7. v: Es la velocidad superficial de flujo.2. es el modelo d flujo tapón con dispersión (Figura 7. FUNDAMENTOS Cinética reversible de segundo orden: R - (7. Esta situación es característica de columna.35. [L/t]. q0 es la capacidad máxima de adsorción del adsor bente. difusión molecular o dispersión axial). se agrupa! en el concepto del coeficiente efectivo de dispersión axial. Es conocido que para flujo laminar de líquidos en lechos empacadc (caso más común) el número de Reynolds basado en el diámetro de h partículas del lecho es menor a 10. Bajo esta consideración el númei I .

336 CAPÍTULO 7.14: Dispersión en lechos empacados. Adaptada de: L venspiel. ADSORCIÓI Perfil plano de velocidad Fluctuaciones debidas a difusión molecular y turbulencia - Figura 7. Adaptada de: Leven.1 1000 2000 Re = Figura 7. Copyright ©1962. . Copyright ©1962. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. 1962. Todos los derech reservados. Pe: 0. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.13: Modelo de flujo tapón con dispersión. piel. Todos los derech reservados. 1962.

Para el establecimiento del coeficiente global de transferencia de masa es necesario fijar la forma en que las resistencias individuales están relacionadas: en serie o en paralelo. lo cual simplifica la solución matemática del modelo de adsorción. de tal manera que la expresión de la velocidad de adsorción se puede aproximar a: R = kda(y . ~^ = r~ + r ( T ' 39 ^ donde K0 es el coeficiente global de transferencia de masa referido a la fase líquida. la cinética de la adsorción puede ser descrita en forma más adecuada utilizando un modelo donde la combinación de resistencias (por ejemplo película y poro) describen en forma más precisa la cinética. Pe = ^ = 2 hi . FUNDAMENTOS 337 de Peclet (el cual es una medida del grado de dispersión en la columna) toma un valor constante de 2 (Figura 7. Si se considera como ejemplo el caso de la resistencia de la película y la del poro actuando en serie. para el cálculo del coeficiente global se deben sumar los inversos de los coeficientes individuales (para equilibrios lineales).2.37) donde Pe es el número de Peclet (adimensional).37) permiten obtener una expresión para el coeficiente aparente de transferencia de masa por dispersión.14) entonces. . la combinación de resistencias se presenta por medio de un coeficiente de transferencia de masa global que agrupa el efecto de las resistencias individuales.7.36) y (7. Sin embargo en algunos sistemas. En estos casos.y*) (7. Las ecuaciones (7. (7.38) Resistencias Combinadas En la elaboración de un modelo cinético se puede suponer que una resistencia a la transferencia de masa es la controlante.

15: Sistemas de adsorción tipo tanque agitado. Los equipos industriales de adsorción más empleados son los tipo columna de lecho fijo. En este tipo de arreglo se cuenta con varias columnas operando en serie.15). Estas columnas pueden ser operadas simulando un sistema a contracorriente mediante el sistema de carrusel (Figura 7. ADSORCIÓN. La columna agotada se descarga y posteriormente se convierte en la columna final de la serie. simulándose una operación a contracorriente. <^_ _^> <=__ _--> r - 0 0 O ° 0 Q(~\ 0*.16). pero resultan muy útiles en la experimentación de laboratorio para la obtención de datos de diseño.— So o ° 0 cd"^ O 00°° ° 0 00°° o °O o (a) Tanque agitado intermitente 0 °O o*" —V (b) Tanque agitado continuo Figura 7. Las operaciones de adsorción pueden llevarse a cabo en tanques agitados. Este tipo de arreglo se considera útil para el tratamiento directo de caldos . en forma intermitente o continua (Figura 7. 4- Adsorbente 0 ° O 0 Oo O4. Cuando se agota la columna que está siendo alimentada. Este tipo de sistemas son poco usados a nivel industrial por incosteables.338 CAPÍTULO 7. En los equipos de lecho fluidizado las partículas de adsorbente se suspenden mediante un flujo ascendente de la solución de interés.— Ad Adsorbente 0 o 0 0 bo Solución 0 o 4. se avanza la posición de la alimentación a la siguiente columna.

EQUIPOS DE ADSORCIÓN F XA' 339 oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo T y(Ut) F a) Columna de lecho fijo Solución Alimentación • "1 A ~l B 1 c L_ ~l r E de lavado Qdol D L_ L_ 1 ^^^ Se)luc»ón as otada Alimentación Solución de lavado Cido2 T Producto Solución agotada .16: Adsorción en columnas.7.?°dn0ae Alimentación Cido3 77 T Solución Producto agotada b) Sistema de Carrusel Figura 7. .3.

con sólidos en suspensión.340 CAPÍTULO 7. . Con esta misma intención existen desarrollos donde se emplea una combinación de un tanque adsorbedor y uno desorbedor operando en forma continua (Figura 7.17). suprimiendo la operación sólido-líquido previa a la adsorción. ADSORCIÓN.

1987. . Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Adaptada de: Gailliot et a/. EQUIPOS DE ADSORCIÓN Solución agotada 341 y Sólidos celulares Altura de lecho expandido Altura de lecho sedimentado - Solución de lavado J a) Adsorción en lecho fluidizado F Alimen lactón Soluá ande lav¡UlO Solu ción de e ución Etapa de adsorción 0 o dbo °oo 0 ° 0 °n° O O o^cT O~o O° 0^> IX F+ ' v 0 <PoOo~ J> O°OoO "M f XI 0 o d0 V o o 0 ° 0 °n° 0 O Etapa de desorción O F Producto b) Adsorción continua con recirculación de adsorbente Figura 7. Copyright ©1990 y con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright ©1987.3.17: Adsorción en caldos completos.7. 1990 y Pungor et a/. Todos los derechos reservados.

1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes En una operación de adsorción tipo tanque agitado intermitente el adsorbente se agrega a la solución dentro de un tanque. se agita la suspensión y posteriormente se separa la fase líquida y sólida.4 Diseño de Adsorbedores El diseño de adsorbedores mediante modelos (Figura 7. los balances y las condiciones de frontera. • El tanque agitado con alimentación continua.3 se han revisado los primeros dos aspectos.2 y 7. • Las columnas empacadas de lecho fijo.Etapas necesarias o longitud de una columna.Tiempo necesario para llevar a cabo el proceso. las expresiones de la velocidad de adsorción. ADSORCIÓN 7. En general los arreglos más comunmente empleados son: • El tanque agitado intermitente.342 CAPÍTULO 7. A escala industrial estas operaciones son poco utilizadas por incosteables. . Sin embargo. Como se estableció en la introducción de este capítulo la formulación del modelo requiere de los datos de equilibrio de sistema. gran parte de los datos de equilibrio o las . debido a que los balances y condiciones de frontera son característicos de cada tipo de arreglo. Las operaciones de este tipo son utilizadas cuando la capacidad del adsorbente es muy alta.11) permite estimar algunos parámetros importantes como: . .Concentración de soluto al final de la adsorción (pérdidas o eficiencia).4. En esta sección se revisa la integración de estos cuatro aspectos en el diseño de arreglos específicos de sistemas de adsorción.Cantidad de adsorbente necesario. 7. . En las secciones 7.

las operaciones de lavado y elución se realizan en tanques agitados en forma intermitente. En el caso de adsorciones lentas. respectivamente. La expresión de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo * de adsorción. una alternativa de diseño es utilizar curvas de equilibrio prácticas que tomen en cuenta directamente la eficiencia de etapa. por ejemplo: q = Kyn (7. Considérese una operación tipo tanque agitado intermitente. La ecuación (7. llamada linea de operación. q¿ y <?2 son las concentraciones de soluto en el adsorbente al inicio y final del proceso.18 puede ser expresado como: FyA + SqA = Fyi + Sq2 (7. por lo tanto el adsorbente y la solución están en equilibrio al término de la operación (o bien una etapa real si se utilizan curvas de equilibrio modificadas). En el análisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa ideal. Bajo esta consideración el análisis de este tipo de operación se simplifica. Es importante mencionar que en algunos casos. Si se proporciona un tiempo de contacto adecuado se alcanza el equilibrio entre las fases.7.40) El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7.41) puede arreglarse para expresarse como la ecuación de una línea recta. . considerando tiempos de contacto menores a los del equilibrio real. y sólo requiere de la combinación de ¡Jas expresiones de equilibrio y los balances de masa. Por otro lado. y A y 2/2 son las concentraciones de soluto en el líquido al inicio y final del proceso. si el tiempo de contacto es menor que el necesario para alcanzar el equilibrio la operación no será 100 % eficiente.41) donde F es la cantidad de la fase líquida y S la cantidad de adsorbente (se suponen constantes como es el caso para soluciones diluidas de caldos biológicos). Asimismo. ya sea en forma gráfica o en forma analítica.4. DISEÑO DE ABSORBEDORES 343 cinéticas de adsorción para otro tipo de diseños son obtenidos en este tipo de arreglos.

40) y (7. sólo cuando la concentración en la solución es muy baja la concentración del soluto en el adsorbente . La estreptomicina se recupera utilizando adsorción por intercambio catiónico.42) La solución gráfica de las ecuaciones (7. t=t (b) Sq Curva equilibrio y (c) Figura 7. #2) al final del proceso. Debido a que la curva de equilibrio es muy favorable para este proceso. donde la curva de equilibrio utilizada para la ilustración refleja una adsorción favorable (n < 1).18c. Se ha observado que 1. ADSORCIÓN ^o o o 0 °0'°0 o db o O 0 0 OO t=0 (a) Sq.2/2) (7.Adsorción de estreptomicina. La intersección de la curva de equilibrio con la línea de operación permite calcular las concentraciones de equilibrio (7/2.. 92 = qA + .56 g de este antibiótico pueden ser adsorbidos por cada gramo de resina. Ejemplo 7.18: Adsorción intermitente.2.344 CAPÍTULO 7. '••::••.42) se representa en la Figura 7.

QA) = F(yA .000 1x6 g/l 1-560/0 — 384. sin embargo el problema que significa el movimiento continuo de los sólidos.56 g/g 7/2 = 0 se puede calcular S: s = s = S FyA <12 100.3. Esto implica que sería adecuada una operación continua ..Adsorción de fenilalanina. DISEÑO DE ADSORBEDORES es 345 menor de este valor. conlleva a utilizar con más frecuencia operaciones semi-continuas. Solución: El balance de masa para esta operación es: S(q-2 . Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100. Ejemplo 7.000 / de un caldo de fermentación que contiene 6 g/l de estreptomicina en una operación intermitente. Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente.4. Si se ponen en contacto 300 g de adsorbente con 2 litros de solución que contiene 15 g/l de fenilalanina. estimar: .615 0 de adsorbente.y2) con los valores: <M = 0 q2 = 1.7. La adsorción de fenilalanina en un adsorbente de poliestireno (amberlita XAD-2) puede ser descrita por la siguiente isoterma: q = 6.1 x 10~V'9 donde q tiene unidades de g/g y y de g/l.

io 0.0420/0 = 8. permite encontrar la ecuación de la línea de operación.6 g/l 2/2 . a) Las composiciones en el equilibrio.06 q (g/g) 0.346 CAPÍTULO 7. Solución: Utilizando el método gráfico el balance de masa para esta operación (ecuación 7.04 0.3.19. el punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operación.oo i 10 I 12 I 14 i 16 Figura 7.02 (15.0) o.42). a) La curva de operación y de equilibrio se grafican en la Figura 7. b) El porcentaje de recuperación. por lo tanto: 92 = 0.19: Solución gráfica del Ejemplo 7. ADSORCIÓN o.08 0.

8. utilizando amberlita XAD-2 modificada. Si se utiliza un proceso intermitente en equilibrio.6 ~~l^~ RE = 43 % RE = Ejemplo 7. ¿ qué cantidad de f h . La isoterma de adsorción de esta impureza en amberlita XAD — 2 — CHi — CH<¿ — Br.C . a un pH de 2. La principal impureza en el proceso de obtención de cefalosporina C es la DAC-C. Solución: Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solución analítica al problema.0. está dada por la siguiente expresión: donde q está en g/g y y en g/l. adsorbente es necesario agregar a 2 litros de una solución de DAC .4.Adsorción de Desacetilcefalosporina C (DACC). para recuperar el 90 % de la impureza?.0877/2 . : con una concentración de 2 g/l..4.7. DISEÑO DE ABSORBEDORES b) El porcentaje de recuperación puede ser expresado como: FyA - 347 FyA y A -y2 15-8. Del balance de masa se obtiene: en el equilibrio: 92 .

Este proceso está descrito por el modelo en estado no estacionario del proceso.20).9 g En la adsorción intermitente puede considerarse el proceso de transición del sistema de su estado inicial hasta su estado final.Adsorción de Inmunoglobulina G (ImG) en protema A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sistema intermitente.2 g de soluto/litro del balance de masa. La adsorción se efectúa utilizando proteína A inmovilizada en una matriz de Sefarosa B en una solución amortiguadora al 0.96 A/? = 28 Kg/m 3 Proteína: MA = 150. #2 = 0. el cual como ya se ha mencionado depende del mecanismo controlante de la adsorción.019 mg/ml q0 = 40 mg/ml Dp = 6x 10~12 m2/s . CAPÍTULO 7.348 y de acuerdo a la recuperación deseada. Datos: Adsorbente: dp = 90 x 10'6 m GÍ = 0.. En el siguiente ejemplo se revisan algunos de los casos particulares de la adsorción intermitente.0174 g de soluto ¡g de adsorbente y-2 = 0. S = 206.1 M de tris HC1 a pH=7 y a 25° C. Ejemplo 7.5.000 daltons Kd = 0. Se desea predecir la variación de la concentración de ImG en un sistema experimental intermitente (Figura 7. ADSORCIÓN Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la intersección de la curva de operación con la de equilibrio. El equilibrio del sistema es tipo Langmuir.

4.. . DISEÑO DE ADSORBEDORES 349 Adsorbente en suspensión Filtro Baño de agua agitado Figura 7.20: Sistema experimental de adsorción intermitente con agitación.

n Q1 0.5 x 2 771 S -4 DAB = 5.__ = 9. [m2/s] T: Temperatura absoluta. A/9 es la diferencia de densidad entre el adsorbente y el líquido y m es la viscosidad del líquido.5 mg/ml El coeficiente de transferencia de masa de la película puede ser estimado en este sistema intermitente utilizando la siguiente correlación: .4 x 10~15 x 298 9.350 CAPÍTULO 7. [°K] MA'. en este ejemplo se desarrolla una solución empleando tres modelos diferentes. Primero se pueden realizar los cálculos comunes a las tres soluciones.5 x 10~n - .Masa molecular de la proteína.31 / 1*1 \PPD AB donde pp es la densidad del adsorbente. Solución: Para mostrar el uso de modelos cinéticos.99 yA = 0. a) Cálculo de la difusividad: 1 T DAB = 9.5 x 10~4 Kg/m . [Daltons].s e = 0. 1. ADSORCIÓN Solución: p = 1000 Kg / m3 HL = 9.4 x 10 -15 donde: i: Difusividad molecular. La difusividad de la proteína puede ser estimada por medio de la siguiente correlación empírica: .

5.31 351 1028 x5.+ 90 x 10-6 m + 0. B y D.5 x líT11 =£ kL = -2. se tiene: (D) . de tal manera que: q = 80</* el balance de soluto en el líquido es: (A) eV J = -RV el balance de soluto en el adsorbente es: (B) (C) la transferencia entre las fases: R=kLa(y-y*) combinando las expresiones A.Equilibrio lineal y control de la película. DISEÑO DE ABSORBEDORES b) Cálculo del coeficiente de transferencia de masa: 2 x 5. En esta solución se supone un equilibrio lineal y que el coeficiente de transferencia de masa de la película controla la rapidez de la adsorción..JA. ' La relación de equilibrio está dada por una aproximación lineal al equilibrio en el rango O < y < 0.5 x 10-11 = X (1028 £f) kL = 4 x 1(T6 6 Solución 1.

q = o y =y . ADSORCIÓN \ combinando B y C e integrando con las condiciones: y = yA . Cálculos Numéricos: = 6(1~ up 6(1 -0.66 x 10~ 3 5~ J TTL . kLa \ kLayA (F) í integrando ( G ) con las condiciones: t=O y = yA se puede obtener: c ( donde: e c _Bt kLa K(l-e) (H) (> La ecuación (H) describe la variación de la concentración de soluto en la fase líquida conforme transcurre el tiempo de adsorción t. AL a .352 CAPÍTULO 7.99) 90 x 10~6 m a = 666 m"1 kLa kLa = = 4 x 10~ 6 — x 666 m"1 s 2. q = q se obtiene la linea de operación. j \ \ q = 7f~y(^ ~ y) sustituyendo (F) en (E) y rearreglando: dy .

66 x 80x(l-.99) C = 1. En esta solución se considera que el equilibrio es de tipo Langmuir y la resistencia controlante está localizada en la película de líquido. se presentan los resultados para ki = 1 x 10 m/s para fines de comparación.447 ezp(-6.4.011 x 10~3 s~l Utilizando (J): (2.66 x 10~3 mg/s .99 2.011 x 10'3 í) ^ «E r^r ^ p^ sas?- En la Figura 7.276 + 0. DISEÑO DE ABSORBEDORES Utilizando (I): 2.66 x 10~3s~1)(0.224 ezp(-6.011 x 10~3 ¿) g k b t* y = ' — = 0.mi _ y (H) queda expresada como: 0.5 mg/ml) 80(1 -0.21 se muestra la variación de la concentración de soluto en la fase líquida en función del tiempo de adsorción..66 x lO"3^1 0. tal y como lo predice la expresión anterior con ki — 4 x 10~6 m/s.Equilibrio de Langmuir y película controlante.99) 353 + B = 6.7. Solución 2. La expresión de equilibrio está dada por: q y = °* El balance global de soluto: 1 —£ .553 + 0. Asimismo.

a) fc¿ = 7 x 10~7 771/5 b) &L = 4 x 10~6 m/s La velocidad de transferencia de soluto por: R = kLa(y . Solución 3. En la Figura 7.y*) El balance de soluto entre las fases por: dy (C -y Las ecuaciones A. pueden ser resueltas utilizando un métod de integración numérico.Adsorción intermitente de ImG... para obtener la variación de la concentracic con el tiempo. Equilibrio lineal y película controlante. B y D.9 0.0 200. en lugar del valor obtenido median la correlación.Equilibrio tipo Langmuir y resistencias cornt nadas poro y película.354 CAPÍTULO 7.0 t (min) Figura 7.21: Ejemplo 7. con el objeto de aproximar más el modelo a los dat< experimentales. En este modelo se supone que la velocidad de adsorción está conti .5.22 se muestra la curva obtenida utilizanc un valor de ki = 7 x 10~7 m/s.7 I 120. ADSORCIÓN 0.0 I 160.

0- "T" 50 1 I ' ' ' ' I ' ' 100 150 M' 200 Tiempo (min) Figura 7. El balance de soluto entre las fases en la superficie del adsorbente: .4- 0. Equilibrio tipo Langmuir.22: Ejemplo 7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 355 0.7. 1989.4..yl dt La relación de equilibrio: (C) .2- 0. Modelo y datos experimentales. relacionadas por una expresión tipo Langmuir. se supone que en la superficie del adsorbente la concentración de proteína en el líquido está en equilibrio con la concentración de proteína en el sólido. lada por la transferencia de la proteína a través de la película que rodea la partícula del adsorbente y por la difusión efectiva de la proteína al interior de los poros del adsorbente.8- y/y* 0. Asimismo. Datos de: Horstman y Chase. El balance de soluto al interior del poro es: '•»-& (A) donde Ra es el radio de la partícula. Cinética lineal.5.Adsorción intermitente de ImG.\r-Ra = ki(y — yi] \r=¡ 3r El cambio de la concentración en el seno del solvente : P (B) dy £-7T = -kia(y .

dqj Kdq0 2 (H) d dyi _ dt e (K¿ + y i) dt 2 (I) combinando el resultado anterior con la ecuación (A). y.-)2' combinando las ecuaciones (G) y (H). 2 dyi rdr l - c - d r Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensiona utilizando el siguiente cambio de variables: T = Dpt Efectuando el cambio de variables se obtiene el siguiente sistema d< ecuaciones: . ADSORCIÓN y las condiciones iniciales y de frontera. r\ 7 r\ r =0 (F) v ' dt dyi dt (G) derivando la ecuación (D) dqi Kdq0 dyt (Kd + y. 7^ = 0 or de acuerdo a la regla de derivación de la cadena.356 CAPÍTULO 7.

. 2 dr z dz (K) (L) dw dr -3(l-e)NSH e (w — Wi (M) donde NSH es un grupo adimensional dado por: NSH = D (N) Este sistema de ecuaciones puede ser resuelto por integración con diferencias finitas. 1989. Equilibrio Langmuir y resistencias combinadas película y poro.Adsorción intermitente de ImG.23 se presenta la curva obtenida mediante este método.4.4-4 > I' ' ' ' 100 r 1! l' 200 Tiempo (min) Figura 7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 357 Película-Poro 0.23: Ejemplo 7. .5. Datos: Horstman y Chase. En la Figura 7.7.6- y/yA I 0.

Una vez que se alcanza cierta concentración de soluto en la corriente de salida. En una primera aproximación para obtener el modelo del proceso del proceso. Una aplicación particular de este arreglo es en el procesamiento de caldos de fermentación completos (con una filtración gruesa previa en cribas vibradoras). donde inicialmente se coloca el adsorbente en solvente puro.Durante la operación el adsorbente se mantiene en el interior del tanque y la corriente agotada se retira continuamente del tanque . un flujo F de solución con una concentración de soluto y A.24: Sistema de adsorción tipo tanque agitado continuo. 7.24) alimentando al tanque adsorbedor. ADSORCIÓN Figura 7.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo Otro tipo de arreglo utilizado en procesos de adsorción industriales es el adsorbedor tipo tanque agitado con alimentación continua.4. La operación se efectúa (Figura 7. se interrumpe la operación y se recupera el soluto concentrado en el adsorbente.358 CAPÍTULO 7. se puede considerar que el tanque está perfectamente agitado. ya que no presenta los problemas de taponamiento con la biomasa como cuando se trata de procesar estos caldos directamente en columnas de lecho fijo. de tal manera que la concentración de soluto a la salida es igual a la .

Fuente: Belter et a/. si la adsorción es muy rápida. Por otro lado. hasta que se alcance la saturación del adsorbente. son ambas funciones del tiempo de operación. Para un adsorbedor continuo tipo tanque agitado el modelo que . En este sistema la cantidad de soluto adsorbido sobre la superficie de adsorbente varía con el tiempo. lo que se traduce en una operación en estado no-estacionario. Copyright ©1988. En el caso general la velocidad de adsorción es intermedia entre los dos casos descritos anteriormente. una vez ocurrido lo anterior la concentración aumentará siguiendo un patrón muy semejante al caso en que no existe adsorción. 1988. De acuerdo con la figura aún en ausencia de adsorción. la concentración de soluto en la corriente de salida varía con el tiempo. DISEÑO DE ADSORBEDORES 359 y(t) Adsorción rápida Tiempo t Figura 7. concentración de éste en la solución dentro del tanque.4. El comportamiento cualitativo del sistema puede representarse de acuerdo a la Figura 7. la concentración de soluto en la superficie del adsorbente q y la concentración de soluto en la solución de salida t/. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechos reservados. Por lo tanto.7.25: Concentración en el líquido de salida de un adsorbedor continuo tipo tanque agitado. la concentración de soluto en la solución será baja por un cierto tiempo.25.

2. la velocidad de adsorción depende de los mecanismos controlantes de la transferencia de masa.360 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN describe la adsorción. El flujo de alimentación es F. La velocidad de adsorción de soluto por unidad de volumen de la mezcla de adsorción es R.45) donde k es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa. el balance de masa. y es la concentración de soluto en el seno del líquido. y ?/* la concentración . debe integrar la isoterma de adsorción. y A y y son las concentraciones de soluto a la entrada y la salida. De tal manera que la expresión para R depende del sistema particular y debe ser determinada experimentalmente. a es el área de adsorbente por unidad de volumen de mezcla. Como se presentó en sección 7. El balance de masa del soluto en la fase líquida se puede expresar en palabras como: velocidad de acumulación — velocidad de entrada — velocidad de salida — velocidad de adsorción £V< = F(yA dt ~y)-VR (7-43) (7. la expresión de la rapidez de la adsorción y las condiciones de frontera. Para este caso la velocidad de transferencia de masa está dada por: R = ka(y-y*) (7. es el caso donde la velocidad de adsorción puede ser aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorción es lineal. El caso más sencillo que permite obtener un modelo mediante integración analítica. respectivamente. La fracción de volumen de líquido ( sin incluir el líquido en los poros) al volumen total de la mezcla es e.44) el balance de soluto en el adsorbente: V(l-e)— = VR donde V es el volumen de la mezcla (solución y adsorbente) en el adsorbedor.

(7.Recuperación de antibióticos por adsorción.. se desea analizar la posibilidad de una recuperación directa del producto por medio de adsorción iónica en un arreglo tipo tanque agitado continuo.46) La solución de las ecuaciones (7.7.4. Como alternativa a los procesos tradicionales de recuperación de antibióticos. El adsorbente empleado inicialmente está libre de soluto y su constante de equilibrio lineal es 110. En un estudio piloto se desea estimar el tiempo para obtener el 90% de recuperación de un antibiótico de una corriente de alimentación que fluye a razón de 3 l/h con una concentración de 1 mg/l de antibiótico. La relación de volumen de líquido a .rl ^ (7.6.46) es: y* -y yA r erii r2 . La isoterma de adsorción lineal se puede expresar como: q = Ky* (7. en la expresión anterior: 2A -Br2 = 2A A = 1 B = 4+ ^ d + (l-e)K = fcaF eA'(l-e)V Ejemplo 7.45 ) y (7.44). DISEÑO DE ABSORBEDORES 361 hipotética de líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente. (7. donde el primer paso consiste en una filtración para la eliminación de micelio y esporas.47) que es la la expresión de la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción.43).rl * r T2t r2 .

El volumen de reacci es de un litro. I ^ "I 0.8 2 B = 84.126 /T1 r2 = -84.4 ft-*)(3 {) •*-* /.59 h~ ) ± v/(84. Jo FyÁdt combinando la expresión anterior con la ecuación (7.59 /i' ) .JO' V i .63 /i' ) i 2 rj = -0.362 CAPÍTULO 7.4 h~l.8 (I -0.46 /T1 Se puede definir el grado de recuperación mediante la siguiente presión: .8)(l/) 0.63 h~2 Asimismo r\ y r2 están dadas por: l 1 2 2 Y . Como primera aproximación se puede considerar que la resisten< controlante es la de la película con un kia = 62.rrz-r! + 115 f f ^ r -r 2 2 ./„' Fyoíf Recuperación = — . B y C están dadas por: A = 1 3¿ 62. /„' Fyxdf .. ADSORCIC volumen total que va a ser empleada es de 0.8)110 C = 10.47). .-> / ~ V \ / 1 1\ I /-i /-.59 /T (62. /o* efectuando la integración.4 h~l í (0. Solución: Las constantes A. -==_ (-84.8. JO Recuperación = f'dt.4(1)(10.

En tin tiempo intermedio (t -f di] cuando aún no se agota la columna. _ t T .1 r 2 . La parte de la figura llamada "Lecho de Adsorbente" muestra como se va cargando de soluto el adsorbente del lecho conforme transcurre el tiempo.4. .e .75 h 7. En la descripción de la adsorción en columna se utilizan gráficas de la variación de la concentración de soluto la salida de la columna con el tiempo. U • Í7 . se interumpe la operación y se recupera el soluto concentrado.f 7. A esta técnica también se le conoce como Cromatografía Frontal.r 1TV ) 2 2 t/ sustituyendo valores. DISEÑO DE ADSORBEDORES 363 n 2— (e r i t -1)4.26 se presenta un esquema de adsorción en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada sólo para efectos explicativos). Durante su paso por la columna el soluto es adsorbido en el lecho y la solución agotada es obtenida en el fondo de la columna.3 Adsorción en Lecho Fijo La adsorción en lecho fijo es la operación más empleada a escala industrial para la concentración de caldos . Una vez que la concentración de soluto a la salida alcanza una cierta concentración. Por la parte superior de la columna se alimenta la solución que contiene el soluto de interés. Este tipo de operación se efectúa en columnas empacadas con adsorbente.1)1I .4.(r -r!)V r2t . se pueden distinguir tres zonas en el lecho de adsorción: .(e ) / Recuperación = -—-.440f ) '~~ t de donde: t — 1. Curva de Ruptura En la Figura 7.95(1 .r ."~~~ 7.8 x 1Q~ 5 (1 .e"0-126*) + 1.8 . Estas gráficas son llamadas curvas de ruptura.

7. ADSORCIÓN . (g) (n) Figura.t) Tiempo Lecho de Adsorbente Solución de Salida t<t (a) (h) (b) ZE ZTM ZNU (c) 0) (d) (k) (e) (I) = t« (m) t>t. .26: Adsorción de soluto y curva de ruptura en columnas. XA . X(L.364 CAPÍTULO 7.

í). El tiempo ÍR marca la terminación del ciclo de adsorción. Este valor es la máxima concentracón de soluto permitida en la solución de salida y representa las pérdidas de soluto tolerables en el proceso. DISEÑO DE ABSORBEDORES 365 La Zona de Equilibrio (ZE) donde el adsorbente se encuentra en equilibrio con la concentración de soluto y A de la solución de entrada. de tal manera que se ha incrementado la concentración de soluto en la solución de salida alcanzando el valor de diseño ya. Conforme transcurre la adsorción la ZE va ocupando toda la columna.14. donde la funcionalidad / depende del tipo de equilibrio. La Zona No Utilizada (ZNU) donde no se ha presentado adsorción. En la misma Figura 7. de tal manera que la concentración de soluto en el adsorbente es igual a la que tenía inicialmente qx. es muy baja e igual a la mínima detectada por el adsorbente yx (para fines prácticos esta concentración puede tomarse como cero). En el tiempo de ruptura ÍR la Zona de Transferencia de Masa ha alcanzado la salida de la columna. la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y ( L . En caso de continuar la operación la concentración de soluto en la solución de salida seguirá incrementándose hasta igualar la concentración de soluto y A- . conforme transcurre el tiempo de adsorción. Se pueden ditinguir tres eventos importantes en esta parte de la figura: Para tiempos menores a ÍR cuando la Zona de Transferencia de Masa aún no llega a la salida de la columna.26 la parte "Solución de Salida" muestra como varía la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y(Z/. la ZTM se acerca a la salida de la columna y la ZNU tiende a desaparecer. En esta zona la concentración de soluto en el adsorbente es constante e igual a q = f(yA).¿) . La Zona de Transferencia de Masa (ZTM) donde la concentración de soluto en el adsorbente varía a lo largo de la zona.

Los datos de equilibrio muestran que q0 — 110 g/l.v-^iJU..^ librio del sistema que se trate. ...'.-.Adsorción en una columna ideal. como de los mecanismos de transporte involucrados..„-.^^.^. La forma particular que toma la curva de ruptura depende tanto del tipo de equi* ^f^^.---. Solución: El balance de masa global en la columna es: FyAAt = q0S despejando Ai y sustituyendo valores se tiene: Ai = Ai = Fy. t ) vs ¿..7. y ( L .27 se presenta un esquema de la columna y de la curva de ruptura para este ejemplo.. ní (10 //mtn)(6 g/l) Ai = 260 min Ai = 4.Adsorción de lisina.\ Suponer que en el rompimiento toda la columna está en equilibrio con la solución de entrada.-.^^^^ .... utilizando adsorción por intercambio iónico.•*•>*•*<••.>..•**-• ¡J -.í-^v*í--v --•'-•'*•-'*'-•--..-^J. La columna está empacada con 10...•-. ADSORCIÓN La curva que describe la concentración de soluto en la solución de salida en el tiempo..56 g/g (Payne. Se desean producir 8000 ton/año de lisina a partir de un caldo que contiene 20 g/l de este aminoácido. Ejemplo 7..•••"-..8. O Calcular la duración del ciclo de una colun/na que opera con un flujo dé^flO l/min de una solución que contiene o g/l de estreptomicina. 1989).--=.*. ** Ejemplo 7...366 CAPÍTULO 7..000 <?jde una resina cationica cuya adsorción máxima es: q0 = 1.v3-..-. . se llama Curva de Ruptura. .i r é®4 ¿f.3 h En la Figura 7. <t:tr».-. '•• .

t) F=10l/min y A -6g/i Curva de ruptura ideal o -4.27: Columna y curva de ruptura para Ejemplo 7.7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 367 y (i.3 Tiempo (h) Figura 7. í .7.4.

estimar las pérdidas y determinar el tiempo ¿# de cada . ADSORCIÓN Estimar las dimensiones volumétricas de un sistema de 3 adsorbedores en carrusel. permite diseñar columnas para lograr ci recuperación. Se estima que el ciclo tiene una duración de 4 horas (adsorción. en el cual cada lecho es lavado y eluído una vez que está completamente agotado. 310 atas oír» año J" v A. JdLB£^^ %Ja-£ü£3¿a-Jde^^ nálisis frontal)..37 x 104 {_ 20? x n / ñó~? S = 9763 * de r**ina h c) Cálculo del volumen del adsorbedor: V = St V = 9763 | x 4 h h V = 39. Solución: a) Cálculo del flujo total a procesar (3 turnos 310 días laborables)..37 x 10 l/h b) Cálculo de la cantidad de resina necesaria en proceso: 6 C* __ ~ 5. producción £4 -—- . dia i 24 h 20 f 4 F = 5. elución y lavado). 000 / Se requieren 3 adsorbedores de 39 m3 cada uno.368 CAPÍTULO 7. o . .. yA 171 _ _ _ O S A. 1 U 9 v Ifl ano 3 - v A.

Para caracterizar la curva de ruptura se seleccionan dos concentraciones. 1982). . Existen diferentes métodos para predecir la forma de la curva de ruptura entre los cuales se encuentran: . mientras que los métodos tercero y cuarto si lo están. en el tiempo IR . Análisis Aproximado Este método es especialmente útil para isotermas de adsorción favorables.9y¿ donde y A es la concentración de soluto en la solución a la entrada. DISEÑO DE ABSORBEDORES 369 ciclo. Esta variedad de métodos se debe principalmente a que las expresiones matemáticas de las curvas de ruptura son difíciles de manejar en algunos casos. Bajo estas condiciones.Los métodos basados en la teoría cinética. .Los métodos basados en la teoría de equilibrio Los dos primeros métodos no están basados en la obtención de modelos a partir de relaciones de equilibrio y balances de masa. .4.Los métodos aproximados.Los métodos basados en la teoría de platos. así como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para ia fase de adsorción (Yang y Tsao. de ruptura que es la máxima concentración que se puede tolerar a la salida.28). se supone que la adsorción se desarrolla formándose una zona de transferencia de masa dentro de la columna con un perfil de concentración constante que viaja a lo largo de la columna (Figura 7. Una guía general es considerar: yR = Q.lyA ys = 0. La concentración yp.7. y la concentración y3 que corresponde a la concentración a la salida cuando el lecho se considera agotado. Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve a lo largo del lecho con una velocidad constante i?.

.28: Adsorción con patrón constante. ADSORCIÓN Concentración d« la solución de alimentación = (c) Zona de adsorción i Zona de adsorción Concentración del efluente = tiempo Figura 7.370 CAPÍTULO 7.

51) IR Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fracción de lecho que está utilizado cuando termina la operación o sea en el tiempo ¿#. El tiempo que tarda en salir la ZTM de la columna es A¿ = t$ — tp_. Combinando las expresiones anteriores se obtiene: Í (7. Por lo tanto se puede establecer que la longitud de la columna que está saturada Zs en el tiempo IR es : Zs = MR .14.50) La longitud de la ZTM ZA está dada por: ZA = L^ (7. de tal manera que : En la zona de saturación: q = f(yA) y en la ZTM : donde la funcionalidad dependerá del tipo de isoterma. En base a lo anterior la fracción de lecho utilizado O está dada por: f(yA)L ¡(y*) .49) RJ (7. considerando simétrica la curva de ruptura.48) (7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 371 existe una zona en la parte superior de la columna donde el adsorbente está saturado y una zona en el fondo de la columna donde se localiza la ZTM.i?A¿ donde ti = — IR y L la longitud de la columna.

ADSORCIÓN 0=1 -2* (7 52 ' > La fracción de lecho utilizado dada por la ecuación (7. Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7. . Teoría de Platos Cuando se utiliza la teoría de platos la columna se modela mediante una serie de etapas en equilibrio como se muestra en la Figura 7.Velocidad de salida de soluto . el balance de masa de soluto en la fase líquida en la etapa n.29. di n dt (7. Esto conduce al diseño de columnas poco esbeltas con poca caída de presión en Jas cuales debe asegurarse una distribución uniforme del líquido.29. En este proceso.Velocidad de adsorción de soluto y por medio de la ecuación : n. El empleo de esta teoría permite diseñar columnas en forma muy sencilla.372 CAPÍTULO 7. la longitud de la columna y la velocidad de alimentación deben permanecer iguales en ambas escalas para mantener el mismo patrón de adsorción. en su forma original esta teoría es de uso limitado por su incapacidad de predecir el número de etapas o la altura real de cada etapa y el efecto del cambio de las condiciones de operación sobre el comportamiento de la columna. De acuerdo a dicha figura la cantidad de adsorbente está fija en cada etapa y el líquido fluye a través de todas las etapas transportando al soluto. Además.53) donde: n: Número de etapa. Una limitación del empleo de la teoría de platos es que sólo puede ser utilizada para sistemas con isotermas lineales.52) debe ser obtenida experi mentalmente y puede ser utilizada para escalamiento. puede expresarse en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en el líquido = Velocidad de entrada de soluto .

29: Teoría de platos en adsorción. Etapa 2 Figura 7.4. DISEÑO DE ADSORBEDORES 373 Etapa F 1 y. .7.

En el tiempo t = O.55) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: .1 .374 CAPÍTULO 7. yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n (masa de soluto por volumen de solvente). F: Flujo de alimentación (constante entre etapas para soluciones diluidas). La ecuación (7.55) (7.53) y (7. qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n (masa de soluto por volumen de adsorbente). El modelo supone que cada etapa está en equilibrio de tal manera que para isotermas lineales: qn = Kyn combinando las ecuaciones (7.N t/( al i mentación) = y A .4.En cualquier tiempo t=t. del líquido + vol. ADSORCIÓN V: Volumen de la etapa (vol. 2.yn) (7.c)K)V}$ = F(yn. .E)K)V] o bien en términos del volumen de lecho Vc = NV.54) se obtiene: l(e + (I. La solución del anterior sistema de ecuaciones se facilita definiendo un tiempo adimensional mediante la siguiente expresión: T = Ft {(e + (1 . e: Volumen de líquido por volumen de etapa..3. . adsorbente).54) donde el término en el paréntesis cuadrado de la izquierda de la expresión anterior representa un volumen hipotético.. yn — O para n = 1.

59) tiene una media r0 = N y una desviación estándar a A = yN cuando n — N (a la salida de la columna).59) De acuerdo a la definición de media y desviación estándar.55) queda expresada como: dyn La solución de la ecuación (7.e)K]Vc donde N es el número de etapas. La ecuación (7.7._ dr ~ VA exp 1 T -T ' (7.58) se puede encontrar que la expresión (7. la distribución de Poisson se aproxima a una distribución normal. con ayuda de la ecuación (7. conduce a una expresión de la siguiente forma: (7.59) para el caso de n = N.60) donde: .4. DISEÑO DE ADSORBEDORES 375 T — NFt ((e + (\ . Puede observarse en la Figura 7. La forma integrada de la ecuación (7.57) La ecuación anterior puede ser expresada de forma más compacta manejando su forma diferencial: dyn dr (n-1)! (7.56) está dada por: (7.58) que representa una distribución de Poisson. entonces se puede efectuar la siguiente aproximación: dyn _.56) yn = (7.30 que conforme se incrementa el número de etapas.

io- 0.30: Aproximación de la distribución de Poisson a la distribución Normal. .00 \ 50 100 I 150 Figura 7.376 CAPÍTULO 7.5 N= 10 o.05 - = 100 0. ADSORCIÓN 0.

438 0.698 0.671 0. r} vs r para el caso de N = 100.664 0.923 0.717 0.318 0.711 0.642 0. 0.389 0.685 0.146 0.555 0.859 0.611 0.994 0.877 0.475 0.736 0.399 0.776 0.993 0.990 0.297 0.2 0.952 0.934 0.546 0.588 0.7 0.990 0.5 1.807 0.986 0.705 0.998 0.862 0.3 0.992 0.847 0.975 0.993 0.090 0.4 1.409 0.308 0.887 0.997 0.958 0.329 0.503 0.890 0.759 0.787 0.428 0.913 0.994 1.179 0.765 0.234 0.563 0.529 0.190 0.825 0.056 0.896 0.287 0.447 0.977 0.940 0.742 0.724 0.918 0.971 0.962 0.986 0.135 0.981 0.976 0.989 0.979 0.7 1.957 0.3 1.485 0.949 0.124 0.955 0.4.792 0.944 0.991 0. DISEÑO DE ADSORBEDORES Tabla 7.983 0.255 0.000 0.023 0.068 0.112 0.6 0.580 0.902 0.359 0.9 2.0 1.999 0.985 0.992 0.932 0.31 se presenta la curva de y(L.649 0.988 0.855 0.905 0.494 0.079 0.7.244 0.990 0.980 0.930 0.839 0.954 0.994 0.916 0.884 0.995 0.4 0.866 0.899 0.419 0.457 0.984 0.921 0.843 0.947 0.989 0.991 0.938 0.975 0.821 0.873 0.446 0.034 0.995 1.982 0.0 377 0.754 0.834 0.212 0.000 0.966 0.538 0.965 0.619 0.9 1.928 0.781 0.910 0.369 0.960 0.987 0.984 0.657 0.870 0.893 0.994 1.3.908 0.951 0.988 0.993 0.961 0.730 0.2 1.999 0.678 0.8 1.045 0.771 0.972 0.978 0. En la misma figura se presenta la curva para la derivada de la función: _1_ VA dy(L.3: Valores de la función error Erf(x).967 0.r) dr La ecuación (7.60) puede ser expresada en función del tiempo real utilizando la definición de T para obtener: .987 0.604 0.340 0.797 0.748 0.802 0.349 0.627 0.1 1.0 0.995 1.223 0.936 0.973 0.266 0.992 0.964 0.011 0.5 0.8 0.946 0.925 0.968 0.991 0.974 0.000 0.634 0.000 0.880 0.942 0.1 0.512 0.6 1.276 0.201 0.157 0. En la Figura 7.521 0.168 0.379 0.982 0.995 1.691 0.812 0.830 0.000 0.970 0.596 0.000 y Erf es la función error dada por: -"*dri Los valores de esta función simétrica están dados en la Tabla 7.851 0.101 0.980 0.572 0.816 0.

ADSORCIÓN i — Figura 7. .378 CAPÍTULO 7.31: Curva de ruptura por teoría de platos con N=100.

4. con este propósito suelen combinarse frecuentemente los resultados de la teoría de platos con los de la teoría cinética que se presenta en la siguiente sección.Velocidad de salida de soluto por convección -f.32. Considerando una sección de una columna como la que se muestra en la Figura 7. Teoría Cinética Los modelos de columnas de adsorción que se enmarcan dentro de la teorías cinética se desarrollan mediante la combinación de balances de masa. el balance de soluto en la fase líquida en un elemento de volumen puede ser expresado en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en la fase líquida = Velocidad de entrada de soluto por convección .61) o bien como: (T 4\ y(M) = y 1 + Erf t-tt 22<0 (7.63) donde HEPT es la altura equivalente de un plato teórico (de sus siglas en inglés).Velocidad . La ecuación (7.62) describe la curva de ruptura que predice la teoría de platos.Velocidad de entrada de soluto por dispersión .62) \/Ñ donde la desviación estándar a está dada por 4=. La teoría de platos no permite predecir la forma de la curva de ruptura cuando cambian las condiciones de operación. relaciones de equilibrio. DISEÑO DE ABSORBEDORES 379 (7. Sin embargo. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experimentales y la determinación de los parámetros hipotéticos N y HETP dados por la ecuación : HETP = - (7. relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones iniciales y de frontera del sistema.

t) Figura 7. .32: Componentes del balance de soluto en un elemento d< volumen de una columna de adsorción. ADSORCIÓN Entrada de A por convección Entrada de A por dispersión Az Adsorción de A Acumulación de A Salida de A por convección Salida de A por dispersión y(L.380 CAPÍTULO 7.

2 En los siguientes párrafos se presentan algunos modelos particular de la teoría cinética. La diversidad de modelos existentes para lechos empacados de a cuerdo a la teoría cinética.). Modelo Cinético : Equilibrio no Lineal Favorable y Fuer Impulsora Lineal. DISEÑO DE ADSORBEDORES 381 de salida de soluto por dispersión .64). Además. etc. se deriva por un lado de los diferente mecanismos que pueden controlar la velocidad de transferencia de mas entre las fases (película. es dec de la forma que adopta el término R de la ecuación (7.) qi también introduce variabilidad al modelo.64) 2 dt dz dz donde E es el coeficiente de dispersión axial basado en el área transversal del lecho (este coeficiente debe distinguirse del coeficiente D el cual está basado en el área transversal sólo del líquido). Langmuir..4). se obtiene la ecuación diferencial que describe el balance de soluto en una columna: dy _ JET. el modelo puede no considerar los efectos de flujo no ideal contemplados en el térmii de dispersión axial (Tabla 7. En un sistema isotérmico y despreciando los efectos radiales este balance puede ser escrito como: Ai dz Edy A dz dividiendo entre AV = A&z y tomando límites.En algunos casos la acumulación en la (ase líqui . etc.7. R es la velocidad de transieren cía de masa entre las fases por unidad de volumen del lecho (sólido -\ líquido). resistencias combinadas. y por oti lado de la forma de la curva de equilibrio (lineal. v es h velocidad superficial del fluido (F/A).4. d y _ v— _ ft ± (7.Velocidad de adsorción de soluto por el sólido. poro.

68) . A continuación se presentan algunos casos particulares: Caso 1 : Control de la transferencia en la película.65).4: Algunos factores a considerar en un modelo cinético de adsorción. En estos casos el retardamiento de la curva de ruptura sólo obedece a los mecanismos de transferencia de masa.64) se puede escribir como: r> -v— = R oz (7..Si la velocidad de transferencia de masa está controlada sólo por la película de fluido que rodea la partícula de adsorbente entonces.66) y (7.y*) (7. (7. R = kLa(y .382 CAPÍTULO 7.67) combinando las ecuaciones (7. Tipo de Equilibrio Lineal Favorable Desfavorable Irreversible Resistencia Controlante Poro Superficie Película Combinadas Efecto Mezclado Flujo ideal tipo tapón Flujo tapón con dispersión axial es mucho menor que la acumulación en la fase sólida (equilibrios favorables) y la dispersión es despreciable.v— = kLa(y -y*) dy (7. Bajo estas condiciones la ecuación (7.65) El balance de masa del soluto sobre el adsorbente se puede expresar como: a — £)TT.67) se obtiene el siguiente par de ecuaciones: .= -/t \ a r~> (7.DO) /i-r /?/>\ El término R de las ecuaciones (7.66) sólo depende del mecanismo controlante de la transferencia de masa. ADSORCIÓN Tabla 7.65) y (7.

<//?: Concentración de referencia del soluto sobre el adsorbente. DISEÑO DE ABSORBEDORES 383 (I .y ' ) (7.K T = -y — y VA - 2M y = J_ 9* donde: £: Distancia axial adimensional.7. Las ecuaciones (7.25): . X' Concentración adimensional de soluto en el líquido.4. yA' Concentración de soluto en el líquido a la entrada de la columna..c) = kLa(y . Y: Concentración adimensional de soluto en el adsorbente. T: Tiempo adimensional medido a partir de que la solución alcanza el punto z.En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto en el seno del sólido y de acuerdo a la ecuación (7.69) Estas ecuaciones pueden expresarse en forma adimensional (solución universal) utilizando el siguiente cambio de variables: zkLa v kLa (t .68) y (7.69) adimensionalizadas se expresan: Caso 2 : Control de la difusión del soluto en el seno del sólido del adsorbente.

e)^sksa(q* .= (\-e}il>sksa(q*-q) (I .65).65).384 CAPÍTULO 7.71) conduce a: -v^.r ' (7 74) ' Caso 3 : Control de la difusión del soluto al interior del poro.q) (7.73) estas dos ecuaciones pueden ser expresadas en forma adimensional con: = ipsksa [t \ . (7.75) conduce a: dy ^pkpa(q* .e)^t = (I .76) .32): R = ^*y q) QR/yA (7..66) y (7.En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto al interior del poro del adsorbente y de acuerdo a la ecuación (7. ADSORCIÓN R= (l-e)VaX<7*-<?) (7. ( Z£ -v x = Y = q/qR obteniéndose la siguiente expresión : -| = f = ( y *.72) (7. (7.71) La combinación de las ecuaciones (7.75) La combinación de las ecuaciones (7.q) v-— = (7.66) y (7.

Y) (7.4.78) c/c.79) Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional utilizando el siguiente cambio de variables : zk¿a í = T = v (<-V tí VA .v— = kda(y .y*) uz y el balance de soluto sobre el adsorebente como: (7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 385 1 n- j ~ (7.77) Las dos ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional con: zijjpkpd í = T — JM X Y = = obteniéndose la siguiente expresión : = (y* .7. C/T Caso 4 : Control de la dispersión. la ecuación (7.Si el mecanismo controlante de la transferencia de masa es sólo la dispersión axial.65) se puede aproximar a: dy ..

utilizando un coeficiente global de transferencia. como en el caso de las operaciones que se realizan en tanques. De acuerdo a lo anterior: NTUL = (7. permiten definir el concepto de número de unidades de transferencia de una columna de adsorción de acuerdo al tipo de mecanismo controlante. ADSORCIÓN \ y x = — i Y = — ' obteniéndose la siguiente expresión : _9x dí ' El análisis presentado para cada uno de los casos anteriores puede ser extendido para el caso en que el mecanismo controlante sea la reacción de superficie. que es una medida de la dificultad de la operación.85) .386 CAPÍTULO 7. Número de Unidades de Transferencia (NTU). Debido a lo anterior estas columnas se caracterizan utilizando el número de unidades de transferencia. Asimismo el análisis puede extenderse para el caso donde exista una combinación de mecanismos controlantes.82) yA N = z^a v 4) NTUd = — v (7..En las columnas de contacto diferencial no existen etapas reales de contacto y separación. como se ha planteado anteriormente este mecanismo generalmente no es el controlante. Sin embargo. Las ecuaciones adimensionales de cada uno de los cuatro casos anteriores. Este número se define como la expresión que adimensionaliza la ecuación de balance.

las concentraciones adimensionales de la curva de ruptura son función de f y r. El mecanismo controlante es aquél cuya NTU sea el menor.p y c/. estas ecuaciones han sido resueltas para algunos casos particulares.86) yA p (l Wzi/>. (7. Dentro de éstos se puede destacar el caso desarrollado en la literatura para equilibrios favorables llamado "Patrón constante" (Hall et a/.87) (7. . DISEÑO DE ADSORBEDORES 387 donde los subíndices L.89) zv Los valores de NTU pueden ser estimados con las ecuaciones anteriores y con correlaciones para cálculo de parámetros de acuerdo a la geometría del sistema y a las condiciones de operación. es decir: r ) (7-90) No existe una solución general para estas ecuaciones diferenciales. Si se utilizan las correlaciones (7.88) (7.36). Asimismo se puede citar los resultados que se obtienen cuando la curva de equilibrio es lineal o cuando se usa el modelo de adsorción a contracorriente.D. 1966). En términos de los grupos adimensionales anteriores. respectivamente. las ecuaciones anteriores pueden expresarse como: NTUL = NTUS = NTUn = NTUd = v (7.32) y (7.7. especifican que el mecanismo controlante es la película. Sin embargo.4.gR(l -e) -e) (7. Por otro lado. la difusión dentro del poro o la dispersión.26).s. la difusión en el seno del adsorbente. En este caso la curva de ruptura es característica de cada mecanismo controlante. estas mismas expresiones pueden ser utilizadas para el cálculo de parámetros utilizando datos experimentales.

La acumulación de soluto en la fase líquida es despreciable. (7. Modelo Cinético: Equilibrio Lineal y Fuerza Impulsora Lineal en el Líquido. .R (7.94) . O . R = ka(y-y*) Balance de soluto en el adsorbente. . Este modelo puede ser aplicado cuando se utilizan razonablemente las siguientes consideraciones: .La relación de equilibrio es lineal.No existe dispersión en la columna. . 9 = Ky' Balance de soluto en fase líquida.El proceso es isotérmico. (7.93) (l-e)ff = * Condiciones iniciales y de frontera. ADSORCIÓN Estos dos últimos casos se presentan en los siguientes párrafos.92) Velocidad de transferencia de masa.388 CAPÍTULO 7.. Con las consideraciones anteriores el sistema de ecuaciones que describe el comportamiento de la columna. 10 cual permite precisar la metodología del uso de los modelos cinéticos.La fuerza impulsora de la adsorción es lineal. .-v^. en el caso de que el control de la transferencia de masa esté dado por una resistencia lineal es: Relación de equilibrio. .91) óz (7.La distribución y el tamaño de las partículas del adsorbente son uniformes.

4. y = JM La combinación de las ecuaciones (7. 9 = 0 ¿ > O. Y = 0.e) obteniéndose el siguiente sistema de ecuaciones: (7. V z. z = 0. V = O.98) con las condiciones: r = 0.97) (7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 389 t = 0. V r . x = O.7.94) conduce a las siguientes dos expresiones: dy_ _ dz (7.91)-(7.95) (7. pueden adimensionalizarse con las siguientes variables: zka v T = X = •y — fi KyA y K(l .96) Estas dos ecuaciones conjuntamente con las condiciones iniciales y de frontera.

Fuente: Vermeulen et al.7 06 . Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son análogos para cada .005 0.5 0. 1973.999 0.33: Solución gráfica de la ecuación de la curva de ruptura. 0.2 0.001 10 20 50 200 500 1000 000 Figura 7. Las ecuaciones (7.05 0. Todos los derechos reservados.995 0.01 0. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Modelo cinético: equilibrio lineal.99). Copyright ©1973.8 0. y J0 es una función Bessel de primera especie y orden 0.1 0.02 0. es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables al caso particular. obteniéndose la siguiente expresión para la curva de ruptura: X = 1~ (7.002 0. resistencia lineal.390 0.998 0. En la Figura 7.98) han sido resueltas utilizando transformadas de Laplace (Bird et «/.97 ) y (7. Sin embargo. 1960).99 0.4 0. ADSORCIÓN :i 0.3 0.33 se presenta una solución gráfica de la ecuación (7.9 0. Esta gráfica puede ser usada para evaluar ka a partir de datos de laboratorio o predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones.95 0.98 CAPÍTULO 7.99) donde i = \/—T.

El modelo supone además: Adsorción isotérmica. S es un flujo hipotético de adsorbente. De acuerdo a la ecuación (7.64) y las suposiciones del modelo.. Volumen líquido en la columna mucho menor que el volumen procesado.89). Modelo de Adsorción de Lecho a Contracorriente.La curva de ruptura tiene igual forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et a/. se supone que el adsorbente se mueve hacia arriba a contracorriente del fluido.En una adsorción de lecho fijo la zona de adsorción se mueve hacia abajo de la columna. DISEÑO DE ABSORBEDORES 391 uno de los casos donde un mecanismo es el controlante.4. de tal manera que la zona de adsorción en la columna permanece estacionaria (Figura 7. El modelo supone que la longitud de la columna es infinita.100) que es la curva de operación del sistema. Mecanismo de transferencia de masa lineal.7. debido a que para un equilibrio lineal Y* — Y = x~X*. Dispersión despreciable. El balance de soluto entre la salida de la columna y un punto z está dado por: F(y . de tal manera que £ o el número de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuación (7.86)-(7.99) es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7. 1966).0) = S(g . En el modelo de adsorción de lecho a contracorriente. de tal manera que en la parte superior de la columna el adsorbente está en equilibrio con la solución de entrada y en la parte inferior la solución está libre de soluto.101) dz .0) (7.34). el balance de soluto entre las fases está dado por: y*) (7.

34: Modelo de adsorción de lecho a contracorriente. .392 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN F S q =0 Figura 7.

. lo cual es útil para establecer las relaciones necesarias para mantener los mismos perfiles de concentraciór (pérdidas.102) [HTU][NTU] La aplicación de este método requiere una integración numérica de datos de laboratorio para evaluar fca. resumidos en la ecuación (7. con el cual se pueden efectuar estudios de escalamiento. L= (y-y*) (7. Una primera aproximación a este enfoque es la combinación de lo resultados de la teoría de platos resumidos en la ecuación (7.4.62).99). coi los resultados de la teoría cinética con un mecanismo lineal controlant y equilibrio lineal. etc. tiempo de operación. de tal manera qu« N = NTU Esta aproximación permite correlacionar la pendiente de la curva c rompimiento con variables de operación. permite mantener la estructura sencilla de la teoría de platos y poder correlacionar el efecto de los cambios en las variables de operación sobre la forma de la curva de ruptura.La combinación de modelos obtenidos por medio de la teoría de platos con modelos obtenidos por medio de la teoría cinética.Teoría Cinética (Equilibrio lineal). DISEÑO DE ADSORBEDORES 393 La ecuación anterior puede integrarse para encontrar la longitud necesaria de la columna para lograr un determinado grado de separación.y*) JyA dy integrando se obtiene: dy y o bien.) entre dos escalas de operación d( interés. Combinación Teoría de Platos . de tal manera que para cae uno de los casos estudiados se tiene lo siguiente: .7. de tal manera que: dz = /" (y .

v J por ecuación (7.86). ADSORCIÓN VA y_ = l l + Erf\ ±-r\ _25_ 2 v/JV (7. de acuerdo a la ecuación (7. de acuerdo con la ecuación (7.21).87): L Sí el mecanismo de control es la difusión del soluto al interior del poro. 1/2 por ecuación (7. de acuerdo con la ecuaciones (7.89): .88): yv L En el caso que el mecanismo controlante sea la dispersión. de acuerdo con la ecuación (7. entonces. N V L Cuando el mecanismo controlante es la difusión del soluto en el seno del adsorbente.37) y (7.14).394 CAPÍTULO 7.103) ! Cuando el mecanismo controlante de la adsorción está localizado en la película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente.

Adsorción de Inmunoglobulina G en proteína A inmovilizada en una matriz de agarosa. Ejemplo 7. el = 0. con = 1/2 para control de la película.10~6 m IV. Datos del adsorbente: \-G dp = 90 x. Se utiliza una columna de 1 cm de diámetro empacada con agarosa con proteína A inmovilizada para adsorber ImG.35. es una constante de proporcionalidad. = 1 para control de la difusión en el sólido. El volumen del lecho es de 2. = O para control de la dispersión.019 = h 11 —43 ™ . DISEÑO DE ABSORBEDORES 395 Lv N ~ T«P De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que: N -Kvn¿n+l 4— (7.96 A/9 = 28 Kd f rrr mi 9 = 0.1 mi con una porosidad de 0.71 mg/ml de esta proteína. = 1 para control de la difusión al interior del poro.7. a partir de una solución que contiene 1. en una columna empacada..9.4. El equilibrio es tipo Langmuir.104) V y n n n n donde K.

b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fracción de lecho ocupado cuando y/yA = 0.5 x 10~4 m —s Dp = 3.4 s min 11 DAB = 5. c) Comparar los datos experimentales con la predicción del modelo de platos.9 xlO.1. Se pide: a) Estimar gráficamente el porcentaje de pérdidas si se deja correr la adsorción hasta que y/yA = 0. suponiendo que el lecho se agota a los 200 min.5 x 1Q- m2 — s Datos de la Columna: Dc = 1 c m A = 0.396 Datos solución: pL = 1000 CAPÍTULO 7.1.785 cm2 Correlaciones: El coeficiente de transferencia de masa puede ser estimado utilizando la siguiente correlación: 1/3 DAB V PL ) \PLDAB La curva de ruptura experimental se muestra en la Figura 7. d) Comparar los resultados experimentales con la predicción del modelo cinético: equilibrio lineal-resistencia lineal.35. .1 2 F = 0. ADSORCIÓN ¡ TU" UL = 9.

a) Las pérdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresión: L ydt Pérdidas = -^— En forma aproximada la expresión anterior equivale a el área del triángulo bajo la curva de ruptura en el punto de ruptura. la cual de acuerdo a la curva de ruptura experimental es : (0. e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de lecho continuo. DISEÑO DE ABSORBEDORES 397 _y VA O ' " 'é¿ ' ' ÍOO 150 200' ' '¿V ' 300 ' ' ' ' t (min) Figura 7.1 . Solución.0 ) ( 1 1 0 .4. Datos de: Hortsman y Chase. 1989.9 0 ) Pérdidas Pérdidas = = 0.35: Curva de ruptura experimental ImG-Proteina A.52): .9 % b) La fracción de lecho ocupado de acuerdo a !a ecuación (7.7.

d) Modelo Cinético.5 yA t0 = 140 min Para -^ = 0. 1973): Cálculos: Área de la sección transversal de la columna: . ADSORCIÓN c) El Modelo platos está dado por la ecuación (7. La curva de ruptura en este caso está dada por la ecuación (7.3 se obtiene: <j = 23.99) que puede aproximarse a (Vermeulen et -a/.398 CAPÍTULO 7.35 se pueden obtener dos pares de datos para calcular Para -^ = 0.1 tR = 110 min Con estos dos puntos sobre la curva de ruptura se puede estimar a «-i 110-140 con auxilio de la Tabla 7.33 min En la Figura 7.36 se muestra la curva de ruptura de acuerdo a este modelo.62): + ^-/f í t - De la Figura 7.

Modelo de platos.4 0. Ejemplo 7.6 0.2 O ~ 200 t (min) 300 Figura 7.36: Curva de ruptura.8 0.4.7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 399 0.9 c. .

5 x 10-4 lOOO^f x 5.45" x • 9.5 x 10-11 sji 90 x 10~6 m x 8.400 CAPÍTULO 7.3 x 10~5 — s Coeficiente de Transferencia de Masa: Utilizando la correlación proporcionada se puede calcular x 1Q-6 m) 5.4 mtn sa 0. ADSORCIÓN A = A Velocidad superficial: = —¡— 0.35) 90 x 10~6 m a = 43.785 cm2 F 4 TT x 1 cm2 A = t? = u = 0.3 x 10~5 ^ x 1000 *'"N 1/2 2 + 1.785 cm2 8.333 m"1 a = .5 x 10-11 ^ = 3xlO-6s Área por volumen de lecho: kL a = 6(1 - 6(1 -0.

Utilizando el mismo modelo con K = 33 y ki — 1.5 muestra algunos valores de estos cálculos. ka .3 x 10-5 ^ = 41. en la ecuación de equilibrio.333 m~l = 0.102).138) el empleo de este modelo implica una integración como la que se muestra en la parte inferior de la Figura 7. La Tabla 7.5 x 10~5 m/s. en el rango de O a T/¿.37 se muestran los resultados en forma gráfica. En la Figura 7.35) r = 8 x 10~ (¿-112.4.346 y de acuerdo a la ecuación (7.38b es de 1.67 cmxO.35 8. En la Figura 7. se produce un ajuste más adecuado (Figura 7. 0) y [ yA. e) Modelo Contracorriente.<l(yA) }• La curva de equilibrio se obtiene dando valores a y. El área bajo la curva de la Figura 7.8 (í-f) . L = 'f .6) 3 donde i está dado en segundos.3X10-5 ?xig^E 25(1 -0. DISEÑO DE ABSORBEDORES Coeficiente de transferencia de masa volumétrico: kLa = 3 x 10~6 — x 43.37a se observa que el ajuste del modelo a la curva real es muy pobre.38.e) = Q 10 J -1 /i V 2. La curva de operación que se muestra en la parte superior de la Figura está comprendida entre los puntos (O.7.67 cm)(0.13 s~l s Variables adimensionales: _ V 777 401 í (2.13 s'1) (8. Los valores de y* se obtienen con valores de q tomados de la curva de operación y sustituidos la ecuación de equilibrio. De acuerdo a la ecuación (7.37b).

K = 33 y kL = 1.9d.20 50 100 150 200 250 t (min) Figura 7. Ejemplo 7.o- y_ Xa 0.. Ejemplo 7..402 CAPÍTULO 7.80. ADSORCIÓN i.5 x 1CT5 m/s .o0.20 O 50 100 150 t (min) 200 250 Figura 7.Modelo cinético lineal. K = 25 y kL = 3 x 10'6 m/s i.60. Modelo cinético lineal.37: Curva de ruptura.9d.40.80.60.37: Continuación.40.

1 202.2000 0.3498 0. sino que sólo modifican el comportamiento pronosticado a partir de consideraciones de equilibrio.5272 42. en el sentido que no introducen nuevos patrones de comportamiento.2487 00.5026 42.0100 0.2435 00.8 002.7.1345 31.1243 y* 1.8276 08. pero éstos siempre son secundarios.9740 02.1 010.1 020.4258 39.5273 42.00417 s~l (1.7050 0.7 101.7 002.6236 1.5261 41.2 L = x 10~5 ^ x 100 cni 2.0003 0.7095 1. En la teoría de equilibrio en la cual todos los efectos cinéticos se ignoran.2694 36.0001 q* 42.5274 42. DISEÑO DE ADSORBEDORES 403 Tabla 7.9583 i/(y-y*) 111.0025 0.5000 0.0077 0. y 1.1000 0.0500 0.0012 0.0 005.9 e.4870 01.7009 1.4.7461 00. Ejemplo 7.5150 42.0050 q 42.0006 0.0300 0.7 022.4031 12.6657 1. la respuesta dinámica se estima con la suposición que existe .7099 1.2 033. La forma de los perfiles de concentración y por lo tanto de las curvas de ruptura puede ser modificada considerablemente por efectos cinéticos.5250 42.346) Teoría de Equilibrio La forma cualitativa de la respuesta dinámica de una columna está determinada completamente por las relaciones de equilibrio.7090 1.3265 14.0001 0.675 cm 0.4349 04.5: Cálculos para el modelo contracorriente.1594 26.8 011.

Ejemplo 7.404 CAPÍTULO 7. a) Curvas de equilibrio y operación.2 y (mg/ml) I 1. .6 Figura 7.38: Modelo lecho a contracorriente. b) Integración gráfica.4 I 1.9e. ADSORCIÓN I 1.

2 i 1.4 i 0.2 i 0.38: Continuación.8 Figura 7. .8 i 1 y (mg/ml) i l 1.4 l 1..6 i 1.7.4. DISEÑO DE ADSORBEDORES 405 i/y-y* 0..6 i 0.

dy.105) R = (l-£)-J.406 CAPÍTULO 7. flii f) 7i r\ii f\ p. R (7. dt dy dz W(y) = ----j- (7. así como para el análisis del comportamineto de sistemas complejos.108) .106) dq dq dy dt dy dt combinando las ecuaciones anteriores se obtiene: dy^ = _ dy__(l_ \^[dy_ _ . Este enfoque ha sido útil para el análisis preliminar de columnas.107) A partir de la ecuación anterior se puede definir W(y) como la velocidad del frente de concentración de una onda. Por regla de la cadena: (7.= O (7.64) se reduce a: e— = — v— con. ADSORCIÓN un equilibrio local a través de la columna.dq] dy _ dy £) V dy\ 8t ~ ~ dz rearreglando. Bajo estas condiciones la ecuación (7. La utilidad del enfoque de la teoría de equilibrio puede ser ilustrado considerando el caso simple de un sistema en el cual el flujo es ideal y se alcanza el equilibrio local.

las relaciones de equlibrio de los sistemas y la cinética de la adsorción. pero se realiza más frecuentemente en columnas de lecho fijo. se compensa con los efectos dispersivos y la onda no se altera a lo largo de la columna (Ruthven. La zona de transferencia de masa tiende a desaparecer debido a que se forman perfiles invertidos ilógicos.5. los tipos de adsorbentes disponibles.5 Sumario La adsorción permite procesar soluciones diluidas para concentrar solutos mediante su inmovilización reversible en sólidos especializados llamados adsorbentes. formando un patrón llamado proporcional. 1987). En el comportamiento llamado de patrón constante el efecto de compactación de la onda cuando el equilibrio es favorable. En el estudio de la adsorción son de fundamental importancia cuatro aspectos: Los mecanismos de adsorción de acuerdo al tipo de interacción soluto-adsorbente. . En tales situaciones la onda debe ser sustituida por el frente de choque. 7. La operación de adsorción puede realizarse en forma intermitente o continua en tanques agitados. La descripción de la dinámica de la adsorción es relativamente compleja y puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a diseños que varían desde los puramente empíricos hasta los muy sofisticados. La zona de transferencia de masa se ensancha conforme avanza la onda a través de la columna. Cuando la isoterma es favorable dq/dy disminuye al aumentar la concentración y la velocidad de onda aumenta.7. SUMARIO 407 Cuando la isoterma es desfavorable el término dq/dy de la ecuación anterior aumenta al aumentar la concentración y la velocidad de onda disminuye.

6 1.8 1. Copyright ©1990.4 0. 7.2.6 Problemas 7..408 CAPÍTULO 7. . Fuente: Skidmore et al.2 0.39: Curva de equilibrio para albúmina. Estimar la concentración final de soluto en el adsorbente.0 1.1.6 si la adsorción se deja a correr 2.Calcular las constantes k¿ y q0 para el sistema Albúmina-S Sefarosa FF a pH=5 y T=25C° a partir de la Figura 7.Un volumen de 2 litros de una solución proteica con una concentración de soluto de 0. 7.5 mg/ml..8 y (mg / mi) Figura 7. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos reservados.3.4 1.2 1.Estimar el porcentaje de pérdidas del Ejemplo 7..39.6 0. ADSORCIÓN 120 110 100 090 oao 070 q (mg / mi) 060 050 040 030 020 010 0. 7. 1990.5 horas. se mezcla con 50 mi de adsorbente en una operación intermitente y se obtiene un 90 % de recuperación.

015 l/g adsorbente.Encontrar la expresión matemática para q(t) en el caso del adsorbedor tipo tanque agitado continuo. considerando los parámetros restantes constantes..5 m/h y el coeficiente volumétrico de transferencia de masa toma un .. y por lo tanto incrementar la recuperación..4. Este sistema ha sido utilizado en la recuperación de novobiocina (Payne.Obtener la ecuación (7.33 /i.La curva de ruptura de una columna puede simularse adecuadamente mediante un modelo cinético lineal con K = 150..99).Simular el perfil adimensional de un adsorbedor utilizando el modelo de la teoría de platos con ¿0=30 min y: a) N=50 b) N=100 c) N=300 7. 6 = 0. Determinar la altura necesaria de la columna para recuperar el 96 % de cefalosporina.8. A = 0.6.. 7.35. y que el equilibrio es lineal con K = 0.6. se ha estudiado como una alternativa para disminuir las pérdidas asociadas a varios pasos de recuperación. utilizando una relación de flujos de 10 a 1. F = 50 cm 3 /mm. el procesamiento de caldos completos en columnas puede originar problemas de taponamiento de éstas.7. K y F. PROBLEMAS 409 7.Se utiliza una columna de intercambio iónico de lecho móvil para separar cefalosporina de un caldo de fermentación que contiene 5 g/l del antibiótico. 1989). 7.El procesamiento directo de caldos completos para la recuperación de productos extracelulares. la relación de adsorbente a flujo es S/F = 98 g — h/l y la concentración de la solución a la entrada y A — 2 g/L Considere un tanque perfectamente agitado en el cual la solución y el adsorbente siempre están en equilibrio.7.. 1960) 7. 7. Sin embargo. si la velocidad de flujo de líquido permisible es de 1. Obtener la variación de la concentración de novobiocina en la salida del tanque si el tiempo de residencia en el tanque VL/IF = 0.785 cm2 y L = 10 cm. Analizar el efecto sobre la curva de ruptura de — 20 % de variación en ki. (Ver Problema 22L4 de Bird.9. kL = 10~4 m/5.a. entonces una alternativa es el uso de adsorbedores continuos tipo tanque.5.

410 CAPÍTULO 7.= P + (1 -P)exp(-Bt) VA estimar los parámetros P y B.1 g/l..135 y B = 0. 150 l/h 7.1) Estimar el flujo manejable por la columna.10. ADSORCIÓN valor de 12 h~l.En la adsorción intermitente de albúmina en un adsorbente de Sefarosa la curva de equilibrio se puede aproximar en forma lineal a: . En esta columna el coeficiente de transferencia de masa volumétrico esperado es de 9 h~l. Para tiempos muy grandes el valor es de 7.. Resp.En la adsorción intermitente de /3-galactosidasa la relación de la actividad inicial de la enzima en la solución a la actividad de la enzima en solución a los 10 min es de 2.Un nuevo antibiótico se va a separar de un caldo de fermentación mediante una operación de adsorción en lecho fijo. 1987). La relación de equlíbrio del sistema es: q = 20J/1/2 y la linea de operación está dada por: 9 = 5(y-0.103 7. utilizando una columna de 5 era de diámetro y 50 cm de longitud. Resp. y a los 30 min de 5.86.11. La relación de equilibrio del sistema es: q = 25y'/2 donde q está en g/l de resina mientras que y en g/l de solución.12. Resp. La alimentación a la columna tiene una concentración de 4 g/l y se desea que la corriente de salida contenga solamente 0..39 ( Pungor et a/.755. L = 0. Considerando el modelo de adsorción intermitente (equilibrio lineal y control de la película) siguiente: ^.6 ra 7. P = 0.

99 dp = 105 x 10-6 m yÁ = 2 mg/ml Representar gráficamente la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción.En una columna de lecho fijo empacada con S Sefarosa se realiza la adsorción de albúmina bajo las siguientes condiciones: q = kL dp l3Qy(aprox.6 x 10~6 m/s = 105 x 10~6 m e = 0.7. obtener una representación gráfica de la curva de rompimiento del sistema..En condiciones de adsorción muy favorables (irreversible). la forma de la zona de transferencia de masa de la columna es independiente del tiempo (patrón constante). PROBLEMAS 411 q Los parámetros de la adsorción son: kL = 5 x 10~6 m/5 e = 0.14. suponiendo una sola resistencia controlante y equilibrio lineal.3 era F = 1 cra3/ra¿n Mediante el modelo cinético de resistencia en la película y equilibrio lineal. 7. Bajo estas condiciones y con el control de la resistencia a la transferencia de masa al interior del poro .6..35 y A = 1 mg/ml Dc = 1 era L = 2.13.) = 5. 7.

Acido.010 cm/s b). en los siguientes tres casos: al..1 y una columna de 15 x 60 era .01 era v L e ^ VA = = = = 0.020 cm/s a2. permite representar varias condiciones de operación.Gra.0...5 era 0.Arsanílico para adsorber anticuerpos monoclonales bajo las siguientes condiciones: dp = 0.ficar la curva de ruptura para el escalamiento del sistema con qn/yA = 18. c). 1985): X =1 - . ADSORCIÓN (modelo adecuado para algunos procesos de afinidad).¿Que significa el punto de intersección de las tres curvas? .011 cm/s 16...v = 0. la curva de ruptura adimensional es única.v = 0. a).v = 0.412 CAPÍTULO 7.Graficar x vs volumen alimentado (Ft — eV) en el rango de 70 a 86 litros.1 el modelo se ajusta a los datos experimentales con NTUP = 8. y está dada por (Arnold et a/.2737Vrt/p .015 cm/s a3.. para cada uno de los tres casos anteriores.-1 Cuando se emplea una columna de Sefarosa 4B.6 18.

1960. 1.J..W. J. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Y. 1989. y Vermeulen. F. 1990. Journal. Clonis.. 183-207.L.). H. "3* ?§r . 243-254. 67. Chemical Reaction Engineering.A. B.N.B. L. 5. 1985. John Wiley and Sons. Schuler. 22-27. 1962. Cussler. y Chase.P. H. W. New York. Reverte S.R.Predicting the performance of affinity adsorbers.F. P. y Chase. Pore and solid diffusion kinetics in fixed-bed adsorption under constant . Bioseparations of traditional fermentations products. Draeger.7 Bibliografía Arnold.J. Dekker. Marcel. En: Separations Processes in Biotechnology. Pyle.. II. Fluidized bed adsorption for whole broth extraction. 325-334. 1988.E. México. (Ed. J.A. London. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. C. 5.M. Biotechnology Progress. New York. M. 6. y Zwarik.7. 401-445. 370-375. L. Res. W. Fenómenos de Transporte.C. Belter.pattern conditions. J. 1990.L. K. Gleason. T. Modelling the affinity adsorption of immunoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. 1966..D. E. John Wiley and Sons. Eng.R. IEC Fundamentáis. Bird. Eng. Ed. 6. A. H. R.). 145-179. y Hu. Blanch. BIBLIOGRAFÍA 413 7. Wilson.H. 212-223. E. C. 13. y Wilke. Modelling of protein adsorption in liquid fluidized beds. Asenjo.L. Des. •f. Hall. Chem.7. 2. (Ed).A.The characterization of affinity columns by pulse techniques.. Process affinity chromatography. 426-489. Payne. G.A. Chem. O. N. En: Separations for Biotehnology 2. New York. 30. 14. y Lightfoot.. 1990. 22. Gailliot. Stewart.. B9-B36.(Ed. AIChE. F. Elsevier Applied Science. 1989.A. Eagleton. D.. Horstmann. Levenspiel. Acrivos..

N. Marcel. 498.A. Skidmore.L. Ion exchange in purification.G. 1990.A. Vermeulen. B.). y Chase.).I. G. C. 359-400. Murray.F. New York. New York. Modelling single-component protein adsorption to the catión exchanger Sepharose FF.K. 411-418. 1973. Klein. Analytical Biochemistry. J. R. Horstmann. 1987.L. Packed-bed adsorption theories and their applications to affinity chromatography. Cordón. Perry.L. En: Separations Processes in Biotechnology. y Hiester. Wang. Flechter. Torres. 171.. Carbonell. J. N. R. 1-50. 1985. E. En: Advances of Biochemical Engennering. J. En: Comprenhensive Biotechnology. Ruthven. D. Liapis. Dekker. y Kilpatrick.414 CAPÍTULO 7. En: Fundamental of Adsorption. Asenjo. A. 1988. 16. (Ed. Permagon Press. Adsorption kinetics and adsorption column dynamics. Continuous affinity-recycle extractions: A novel potein separation technique.B.H.J.K. 7.. C. A. Pseudobioespecific ligan affinity chromatography. 12. (Eds.L. Afeyan.). 604-608. D. 25. Springer-Verlag.). C. New York. 507-521. New York. Yang. 32. H. 5. Vijayalakshmi. TibTech. N. 1989. Bio/Technology.. Me Graw Hill. y Cotton. 1-18 Yarmush.). (Ed. y Chilton. 113-128.T. ADSORCIÓN Ptmgor.K.A. H. Affinity chromatography. y Cooney C.L. y Tsao. G. Adsorption and ion exchange.. (Ed.M.. 1982. En: Chemical Engineer's Handbook. 71-76. T. of Chromatography. Guzmán. M.Y. 1987. G. 1990. M. Fifth Edition.R. N. M. . (Ed. Affinity surfactants as reversibly bound ligands for high-performance affinity chromatography..

Parte IV Purificación del Producto .

417 Una vez que los caldos biológicos han sido concentrados el paso siguiente dentro de un esquema general de separación. es la purificación del producto de interés. En esta parte se presentan los principios generales de las operaciones más utilizadas para efectuar esta purificación: la cromatografía por elución. muy característico de esta operación. En los capítulos 10 y 11. la precipitación. que requiere un enfoque fuertemente fisicoquímico. En el capítulo 9 se presenta la operación de precipitación. La cromatografía por elución puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir la adsorción en lecho fijo. la ultrafiltración y la electroforesis. por lo que es la primera operación tratada en esta parte. se presentan las operaciones de ultrafiltración y electroforesis dado que sus principios permiten una presentación más unificada. .

la operación 419 . en la cromatografía por elución la columna no se satura completamente con soluto. En la cromatografía por elución isocrática la composición del eluyente se mantiene constante durante el proceso. sólidos porosos o geles. En la operación de una columna cromatográfica se aplica una pequena cantidad de muestra en la parte superior de la columna. La decisión entre emplear adsorción frontal o cromatografía por elución en una separación.Capítulo 8 Cromatografía por Elución. Por'ejemplo. si se desea remover dos compuestos orgánicos A y B muy similares que se encuentran diluidos en agua. radica principalmente en la dilución del soluto. sino que sólo se carga en forma controlada una porción de ésta. El adsorbente constituye la fase estacionaria de la columna.. Conforme avanzan los solutos sobre la columna éstos se separan permitiendo su purificación. 8. Esta se efectúa en columnas empacadas con adsorbentes que pueden ser sólidos. Sin embargo. En la elución por gradiente la composición del eluyente se varía gradualmente.1 Introducción La cromatografía por elución es un método para separar en sus componentes (resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propósito de puricar productos de interés. Una vez colocada la mezcla se hace pasar un líquido que favorezca la desorción llamado eluyente (fase móvil). La operación de una columna de cromatografía es similar a la de una columna de adsorción.

tipos de adsorbentes. • La relación de equilibrio. Para abordar el tema de cromatografía por elución en la sección 8. En la Figura 8.2 Fundamentos Existen varias técnicas cromatográficas basadas en la interacción de una fase móvil líquida y una fase estacionaria. las relaciones de equilibrio y cinéticas que son utilizadas en esta operación. Por otro lado.4 se presentan algunos de los modelos para el diseño de equipos cromatográficos que nos permiten predecir y analizar los perfiles de concentración o cromatogramas. apropiada es una adsorción frontal. describiendo las principales técnicas cromatográficas.3 se revisan los principales equipos utilizados en las operaciones cromatográficas. mientras que en la adsorción el soluto se retiene en la columna y posteriormente se eluye concentrado. • La presión a la que se desarrollan. siendo el soluto A el más lento y el soluto C el más rápido. si estos mismos compuestos se desean separar entre sí con una alta pureza a partir de una muestra concentrada.2. En la cromatografía por elución el soluto se purifica a expensas de cierto grado de dilución. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Cinco aspectos fundamentales permiten distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas: • El tipo de principio de separación que emplea cada una de ellas. .1 se ilustra la separación cromatográfica de una mezcla de tres solutos. Un detector de solutos a la salida de la columna obtendría una gráfica como la de la Figura 8. • Las características de las matrices que utilizan. la selección apropiada es la cromatografía por elución. Cada soluto tiene diferente grado de retención en la columna de tal manera que la velocidad de avance de cada uno es diferente. 8. En la sección 8.2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la cromatografía.420 CAPÍTULO 8. En la sección 8. se han desarrollado otros modos intermedios como la cromatografía por desplazamiento y la de recirculación. llamada cromatograma. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna.

FUNDAMENTOS 421 Eluyente » Columna empacada con adsorbente Inyección de muestra (componentes O. O) Eluyente Eluyente > Tiempo Eluyente "A*M A " A AA A > F^ •f Eluyente 0TO D 0 0 D 0 0 Eluyente < o D aD' 1 D D ° OD1 - D 00°0° O o ooo Figura 8. Adaptada de: Belter et al.2. Copyright ©1988.1: Esquema de una columna de cromatografía. Todos los derechos reservados. . 1588. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.8. A.

Copyright ©1988.Cromatografía líquido-líquido. . . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.422 CAPÍTULO 8. Adaptada de: Belter et al.Cromatografía de filtración en gel o cromatografía por exclusión. 8. Tiempo Figura 8. Todos los derechos reservados. • La cinética de la adsorción.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación De acuerdo al principio utilizado para la separación se pueden distinguir < tres tipos básicos de cromatografía por elución: . Cromatografía Líquido-Líquido En la cromatografía líquido-líquido se utiliza un adsorbente sólido impregnado con un líquido que funciona como fase estacionaria.Cromatografía por adsorción. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.2: Cromatograma típico. La separación de los solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de partición de cada uno de los solutos de la mezcla entre las fases líquidas (estacionaria y móvil). Cromatografía por Filtración en Gel La cromatografía por filtración en gel utiliza partículas fabricadas de geles porosas que actúan como mallas moleculares que permiten separar . 1988.2.

Existen varias modalidades caracterizadas básicamente por el tipo de adsorbente que emplea. .. Cromatografía por afinidad.Tanto la cromatografía de interacción hidrofóbica como la de fase inversa.Física. Este tipo de cromatografía es poco selectiva entonces se utiliza poco a nivel analítico.De fase inversa. Este tipo de cromatografía es muy empleada en la purificación de proteínas..De afinidad. llamadas cromatografía de adsorción: . FUNDAMENTOS 423 moléculas en función de su tamaño. Cromatografía por Adsorción La cromatografía por adsorción emplea adsorbentes en los que los solutos a separar presentan diferentes grados de retención..8. Este tipo de cromatografía es comunmente empleada en las últimas etapas de los procesos de obtención de proteínas. Cromatografía de interacción hidrofóbica y cromatografía de fase inversa.La cromatografía por intercambio iónico se basa en la interacción electorostática entre los grupos cargados del soluto y los grupos cargados de los adsorbentes utilizados en ésta.Se caracteriza por la unión del soluto al adsorbente por fuerzas débiles del tipo de van Der Waals. .La cromatografía por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el soluto de interés y el adsorbente.Por intercambio iónico.. Cromatografía por intercambio iónico. . pero por su bajo costo es utilizada a nivel industrial.De interacción hidrofóbica. se basan en la interacción entre las regiones hidrofóbicas de moléculas como las proteínas y los grupos hidrofóbicos de los adsorbentes empleados. . Cromatografía de adsorción simple.2. Los adsorbentes utilizados en esta cromatografía .

Sílica porosa Vidrio de poro controlado (Marca Spherosill) Hidroxiapatita Polímeros orgánicos sintéticos.2 Matrices Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para fabricar los soportes (empaques) de las columnas cromatográficas. 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Ultrogel A y BíoGel.) Compuestos: polímeros orgánicos-polisacáridos. Poli-N. Superosa. En general los materiales de las matrices pueden ser de cuatro tipos: Materiales inorgánicos. Cellulofine y Sephacel) Dextrano (Marca Sephadex) Agarosa (Marcas Sepharosa.3 muestra la estructura de algunas de las matrices empleadas en cromatografía. Poliacrilamida (Marca Biogel P) Polimetacrilato (Marca Spheron) poliestireno Polisacáridos Celulosa (Marcas Whatman. La Figura 8./V -bisacrilamida-dextrano (Marca Sephacryl) ..2.424 CAPÍTULO 8. presentan grupos químicos llamados ligandos que son altamente específicos para la unión con los solutos. los cuales se comercializan en forma de pequeñas esferas cuyo diámetro varía entre 10 y 100 /¿ra. Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente están hechas de materiales que forman geles de alto poder hidratante. En algunos casos estos materiales se modifican químicamente para incrementar su especificidad.

. Fuente: Janson.S. d) Poliacrilamida entrecruzada.3: Estructuras de matrices. Copyright ©1995. b) Dextrano (di 1-6). 1989. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de VCH Publishers. c) Agarosa. FUNDAMENTOS 425 CH2OH n B HO n OH OH H H n NH2 C=O I — CHa—CH — CHa—CH — CHz—CH— C=O I HN C= O I NH2 D HN I C=O I CH2— CH — CH2— CH — CH2— CH — I I r I HN c= o c— o NH2 I n Figura 8.2. a) Celulosa (fi 1-4).

sílica. Cromatografía de filtración en gel. Cromatografía Líquido-Líquido. Este tipo de geles son empleadas en cromatografía de intercambio iónico y de afinidad donde se requieren poros más grandes.4). Esta técnica es poco selectiva por lo que no es mu. se pueden distinguir dos tipos de geles: xerogeles y aerogeles. el volumen de las aerogeles es independiente del solvente. Las xerogeles se caracterizan por arrugarse e hincharse en la ausencia y presencia del solvente. Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de geles: microporosas y macroporosas (Figura 8. como la agarosa y la poliacrilamida macroreticular. Las geles compuestas se forman al introducir geles de microporos en los poros de las geles de macroporos. a continuación se presentan algunos ejemplos parti culares. pertenecen a las xerogeles. utilizada en el laboratorio.. Por otro lado. pero debido a su bajo costo es utilizada escala industrial. respectivamente. Este tipo de geles son utilizadas en cromatografía de filtración en gel y tienen baja resistencia mecánica. .426 CAPÍTULO 8. Tipo de Cromatografía y Tipo de Matriz Existe una relación directa entre el tipo de cromatografía y el tipo d< matriz empleada. poliestireno y polimetacrilato sor aerogeles. Las geles macroporosas se obtienen por entrecruzamiento y agregación de polímeros. CROMATOGRAFÍA Agarosa-dextrano (Marca Superdex) Agarosa-poliacrilamida (Marca Ultrogel AcA) POR ELUCIÓN. para combinar las ventajas de ambos tipos de materiales. De acuerdo a su comportamiento con relación al solvente. mientra* que las geles de vidrio poroso..En la cromatografía líquido líquido se emplean partículas de tierras diatónicas impregnadas coi propilen-glicol.En la cromatografía de fil tración en gel se emplean básicamente geles de microporos de dextran o poliacrilamida. Las geles microporosas se obtienen por entrecruzamiento puntual de polímeros lineales como el dextrano y la poliacrilamida. Las geles de dextrano entrecruzadc (Sephadex) y las de poliacrilamida.

1989.2. Reproducida con el permiso de VCH Publishers. Todos los derechos reservados. a) Celulosa. c) Agarosa.8. Copyright ©1995.4: Matrices microporosas y macroporosas. Fuente: Janson. . b) Polímeros entrecruzados como poliacrilamida y dextrano. FUNDAMENTOS 427 (b) (c) Figura 8.

CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN /J-OCH2COO Carboximetil 2 Fosfato -OCH2CH2SO3 Sulfoetil Sulfopropil © XCH2CH3 OCH2CH2N( I CH2CH3 n Dietilamino-etil ' *"' Chfe Chb CH2 CH3 Trietilamino-etil Figura 8.428 CAPÍTULO 8. pero debido a su bajo costo este tipo de cromatografía también se aplica sólo en separaciones en procesos industriales. Como ya se ha mencionado este tipo de adsorbentes son poco selectivos. dependiendo del grupo iónico (Figura 8.5).. Cromatografía por adsorción. La cromatografía por intercambio iónico es una de las más utilizadas a nivel industrial para la purificación de diferentes tipos de compuestos. utilizan adsorbentes como alúmina y sílica-gel.5: Grupos funcionales de adsorbentes iónicos. Las resinas utilizadas son de dos tipos: catiónicas y amónicas.Los procesos cromatográficos basados en la adsorción simple de solutos en un adsorbente sólido poroso. .

En las técnicas cromatográficas de interacción hidrofóbica y fase inversa. Los colorantes asemejan estructuras biológicas como los cofactores . Estos iones interactúan con los grupos cargados de las proteínas como es el caso de los residuos de histidina. El tipo de iones más utilizados son el Cu+2 y el Zn +2 .6). La separación se basa en el hecho de que algunas moléculas como las proteínas presentan residuos externos no polares.2. de tal manera que en soluciones no acuosas estos tienden a interaccionar con los ligandos no polares de los soportes. Las interacciones hidrofóbicas entre la proteína y el ligando del soporte. se fortalecen utilizando medios con altas concentraciones salinas. la fase estacionaria consiste de una matriz con ligandos no polares (Figura 8.6: Grupos funcionales comunes de la cromatografía de interacción hidrofóbica y de fase inversa. En la cromatografía de fase inversa no se utilizan solventes de baja polaridad para eluír. En la cromatografía con iones metálicos. y ese es su rasgo distintivo respecto a la cromatografía de interacción hidrofóbica. por ejemplo: sulfato de amonio a una concentración cercana a la de precipitación de la de la proteína. La cromatografía que utiliza colorantes como ligandos. Para eluír las proteínas se utiliza una solución con concentración salina baja o un solvente de baja polaridad. para evitar la desnaturalización de las proteínas. FUNDAMENTOS Fenil C6Hs- 429 Octadeál Octil Butil Etil Figura 8. se basa en el hecho que cierto tipo de estos colorantes interactúan fuertemente con los grupos aniónicos de las proteínas. el adsorbente contiene iones metálicos inmovilizados sobre el soporte por medio de grupos quelantes como el ácido iminodiacético.S.

c) Naranja A.7: Colorantes utilizados como ligandos. b) Rojo A.430 CAPÍTULO 8. .S03H S03H SO3H(m/p) H03S SO3H H03S 03H H03S 03H S03H S03H Figura 8. a) Azul A. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. .

2.8. 8.2.4 Relaciones de Equilibrio En el análisis de columnas cromatográficas. .1: Tipos de cromatografías de acuerdo a su presión de operación. La ventaja es que son más baratos que dichos cofactores. HPLC de sus siglas en inglés). FUNDAMENTOS 431 Tabla 8. Las diferentes modalidades de la adsorción por afinidad se presentan en la Figura 7. Otro tipo de cromatografía utiliza ligandos biológicos altamente específicos para ciertos sustratos.7). Estaí isotermas son iguales a las descritas en el capítulo anterior. presión moderada y presión alta (la cromatografía líquida a presión alta es característica de la técnica llamada cromatografía líquida de alta resolución.$. más fáciles de unir a las matrices y más estables (Figura 8.1 se presentan las presiones y el tamaño de partícula características de cada una de ellas. 8. Dichas isotermas son generalmente no lineales mostrando comportamientos tipo Langmuir o Freundlich. las relaciones de equilibrio se expresan por medio de isotermas de adsorción o curvas que relacionan la concentración en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y de! soluto en la fase móvil. Tipo Baja Moderada Alta Presión (atm) 1 2-50 51-350 Diámetro ((¿m) 90-100 30-50 5-10 NAD y ATP y permiten la interacción con ciertas proteínas. la cromatografía líquida se puede clasificar en cromatografía de presión baja.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación De acuerdo al tamaño de partícula y a la presión de operación que emplea.2. En la Tabla 8.

c diámetros máximos de 1. 3.5 Cinética de la Adsorción Algunos modelos utilizados para describir una operación cromatográfica toman en cuenta las resistencias a la transferencia de masa involucrada? en el proceso.432 CAPÍTULO 8. Contradifusión del soluto en el poro hacia la superficie del adsoí bente. Las columnas empleadas en cromatografía HPLC tienen diámet de hasta 80 cm y altura de lecho de 120 era (Figura 8. vidrio o acero inoxidable. Generalmente uno o dos de los pasos descritos anteriormente son 1< más lentos. 4.5 rn. En el caso de geles blandas la longit necesaria de la columna se alcanza por medio de sistemas de varias columnas cortas. 2. 8. reacción y desorción de superficie). de líquido que rodea al adsorbente.2. Difusión del soluto del seno del líquido a través de una películ. Reacción reversible del soluto con el adsorbente (la reacción pued involucrar adsorción. de tal manera que son los que controlan la velocidad glob de transporte del soluto. Este t: de columnas deben ser empacadas utilizando sistemas hidráulicos ( permitan el manejo adecuado del empaque. en el rango de 0. . Difusión del soluto dentro del poro del adsorbente.3 a 3.3 Equipo Cromatográfico Los principales equipos cromatográficos son columnas fabricadas plástico. Las columnas para cromatogra en gel tienen relaciones L¡D muy bajas. 8. las cuales pueden ser descritas mediante un mecanisrnc de cinco pasos: 1.8). CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. 5. a través de la película de líquido. Contradifusión del soluto de la superficie del adsorbente hacia seno del líquido.

Adaptada de: Nicoud y Perrut.S. EQUIPO CROMATOGRAFICO 433 Salida Distribuidor Bomba Figura 8. Reproducida con el permiso de Kluwer Acadeiiüc Publishers. Copyright ©1991. Todos los derechos reservados. 1991.3. .8: Columna cromatográfica.

8.434 CAPÍTULO 8. La suposición de una isoterma lineal se puede justificar en función de que un gran número de sistemas cromatográficos se trabajan con muestras pequeñas. particularmente en el arreglo tipo columna de lecho fijo. El trabajar con muestras pequeñas permite tener una buena separación de los solutos de la mezcla (resolución) a expensas de un bajo rendimiento o cantidad de muestra que puede ser procesada. Tres conceptos se combinan para lograr un diseño apropiado de estas columnas cromatográficas: • El modelo de la columna. utilizan isotermas lineales para describir las relaciones de equilibrio que se presentan en éstas. ha creado la necesidad de llevar a escala de proceso las técnicas que tradicionalmente se utilizan sólo a nivel laboratorio. es conveniente . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Es en esta transición donde los conocimientos ingeníenles juegan un papel muy importante. debido a que por su simplicidad dichos modelos pueden ser resueltos analíticamente para obtener los perfiles de concentración tipo campana de Gauss. Pureza y Rendimiento. de tal manera que el rango de concentraciones en la columna es bajo. Sin embargo.4. que se observan experimentalmente en algunos cromatogramas. Una de las técnicas que ha recibido más atención en este sentido es la cromatografía. • Los criterios para la evaluación técnica del comportamiento de la columna: Resolución. • Los procedimientos de escalamiento y optimización de la columna. 8. y puede ser situado en el rango lineal de cualquier tipo de isoterma (en la región de baja concentración).1 Modelos Cromatográficos Varios modelos empleados para el análisis y diseño de columnas cromatográficas que operan bajo condiciones isocráticas.4 Diseño de Columnas Cromatográficas La obtención de productos biotecnológicos con grados de pureza y mercados cada vez mayores.

Bajo estas condiciones la aplicación de los modelos lineales también es limitada. Modelo de Platos Teóricos o Etapas El modelo de platos teóricos es uno de los más usados el análisis de la cromatografía por elución. Teoría de platos y Teoría cinética combinadas. las relaciones de equilibrio varían conforme cambia la composición de los eluyentes y los modelos basados en isotermas lineales no son aplicables directamente. Sin embargo.8¿. Cuando la elución es por gradiente. Cada etapa puede visualizarse como un adsorbedor tipo tanque de volumen constante. por lo que su uso es cada vez más limitado. El solvente fluye de un tanque hacia el otro. El balance de masa del soluto para la etapa ?i puede ser escrito como: . Esta sección sólo se refiere a los principios básicos de la cromatografía por elución isocrática en columna y principalmente a los modelos basados en isotermas lineales. La teoría cinética. Existen tres enfoques básicos para la obtención de estos modelos cromatográficos de columnas: La teoría de platos. A nivel preparativo la cromatografía por elución se utiliza bajo condiciones de sobrecarga con el propósito de incrementar la productividad de la columna. Actualmente se cuenta con algunas técnicas cromatográficas que emplean otros principios como es la cromatografía por desplazamiento y la de cambio cíclico de la zona de adsorción. principalmente para los sistema cromatográficos muy selectivos como los de afinidad. este modelo tiene sus limitaciones en lo que se refiere al diseño y escalamiento de columnas. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 435 establecer que este enfoque tiene sus limitaciones .10). En el desarrollo del modelo de platos teóricos se supone que la columna se comporta como una serie de etapas en equilibrio. mientras que el adsorbente permanece fijo en su tanque respectivo (Figura 8.9). esto puede lograrse incrementando el volumen o la concentración de la muestra (Figura 8. donde tampoco son aplicables los modelos basados en isotermas lineales.

a) Analítica. b Sobrecarga de volumen. Fuente: Kno: y Pyper. Todos los derechos reseí vados. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN Figura 8.436 CAPÍTULO 8. Copyright ©1986. c) Sobrecarga de concentración. . 1986.9: Cromatografía analítica y preparativa.

Etapa 2 Figura 8.4.10: Modelo por etapas. . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 437 y(L.t) Etapa F 1 y.8.

.Fyn .e)VE-£ \it cLt donde: VE'.e)K] VE] % .F(y n _.3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: 1. £ : Volumen del líquido por volumen de etapa.3) donde la cantidad entre corchetes es un volumen hipotético de líquido V* = [e + (1 — E)K\VE que contiene al soluto de las fases líquida y sólida (de tal manera que la expresión (8. Acumulación en el liquido — Entrada — Salida — Adsorción lo cual pude ser expresado mediante la siguiente ecuación: 7T .1) y (8. . yn = O para n = 1. de tal manera que en cada etapa la relación de concentraciones puede ser expresada como: qn = Kyn (8.yn) (8.(1 .Fyn-i . La ecuación (8. para t < O.1) (8-2) Combinando las ecuaciones (8.Volumen de la etapa (líquido más adsorbente). CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.438 CAPÍTULO 8.2) se obtiene: {[e + (1 . Inicialmente ninguna etapa contiene soluto. F: Flujo de alimentación. El modelo supone que cada etapa está en equilibrio y que la relación de equilibrio está dada por una isoterma lineal. qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n..N .3) es equivalente a un balance de masa de un tanque de volumen V* con entrada y salida). yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n.2..

4.8.5) también puede ser expresada de la siguiente forma: r = NFt (l-e)K]Vc (8. Al inicio de la operación de la columna se inyecta un pulso muy corto de tal manera que: para t = O.11).5) o bien como el volumen total del lecho Vc se puede expresar como: Vc = entonces la ecuación (8.4) es la expresión de una distribución de Poisson. puede aproximarse con la ecuación de una distribución de Gauss. En el modelo de platos teóricos la variación con el tiempo de la concentración de soluto a la salida de la columna. yi = yA (lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se alimenta a la primera etapa en el tiempo cero es M = V*y¿).4) Ft (£ + (l-e)K]VE (8. característica de los cromatogramas que se observan experimentalmente en comatografías de laboratorio donde la cantidad de muestra es pequeña. La forma integrada es: yn = y A donde el tiempo adimensional r está dado por: T = (8. 2. de tal manera que: .6) La ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 439 donde N es el número total de etapas en la columna. Para N grandes (mayores a 30) ésta se aproxima a una distribución de Gauss (Figura 8.

os N=100 o. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN N = 10 o.oo 50 I 100 150 Figura 8.11: Aproximación de la distribución de Poisson a la de Gauss. .io- o.440 CAPÍTULO 8.

7) relaciona la concentración y con los parámetros yo ? oA Y TO] Y con la variable r. La ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 441 (r y = y»exP -Hr-5^ (8-7) donde: y0: Concentración máxima de soluto a la salida de la columna.8.8) M= Fydt (8.7). ÍT^: Desviación estándar del perfil de concentración de soluto. El parámetro y0 puede ser relacionado con el sistema mediante un balance de masa en toda la columna. sustituyendo dt por V*dr/F. Para poder utilizar dicha ecuación es necesario relacionar estos parámetros con el sistema físico particular. De este balance se obtiene la expresión de la masa M de soluto alimentada al sistema.4. de tal manera que: .10) puede encontrarse en cualquier texto de probabilidad y estadística que la expresión entre corchetes de la ecuación anterior vale uno. y multiplicando y dividiendo por (2 de tal manera que: M= exp dr} (8. yoo M= I Jo la cual puede ser aproximada a Fydt (8.9) la ecuación anterior se integra combinándola con la ecuación (8. TO: Tiempo adimensional para el cual la concentración de salida es máxima (tiempo adimensional de retención).

13) (8. dado por: 7-n ~~ — * NFt0 (l-e)K]Ve (8.7) puede ser escrita en términos de las características y condiciones de la columna como: y = yoexp (í-0 2_ N (8. entonces: t0 = (l-e)K]Ve (8.15) como TO = N.5) se puede definir un t0. yo = (8. de tal manera que: (8.16) (El tiempo real de retención de un soluto en la columna. es función del tiempo de residencia del fluido en la columna (V^/F).11) como M = V*yA.17) . y \it\. Mediante las definiciones de media y desviación estándar.\ lizando la ecuación (8.442 CAPÍTULO 8.12) que es la expresión que se busca para el primer parámetro. entonces. la ecuación (8.14) Mediante la ecuación (8. es posible relacionar a A y TO con el número de etapas de la columna.4).) Finalmente. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. (8. la porosidad e del lecho y la constante K.

20) Aplicación del Modelo de Platos. la cual es una medida de la eficiencia de ésta.Las ecuaciones (8. y = yoexp (*-') __ N (8.21) Asimismo. Sin . DISEÑO DE COLUMNAS > CROMATOGRAFICAS 443 La ecuación (8.17) y (8. considerando un flujo constante. de tal manera que: t= V F Vo (8. Una vez calculada N y contando con la longitud de la columna L. dichas ecuaciones han demostrado ser útiles en el análisis de la dispersión y la resolución de los picos de un cromatograma.19) F y entonces.4.17) es una distribución normal que tiene un máximo en t = t0 igual a: yo = y una desviación estándar: (27TJV) a= x/TV La ecuación (8.8.20) pueden ser utilizadas para estimar el número de etapas de una columna a partir de datos experimentales de concentración contra tiempo. mediante la siguiente ecuación: HETP= - (8.17) también puede expresarse en términos del volumen V de solvente añadido a la columna.18) (8.. se puede obtener la altura equivalente de un plato teórico (HETP de sus siglas en inglés) de la columna.

1991) produce un cromatograma con un pico cuyo tiempo medio de retención es de 32. Una de las más utilizadas emplea la siguiente expresión: W2 (8.22) .Existen varias formas para calcular N a partir de un cromatograma gausiano. no pueden ser utilizadas para predecir el número de etapj o la altura equivalente de un plato teórico. Ejemplo 8.1.444 CAPÍTULO 8. Estimar el número de etapas teóricas de esta columna. Solución: Se puede utilizar la ecuación (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUClól embargo. mayor eficiencia de la columna. la HETP es una medida de la amplitud de un pico cromatografía) (eficiencia de la columna). Entre menor sea HETP. N será más pequeña y por lo tanto HETP más grande. Sustituyendo valores. La cromatografía de perfusión-afinidad de alta resolución de Inmunoglobulina G (Fulton et a/. Métodos gráficos para determinar N.17) para determinar el número de etapas teóricas de la columna.Cálculo del número de etapas en la cro-1 matografía de Inmunoglobulina G. Consecuentemente.5 = exp 2_ N aplicando logaritmos en ambos lados de la expresión anterior se obtiene. N = 2287 Es importante hacer notar que entre más ancho sea el pico del cromatograma.. El ancho del pico cuando la concentración es la mitad de la máxima es de 1. 0.60 s. y viceversa.5 s.. ni para predecir en forma el cambio de las condiciones de operación de la columna afectí su comportamiento.

.8.6- 0.4- 0.2- JL Xo 0.8- 0.4.2-J 55 Tiempo (min) Figura 8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 445 1.12: Cálculo del número de unidades de transferencia en forma gráfica.

sólo si: . t0 = 41 min sustituyendo valores. N = N 16(41 min)'' (16 min)2 = 105 Modelos Basados en la Teoría Cinética Los modelos basados en la teoría cinética describen el comportamiento de una cromatografía mediante los perfiles de concentración de los solutos obtenidos mediante balances de masa.. W = 49 min — 33 min = 16 min y el tiempo de retención..13. Este enfoque resulta más complejo que el de la teoría de platos pero permite mejorar la descripción y comprensión de estos sistemas.Cálculo gráfico del número de etapas teóricas. Para iniciar la revisión de algunos modelos cinéticos es conveniente describir cuatro comportamientos generales de una columna cromatográfica operando en modo elución ¡socrática. La teoría de platos es muy utilizada debido a que permite una rápida caracterización y una comparación sencilla entre columnas Ejemplo 8.22) se puede calcular N. relaciones de equilibrio y expresiones cinéticas. Para realizar el cálculo es necesario determinar el ancho del cromatograma.Un pulso inyectado a una columna no sufrirá ningún cambio a la salida de la columna.446 CAPÍTULO 8. Solución: Utilizando la ecuación (8. Caso 1. Estimar a partir del cromatograma que se muestra en la Figura 8.12 el numero de etapas teóricas obtenidas en la cromatografía de transferrina.2. descritos en la Figura 8. CROMATOGRAFÍA POR donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre las rectas tangentes que pasan por los puntos de inflección del cromatograma.

4. Descripción cualitativa del comportamiento de una . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 447 Casal Caso 2 Caso 3 Caso 4 Figura 8.8.13: columna.

. sufrirá un retardo y un cierto grado de dispersión al pasar por la columna. La técnica cromatográfica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos en un mismo adsorbente. La dimensión de estos efectos dependerá de de la naturaleza de la adsorción.La cinética en la superficie del adsorbente. La elaboración del modelo de la columna se inicia con el balance de masa de.Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorción y efectos de flujo no ideal simultáneamente. tendrá un tiempo de retención igual al del caso 3.Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido. pero una mayor dispersión.Los solutos no penetran al interior del adsorbente. presentará un tiempo de retención promedio igual al del pulso del caso 1..Los solutos no reaccionan (no se adsorben) con el adsorbente.El número y tipo de resistencias a la transferencia de masa que toman en cuenta. los cuales presentan diferentes grados de complejidad y difieren entre sí en: . Caso 4. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. .Un pulso inyectado a una columna donde exista un cierto grado de flujo no ideal debido a un empaque deficiente o a fenómenos de difusión axial. pero con cierto grado de dispersión. Caso 3.Los efectos de mezclado que incorporan.El tipo de equilibrio que consideran. . dt donde: dz2 dz . . soluto en la fase líquida en una sección de la misma. . Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de concentración de las colunas cromatográficas desde el punto cinético. pero no exista adsorción.448 CAPÍTULO 8. ..El flujo en la columna es idel o tipo tapón. . Caso 2.

ambos consideran relaciones de equilibrio lineales. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS e: Fracción vacía del lecho..Este modelo supone que sólo una resistencias controla la transferencia de masa.y*) (8. [L2/t]. R: Velocidad de adsorción de soluto en el adsorbente. En el caso que la resistencia en la película sea la controlante. 449 v: Velocidad superficial (flujo por área de sección transversal de columna). . Modelo Cinético Lineal. debido a la dificultad experimental de mediciones que puedan distinguir entre los diferentes mecanismos de control). la velocidad de transferencia de masa del líquido al adsorbente puede ser expresada como: R = kLa(y . t: Tiempo. E: Coeficiente de dispersión axial. z: Distancia axial. [M/L3 — t].¡ 8A. [L]. el modelo cinético lineal y el modelo cinético general. [t].24) A continuación se revisan dos modelos cinéticos de diferente grado de complejidad.25) donde y* es una concentración hipotética en el líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente (en algunos casos la k^a se toma como un coeficiente que agrupa todas las resistencias. mientras que las condiciones iniciales son diferentes. [M/L3]. y: Concentración de soluto en el líquido. [L3/L3]. [L/i\. En este punto es importante recordar que los balances de masa y las relaciones de equilibrio para columnas cromatográficas son iguales que los de adsorción en columna. El balance de soluto sobre el adsorbente complementa al balance anterior y puede ser expresado como: /2 = (l_ e )|? (8.

CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. y al término entre corchetes se le llama número de unidades de trasferencia NTU (de sus siglas en inglés).26) dv kLa(y-y*) = -v-^ (8.26) se obtiene: (8. de tal manera que la ecuación anterior puede ser expresada como: L = HTU.29) La ecuación anterior puede ser utilizada para calcular la longitud necesaria de una columna cuando se conoce k^a.450 CAPÍTULO 8. .Adsorción reversible de primer orden sobre la superficie de los poros (isoterma lineal). .25) y (8.23) se transforma en: R = -v Combinando las ecuaciones (8. Modelo cinético general: Teoría de momentos. El modelo supone además que la dispersión axial y la acumulación en la fase líquida son despreciables.28) al término entre paréntesis cuadrados de la ecuación anterior se le llama altura de una unidad de transferencia HTU (de sus siglas en inglés).. .27) Esta ecuación puede ser integrada para obtener la longitud necesaria de la columna para un determinado grado de separación.Resistencia a la transferencia de masa en la película.NTU (8.Resistencia a la difusión al interior de la partícula. L L= ¡ dz = V dy y -y") (8.Dispersión axial.El modelo cinético general para describir una columna cromatográfica es más complejo e incluye los efectos de: . Los modelos cuando la resistencia controlante es otra son análogos. entonces la ecuación (8. .

\r=Ra dp or (8. 2. R es la velocidad de transferencia de masa de soluto entre el líquido y el adsorbente por unidad de volumen de lecho.31) donde: e: porosidad del lecho. Balance de soluto interfacial en la superficie del adsorbente: Dp-^-\r=Ra = kL(y . 3. Balance de soluto en el seno del líquido de la columna: 2 dy dy D y c1 d y " (Q Q n \ 6— = £-T-T — v-" ri (0. 1. yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro. r: Distancia radial del centro de la partícula a un punto dado en la partícula de adsorbente.r. dp: Diámetro de la partícula de adsorbente. t j \ _^^^^_ ^ ( § w <jy \ donde </. l ~dt~ — ¡ip i __^_^_ + _^_ Q i ( "--" ~ ~ '"" ( _ i /1 £». Dp: Difusividad del soluto al interior del poro del adsorbente. R——i Dp-.4. Ra: Radio de la partícula.60) ¿ ot oz oz En la expresión anterior. es la concentración de soluto en el adsorbente y e. Balance de soluto al interior del poro: £>. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 451 Estos efectos se integran mediante un modelo pseudocontinuo descrito por el sistema de ecuaciones que se lista a continuación.33) .yl)\r=Ra (8. es la porosidad de la partícula de adsorbente al soluto de interés. dada por: /"»/1 \ O 6(1 — e) oyi.8.

452 CAPÍTULO 8.O y = yA r 2 r 2 =0 >O >O = 0 2 = 0 t > tp £/ = O donde íp = Vp/F es la duración de un pulso rectangular de volumen Vp inyectado a la columna.34) fue resuelto en el dominio de de las Transformadas de Laplace (Furusawa et a/.35) de tal manera que el momento absoluto n es. pero la | solución no pudo ser invertida para obtener la expresión de la concentración a la salida como una función del tiempo.34) donde &i es la constante cinética de la reacción de superficie en el sentido directo y K es la constante de equilibrio de la reacción de superficie. Las condiciones iniciales y de frontera del sistema de ecuaciones anterior son: en: para: í>O t =0 ¿= O O < í < ¿p se tiene: fr = O y =O yi .30)-(8. Adsorción reversible de primer orden en la superficie del adsorbente: (8.L)tndt (8. 4. rnn m J™y(t. oo mn= y(t. El sistema de ecuaciones (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.L)tndt Jo (8. 1976). La solución en el dominio de Laplace fue utilizada para calcular los momentos del perfil de concentración del soluto dados por las expresiones siguientes: La ecuación para el momento u del perfil de concentración del soluto en un lecho de longitud L es.36) .

= O y no existe adsorción. el tipo de empaque y de la constante de equilibrio.39) se reduce a: tp _ Le 2.El segundo momento central es una medida de la dispersión del pico y está dado por: Í8 40) 4fn (8 ' ' J~y(t.El primer momento absoluto o tiempo de retención promedio dado por: ^£y(t.SA. 453 . rn J?y(t.L)(t- Jo 2/0 roo / Dos momentos tienen un significado físico y son de particular interés en cromatografía: 1. el tiempo de retención de un soluto en la columna depende del tiempo de residencia del eluyente..L)tdt ^ /o°°y(*.e W l + ^l + f ' tp v De acuerdo a la ecuación anterior. L e + ( l . .L)dt y de acuerdo al modelo general. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS y el momento central n.¿)<ft (8. de tal manera que la ecuación (8.. Se puede utilizar la expresión del primer momento absoluto para estimar la porosidad de lechos cuando el soluto es tan grande que e.39) y de acuerdo al modelo está dado por.

Ejemplo 8. la constante de equilibrio. utilizando pulsos de 1 -mi en una columna de 1. el coeficiente de difusión efectiva al interior del poro. las constantes cinéticas de adsorción y la porosidad de la partícula. 1985) los tiempos de retención promedio de mioglobulina y albúmina de suero de bovino (ASB). Los estudios se realizaron bajo condiciones . como la difusividad efectiva de partícula.Estimación de la porosidad de un adsorbente. Sin embargo.3 . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. los coeficientes de dispersión que se determinen en una columna de laboratorio pueden ser muy diferentes a los de una columna industrial. Sin embargo. variando su longitud entre 26 y 31 cm. Otra desventaja del método de momentos es que la solución no se obtiene en el tiempo real y no se puede predecir el efecto de los parámetros o variables de diseño sobre los perfiles de concentración. su uso está restringido a sistemas que presenten isotermas y expresiones de transferencia de masa lineales. Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimación de parámetros para diseño.454 CAPÍTULO 8..41 La ecuación anterior muestra que la dispersión del pico respecto al tiempo de elución o segundo momento central.6 cm de diámetro. 12 (8. El método de momentos elimina la necesidad de una solución numérica del sistema de ecuaciones de conservación de la columna. el coeficiente de dispersión y los parámetros del empaque. pero sólo de aquellos que no varian con la escala. es función de varios parámetros como el coeficiente de transferencia de masa en la película. la constante cinética de adsorción. Se determinaron (Arnold et a/.

35)e¿ e¿ = 0. v Para Albúmina: _ | = 0.87 = 0.8 sustituyendo valores para el caso de la albúmina se tiene: 0.35. = [e sustituyendo valores en la expresión anterior para el caso de la mioglobulina se tiene: 0.692 v La porosidad de la columna se estimó utilizando datos de tiempo de residencia de azul de dextrano (molécula que no penetra en los poros del adsorbente ni se adsorbe) y fue de e = 0.69 = 0.52 El adsorbente presenta diferente porosidad dependiendo del tamaño del soluto: BSA (PM=67.8.4. utilizando Sefarosa CL-4B (100 /im). la ecuación (8.500) .35 + (l-0.35+ (1 -0.39) se puede expresar como: entonces. A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque e¿. Solución: En el caso que no existe adsorción (K=0).000) y Mioglobulina (PM = 17. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 455 de no-adsorción (columna equilibrada con solución amortiguadora de elución K = 0).35)e¿ £¿ = 0. Los resultados se correlacionaron con L/v y se ajustaron a las rectas: Para Mioglobulina: Mi - 2 = .

El modelo combinado lineal.Una primera aproximación para la obtención de expresiones de HETP en función de variables de operador de la columna. .29): J N = NTU= !^L v (8.43) la desviación estándar del pico está dada po por otro lado se sabe que: HETP=— yv (8.El modelo de van Deemter.17) se puede obtene el perfil de concentración en función de las variables de operación.4 . Sobre este tipo de enfoque dos tipos de modelos resultan de particular interés: . Se han efectuado diferentes intentos para superar esta limitación de la teoría de platos. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. pero no puede ser usada para predecir el comportamiento de columnas a partir de datos fundamentales. es igualar el número de platos teóricos de la teoríí de platos (N) con el número de unidades de transferencia (NTU) de modelo cinético lineal. de tal manera que de acuerdo a la. ecuaciones (8. Modelos Combinados: Teoría de Platos y Teoría Cinética Las teoría de plato es sencilla en su desarrollo matemático. y = yoexp 2v En la ecuación (8. todos los desarrollos efectuados han producido expresiones en las que la HETP (medida del grado de dispersión del pico) se relaciona con parámetros que permiten predecir el comportamiento de la columna. Modelo Combinado Lineal.456 CAPÍTULO 8.28) y (8.42 y combinando esta ecuación con la ecuación (8.. considerando que ambos modelos describen ui comportamiento gausiano similar.

67 kL = l..0045 era de diámetro. para lo cual es necesario calcular primero el volumen del lecho Vc: V. cuando se utiliza una columna de 25 cm de longitud y 0. HETP = v (8. La fracción vacía de la columna se estimó en 0.Cromatografía de aspartamo.16) para obtener A'.4.8A. el cual puede ser estimado por medio de la siguiente correlación: -0. produce un cromatograma en el cual el tiempo de elución del d-aspartamo es t0 = 62 min y la desviación estándar a = 3 razn. Se pide calcular: a) La constante de equilibrio del sistema.46) Ejemplo 8. La cromatografía de d-aspartamo (Belter et al. 1988) en sílica gel modificada. La viscosidad y densidad pueden ser tomadas como las del agua. cr2 y HETP de acuerdo al modelo lineal combinado.llv La difusividad del d-aspartamo en estas condiciones es 0. b) N y HETP de acuerdo al modelo de platos. d) El efecto de variaciones de ±20 % de la longitud de la columna. 2 Solución: a) Cálculo de la constante de equilibrio. = 7r(0.7 x 10 -5 cm /s. La cinética de adsorción puede suponerse que es controlada por el coeficiente de transferecia de masa de la película. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 457 y se puede expresar el HETP no sólo en términos de un parámetro hipotético TV. sino en función de características físicas del sistema .41 era de diámetro. Se puede utilizar la ecuación (8.41 era)' x 25 cm . con silanos como brazos espaciadores y 1-prolina como ligando. sobre N y t0. c) N. rellena de partículas esféricas de 0.38 y el flujo utilizado fue de 2 cm3/min.

42). cr2 y HETP con el modelo combinado lineal.458 CAPÍTULO 8. cm 2 min .132 T7iin _„ 60 s = 0.132 cm2 x 25 cm = 3.30 cm3 K = 60 b) Cálculo de N y HETP con el modelo de platos.45).45) y (8. Vc Vc = 0. Para calcular TV se utiliza la ecuación (8. De acuerdo con las ecuaciones (8. Para tal efecto primero se calcula la velocidad superficial v.16) y sustituyendo valores se tiene: tnF K = K = 1 . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.0. X v = 0.25 cm ..46). HETP HETP HETP L^ ~Ñ 25 cm = 427 = 0.0585 cm = c) Cálculo TV.30 cm3 rearreglando la ecuación (8.38 62 min x 3. N N = -\ 622 min2 = 15—^ 6¿ min¿ = 427 N por la definición de HETP dada en la ecuación (8.

62 min \/468 2. s 468 De acuerdo a la ecuación (8.25 — x 0.0045 cm a = 826.25 ss.01 JbL x 0.01 -f- -0. N = TV = v (5.0.42 kL s \ 0.25 22.8. x ———* -0. a — i.17 x 0.67 cm'1 entonces.67 x 10~3 sa)(826.67 x 10-J — s X El cálculo del área interfacial es: 6(1-g) dp 6(1 . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 459 El coeficiente de transferencia de masa se calcula utilizando la cor rrelación dada de tal manera que: cm = 1.67 0.86 .0045 cm x 0.38) a = 0.7 x 10~5 sai cm = 5.67 cm~1)(25 cm) 0.46).4.

1956) es uno de los más conocidos para cromatografía por elución. HETP HETp = °-^= HETP (2. = [0..38 + (1-0.6 min De la misma manera se pueden efectuar los cálculos para L — 30 era (+20%). Esta es la ventaja de este tipo de modelo. 1952). Una columna de 20 cm representa la reducción de un 20 % en longitud de tal manera que: (5.052 cm d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo combinado lineal.86 min) 2 x 25 cm (63 min)2 = 0.460 CAPÍTULO 8.47). es decir.67 x 10~3 ^f)(826. Este último fue utilizado en forma simplificada para el caso de un sistema con isoterma de adsorción lineal y una columna larga. El resultado fue obtener una expresión para HETP en función de los parámetros .38) 60] x "-"E cm^x 20 cm rntn t0 = 49. nos permite hacer predicciones con la variación de ciertos parámetros.67 cm~ 1 )(20 cm) _____ TV = 374 por otra parte: í. de tal manera que el perfil de concentración del soluto a la salida de la columna también sea gausiano como el de la teoría de platos. POR ELUCIÓN. CROMATOGRAFÍA De la ecuación (8.El modelo de van Deemter (van Deemter ti a/. Modelo de van Deemter. Estos autores combinaron los resultados de la teoría de platos con los del modelo cinético de Lapidus y Amundson (Lapidus y Amundson.

resistencia a la transferencia de masa en la película y al interior del poro. la expresión de van Deemter considera todos estos efectos en tiempo real. 1985) de la expresión de van Deemter es: 12 HETP = (8 47) ' donde: t\ Longitud de mezclado.47) puede ser despreciado.Coeficiente de difusión del soluto.5. ?/: Tortuosidad del lecho. Una versión reciente (Arnold et a/.48) En el caso de cromatografía líquida de moléculas de tamaño grande (por ejemplo proteínas). . [L].4. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 461 considerados por Lapidus y Amundson para su modelo cinético. DAB'. E = rjDAB + iv (8. Demostrar <que para el caso de perfiles de concentración gausianos la teoría de momentos y la de van Deemter producen resultados idénticos..8. Ejemplo 8. el segundo término del lado derecho de la ecuación (8. [L2/t]. esto es. En la expresión anterior el coeficiente de dispersión axial E se considera que está conformado por dos contribuciones: la difusión molecular en la dirección axial y un término de mezclado que es proporcional a la velocidad.Comparación de los resultados de la teoría de momentos con el modelo de van Deemter. Dado que el modelo de Lapidus y Amundson incluye los efectos de dispersión axial (difusión molecular y mezclado).

Solución: En el caso de perfiles gausianos se cumple que: de tal manera que: HETP = La expresión anterior conjuntamente con las ecuaciones (8. Las partículas de diámetro pequeño. producen valores bajos de A. cuando se considera que existe equilibrio sobre la superficie del adsorbente (sólo existen las resistencias de la película y del poro) y que el pulso alimentado es de duración corta. (8.49) .+ Cv v donde: El término A es función del tamaño y uniformidad del adsorbente de la columna.462 CAPÍTULO 8.47) en su versión más popular y simplificada se escribe como: HETP = A + .39). CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. (8. ya que esto determina la longitud y uniformidad del mezclado. (8.48) y las condiciones particulares: tp A = O g conducen a: \íl Hj J. i )momentos — \f* KJi i )van Deemter j La ecuación de van Deemter (8.41).

Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna. 8. Para una columna particular es posible encontrar la ecuación de van Deemter efectuando mediciones de HETP a tres velocidades diferentes. el término B/v aumenta.4. . Pureza y Rendimiento El objetivo de un proceso cromatográfico puede ser alguno o algunos de los siguientes: alta purificación de un componente. Si la velocidad superficial se incrementa. En la Figura 8. Este término es función de la geometría de la fase estacionaria. Cuando el rendimiento de una operación disminuye conforme la pureza deseada aumenta. del coeficiente de distribución del soluto y de las velocidades de transferencia. Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna. de acuerdo al modelo de van Deemter. es decir. análisis rápido de un componente o una alta productividad. esto significa que al ser mayor el tiempo de retención hay más tiempo para que el pulso se disperse por difusión molecular. Este término puede ser despreciado en el caso de cromatografía líquida y particularmente cuando el soluto es una molécula grande como una proteína.14 se muestra el efecto de la velocidad superficial en la columna sobre el HETP. Se observa que existe una velocidad óptima debido a los efectos opuestos de los términos B/v y Cv. el término Cv se incrementa.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución.8.4. el tiempo para lograr el equilibrio es menor. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 463 K f El término B se relaciona con la difusión molecular axial. El término C representa la dispersión del pulso debida a la resistencia a la transferencia de masa. estos objetivos no pueden lograrse simultáneamente. Esto significa que a mayor velocidad superficial en la columna. a incrementar el HETP. Si la velocidad superficial en una columna disminuye.

Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Resolución En la cromatografía por elución un objetivo puede ser el separar los componentes de una muestra en forma satisfactoria. no-equilibrio Calidad de empaque Difusión longitudinal U Figura 8.15 a y b ). Fuente: Janson y Hedman. Pureza. La resolución de una columna depende de dos factores: La selectividad de la columna. . La teoría cromatográfica permite evaluar el comportamiento de una operación mediante el uso de tres criterios: Resolución. La medida del grado de separación de dos componentes en una operación cromatográfica se conoce como resolución o eficiencia de separación.Este factor es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente (Figura 8.464 CAPÍTULO 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Copyright ©1982. 1982. Todos los derechos reservados.14: Efecto de la velocidad superficial sobre HETP.. Rendimiento.

15 c y 8. La eficiencia de la columna. se intersectan abajo del eje t.8.15: Efecto de la selectividad y de la eficiencia sobre la resolución.16 una separación completa de dos picos puede lograrse cuando las rectas que definen la amplitud de la base de los picos W'.51) donde . . Generalmente una Rs =1.5 es satisfactoria. Numera de platos pequefio Factor d« separación bueno Número de platos pequeño Respuesta c) d) Factor de separación pobr Número de platos grande ^ < | >X ^ ^ SS _j Factor de separación bueno Número de platos grande \ ¿ / \ * \ / / / ' ^ A t / / 1* $ ^ | i^O t ' +/ y j/ ^ o<N vo J <. Si se considera la Figura 8. Puede ser demostrado que cuando esto sucede: Rs = 2( * Q2 "* Ql) > 2 (8.4. v ^ ^^ ^ t i/s Tiempo ^ Figura 8.Este factor está relacionado con el grado de dispersión de los picos (Figura 8.Rs es la resolución.15 d).. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 465 Factor de separación pobre.50) W = 4<r (8.

Para disminuir el ancho de los picos. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. se puede estimar la longitud necesaria de una columna para alcanzar una determinada resolución. Respuesta Tiempo Figura 8.16: Medición de la resolución. (c) Reducir el tamaño de la muestra. (b) Aumentar la cantidad de la fase estacionaria. Una resolución adecuada puede ser difícil de obtener cuendo se trata de resolver una mezcla de componentes con propiedades similares. La ecuación (8. como en la separación de mezclas de proteínas. (a) Empacar más uniformemente la columna y/o disminuir el tamaño de las partículas del empaque. . En este caso la mejor forma para mejorar la resolución depende del tipo de cromatografía. pero existen algunas lineas generales como las siguientes: 1. 2. (c) Mejorar la selectividad.50) puede ser utilizada conjuntamente con los modelos cromatográficos apropiados para analizar este tipo de acciones y generar las decisiones correspondientes. selecionando otra fase estacionaria u otra fase móvil.466 CAPÍTULO 8. Para incrementar A¿ = t02 — t0\. Por ejemplo. (a) Incrementar la longitud de la columna L. (b) Optimizar el flujo.

Es posible efectuar un análisis de pureza y rendimiento de columnas.51). empleando los modelos revisados.4.600 0..6.7 h la resolución se calcula con la ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 467 Ejemplo 8. existe un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza deseada.42 0.175 h) = 0. Wl = 4<7! = (4)(0. en el intervalo de t a t está dada por: .50). Calcular la resolución lograda en una columna de filtración en gel en la que se separa un anticuerpo de una impureza y se obtienen los siguientes resultados: Anticuerpo Impureza 7.2 h W2 = 4<r2 = (4)(0. Pureza Cuando se tiene una resolución muy baja debido a propiedades muy semejantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productividad.80 82 Se puede calcular el ancho de las bases de los picos W utilizando la ecuación (8. menor rendimiento puede ser obtenido. Entre mayor sea la pureza requerida.Cálculo de la resolución de una columna.175 43 í0(h) <7(h) y0 Solución: 6. esta resolución es demasiado baja. Considerando que en una operación cromatográfica la masa eluída del soluto j de una mezcla.80 h) = 3.8.

La masa total de soluto j inyectada a la columna está dada por: r (8. t o rendimiento REj puede entonces expresarse como: fi Fy3dt reo „ . es decir: PRj = Jt ^=JtlFy. nos permiten calcular y/o predecir (según el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas. yji Concentración del soluto j a la salida de la columna. F: Flujo de solvente en la columna.468 CAPÍTULO 8..53) y (8. PRj. respecto a la cantidad aplicada en la muestra original. Jo Fyjdt Las ecuaciones (8. entre la masa total obtenida en ese mismo intervalo.54) = I Fyjdt Jo la proporción de soluto j recuperada en el intervalo de t a. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. . se define como la razón de la masa de soluto j obtenida en el intervalo de t a t. Rendimiento El rendimiento de una operación cromatográfica puede ser definido como la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo.53)] donde n es el número de solutos presentes.dt ti Fyj y¿dt 8. SE3 = / Fyjdt jt donde: jí Masa del soluto j eluída en el intervalo de tiempo.55) combinadas con los modelos que describen los perfiles de concentración en las columnas.52) la pureza del soluto j. (8. SE.

respectivamente (se usa el subíndice 1 para el anticuerpo y el subíndice 2 para la impureza). Solución: Combinando las ecuaciones (8.55) se obtiene una expresión para el rendimiento en función del tiempo.6. Puede observarse un traslape de los picos de estas sustancias debido a la baja resolución de la operación.Pureza y Rendimiento La Figura 8.63 g y 0.17: Perfiles de concentración del Ejemplo 8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 469 90- Anticuerpo 80706050- Impureza 40-^ 302010- 0 10 t(h) Figura 8. Describir la variación de la pureza y el rendimiento del anticuerpo con el tiempo de operación.17) y (8.4.7..17 muestra los prefiles de concentración del anticuerpo y la impureza del Ejemplo 8.45 g.7. Ejemplo 8. si la masa de anticuerpo y la masa de impureza alimentadas a la columna son 1. .8.

CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.53). obteniéndose: = -\Erf J 2 -Erf cuando i — O la expresión anterior pued e aproximarse a: 1 + Erf i — ¿oí La variación de la pureza con el tiempo de operación se obtiene combinando las ecuaciones (8. — 82 REl 82 REl + 43 .>/2(0. REi = ü"= 1 y ° iexp i (^oj. — 1 2 pp.N/2(0.175)J.470 CAPÍTULO 8.42V 1 + Erf [ .60 V = 1 + Erf ( 2 . PRr '/' Fy0i exp [-^l^p-J di + Jt' Fyoi exp [-^l^~J dt utilizando la definición de función error la expresión anterior puede expresarse como: sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene: fíF 1 ILJ\ RE2 'Í-6.8)JJ 1 ' í-7.17) y (8. t' - La expresión anterior puede integrarse expresando la integral del numerador como una diferencia de integrales y utilizando la definición de la función error.

8.3 Escalamiento y Optimización El escalamiento de una columna cromatográfica consiste generalmente en determinar el diseño de la columna que permita cumplir con una productividad mayor a la de la columna empleada en la obtención de los datos para el el diseño.4.18: Perfiles de pureza y rendimiento del Ejemplo 8.o Figura 8. Se puede constatar en la figura el hecho de que en una operación de separación generalmente se pueden obtener altas purezas o altos rendimientos. 8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 471 o. Los resultados sobre los cálculos de los rendimientos y la pureza de anticuerpo se muestran en forma gráfica en la Figura 8. pero no ambos. En general las técnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la imposibilidad del diseño de este tipo de equipo mediante modelos .4.18.7.

manteniendo la concentración y el tamaño relativo de la muestra.9). 4. que se traducen en una disminución del grado de purificación obtenible. . 1. El incrementar sólo el flujo volumétrico. estrictamente teóricos (Gibbs y Lighfoot.Incrementar el volumen de la muestra.472 CAPÍTULO 8. Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas cromatográficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes. 2. concentración del producto y duración de cada ciclo. 3. Restricciones: El escalamiento además de cumplir con el objetivo fundamental de incrementar la productividad (o al menos la producción). 1986). que produce un perfil de concentración no gausiano a la salida de la columna (Figura 8. En estos casos no puede ser aplicado el concepto de HETP desarrollado para sistemas lineales. Objetivo del escalamiento: Generalmente el objetivo de un escalamiento es incrementar la productividad.Incrementar el flujo volumétrico a procesar. debe también cumplir con las restricciones del proceso en cuanto a pureza. En algunos casos sólo se busca incrementar la producción. Cuando se incrementa la concentración y/o el volumen de la muestra se produce una condición de sobrecarga. permite conservar la linearidad del proceso. rendimiento. . Criterio de escalamiento: Existen varias alternativas no excluyentes que pueden servir de base para realizar el estudio de escalamiento como: . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. En el caso de muestras más concentradas generalmente se producen isotermas no lineales y efectos de interferencia de los solutos en la adsorción. Características de flujo: El escalamiento de columnas presenta varios problemas asociados al flujo dentro del lecho: .Incrementar la concentración de la muestra.

donde v es la velocidad superficial y está dada por la relación: 4F donde D es el diámetro de la columna. Dinámica de la columna. Geometría: Los parámetros básicos que define la geometría de una columna y que pueden ser modificados son: c/p. Dc y L. En el proceso de escalamiento generalmente también se busca optimizar la columna fijando criterios de máxima productividad o mínimo costo.El incremento del diámetro produce problemas de distribucción del flujo y de incremento del gradiante de presión por disminución de soporte por la pared. La caida de presión en una columna empacada en régimen laminar está dada por la ecuación de Blake-Kozeny (Bird et a/.El incremento de la longitud de la columna es imposible sin reducir la velocidad de percolación debido a que generalmente las caídas de presión de las columnas de laboratorio están en el límite del colapso de los adsorbentes empleados. de particular importancia son el tiempo t/t0 y el número de unidades de transferencia NTU o de etapas teóricas N. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 473 . Método de escalamiento mediante modelos. . (8 57) ' 5. 1960).8. 6. Es importante distinguir dos métodos de escalamiento comunmente empleados en cromatografía: Método de escalamiento directo.4. . En el proceso de escalamiento es fundamental tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan de la expresiones diferenciales que describen los perfiles de concentración en la columna.

474 CAPÍTULO 8. el método de escalamiento directo se parte de un diseño óptimo desarrollado generalmente a nivel laboratorio (puede ser teórico) y se supone que los fenómenos difusionales no varían dentro del rango de escalas que se estudia. para cada uno de los solutos en ambas escalas (escalas 1 y 2). requiere mantener iguales ?/0. lo que permite mantener la linearidad del proceso. TV y t/t0. A continuación se presenta caso particular de escalamiento directo con el proposito de ilustrar este método. Una limitación de este método es la escasa información que genera sobre los mecanismos cinéticos controlantes.Uno de los enfoques más utilizados en el escalamiento de columnas cromatográficas. Generalmente las restricciones son de igual pureza y rendimiento en ambas escalas (Cowan ti a/. 1990). la concentracción máxima de soluto. la cual es función de la concentración de entrada principalmente. El número de etapas cuando sólo un mecanismo controla la rapidez de la adsorción puede ser expresado como: . Estas restricciones requieren que la dinámica de la columna no cambie. Este método permite determinar el tamaño y las condiciones de operación de la escala nueva en forma rápida. El perfil de concentración de los solutos a la salida de la columna debe mantenerse igual en ambas escalas.. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Escalamiento Directo La mayoría de los procesos cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio (Wang. 1987). consiste en seleccionar como parámetro de escalamiento un incremento del flujo de la columna. o sea y0l = y0in donde los subíndices I y II se refieren a cada una de las escalas. 21 (¿""O = y0 exp _ N mantener los perfiles iguales durante el escalamiento. puede considerarse igual en ambas escalas. Caso de escalamiento directo de un sistema lineal. Si el escalamiento es sólo a través del incremento de flujo. En este caso lineal los perfiles gausianos están dados por la relación ya conocida.

L y v iguales a las de la columna de escala laboratorio. el tiempo de retención está dado por: t0 = [e + (l-e)K](8. en casi todos los casos de un sólo mecanismo controlante. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 475 N = ^ (8. es posible realizar el escalamiento y obtener una mejor resolución. independientemente del valor que tome n en la ecuación (8. sin embargo.58) o mecanismo controlante de la cinética.59) v Como primer alternativa se puede considerar incrementar Z)c. lo que permite mantener t0 y N constantes entre las escalas. Como tercera alternativa se puede considerar mantener dp igual para ambas escalas e incrementar v y L. sin embargo esto también conduce a un cambio en el valor de N.56).4. de tal manera que la relación L/v sea igual en ambas escalas. no es posible hacer este cambio sin alterar el perfil de concentración dado que el valor de N cambia con todos estos parámetros. Para reducir los costos asociados a la inversión inicial en las columnas. De tal manera que el proceso .8. de tal manera que su razón se mantenga constante. En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse el diámetro del empaque utilizado a nivel laboratorio d p . entonces el problema de optimización de la columna escalada se traduce en encontrar el diámetro de columna que produce el menor costo del producto. con una columna de menor volumen y conservando la misma caída de presión (Wankat y Koo. Sin embargo. La solución comúnmente empleada consiste en usar columnas poco esbeltas (gordas) con dp . al aumentar el área de flujo o diámetro de columna. es preferible utilizar cada columna en varios ciclos procesando alícuotas del material inicial. dp y L. Esto permite aumentar la producción (no la productividad).58) Asimismo. incrementar simultáneamente L y v produce un efecto dramático sobre la caída de presión. También se puede considerar incrementar Dc y dp. 1988). de acuerdo a lo que establece la ecuación (8.

80 % de la cual es transferrina y 20 % sales (como NaCl). 0. se desarrollan simultáneamente (Janson y Hedman.1 + Erf i -41 2x4 . empacada con sefacril S-200 superfino (dextrano). Ejemplo 8. se utiliza una columna cromatográfica de 5 cm de diámetro y 15 cm de longitud.8. 1 + Erf ( t-t 0\ sustituyendo valores. b) Si se desea incrementar la productividad de la columna mante niendo la misma geometría y suponiendo que la etapa controlante es te que la desviación estándar es proporcional a v~í. Solución: a) De acuerdo a la ecuación desarrollada en el Ejemplo 8. 1987). 1982): Transferrina t0 (min) 41 <j (min) 4 Sales 88 4 Se pide: a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90% de rendimient< de transferrina. La alimentación consiste en una solución diluida que contiene una mezcla de solutos.Optimización de una columna. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN de escalamiento y el de optimización..90 = . escalas I y II).7. Guarido la columna se opera a 10 cm/h se produce una separación caracterizada de la siguiente manera (Janson y Hedman. Con el propósito de separar una proteína de sus sales acompañantes. calcular la velocida de alimentación máxima y el tiempo del ciclo necesario para obtener u rendimiento de 99% de transferrina con 98% de pureza (transferrina^ y sales=2.476 CAPÍTULO 8.

8) (REu). como a oc t>~2 ? se pueden desarrollar la siguientes relaciones: = (-)* \viij utilizando la ecuación (8. se obtiene: ton Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de ecuaciones: (0. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS de tal manera que.59).8.4. 477 ¿90% =46. . la pureza de la transferrina en la masa total colectada en un intervalo de tiempo está dada por: masa de transferrina masa 7T~j total (masa de transferrina)(RE\) (masa de transferrina](RE\] -f (masa de sal^RE?) PR\ - Por otro lado.1 min b) De acuerdo a las expresiones también desarrolladas en el Ejemplo 8.7.

Calcular t de la ecuación de rendimiento de transferrina.3 veces la velocidad en la columna.65 410 880 VJ1 Erf | LJf» "\ El sistema anterior puede ser resuelto mediante el método de cálculo siguiente: . !_ 2 1 2 12. El análisis anterior es válido. De acuerdo a lo anterior el resultados es: vtl = 93 cm t = 7. . .4 min Esto representa aumentar 9. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.19 muestra los perfiles de los solutos para el caso base y la situación nueva.65 12. Suponer una t?//. Con los datos anteriores calcular la pureza de la transferrina. Calcular el rendimiento de sal. Calcular cr// y ton para ambos solutos. La Figura 8.478 CAPÍTULO 8. puede ser diferente. siempre y cuando el mecanismo controlante se mantenga en ambas situaciones. . La suposición de v¡¡ será correcta cuando ésta sea del 98 %. Los resultados sugieren que a nivel laboratorio la optimización consiste en incrementar la velocidad manteniendo una resolución o pureza adecuada. . . También es importante hacer notar que para otro tipo de cromatografía la expresión de la desviación estándar utilizada en este ejemplo.

4.5002.000- 3.0001. . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 479 4.8.5000.500§ 3.0000.8.5001.19: Perfiles de concentración del Ejemplo 8.000- 1> 2.000 Escala I Escala I 10 20 30 40 50 t (min) 80 90 100 Figura 8.

Química del sistema: Tipo de eluyente. Cuando se utiliza este enfoque. poca dispersión y tiempos cortos de ciclo . Las limitaciones del escalamiento directo han conducido a tratar de incorporar metodologías ingeníenles al diseño de las columnas. Estas partículas pequeñas no siempre son las más adecuadas en un proceso industrial. los experimentos que se realizan más que tener como objetivo desarrollar una optimización de la columna. Escalamiento Mediante Modelos La mayoría de los sistemas cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio. el escalamiento directo conduce a la utilización de una fracción muy pequeña del lecho cromatográfico. por medio de una simulación por computadora. . tipo de adsorbente y tipo de isoterma. están orientados a la validación del modelo y a la obtención de los parámetros del mismo. así como el impacto que sobre los perfiles producen los cambios en: . volumen y tamaño de muestra. L y dp. . Esto se debe a que las resistencias por difusión dentro de la partícula y los fenómenos de dispersión son menores con partículas pequeñas.480 CAPÍTULO 8. Por otro lado. aspecto que también impacta el costo. . aún cuando producen buena resolución. Este enfoque conduce a utilizar partículas muy pequeñas (5-100 //m) que incrementan el costo del proceso. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. . 1988). En la Figura 8. Los casos de escalamiento directo no lineal escapan al alcance de este trabajo pero existen varias publicaciones especializadas que pueden ser consultadas (Wankat y Koo. concentración. dado que el objetivo en éstos es incrementar la productividad y no la resolución de todos los componentes.La operación del sistema: Flujo.20 se presenta la metodología para el escalamiento mediante el uso de modéleos de columnas.La geometría del sistema: Dc. Los modelos desarrollados son utilizados para predecir los perfiles de concentración a la salida de la columna.

1990. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. de Masa Modelo Cromatografía) Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 8.20: Metodología para escalamiento y optimización de columnas. . Adaptada de: Wang. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 481 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T.4.8.

Los modelos cromatográficos presentados en este capítulo son particularmente útiles cuando se trata de seguir este enfoque de escalamiento. Las columnas cromatográficas han sido escaladas principalmente a partir de columnas de laboratorio. de tal manera que sea posible obtener un diseño óptimo bajo restricciones de costos.5 Sumario La cromatografía por elución se utiliza para obtener productos biotecnológicos con un alto grado de pureza. pero existe creciente necesidad de apoyar el diseño de las columnas mediante el empleo de modelos. pureza y concentración.482 CAPÍTULO 8. . productividad.Modo de operación. . Las operaciones cromatográficas se desarrollan generalmente en columnas empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a presiones moderadas como a altas presiones. tiempo de ciclo. Existen varias formas para llevar a cabo una operación cromatográfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las condiciones en las que se realiza. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. 8.

500 8. respectivamente. (a) Calcular la resolución para estos compuestos en la columna. La columna se puede considerar que tiene 8.600 8.2. donde: — _ u i K! -f- AI 1: Soluto 1 .—-.8. estimar el número de etapas para obtener una resolución de 1. son de 800 y 815 5..Obtener una expresión para la v óptima y la altura equivalente de un plato teórico (HETP) mínima.. 8. R: 57. PROBLEMAS 483 8.-—N* esta ecuación se conoce como la ecuación fundamental de la cromatografía lineal.3.49). R: 45.Utilizando el modelo de platos teóricos y considerando iguales la altura equivalente de un plato teórico para dos solutos que se desea separar. a partir de la ecuación (8.El ancho W de un pico es de 50 s y el tiempo de retención es de 50 min.100 etapas teóricas para ambos compuestos...i Rs .. demostrar que: a-1 F .Los tiempos de retención de los compuestos A y B.6. R: 0.4.1.42 (b) Suponiendo que los tiempos de retención son iguales. Calcular el número de platos teóricos de la columna bajo estas condiciones.6 Problemas 8.

K-2'. a: Selectividad k{: Factor de capacidad del soluto 1. si en una columna de 20 era la .484 2: Soluto 2 CAPÍTULO 8. La altura equivalente de un plato teórico para la mioglobulina está dada por: 6.5.2 x l(T 5 -M. 8.En el caso de la cromatografía líquida de alta resolución puede considerarse que el ancho de los picos es igual. e: Porosidad del lecho. Estimar la resolución esperada si la columna tiene un diámetro de 7.1.En la separación de albúmina de suero de bovino (ASB) y mioglobulina (Mg). se determinó que los factores de capacidad de los solutos son: kASB — 0. 1 I •i | 8.58 8. El volumen de la muestra es de 10~7 m3 y la velocidad superficial en la columna es de 2.8 y kMg = 1. ¡ donde el subíndice 2 corresponde al soluto más lento.4. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.6. estimar la resolución que se obtiene en una columna de 50 c??i. K\: Constante de equilibrio del soluto 1. Rs = 1.17 x 10~4 m/s Resp. ¡ Demostrar que bajo estas condiciones. entonces: W\ — W-¿. k'\ Factor de capacidad promedio.Utilizando la expresión del problema 8.7.5 x 10~3 m y una longitud de 0.Constante de equilibrio del soluto 2.6 ni.13u donde HETP está en metros y v en m/s. mediante una columna de laboratorio de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). k'2: Factor de capacidad del soluto 2....

27 8. La cromatografía se desarrolla utilizando agua como eluyente.. 1990) de 0. a). R: 1. El volumen de elución (V0) de la ASB es de 1. d). b). 650 y 700 litros de elución.Cuando se procesa una mezcla de Lincomicina A y B. produciéndose un lecho empacado de 100 cm de altura. Cuando esta mezcla se corre en una columna de laboratorio. se colecta el 2.. los tiempos de retención son de 9.8 (considere como única variable la longitud de la columna)..8. el cual tiene una concentración de ASB de 5 Kg/m3 y 10 Kg/m3 de glucosa.5 y 0. rendimiento y pureza.2%. se empaca con 0.Una columna de laboratorio ( Ghose.003 m3/Kg de gel seca.9..95 x 10~4 m3. en una columna de partículas de celulosa. respectivamente. La columna se utiliza para separar una mezcla de albúmina de suero de bovino (ASB) de glucosa. PROBLEMAS 485 resolución obtenida es de 0.8% y 50% de lincomicina A a 600.7 y 8.02 m de diámetro.10.065 Kg de Sephadex G-100 cuyo poder hidratante es de 0. pureza y rendimiento dados por las condiciones del problema utilizando la computadora.Repita la simulación para una proporción 90:10% 8. c)..Calcular el rendimiento de la droga si desea separarse mediante cromatografía y obtener una pureza del 99%.Simular los perfiles de concentración. El volumen vacío de la columna (e V] se midió utilizando el polímero de alto peso molecular dextrano y fue de 1. El volumen utilizado de muestra es de 2 x 10~6 ra3.. esta medición con dextrano no incluye el volumen de .Simular el efecto de variar la proporción de soluto a 50:50% sobre los perfiles de concentración.6. R: 780 1 8.05 x 10~4 m3 y el de glucosa de 2.2 /i. Calcular el volumen para obtener un rendimiento del 95% de lincomicina A.05 x 10~4 m3 (en cromatografía en gel donde la cantidad de líquido en los poros de la matriz es considerable. 15.Una mezcla contiene 70% de una droga y 30% de una impureza..8.7 h y la desviación estándar de 0. respectivamente.

a). considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. Resp. 1. ¿Cuál es el significado físico de A'p?. .16) con la (8. (V0)A = 2. d)..834 x 10~3 m3 b). c). dicho líquido V¿).Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica.76 Kg 8.11.486 CAPÍTULO 8.06 m de diámetro y 3 m de lecho manteniendo la relación de volumen vacío a volumen total constante (¿K/K) = c¿e? y 1a realción de volumen de los poros a volumen total constante. Demostrar que en cromatografía en gel el modelo de van Deemter conduce a: _ Vc(l-e)ep ~ V. adsorbente}. b).39) para su uso en cromatografía en gel. Comparar la ecuación (8. El coeficiente de partición de los solutos A (ASB) y B (glucosa) está dado por: donde Vc es el volumen total del lecho de la columna y Kp¿ y K son los coeficientes de partición. El volumen de los poros V¿ puede ser calculado con la expresión: K = aWr B donde a es la masa seca de gel y WT la capacidad hidratanten de la gel. a). Se desea escalar la operación de esta columna a una columna de 0. La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Resp. \§j Ky de. Determinar los volúmenes de elución de la ASB y de la glucosa en la nueva columna.

12.Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica. [§/Kg]. n: Duración del ciclo.. [ciclo/h].0. CE'. Resp. [$/Kg de adsorbente]. [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo].02 Kg deproducto/Kg de adsorbente — ciclo. L = nt: Número de ciclos en la vida del adsorbente. a).00//f<7 y tiene una vida de 2. [$/Kg]. [§/Kg]. t: Tiempo de vida del adsorbente.625//f <jr de producto 8.6. . CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. Impacto del costo del eluyente sobre el producto. Obtener una expresión del impacto del costo del adsorbente sobre el costo del producto. [§/Kg]. 0. P: Productividad promedio. [h].000 h.5 y 1. en el rango de O < P < 0. La operación se efectúa de tal forma que se inyecta una muestra cada 2.05 c). Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0.8. n: Duración del ciclo. CT'.1. [ciclo¡h]. t: Tiempo de vida del adsorbente. [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo]. PROBLEMAS 487 p: Productividad promedio. considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. Impacto del costo del adsorbente. CR: Impacto del costo del regenerante sobre el producto. [h].5 h y la productividad promedio P es de 0. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el producto. CA = $0. c). En una operación cromatográfica el adsorbente tiene un costo de $10. regenerante y eluyente sobre el producto. b).

5 cm Resp.015 HETP (cm) 0. Estimar el número de etapas teóricas y la altura equivalente de una etapa teórica.10 g/l a los 670 s. C = 14 s 8.En la cromatografía de ASB se obtienen los siguientes datos: v^f 0. B. Resp.12 0. Demostrar que: 8.En una separación cromatográfica se obtiene un pico de hemoglobina con una concentración máxima de 0. A = 0. B = O.19 0.005 0.En una separación cromatográfica de albúmina y hemoglobina se aplica una muestra que contiene un gramo de cada una de estas proteínas.13. obteniéndose dos picos con las siguientes características: . TV = 47 y HETP = 0. y C de la ecuación de van Deemter para la columan empleada.488 CAPÍTULO 8.. [§/Kg de adsorbente — ciclo de regeneración].14.. M: Costo de eluyente.010 0. Ciclos por ciclo de regeneración.. si la columna utilizada tiene una longitud de 16.15.35 cm 8. la cual se eluye con un flujo de 5 cra 3 /ram. Lft'.22 g/l a los 820 s y una concentración de 0. [$/Kg de adsorbente — ciclo]. CROMATOGRAFÍA POR R: Costo del regenerante.26 Estimar los parámetros A.05 cm.

16. 1992): Dp = 8. máxima Tiempo de elución Conc. Resp. 500 s b). Concentración de polímero en la partícula de adsorbente^ 0..25 g/l 680 s 0.4.22 g/l 820 3 0. Calcular la porosidad interna del empaque de la columna para esta proteína.34 x 10'10 (-7777^ 1 exp [-0.04 *g/cm? . en un tiempo t Tiempo t 0. €i = 0.17.200 s b).8. Comparar este valor con el que se obtiene mediante la correlación para este tipo de geles (Boyer y Hsu. Cuando se corre albúmina en una columna de 16. 1.11 g/l 600 s 0.9 x 10~7 cm2/s.. Para albúmina RE = 0.1307v (M1/3 + 1245) CÍ/21 V uM1/3 / L ' J J donde: Ai: Peso molecular de la mioglobina= 16890 Da.775 8.5 cm de altura y 2.5 8. Resp.5 cm de diámetro con un flujo de 5 cm3/mw su tiempo de retención es de 680 s.6. PROBLEMAS Albúmina Hemoglobina Conc. T: Temperatura=293 °K.1 y PR = 0. //: Viscosidad del solvente=0.El valor experimental para la difusión en el poro en una matriz de agarosa es de 3.La porosidad de un lecho medida con azul de dextrano es de 0.01 g/cm — s Cf. 600 5 c).10 g/l 670 s 489 Calcular el rendimiento y la pureza de la albúmina a los: a).

F. 259-272. C. y Wilke. Jansen. W. Bird.B.. P. J. AlChE. Furusawa. P. Fiechner. Chem. 490-498... CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. 152175.P.E. T.H.T. Biotechnology Progress. 1982.S. 1992. Gosling. Rev. 1985.490 CAPÍTULO 8. México. 9. P. Fenómenos de transporte. IEC Funcl. H. Suzuki. M. Boyer. 43-76... 11. 1988. New York. Vol.. J. y Hu. y Sweetenham. J. Várady. Sci. y Hedman. R. E. En: Adv.. Verral. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.. 8. C. Janson J. Modeling for scale-up and optimisation of packed-bed columns in adsoption and chromatography. . New York. Janson J. G. John Wiley and Sons. W. 9-13.L.. B9-B23. Eng.A. y Afeyan. 1987.R. Eng. 2. 1. 7. C. 183-219.).B. M. En: Separations for biotechnology. 1986. L. 1. y Smith. y Hsu. Gibbs S. J. 13. 1964. M.J. 38.7 Bibliografía Arnold. Ed. On the optimization of process chromatography of proteins. Eng. Reverte. SpringerVerlag. Biochem. Large scale chromatography of proteins. M. Bioprocess Computations in Biotechnology. Ellis Horwood. Meys.W.. 2.P. Analysis of affinity separations. F. 43-99. 10. New York.N. 226-231. Belter. S. 3. T. 1987. England. Ghose. 1990. (Eds. R. y Lightfoot E. P. M. Fulton.M. Ellis Horwood. 229-264. 1976. Blanch. Experimental studies of restricted protein diífusion in agarose matriz. Biotechecniques. (Ed. Catal.H. Cowan.N. 1991. W. 25. y Hedman.K. A. 30. Antibody quantification in seconds using amnity perfusión chromatography. J. Cussler.S.). Scaling up gradient elution chromatography. 25. 1. y Lighfoot E. Stewart.M. y Hudson.

scale-up and optimization of chromatographic processes. 1987.. y Perrut.).M. M. Scaling rules for isocratic elution chromatography. Wang. 363. Costa. N. Lapidus. New York. J.R. Ladisch. En: Advanced Biochemical Enginnering. Phys. Nicoud. P. 34.J.8. J. Netherlands. 1990. 56. New York.A. Framework for maximizing throughput in preparative liquid chromatography. N. BIBLIOGRAFÍA 491 Knox J. Marcel Dekker. y Amundson. Bungay.). y Pyper.S. Wankat. y Klinkenberg. En: Separation Processes in Biotechnology. 1991. 1-56. C. J. R. Ion exchange in purification. (Eds. 1006-1019. The effect of longitudinal diffusion in ion exchange and chromatographic columns.).J. 1986.M. AIChE Journal. Eng. En: Chromatographic and Membrane Processes in Biotechnology. H. 271-289. G. Asenjo. (Ed. L. (Eds. . Separation by sorption. H. John Wiley and Sons. Y. 1956. 359-400. 1952. 219-237. 6. Chem. Chem.A: y Cabral. 984-988.C y Koo. of chromatography. Kluwer Academic Publishers. 381-413. 9. y Belfort. Mathematics of adsorption in beds VI. Sci. F. 1988. 12. 5.R. J. Longitudinal diffusion and resistance to mass transfer as causes of nonideality in chromatography. A.R. M. Operating modes.7. Zuiderweg. J.. van Deemter.L.

3. las siguientes: 1. Los agentes precipitantes seleccionados no deben producir desnaturalización del soluto y deben proveer una mayor estabilidad del soluto en el precipitado que en la solución.utiliza es sencillo.en forma continua. entre otras.1 Introducción Algunos productos biotecnológicos presentan solubilidades que varían con la temperatura. Puede realizars. por lo que es una operación que se usa con frecuencia al inicio de un proceso de bioseparación. son de las operaciones más importantes para la recuperación y purificación de proteínas tanto a nivel laboratorio como a escala industrial. . Es una operacicn que se adapta fácilmente a gran escala. 493 . Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos mediante la operación de precipitación. La precipitación de proteínas y la subsecuente recuperación del precipitado. 2. Las ventajas de usar la precipitación para la concentración y purificación de solutos SOD. la fuerza iónica y con la constante dieléctrica del medio. El equipo que . el pH.Capítulo 9 Precipitación 9. En la precipitación se concentra el soluto de una solución convirtiendolo en sólido mediante la acción del agente precipitante. Teóricamente la precipitación debe producir un soluto concentrado y puro.

Este puede ser una sal neutra como el sulfato de amonio. un agente que altere el pH de la solución". un solvente orgánico como etanol.4 se presentan algunos aspectos del diseño de dichos equipos. PRECIPITACIÓN Tabla 9.494 CAPÍTULO 9.2 Fundamentos La precipitación de proteínas puede realizarse empleando diferentes principios (Tabla 9. 9. La precipitación por disminución de la solubilidad de la proteína de interés se efectúa por medio de un agente precipitante.2 se revisan los fundamentos de la precipitación incluyendo algunos métodos para la precipitación de proteínas.3 se hace mención de los equipos utilizados en esta operación y en la Sección 9.1: Pincipios de la precipitación de proteínas. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos éstos son baratos. . Principio Agente Precipitante Disminución de la solubilidad Sales (Sulfato de Amonio) pH (Precipitación isoeléctrica) Solventes (etanol) Polímeros no iónicos Desnaturalización selectiva. o algún polímero como el polietilenglicol. Este capítulo se enfoca a la precipitación de proteínas debido a su gran interés biotecnológico. En la Sección 9.1). acetona o éter. En la sección 9. Afinidad Ligandos 4.

2. las proteínas que presentan mayor hidrofobocidad (por contar con mayor cantidad de aminoácidos hidrofóbicos en su superficie) precipitan más fácilmente que las de menor hidrofobocidad.2. La proteína permanece en solución cuando termodinámicamente es más favorable estar rodeada por el solvente que estar en un agregado con otra proteína formando una fase sólida. • Precipitación por Afinidad. Debido a su naturaleza anfotérica cuando una proteína se encuentra en solución acuosa produce complejas interacciones con la solución que la rodea. De lo anterior se desprende que la estructura de la proteína determina su solubilidad. La protema puede insolubilizarse ya sea cambiando las características de su superficie. Particularmente. pH y algunos solventes orgánicos. • Precipitación por Desnaturalización Selectiva.9. 9. FUNDAMENTOS 495 En la desnaturalización selectiva se producen cambios en la conformación de las proteínas contaminantes con el propósito de aislar en la solución la proteína de interés. utilizando como agentes precipitantes temperatura. Un tipo reciente de precipitación lo conforman los métodos que se basan en la capacidad que tienen las proteínas de formar complejos mediante la interacción de los sitios activos de éstas con ligandos específicos.1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad El hecho de que las proteínas sean moléculas anfotéricas se debe a que sus superficies (Figura 9.1) presentan regiones hidrofóbicas. o cambiando el solvente que la rodea. cuando se agrega un agente precipitante a la solución. En esta sección se revisan los tres métodos básicos de precipitación: • Precipitación por Disminución de la Solubilidad. y regiones hidrofílicas cargadas ya sea positiva o negativamente. En el primer caso las proteínas tienen una baja solubilidad y en el segundo caso una alta solubilidad. . Como el cambiar las características de la superficie de la molécula puede implicar cambiar la proteína misma.

Precipitación isoeléctrica. . . Precipitación con Sales Una de las técnicas más ampliamente utilizadas para la purificación de enzimas es la llamada precipitación por insolubilización por salado o "salting out".1: Esquema de la distribución de carga y de zonas hidrofóbicas en una molécula de proteína típica. .Precipitación con polímeros no iónicos. Se realiza agregando altas concentraciones de sales a la solución en leí que se encuentra la proteína para producir su precipitación. Los métodos utilizados para la precipitación de proteínas que se revisan en esta sección y que están basados en la disminución de la solubilidad por alteración del solvente son: .496 CAPÍTULO 9.Precipitación con solventes.Precipitación con sales. generalmente se opta hacer cambios en el solvente que alteren la solubilidad de la proteína. . PRECIPITACIÓN wm Regiones hidrofóbicas Figura 9.

1990). FUNDAMENTOS 497 Insolubilización por salado [Sal] Figura 9.2.2 muestra una curva característica de la solubilidad de una proteína como una función de la concentración de la sal en el medio. En esta figura se pueden apreciar dos regiones. y la otra donde la solubilidad de la proteína disminuye a medida que la concentración de sal aumenta llamada región de insolubilización por salado o "salting out". llamada región de solubilización por salado o "salting-in". Aquellas proteínas que presentan mayor número de regiones hidrofóbicas sobre su superficie. Mecanismo: Una descripción simplificada del mecanismo de insolubilización por salado está basada en el hecho de que la adición de las sales elimina el agua de la protema hidratada.2: Efecto de la concentración de sal en la solubilidad de proteínas: Regiones de solubilización por salado e insolubilización por salado. dejando las regiones hidrofóbicas en libertad de combinarse intennolecularmente (Glatz. la primera del lado izquierdo de la figura. forman agregados y precipitan más . donde la solubilidad de la proteína se incrementa con la concentración de la sal. La Figura 9. El punto máximo de esta curva es característico de cada tipo de proteína.

Debido a esta propiedad hay proteínas que pueden permanecer en solución a altas concentraciones de sal.3: Ordenamiento de las moléculas de agua frente a las regiones hidrofóbicas de la molécula de proteína.498 CAPÍTULO 9. Si la precipitación de proteínas utilizando sales se presenta como una serie de tres procesos. 1994): Cuando las moléculas de proteína están en solución las moléculas de agua presentan un ordenamiento como el que se muestra en la Figura 9. PRECIPITACIÓN Figura 9. Una descripción más detallada de la precipitación con sales es la siguiente (Scopes. esta disolución puede ser representa por: . Este ordenamiento lo produce el contacto entre regiones hidrofóbicas de la proteína con la solución acuosa.3. de tal forma que en el primer proceso se considere la disolución de la proteína en agua. Este ordenamiento es inestable termodinámicamente comparado con el que presentan las proteínas sin solvatar conjuntamente con las moléculas de agua libre. rápidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofóbicas.

P') + (ri! + n2)H2O (9. En el segundo proceso que es hipotético.4) (9. De esta unión se liberaría agua por medio de la siguiente reacción: P •niH20 + P' • n2H2O -+(P. se considera a dos moléculas de proteína en disolución que podrían unirse al interactuar a través de sus residuos hidrofóbicos.2.2).5) La Figura 9. FUNDAMENTOS 499 P + nH2O -> P • nH2O (9.P' + A+ •niH2O 4. El proceso completo puede describirse de la siguiente manera: P-P' + (ni + ni)H20 + (AB)aai-* P .2) donde (P — P') representa el agregado de proteína que puede ser formado.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipitación de proteínas (insolubilización por salado) basado en el proceso descrito anteriormente. A (7° puede ser pequeño y su signo depende de la magnitudes de AS0 y A//°.B~ • n2H2O (9.1) donde nH2O representa el agua ordenada alrededor de los residuos hidrofóbicos de la proteína P (el proceso tiene una AS° y una AG° negativas y por lo tanto una A//° también negativa).1). Puesto que la proteína es soluble no ocurre el agregado dado por la ecuación (9. AG° a bajas concentraciones de sal será positiva para una proteína soluble en agua. se producen agregados de proteína y éstos precipitan. el cambio en la entalpia se espera que sea aproximadamente el inverso del que presenta el proceso de la ecuación (9. En este segundo proceso se tiene que A5° es grande y positiva.2) son atrapadas por la sal. Esto es: (AB)ml + (ri! + n2)H2O -> A+ . .niH2O + B' • n2H2O (9.9.3) para esta reacción A//° es positiva. las moléculas de agua liberadas de acuerdo al proceso hipotético de la ecuación (9. En el tercer proceso se agrega una sal a la solución.

En esta ecuación: S: Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina A: Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura Esta constante usualmente toma un valor mínimo en el punt( isoeléctrico. Uno de los más ampliamente utilizados es el de Cohn. pero varía con el tip< de sal y de proteína. . Las sales que contienen aniones polivalente tales como sulfates y fosfatos tienen valores de ra mayores qui las sales univalentes. es característica de cada proteína e independient< del tipo de sal.500 CAPÍTULO 9. Debido a lo anterior los modelos de precipitación son de carácter empírico. de sal] (9. independiente del pH y de la temperatura.6' la ecuación (9. PRECIPITACIÓN + Sal Solución salina (Agregado que Precipita) Figura 9.5) es la ecuación de una recta con pendiente m y ordenada al origen A. m: Pendiente de la curva de insolubilización por salado. sin embargo la teoría de este fenómeno aún está en desarrollo. En este modelo la solubilidad de la proteína está dada por: log S = A — m[conc. Ecuación de la Precipitación con Sales: El mecanismo de precipitación descrito anteriormente proporciona una explicación para la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. Esta e.4: Esquema de la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. Los cationes polivalentes como el calcio o e magnesio disminuyen los valores de m.

Los datos experimentales que se presentan en la Figura 9. Fuente: Scopes. gliceraldehido fosfatasa deshidrogenasa y lactato deshidogenasa en proporciones 3:3:3:1. Se observa para este último caso una ligera desviación respecto al comportamiento teórico. Copyright ©1994.3) es un aspecto muy importante .4 70 % Sat. (-f) solubilidad en una mezcla de enzimas de músculo de conejo: aldolasa. En la Figura 9.5) para dos casos.0 60 2.5) (la escala de las ordenadas es logarítmica). FUNDAMENTOS 501 o- TJ 1 -H -2- 50 2. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. 2.0 en solución de sulfato de amonio: (o). Todos los derechos reservados. el de una enzima pura y el de una mezcla de enzimas. Naturaleza'de la Sal: La naturaleza de la sal que se utiliza en el proceso descrito por la ecuación (9. 1994.6 se muestra otro ejemplo experimental de precipitación de proteína que obedece la ecuación (9. En esta figura se observa que el comportamiento lineal depende de la concentración inicial de la enzima.9.8 M Figura 9.5 permiten apreciar el grado de ajuste del modelo dado por la ecuación (9. solubilidad de la enzima pura.2.5: Solubilidad de aldolasa de músculo de conejo a pH 7. piruvato kinasa.

Adaptada de: Bell etal. PRECIPITACIÓN E 10 T3 'E D í '« 1 1-1 0. Concentraciones iniciales de enzima (unidades/mi): (A) 5.5- Fuerza iónica ( moles/1) 0.4. ( + ) 25. Todos los derechos reservados.1 4 5 6 30 40 50 60 % de saturación Figura 9. .2. 1983 Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright ©1983.2. (o) 15.6: Efecto de la concentración de enzima en la insolubilización por salado de fumarasa por sulfato de amonio a 6°C.502 CAPÍTULO 9.

2. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea diferente a la de la solución para facilitar su separación. Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series de Hofmeister): citrato'3 > tartato'2 > SO'2 > F~ > IO^ > H2PO~ > CH3COO. Los cationes son efectivos en el siguiente orden: NH+ > K+ > Na+ 3.Determinación de la solubilidad de piruvato quinasa de músculo de conejo. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que requiere el método. para minimizar la dilución. algunas de ellas son las siguientes: 1. Ejemplo 9. Las sales que producen mejores resultados. Existen reglas heurísticas para seleccionar la sal más adecuada para un proceso de precipitación. se obtuvieron los siguientes resultados (Scopes. Las sales que producen enlaces e interactúan directamente con la proteína tienen efectos desestabilizadores. Añadir la sal en forma sólida y no como solución. 4. sin interaccionar directamente con ésta.1.> Cl~ > C/03 > Br~ > N0~ > CIO~ > I~ 2. 5.9.. esto es. En un experimento de precipitación de la enzima piruvato quinasa con sulfato de amonio a pH 7. FUNDAMENTOS 503 que debe considerarse. son aquellas que producen deshidratación de las regiones hidrofóbicas y fomentan la hidratación de las regiones polares de la proteína. 1994): . una mayor precipitación de la proteína.

.04 CAPÍTULO 9. los valores experimentales se ajustan por mínimos cuadrados y se abtiene que A = 10.salina] b). b).162 2 3 4 Concentración sulfato de amonio (M) 2.50 2.7 muestra la gráfica correspondiente. se tiene que la solubilidad de la enzima a una concentración 2.540 y m = 4.34 M de sulfato de amonio.5) la solubilidad de la enzima está lada por: log S = A — m[conc.079 0.43 x [conc. 1 PRECIPITACIÓN S (mg/ml) 0.258 3. Determinar los parámetros de la ecuación de solubilidad A y m.salina] donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva. La ecuación de solubilidad para la enzima piruvato quinasa está dada por: logS" = 10.316 1. De acuerdo a la ecuación (9.34 M de sulfato de amonio es: S = 1. Calcular la solubilidad de la enzima para una concentración !.60 2.24 a). La Figura 9. Para determinar los valores de los parámetros de la ecuación anterior. Sustituyendo el valor de la concentración salina en la expresión anterior. Solución: a). Dato No.37 2.43.4918 mg/ml Precipitación Isoeléctrica Otra técnica para precipitar proteínas se basa en la disminución de su solubilidad en el punto isoeléctrico.540 — 4.

4 70 % saturación 2. A este tipo de precipitación se le llama precipitación isoeléctrica.Las atracciones electrostáticas son bloqueadas por pequeños agregados de moléculas. Existe un pH llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de la proteína es cero. 1994.2. .7: Variación de la solubilidad de la enzima piruvato quinasa en función de la concentración de sulfato de amonio. Fuente: Scopes. Debido a esto existe una repulsión electrostática entre las moléculas ocasionando que su solubilidad se incremente. las moléculas proteicas poseen una carga eléctrica neta del mismo signo.8 se muestra el tipo de interacciones que se presentan entre moléculas cargadas: .0 2.9. En la Figura 9. y en consecuencia las moléculas de proteína tienden 'a unirse y a precipitarse.8 M Figura 9. FUNDAMENTOS 505 -2 - 2. Todos los derechos reservados. Mecanismo: Las proteínas por su naturaleza anfotérica presentan una carga neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH bajos. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. .En punto isoeléctrico el efecto de las fuerzas electrostáticas entre las proteínas es casi nulo. A este pH la molécula es incapaz de desplazarse en un campo eléctrico. Copyright ©1994.Cuando la proteína se encuentra a un pH diferente de su pH isoeléctrico. En estas condiciones la solubilidad de la proteína es mínima. .

debido a que los ácidos son baratos r varios de ellos como el fosfórico.idad de proteína no precipitada con respecto al pH. Cada proteína tiene un pH isoeléctrico característico por lo que la precipitación isoeléctrica puede utilizarse como una operación de pu•ificación de proteínas.8: Representación esquemática del efecto de las fuerzas electrostática sobre la proteína: a).2 ¡e muestran pH's isoeléctricos de algunas proteínas. PRECIPITACIÓN •f \ Baja interacción * + en el punto isoeléctrico Figura 9. En la Tabla 9. En esta figura Duede observarse que existe un pH al cual la fracción de proteína no precipitada es mínima. La Figura 9. clorhídrico y sulfúrico son aceptables :n productos alimenticios. c). Selección del agente precipitante. repulsión.9 muestra una curva típica de la variación de la can. que presentan una solubilidad conside•able aún cuando se encuentren en su pH isoeléctrico. cabe hacer notar que hay algunas )roteínas como las globulinas. Sin embargo. La principal desventaja de usar ácidos es su >otencial de producir daños irreversibles a la proteína. atracción. éste es el pH isoeléctrico. b). La precipitación isoeléctrica :omunmente se realiza a pH's ácidos.506 CAPÍTULO 9. atracción nínima a pH isoeléctrico. .

2. 7 . leproducida con el permiso de Springer-Verlag. Fuente: Bell et al.9: Efecto del pH sobre la concentración de .ración inicial del extracto acuoso.4 0. Copyright ©1983..proteína de soya jue permanece en solución.2 pH igura 9. 1983. Todos los derechos reservados.6 0. FUNDAMENTOS 507 0. expresada como una fracción de la concen.8 0.

0 5.2 6. Este efecto se debe principalmente a que el solvente presenta una constante dieléctrica menor que la del agua. lo cual produce un incremento en las fuerzas de atracción entre cargas opuestas y una disminución en el grado de ionización de los radicales de la proteína.0 9.0 5.2: pH's isoeléctricos de algunas proteínas.8 7.508 CAPÍTULO 9.6 4. lo cual significa que los iones en solución acuosa presentan interacciones más débiles que en otros medios. conjuntamente con una inmovilización parcial de las moléculas . y en consecuencia una disminución de la solubilidad de ésta. Proteína Pepsina Ovoalbúmina Seroalbúmina Ureasa (3 -Lactoglobulina 71 .0 Precipitación con Solventes La precipitación de las proteínas de una solución también puede realizarse mediante la adición de un solvente orgánico ligeramente polar.6 6.Globulina Hemoglobina Mioglobina Ribonucleasa Lisozima pH ~ 1.6 11.0 4. PRECIPITACIÓN Tabla 9. se producen agregados de moléculas proteicas que tienden a precipitar. Mecanismo: El agua se caracteriza por su alta constante dieléctrica (Tabla 9. a una solución acuosa de proteínas (a un pH y temperatura dados). Cuando se agrega un solvente orgánico como etanol o acetona.10) consiste en considerar un desplazamiento global del agua por el solvente.3). Otra forma de explicar la precipitación por solventes (Figura 9.

2.turas bajas. este tipo de precipitación debe trabajarse a tempe.0 21. El solvente puede desplazar las oléculas ordenadas de agua de las regiones hidrofóbicas estimulando precipitación de la proteína. Trabajar con temperaturas por arriba de 10°C provoca jsnaturalización de la proteína.4 2. Por ejemplo. FUNDAMENTOS Tabla 9. agua por la hidratación del solvente. Debido a que la influencia de la constante dieléctrica es muy sensible la temperatura. 1983) que está dada por: log S = log S0 -f — (9. lisma que varía dependiendo de la cantidad de solvente agregada. la precipitación de proteínas de plasma imano utilizando etanol.3 1. S0 es la solubilidad extrapolada.7) donde Ds es la constante dieléctrica de la mezcla solvente-agua.0 24. K > una constante que toma en cuenta la constante dieléctrica original el medio acuoso.3: Constantes dieléctricas de algunos líquidos a 20°(7. elección del solvente: La mayor desventaja de la precipitación con )lventes es la desnaturalización que puede sufrir la proteína por acción . cuación de la precipitación con Solventes: La expresión que tlaciona el cambio en la solubilidad de una proteína en su punto oeléctrico con un cambio en la constante dieléctrica del medio es una cpresión empírica (Bell et a/. Líquido Agua Metanol Etanol Acetona Benceno Hexano 509 D 80.0 33.9 . se lleva a cabo a temperaturas tan bajas uno —100(7.

Reproducida con el penniso de Springer-Verlag. PRECIPITACIÓN Solvente orgánico Región hidrofóbica Figura 9. 1994. Fuente: Scopes.10: Representación esquemática de las interacciones electrostáticas de agregación entre las proteínas en presencia de un solvente orgánico.510 CAPÍTULO 9. Copyright ©1994. Todos los derechos reservados. .

5). El modelo de Ogston se basa en la teoría termodinámica y concluye que los sistemas (proteína en solución acuosa-polímero) pueden ser explicados en términos de los coeficientes de interacción proteínapolímero. Los modelos desarrollados por Ogston y Laurent (Clark. 1971) considera. a la proteína como una . y sugieren que los polímeros excluyen a las proteínas de parte de la solución y reducen la cantidad efectiva de agua disponible para su solvatación. Algunos factores que deben considerarse en la selección del solvente son: El solvente debe ser completamente miscible en agua. sin embargo existen dos modelos que permiten una buena comprensión de este fenómeno. de tal manera que es importante seleccionar adecuadamente éste. 1989) conducen a una ecuación de solubilidad de la misma forma que la ecuación (9. Mecanismo: El mecanismo por el cual ocurre la precipitación cuando se utilizan estos polímeros no está claramente establecido. No debe reaccionar con las proteínas. Debe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente principalmente cuando se trabaja a gran escala. FUNDAMENTOS 511 del solvente. Dichos polímeros de elevado peso molecular son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas. Debe ser seguro. ya que algunos de ellos como los alcoholes son altamente inflamables y el uso seguro de los mismos ocasiona incrementos en los costos. El modelo de Laurent (Juckes. El modelo propuesto por Laurent se basa en un mecanismo de exclusión geométrica de regiones hidratadas de la proteína por el polímero. y proteína-proteína de las especies presentes.2. Precipitación con Polímeros no Iónicos La precipitación de proteínas también puede realizarse utilizando polímeros neutros como el polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. Debe ser un buen agente precipitante.9.

Considerando que el volumen total (Vt) es igual al volumen disponible (Vd) más el volumen excluido (K).512 CAPÍTULO 9.10 -KC como la solubilidad de la proteína es proporcional a la fracción de volumen disponible: = x . [//]. PRECIPITACIÓN esfera y al polímero como un cilindro.9) i \ 3 2. rp: Radio del cilindro del polimero.303 V rp ) donde v es el volumen parcial específico del polímero.8) [i]. por lo tanto. [L]. el volumen excluido por peso del polímero (W) está dado por: | = 1(1 . que la solubilidad (S) de la proteína es proporcional sólo al volumen disponible (V¿) dado por: Vd = exp [-7r/(ra + r p ) 2 ] donde: rs: Radio de la molécula de proteína. 1: Longitud total de la molécula de polímero por unidad de volumen (9.10-KC) donde: C es la concentración del polímero y — / (9. la fracción de volumen excluido Ve> y la fracción de volumen disponible Vd> están dadas por las siguientes expresiones: VO = 1 . supone que la proteína es incapaz de distribuirse dentro del polímero y.

(9. Considera que el potencial químico de la proteína //t en «encía de un polímero.9) es equivalente a la ecuación corresidiente a la precipitación por insolubilización por salado.10) que es la ecuación de una recta con pendiente K y ordenada en el El uso de la ecuación (9.9) proporciona un resultado similar (Juckes. está dado por: pi = fí0.11) . 1) al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en :cuación (9. La ecuación (9. La ecuación anterior de ser escrita en forma más conveniente como: logS^logk-KC o bien como: logS^X-KC jen X.FUNDAMENTOS 513 donde k es una constante de proporcionalidad. + R!T(lnm¿ + c¿t-m¿ + c¿.7). El modelo de Ogston que se deriva de una simplificación termodinica establece que la proteína permanece en solución siempre que potencial químico en solución sea menor que su potencial en la fase icipitada.-mj) donde: Proteína Polímero °: Es el potencial químico de la proteína en el estado estándar : Es la constante de los gases ideales ': Es la temperatura absoluta til Es la molalidad de la proteína ij\ Es la molalidad del polímero «•: Es el coeficiente de interacción proteína-proteína (9.

El grado de ajuste del modelo depende de 1 concentración de la enzima.13) puede ser utilizada para calcular la solubilidad d la proteína a diferentes concentraciones del polímero. La ecuación (9. Después de ésto el potencial permanece constan te. en e que solamente las interacciones polietilenglicol-proteína y proteína proteína son significativas. La Figura 9.11 muestra el comportamiento de la solubilidad de 1 alcohol deshidrogenasa en función de la concentración de PEG. el potencia químico se eleva y el sistema reacciona insolubilizando proteína inician dose la precipitación.10) puede ser escrita corn (Foster et al.514 CAPÍTULO 9.13 donde: RT En este sistema puede suponerse que el término fS es mucho má pequeño que In5 entonces la ecuación (9.12 donde S es la solubilidad de la proteína. la ecuación (9. Se puede apreciar que la cor centración de PEG requerido para reducir la solubilidad depende de 1 concentración de enzima.11 puede ser rearreglada en forma más conveniente como: (9. En un sistema polietilenglicol y proteína en solución acuosa. C la concentración d polietilenglicol.14 que resulta ser análoga a la ecuación de insolubilización por saladc La ecuación (9. de tal manera que cuando la concentrado de la enzima es alta es necesario considerar en la ecuación el términ de interacción proteína-proteína fS para un mejor ajuste.12) puede ser escrita como: \nS = X-aC (9. 1973): (9. a de niveles de concentración de la enzima. . / el coeficiente de interacción proteína-proteína y a c coeficiente de interacción proteína-polietilenglicol. PRECIPITACIÓ1 Ciji Es el coeficiente de interacción proteína-polímero Cuando la molalidad del polímero rrij se incrementa.

0- 1. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Lie. (o) 75 mg/ml.5- 1. b) log (S) + fS vs C. Copyright ©1973.p.5- 1.5- 6 10 14 6 10 Concentración de polietilenglicol ( % w/v) 14 Figura 9. .0- 0. Todos los derechos reservados. 1973.11: Relación entre la solubilidad S de la alcohol deshidrogenasa y la concentración C de PEG a dos concentraciones de la enzima: (ü) 8 mg/ml. et al. Fuente: Foster. FUNDAMENTOS 515 1. a) log (S) vs C.2.5- 0.

516 CAPÍTULO 9. Varios tipos de polímeros pueden ser efectivos en la precipitación de las proteínas el incoveniente es que algunos pueden generar una alta viscosidad que 5 dificulta su manejo. 9. Una ventaja adicional de la precipitación con polímeros no iónicos es que éstos estabilizan la proteína y permiten realizar la precipitación a temperatura ambiente. Se ha observado también (Bell et a/. a diferencia de la precipitación por . El objetivo de la desnaturalización selectiva es crear las condiciones en las cuales la proteína de interés no se desnaturaliza o su desnaturalización es mínima. los polímeros no ] iónicos generalmente pueden ser eluídos durante el paso de la proteína I por un intercambiador iónico. El polietilenglicol es un polímero disponible en varios grados de ' polimerización y presenta una viscosidad moderada. Además. puede utilizarse esta propiedad en las primeras etapas del proceso de purificación sujetando a la solución de proteínas a estas condiciones extremas. Si la proteína que se desea purificar presenta estabilidad en condiciones extremas de temperatura. salado en la cual debe eliminarse la sal antes de seguir con cualquier i operación de fraccionamiento por intercambio iónico.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva Los métodos de precipitación por disminución de la solubilidad son efectuados a condiciones moderadas de tal manera que la proteína de interés no se desnaturalice. mientras que para precipitar proteínas de bajo peso molecular las concentraciones deben ser mayores. . PRECIPITACIÓN Selección del Polímero: Es importante seleccionar adecuadamente el polímero que se utilice como agente precipitante. de tal manera que se eliminen por desnaturalización las proteínas contaminantes y se obtenga una buena recuperación de la proteína deseada. 1983) que se requieren bajas concentraciones de polietilenglicol para precipitar proteínas de alto peso molecular. pH. El polietilenglicol de peso molecular 4000 o mayor es más efectivo en la precipitación de proteínas que el de bajo peso molecular. o en solventes orgánicos.2.

2. T: Temperatura. [KJ /mol —° K}. k: Velocidad específica de desnaturalización. [M/L3]. El proceso de desnaturalización de la proteína por efecto de la temperatura puede ser descrito como un proceso de primer orden de acuerdo a la siguiente expresión: = -k[P] donde: [P]: Concentración de proteína disuelta. [KJ /mol}. Sin embargo. E: Energía de activación de la desnaturalización. t: Tiempo. R: Constante de los gases ideales. Cuando esto sucede. (9. puede usarse la temperatura para desnaturalizar y precipitar proteínas contaminantes y aislar la proteína de interés. FUNDAMENTOS Desnaturalización por Temperatura 517 En general las proteínas son muy sensibles a la temperatura. [t]. hay proteínas que se mantienen estables a temperaturas altas.15) La dependencia del proceso de desnaturalización con la temperatura está dada por: (9-16) de tal manera que la influencia de la concentración de proteína y la temperatura sobre el cambio en la concentración está dado por: P] donde: k0: Constante característica.g. [°K]. [t~1]. (9. [t~l].17) .

con E — 400 kj rao/"1. que produzca por un lado 1 . PRECIPITACIÓN 1-s 45 50 55 Temperatura (°C ) Figura 9. 1994. Fuente: Scopes.13 muestra un esquema teórico de las posibles curva de desnaturalización para diferentes enzimas. El mecanismo de desnatu ralización puede involucrar varios pasos. Esto significa qu es posible seleccionar una temperatura. La Figura 9. siendo ésta estable a temperaturas de hasta 58°. regla general el primer paso es el más lento e involucra el rompirnient< de los enlaces que le dan la conformación a la proteína. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.y en grado substancial la P3 y la P4. lo importante es determina. se desnaturalizan completamente las enzima Pl y P1. cual es la energía de activación del paso más lento o controlante. Cuando la enzima d> interés es la P5. si L solución se calienta a 57°. Po. Todos los derechos reservados Las proteínas tienen energías de activación relativamente altas de ta manera que presentan una variación muy significativa de la velocidac de desnaturalización con la temperatura. La Figura 9. Copyright ©1994.518 CAPÍTULO 9. cuando la energía d< activación es de E — 400 kj mol~l.1^ muestra un diagrama teórico del porcentaje de proteína que permanecí estable después de 10 minutos de incubación.12: Diagrama teórico de proteína que permanece estable después de 10 min de incubación.

.2. Es conveniente realizar el calentamiento en presencia de sulfato le amonio en la solución. debido a que éste estabiliza las proteínas e nhibe la actividad de las proteasas. se requiere contar con sistemas de enfriamiento idecuados. se mantiene por un )eríodo de tiempo a dicha temperatura y enseguida se enfria rápidanente. 1994. La precipitación con temperatura puede ser riesgosa debido a que os daños que se ocasionen a la enzima de interés son irreversibles. sobre todo en tanques agitados. Fuente: scopes. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Todos los derechos reservados. para lograr bajar adecuadanente la temperatura y evitar así que ésta pueda dañar a la proteína de nterés. que como es sabido se incrementa :on la temperatura.13: Esquema teórico de las posibles curvas de desnaturalizaión por temperatura de diferentes proteínas. La elución se calienta hasta una temperatura dada. lesnaturalización completa de una enzima y por otro permita que otra >ermanezca estable. FUNDAMENTOS 519 100- 1-s 50- 25- 40 45 50 55 60 Temperatura (°C ) 'igura 9. Copyright ©1994. Por lo tanto.

2.La forma integrada de la ecuación (9. La desnaturalización de una protema tiene una energía de activación de 400.58 kr combinando el resultado anterior con la ecuación (9. O í mol-°¡\ • J „r- 1 \ x O¿<JJ ^^1T x/ j/ . Cuando esta proteína se mantiene a 50° C por u n lapso de lOmin se desnaturaliza en un 50 %.. Solución: a).155 x 10~3 s~l b).Calcular la temperaratura a la cual la proteína sólo se desnaturaliza el 10 % en lOmin.15) se obtiene: ^323 °K kT 'E /323 -T\l R V 323T )\ 6.14) es: P / .520 CAPÍTULO 9. x — = exp(-kt) •In cuando la desnaturalización es del 50 % la constante k está dada por: k = -ln(0..5) lOmin k = 0.58 - 400000 -^-7 1/323 .14).5) ln(0.0693 min~l k = 1.9) = 6. PRECIPITACIÓN Ejemplo 9..000 J/mol. ^323 °K kT ^323 °K ln(0.De acuerdo a la forma integrada de la ecuación (9.Cinética de desnaturalización ...T\\ mol oqi O. b). a).Calcular la constante de la velocidad específica de desnaturalización.

. 1994. La desnaturalización por pH ocurre tanto por la formación en la lécula de proteína de regiones con cargas iguales que tienden a resrse. •oducida con el permiso de Springer-Verlag. Todos los derechos reservados.14: Esquema de la desnaturalización de una proteína por :to del pH. Fuente: Scopes. Este proceso es esencialmente similar al que ocurre la desnaturalización por temperatura. como por el rompimiento de las fuerzas de atracción que le dan :onformación a la proteína (Figura 9. La velocidad de desnaturalización a pH's extremos ya sea ácidos o icos depende del tiempo que tarde la proteína en abrirse y perder conformación.0 ura 9. Copyright ©1994. la temperatura es: T = 46°C' snaturalización por pH 3Ído a que ciertas proteínas de interés son estables a pH's extremos.14). la utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitai por desnaturalización selectiva de sus proteínas contaminantes.FUNDAMENTOS 521 H. Las fuerzas internas obligan a la molécula a abrirse provodo su desnaturalización.

Después de un tiempo de incubación a esta temperatura la solución se enfría. Este tratamiento permite desnaturalizar las proteínas contaminantes y obtener la deshidrogenasa. y de lograr la máxima precipitación de las proteínas contaminantes. Una proteína estable en solventes orgánicos es la alcohol deshidrogenasa de levadura. Cuando se utilizan solventes orgánicos como etanol. PRECIPITACIÓN Desnaturalización por Solventes Orgánicos La estabilidad que presentan algunas proteínas en una solución con solventes orgánicos es una propiedad que ha sido utilizada en procesos de purificación. Esta enzima puede ser purificada mediante un tratamiento con 33% vol/vol de etanol.15 se muestra la desnaturalización de la enzima gliceraldehido fosfato deshidrogenasa con varios alcoholes a una temperatura de 30°(7 y un tiempo de incubación de 30 minutos (Scopes. acetona o cloroformo para desnaturalizar proteínas.2.3 Precipitación por Afinidad La precipitación de proteínas por afinidad es un método de precipitación selectivo que se basa en la capacidad que tienen las proteínas para unirse con ligandos por medio de sus sitios activos. un inhibidor. o un anticuerpo. En el caso de la afinidad bioespecífica el ligando puede ser un sustrato. 9. 1994). En el caso de pseudoafinidad los ligandos utilizados son colorantes o metales. El pH y la temperatura de la solución deben definirse y manejarse cuidadosamente (pues también actúan sobre la proteína de interés) con el fin de maximizar el rendimiento y la pureza de la proteína de interés. La simple adición de ligandos a una solución proteica generalmente no es suficiente para que ocurra la precipitación. En la Figura 9. Es necesario que el ligando propicie un estado de agregación de los complejos ligando- . mediante la precipitación de proteínas contaminantes con estos solventes. la temperatura de la solución se mantiene entre 20 y 30°C con el fin de acelerar el proceso.522 CAPÍTULO 9. El aumento de temperatura permite que la cantidad de solvente utilizada sea menor que la empleada en la precipitación convencional de proteínas.a 25°C.

(O).2. 1-pentanol. Copyright ©1994. 1-propanol. (•). 1-butanol. (ü). Todos los derechos reservados. FUNDAMENTOS 523 10 Figura 9. (<). 1994. metanol. Scopes. (+).9. etanol. 2-propanol. . Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.15: Desnaturalización de gliceraldehido fosfato deshidrogenasa: (o).

llamado inmunoprecipitado. Este ligando se une con las proteínas o enzimas y forma agregados. Copyright ©1994. El tipo de agregados que se forman depende del tipo de ligando y de la proteína. La Figura 9. a).16: Representación esquemática de la formación de agregados por inmunoafinidad y por afinidad.524 CAPÍTULO 9. b) Agregado en forma de red producido por un anticuerpo policlonal y una proteína tetramérica o por ligandos bis-NAD y una proteína tetramérica. Este tipo de agregados se producen en forma natural en el caso de los sistemas antígeno-anticuerpo. El principio de precipitación por inmunoafinidad se ha generalizado .16 se presentan dos sistemas de precipitación por afinidad. proteína. En el caso de que las proteínas sean oligoméricas se originan redes como la que se muestra en la Figura 9. Todos los derechos reservados. La precipitación por afinidad bioespecífica ocurre sólo cuando se agrega un ligando específico a la solución de proteínas.18b. Reproducida con el permiso de Spriiiger-Verlag. PRECIPITACIÓN1 a) b) Figura 9. En la Figura 9. Fuente: Scopes.16a presenta un agregado producido por la unión de un anticuerpo policlonal y una protema monomérica. 1994. Agregado en forma de cadena constituido por un anticuerpo policlonal y una proteína monomérica.

En base a lo anterior. La limitación de este enfoque de la precipitación radica en que se lica únicamente a proteínas oligoméricas.í. Esta técnica de precipitación por afinidad ha tenido m éxito en la precipitación de deshidrogenasas utilizando como pretitante el ligando Bis-NAD . y es necesario llevar a cabo rias pruebas experimentales para determinar cuál es la concentración tima de bis-ligando a la que ocurre la precipitación de la totalidad la proteína.16b. 3 Equipo de Precipitación operación de precipitación puede realizarse en diferentes tipos de ictores entre los que se encuentran los reactores intermitentes. 4 Diseño de Precipitadores el diseño de un proceso de precipitación debe tomarse como base el nportamiento cinético de las partículas en solución. esta sección enfoca a dos aspectos: . tubues y continuos tipo tanque agitado (Figura 9. el cual ya ha sido aplicado a escala industrial. En la Figura 9. tos ligandos se enlazan covalentemente a los sitios activos de las )teínas oligoméricas y forman redes semejantes a la que se muestra la Figura 9. insiste en sujetar el ligando a un polímero obteniéndose así agentes iltifuncionales (macroligandos) que se unen con la proteína de interés forman agregados.17 se muestra un esquema de otro enfoque de la ?cipitación por afinidad. EQUIPO DE PRECIPITACIÓN 525 ra el uso de otro tipo de ligandos que no son anticuerpos y que se >ducen de manera artificial.18). dando origen a un nuevo enfoque en la jcipitación por afinidad al utilizar ligandos bifuncionales bis-NAD. El conocimiento este comportamiento permite hacer la selección adecuada de la geo>tría en que se realizará el proceso. Se ha reportado un rendimiento del 85% la recuperación de la enzima lactato deshidrogenasa (Luong et a/. 37). Posteriormente se produce la precipitación del nplejo ligando-proteína al agregar sal a la solución o al cambiar el [ de la misma (Janson. 1984).

-. disode la protema del macroligando.producía Cambia tn «I pH d* U solución Precipitado maerotiga'ido • producto S*pv«ción ¿«Ipredudo o 0 ¿b o o o O 9. formación del |o ligando-proteína. PRECIPITACIÓN A// Extracto crudo p. precipitación del complejo. o 0 0 ° o a Formaoibod» agregado* maoofigafldo .17: Representación esquemática. b). de la precipitación del comgando-proteína al agregar una sal o cambiar el pH de Ja solución.526 CAPÍTULO 9. . ición del macroligando a la solución proteica. c). d).

como las que originan sus cargas eléctricas. En este apartado se revisan los aspectos .DISEÑO DE PRECIPITADORES 527 Alimentación ^ C2 Alimentación to (b) (a) P /->--v£:-. a una solución proteica las moléculas presentan por efecto de su ía cinética un movimiento al azar que produce choques entre sí.•?•. Cinética de la Precipitación. Nucleación: Al disminuir la solubilidad de la proteína se inicia la precipitación al formarse en el seno de la solución pequeñas partículas (núcleos). ira facilitar su estudio la cinética de la precipitación se divide en fruientes fases: Mezclado inicial: La solución proteica se mezcla con el agente precipitante para eliminar las barreras.18: Tipos de reactores utilizados en la precipitación de ínas. a) Intermitente b) Tubular c) Continuo tipo tanque agitado. que las moléculas de proteína queden asociadas al chocar se ree eliminar tanto las barreras producidas por las moléculas de agua is rodean.cos relacionados con la precipitación sin que ocurra desnaturalin de la proteína.: (c) í^S VÜ£^^ V Producto a 9. 1 Cinética de la Precipitación ecipitación de proteínas puede efectuarse ya sea desnaturalizando desnaturalizar éstas. . Diseño del Precipitador.

1: Diámetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitación. La frecuncia de las colisiones está limitada por la velocidad de difusión de las moléculas y no por el mezclado. se requiere que : éste se difunda rápidamente para obtener una mezcla homogénea.1 y 10 4. El f tiempo requerido para obtener una mezcla homogénea esta dado por: donde: D: Coeficiente de difusión. Crecimiento influenciado por el flujo: El mezclado favorece el crecimiento del agregado formándose partículas en el rango de 1 a 100 5. En la descripción anterior las fases de crecimiento 3 y 4 son llamadas también crecimiento pericinético y agregación ortocinética. [cm2/s]. Se forman las partículas primarias de tamaño entre 0. PRECIPITACIÓN 3. respectivamente. Crecimiento limitado por difusión: En esta fase los núcleos van creciendo conforme la proteína difunde del seno de la solución hasta los núcleos. solvente o polímero no iónico) a la solución de proteínas. Floculación: Los agregados se juntan formando los grandes flóculos. De acuerdo a la teoría de difusión de remolinos el diámetro de éstos está dado por: donde: .528 CAPÍTULO 9. Mezclado Inicial Una vez que se agrega el agente precipitante (sal. [cmj.

19) conduce a: -. [g/cm3]. (9 20) - yi\ Concentración de partículas de soluto ¿ en el tiempo t.17) y (9. [HP/cm3]. [s] k: Constante del proceso. Crecimiento Limitado por Difusión o Crecimiento Pericinéico. por lo que el tiempo en que esto curre puede despreciarse. puede ser escrita de acuerdo a la teoría de Smoluchowski por un proceso de egundo orden: .18) se pueden estimar tiernas de mezclado mediante parámetros del sistema. Este tiempo es una ledida del tiempo necesario para tener una mezcla homogénea. 529 P/V: Razón de potencia por unidad de volumen del sistema de agitación.21) . [I/mol — s]. Combinando las ecuaciones (9. En esta fase la velocidad con que disminuye la concentración e partículas de soluto suspendidas en el seno del líquido.4. [cm2/s].-. En esta fase del proceso se inicia la formación de las equeñas partículas de precipitado (núcleos) que aparecen después de gregar el agente precipitante. En algunos casos como en los sistemas oloidales esta etapa es instantánea. i/: Viscosidad cinemática. En esta etapa las partículas de precipitado e encuentran dispersas en el líquido.— = k* y^ yio (9. íucleación.í =ks/-2 donde: t: Tiempo. [mol/I]. DISEÑO DE PRECIPITAD ORES p: Densidad de la solución. Considerando un tiempo de nucleación instantáneo la integración e la ecuación (9.

PRECIPITACIÓN donde y to es la concentración inicial del soluto i. M: Peso molecular promedio de las partículas de precipitado. se puede obtener la siguiente expresión: M = M0 + M 0 y io kí donde: M0: Peso molecular del soluto. La ecuación (9.21). El valor del coeficiente de difusión de la ecuación anterior es un valor promedio de todas las partículas en el sistema.24) donde: á. La ordenada al origen es M0 y el valor de la pendiente está dada por M0í/.23) La ecuación (9. De acuerdo a la ecuación (9. de tal forma que a medida que la partícula crece el valor del coeficiente de difusión disminuye. Debido a que es difícil medir la concentración y. de acuerdo con la teoría de Smoluchowski. Si se conocen 7/to y M0 puede estimarse k. de .22) combinando las ecuaciones (9. Esto es: y¿M = yloM0 (9.19. es el diámetro de la partícula.20) y (9. el valor de la constante no se altera pues la disminución en D tiene como causa un incremento en la misma proporción del diámetro de la partícula d. De acuerdo a esta teoría k está dada por: k = SnDdN (9.530 CAPÍTULO 9. es el coeficiente de difusión. y TV. es el número de Avogadro. De aquí que esta etapa esté limitada por la velocidad de difusión.20) puede escribirse en términos del peso molecular promedio del precipitado utilizando un balance de masa. la ecuación (9. sólo depende de la difusividad y el diámetro de la partícula de soluto.-0k.22) se representa gráficamente en la Figura 9. D.23) aún cuando esto suceda.20) describe una recta con ordenada al origen \/yi y pendiente k. (9. La constante k del crecimiento pericinético.

Es decir. el movimiento del fluido provocará que las partículas choquen y formen agregados. tal manera que el producto Dd permanece constante.4. la determinación experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas. Crecimiento Limitado por el Flujo o Agregación Ortocinética. La difusión puede limitar el crecimiento de partículas pequeñas. Estos choques también pueden ocasionar rompimiento de los agregados.m aproximadamente. pero es menos importante en el crecimiento de partículas grandes. DISEÑO DE PRECIPITAD O RES 531 m = pendiente Figura 9. la velocidad con que disminuye la concentración inicial de esas partículas debido a los choques que forman agregados. En el proceso de precipitación cuando se agita una suspensión de partículas cuyo diámetro es mayor que una fj. Generalmente el tiempo de formación de las partículas primarias es mucho menor que el tiempo global del proceso de precipitación. y en consecuencia k permanece constante. está dada por: . En una suspensión agitada de partículas esféricas de tamaño uniforme de diámetro e?. El crecimiento de las partículas estará limitado tanto por el movimiento del fluido como por la concentración de partículas.19: Representación esquemática de M vs t para determinar experimentalmente el valor de la constante k.9.

—— = -aNd3 dt 3 P" (9. dicho término se hace menos importante conforme aumenta el tamaño de las partículas. por lo que para su integración se considera una fracción constante f de volumen de partículas del soluto a volumen de la solución. Este coeficiente puede ser estimado estudiando la velocidad con que decrece el número de partículas durante el crecimiento pericinético. Sin embargo.24) está dada por: 1/2 [ pv (9. Se ha encontrado que en ausencia de fuerzas repulsivas entre las partículas. la eficiencia de la colisión es proporcional a la (velocidad de corte)~°'18 y aproximadamente proporcional a d~°-73. indica la frecuencia con que un choque da lugar a un agregado.29) .26) se obtiene una ecuación en la cual no esta involucrado el diámetro de las partículas y es dt fP/V\ ~ 1/2 (9. Esta fracción esta dada por: 7TC?2 (9.24) se obtiene: v.532 CAPÍTULO 9. Si se sustituye la expresión de k en la ecuación (9.26) el diámetro d de las partículas depende del tiempo. PRECIPITACIÓN Ii = k V? Í>1 (9 2^ \&-¿\J) idealmente la ecuación anterior debería incluir un término para tomar en cuenta el crecimiento pericinético.27) En la ecuación (9. La constante k de la ecuación (9.26) en esta ecuación a representa un coeficiente que indica la eficiencia del choque.28) si ce esta ecuación se despeja d3 y se sustituye en la ecuación (9.

proceso conocido como envejecimiento del ipitado.spera antes de que la floculación comience. Debido a lo anterior la fase loculación generalmente se realiza a bajas velocidades de agitación L ocasiones sin agitación. Todas estas etapas determinan el tiempo . culación. de la 'Cidad de difusión y de la unión del agente floculante a la superficie a molécula de proteína. l)n un proceso de precipitación en el cual el crecimiento de las ículas está limitado por el flujo. Estos aspectos deben arse en consideración en el diseño del precipitador. Lo anterior se debe a que partículas que aparentemente pueden ir directo a una colisión.2 Diseño de Precipitadores )roceso de crecimiento de las partículas en la precipitación puede T limitado por varios mecanismos. debe conrarse que éste depende no sólo del tamaño de las partículas sino bien de la velocidad de corte del fluido. el cambio en la concentración de s tiene un decaimiento exponencial.DISEÑO DE PRECIPITADORES malmente. integrando la ecuación (9. Aún cuando hay pocos datos . Sin embargo. : . La aglomeración o floculación de las partículas de pretado es la última fase del proceso de precipitación.28) se tiene: 533 (~¿~J *} /p/vY'2] } (9 30) - londe j/io es la concentración inicial de soluto en la solución bajo consideraciones del modelo. en este caso la velocidad de floculación enderá del mezclado del agente con la solución de proteínas. D ara determinar el coeficiente de eficiencia de colisión a. La floculación espontanea de la suspensión puede ser estimulada por lición de agentes floculantes. tiena seguir las líneas de corriente del fluido con lo que disminuye la >abilidad de la colisión. Durante la agregación ortocinética el crecimiento es función directa mezclado. este mismo mezclado puede causar el pimiento de los flocules formados.

18) y (9.Precipitador intermitente. Cuando la velocidad de crecimiento pericinético es alta con respecto a la velocidad del proceso global de precipitación. las ecuaciones (9. se producen partículas primarias más grandes que las obtenidas en los precipitadores tubulares.29) establecen que la cinética de precipitadóra a nivel laboratorio y a gran escala será la misma siempre que la razón P/V permanezca constante entre ambas escalas. la velocidad de mezclado de los reactantes afectará el tamaño inicial de la partícula y las características de su crecimiento posterior. . A nivel laboratorio es muy usado el precipitador intermitente que consiste en un tubo de ensayo que se agita en vortex por un corto tiempo inmediatamente después de agregar el agente precipitante. como generalmente es el caso de la precipitación de proteínas. Posteriormente se deja en reposo toda la noche. 1986). puede suponerse que para proteínas que precipitan rápidamente.Precipitador Continuo. Precipitador Intermitente En un precipitador intermitente la proteína está expuesta a un rango de condiciones creadas por el agente precipitante durante el tiempo en que éste se agrega a la solución. dado que . entonces las condiciones inicíales de precipitación del material son diferentes a las condiciones finales. Otro arreglo básico es el vaso de precipitados agitado magnéticamente (Chan et a/. Para disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente y bien dispersado. De tal manera que en el diseño del precipitador deben tenerse muy en cuenta las condiciones de mezclado en las que se realizará la precipitación. y cuando éstas son controladas. En un precipitador intermitente todas las partículas son sometidas a fuerzas de corte similares. PRECIPITACIÓN para definir la relación que existe entre las condiciones de mezclado inicial y el tamaño de partícula.534 CAPÍTULO 9. En el escalamiento de un proceso de precipitación lo que interesa es que la cinética que se observa a nivel laboratorio sea la misma que la que se presente a gran escala. existiendo dos arreglos básicos: .

01 cm2/s = 1 HP = 746 x 107 g .01 era 2 /s. Precipitación de Caseína.cm2/s3 = 1000 / -0. A partir ia información anterior estimar: a).367 g/cm3 = 0.0 es de g/l. d es de 0.000 .002 x 10~4 cm y el coeficiente de difusión. la densidad precipitado pp medida a nivel laboratorio es de 1. El tiempo en que el crecimiento está limitado por la difusión y oncentración de partículas al final de este tiempo. El peso molecular M de la caseina-a es de 27.1 g/l = 27. D es de x 10~7 cm2/s.000.. Ejemplo 9. Se va a precipitar caseína artir de una solución que presenta una densidad ps de 1.008 M. El tiempo para alcanzar un tamaño de partícula de 50 //m. DISEÑO DE PRECIPITADORES 535 densidad de la solución /o. a y t/> no ibian con la escala. El proceso se va a realizar un tanque agitado con una potencia P de 1.032 g/cm3 y i viscosidad cinemática v de 0.08 ue el tiempo en que se realiza la nucleación es instantáneo. Solución: Se tienen los siguientes datos: = 1. b). el metro. La concentración de la caseína en la solución alimentada ?/.0 HP y un volumen V 1000 /. Se estima que el coeficiente de aglomeración a tiene un valor de 0.032 g/cm3 = 1.367 g/cm3. La caseína a de bovino es una proteína que precipita en presencia de -uro de calcio a concentraciones 0. la viscosidad cinemática í/.3.

20) y (9. combinando las ecuaciones (9.= — + (SxDdN)t de tal manera que: 27000 7 .032 -^ (o.08 a). El tiempo t corresponde al tiempo en el cual e crecimiento está limitado por la difusión.46 s) mol .23) para obtener: ..7 x 10.18) y sustituyendo valores s< tiene: 3 \ 1/2 t = 4D \P/VJ -.002 x 10~4 cm D = 8.3 cm" mol 1 entonces.5 x 10 0.^ mol 9 8.17) y (9.1/2 t = 1 1. i = 1.5 x 10~7 cm2/s a = 0. w ~7 cm 8(7r)(8.5 x lQ-7 cffil) 10 cm t = 3.12 x 10 -13 mol .Ol sai) 746xlo r£^2Í 6 3 4(8.17).1 103 cm3 (0.9 x 101 -(3.El tiempo requerido para un mezclado homogéneo está dadc por la ecuación (9.02 x 10¿J 1 3. PRECIPITACIÓN d = 0.46 s La concentración de partículas T/¿ al final de este tiempo se determin.536 CAPÍTULO 9. combinando las ecuaciones (9.002 x 10~4cm) x 6.

31 x 1CT5 sustituyendo estos valores se tiene: . b).39 x 1016 13 WMI — = 5 x 10~ yio la fracción de volumen de soluto en la solución es: w ^ / = —: 103 1.29): In J de acuerdo al balance expresado en la ecuación (9.10 g i¡) = 7.0. 27.El tiempo necesario para obtener partículas de 50 //m de diámetro está dado por la ecuación (9.21). y el peso molecular promedio M de las partículas de 50 fim es: M = M = M = 5.. DISEÑO DE PRECIPITADORES 537 la concentración final es mucho menor que la inicial.367 o ^r cm3 0.39 x 10 l6 9 1Q23 rnolec 4 TT (50 x 10 4 ) o mol entonces.4.000 yio 5.

Para'visualizar el diseño de precipitadores continuos. provocadas por la forma com se agrega el sulfato de amonio. y la partículas estarán sujetas a las fuerzas de corte durante el tiempo d residencia en el reactor (Glatz.31xlQ-5\ / ^ * /4bxiu ' I 106 cm 3 x 1. El mismo corrimiento se observa cuand hay variación en el grado de mezclado en un tanque agitado. alcanzándose a mismo tiempo las condiciones finales de precipitación. Las condicione de corte son muy parecidas a las de un precipitador intermitente. La Figura 9. 1990) . que pued ser debido a diferencias locales en el pH.538 CAPÍTULO 9. Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a cor siderar en el diseño del reactor.20 muestra la influencia del tipo de reactor sobre 1 curva de insolubilización por salado de la fumarasa (Bell et a/. 1983] Puede observarse que existe un desplazamiento en la curvas. se puede part de un sistema sencillo donde se cuenta con una suspensión diluida ( . En un reactor continuo tipo tanque agitado la proteína es puesta ei contacto instantáneamente con el agente precipitante. Las fuerzas d( corte a las que están sujetas las partículas pueden ser las que produc< el flujo laminar. Precipitadores Continuos En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punte donde se agrega el agente precipitante. es la agitación que se proporciona a 1 solución en la que se encuentra la proteína de interés. aún cuando la velocidad media de corte puede excede a la de un tanque agitado.Q8x7. Esto es part cularmente importante cuando se desea escalar el proceso debido a 1 relación que hay entre potencia y agitación.032 t - 4474 5 el paso controlante en esta precipitación es el crecimiento ortocinético. PRECIPITACIÓN ln(5 x 1Q-13) 1/2 _ /4xO. la proteína se ubica rápidament< a las condiciones finales en que ocurre la precipitación.

.20: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubiición por salado de fumarasa. . ü Contacto continuo r = 96 s . •reducida con el permiso de Springer-Verlag. V=0. V Contacto intermitente con sulfato amonio sólido.0 1. o Contacto intermitente con solución saturada de fato de amonio. 1983. Bell et a/. Copyright ©1983. DISEÑO DE PRECIPITADORES 539 15.0 10.38 1 y solución rUrada de sulfato de amonio.87 solución saturada de sulfato de amonio. Todos los derechos reservados. < Contacto continuo r = 918 s V=1.0 Fuerza iónica ( mol" 1 ) 7 SO 8 70 9 80 60 % de saturación $ura 9.

a.m/h]. q. [KJ/mol]. EG y E A. cr: Sobresaturación aparente. EB. [mol/I]. de tal manera que e rompimiento de los agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen 1993).]. h. b. f. Bajo estas condiciones es posible utilizar balances poblacionale para derivar expresiones de las velocidades de nucleación.]. r. /: Fuerza iónica. [fj. G: Velocidad de crecimiento pericinético.31 (9. [número de núcleos// — h]. [h]. g.índice de agregación. c. [Unidades consistentes. d. [adim.33 donde: B°: Velocidad de nucleación. p. crecimienti y agregación a partir de datos experimentales. Las correlaciones empí ricas que se obtienen son de la siguiente forma: til = kG exp veIu9T (9. PRECIPITACIÓN 20 g/l) y velocidades de agitación moderadas.540 CAPÍTULO 9. ko y k¿: Constantes cinéticas. e. Iagg. Medida del crecimiento ortocinético. s: Constantes empíricas. u: Velocidad de agitación.Energías de activación. .32 V J^ / (9. r: Tiempo de residencia promedio. [rpra]. ks.

Cuando la agregación es total el índice toma el valor de uno. ^: Número de partículas formadas por nucleación en un tiempo de residencia. se obtuvieron correlaciones empíricas siguientes: B° = 4. En el caso de una precipitación continua la sobresaturación . La definición de sobresaturación en un proceso de precipitación es ipleja... cuando existe agregación el índice toma el valor de cero. [núm/L3].4. [núm/¿3].DISEÑO DE PRECIPITADORES A su vez el índice de agregación está dado por: TT 541 (9. G = 0. lagg = 1. Ejemplo 9. En el estudio cinético de la precipitación de proteína a partir de una tción obtenida de una pasta de una semilla oleaginosa.Precipitación isoeléctrica de proteínas de una aginosa.2exp RT J .34) donde: 0: Número de partículas por unidad de volumen en el precipitado.de definirse como: /n o c \ (9'35) donde Ce y Ca son las concentraciones proteicas a la entrada y salida precipitador.

.6746) 0 .99 b).Aplicando las correlaciones correspondientes se tiene: B" = 4 .67 x 1015 ^^ / —h G = 0.2 exp 8.0. 7=0.6246)5'723(0.048)-°-215) ?° = 1.6246. la velocidad de crecimiento y el índice de agregación cundo la precipitación se efectúa a las condiciones siguientes: a =0.027)-°.7 exp' ° 8.007 (0. 8 x 1 0 " exp 1654 ° 8.048) 0 ..004 (0. b).Estimar el número de partículas por unidad de volumen en el precipitado.0 —— h Iagg = 1.314 -470 mo 7_ 0 ^ x 295 A ° ' ((0.027 rnol/¡ y T=295°K. PRECIPITACIÓN a).314 mcp/-°/\ x 295°/T *•* ((0..6246)°-67(0.314 — F x 295°K mol—°h -2860 ^ m l ((0. r = 0.003 (270) 0 ..542 CAPÍTULO 9. Solución: a).027)-°-1 (270)°-905(0. u= 270 rpm.De acuerdo a la ecuación que define al índice de agregación.048 /¿..008 ) /a55 .027)-°-091(270)0-625(0.048)-0-833) X-Y G = no o ^m 93.Estimar la velocidad de nucleación.

99) = 8.0. De tal manera que la precipitación puede realizarse por disminución de la solubilidad.5. Existen varias formas de realizar una operación de precipitación. El diseño de estos equipos se realiza mediante una combinación de experimentos y modelos cinéticos de cierto grado de complejidad.67 x 1015 ^^\ (0. Los equipos empleados en la precipitación pueden ser intermitentes o continuos en diseños convencionales. SUMARIO 543 Np Np Np = B°r(l-Iag3) = fl. dependiendo del tipo de agente precipitante que se utilice y el principio que se emplee.5 Sumario La precipitación es una operación empleada tanto para la concentración como para la purificación de soluciones proteicas. por desnaturalización selectiva y por afinidad.048 h) (1 .9. .oi6 xlO 1 1 ^ 9.

Resp A=5. Resp. en determinaciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes: % de Saturación (NH4)2S04 50 45 40 35 25 Actividad Específica 180.7 y m=-0. 1..87 8.6 Problemas 9.En la precipitación de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 mi.51 min .2.000 440.544 CAPÍTULO 9. Estimar el tiempo de calentamiento para que la desnaturalización sea sólo del 10 %.244 9.87 Obtener los parámetros A y m de la curva de precipitación para la actividad de la enzima en U/ml. PRECIPITACIÓN 9.000 650.65 23.000 Proteína total (mg) 29.000 430.80 21..1.Una proteína se desnaturaliza el 50 % cuando se calienta a 50°C por lOmin.28 17.000 200.

Biotechnology and Bioenginnering. J. 535546.7. B. y Lilly. Protein Purification: Principies and Practice. BIBLIOGRAFÍA 545 9. Shuler. 1-72. 1973. J. P.A. New York. 3. The Canadian Journal of Chem. S. C. New York. P. Marcel Dekker. Advances in Biochemical Engineering. Janson. (Ed. M. L y Male. SpringerVerlag. Eng. New York. 5. New York. M. Hoare.9. 1993.E. 229. Glatz. En: Separation Processes in Biotechnology. Trends in Biotechnology. 317. AIChE. 1986. 2. 1994.Y. A. Chan. T. 27. y Chen. M. 505-516.. Biochemica et Biophysica Acta. P. 281-286.D. y Dunnill. H. 1990. Precipitation. 31-38.). D. M.. . En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Rohani. R. K. 26. State of the art and future prospects. Clark. 147-179. L. and Dunnill.). Aggregation and precipitation kinetics of cañóla protein by isoelectric precipitation. 329-356. The kinetics of protein precipitation by different reagents. Juckes. Recent developments in downstream processing based on affinity interactions. Biochemica et Biophysica Acta. The precipitation of enzimes from cell extracts of Saccharomyces cerevisiae by polyethylene glycol.. Luong. 71. Scopes. 1983. Asenjo. R.7 Bibliografía Bell. P. En: Downstream Processing. Fractionation of proteins and viruses with polyethylene glycol. 1989. 1987. Dunnill. M. Springer-Verlag. M. 1971. Thermodynamics of protein partitioning in aqueous two phase system.Y. Hoare. I. Nguyen. 689-698. J. Foster. 387-393. W. M. (Ed. J. Tibtech. 41-71. The Formation of Protein Precipítales and their Centrifugal Recovery.R. 1984. Large-scale affinity purification. M.

el mecanismo mi>scópico de flujo (y rechazo) no es explicado en este enfoque. Es importante hacer notar que los principios básicos de estas oraciones son comunes. 547 . En esta etapa los caldos sujetos a purificación contienen al uto de interés en forma más concentrada y pura que el caldo original. es decir. bido a ésto los volúmenes a tratar son menores que los correspondites a las primeras etapas del proceso.Jltrafiltración D. Este ¿amiento es característico del enfoque de los fenómenos de transrte. ultrafiltración (UF) es una operación que emplea membranas espejes en diferentes tipos de arreglos para separar macromoléculas en ución de contaminantes más pequeños. Para describir un proceso de membrana es necesario poder estable• el movimiento relativo de los componentes de la mezcla a través de membrana. debido a la fuerza originada por el gradiente de presión. La ultrafiltración es utilizada en la etapa de purificación de caldos )lógicos. por medio de un gradiente presión. La ultrafiltración forma parte de un conjunto de "operaciones de ¡mbrana" empleadas en diferentes etapas de los procesos de biosepa.ión. neralmente se realiza una descripción fenomenológica donde la memina se considera como una caja negra.l Introducción .

2. En la sección 10. Se presenta una discusión sobre las condiciones óptimas de operación de un sistema en el marco de la mecánica de fluidos y los esquemas de operación más frecuentes en los sistemas de UF. 10. 10. ULTRAFILTRACIÓN En la sección 10. . esta sección hace énfasis en tres aspectos: « Los procesos de membrana. En este sentido. es conveniente revisar los fundamentos teóricos de la operación que facilitan su uso y correcta aplicación. 1986). Se presenta también en esta sección la teoría de la ultrafiltración que permite analizar el efecto de los diversos parámetros sobre el comportamiento de esta operación.548 CAPÍTULO 10. Estos procesos s< pueden caracterizar en forma general en base a: .2 de este capítulo se efectúa una descripción general de los diferentes procesos de membrana existentes con el propósito de establecer las principales similitudes y diferencias de éstos con respecto a la ultrafiltración.El tipo de membrana que emplean. Asimismo. • Flujo cruzado o tangencial • La teoría de UF.1 Procesos de Membrana Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana parí lograr una separación dada (Me Gregor. .2 Fundamentos Para el tratamiento de la operación de UF es conveniente establecer primero el marco donde se desarrolla. Se resalta la importancia que tiene la operación en flujo tangencial para este tipo de sistemas.La fuerza impulsora del proceso.3 se se describen las características más importantes de los principales equipos utilizados en los procesos de membrana.4 presenta los fundamentos del diseño de equipos de UF haciendo énfasis en el cálculo de áreas y tiempo de UF de dichos sistemas. La sección 10.

1) se pueden clasificar de la siguiente forma: Gradiente de presión.1 0.10* 10J . ¡producida con el permiso de Marcel Dekker Inc.1. MF Fuerza impulsora Presión de operación (KPa) fipo de membrana Flux Ifm2 — h flango de retención Especie Peso molecular D Hongos Levaduras Bacterias Coloides Virus Proteínas 10* .6. Todos los derechos reserdos.0.106 Antibióticos 300 . Microfiltración (MF).8.104 300. Gradiente de concentración Diálisis (D).8 0. El rango de tamaño de partícula que retienen sus membranas.10-5 30 . Osmosis Inversa (01).000 Semipermeable Asimétrica 1-20 D ACDiálisis Simétrica - 100-500 Microporosa Simétrica 50-1000 Tamaño mn 10J .0.1: Principales características de los procesos de membrana. Orgánico 100.12.300 2-10 2-10 2-5 X X X X X X X X X X X X X X X X X X 0. 1990. Ultrafiltración (UF).4 .2 .100 AP UF AP 100-500 Microporosa Asimétrica 10-200 oí AP 700-20. FUNDAMENTOS 549 Cabla 10.10J Azúcar 200 .10b Polisacárido 10* .2 0.400 Ac.4 Adaptada de: Fane y Radovich. . Copyright ©1990.500 [on inorgánico 10 .106 Enzimas 10* . De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos de embrana (Tabla 10.10* 300.

m de espesor y bajo la película una subestructura microporosa de 0.Gradiente de Voltaje Electrodiálisis (ED). . Las membranas anisotrópicas tiene dos capas características: una película delgada y densa de 0. que facilitan el paso del solvente y los solutos que logran pasar la película (Figura 10.550 CAPÍTULO 10. de .1 a 1. moléculas pequeñas y solventes (Figura 10. Las membranas utilizadas en UF se caracterizan por su Peso Molecular de Corte (PMC).1).1: Esquema de ultrafiltración.1 mm que presenta aberturas progresivamente mayores. \ j \ • Ultrafiltración La ultrafiltración utiliza membranas microporosas generalmente asimétricas o anisotrópicas para separar macromoléculas y partículas.5 fj. el cual es el peso molecular del soluto globular .2). ULTRAFILTRAC1ÓN O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos AP Alimentación_jo u-o Ao 0^o ^ u —• 0 ao<ÉoA° ^[_Retenido 0 0 ° A O^. Las membranas anisotrópicas son las más utilizadas en UF debido a que las membranas microporosas convencionales poseen una estructura tortuosa que provoca retención irreversible de partículas dentro de la matriz lo que dificulta su limpieza y reuso. ^ A n • o ^ o o ^ o w o w 00 o w o o p A ° <^^ ^^ ^^ ™ A ™ ^ > Permeado \ 4 Membrana Figura 10.1 .

Todos los dere- . et el.2: Comparación de membranas Dtrópicas. convencionales con 'ducida con el permiso de Kluwer Academic Publishers. Copyright ©1991.FUNDAMENTOS 551 Membrana Anisotrópica Filtro Microporoso ira 10. eservados. Fuente: Santos. 1991.

000. El rango de pre de operación también es restringido debido a las características d< equipos que se emplean.3: Esquema de microfiltración.1000 l/m2 . ULTRAFILTRAd <O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos Alimentación_ro-o—omo omo ^u ^o—0 A 0 — ^ [_Retenid Permea< Membrana Figura 10.552 CAPÍTULO 10. que es retenido en un 90 % por la membrana.000 para la mayoría de las membranas de UF. Un r característico de la MF es que puede manejar flujos mucho mayores la UF del orden de 50 . tualmente tiende a desplazar a la filtración convencional y a la trifugación como técnica de recuperación celular.3) se emplea generalmente para separar de ca biológicos partículas mayores de 1 /zm como coloides y células. .000 nanometros de tamaño. La mi filtración (Figura 10. lo cual repres< la retención de partículas de 1 a 10. Las capacidades características son del ordei 10 — 200 //m 2 — h (al flujo volumétrico por unidad de área de membí se le conoce como flux y se utiliza para especificar equipos de UF) Microfiltración La microfiltración emplea membranas con poros más grandes qu( utilizados en UF.500 KPa.h. y es del orden de 160 . El PMC varía entre 5i 1. presiones características de la ultrafiltración son moderadas en el re de 100 a 500 KPa. ya sean de tipo convencional o asimétricas.

Los flujos característicos en la Oí son del orden de 1 — 20 l/m2 — h. Las presiones •utilizadas en esta operación son relativamente altas del orden de 700 a 20. en base a su peso molecular y posiblemente a su conformación y carga.5) emplea membranas de poro muy pequeño (menor que las membranas de UF). invertir el flujo espontáneo.4) utiliza membranas semipermeables que permiten el paso sólo del solvente (generalmente agua). Osmosis Inversa La osmosis inversa (Figura 10. El o los solutos a separar de la solución de . Las membranas utilizadas en Oí son películas no porosas que permiten el paso del solvente a través de espacios entre los polímeros que conforman la membrana. FUNDAMENTOS 553 Partículas Macromoléculas Microsolutos Alimentación ro-o—5— ° 0 0 0 u 0 00 0 ° 0 0 o °—ó O 0 0 0 0 0 0 0 0 o o ^Permeado Membrana Figura 10. Esta operación se utiliza para separar solutos de sus soluciones. para separar éste de solutos de bajo peso molecular. Los iones no pueden estar solvatados en estos pequeños espacios y por lo tanto no son transportados.4: Esquema de osmosis inversa. es decir. Diáli SIS I La diálisis (Figura 10.10.2. La fuerza impulsora es un gradiente de presión que debe vencer la presión osmótica normal de las soluciones.000 KPa.

En los procesos de electrodiálisis la operación de diálisis se efectúe bajo la acción de un campo eléctrico.En los procesos de diálisis disminuye el gradiente de concentració efectivo.6 . alimentación fluyen hacia la solución de lavado o dializado a través de la membrana. causado por las diferentes velocidades de transporte de cada uno de ellos. produce un Incremento de la concei tración de solutos en la proximidad de la membrana (Figura 10.554 CAPÍTULO 10.2. UF y 01. ULTRAFILTRACIÓN Partículas Macromoléculas Microsolutos AC Al i mentado n_jó-ü CZ>° Corriente Purificada o 0 O 0 0 0° o o 0° o o o o0 o o 0°°0 o o 0 ° O 0 0 oo 0 ' r Dializado Membrana Figura 10. El papel fundamental de la membrana es impedir el paso de macromoléculas o partículas de la alimentación al dializado permitiendo e! paso del solvente y de solutos más pequeños. disminuyendo por lo tanto el flux de impurezas. .5: Esquema de diálisis.2 Flujo Cruzado o Tangencial En los procesos de separación por membrana se producen gradientes d< concentración de los solutos en la proximidad de la membrana. Esta polarización actúa de dos formas: .En los'procesos de MF. Est efecto es conocido como "Polarización de la Concentración" . sólo por la acción de un gradiente de concentración. 10.

6: Gradiente de concentración durante la UF. temperatura. >roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Asimismo.2. Fenómeno de larización. concentración de la solución y velocidad igencial. Fuente: Tutunjian. 1985b. K2. FUNDAMENTOS 555 Rux de Agua Ce Membrana 10. En los sistemas flujo cruzado la alimentación fluye en forma paralela a la membrana nimizando el efecto de la polarización de la concentración. ya que el uerzo cortante del fluido estimula el desplazamiento de las partículas la superficie de la membrana. puede ocasionar una resistencia adicional debido a que puede estimular la interacción del soluto con la membrana ocasionando que esta se incruste con soluto..3 Teoría de la Ultrafiltración teoría de la ultrafiltración está orientada a tratar de predecir el flux un sistema dado en ^función de los parámetros de operación como i: presión. Copyright ©1985. Todos los derechos reser- lo cual por un lado puede incrementar el flux de soluto.nificativamente utilizando flujo cruzado o tangencial en lugar del jo de extremo-cerrado convencional (Figura 10. El flux de solvente a través de la membrana puede ser incrementado . y por otro disminuir el flux del solvente debido a un aumento de la resistencia al flujo producida por esta barrera de concentración.7). Es importante señalar que la teoría de la ultrafiltración es .

P (10. se enfocan a resolver este problema de diseño. el cual puede ser definido en referencia a la Figura 10. bajo limitaciones de rangos de presión y temperatura tolerados por los equipos.556 CAPÍTULO 10. de aplicación limitada. APTM = P0 . ULTRAFILTRACIÓNI Filtración Convencional Filtración de Flujo Cruzado Figura 10.P . La predicción del flux o la interpretación y extrapolación correcta de las mediciones experimentales de éste. Predicción del Flux La fuerza impulsora de un proceso de UF es el gradiente de presión transmembrana (APTM).1) o bien. pero es útil en la interpretación y extrapolación de los datos experimentales.8 como: P 4.7: UF convencional y de flujo cruzado. El principal parámetro de diseño de un sistema de UF para concentrar una solución es el área necesaria para lograr una concentración determinada en un tiempo dado. así como de guía para la operación de los equipos.

En este arreglo la bomba debe ser dimensionada para proveer la )cidad de flujo cruzado necesaria a. FUNDAMENTOS Pi •** ^r1 v 557 Po ~~TK Permeado Retenido Válvula de Contrapresión Retenido Módulo deUF Pí Alimentación Bomba Filtrado gura 10.Gradiente de presión del flujo tangencial.sí como la APTM.. : Presión de entrada de la alimentación.2.8: Relación de presiones en UF.: Presión de salida del retenido. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985. el hecho de que las presiones de . P = PÍ — P0'. roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. •: Presión de salida del permeado o filtrado.e contrapresión a la salida de la dad de UF. Le. Esta última ontrolada restringiendo la válvula . . Todos los derechos reser- donde: PTM: Gradiente de presión transmembrana.8 muestre. Figura 10. 1985b.

1. Sin embargo.02 Kg/cm2 1 7 4.1 02 APTM = ' ' Kg/cm2 = 1. Se obtienen resultados análogos a los anteriores cuando se utilizan equipos operando con flujo cruzado constante (Figura 10. Solución: Se puede utilizar la ecuación (10.68) Kg/cm2 = 1. En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado c velocidad del permeado a través del lecho filtrante. mientras que en la filtración convencional se utiliza la variable v para el mismo efecto.558 CAPÍTULO 10. Primero es necesario calcular P0.PÍ .1) para calcular APTM. Conociendo que AP .36 Kg/cm2 £t Un comportamiento típico de un proceso de ultrafiltración de una macromolécula se muestra en la Figura 10. Ejemplo 10.10). pueden ser moni toreadas con el empleo de manómetros.9.Cálculo de APTM La presión de alimentación a una unidad de UF es de 1.70 Kg/crri2 La válvula de salida de la unidad se ajusta de tal manera que la caída de presión del flujo tangencial es de 0.. ULTRAFILTRACIÓN entrada y salida a la unidad.P0 entonces P0 = (1. Q Gasto volumétrico J =v = —= : A área . Estimar APTM.70 .68 Kg/cm2 y la presión del permeado despreciable. al aumentar la velocidad de flujo cruzado U se produce un incremento en el flux J. es decir.0. la cual muestra la variación de flux del permeado J (L3/L2 — ¿) con el gradiente de presión transmembrana (APTM) para soluciones de concentración en el rango de O a 65 % en celdas de ultrafiltración agitadas (sin flujo cruzado).

T = 60 Linea A 1. Copyright ©1987.2. Fuente: Le y Howell. FUNDAMENTOS 559 '0.5 % Protelna (1830 RPM ) 6 5 % Protelna ( 880 RPM ) APTM (Atm ) 'igura 10.10: Efecto de la presión. 1987.5 0.0 0 1 2 APTM (Kg/crn) 3 ura 10. Todos los derechos •vados.8 % Solución Salina r 0. Fuente: Belfort.66 % Proteica (1830 RPM ) 3.5 1. oducida con el permiso de Elsevier Science Inc.9: UF de albúmina en una celda. Todos los derechos reser- .0 J cm/h 0.0 % Protelna (1830 RPM ) 6. •oducida con el permiso de John Wiley and Sons. 1985. Copyright ©1985. de la velocidad de recirculación y a concentración sobre el flux.

donde J sólo es función de U (independiente de APTM). donde J es función de APTM y U. la ecuación del flux de solvente que se obtiene es: J = L P (APTM . cr: Coeficiente de rechazo del soluto por la membrana. es conveniente dividirlos en dos regiones separadas por un gradiente de referencia APTM ++ : .. Para analizar los resultados experimentales (Figura 10.560 CAPÍTULO 10.2) donde: . Por medio de la termodinámica de los procesos irreversibles. ATT: Contrapresión osmótica.Localizada a la derecha de APTM ++ .Localizada a la izquierda de APTM ++ . cuando se utiliza la ecuación de D'arcy como se hiz< en el caso de la filtración convencional (Capítulo 3) se obtiene la si guíente expresión: (10.crATr) donde: Lp: Coeficiente de permeabilidad.Región II..Región I. J: Flux de permeado.10) para una solución de una concentración dada. Modelo General del Flux La descripción fenomenológica del flux en un proceso de ultrafiltración. se ha efectuado por varios caminos con resultados análogos. Por otro lado. . ULTRA FILTRACIÓN La predicción del flux a que hace referencia el título de esta sección consiste en encontrar relaciones que permitan describir y predecir el comportamiento experimental al que se hace referencia.

= 1: Retención completa del soluto por la membrana. Concentración de soluto en el seno de la solución. 'B.4) B donde: 'p: Concentración de soluto en el permeado. FUNDAMENTOS ^: Resistencia de la membrana.2) y (10. Dado que la presión osmótica para macromoléculas en solución y ra dispersiones coloidales es muy baja. .3) se transforma en: Se puede utilizar la ecuación (10. De acuerdo a las ecuaciones (10. Si además se considera Rm constante.10) que se lizan en un proceso de UF: En soluciones diluidas la resistencia Rs puede considerarse nula. .6) para efectuar una descripción ilitativa de las observaciones experimentales (Figura 10.3). : Coeficiente de retención del soluto por la membrana. en dicho caso el modelo ge:al de flux en la forma de la ecuación (10. = 0: Retención nula del soluto por la membrana. 561 El coeficiente de rechazo en un instante dado durante el proceso de í está dado por: 1 (10.5: Resistencia de la capa de soluto de polarización.2.. entonces J varía linealmente con APTM (línea A).

que no se produce un incremento en J. Los incrementos en APTM producen incrementos en Rs tales. los incrementos en APTM producen un aumento en Rs. de tal manera que J tiende a un valor máximo conforme aumenta APTM.Para la región I donde APTM < APTM ++ . de tal manera que J es independiente de APTA/. es decir la resistencia de la membrana es controlante Es una zona donde J depende de APTM. En esta película el perfil de concentración es función de APTM. Esta región es más sensible a la velocidad del flujo cruzado por actuar ésta directamente sobre RsEl uso del modelo general para la predicción del flux requiere poder expresar Rs en términos de parámetros medibles como se hizo en el caso de la resistencia de la torta RT.. los perfiles de concentración en estado estacionario se irán incrementando conforme se incremente APTM (Figura 10. Los sólidos retenidos representan la resistencia controlante. ULTRAFILTRACIÓN .562 CAPÍTULO 10. Un balance de soluto en estado estacionario (UF continua) en una película diferencial en la interfase fluido-membrana puede ser expresado como: Movimiento Movimiento convectivo de difusivo del soluto hacia la = soluto de la interfase interfase al seno del fluido -f Movimiento convectivo de soluto fuera de la interfase . se puede considerar que Rs > Rm. Los intentos que se han efectuado en este sentido son de uso limitado para el caso de UF de proteínas y coloides.11). Modelo de polarización con película (Región I). Considerando como única variable la APTA/. . en el capítulo de filtración convencional.En la región II donde APTM > APTM ++ .Otro enfoque para obtener el modelo del flux propone que el fenómeno de polarización de la concentración sólo se presenta en una película delgada del fluido en la proximidades de la membrana (Teoría de la capa límite). se puede considerar que Rm > Rs.

CB ' Concentración de soluto alimentación.11: Variación del perfil de concentración en estado estacionario con el gradiente de presión transmembrana. Cw • Concentración de soluto en la 3ared de la membrana.\0.2. Cp : Concentración de soluto en el permeado. ): Espesor de la capa límite de concentración. FUNDAMENTOS 563 Flujo de Permeado Flujo Alimentación x=o APTMi Cw Incremento de APTM y del x=6 Flux APTM APTM3 Figura 10. .

C = CB C — C^r O — l-'M' La ecuación (10. Separando variables e integrando a lo largo de la capa límite con: x = O.8) se simplifica a: J> = ^B. a (1()_9) dado que el espesor de la película 8 generalmente es desconocido.Difusividad del soluto en la solución. ULTRAFILTRACIÓN (10.\n^(10. r — A •L — V . APTM: Constante. el coeficiente DAB/& se sustituye por un coeficiente de transferencia de masa ks.8) Si la membrana presenta un coeficiente de rechazo total Cp = O. de tal manera que: J* = k.10) . DAB'. x: Coordenada espacial.7) donde: * : Constantes en estado estacionario. entonces la ecuación (10.7) se transforma en: J* = AD •» In —yy p —— /1 n o \ (10.564 CAPÍTULO 10.

[L/t]. donde los parámetros que afectan el Desor de la capa límite de la transferencia de masa. El coeficiente de insferencia de masa ks puede ser estimado por medio de correlaciones perimentáles de la literatura.. Densidad.12) UB: Difusividad del soluto. el Schmidt y el Sherwood.023#e°-83Sc°-33 (10. [L]. . i \ ^/^ ^-ReSc] 2L/ J ( Flujo turbulento: donde: . : Viscosidad. : Longitud del tubo.2. .: Diámetro del tubo. (10. Para flujo en tubos circulares las siguientes ecuaciones son aplica.e: Número de Reynolds. [M/L — t].11) Sh = 0. [L]. se agrupan en ipos adimensionales como el Reynolds. [L/t2]. FUNDAMENTOS 565 El modelo de película permite analizar la dependencia del flux J* a los parámetros físicos y geométricos que afectan 8. c: Número de Schmidt.s: Flujo laminar: Y * ~V/3 o bien en términos de números adimensionales. [M/L3]. : Velocidad promedio del fluido en el tubo.

ULTRA FILTRACIÓN Es importante hacer notar que de acuerdo a las ecuaciones (10.15) \ljj donde 7 es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana. CAPÍTULO 10.El flux J* aumenta al aumentar U . J'ocfy) (10.13) (10. .16) El modelo de polarización de película conjuntamente con las ecuaciones (10.11) y (10.El flux J* considerando U constante. En la región II: . es proporcional a In l/Cs.14) L.12) permiten interpretar los resultados experimentales de los procesos de UF: En la región I: . Para Flujo Turbulento: r oc U0'83 (10. entonces.El flux J* aumenta al aumentar C^ la cual a su vez aumenta con APTM.11) y (10.12): Para flujo laminar: t/V /3 o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como: (10.El flux J* varía con í/3 en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento. .566 Sh: Número de Sherwood.

Ejemplo 10. Estiir ks y CG para esta operación.14. te gel actúa en serie con las otras resistencias. Sin embargo. ks es el coeficiente de transferencia de masa dado por las relaciones ya presentadas (ecuaciones (10. De acuerdo o anterior. el aumento de Cw con APTM tiene límite CG.10) se transforma en: donde CG es la concentración límite que es una constante para un tema dado. Modelo de polarización en película y capa de gel (Región ). implica que en la región II de la UF los incre.17.2. se serva que en la región II (Figura 10.. de tal manera que J se mantiene constante.12. Varía con U* en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento. existe un límite para este >o de correlación. Solución: En la Figura 10.2.10). Los datos de flux en //m 2 — h de la UF de una solución proteica se íestran en la Tabla 10.11) y (10.De acuerdo con el modelo de polarización en película (ecuación .2: Cálculo de CG y ks. FUNDAMENTOS 567 J* es proporcional a Inl/C^ cuando la velocidad de recirculación constante. Uno de los modelos más empleados para la región II propone que en i soluciones macromoleculares..13). Este modelo llamado lodelo de capa de gel". Se puede observar que conforme se incrementa la . Estos resultados se muestran en forma gráfica en la Figura 10.12)).15 se presentan los datos graneados en la forma de ecuación 10.ntos en APTM se contrarrestan con incrementos en la resistencia de capa de gel. J* aumenta al aumentar U. la ecuación (10.10) el flux J puede ser incrementado aumentando la concentración soluto en la membrana C\v (aumentando APTM). Estos datos se presentan en forma gráfica en la Figura 10. donde la solución forma una "capa de gel" (Figura 10.

12: Efecto de la presión.568 CAPÍTULO 10. concentración y velocidad de recir culación sobre el flux.83 In J Laminar Turbulento l n ( R e o U o Y) Figura 10. ULTRAFILTRACIÓN (b) U2 J lnC t (c) A 0. . Fuente: Belfort. Todos los derecho reservados. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. 1987. Copyright ©1987.

80 7.00 00.66 1. Copyright ©1985.00 52.00 7.13: Gradiente de concentración durante la polarización con 1.00 36.33 47.00 8.00 22.00 36.50 17. 1985a..00 18.66 50.00 30.50 22.00 00.66 .00 21.20 7.00 0. Membrana Capa Límite de Fluido Película deGel gura 10.50 23.00 33. Tabla 10.00 37.00 2 Concentración % peso 1 10 20 5 00.66 2.33 1.60 8.00 0.00 17. producida con el permiso de Nature Publishing Co.2.00 37. APTM Kg/cm 0.33 54.00 23. Todos los derechos er vados.2: Datos de UF para Ejemplo 10. Fuente: Tutunjian.40 8. FUNDAMENTOS 569 Flujo de agua J.00 1.33 0.2.

. 1%PROTEINA 5% PROTEINA 10%PROTEINA A PTM (Kg/cm2) Figura 10. ULTRAFILTRACIÓ. Copyright ©1985. Todos los derechos res vados. Datos Ejemplo 10. Fuente: Tutunjia 1985b. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.2.570 CAPÍTULO 10.14: Variación del flux con el gradiente de presión transmer brana y con la concentración.

FUNDAMENTOS 571 10 o O Figura 10.es igual a la pendiente de las curvas en la zona de formación del puede ser estimada con dos puntos sobre la recta. en la cual x J varía sólo con CB y es independiente de APTM. CG = 30 % Cálculo de ks.15: Flux vs \nCB. Datos Ejemplo 10. ) Cálculo de CG>'G puede ser obtenido gráficamente de la intersección de las curvas Figura 10.15 con el eje de las abscisas de tal manera que.2. . o ¿j ) L _ ft <. 28-8 3-2 m2-h . entración C# y la APTM.2. se llega a una región donde la variación ux se comporta de acuerdo al modelo de película de gel.

que en la ultrafiltración el flux J se puede controlar por medio de la.16). APTM y la velocidad de flujo cruzado. . La expresión del flux en la región II es por lo tanto: 30 = 201n Se puede resumir en base a la discusión de los dos modelos anteriores. El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado. ULTRAFILTRACIÓN 60 50 Flux i m'-h 40 30 20 10 O 1 2 3 Tiempo (h) Figura 10.CAPÍTULO 10. El análisis anterior también permite describir el comportamiento típico de los procesos de UF intermitentes (Figura 10. El flux aumenta linealmente con APTM en su fase inicial. 1990. Copyright ©1990. lo cual implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie do la membrana. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.J6: Variación del flux con el tiempo. posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento. Fuente: Brocklebank. Todos los derechos reservados. y finalmente cuando ocurre la polarización J se hace independiente de APTM y permanece constante .

1 Membranas arte central de los procesos de membrana es la membrana misma. Presentan diferentes geometrías en arreglos tipo modular. permitir altos flujos de permeado bajo gradientes de presión razonables. 3. Este fenómeno llamado rustación de la Membrana" debe distinguirse del fenómeno de posición de la membrana. sin embargo estos incrementan los costos de operación y dislyen la vida útil de los equipos.EQUIPOS ustación de la Membrana 573 de los problemas que se observa durante la operación de un sisL de UF es la reducción progresiva en el flux manejable conforme snta el tiempo de uso de las membranas. ]\ equipo modular conjuntamente con el equipo periférico constila unidad de ultrafiltración. general la membrana debe reunir algunas características impor- na alta permeabilidad hidráulica.17. . Parte importante del equipo periférico bomba de alimentación y el tanque de almacenamiento. Un arreglo o de un sistema de UF se muestra en la Figura 10. Existen Amiento físicos (retrolavado) y químicos para desincrustar memas. 11 fenómeno de incrustación se refiere a la interacción de algunos so. es decir. con la membrana que afectan la porosidad de la misma. 3 Equipos equipos utilizados en los procesos de membrana generalmente on con flujo cruzado o tangencial y presentan dos características ntivas: Utilizan una membrana apropiada para el tipo de proceso.

Facilidad de limpieza.17: Sistema de UF típico (intermitente). química y térmica. .Larga vida activa.3 se presenta una lista de algunos materiales y cara terísticas <!<• las membranas. .3. . Recientemente se han desarrollado membranas < materiales cerámicos y metálicos.Baja tendencia a incrustamiento. El la Tabla 10. Fuente: Belter e al.574 CAPÍTULO 10.2 Módulos Los módulos utilizados en los equipos de separación con membrana p sentan diferentes geometrías que se pueden dividir en dos tipos básio . . pero permitir el paso de las de menc peso molecular. Un peso molecular de corte preciso. 1988.<>ii <:l permiso de John Wiley and Sons. Los materiales que se utilizan en la fabricación de membranas g neralmcrite son derivados de polímeros naturales como la celulosa o < polímeros sintéticos. _ Buena resistencia mecánica. 10. es decir.Capacidad de esterilización. Todos los derech< reservados. R educida <. ULTRAFILTRAClÓfi Retenido Recirculación •OO Permeado AJ¡ mentación £=* Figura 10. Copyright ©1988. retener especies d determinado peso molecular.

3 . EQUIPOS Tabla 10. Hoja enrollada en espiral. Droducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.3. Tubos normales. 1990. Módulos de tubos y carcaza. 130 140 130 140 150 X Asimétrica Asimétrica - - Simétrica 1-10 1-20 nm 10-20 0.3: Características típicas de las membranas. Hoja plegada. Módulos de hojas. MF Rateriales: Acetato de celulosa Poli amida Polisulfona Politetrafluro Etileno Polipropileno Cerámica Poliester Sstructura: $ de Porosidad ¡uperficial: Tamaño de poro: 575 UF X X X oí X X X D X X X X X X X X Asimétrica Simétrica 30-70 0.1 nm 3-10 2-12 1-14 1-14 1-14 1-13 75 . Todos los derechos reserlos.1. Copyriglit ©1990. Los módulos de tubos y carcaza pueden presentar dos tipos de tubos: Tubos de fibras huecas. Los arreglos de hojas pueden ser de: Hoja plana.1 .3 nm Adaptada de: Brocklebank. .

Los módulos de hoja plana pueden ser utilizados tanto en MF como en UF. A y Membrana Macrosolutos Retenidos • * Malla Separadora Solvente y Microsolutos Figura 10. por lo que son empleados para manejar soluciones viscosas. Este tipo de módulos pueden trabajar a presiones mayores que los otros tipos. Copyright ©1985.18: Módulo de UF de hoja plana. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos reservados. Módulos de Hoja Plana Los filtros de hoja plana (Figura 10. son muy similares a los filtros convencionales de marcos y placas. Como consecuencia este tipo de módulo se recomienda para caldos relativamente limpios o en combinación con un prefiltro. .19) utilizan un diseño de membranas con espaciadores tipo malla separando la membrana. Este tipo de arreglos producen un flux mayor que los de hoja plana debido a que presentan una mayor área por unidad de volumen. Son más difíciles de limpiar y frecuentemente debe descartarse toda la unidad aún cuando sólo parte del módulo esté dañado.576 CAPÍTULO 10. Módulos de Hoja Enrollada en Espiral Los módulos de hojas enrolladas en espiral (Figura 10. . Fuente: Tutunjian. 1985b. ULTRAFILTRACIÓN . Una desventaja es que su área por unidad de volumen es menor en relación a los otros tipos de módulos y producen un flux moderado. Los filtros de hoja plana pueden ser desmontados para su limpieza y permiten restituir hojas defectuosas.18). Su principal ventaja es su versatilidad.

Fuente: Hanisch. EQUIPOS *• *.19: Módulo de UF de hoja enrollada en espiral.10. Todos los deredios reservados. 1986. Copyright ©1986. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. . • Macrosolutos Retenidos 577 Membrana Solvente y Microsolutos Malla Separadora Cubierta Externa Espaciadores Flujo de permeado Flechas que indican el flujo de permeado Figura 10.3.

Los tubos son fabricados utilizando polímeros o cerámica. Todos los derechos reservados. con varios tubos unidos en sus extremos a un cabezal común (Figura 10. Copyright ©1990.20: Módulo de UF de hoja plegada.21). Han sido recomendados para procesar materiales «viscosos y para la obtención de concentraciones celulares elevadas. de tal manera que el permeado se colecta en la parte externa de los tubos a través de la carcaza y el retenido sale por el extremo opuesto de los tubos a través del cabezal de salida. Módulos de Hoja Plegada Los módulos con membranas en forma de hoja plegada (Figura 10. Módulos de Tubos y Carcaza Este tipo de módulos presenta una geometría similar a los intercambiadores de calor de tubos.20) permiten un arreglo tubular con área ampliada. y presentan propiedades similares a los de hoja enrollada en espiral. . Normalmente la alimentación fluye a presión a través del cabezal de entrada por el interior de los tubos . lo que les confiere una alta resistencia mecánica y térmica. Flujo de Permeado Alimentación ULTRAFILTRACIÓN Material de Soporte Membrana Figura 10.5 cm. El diámetro de los tubos varía entre 0. 1990.6 y 2. Fuente: Dziezak.578 CAPÍTULO 10. Reproducida con el permiso del Instituía of Food Teclmologiests.

. • El diseño de la unidad de UF. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 579 Alimentación Salida de Retenido Salida de Permeado Figura 10. En la Tabla 10. • La mecánica de fluidos del sistema. Módulos de Tubos de Fibra Hueca Los módulos de tubos de fibra hueca (Figura 10. así como en su facilidad a la esterilización. menor es su capacidad de manejo de sólidos.22) son muy parecidos a los de tubos y carcaza convencionales.02 a 0.4. 10. • El método de operación apropiado. sin embargo presentan algunas limitaciones en cuanto a su rango de operación (presión y temperatura).21: Módulo de UF de tubo y carcaza.10. Este tipo de módulos es probablemente el más empleado tanto en MF como en UF. Entre más pequeño sea el diámetro interno.4 Diseño de Procesos de UF Para el diseño de un proceso de UF se deben considerar cuatro aspectos principales: • El objetivo de la UF.4 se presenta un resumen de las principales características de los módulos empleados en las operaciones de membrana. Las fibras grandes (0. sin embargo los diámetros de los tubos son muy pequeños: de 0.11 cm.11 cm de diámetro) son especialmente útiles para separar células así como para el manejo de materiales viscosos.

22: a) Módulo de UF de fibra hueca. ULTRAFILTRACIÓK Alimentación Cilindro Cabezal Permeado m Figura 10. . Reproducida con el permiso del Institute of Food Technologiests. b) Fibra individu. Copyright ©1990. 1990. Todos 1 derechos reservados. Fuente: Dziezak.580 CAPÍTULO 10.

10.1 Objetivo de la UF Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propósitos entre los cuales se pueden mencionar los siguientes: . la solución retenida es el producto deseado (Figura 10. Hoja plana Moderada 200-400 Moderada Regular Hojas o módulo Tipo de módulo Hoja Tubo y carcaza enrollada Moderada Baja 150-300 300-900 Baja Regular Módulo Buena Buena Tubos Fibra hueca Alta 9000-30.4. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Diafiltración Cuando se desea separar macromoléculas de moléculas pequeñas como sales. . Esta operación es conocida como diafiltración (Figura 10. . Copyright ©1990.4: Características de los módulos de UF.000 Baja Retrolavado Módulo 581 Característica Densidad de empaque Área (m^/m 3 ) Tolerancia a solidos suspendidos Facilidad de limpieza Remplazo Adaptada de: Fane y Radovich. . DISEÑO DE PROCESOS DE UF Tabla 10.24). Todos los derechos reservados. 1990. azucares o alcoholes por medio de la UF de una solución.Concentración de una solución diluida. Concentración En la UF donde el objetivo es la concentración de una solución. el permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o bufer.10A.Diafiltración de una solución con solutos indeseables pequeños.Purificación de una solución que contiene solutos indeseables grandes.23).

582 CAPÍTULO 10. Copyright ©1985. Todos los derechos res< vados. Todos los derechos re.23: Concentracón por UF. . ULTRAFILTRACíÓf • • • «— 1 UF » * * r_r • • • • • Figura 10. vados. Adaptada de: Tutunjian.24: Diafiltración por UF. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. 1985b. Figura 10. Fuente: Tutunjian. 19851 Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1985.

Sin embargo. Fuente: Tutunjian. Todos los derechos reservados. Algunos procesos combinan las operaciones descritas anteriormente.1).25: Purificación por UF. como es el caso de la operación de concentración con diafiltración. La mayoría de los equipos de UF deben operar abajo de 7 Kg/cm2 de presión.4.7 Kg/cm2.25).10. existen limitantes en cuanto a la operación de los equipos. Copyright ©1985. APTM = i + -Pt Si se supone que la presión de salida del permeado es O. 10.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 583 Figura 10. 1985b. mientras que los equipos de fibras huecas sólo toleran presiones de hasta 2. Teóricamente el flux puede incrementarse tanto como sean incrementados estos parámetros. De acuerdo a la ecuación (10.2 Mecánica de Fluidos En un sistema de UF el flux es función de APTM y de la velocidad del flujo cruzado. entonces la ecuación anterior puede rearreglarse de la siguiente forma: . Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Purificación La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente de interés o una solución con solutos de bajo peso molecular se conoce como purificación (Figura 10.

La presión de entrada al sistema es fija e igual 1.18) permite optimizar la relación de APTM coi AP. donde: AP = Pt . para una combinación de P. .y P0 Esto ocurre generalmente donde se inicia la formación de la película d< gel.-Mecánica de fluidos en UF. cuando la P. ULTRAFILTRACIÓ* i AP APTAf = />•. Se desea optimizar el flux de un sistema de UF a partir de los dato de la Figura 10. Ejemplo 10. Solución: a) Región de operación factible.— (io.584 U' CAPÍTULO 10. Al fijar la presión de entrada Pt a un valor máximo de 1. b) Flux máximo.P0 La ecuación (10. AP disminuye y p0 lo tanto la velocidad del flujo cruzado del fluido. En la Tabla 10. Se pide: a) Encontrar la región de operación factible. se fija como la presión máxima de operación de equipo.27 muestra la región de operación factible en base a este datos. AP aumenta y por lo tanto aumenta U la velocida< del flujo cruzado.26. al aumentar APTM.7 Kg/cm tanto la AP como la APTM se restringen a un rango posible de valore: en función de la presión de salida P0 la cual puede ser regulada median! la válvula de salida. visto de otra manera. El flux será óptimo para una cierta combinación d< AP y APTM .**• donde AP tiene unidade§^de~J^/^em'^y Q de l/min (área fija). a disminuir APTM.i 8 . b) La combinación APTM y AP que permita el máximo flux.5 se presentan algunos valores de este rango. -_ Q = 29. Bajo esta condición. El flujo cruzado se correlaciona con la caída presión d acuerdo a la siguiente expresión.3. .41 AP . L figura 10. Por el contrario.7 Kg/cm2..

4j AP = 170 Kg/cm2 AP = 1.3. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 585 4j AP =1. Copyright ©1985.34Kg/cm 2 1-1 APTM (Kg/cm2) Figura 10.02 Kg/cm2 AP = 0.27: Región de operación factible. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc . Copyright ©1985.3. Presión de entrada fija y la velocidad de recirculación variable.37 Kg/cm2 AP = 1.34 Kg/cm2 APTM (Kg/cm2) Figura 10.68Kg/cm 2 JA l/min 3 2 AP =0.68 Kg/cm2 JA l/rnín 3 2 1-1 A P = 0.70Kg/cm2 AP = 1.4. 1985b.37 Kg/cm2 AP = 1. n . Datos Ejemplo 10. Todos los derechos reservados. Adaptada de: Tutunjian. 1985b. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.10.02 Kg/cm2 AP=0.26: Variación del flux con APTM. Ejemplo 10. Todos los derechos reservados. Adaptada de: Tutunjian.

19 Kg/m2 JA = 2. es bombeada a la unidad de UF y regresada al tanque hasta alcanzar la concentración final deseada.53 0.36 0. Kg/cm2 Pi 1.70 1.37 1.586 CAPÍTULO 10.3 Métodos de Operación Los sistemas de UF pueden ser diseñados para operar en forma intermitente o en forma continua. En una operación intermitente sin recirculación (Figura 10. Datos del Ejemplo 10.28).5: Cálculo de la región de operación factible.70 1. la solución que inicialmente está contenida en un tanque de proceso. Operación Intermitente Las operaciones intermitentes se pueden efectuar con y sin recirculación interna. y P0 que optimiza el flux.4.70 1.70 En la Figura 10.70 0.00 00 0. 10.34 0. son funciones de la concentración de la solución de alimentación.30 1.27 se puede observar que para cada combinación de PÍ con P0 o AP con APTM.70 Po 0.00 0.02 Kg/cm2 APTM = 1.02 1.9 l/min En un sistema de UF tanto la región factible de operación como la combinación P.3.02 1.80 1.85 40 2.901. ULTRAFILTRACIÓN Tabla 10.70 1/min AP APTM Q JA 50 2.68 1.36 1.34 10 1.19 20 2.70 1.68 1.40 0. De esta manera la concentración del .70 1.70 1.02 30 2.00 1. existe un flux factible alcanzándose un máximo cuando: AP = 1.

Fuente: Tutunjian. Cuando al tanque de proceso se le alimenta solvente para lavar la solución la operación intermitente respectiva. 1985b.J0.4. En estado estacionario el flux es cons- .29) emplea dos bombas. La operación intermitente con recirculación interna (Figura 10. Esto generalmente se logra manteniendo una relación de 20 veces la velocidad de alimentación a la de permeación. se convierte en una operación intermitente de diafiltración. La velocidad de alimentación debe mantenerse alta. producto en el tanque aumenta gradualmente durante el proceso. a la vez que el flux decrece proporcionalmente a ésta. de tal manera que la concentracón en el circuito de recirculación sea cercana a la concentración del tanque alimentador. Copyright ©1985. Todos los derechos reservados.28: UF intermitente sin recirculación. Una de recirculación para proveer la velocidad de flujo cruzado óptima y la bomba de alimentación. Operación Continua La diferencia entre una operación intermitente y una continua es que en esta última. el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentración final deseada. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. La desventaja principal de los sistemas intermitente es que generalmente requieren más tiempo de residencia (lo cual puede afectar al producto) y tanques de proceso más grandes. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 587 UF Tanque de' Proceso Permeado Bomba I Figura 10.

Copyright ©1986.588 CAPÍTULO 10. Todos los derechos reser vados. . 1986. Fuente: Gravatt y Molnar. ULTRAFILTRACIÓN Agua de Diafiltracion Permeado Bomba de Alimentacio'n Bomba de Recirculacion Figura 10. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.29: UF intermitente con recirculación.

30). 1985b.30: UF continua de una y varias etapas. la predicción de coeficientes de transferencia de masa y del flux es limitada.4. Generalmente para situaciones de interés práctico. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 589 • 0 1 0 » UF Retenido Alimentación —a-* Bomba Etapa 1 Bomba de Permeado Recirculación 0^1 Etapa 2 Etapa 3 Retenido Bomba Permeado Permeado Permeado Figura 10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Adaptada de: Tutunjian.10. Copyright ©1985.4. . Todos los derechos reservados. Para contrarrestar esta limitación de la operación continua generalmente los sistemas utilizados son de etapas múltiples (Figura 10. hasta una concentración final determinada.4 Diseño de la Unidad de UF El problema del diseño de la unidad de UF consiste en determinar el área de UF necesaria para procesar una cantidad de una solución de concentración conocida en un tiempo dado. por lo que el diseño requiere de datos experimentales específicos del sistema. 10. tante y mínimo.

A continuación se presentan las ecuaciones de diseño de algunos arreglos típicos de los sistemas de UF._ Bo B P '--1% J(CB-CP) ( .20) de la siguiente forma: CBJ exp .Jc B c -c J dCB ¡C s r .590 CAPÍTULO 10. se procesa hasta alcanzar un volumen final Vj con una concentración final CBJ. puede ser integrada entre O y ¿.20) La ecuación (10. se puede expresar como: (10. y expresada con ayuda de la ecuación (10.19) combinada con la expresión del flux dada por: donde A es el área de UF. considerando la concentración de soluto en el permeado Cp constante. ULTRA FILTRACIÓN En el caso de los sistemas de diafiltración otro parámetro importante es la cantidad de solvente de lavado que es necesario agregar. obteniéndose un volumen de permeado Vp. Concentración Intermitente En un sistema de concentración intermitente el volumen inicial de solución V0 con una concentración inicial CBO. Un balance de soluto en el sistema.19) La ecuación anterior integrada entre los límites y v y vQ r* \-j B /~i ^*Bo V =V conduce a: CB V = V0 exp 'CB dC B (10.

b) Calcular el número de tubos necesarios (diseño modular).í 10. entonces la equación (10.UF intermitente. Este cálculo requiere la evaluación de la parte derecha de la ecuación (10. Los datos de laboratorio muestran que para una AP =1. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 591 Cuando el rechazo es total Cp^^O. .012 x 1. Como el tiempo muerto (descarga. Se realizan pruebas de laboratorio utilizando una unidad tubular de 0..22) simplifica a: (10. y por las ventajas que ofrece para su limpieza por retrelavado.4.5 Kg/cm2 el gasto volumétrico en la recirculación es de 8 l/min y el flux en //m 2 — h está dado por la expresión: = 81n 'B a) Calcular el área de UF necesaria.) de la unidad es de 4 h. c) El flux promedio.23). el tiempo de operación es de 20 h.23) puede ser utilizada para calcular el área necesaria para realizar una concentración de CBO a CBJ en un tiempo / o para calcular dicho tiempo dada el área de UF disponible.4. limpieza.23) La ecuación (10. conjuntamente con la ecuación 10. lo cual puede realizarse calculando el área bajo la curva de los datos experimentales graneados como: ~JVS J 1 1 j Para realizar estudios de escalamiento también puede utilizarse la | expresión experimental de la variación delfluxcon CB obtenida en equipos de laboratorio. Se desea concentrar de 2 a 10 % en peso 10 m3/dia de una solución de un polisacárido.2 ra.23. por considerarse más conveniente este tipo de arreglo para el flux proyectado. etc. Ejemplo 10.

40 0.31: Curva de 1/J vs l/CB.30 1/J 0.20 CAPÍTULO 10.35 0.4 Solución: a) Cálculo de área: Con los datos y la ecuación (10.05 0.10 0.592 0.00 0.40 Figura 10.20 0.04 m 2 A = 40 m2 .10 0.15 0. ULTRAFILTRAC) 0. de tal manera que: A = 1000 x 0.30 I/Ce 0.23) se obtiene la expresión: .La integral de la expresión anterior es igual al áre< esa curva.1/2 A = 1000 >i ^ n > l n15 \\CB/I En la Figura 10.25 0.31 se muestra la curva que se obtiene al gr 1/J vs \¡CB. Datos de Ejemplo 10.

Debido a esto los sistemas de multietapas continuas son los más utilizados. DISEÑO DE PROCESOS DE UF b) Cálculo del número de tubos N: Área total Área por tubo 40 m2 = TT x 0. .000x2/ —lo— vf = 2000 / con estos datos se puede calcular el flux promedio: (10. el área de UF necesaria es mucho mayor que si se opera en varias etapas en cascada. Debido a que un sistema continuo opera todo el tiempo a la concentración de salida deseada.012 m x 1.2 m = 884 tubos = 593 N N N c) Cálculo del flux promedio: Mediante un balance de soluto se obtiene primero el volumen final de la solución: V0C0 = VjCf de tal manera que. si el sistema consta de una sola etapa.4. 10.0.000-2000) I 40m2x20/i 1U Ví = prom ~ — Jprom m* — Concentración Continua Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volúmenes considerables o cuando se tiene una alimentación continua.

\r C2 i Figura 10. donde el área por etapa disminuye conforme la concentración de soluto aumenta. 1985b). Entre más etapas presenta la cascada mayor es el flux promedio de ésta. conforme la concentración de soluto aumenta en cada etapa el flux de permeado disminuye. con una concentración de la solución de entrada C0 y una concentración de salida deseada Cn. ^ t. es decir el volumen de solución disminuye. En el sistema de UF continua que se muestra en la Figura 10.32. este efecto disminuye conforme aumenta el número de etapas.32: UF continua de etapas múltiples. tendiendo a alcanzar el flux promedio de un sistema intermitente. cada etapa está constituida por una o varias unidades de UF en serie o paralelo. de tal manera que. Fn = ^ (10. El flujo Fn puede calcularse efectuando un balance de masa de soluto en toda la cascada. V r r .24) El flux en la etapa n está dado por una expresión de la forma: . Sin embargo.594 CAPÍTULO 10. Si un sistema de UF presenta varias etapas de igual área.n n c. Generalmente es más económico utilizar de tres a cinco etapas (Tutunjian.\ i r _ . para un flujo de entrada F0. El problema de diseño consiste en determinar el área de UF de cada etapa. Si se supone un coeficiente de rechazo a = 1 para todas las etapas. r) * * f. Algunos cascadas de UF operan con áreas diferentes en arreglos tipo pirámide. ULTRAFILTRACIÓN F r ° ir ^ C0 Av . i ir /i\ fc 1r " e. el área de cada etapa puede calcularse utilizando balances de masa solamente.

25) n • El flujo de permeado Pn en la etapa n se puede calcular para un Í área A de diseño con.27) Por medio de un balance de soluto en la etapa n se calcula la conI centración de soluto en la etapa previa. í Pn = AJn (10.28) Con el sistema de ecuaciones (10. Ejemplo 10. (10.24)-(10. Se desea procesar 5000 l/h de una solución proteica para concentrarla de 2 a 20% en peso. en forma iterativa descendente se calcula el número de etapas necesarias hasta alcanzar el valor de la concentración de soluto de la solución de entrada.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 595 (10.5. .10.Comparación de UF intermitente y continua. o bien el área necesaria para un número de etapas prefijado. cuando se conoce el área de cada etapa.28). Las pruebas experimentales muestran que el flux puede estimarse con la expresión Calcular: a) El área necesaria para un procesamiento intermitente y el flux promedio.26) Efectuando un balance global en la etapa n se puede calcular el flujo de la etapa previa.. Fn_1 = JPn + Fn (10. b) El área necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux promedio.

875 m2 satisface la condición de diseño.375 m2 Acont El flux promedio es: r _ 4500 l/h _ "" ~ 164.875) m2 = 164. Utilizando la ecuación (10.000 x 0. donde la relación Área/etapa = 32.üO m2 — h b) En la Tabla 10.0134 m 134 772.596 CAPÍTULO 10.6 se presentan los cálculos utilizando las ecuaciones (10. .000 X i A>ntermitente •^intermitente = — 10.7.23) se puede llegar a la siguiente expresión: *1/2 Aintermitente — 10.375 m 2 n I m -h 2 c) Utilizando el procedimiento del inciso b) se realizan los cálculo para obtejier la Tabla 10.24)-(10. El flux promedio está dado por: c nnn DU Jprom ~ 5000x2 1 7 _ n 134 m 2 .28).33 muestra estos resultados en forma gráfica. El área total es : = (5)(32. ULTRAFILTRACIÓN c) La variación del área total de la UF con el número de etapas. La Figura 10. . o 20 h '==- OO. Solución: a) Área UF intermitente.

500.77 Área total (m 2 ) 555.74 Flux promedio (//m 2 .5 Número de Área por etapas totales etapa (ra 2 ) 1 555.22 3 63.81 Total Jn (l/h) Pn 266.14 3461.11 16.88 10 14.44 27.00 (//m 2 .38 30. Datos ejemplo 10.00 Cn (% en peso) 20.87 23.00 13.h) 8.h) 8.61 4.51 2.04 7.44 37.55 1538.4.69 5000.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 597 ¡Tabla 10.17 2216.flO.57 901.7: Cálculos para diferentes número de etapas.59 1314.11 18.79 4.00 2 119.6: Área para procesamiento continuo en 5 etapas. Datos del Ejemplo 10.97 1245.45 .59 547.37 147.94 164.66 27.5 Fn n 5 4 3 2 1 0 (1/h) 500.98 5 32.00 Tabla 10.89 2.44 191.00 766.89 46.00 238.

ULTRAFILTRACIÓN O 4 6 N (Etapas) 8 10 Figura 10.33: Variación del área de UF con el número de etapas.5.598 CAPÍTULO 10. Datos del Ejemplo 10. .

el balance en el sistema del soluto que se desea eliminar. de tal manera que el flujo de alimentación es igual al flujo de permeado. DISEÑO DE PROCESOS DE UF Diafiltración Intermitente: Volumen Constante 599 En la diafiltración intermitente a volumen constante (Figura 10.30) donde VD es el volumen de solvente de diafiltración.31) La ecuación* anterior puede ser rearreglada expresando el flux de permeado como: . P: Flujo de permeado.29) donde: VR: Volumen retenido en el tanque. La ecuación 10. [L3/t].30 puede integrarse con los límites. C = C0 C.24) se alimenta continuamente solvente de lavado al tanque de alimentación y se mantiene el volumen del retenido constante. está dado por: al = -PC¡ (10. Considerando que el soluto de interés es totalmente rechazado por la membrana y la impureza totalmente permeable. Ci\ Concentración de impureza en el tanque. [M/L3]. obteniéndose la siguiente expresión: (10. = Ci VD — O VD = VD obteniéndose la siguiente expresión: (10. dado que VR es constante el flujo de permeado puede igualarse al flujo de solvente. [L3].10A.

ULTRAFILTRACIÓN J = -T7 (10.31) y (10. Ejemplo 10.h a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solución de la razón del volumen de diafiltración a volumen de retenido o índice de lavado. El flux del sistema está dado por: CB [™? .34) (10.Diafiltración intermitente a volumen constante.32) para obtener: „ „ í-JAt\ C/ = C/0exp -TT— (10. I c) El volumen de solvente de diafiltración para el inciso b).34) se obtiene: Ci = C /0 exp -£*— VR (10. b) Calcular el área de diafiltración necesaria para lograr una pureza del 99% en un tiempo de 10 h.600 CAPÍTULO 10. 1984).6. Solución: .33) V VR ) dado que el flux de permeado también puede expresarse de la siguiente forma: J = ks\n-~ al combinar las ecuaciones (10.35) V J La ecuación (10.35) puede ser utilizada para calcular el área de diafiltración necesaria para lograr un determinado grado de eliminación de impurezas.32) y combinando las ecuaciones (10.33) y (10. Se desea purificar por diafiltración intermitente a volumen constante 5000 / de una solución que contiene 15% en peso de proteínas y 3% de sal (O'Sullivan et a/..

10. Datos del Ejemplo 10.10 15.833 0.05 CB CÍ + CB 15 15 15 15 15 Pureza 18.15 15. .990 0.32) puede ser usada para calcular V¿>. b) Utilizando la ecuación (10.973 0. Esta operación se repite hasta alcanzar la pureza deseada.4.8: Efecto del volumen de diafiltración sobre la concentración de impurezas.00 16.00 1.41 15. 3. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 601 Tabla 10.05 = exp de donde se obtiene: 5000 / A = 108 m2 c) La ecuación (10. de tal manera que: VD VD VD = JAt = (201n^)(108m 2 )(10/i) 15 = 15.8.996 a) Utilizando la ecuación (10.15 0. y lavar hasta alcanzar nuevamente el volumen VR.05 = c7+fe 0.41 0.10 0.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.35) y los datos se tiene: 0.6 VD/VR 0 1 2 3 4 c.932 0.000 / QH Diafiltración Intermitente Repetida Una forma alternativa de diafiltración intermitente consiste en adicionar un volumen de líquido de lavado al tanque de proceso que contiene un volumen VR de solución.

VDT C '° + rf% (10.602 CAPÍTULO 10. si la membrana no retiene la impureza. VDT'. Diafiltración Continua en Cascada En la diafiltración continua en cascada el líquido de lavado se adiciona continuamente en cada etapa (Figura 10. ULTRA FILTRACIÓN El balance de masa para esta operación puede ser expresado cornol C ^ 7T.Volumen total de líquido de lavado empleado. . . la concentración de ésta a la salida de cada etapa y en el permeado es la misma. VR: Volumen de retenido.= l. de tal manera que el balance de masa para la primera etapa puede ser expresado (con Q = P) como: (10. Este tipo de arreglo es útil para procesar volúmenes considerables o cuando por inestabilidad del producto se requieren tiempos de operación cortos. (7/0: Concentración inicial de impurezas.34). Además.36) } donde: Cin\ Concentración de impurezas después de n lavados.37) La concentración de soluto a la salida de la etapa n puede ser expresada como: donde: C¡n: Concentración de impureza en la etapa n. Cuando la concentración de la especie retenida es constante. existe un flux constante en cada etapa (flujo de líquido de lavado igual al flujo de permeado). n: número de lavados.

34: Diafiltración continua en cascada.4.39) se puede rearreglar de la siguiente forma: At = J . DISEÑO DE PROCESOS DE UF 603 Q Q FCk. La ecuación (10. Q: Flujo de líquido de lavado. F: Flujo de alimentación (retenido). P: Flujo de permeado.40) la ecuación (10. F Cu —\\- FC'n Figura 10.38) también puede expresarse como: ^ Cío (10.39) donde VD es el volumen de lavado alimentado a una etapa y VR el volumen de retenido alimentado al sistema en un tiempo dado.•0. Como el flux de permeado en cada etapa está dado por: J J~VD ~Tt (10.

De acuerdo a la ecuación (10. Se desea efectuar un análisis comparativo entre la diafiltración i termitente y la continua para determinar que operación requiere men volumen de lavado (menor área) para alcanzar un mismo porcentaje ( eliminación de impurezas. De acuerdo a la ecuación (10. definiendo las siguientes expresiones del grado de eliminad de impurezas: Para la operación intermitente: CIo-CIn Para la operación continua: Cío — C¡n Cío De acuerdo a lo anterior si VDT/VR — 2 el % de eliminación impurezas es: Operación intermitente: (1 .. Ejemplo 10. El producto At es mínimo cuando el lado derecho de la ecuació (10.39) para efectuar es análisis. Solución: Se pueden utilizar las ecuaciones (10.7.4( el área necesaria para efectuar una determinada purificación disminu^ al incrementar el número de etapas.40) es mínimo.39) al aumentar el índice de lavad VD/VR se incrementa la purificación.e'2) x 100 = 86.31) y (10.5 % . o bien el incremento del númei de etapas reduce la cantidad de líquido de lavado y el área necesar por etapa.Comparación entre la diafiltración interm tente y la continua.604 CAPÍTULO 10. ULTRAFILTRAClÓi donde A es el área de UF por etapa.

4% En la Tabla 10.4.35. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 605 100 8 Figura 10. Datos Ejemplo 10.7% Operación continua 2 etapas: 1x 100 = 75.0% Operación continua 3 etapas: 1f) 3 . . por lo que en el caso de la operación continua dicho volumen se reparte equitativamente entre las etapas.9 se presentan los cálculos para otras relaciones de l°s cuales se muestran en forma gráfica en la Figura 10. Operación continua 1 etapa: 1- 1 x 100 = 66. Es necesario hacer notar que VDT es gl volumen total de líquido de lavado.35: Comparación de diafiltración intermitente y continua. 1:Intermitente 2: continua 1 etapa 3: continua 2 etapas 4: continua 3 etapas.10.7. x 100 = 78.

7.0 100.31 o 10. Estos hechos conducen a un problema de optimización. en e tos casos se requiere decidir cuando efectuar la diafiltración. ULTRAFILTRACIÓ Tabla 10.0 0.0 86. entonces cuando ésto sea el objetivo de la operacic debe seleccionarse este tipo de operación.34).39).2 80.0 78.36) es posible lograr ur mayor purificación con menos líquido de lavado.5 66. Diafiltración a Contracorriente En la diafiltración a contracorriente (Figura 10.606 CAPÍTULO 10.1 99.9 96.3 100.9 92. Por otro lado. sin embargo.0 88.8 VDT/VR 0 2 4 6 8 10 La operación intermitente es la que requiere menor volumen c lavado (área).0 0. sin embargo el flux también disminuirá dado que éste var inversamente a la concentración del soluto impermeable CB (ecuacic 10. don< .0 88.2 98. esto d pende de la concentración alcanzable de la especie no permeable (Fai y Radovich.9 97.0 90.8 85.9: Comparación de diafiltración intermitente y continu Datos Ejemplo 10.0 98. % de eliminación de impurezas Continua intermitente 1 2 3 0.4 98. si el caldo se concentra valor deseado y posteriormente se lava. Operaciones Combinadas: Concentración-Diafiltración / Algunos caldos requieren tanto ser concentrados como lavados. sin embargo la cant dad de líquido de lavado también es la máxima bajo estas condición (ecuaciones 10.0 0. Si es ise inicia con el caldo inicial.8 96. el flux se maximiza.7 93.7 75. la cantidad de líquido de lavac disminuye. 1990).

Se desea concentrar 10 veces 1000 / de un caldo que contiene 2% en peso de proteína y 5% en peso de sales. [l/h] Encontrar el tiempo de diafiltración óptimo. Copyright ©1990. El flux para el sistema está dado por la relación experimental.Operaciones combinadas de UF.05%. Fuente: Fane y Radovich. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 607 Agua de Lavado 20 1 Alimentación 100 t i 1 50 ni •mi w ti 1 50 7 J + Retenido Libre de Producto 10 f Perneado (Producto) 110 Recuperación de Producto 97% Dilución del Producto 868 Figura 10.31) se puede calcular la relación del volumen de líquido de diafiltración a volumen del caldo. de tal manera que se obtenga una concentración final de 20% en peso de proteína. . Todos los derechos reservados.36: Diafiltración a contracorriente. Ejemplo 10. 1990..QA. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. la diafiltración deberá efectuarse en un punto intermedio entre la concentración inicial y final de retenido. Se desea también reducir la concentración de sales al 0.8. Solución: Empleándola ecuación (10.

Se supone que el tiempo total de concentración no se afecta por el esquema de diafiltración que se adopte. 5 In Esta relación debe ser utilizada independientemente del volumen de caldo VR.05% de sales.608 CAPÍTULO 10. Utilizando la expresión de flux se puede calcular el tiempo de diafiltración de acuerdo a la siguiente expresión: JA o bien. t = 4. Diafiltrar hasta 0.37 muestra la variación del tiempo de filtración en el factor de concentración. y la Figura 10.Diafiltración: 1. t = 500 l n ^ La ecuación anterior puede expresarse en términos de "X" o veces que se concentra la solución original de 1000 / y 2% de proteína. 2.85 h. Concentrar 2 veces hasta 20% de proteína. / Los resultados anteriores conducen a proponer el siguiente esquema de Concentración . .6- En la Tabla 10.10 se muestra el efecto del factor de concentración sobre los diferentes parámetros. Concentrar 5 veces hasta 10% de proteína y 5% de sales.05 VD . VR depende del grado de concentración previa a la diafiltración. Por otro lado. observándose un mínimo en X = 5 con t = 1. 3. ULTRA FILTRACIÓN — VR VR = In = Ci 0.

00 2.00 150.8.00 3.00 920.00 496. X % VR(') M/) CB ( ) JA (l/h) t(h) 1 1000.00 2300.00 2.67 766.67 12.14 14.00 4600.77 4.18 22.37: Operación de UF combinada. Datos del Ejemplo 10.00 1. Datos del Ejemplo 10.20 8.04 3 333.33 6.00 328.11 511.89 608.00 954.10: Operaciones combinadas.00 575.8.00 .00 4 250.73 9 111.47 6 166.41 2 500.89 405.85 5 200.53 2.63 1.33 1533. Tabla 10.11 18.40 418.00 261.62 2.00 1150.39 7 142.34 3.00 1301.00 4.86 657.00 460.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 609 Figura 10.00 10.00 1.00 2.05 20.52 202.91 102.00 2.00 16.07 10 100.08 11 90.04 752.20 8 125.

610 CAPÍTULO 10. ULTRAFILTRACIÓI 10. para estimar áreas de 1< equipos. .5 Sumario La ultrafiltración se utiliza para concentrar y purificar caldos biológico. Los equipos de ultrafiltración presentan características distintiva en arreglos modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad c flujo cruzado de la alimentación. las etapas necesarias o el tiempo requerido de un proceso. Las operaciones pueden ser efectuado en forma intermitente o continua ya sea para concentrar. El diseño de los equipos de ultrafiltración está basado en una con binación de la teoría y la experimentación. mediante el uso de membranas especializadas para lograr la separado deseada. purificar diafiltrar una solución.

está dada por: C= -sG e donde e es la base de los logaritmos naturales. 321 m 2 b) Resp.3.5 40 7.0 20 11. 1986) se obtuvieron los siguientes datos: Cs(m<7/m/) J(ml/cm2 . a) Resp. 410 m 2 .000 / de una solución proteica del 2 al 15% en peso y reducir su contenido de sales 5 veces.l. 10.J.. b) Calcular el área total para una operación continua en cascada con 3 etapas de igual área.0 50 6.Se desea concentrar 75.s) x 105 5 15.0 30 8...6 ik- Problemas fo.1 10 12.En la concentración de una solución de factor VIII antihemofílico itilizando módulos de fibra hueca (Mitra y Ng.2. PROBLEMAS 611 0. El tiempo de proceso es de 12 horas y la expresión experimental del flux es: 40^ J = 12 In ~C~B I m — ¿ a) Calcular el área mínima para una operación intermitente a volumen constante.5 J Estimar ks y CG10.Demostrar que la concentración de un soluto impermeable a la cual el tiempo de diafiltración es mínimo en un proceso combinado.

00 / cada semana.. el flux está dado por: J = 5 x 10~ 4 In 100 cm 3 cm¿ — s . El coeficiente de retención de la Cefamicina C en la unidad puede considerarse igual a cero.612 CAPÍTULO 10. 0.24 l/min 10. b) El flujo que es procesado por unidad.000 Da.h 10.El flujo de permeado por unidad en la di afilt ración. El caldo que contiene sólidos en suspensión se procesa en un sistema que consta de cuatro unidades de UF de 268 m2 cada una.3 veces en 14mm. 47. ULTRAFILTRACIÓN 10. megatherium en una unidad de fibra hueca de 0.6. la solución se concentra 5.5 l/min c) Resp. d) El porcentaje de recuperación de Cefamicina C en el primer paso. 319 //m 2 . f).5. a) Resp.Al procesar en forma intermitente 2. ii) Posteriormente se diafiltra a la velocidad final de permeación del primer paso.. JA = 74.. Para obtener una recuperación del 98 % de Cefamicina la operación se efectúa en dos pasos: i) Primero se reduce el volumen del caldo a la tercera parte.En una unidad tubular de UF donde se concentra a razón de 2 l/min una solución que contiene 30 mg/l de una proteína de peso molecular de 300. a) Calcular la concentración final del caldo. e) El volumen de diafiltración..0316 m2 de área.77 g/l de B. a) Resp. 5 h/lote b) Resp.547 / b) Resp. Determinar: a) El tiempo requerido para procesar cada lote considerando un tiempo muerto de cuatro horas por dia. El flujo de permeado promedio que produce cada unidad es de 76 l/min. 125 min d) Resp. VD = 53. 66% e) Resp.Una planta produce Cefamicina C mediante una fermentación a un ritmo de 28 lotes de 57.4.455 / f) Resp. b) Calcular el flux promedio de la operación. c) El tiempo necesario para el primer paso del proceso.9 / de un caldo que contiene 23.

Se desea comparar dos tipos de membranas para desalar y concentrar una solución de proteasas (Ghose. c) El flux de permeado. Los coeficientes de retención de las membranas son los siguientes: Membrana Soluto Proteasas PM-10 Sales Proteasa PM-30 Sales Coeficiente 0.1 Kg/m3 de proteasas y 4 x 102 mol/m3 de NaCO?. PROBLEMAS 613 La presión de entrada a la unidad es de 2 atm. 0.h c) Resp. Q: Flujo cruzado en cm3/s. 1. b) La caída de presión transmembrana.99 0.ooiLcy donde: AP: Caída de presión en atmósferas.80 0.264 atm b) Resp..132 atm 146 //m 2 .00 0. . d: Diámetro del tubo en cm Determinar: a) La presión a la salida del tubo. La caída de presión ía lo largo del tubo está dada por: o. Determinar para cada tipo de membrana: a) El volumen necesario de agua destilada para eliminar el 99 % de sales por diafiltración a volumen constante. El tubo presenta un fcliámetro interno de 2 cm y una longitud de 50 cm.7.. a) Resp. L: Longitud del tubo en cm.. 10.00 El volumen a procesar es de 10 2 m3 con una concentración de 0.6. 1990).

c) La concentración de proteasas al final de la diafiltración.614 CAPÍTULO 10.69 % . 3 0. 4.6 x 1(T2 m3 b) Resp. 4. 6.5 x 10~5 m3 c) Resp.0955 Kg/m e) Resp. ULTRAFILTRACIÓN b) Las pérdidas de proteasas durante la diafiltración. Respuestas para la membrana PM-10. e) El porcentaje de pérdidas totales de proteasas. d) Las pérdidas de proteasas al concentrar 10 veces la solución diafiltrada. a) Resp.

A. Asenjo. y Howell. Selection and use of ultrafiltration membranes. En: Separation Processes in Biotechnology. 1990. Bioprocess Computations in Biotechnology. J. 8.A. En: Membrane Separations in Biotechnology. Ultrafiltration. 1-35. J. 3.Y. Permagon Press.R. J. 61-88. P. 4. Downstream processing plant and equipment.C. M. W. (Ed. 239-297. 1985 . Me Gregor. W. y Hu.). Brocklebank. J. Me Gregor. Me Gregor.S. 89-97. 383-409.P. En: Membrane Separations in Biotechnology. New York. 1986. Belter. Marcel Dekker. New York. Sep. G. New York. .A. 1990. 1. 9. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. Marcel Dekker. W. (Ed. Marcel Dekker. 1. En: Membrane Separations in Biotechnology.). T. 9. En: Comprehensive Biotechnology.G y Radovich. 1987. Vol. Bungay. (Ed.7. 1990. Marcel Dekker. Hanisch.John Wiley and Sons. A. Marcel Dekker.). Fane. New York.L. Cussler.10.P. W. E. Recovery of an extracellular antibiotic by ultrafiltración. 25.C. Membrane Systems. Ellis Horwood.C.7 Bibliografía Belfort. 237-270. 108-113. Murray M.) New York. 1986. J. (Ed. G. Cell harvesting. y Molnar.). (Eds. New York. Membrane separations technology: An overview. Food Technology. W. (Ed. Gravatt. Me Gregor.). Le M. 209-262 Ghose. Membrane separation technology offers processors unlimited potential. John Wiley and Sons. 19. New York. Advanced Biochemical Enginnering.M.A. New York. 1988. y Belfort. T. 229-264.D. D. 1990.K. En: Separation Processes in Biotechnology. 1986. Asenjo. Dziezak. 10. 617-740. (Ed. W.C.)..E. H. BIBLIOGRAFÍA 615 10.

N.). R. Pressure driven membrane processes. 115-134. J. En: Membrane Separations in Biotechnology. J. G. J. Bio/Technology. 68-75.. 1985b. Epstein. Scale-up considerations for membrane processes. New York. En: Chromatographic and Membrane Processes in Biotechnology. ULTRAFILTRACIÓN Mitra.A. M.M. Applications of ultrafiltration in biotechnology. (Eds). Tutunjian. O'Sullivan T. 1986. 177-205. Permagon Press. En: Comprehensive Biotechnology. 26. 1991. Korchin S. Murray M. .Y.J. New York.. Marcel Dekker.C.C. R. (Ed. Mateus. Netherlands. 1984.R. (Ed. Ch.A. Practice of ultrafiltration-diafiltration in the plasma frationation industry.S. C.437.616 CAPÍTULO 10. Kluwer Academic Publishers. W..M. Costa.L.S.K. Santos. Tutunjian.C. R. 411 . 3. 1985a. 6. Enero. y Ng. 615-626.). Eng. y Cabral. A.S. Me Gregor. Prog.S. y Beatón. y Cabral. Ultrafiltration processes in biotechnology.

Gran parte de la teoría y de los equipos de electroforesis han sido desarrollados para la separación de proteínas globulares. la carga y la naturaleza anfotérica de éstas juega un papel fundamental. La sección 11. existen otros factores tanto microscópicos como macroscópicos que afectan el movimiento de una partícula en un campo eléctrico. En la separación de proteínas por medio de un campo eléctrico. así como a ácidos nucleicos. células o partículas coloidales.3 se presenta una descripción general de este tipo de equipos.Capítulo 11 Electroforesis 11. Actualmente existen varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso de esta técnica a escala preparativa.4 presenta una discusión sobre los principios básicos 617 . La electroforesis constituye una de las técnicas más poderosas para la purificación de moléculas biológicas. La electroforesis no está limitada a la escala analítica.1 Introducción Electroforesis es el movimiento de las partículas cargadas contenidas en un medio debido a la influencia de un campo eléctrico. En la sección 11. Estos aspectos fundamentales de la electroforesis se revisan en la sección 11. sin embargo pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de proteínas. que han conducido al desarrollo de diferentes formas y técnicas para el desarrollo de las separaciones electroforéticas. Sin embargo.2 de este capítulo.

1: Electroforesis de zona en una gel anticonvectiva. almidón. las matrice son teñidas para observar los componentes de la muestra. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Todos los derechos reservados.2 Fundamentos La forma mas sencilla de realizar una operación de electroforesis es el método de electroforesis de zona (Figura 11. despué de un tiempo apropiado para desarrollar la electroforesis. Dichas matrices tienen la propiedac de constituir medios porosos altamente hidratados que proporcionar resistencia mecánica. Fuente: Ivory. En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se muev< a diferente velocidad. del diseño de equipos de electroforesis. de celulosa. Cuando esta técnica se utiliza con fines cualitativos. En este método se coloca una pequeña banda de muestra de la solución que contiene el soluto de interés. sobre una matriz generalmente rectangular.618 CAPÍTULO 11. ELECTROFORES1S y Inicio 15 minutos (i] | 30 minutos gQ Soluto Aniónico Soluto Catiónico Figura 11. En la discusión de la operación de electroforesis es importante con siderar cuatro aspectos fundamentales: . agar o poliacrilamida. Copyright ©1990. 1990. 11. la cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como bufer. y disminuyen los efectos del calor generado por e paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.1). separándose los componentes de la mezcla sobn la matriz.

que es el campo de estudio de la teoría electrocinética.2.///.2.1. L 1. La carga que adquiere una proteína en determinado pH.2. A un pH relativamente bajo existen más grupos —NH^ y —COOH y la proteína tiene una carga neta positiva. Los grupos amino —7V//2 sn medio ambientes ácidos son protonados produciendo grupos amoaio —TV. 11. • Los fenómenos de dispersión de la muestra que se observan en las operaciones electroforéticas. Existe un pH particular para cada proteína donde la carga neta de ésta es cero. Tal como se muestra en la Figura 11. En esta sección se hace uso del caso de las cargas que se presentan en las proteínas globulares. FUNDAMENTOS 619 • La naturaleza de la carga de la partícula que se mueve en el campo eléctrico. a este pH se le conoce como punto isoeléctrico. está influenciada por algunos fenómenos físicos mi- . a un pH relativamente alto la proteína tiene más grupos —NH<¿ y —COO~ y se encuentra cargada negativamente.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas 3n las proteínas su carga se origina principalmente de la ionización de ms numerosos grupos amino y carboxilo. • El cuarto aspecto se refiere a las técnicas y diversas formas en que es posible realizar una operación electroforética. son dos propiedades que se utilizan para la correcta separación electroforética de proteínas. constituyen el tercer aspecto. despreciando efectos gravitacionales y difusivos. Los grupos carboxílicos —COOH en medios ambientales básicos son ionizados para formar grupos carboxilatos —COO~. • El segundo aspecto lo constituye el estudio de los parámetros más importantes para describir la velocidad de migración de la partícula.2 Teoría Electrocinética La velocidad de migración de un soluto a través de un líquido conductor por la acción de un campo eléctrico. así como el punto isoeléctrico de ésta. la carga neta de una protema depende entre otros factores del pH al que ésta se encuentre.2.

1 -10 4 PH e Figura 11. ELECTROFORESIS + 10 8. . Un balance de las fuerzas que actúan sobre la partícula cuando ésta se mueve a una velocidad constante (en equilibrio).El modelo de la doble capa. la fuerza de arrastre que se opone al movimiento de la partícula.620 CAPÍTULO 11. y las fuerzas de relajación y de retardamiento que se producen en el ambiente iónico que rodea al soluto. despreciando los efectos difusivos y gravitacionales. Modelo de una Esfera Cargada Sumergida en un Medio Continuo Un modelo sencillo para el tratamiento de la electroforesis consiste en considerar a la partícula de soluto. como si se tratara de una esfera sumergida en un medio continuo de solvente. Dos modelos básicos de gran utilidad son: I . los cuales varían en su grado de complejidad.2: Cambio de la carga neta de un proteína con el pH. La teoría electrocinética que ha sido desarrollada para el tratamiento de estos aspectos ha conducido a la elaboración de varios modelos. establece que la fuerza que actúa . croscópicos como: la carga de la partícula.El modelo de una esfera cargada sumergida en un medio continuo.

[M/L — t]. [L/t]. d: Diámetro de la esfera. 1964): (11.3) •/' o donde: z\\ Valencia de la partícula o carga puntual.3) para obtener: En la expresión anterior N0 puede ser expresada en función de la constante de Boltzman ks y la constante de los gases ideales R para obtener: .500 Coulombio/Mol-equiv]. FUNDAMENTOS 621 sobre la partícula debida al campo eléctrico./V'oneJ. es igual a la fuerza de arrastre de la partícula. F\ Constante de Faraday.1) La fuerza de arrastre FK en el caso de un flujo viscoso lento alrededor de una esfera (flujo reptante) está dada por (Bird et a/. de tal manera que: (11. [96. [Voltio /cm]. 0 ° iMoí— equiv* E: Campo eléctrico.11.2) donde: v : Velocidad de la partícula.1). ~Ñ"\ Número de Avogadro.2.2) y (11. Si la partícula está en equilibrio es posible combinar las ecuaciones (11. La fuerza eléctrica FE es proporcional tanto al campo que actúa sobre la partícula así como a su carga. (11. ¡i: Viscosidad líquido. [L]. es decir: FK = -FE (11. [.].

como predice modelo d esfera en la forma de la ecuación (1 1. El ambiente iónico que s^ form alrededor de la partícula en solución tiene una influencia importan! sobre la movilidad y las propiedades electrostáticas de la partícula.9).622 CAPÍTULO 11. la difusividad DAB está dada por: Combinando las ecuaciones (11.5) y (11 .8 En este caso particular del modelo de esfera. por: Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una part cula no depende sólo de su carga intrínseca. la movilidad está dad. m=~ (11. Modelo de la Doble Capa El modelo de la capa doble desarrollado en base a la teoría de los ele trolitos fuertes de Debye y Hückel. Las partículas como las proteínas cuando se encuentran present en soluciones de electrolitos desarrollan cargas. Estos grupos cargad' atraen especies de la solución que presenten cargas contrarias (coione . I modelo de la doble capa para interfases sólido-líquido electrolito.6) se tiene: La movilidad m de una partícula en un campo eléctrico se definí como la velocidad de la partícula por unidad de campo eléctrico. 1 ELECTROFORESIS De acuerdo a la ecuación de Stokes-Eistein para un flujo reptante alrededor de una esfera. con su microambiente iónico. permite visualizar las interacción de una partícula sólida cargada. h sido empleado para explicar estos efectos.

moléculas polares o moléculas con dipolos inducidos. A esta segunda capa se le conoce como capa difusa o capa de Gody-Chapman.11. de un espesor aproximado de 10° A Esta capa que envuelve a la partícula misma constituye la superficie de corte del complejo formado. formando una capa altamente hidratada. 1971). A o c 4= (11. Se considera a esta capa la responsable de la disminución del campo eléctrico intrínseco de la partícula. coiones solvatados o contraiones solvatados). FUNDAMENTOS 623 contraiones. El modelo de la doble capa propone que este conjunto de cargas genera dos regiones o capas con diferente grado de movilidad (Figura 11. El modelo de la doble capa permite interpretar el hecho que la velocidad de migración de una partícula cargada en un campo eléctrico. relativamente fija. Dependiendo de la carga neta que se genere dentro de la superficie de corte por acción del rearreglo de cargas.2. constituida por moléculas del solvente ligeramente ligadas y iones totalmente hidratados. Utilizando la teoría de Debye-Hückel ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de Debye A. El potencial Z es el potencial eléctrico medido en la superficie de corte de la partícula. El radio de la capa difusa también tiene una influencia importante sobre la movilidad de la partícula. en las proximidades de la superficie de corte se genera una segunda capa de carga contraria (cuya naturaleza no es rígida).3). es proporcional al potencial Z de la partícula y no a su carga intrínseca. y está dada por: = * E c--? . es decir. En la primera región (capa de Sterm) la atracción que ejerce la partícula sobre las especies es más fuerte.10) \/7 donde la fuerza iónica es una medida de la concentración y valencia de los iones que rodean la partícula. Esta longitud varía inversamente con la raíz cuadrada de la fuerza iónica / (Castellan. Actualmente no existen suficientes bases teóricas que permitan calcular el potencial Z en función de la carga de la partícula y su determinación es de carácter empírico.

ELECTROFORESIS Superficie cargada \ >> Cap* interna de Helmholtz c*p* externa de Helmholtz Superficie de corte Agua de Hidratación Capa difusa de Gouy-Chapman Capa de Stern Distancia Figura 11.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. . Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.624 CAPÍTULO 11. 1990. Adaptada de: Ivory. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

Para fuerzas iónicas bajas. la capa difusa es grande pero muy diluida en contra iones. tal como el desarrollado para obtener la ecuación (11. de tal manera que: FK = 3TTfídcv (11.11. como los característicos de los líquidos fisiológicos (0. el espesor de la capa difusa es muy bajo (~ 2 °A) y su presencia también puede ser ignorada. se puede considerar la situación en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio. es decir a concentraciones salinas bajas.15M).9). Para analizar los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de la partícula. y al potencial Z que es una medida de la carga aparente de la misma.Para soluciones diluidas la movilidad en función del potencial Z puede calcularse por medio de un balance de fuerzas sencillo. Concentración de la especie i. 625 En la mayoría de los casos prácticos A es menor a 1000°A. Modelo de la doble capa: Movilidad en soluciones diluidas. de tal manera que en equilibrio FK = -FE (11. es conveniente considerar tres casos particulares: . De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas está dada por: . Z{\ Valencia de la especie i.13) La fuerza eléctrica FE que actúa sobre la partícula es proporcional al campo que actúa sobre ésta. . .En ambientes de fuerzas iónicas altas.2. FUNDAMENTOS donde: d'. de tal manera que su presencia puede ser ignorada.12) siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partícula esférica formada por la superficie de corte.Entre los dos extremos anteriores.

[coulombio].15) y (11. 67T/Í (11. [Coulombio2/new — m 2 ].17) conducen a: — 6?r/¿t. El campo aplicado a la partícula puede ser expresado como: (11.14).16) -— e r2 combinando las ecuaciones (11.17) de tal manera que la movilidad m = v/E está dada por la ecuación conocida como de Hückel.13) y (11.12).626 CAPÍTULO 11. e: Constante dieléctrica del medio.16) se obtiene: FE = etrcE y las ecuaciones (11.19) Esta movilidad es menor a la esperada si sólo se considera la carga real de la partícula. [coulombio]. El potencial Z está dado por: (11.15) donde rc es el radio de corte de la partícula y q\ es la carga neta de la partícula en la superficie de corte. = 6^E (11. y es aplicable cuando la relación de radio de corte a longitud Debye es muy pequeña (rc/X « 1). ELECTROFORESIS £ rA (11. (11.14) en este caso: q\: Carga aparente de la partícula. qi: Carga correspondiente al campo. . (11. [m].18) (11. m = _£í. r: Distancia entre las cargas.

2.m' coul2 1. Modelo de doble capa: Movilidad en soluciones de concentración intermedia y alta.Cálculo del campo que genera un protón. FUNDAMENTOS 627 Ejemplo 11.1..Cuando la capa difusa presenta una longitud intermedia en el rango..6 x 10~19 (31 x 10-10)2 m 2 £7 = = 1.6 x 10 I9 coulombio r = 31 x 1(T 1 6 10 m new — m coul2 = 9 x 10 Solución: El campo está dado por la ecuación siguiente: E= sustituyendo los datos se tiene: ' ' E = 9 x 10 .5 x 10 cm El campo que produce el protón debido a la relación de la carga con la distancia es muy grande. 0. Una batería de 100 V produce un campo de sólo 10 V/cm.01 < -f < 1000 Á . Estimar el campo sobre la superficie de un protón utilizando los siguientes datos: 1.5 x 10* V_ m e V_ 1.1.

01 10 100 1000 Figura 11. los modelos predicen una soluci< asintótica donde: (i) = 3/2 de tal manera que: .628 CAPÍTULO 11. tal y como se representa en la Figura IIA Esta variación ha sido correlacionada utilizando modelos basados e la ecuación de Henry.2Í 67T/I Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hückel c hasta 60% en el rango aproximado de 0. E decir. tambié es función de la relación del radio de corte a la longitud de Debye. se observa experimentalmente una variación en la movilidad predi cha por la ecuación (11. la cual establece que la movilidad de la partícul además de ser función del potencial Z y de la fuerza de arrastre. m= (11.5 Fuerza Iónica 0.4: Variación de la movilidad con el radio de la capa difusa.6 < Y < 6 A Para relaciones de rc/X » 1.19). ELECTROFORESIS 1.5 .

Los modelos electrocinéticos en general han presentado dificultades para predecir con exactitud los resultados de las separaciones electroforéticas. Sin embargo.11. FUNDAMENTOS 629 m= ef D7T// * 2 m = -^47T/X (11. Cuando la partícula emigra en dirección opuesta a su carga neta. generándose un esfuerzo viscoso adicional sobre la superficie de corte de la partícula. .Fuerza de relajación.2. se presenta una distorsión de la capa difusa (Figura 11. La fuerza de retardamiento se origina por el movimiento de solvente provocado por el movimiento de contraiones de la capa difusa. se conoce como fuerza de relajación. A nivel microscópico esta variación de la movilidad ha sido explicada utilizando el modelo de doble capa para proponer otros efectos conocidos como: . Sin embargo. Los contraiones de la capa difusa tienden a emigrar en dirección opuesta creando un campo que se opone al movimiento de la partícula. es decir se obtenga una resolución apropiada. 11.2.Fuerza de retardamiento.21) que es una movilidad 50% mayor que la predicha por la ecuación de Hückel. La fuerza opuesta al movimiento de la partícula que se genera. han servido de base para generar diversos modelos empíricos de amplio uso.3 Fenómenos de Dispersión Cuando se realiza una operación de electroforesis se requiere que los solutos presentes en la solución de interés se separen formando bandas bien definidas. existen varios fenómenos que provocan la dispersión de la .5).

Todos los derechos reservados. 1986. . Adaptada de: Rudge y Ladisch. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society.630 CAPÍTULO 11. Copyright ©1986. ELECTROFORESIS Carga neta + O Cátodo (-) t Ánodo (+) R E Campo Fuerza de Relajación Figura 11.5: Representación esquemática del efecto de relajación.

Solución: .El tiempo de doblado del ancho original de la banda de muestra que es de 0. la desviación estándar de una muestra dispersada sólo por difusión está dada por: a = T/WABt (11.La variación de la dispersión por difusión con el tiempo. se desea estimar: a). como los efectos microscópicos de mezclado que se agrupan en la llamada difusividad de remolino.11. [°K].Dispersión de proteínas. D =9Axl " °~nm&r> (1L23) donde: T: Temperatura.001 Kg/m — s.. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge y Ladisch. FUNDAMENTOS 631 muestra. sin embargo este fenómeno normalmente no es la causa principal de la dispersión. Difusión En una electroforesis generalmente existe algo de dispersión de la mezcla debida a la difusión molecular. MA> Peso molecular del soluto. Algunos de estos efectos se describen a continuación. 1986).000).22) En el caso de proteínas la difusión puede ser estimada empleando la ecuación de Polson (Horstmann y Chase. ImG (PM=150.2. Para la electroforesis a 25°C de ovalbiímina (PM= 45. Ejemplo 11.000) y colágeno (PM= 345. término que engloba tanto los efectos de difusión molecular.. en un medio cuya viscosidad es de 0. //: Viscosidad de la solución. 1989). b). [Kg/m — s].08 era.000)..2.

ésta tardará alrededor de 1.000 Difusividad (cm 2 /s) 7.25 0. En la Tabla 11.000 345.107 0.00 0. ELECTROFOREí Tabla 11.50 0.22) y (11.000 150. Proteína Ovalbúmina ImG Colágeno PM 45. el coeficiente de dispersión disminuye dispersión es menor.000 0.8 h para doblar el ancho inicial.046 0.038 0.054 0.632 CAPÍTULO 11.00 3.2.00 4.27 x 10~7 3.031 0.2.75 1.2: Cálculos de dispersión.053 0.087 0. Ejemplo 11. Estos resultados se muestran en f< gráfica en la Figura 11. Se puede puntualizar que conforme aurr el tamaño de la proteína.138 0.De acuerdo a los resultados anteriores. si la muestra con ImG.027 0.151 0.00 Dispersión (cm) Ovalblímina ImG Colágeno 0.23).076 0.000 0..00 5..Mediante las ecuaciones (11.168 a).120 0.044 0. muestra contiene ovalblímina el doblado de la longitud de la ban .1 se presentan los resultados de los cál< de difusividades de acuerdo a la ecuación (11. b).99 x 1Q-7 Tabla 11.093 0.2 se presentan los resultados de los cálculos < dispersión en función del tiempo.062 0.123 0.106 0. Ejemplo 11.00 2.130 0.075 0.6. i(h) 0.053 0.065 0. En la Tabla 11.107 0.23) se puede calcul dispersión.1: Cálculo de difusividades de proteínas.000 0.038 0.88 x 10-7 5.

040.2.5 4 4.160.100.6: Dispersión de proteínas por difusión en electroforesis.12- 1 0. 1) Ovalbúmina 2) ImG 3) Colágeno.5 5 Tiempo (h) Figura 11.11.140.060.5 2 2. FUNDAMENTOS 633 0.02- 0 0.080.5 1 1. .5 3 3.

El bufer puede presentar una menor conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene. cuando el campo se incrementa arriba de un valor crítico. Electroósmosis Otra causa de dispersión en una operación electroforetica es la electroósmosis. mientras que en la posterior es conveniente que la movilidad de la muestra sea mayor. . puede provocarse una distorsión en "forma de puntas" de la interfase. Una forma de disminuir el grado de dispersión en una operación intermitente consiste en disminuir el tiempo de operación. Gradientes de Conductividad Si la conductividad de la muestra es mayor que la del bufer. Esta es el resultado del movimiento de la capa difusa de iones en la proximidad de la superficie cargada fija de la celda por acción del campo eléctrico. Efectos Iónicos Regulatorios La diferencia de movilidad entre el soluto de interés y los iones del bufer donde se efectúa la electroforesis. Sobrecalentamiento: Efectos Térmicos Cuando una.634 CAPÍTULO 11. puede generar dispersión durante la electroforesis. Este efecto microscópico puede alterar el patrón de flujo macroscópico dependiendo de la configuración de la celda electroforética. lo que se traduce en el desplazamiento neto de solvente hacia uno de los polos (en dirección opuesta al movimiento electroforético). corriente eléctrica se hace pasar a través de un medio con una determinada resistencia parte de la energía se convierte en calor. ELECTROFORESlS efectúa en una hora aproximadamente. alterando el desplazamiento de la muestra. Para atenuar este efecto en la interfase delantera la muestra debe presentar una menor movilidad que el bufer.

Esta es la principal causa de mezclado en electroforesis.24) ésto se puede lograr de varias formas. de tal manera que la cantidad de muestra está limitada por este espesor. a: Difusividad térmica del medio. dañar el gel o estimular la evaporación de solvente. Sobrecalentamiento: Efecto de Convección Libre Si la electroforesis se desarrolla en un medio líquido en ausencia del gel de soporte. Entre menor sea el valor Ra menor es el efecto de la convección natural.2. [L/t2]. FUNDAMENTOS 635 fenómeno conocido como efecto de Joule. La más empleada a nivel laboratorio es el incremento de la viscosidad mediante el uso de geles de soporte. los gradientes de temperatura pueden originar movimientos convectivos libres debido a la acción de la gravedad sobre los gradientes de densidad que se originan. El grado de convección se caracteriza por el número adimensional de Rayleigh Ra el cual está dado por: fía \¿±z donde: /: Longitud característica de la geometría del aparato de electroforesis (en una celda es el espesor del gel). : Gradiente de densidad en la dirección z. . g: Aceleración de la gravedad. La existencia de gradientes térmicos puede desnaturalizar solutos lábiles. En una operación electroforética el calor generado es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al cuadrado del espesor del gel. Esto tiende a disminuir la convección al disminuir la longitud característica /. [M/L4]. [L2/t]. En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. ¡j. De acuerdo con la ecuación (11. [L]. [M/L — t].11.: Viscosidad del medio.

Inicialmente éstas se realizaban en medio líquido en celdas especiales (Lehninger. Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidratada con poca carga que asemeja un medio líquido.636 CAPÍTULO 11. fibra de vidrio y almidón granulado. 1990). Este tipo de gel es muy utilizado en análisis de ácidos nucleicos.Bm donde A y B son constantes y m es la movilidad.2. Las cadenas desnaturalizadas migran a una velocidad proporcional al logaritmo de su peso molecular PM. A mediados de los cuarenta fue introducido el uso de geles cuyo comportamiento es superior a los materiales anteriores por su menor tamaño de poro y menor carga superficial. Actualmente existen diferentes medios y formas para efectuar una separación electroforética (Ivory. . Una variante de la técnica PAGE es la PAGE-SDS. log(PM) = A. Medios Anticonvectivos Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electroforéticas. En ésta se agrega sulfato de dodecil sodio a la solución amortiguadora que provoca la desnaturalización de las proteínas. En 1939 fueron introducidos los primeros materiales anticonvectivos como: papel filtro. ELECTROFORESIS 11. Los geles de poliacrilamida están formados de polímeros más entrecruzados que producen poros más pequeños. Este gel es muy empleado en el análisis electroforético de proteínas. 1989). A partir de 1959 fueron introducidos los geles de poliacrilamida (PAG de sus siglas en inglés) y de agarosa.4 Medios y Modos de la Electroforesis La electroforesis ha evolucionado en forma considerable a partir de los trabajos pioneros de Ame Tiselius en 1937 y el desarrollo de la teoría de los electrolitos fuertes de Debye y Hückel en 1923. técnica conocida como PAGE (de las siglas en inglés de electroforesis en gel de poliacrilamida).

.Electroforesis de zona (ZE). . formando una interfase. Inicialmente se coloca dentro de la celda la solución que contiene la mezcla proteica en el bufer adecuado..Isotacoforesis (ITP). 1983): .[1. .Electroforesis de interfase móvil (MBE). La separación completa de los componentes de la mezcla no puede ser alcanzada mediante este tipo de electroforesis. cuya clasificación es difícil. La resolución que se puede lograr considerando sólo estos parámetros ha sido mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como el uso de geles porosos que incrementan la separación por filtración o la utilización de gradientes de pH que orientan a las especies de acuerdo a su punto isoeléctrico. posteriormente se añade una columna de solución con bufer. pero que en términos generales se pueden dividir en (Bier et al. sólo el soluto más rápido puede obtenerse en forma pura. utilizando el índice de refracción. logrando por primera vez resolver las globulinas sanguíneas en los tipos a. Al aplicarse el campo eléctrico cada proteína migra.2. Electroforesis de interfase móvil.Enfoque isoeléctrico (IEF). tamaño y forma. La proteína más rápida se coloca al inicio del patrón de migración en el brazo ascendente y la más lenta al final del brazo descendente de la celda. .7). de la muestra a la zona de bufer. FUNDAMENTOS Modos de la Electroforesis 637 En un proceso electroforético la velocidad de migración de las especies. y de las propiedades del medio. Este tipo de modificaciones ha dado origen a una amplia gama de técnicas electroforéticas analíticas y preparativas. Esta técnica utiliza una celda en forma de tubo en U (Figura 11. depende de su carga. Cada banda se detecta en función de la velocidad de migración de la proteína particular.La electroforesis de interfase móvil o electroforesis libre fue desarrollada por Ame Tiselius en 1937. ¡3 y 7.

638 CAPÍTULO 11. Electroforesis de interfase móvil. . ELECTROFORESIS Buffer \ Frontera Ascendente Frontera Inicial Frontera Descendente Figura 11.7: Representación esquemática de la celda de Tieselius.

2.8).En la electroforesis de zona descrita al inicio de la sección 11.. En los desarrollos recientes la electroforesis de interfase móvil actúa como una celda donde la banda de muestra aplicada es semi-infinita. Electrolito de Alta Movilidad 1-5 1-4 1-3 1-2\ / 1 No. Para solutos con carga positiva deberá colocarse en el ánodo. Isotacoforesis. El resto de la celda se carga con electrolito rápido que permanezca siempre al frente de la migración y permita disminuir la dispersión de la muestra (Figura 11. FUNDAMENTOS Compartimiento . En estado estacionario todos los constituyentes se mueven a la misma velocidad.9).En una separación por isotacoforesis la muestra se inserta entre un electrolito rápido y uno lento (Figura 11. Este tipo de electroforesis puede ser empleada para resolver mezclas de cargas diferentes. (antes y después).2.X del Ánodo 639 Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No.8: Electroforesis de interfase móvil de cinco componentes iónicos..11. en un orden impuesto por sus moví- . Tomada de: Ivory. 1990. la muestra es pequeña y diluida. formando una banda finita. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. La colocación de la muestra depende del polo hacia al que va migrar. de tal manera que sólo pueden separarse solutos de igual carga. entonces es posible lograr la su resolución completa. Figura 11. Todos los derechos reservados. de Componentes Fase No. Electroforesis de zona. Copyright ©1990.

Todos los derechos reservados. 1990.3 Equipos Actualmente existe un buen número de equipos para realizar electroforesis a escala preparativa. Copyright ©1990. Tomada de: Ivory. El enfoque isoeléctrico es una operación gobernada por el equilibrio. En el medio continuo de pH las moléculas como las proteínas se ordenan conforme a su punto isoeléctrico. Figura 11. 5 5 Í4l '—' 4 4 HFl '—' 3 3 2 Un '—' 2 \ / m — 1 1 Electrolito de Alta Movilidad Fase No. en la Tabla 11.Cuando la separación electroforética es por medio de enfoque isoeléctrico (IEF) se requiere un gradiente de priven el medio donde se realiza la electroforesis (Figura 11. Electrolito de Baja |II 5 Movilidad ¡ Componente No. ELECTROFORESIS Electrolito de Baja Movilidad Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No. lidades.3 se presentan las principales . con la ventaja de que cada banda contiene sólo un tipo de electrolito (el ancho de la banda es una medida de la concentración de la especie en la muestra original).10). es decir al migrar llegan a un punto donde su carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es nula. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Enfoque isoeléctrico.640 CAPÍTULO 11.9: Isotacoforesis de cinco especies iónicas(antes y después).. mientras que las otras operaciones son controladas por la velocidad de transporte. 11.

• Equipos electrocronialográíicos. la forma que se ha empleado para minimizar el problema de la dispersión de la muestra por convección. EQUIPOS 641 Ánodo /"p\ ^ ^ f\ \-S Cátodo Ánodo pl: Punto Isoeléctrico Cátodo Figura 11.10: Enfoque isoeléctrico de solutos polianfolíticos (antes y después).11. Para evitar el uso de geles se han diseñado equipos donde la electroforesis se realiza en medios líquidos. De manera general los diversos equipos de electroforesis existentes se pueden dividir en tres tipos: • Equipos de flujo libre. Tomada de: Ivory. y donde la longitud característica / del número de Rayleigh se reduce empleando películas delgadas o mediante el uso de membranas. características de algunos de ellos. debido que al finalizar la operación se requiere recortar las regiones de gel donde se localizan las bandas y extraer por electroelución o algún otro método los solutos de interés. Copyright ©1990. Otro tipo de equipos combina la electroforesis con la cromatografía para eficientar las separaciones.3. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1990. A nivel laboratorio y en algunos equipos a escala preparativa. Estas técnicas han sido caracterizadas como tediosas y costosas. ha sido el uso de geles como medios de soporte. Todos los derechos reservados. . • Equipos de flujo libre con recirculación.

Técnicas Electroenfoque SDS-PAGE PAGE A garosa Celes Isotacoforesis Zona Escalón de campo 6.000 Si No No No No Si No No Intermitente Si Si No No Película con recirc. Colector de fracciones Número de fracciones Proceso de colección Adaptada de: Eby. Si No SI 10 cm 100-300 V/cm 12. Tamaño típico de la muestra 12. Operación 7. .3: Características de algunos equipos de electroforesis. Todos los derecho: reservados. ELECTROFORESIS Tabla 11. Detector 15. Producción típica 13. Estabilización del flujo Rotación Membranas Película Gel 8. 1991. Campo Típico 10. 5. Nombre 3. Tipo 1.000 Si No No No No Si No No Intermitente No Si Si No Rectangular 250 mm 2 Rectangular 60 mm 4 cm 100-150 V/cm Anular 627 mm 2 Rectangular 150 mm 2 4 cm 250-375 V/cm 2h \ \ mg-g proteína 5-500 mg/corr. Si 35 Rápido Si 20 Rápido 30 Rápido Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Precio dU. Introducción 4.000 No No No No No No Si No Continua No No Si No Tipo tambor Bio-Rad Rotofor Prep IEF 1987 7. P r o t e i n Techs RF3 1990 30. Copyright ©1991. Enfriamiento 14.2-500 mg/día Continuo 25 X 10 ceí/mí 500 X 106 ce///» Si 6 Continuo 5 X 10 ceí/mí 100 x 106 ce///i Si 6 Si No U V / V i s . Dimensión de U celda Geometría Sección transversal Longitud de separación 9. Compañía 2.1 g 0. Película con flujo libre Bender y Hobein Elphor VaP 22 1987 80.642 CAPÍTULO 11. Variable Si 90 Lento U V / V i s Var.5 cm 50-100 V/cm 3-5 h 100 pg . Tiempo de operación típico 11.000 Si No No No No Si Si Si Continua No No Si No Película con flujo libre Hirschmann AGE 710 1986 140.

y son eluídos continuamente por el fondo de la cámara y colectados por medio de una bomba de canal múltiple. EQUIPOS 643 11. En las partes laterales de este arreglo se sitúan los electrodos en forma de placas.Tipo anular. Los solutos forman bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforáticas. Electroforesis Anular La electroforesis de flujo libre también se ha conducido en arreglos anulares basados en el diseño de Philpot-Harwell (Figura 11.Tipo película delgada. .12). mientras que el exterior gira a velocidades hasta de 150 rpm. En tales sistemas se inyecta una corriente continua y puntual de muestra sobre una película de bufer que se mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Figura 11. La muestra y el bufer son inyectados en la base del anillo y se mueven axialmente hacia el colector múltiple situado en la parte superior. La estabilización de los flujos se logra empleando distancias pequeñas de migración o estabilización rotacional.3.11). La muestra emigra horizontalmente conforme pasa por la cámara. Existen dos arreglos básicos de este tipo de equipo: . El calor generado es removido por medio de refrigerantes que enfrían las paredes laterales. Este movimiento permite neutralizar los efectos convectivos radiales.3.1 Equipos de Flujo Libre En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan recirculación. Uno de los usos principales de este tipo de equipos es en la separación de células y virus. Película Delgada Los equipos de electroforesis de película delgada han sido estudiados desde los años cincuenta (Hamel y Hunter. 1990). partículas sub-celulares y componentes de membrana. el medio no se recircula.11. En estos sistemas el cilindro interno es fijo y funciona como cátodo. .

ELECTROFORESIS z (lateral) ' y (transversal) x (axial) Alimentación Buffer Electrodos Figura 11.644 CAPÍTULO 11.11: Esquema de un equipo de electroforesis de flujo continuo en una celda de electroforesis. 1986. Copyright ©1986. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Tomada de: Gobie y Ivory. Todos los derechos reservados. .

.3. Tomada de: Hamel y Hunter. Todos los derechos reservados. EQUIPOS 645 Fracciones Recuperadas Anillos colectores de fracciones Campo eléctrico transverso Anillo de carga de muestras Entrada del Buffer Figura 11.12: Esquema de un equipo de flujo libre en un arreglo anular. Copyright ©1990.11. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1990.

2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación En los equipos de flujo libre con recirculación el medio líquido donde se efectúa la electroforesis se recircula continuamente. Existen diferentes tipos de arreglos para estos equipos como: .646 CAPÍTULO 11. BioRad 11. Celda Tipo Tambor La celda tipo tambor (Figura 11. La rotación de la cámara y la membranas permiten enfocar apropiadamente las zonas.La celda tipo tambor.Los equipos de película delgada con recirculación. A) Entrada y salida de refrigerante B) Ánodo C) Cámara de electroenfoque D) Cátodo E) Brazo de enfriamiento F) Venteo G) Cubierta. . y gira a 1 j-pni.3. . Este tipo de equipo es operado con gradientes de pH. ELECTROFORESIS Figura 11. de tal maner que la operación es conocida como enfoque isoeléctrico con recircí lación (RIEF de sus siglas en inglés).13: Celda de electroforesis tipo tambor rotatorio. lo cual se efectúa por medio de vacío. con poros de 10 /i. .Los equipos de película delgada con recirculación desplazada. Cada cámar posee un'a posición para alimentar la muestra y una para descargar!.13) consta de una cámara cilíndric dividida en 20 compartimientos por medio de 19 discos de membrana de poliéster.

14).3. El flujo en la celda es laminar ya que está dividida por membranas formando canales de flujo muy delgados.3. Típicamente una separación se realiza después de cientos de ciclos en aproximadamente dos horas. Película Delgada con Recirculación Desplazada Una variante del arreglo físico anterior empleado en electroforesis de zona (Figura 11. cuando este desplazamiento sea lo suficientemente grande. La operación se efectúa utilizando un gradiente de pH sobre la cámara y sólo el 6% de la muestra permanece en la cámara en un tiempo dado.15).11. 11. Película Delgada con Recirculación Una variante de los equipos de enfoque isoeléctrico con recirculación separa físicamente las funciones de enfriamiento y estabilización del fluido (Figura 11. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de cerámica por el cual fluye el líquido de enfriamiento por el interior del tambor.3 Equipos Electrocromatográficos Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la electroforesis son los sistemas que utilizan medios con partículas como las . de tal manera que su migración neta es alterada. es la electroforesis en película delgada con recirculación desplazada. y en dirección contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la recirculación. En este sistema la muestra es inyectada continuamente en un canal de la celda y reinyectada en forma desplazada. Los solutos más lentos tenderán a migrar en el sentido del desplazamiento de la alimentación. En este arreglo la solución que va a fraccionarse es recirculada continuamente entre la celda de canales múltiples donde se realiza la electroforesis y un intercambiador de calor de canales múltiples. EQUIPOS 647 El campo eléctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los extremos de la cámara.

Copyright ©1986. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1) Bomba 2) Celda de enfoque 3) Intercambiado! 1 4) Monitor de pH 5) Monitor UV 6) Control de la bomba 7) Interfase de datos 8) Centro de carga 9) Control UV Adaptado de: Bier.14: Esquema de un equipo electroforético con recirculación. ELECTROFORESIS Figura 11. . 1986.648 CAPÍTULO U.

16). 1990. y se eluye mientras el lecho rota. la muestra se alimenta en forma continua en un punto de un lecho anular. El campo es aplicado axialmente.Los equipos de Electrocromatografía anular rotativa continua. y se desarrolla en una columna empacada de cromatografía por pxclusión.3. el campo eléctrico es antiparalelo al movimiento convectivo forzado. .Los equipos de electrocromatografía de efectos opuestos.17). Electrocromatografía de Efectos Opuestos En la electroforesis cromatográfica de efectos opuestos (CACE de sus siglas en inglés). usadas en cromatografía. Electrocromatografía Anular Rotativa Continua En los equipos de electrocromatografía anular rotativa continua (CRAE de sus siglas en inglés) (Figura 11. Su desarrollo actual es a nivel de prototipos y se pueden mencionar dos tipos: . Tomada de: Ivory. Copyright ©1990. que presenta dos secciones de diferente resolución (Figura 11.11. EQUIPOS 649 Alimentación uuuuuu Purga Componente de Baja Movilidad Sección de cambio Componente de Alta Movilidad Figura 11. La parte superior de la columna se empaca . Todos los derechos reservados.15: Esquema de un equipo electroforético de película delgada con recirculación desplazada. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

. Copyright ©1990. Tomada de: Hamel y Hunter.16: Esquema de un equipo de electrocromatografía anular rotativa continua. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Todos los derechos reservados. 1990.650 CA PíTVLO 11. ELECTROFORESIS Alimentación Multicomponente V= reo Figura 11.

pero su productividad está limitada por el calentamiento y la caída de presión. Todos los derechos reservados. de tal manera que éste se mueva más rápidamente en la parte superior. Con un manejo adecuado de la intensidad del campo.17: Electrocromatografía de efectos opuestos. Copyright ©1990.1L3. . mientras que los contaminantes salen por alguno de los extremos. 1990. Este arreglo produce separaciones de alta pureza y concentración. con gel excluyente del soluto de interés y la parte inferior con gel incluyente. el soluto de interés puede tener un movimiento neto siempre hacia el centro de la columna y acumularse en esa región. Tomada de: Hamel y Hunter. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. EQUIPOS 651 Compartimiento del Buffer Anión ico Tapón de Poliacrilamida Entrada del Bufler acarreador Lecho de Gel de Exclusión Zona de Acumulación del producto • Flujo del Buffer Migración Electroforética Movimiento í i Lecho de Gel de Inclusión Tapón de Poliacrilamida WW - ^ Salida del Buffer acarreador Compartimiento del Buffer Catiónico Figura 11.

652

CAPÍTULO U.

ELECTROFORESiS

11.4

Diseño

El tratamiento de la electroforesis al igual que las columnas cromatográficas puede ser abordado empleando: • La teoría de platos. • La teoría cinética.

11.4.1

Teoría de Platos

La teoría de platos es útil para comparar el comportamiento de un mismo equipo para diferentes aplicaciones, y entre la misma aplicación en equipos diferentes. Como se estableció anteriormente la desviación estándar en equipos electroforéticos cuya principal causa de dispersión es la difusión molecular está dada por: (11.25) donde: D: Dispersión axial. [L2/t]. t: Tiempo. [i\. a: Desviación estándar. [L]. La ecuación (11.25) se puede expresar en términos de parámetros electroforéticos introduciendo la expresión: u = rnE = m — donde: v: Velocidad del soluto. [L/t]. m: movilidad. [L2/ Voltio — t}. E: Campo. [Voltio/ L}. (11.26)

11.4. DISEÑO V: Voltaje. [Voltio]. L: Longitud de la celda. [L] dimensionalmente: t=-

653

v

(11.27)

entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para obtener:

De acuerdo a la teoría de platos, la eficiencia de la separación puede definirse como la dispersión por unidad de longitud,
2

~ LJ Las ecuaciones (11.28) y (11.29) conducen a:

(11.29)

1DL HETP=—— mV
como:

(11.30)

L = (HETP)(N)
entonces

(11.31)

(11-32) De estos resultados es importante notar que TV es independiente de L. Asimismo, /V puede incrementarse aumentando V. Por otro lado, HETP aumenta al aumentar L. Esto implica que las distancias cortas de migración son las más eficientes para la separación. La resolución de dos componentes del sistema cuando su coeficiente de dispersión es el mismo está dado por (Rudge y Ladisch, 1986):

R=4 V 2D

654

CAPÍTULO 11. ELECTROFORESIS
donde mi y m<¿ son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente

y:'
771 =

mi + m 2 2

De acuerdo a la expresión (11.33) el voltaje incrementa la resolución. Ejemplo 11.3.- Resolución de una mezcla de proteínas. Se desea separar dos enzimas mediante una electroforesis en gel a 4°C. El coeficiente de dispersión axial es de 2 x 10~7 cm2/s. La movilidad es de 3.38 x 1(T5 cm?/V - s y 1.33 x 10~5 crn2/V - s, respectivamente. Para realizar la separación se utiliza una celda de 2 cm donde se aplica un campo de 1.8 V/cm por un lapso de 7.5 h. Se pide estimar: a) La distancia que viaja cada soluto. b) La eficiencia de la separación de cada soluto. c) La resolución de la separación. Solución: a).- La distancia puede ser calculada mediante la expresión

L = vt — mEt
de tal manera que:

= 3.38 x 10~5 -f^— x 1.8 — x 7.5 h x V —s cm
=
1.64 cm

cm

V

.

3600 s

y,
¿2 =

1.33 x 10-* .,cm' x 1.8 -ü x 7.5 h x V — cm cm

L2

= 0.64 cm

11.4. DISEÑO La separación entre los solutos es:
LI — Z/2 = 1 era

655

b).- De acuerdo a la ecuación (11.30),

HETP = (HETPh
(HETP)i

mE
2 (2 x 10~7 22!)

=

3.38 x 10-5 gal x U

= 6.57 x 1(T3 era
2 (2 x 10-7 ss¿\ 2 i/ 1.33 x io-5 ^ x 1.8 £

(HETP)2 (HETP)2

= =

1.67 x 10~2 era

c) Utilizando la ecuación (11.33) se puede calcular la resolución. Primero es necesario calcular la movilidad promedio,
I | I j
ífe,

ra

_ _
m

4 ¥

i

=

mi + = 2 (3.38 + 1.33) x 10-5 &£.
¿J

2

-

2

ra = 2.334 x 1(T5 ^~V —s de tal manera que, 1 /2.334 x 10~5 ^ x 1.8 ^7 x 2cra
4 \ 2 x 2 x 10-7 '

(3.38- 1.33) x 10-5 f^-2

2.334 x 10-5

R = 3.18

656

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESIS

11.4.2

Teoría Cinética

En un proceso electroforético la velocidad de migración depende de la carga, tamaño y forma de la partícula de interés, así como de las propiedades del medio. La resolución puede ser incrementada mediante gradientes de pH, filtración molecular, o modificaciones del flujo. Esto a dado origen a una diversidad de procedimientos para optimizar las separaciones electroforéticas. Actualmente se cuenta con un teoría unificada para tratar los diversos modos electroforéticos (ZE, MB, ITF e IEF) (Bier ti a/, 1983), lo cual demuestra que las ecuaciones que rigen estos procesos son idénticas. Las diferencias aparentes surgen de las diferentes condiciones iniciales y de frontera de cada caso. A continuación se presentan algunos modelos particulares.
Película Delgada con Alimentación Continua

En el caso de la electroforesis en película delgada con alimentación continua, el soluto está sujeto a fuerzas difusivas, convectivas y electroosmóticas, que determinan su patrón de elución. En estado estacionario y para E constante, el balance de masa de soluto en este tipo de arreglos es:
de de de
d^c

donde vx es la velocidad parabólica axial y vz es la velocidad osmótica lateral. S0(x) es un término que describe la distribución del flujo de soluto inyectado. La ecuación (11.34) es una ecuación difusiva, convectiva tridimensional, cuya forma más sencilla es su solución asintótica (Gobie y Ivory, 1986).
Electrocromatografía

En el caso de electrocromatografía en columna si se supone que mE es independiente de la concentración, en ausencia de electroósmosis el modelo empleado es:

11.5. SUMARIO

657

rearreglando,

01.36)
donde R es la acumulación de soluto en la fase sólida y vx es la velocidad del flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones a la ecuación de diseño de las columnas cromatográficas, pueden ser aplicadas a la electrocromatografía, sustituyendo vx por vx -f mE.

11.5

Sumario

La electroforesis es una operación que permite la purificación de solutos por la acción de un campo eléctrico. Uno de los problemas que se presenta normalmente en las operaciones electrofcréticas es la dispersión que sufre la muestra conforme la operación se desarrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrollado diversas formas y medios para efectuar la operación, lo cual se ha traducido en una variedad de equipos disponibles a escala preparativa. El diseño de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfoques similares a los utilizados en cromatografía de columna, y actualmente su desarrollo es incipiente y basado fuertemente en las pruebas de laboratorio.

658

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORES1S

11.6

Problemas

11.1.- La movilidad relativa de /2-galactosidasa respecto a la de citocromo c en un gel de PAGE-SDS es de 0.2, mientras que la de actina es de 0.6. Los pesos moleculares de estas proteínas son de 130,000 para la /3-galactosidasa y de 45,000 para la actina (Condeelis, 1977). Estimar la movilidad relativa de ASB (albúmina de suero de bovino) en el mismo gel si su peso molecular es de 68,000. Resp. 0.42 11.2 La electroforesis capilar de alta resolución (HPCE) es una poderosa técnica analítica que maneja muestras menores de 1 ¡j,g (Frenz y Hancok, 1991). Estimar el número de platos de una columna de HPCE donde la movilidad del soluto es de 10~8 m 2 /V — s, el voltaje aplicado es de 30 KV y el coeficiente de dispersión de 10~10 m2/s. Resp. 1.5 x 106 platos. 11.3.- Se desea separar dos proteínas en una celda electroforética aplicando un gradiente de potencial de 1.2 V/cm. Bajo las condiciones de la electroforesis la movilidad de las proteínas es de —1.2 x 10~4 y 2.1 x 10~4 cm2/V — 5, respectivamente. Estimar el tiempo de separación de estas proteínas si inicialmente se colocan formando una banda de 0.4 cm de espesor. Resp. 0.51 h 11.4.- La movilidad electroforética de las células de glóbulos rojos humanos es independiente de las razas, edad, sexo y varios otros factores. Esta propiedad permite tomar a este tipo de células como un patrón electroforético (Brinton y Lauffer, 1959). Estimar la movilidad de glóbulos rojos en un medio M/15 de fosfatos a pH=7.4, si la viscosidad del medio puede tomarse como la del agua, el potencial Z es de 0.0168 Voltios y la constante dieléctrica es de 9.8 x 10~9 coulombio'2/N - m2. Resp. 1.31 (¿m — cm/V — s

11.7. BIBLIOGRAFÍA

659

11.7

Bibliografía

Bier, M. 1986. Scale-Up isoelectric focusing. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds). ACS Symposium Series 314. ACS. Washington, D.C. 13, 185-192. Bier, M., Palusinski, O.A., Mosher, R.A. y Saville, D.A. 1983. Electrophoresis: Mathematical modeling and computer simulation. Science. 219, 4590, 1281-1286. Bird, R.B., Stewart, W.E. y E.N. Lightfoot. 1964. Fenómenos de Transporte. Reverte. Barcelona. 2, 25-28. Brinton, C.C. y Lauffer, M.A. 1959. The electrophoresis of virues, bacteria, and cells, and the microscope methods of electrophoresis. En: Electrophoresis: Theory, Methods, and Applications. Bier, M. (Ed.). Academic Press. New York. 10, 427-492. Castellan, G.W. 1971. Fisicoquímica. Fondo Educativo Interamericano. México. 18,430-431. Condeelis, J.S. 1977. A sodium dodecil sulfate microgel-electrophoresis technique suitable for routine laboratory analysis. Analytical Biochemistry. 77, 195-207. Eby, M.J. 1991. Prep-phoresis: A wealth of novel possibilities. Bio/Tech 9, 528-530. Frenz, J. y Hancok.,, W.S. 1991. High performance capillary electrophoresis. Tibtech. 9, 243-250. Gobie, W.A. y Ivory, C.F. 1986. High-resolution, high-yield continuous-flow electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds). ACS Symposium Series 314. ACS. Washington, D.C. 12, 169-184. Hamel, J.P. y Hunter, J.B. 1990. Modeling and applications of downstream processing. En: Downstream Processing and Bioseparations. Hamel, J.P., Hunter, J.B. y Skidar, S.K. (Eds.). ACS Symposium Series 419. ACS. Washington, D.C. 1, 1-35.

660

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESlS

Horstmann, B.J. y Chase, H.A. 1989. Modelling the affinity adsorption of inmunoglobulin G to protein A inmobilised to agarose matrices. Chem. Eng. Res. Des. 67, 243-254. Ivory, C.F. 1990. Electrically driven separation processes: Analytical and preparative methods. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker. New York. 16, 517-567. Lehninger, A.L. 1989. Bioquímica. 2 ed. Omega. Barcelona, España. 7, 131-132. Rudge, S.R. y Ladisch, M.R. 1986. Process considerations for scaleup of liquid chromatography and electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds.). ACS Symposium Series 314. ACS Washington, D.C. 10, 122-152.

Parte V Operaciones de Acabado

663

Las operaciones finales en un proceso de bioseparación son las operaciones de acabado del producto. Estas operaciones permiten incrementar la pureza del producto, facilitar su manejo y mejorar su apariencia. En esta parte, se revisan dos de las operaciones de acabado más utilizadas en los procesos biotecnológicos. En el capítulo 12, se trata la operación de cristalización que es muy empleada tanto en la obtención de productos biotecnológicos tradicionales como los antibióticos, como en la obtención de productos provenientes de la tecnología del r-DNA como las proteínas terapéuticas. En el capítulo 13 se presenta la operación de secado la cual se utiliza como fase terminal de los procesos de cristalización, o bien para el secado de caldos en la producción masiva de algunos productos.

Capítulo 12 Cristalización
12.1 Introducción

La operación de cristalización consiste en separar un soluto de una solución mediante la formación de cristales de éste en el seno de la solución. Una vez formados los cristales se separan de la solución obteniéndose el soluto con un alto grado de pureza. Durante el proceso de cristalización los cristales deben formarse primero y luego crecer. Al fenómeno de formación de pequeños cristales se le llama nucleación y a la formación capa por capa del cristal se le llama crecimiento. La sobresaturación es la fuerza impulsora tanto de la nucleación como del crecimiento de los cristales. Si la solución sólo está saturada los cristales no se transforman ni crecen, mientras que si está subsaturada éstos tienden a disolverse. La cristalización es ampliamente utilizada a nivel industrial para recuperar sales como cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de soluciones acuosas. Algunas sustancias orgánicas como la sacarosa y la glucosa también son obtenidas mediante procesos que involucran una operación de cristalización. Varios productos biotecnológicos de uso masivo como algunos antibióticos y ácidos orgánicos, así como algunos productos terapéuticos, son comercializados en forma de cristales. Esta diversidad de procesos se traduce en una gran variabilidad en la capacidad de los cristalizadores
665

666

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

industriales que oscila de gramos a cientos de toneladas por día. La cristalización es una operación ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicos debido a que ofrece las siguientes ventajas: - Se puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de hasta un 99 %. - Se puede controlar la cristalización de tal manera que se produzcan cristales uniformes que faciliten su manejo, empaque y almacenamiento. - La cristalización mejora la apariencia del producto para su comercialización. - Es una operación que puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas. Frecuentemente la operación de cristalización va acompañada de un lavado de los cristales en un equipo de separación sólido-líquido y de un secado final, en un arreglo como el mostrado en la Figura 12.1. El diseño apropiado del cristalizador es esencial en el funcionamiento de todo el arreglo anterior debido a que el tamaño de los cristales y la concentración de estos en la solución de salida, son determinados en gran medida en la operación de cristalización; a su vez estos parámetros determinan el diseño del separador sólido-líquido y del secador. La cristalización es en gran medida un arte mas que una ciencia; sin embargo, el conocimiento actual de los mecanismos de formación y crecimiento de los cristales, y de la fuerza impulsora de éstos, la sobresaturación, permite abordar el crecimiento de cristales de una manera más científica. La estrategia para el diseño de cristalizadores comprende el establecimiento de las relaciones de equilibrio, la forma de operar del cristalizador (el método para generar la sobresaturación) y el estilo de cristalizador que se va emplear. Una vez obtenido el diseño conceptual del cristalizador, el problema de diseño restante consiste en determinar el diseño funcional que permita satisfacer los requerimientos de tamaño de cristal mediante el estudio cinético del sistema (Figura 12.2).

12.1.

INTRODUCCIÓN

667

Alimentación -

Solvente de lavado

Fase

-soiwnt*

., .. H-Soluto disiMlto liquida 1-impur.as

Solvente

Producto seco

Figura 12.1: Esquema de un sistema de cristalización. Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados.

668

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

Equilibrio - Selección del solventa - Sobresaturación

Modos de Operación - Generación de sobresaturación -Presión - Temperatura - Composición

Tipo de Cristalizador - Flujo de vapor - Presión de operación -Tratamiento déla suspensión -Tamaño del producto

Cinética Diseño Funcional -Diámetro •Tiempo de residencia -Velocidad de circulación -Materiales -Equipo auxiliar

Figura 12.2: Estrategia de diseño de un cristalizador. Adaptada de Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derecho reservados.

2.2. FUNDAMENTOS

669

Para abordar los aspectos relacionados con la cristalización en la ección 12.2 de este capítulo se revisan los fundamentos de la cristaliación: el equilibrio, los modos como se puede efectuar una operación le cristalización y la cinética de la cristalización. En la sección 12.3 e describen los equipos de cristalización más empleados. El diseño de :ristalizadores se presenta en la sección 12.4.

12.2

Fundamentos

Para evaluar el uso de la cristalización como alternativa para la purificación de un producto es necesario contar con determinada información básica relacionada con el producto y sus soluciones como: • Tipo de cristales que forma el producto. • Pureza de los cristales que forma el producto. • Equilibrio: Solubilidad y sobresaturación de soluciones del soluto en agua u otro solvente. • Modos de operación posibles para generar la sobresaturación de la solución del soluto. • Cinética: Velocidad con que se originan (nucleación) y crecen los cristales en la solución. • Distribución de tamaños en poblaciones de los cristales.

12.2.1

Tipos de Cristales

Un cristal es un sólido compuesto por átomos, iones o moléculas dispuestos en un arreglo tridimensional ordenado y periódico, o retícula espacial. La distancia entre los átomos del cristal de cualquier material es constante y característica de dicho material. Los ángulos entre las caras de los cristales también son característicos y dan origen a cinco tipos básicos de cristales y a siete sistemas cristalográficos. En el

de acuerdo a la siguiente ecuación: ^=fi donde: ( 12J ) masa de soluto A en el producto masa de soluto A en la f a s e liquida de manera similar para la impureza B.8 %. tanto las distancias características (largo. el sistema cristalográfico cúbico. . Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento originando los sistemas tetragonal.2. normalmente después de la separación de los cristales de la solución. Desde el punto de vista industrial el término "habitat del cristal" se refiere a los tamaños relativos de las caras del cristal. 12. los cristales en forma de disco son difíciles de lavar durante su centrifugación y difíciles de filtrar. La separación alcanzada en una cristalización puede ser caracterizada mediante la distribucción del soluto y las impurezas entre las fases. El habitat de un cristal es de gran importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fácilmente durante su centrifugación y secado. CRISTALIZACIÓN sistema más sencillo. los cristales formados sólo contienen un componente alcanzado purezas hasta de 99.2 Pureza de los Cristales La mayoría de las soluciones cuando forman cristales a velocidades de crecimiento moderadas y a condiciones constantes.670 CAPÍTULO 12. > masa de impureza B en el producto masa de impureza B en la fase liquida no (12. Las impurezas de los cristales generalmente son debidas al atrapamiento de líquido en el cristal en pequeñas bolsas u oclusiones. lo que hace necesario lavar los cristales. Además de este tipo de impureza. ancho y alto) como los tres ángulos característicos son iguales. ortorrómbico. Los cristales esféricos son los más fáciles de manejar. hexagonal monoclínico. parte de la solución queda adherida a la superficie del cristal. triclínico y trigonal.

2.Conocer la concentración del líquido de salida del cristalizador. de las condiciones de temperatura y presión a las que se realice la cristalización. FUNDAMENTOS 671 El grado de separación o selectividad del proceso es más efectivo conforme (3 aumenta. . Esta solubilidad es la máxima que puede alcanzar la solución en forma termodinámicamente estable.Determinar la recuperación máxima posible de la operación. Los datos experimentales de equilibrio sirven de base para la evaluación de las diversas opciones que existen para llevar a cabo un proceso de cristalización ya que permiten entre otras cosas: . y del grado de saturación (sobresaturación) con que se realice la operación.3 se pueden describir algunos comportamientos generales de la solubilidad de las sustancias en función de la temperatura.Establecer el rango de temperatura y presión de operación. El factor de cristalización E (análogo al factor de extracción) depende de la naturaleza del sistema solvente-solutoimpurezas. Con ayuda de la Figura 12.Seleccionar el solvente. Las curvas de solubilidad representan la solubilidad de soluciones saturadas a diferentes temperaturas. .Determinar si el sólido que se cristaliza sólo contiene el soluto de interés. La saturación es resultado del equilibrio entre la fase sólida y la fase líquida.3).3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación Solubilidad Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalización se presentan en forma de curvas de solubilidad (Figura 12. . 12. . y consecuencia de la igualación de sus potenciales químicos. En estas curvas la solubilidad se expresa comúnmente en porciento de peso de soluto a peso de solvente.12.2. .

CRISTALIZACIÓN 150 h Glutamato Monosódico % peso Acido Adípico 90 Temperatura °C Figura 12. Todos los derech reservados.672 CAPÍTULO 12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. .3: Curva de solubilidad. 1988. Copyright ©1988. Tomada de: Belter ti al.

.Existen sustancias como la hexametilentetramina cuya solubilidad no varía apreciablemente con la temperatura.Solubilidad de 1-serina. y se expresa como: donde: X>2'. 1991) en agua en el rango de 35 . Fracción mol de soluto en la saturación.2.50°(7. Los datos experimentales se ajustaron a la recta dada por: S= 146.12.834 T donde T es la temperatura en grados centígrados y S es la solubilidad de la 1-serina en g/lOOO g de agua. FUNDAMENTOS 673 .1. A//^: Entalpia de fusión en el punto de fusión. La solubilidad de 1-serina también fue obtenida a partir de la teoría de las soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe similitud química entre el soluto y el solvente. . El conocimiento del comportamiento de la solubilidad de una sustancia es básico en la selección del modo para realizar su cristalización: Es factible obtener cristales de ácido adípico por enfriamiento de una solución de éste. Ejemplo 12. . pero no es factible obtener cristales de hexametilentetramina por este mismo método.13 + 80.Otras sustancias como el ácido fumárico muestran un incremento moderado en solubilidad con respecto a la temperatura. Se determinó la solubilidad de 1-serina (Charmolue y Rousseau..Algunas sustancias como el ácido adípico y el glutamato monosódico muestran una gran dependencia de su solubilidad con la temperatura. Tm: Temperatura de fusión en grados Kelvin.

respectivamente. CRISTALIZACIÓN T: Temperatura en grados Kelvin. X2 donde MI= 18 y M2=105.82 cal/g-mol.89 combinando ambas expresiones. \ \ de tal manera que: A 2 = exp La solubilidad S en g/1000 g de agua puede obtenerse mediante la expresión: S = (M /1000A / >\-ñ.230. con estos valores la expresión anterior puede ser escrita como: 5-5. . Para 1-serina la temperatura de fusión Tm es de 501° K y la entalpia de fusión A//^ se ha estimado en 4.. son los pesos moleculares del agua y la 1-serina .89 exp [4.674 CAPÍTULO 12.1 En la Figura 12. la solubilidad teórica de la 1-serina es: O — 5.838.4 se muestra una comparación de los datos experimentales de solubilidad de 1-serina con los que predice la teoría de las soluciones ideales.25 (^ .838.82-^-7 ' g—mol ca 1. Solución: Sustituyendo valores en la ecuación de las soluciones ideales se tiene: i A 1 4. A partir de la informacin anterior comparar los resultados experimentales con los derivados de la teoría de las soluciones ideales para 1-serina.1.230.987 g—mol—°J\ ¡ OK n ~X~2 ~ x 501°/\ \N f ~ ' ) I/sol ""-1 7 .1)] .

Rousseau.2.12. Miers a fines de los años veinte. Todos los derechos reservados. formando lo que se conoce como solución sobresaturada. . Copyright ©AIChE Sobresaturación Pudiera pensarse que una solución con una concentración de soluto mayor a la de saturación forma inmediatamente cristales pequeños o núcleos. 1991.A. . Sin embargo. y la región de sobresaturación. FUNDAMENTOS 675 Temperatura *C Figura 12. Tomada de: Charmolue y Reproducida con el permiso del American Institute of Chemical Engineers. El estudio del fenómeno de sobresaturación es fundamental en el diseño de cristalizadores. Estos estudios han conducido a dividir la región de sobresaturación en tres zonas cuya delimitación no es muy precisa. donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales ya existentes (sembrados o formados por nucleación) pero no forma cristales nuevos o núcleos. actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solución puede contener más soluto que el correspondiente a la saturación. 1991.La región metaestable. La curva de solubilidad (Figura 12. El comportamiento de las soluciones en la región de sobresaturación fue descrito por H.4: Solubilidad de 1-serina.5) separa dos regiones: la región de subsaturación donde una solución es capaz de disolver más soluto a las condiciones dadas.

con el propósito de lograr un tamaño de cristal lo más uniforme posible.La región intermedia. los limites de estas tres zonas se controlan no sólo por el equilibrio.5: Zonas de sobresaturación. En el caso de una operación intermitente. El conocimiento de la región de sobresaturación permite determinar regiones de operación. sino también por los parámetros del proceso como el grado de agitación. el grado de sobresaturación se mantiene en la región metaestable. de tal manera que la sobresaturación generada sirva para el crecimiento de los cristales ya existentes (sembrados) y no exista formación de cristales nuevos. .La región lábil. . .676 CAPÍTULO 12. donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales existentes y forma nuevos cristales o núcleos . a) Metaestable b) Intermedia c) Lábil. CRISTALIZACIÓN Región sobresaturada Región subsaturada Peso de soluto Solubilidad Región de operación intermitente Región de operación continua Temperatura Figura 12. donde la formación de cristales nuevos o núcleo ocurre en forma espontanea a partir de una solución que no contiene cristales o semillas. A diferencia de la solubilidad de equilibrio.

Esto se logra utilizando un lecho fluidizado de cristales. . 12.Sobresaturación por enfiamiento. Además es necesario proveer un mecanismo de clasificación de cristales.12. o directamente utilizando un líquido refrigerante inmiscible con la solución y con propiedades termodinámicas que minimicen el trabajo de compresión necesario.Sobresaturación por evaporación térmica al vacío.2.4 Selección del Modo de Operación El modo de operación en una cristalización es la técnica empleada para generar la sobresaturación de la solución. de tal manera que el número de cristales que se retiran en la corriente de salida sea igual al número de cristales generados por nucleación. En este tipo de operación la evaporación de solvente es mínima. de tal manera que sólo se retiren cristales de un mismo tamaño. La selección del modo de operación está fuertemente influenciada por las características de la solubilidad en equilibrio del sistema.Sobresaturación por evaporación térmica.Sobresaturación por enfriamiento evaporativo. Los principales modos para generar la sobresaturación (Figura 12.2. Este enfriamiento puede realizarse en forma externa mediante un intercambiador. FUNDAMENTOS 677 En una cristalización continua la sobresaturación debe ser mantenida en el limite inferior de la región intermedia.6) son los siguientes: . el enfriamiento de la solución a tratar permite la formación de cristales con altos rendimientos y bajo consumo energético. Una vez que se ha seleccionado el modo de operación del cristalizador es posible desarrollar los balances de masa y energía del sistema. Sobresaturación por Enfriamiento Cuando la solubilidad del soluto varía sensiblemente con la temperatura. . el cual proporciona una área adecuada para remover la sobresaturación mediante el crecimiento de los cristales. . .

CRISTALIZACIÓN i k » V t ( f~ — 1 n— 1 —-V. Todos los derechos reservados. Adaptada de: Moyers y Rousseau. I Refrigerante r j V — ^ . Copyright ©1987. 1987. • Alimentación Vapor Producto Figura 12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.6: Modos para generar sobresaturación.678 CAPÍTULO 12. A) Enfriamiento B) Enfriamiento evaporativo C) Evaporacin térmica D) Evaporación térmica al vacío. .Vacio Alimentación -»• V Y Refrigerante Producto y < / * \ Alimentación / ( i Cond«nsado 1 «_ V/ / \ f k.

Este modo se emplea sólo cuando la solubilidad del soluto es insensible a la temperatura. y el crecimiento de éstos. Sobresaturación por Evaporación Térmica al Vacío En este modo la alimentación tiene una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador y al entrar se enfría adiabáticamente. FUNDAMENTOS Sobresaturación por Enfriamiento Evaporativo 679 En este modo el enfriamiento se produce con auxilio de un sistema de vacío. Este modo también es aplicable cuando la solubilidad del soluto es muy sensible a la temperatura.12. La alimentación entra a una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador enfriándose adiabáticamente dentro de éste. La fuerza impulsora de ambos fenómenos es la sobresaturación. Nucleación La velocidad de nucleación afecta el tamaño que los cristales pueden alcanzar en un cristalizador intermitente. Existen dos mecanismos de formación de cristales: .2. Conforme mayor sea la velocidad de nucleación menor es el tamaño de los cristales obtenidos.2. En el caso de una cristalización continua el aumento de la velocidad de nucleación se traduce en un mayor tiempo de residencia de los cristales. A niveles elevados de sobresaturación ambos fenómenos compiten por el soluto disponible. Sobresaturación por Evaporación Térmica En este modo se transfiere calor al sistema para evaporar solvente y generar la formación de cristales por "salting out". Paralelamente se transfiere calor al sistema para evaporar solvente con auxilio de un sistema de vacío. Este modo es empleado para la cristalización de solutos cuya solubilidad tiene una dependencia intermedia respecto a la temperatura.5 Cinética de la Cristalización Los fenómenos cinéticos asociados a la cristalización son la nucleación o formación de cristales nuevos. 12.

bombas y agitadores.Sembrado. la velocidad . . se piensa que el cristal libera pequeños cristales que se formaron durante el proceso de secado y que dan origen a nuevos cristales. En la nucleación primaria el cristal nuevo se origina espontáneamente a partir de la solución sobresaturada (nucleación homogénea) o bien se origina a partir de un material insoluble. CRISTALIZACIÓN . La mayoría de los cristalizadores operan en la región de baja sobresaturación para que el crecimiento del cristal sea regular y el producto puro. .680 CAPÍTULO 12. Al colocarse cristales del material en una solución sobresaturada. los mecanismos para controlar la nucleación secundaria pueden establecerse con relativa facilidad a ese nivel. Por tal motivo la nucleación secundaria es la más empleada a nivel industrial. Ante la carencia de una descripción matemática detallada que englobe los diferentes mecanismos de nucleación posibles. . Cuando la solución sobresaturada fluye sobre la superficie de los cristales se considera que puede despegar segmentos de cristal.Esfuerzo cortante.Contacto.Nucleación secundaria. La velocidad de nucleación es función de la sobresaturación y del mecanismo que la origina. Es la formación de cristales nuevos como resultado de la presencia de cristales ya crecidos de soluto. ya sean impurezas o cristales del mismo material previamente sembrados.Nucleación primaria. y puede originarse por medio de varios mecanismos: . Por otro lado. En general se observa que la dependencia de la velocidad de nucleación primaria con la sobresaturación es de mayor orden que la de la velocidad de nucleación secundaria. Consiste en la producción de cristales nuevos mediante el rompimiento de los cristales por choques entre sí o con las diferentes partes del equipo: tanque. que pueden a su vez originar nuevos cristales.7 en forma cualitativa. Esto se muestra en la Figura 12.

. Adaptada de: Moyers y Rousseau.7: Influencia de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados.2. 1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. FUNDAMENTOS 681 Velocidad de nudeación primaria Número Tiempo Velocidad de nudeación secundaria Sobresaturación Figura 12.12.

i: Parámetro empírico. El crecimiento de un cristal es un proceso de adición capa por capa.volumen de solvente]. CRISTALIZACIÓN de nucleación generalmente se expresa por medio de una correlación empírica de la siguiente forma: dN B= — = kn(c-c*)1 (12. [M/L3]. c: Concentración de soluto en la solución.4) donde: B: Velocidad de nucleación. [M/L3]. c*: Concentración de saturación del soluto. El crecimiento sólo puede ocurrir en la superficie del cristal y las resistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusión del soluto hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integración del soluto a la superficie del cristal. [M/L3].5) . c — c*: Sobresaturación.682 CAPÍTULO 12. [M/L3]. [Núcleos/í. En la Figura 12. N: Número de núcleos por unidad de volumen de solvente.8 se muestra el proceso donde un cristal cúbico ideal crece por adición de pequeños cubos sobre su superficie. la velocidad de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma empírica como: = KcA(c-c') en la ecuación anterior Kc está dada por: (12. kn: Parámetro empírico. dado que estas resistencias actúan en serie. Crecimiento El crecimiento de cristales es un fenómeno cuya fuerza impulsora también es la sobresaturación.

: Coeficiente transferencia de masa en la película. Tomada de: Bennett. [t]. t: Tiempo. [L/t]. Todos los derechos reservados. c — c*: Sobresaturación. [L/. . 1973. ks: Velocidad específica de integración del soluto a la superficie del cristal. [M/L3]. [M]. FUNDAMENTOS 683 Figura 12. Kc: Coeficiente global de transferencia de masa. a diferencia de la expresión de la velocidad de nucleación cuyo orden es variable. Es importante hacer notar que la expresión de la cinética del crecimiento es de primer orden. Copyright ©1973.12. JL kL J_ ks (12.6) donde: Mc: Masa de un cristal. [L2].8: Crecimiento de un cristal.t].2. ki. A: Área del cristal. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. [L/t].

mientras que k$ generalmente es un función exponencial de ésta.7) puede ser expresada en función de esta longitud característica de la siguiente manera: Mc = pc(<f>vl3) (12. De igual manera el área del cristal puede relacionarse con la longitud característica mediante: A = <]>Al2 donde ^ es un factor geométrico de área. y puede cambiar dramáticamente durante un proceso de enfriamiento. partiendo de la siguiente relación conocida: Mc = PcVc (12.8) donde (f>y es un factor geométrico que relaciona la longitud característica / del cristal. ki varía ligeramente con la temperatura. En base a lo anterior la ecuación (12. respectivamente. Se puede asociar la velocidad de crecimiento de un cristal expresada en unidades de masa por unidad de tiempo. El coeficiente &/. siendo el más utilizado el del tamizado de los cristales bajo estudio. con una velocidad expresada en longitud por unidad de tiempo. Si se supone que el cristal mantiene una similitud geométrica durante su crecimiento. CRISTALIZACIÓN En sistemas no agitados la velocidad de crecimiento está controlada por la difusión y el término l/ks se cancela de la ecuación (12. Por otro lado. una longitud característica del cristal que sea seleccionada mantendrá un proporción constante con las otras dimensiones. con su volumen. es función de algunos parámetros como la agitación y la viscosidad del medio.6). Esta longitud puede ser determinada por varios métodos. (12. mientras que ks no lo es.684 CAPÍTULO 12. por tal motivo la velocidad de crecimiento de un cristal generalmente se asocia a una longitud característica medible.7) donde pc y Vc son la densidad y el volumen de un cristal.9) . Uno de los objetivos de la cristalización es producir cristales de tamaño uniforme. Cuando la velocidad de agitación es alta el término I/&L es el que puede ser despreciado.

de tal manera que: V = ~ o b) En el caso de un cubo de lado L. Determinar la longitud característica y los fatores geométricos de volumen y área para: a) Una esfera.Longitud característica y factores geométricos. FUNDAMENTOS 685 Ejemplo 12..2.2.12. b) Un cubo.6 tv = 1 /= ¿ . A = 6L* V = L3 de tal manera que: <Í>A . Solución: a) El área de la esfera de diámetro d es: A = xd2 el volumen.

13) describen la velocidad de formación y crecimiento de cristales. CRISTALIZACIÓN Se puede combinar la ecuación (12.10) o bien. cuando crecen en una misma solución crecen a una velocidad constante e igual para todos los tamaños de cristal.11) PcJ \¿$Vj\ ' La ecuación (12. respectivamente.686 CAPÍTULO 12.5) con las ecuaciones (12.9) para obtener una expresión de la velocidad del crecimiento de un cristal en función de una longitud característica.13). Es decir este tipo de cristales cumplen con la ecuación (12.13) Las ecuaciones (12. cuando la velocidad es medida en función de una longitud característica.11) puede escribirse en forma simplificada de la siguiente manera: donde kg es la constante cinética de crecimiento de un cristal. . de tal manera que: G = kg(c-cf) (12.8) y (12. (12. Ley Delta L: AL Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un material que son geométricamente similares. Ambos fenómenos dependen de la sobresaturación pero son independiente del tamaño de los cristales ya formados. La velocidad de crecimiento expresada en función de una longitud característica se simboliza como (7.4) y (12. r)(c-c*) UrC/ (12.

12. Este tipo de distribución es necesaria para realizar los balances de masa y energía en los cristalizadores. generalmente se describe por medio de una curva de densidad poblacional como la que se muestra en la Figura 12. Adaptada de: Belter et al. .9. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. La p e n d i e n t e de la curva p e r m i t e obtener la densidad poblacional // q u e es u n a m e d i d a d e l n ú m e r o d e c r i s t a l e s p u r u n i d < t d de v o l u m e n e n un i n t e r v a l o diferencial de l o n g i t u d : es decir.6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales Para caracterizar una operación de cristalización también es necesario describir la distribución del tamaño de los cristales en una suspensión o "magma".9: Curva de densidad poblacional. Un punto sobre la curva relaciona a ¡i con yVt-. donde lt es una longitud dada de cristal y Nr es el número cíe cristales por unidad de volumen de solvente con una longitud entre O y I i.2. FUNDAMENTOS Número Volumen N¡ Tamaño de cristal. Copyright ©1988.2. Todos los derechos 12. reservados. La distribución de tamaños de una población de cristales. 1988. I Figura 12.

el momento fraccionario ¡JL\ es la fracción que representa la suma de las longitudes de los cristales de tamaño entre O y /. </>AJo .»„ (12. de la longitud total de los cristales de una población. Los casos particulares de interés son: Para k = O.18J . f ck * l n(l)dl (12-15) donde n(l] es la densidad poblacional para el tamaño /. el momento fraccionario k de la distribución de tamaós de cristales está dado por: n= fllkn(l)dl Jo o . el momento fraccionario ^ 2 es 1a fracción que representa la suma del área de los cristales de tamaño entre O y /. . mediante los momentos fraccionarios de esta distribución. Para k = 2. el momento fraccionario //o representa la fracción del número de cristales de una población que tiene un tamaño entre O y/. f oo / 2 2 I n(l)dl . De acuerdo a la definición de momentos de una distribución. del área total de una población de cristales.688 CAPÍTULO 12. lim A TV dN CRISTALIZACIÓN (12 14 A/^OA/ di ' ' El uso apropiado de la variable densidad de población n permite estimar importantes características de una población de cristales. *> = r~ \yu/ J0 n l dl fln(l)dl () Para k = 1.

~ roo n 3 . Al final del ciclo. p <t> fll3n(l)dl v . de la.2 Cristalizadores Continuos Existen tres tipos básicos de cristalizadores continuos: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido (también llamado cristalizador con clasificarión de la suspensión o tipo Oslo). La mayoría de los productos biotecnológicos que involucran una cristalización se obtienen en forma intermitente.3.1Q^j (JZ iy 12.3.3 Equipo de Cristalización La selección del tipo de cristalizador está influenciada tanto por el volumen de producción como por el modo de operación seleccionado. el momento fraccionario . ./ 3 — ' c I v Jo f. El ciclo de la cristalización dura entre 2 y 8 horas.3. 12.10). En general los equipos de cristalización pueden operar en dos formas: • Intermitente • Continua./3 es la fracción que representa la masa de los cristales de tamaño entre O y /.'n . 12.. masa total de una población de cristales . EQUIPO DE CRISTALIZACIÓN 689 Para k = 3. el material cristalizado se retira del cristalizador para lavarse y secarse.1 Cristalizadores Intermitentes Los cristalizadores intermitentes son tanques agitados con sistemas de vacío y enfriamiento (Figura 12.12. pc(l)v J0 I n(l)dl (19 .

Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.10: Cristalizador intermitente. .690 CAPÍTULO 12. CRISTALIZACIÓN Condensador barométrico" Vapor Agua Vapor Eyector de dos etapas Alimentación Agitador de propela Válvula de descarga Figura 12. Adaptada de: Bennett. Todos los derechos reservados. 1988. Copyright ©1988.

Los cristales más grandes sedimentan y son retirados por el fondo del cristalizador. m ¡ • > .12. . c u * •: . i l : f a i ü b i ' 1 ! ! conocido r ( M i ) u c n . Cristalizador al Vacío y Circulación Forzada de Magma Í'J c n s t a . ¡¡i--''O < ' < Í ! • • . . Cristalizador-Evaporador con Circulación de Líquido En el cristalizador-evaporador con circulación de líquido (Figura 12.3. a i i / a d o r c o n R e m o c i ó n < ! ' • P r o d ^ c í n M e «"íado v S n s p c n s i i > : ! M c / e j ^ . 1988.11) la sobresaturación se produce por evaporación. Todos los derechos reservados. M . Adaptada de: Bennett. . Copyright ©1988.¡ ¡ h'l ' M S \! ' a. EQ UlPO DE CRISTA LIZA ClON 691 Alimentación Figura 12. i i / a d o r al vacío v c i r c u l a c i ó n (orzada de. La alimentación concentrada y caliente se mezcla con la corriente de recirculación y se bombea a la cámara de evaporación donde el solvente se evapora adiabáticamente con ayuda de un sistema de vacío.n í a e n . El líquido sobresalurado fluye hacia la parte inferior del cristalizador a través de un tubo de bajada y después hacia arriba a través de un lecho fluidizado de cristales que permite una liberación efectiva de la sobresaturación. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. . Los cristales más finos pueden ser retirados por la parte superior para incrementar el tamaño de los cristales.11: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido.a i l ' i í i ' u r a í l ' . i.

mediante un impulsor grande que se mueve a bajas velocidades. Copyright ©1988.13). a partir de la cual los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el tamaño del cristal. apropiado para retener los cristales en crecimiento. La alimentación se mezcla con la corriente de salida del cuerpo principal y se hace pasar por un intercambiador donde se eleva su temperatura entre 2 y 6° C. Cristalizador con Tubo de Tiro y Mampara En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Figura 12. 1988. La suspensión en la superficie del cristalizador libera parte . La alimentación mezclada con la corriente de finos se hace pasar por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del cristalizador.692 CAPÍTULO 12. No condontabtos CRISTALIZACIÓN Enfrxted* V*p<K I Intercambiado? Figura 12. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.del solvente produciéndose la sobresaturación. los cristales de mayor tamaño que sedimentan en el fondo del cristalizador son impulsados hacia la región superior donde se efectúa la evaporación y se origina la sobresaturación. Todos los derechos reservados.12: Cristalizador al vacío y circulación forzada de magma . . Una mampara externa al tubo de tiro permite formar una zona de sedimentación externa. Adaptada de: Bennett.

en aplicaciones a situaciones de importancia i n d u s t r i a l . con las variables de operación y la configuración de los cristalizadores. existen aún varias limitaciones debido a lo complejo que resulta describir de manera racional la forma como se relacionan los fenómenos de nucleación y crecimiento de cristales. Todos los derechos reservados. Copyright ©1988.4. Sin embargo. en el diseño de tres sistemas de interés en c r i s t a l i z a c i ó n : * (Yista.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara. sección se describe como se c o m b i n a n los balances poblacionales de cristales. DISEÑO DE CIUSTALIZAUÜItM Figura 12. diseño y optimización.12. Adaptada de: Bennett. 1988. Reproducida con el permiso de Me Gravv Hill Inc. los balances de masa y los balances de energía.bzadur c . 12. En esta.4 Diseño de Cristalizadores Actualmente se han logrado avances importantes en la modelación de cristalizadores para su análisis.

4. Se supone además en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeración .14 muestra un esquema de un cristalizador continuo perfectamente agitado operando en modo "cristalización por enfriamiento".694 CAPÍTULO 12. Balance Poblacional Los balances poblacionales de cristales consideran que el número de cristales es una cantidad balanceable.1 Cristalizador Continuo La Figura 12. En estos balances se supone que los cristales son lo suficientemente numerosos y pequeños. CRISTALIZACIÓN Q •*• Figura 12. Como el cristalizador está perfectamente agitado el flujo volumétrico de solvente a la salida F también está caracterizado por y y n. El cristalizador contiene un volumen V de solvente. con una concentración de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribución de tamaño de cristales caracterizada como n. La distribución del tamaño de los cristales a la entrada está dada por n^. El cristalizador es alimentado continuamente con un flujo volumétrico de solvente F¿ que presenta una concentración y A de soluto disuelto por volumen de solvente. 12.14: Esquema de un cristalizador continuo. de tal manera que su distribución de tamaño puede considerarse una función continua de la longitud característica o tamaño del cristal.

20) ha sido resuelta para un caso p a r t i c u l a r de cristalizador continuo bien agitado llamado: Remoción de Producto Mezclado .20) La ecuación anterior ha sido resuelta para algunos casos de interés particular como el que se describe a continuación. DISEÑO DE CRISTALIZADORES (>95 de cristales. que está sujeto a las siguientes restricciones: .4. (RPMSM).] menos [La. velocidad de salida de cristales de tamaño en el rango di del cristalizador..Suspensión Mezclada (RPMSM). al interior del cristalizador.] más [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador entran al rango de tamaño di.Suspensión Mezclada. puede expresarse en palabras como: [La variación con el tiempo. Cristalizador Continuo con Remoción de Producto Mezclado .12.V^^- (12. del número de cristales de tamaño en el rango di.} lo cual se expresa matemáticamente como: j-t(Vn) = FAnA -Fu.El cristalizador opera en estado estacionario.} es igual a [La velocidad de e n t r a d a de cristales de t a m a ñ o en el rango di en la a l i m e n t ación. por lo que: .La ecuación (12. El balance poblacional de cristales en el cristalizador continuo considerando sólo los cristales en un rango de tamaño di — l¿ — / i .} menos [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador salen del rango de tamaño di.

21) .25) puede ser expresada como: (12.696 CAPÍTULO 12.(12.25) como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador está dado por: r = ¥r entonces la ecuación (12.El volumen es constante.El cristalizador está perfectamente agitado y no existen pérdidas de solvente. .26) al r Cuando / es muy pequeña (tiende a cero) la densidad poblacional n(0) se deriva preferentemente de la nucleación de nuevos cristales. .No existe variación del número de cristales por aglomeración o rompimiento.24) ' . es decir dG aT = ° (12. Si estas restricciones se aplican la ecuación (12.24) se transforma en : 0 (1.23) en base a lo anterior.27) . entonces. CRISTALIZACIÓN nA=0 (12.= O (12.20) con las ecuaciones (12. el último término de la ecuación (12. G^ + U.El crecimiento de cristales al interior del cristalizador sigue la ley de A/.20) puede expresarse de la siguiente manera: d(nG) dG ^dn fin -~~ = n-¿T + G— = G— oí oí oí oí (12.22) .

31) De acuerdo con la ecuación anterior los datos experimentales de Inra vs / ajustados a una linea recta.30) puede ser utilizada para obtener velocidades de nucleación y crecimiento de cristales. presentarán una pendiente m = (—l/Gr) y una ordenada en el origen igual a \n(B°/G). la ecuación (12. La ordenada en el origen conjuntamente con el valor de G permiten determinar B°.Diseño de cristalizadores RPMSM. .28) puede utilizarse como condición de frontera para la integración de la.28) 71 La ecuación (12.12.29) n 9 Ifh ^i^.30) puede ser utilizada para: . „ — /"» "xp i/ ^j _ ~vri ii (12.30) puede rearreglarse para ser expresarse como: (12. Existen varias técnicas para obtener la distribución de tamaño de partículas de una población. El tiempo de residencia en el cristalizador y la pendiente permiten determinar G. Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM. mediante datos de densidad poblacional obtenidos en un cristalizador RPMSM. Para tal efecto. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 697 áE fío n(0) = n° = -j|.La ecuación (12.oui Como todo modelo la ecuación (12. Los procedimientos para determinar n a partir de los datos que se generan con las técnicas. ecuación (12. Dos técnicas son de particular interés: .4.= — (12.) \GT ) o bien. obteniéndose la ecuación: n = n°exp( ~. varía con cada una de ellas.27)..Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM.

El analizador electrónico de partículas.Los analizadores de mallas consisten en un conjunto de cilindros cortos sin tapa superior y con una malla en el fondo.El analizador electrónico de partículas. dispersión de la luz. La dimensión característica que se le asigna a cada partícula es la correspondiente al diámetro de una esfera equivalente al volumen medido. Analizador de mallas. CRISTALIZACIÓN . bloqueo de luz o conductividad eléctrica. arreglados verticalmente de mayor a menor tamaño de malla. . Los cristales del magma bajo estudio requieren cierto tratamiento previo: deben ser filtrados. : Fracción de la masa total de cristales retenida en una malla.14) mediante la siguiente expresión: n= A//9C<M3 (\¿. conforme la población de partículas fluye por el sensor.. el sistema se somete a movimiento mecánico. Mediante estas determinaciones es posible obtener densidades poblacionales en forma directa o indirecta. dependiendo del equipo. para determinar el tamaño de las mismas mide el cambio de alguna propiedad como difracción de la luz. secados y durante su manejo debe evitarse su rompimiento. El cambio de tales propiedades es función del volumen de la partícula. lo cual puede realizarse de acuerdo a la ecuación (12. Funcionan en seco o en húmedo y proporcionan una distribución acumulativa de peso. Una vez que se ha cribado la muestra es necesario determinar n a partir de los datos de la masa de cristales acumulada en cada malla.6¿) donde: T'.Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión).. de tal manera que se genere un fenómeno de cribado.698 CAPÍTULO 12.El analizador de malla. Analizador electrónico de partículas. . lavados. de tal manera que éste es el parámetro que se correlaciona con las mediciones del instrumento. Una vez que se coloca la muestra en el cilindro superior.

Análisis de la cristalización de urea.31) es necesario generar una gráfica de Inn vs /. Se desea calcular la velocidad de nucleación y crecimiento en una cristalización a partir de una muestra de cristales de urea obtenida en un cristalizador RPMSM. Ejemplo 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES /: Longitud de la abertura de la malla. en la columna (2) el porcentaje de masa acumulada en la malla respectiva. para lo cual es necesario utilizar la ecuación (12. Entre la malla 14 y la malla 20 los cálculos a realizar son: A/ = 1.335 g/cm3 y el tiempo de residencia de 3.4.3._ 1. la densidad de la urea es de 1.841 mm 2 / = 1. donde la masa de cristales en la suspensión es de 450 g/dm3. en la columna (3) la fracción masa acumulada entre mallas y en la columna (4) la abertura de la malla en mm.1 se presentan los datos del análisis de mallas practicado a la muestra: en la columna (1) el tamaño nominal de la malla.12.38 h. 699 A/: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales.841 mm A/ = 0. El denominador contempla la masa de un cristal de tamaño promedio / y el intervalo A/.32) representa la masa de cristales de tamaño promedio /.349 mm .Factor geométrico de volumen.32) se obtiene: . En la Tabla 12. Solución: De acuerdo con la ecuación (12..19 mm +0. pc\ Densidad de los cristales. El numerador de la ecuación (12. <f)v'.19 mm-0.016 mm de tal manera que mediante la ecuación (12.32). El factor geométrico de volumen <j>v puede considerarse igual a la unidad.

07 0.4 0. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.795.000 36.765 .508 0.000 10.123 0.349 mm)(1.087 24.6 0.4 1.242 0.61 Los cálculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.595 0.044) (0.180 0.359 0.841 0.75 17.566.246 40.05 mm: ordenanda en el origen = 19. (6).210 0. 1973. masa AW Tamaño abertura malla (mm) 1.2 0.335 ^)(1)(1.581 mm — dm3 ) = 10. Copyright ©1973.200 18.044 20 28 35 48 65 100 4.349 0.718 0.703.4 0. Los parámetros de la recta ajustada son: Pendiente = —9.15.016 mm)' Vloo0mm3 número de cristales = 40.175 0. (450 ¿:r)(0.155 15.016 0.19 15.700 CAPÍTULO 12.3.420 0. (7) y (8).149 0.865.070 3.061 Fondo 2. Malla (1) 14 (2) (3) (4) (5) (6) %de masa acumulada Frac.42 18.074 7.144 14.581 533.5 Fuente: Bennett. Los datos de In n vs / se presentan en la forma gráfica en la Figura 12.1: Datos y cálculos del Ejemplo 12.254 0.316 31.61 13. CRISTALIZACIÓN Tabla 12. Todos los derechos reservados.190 Longitud promedio 7 (mm) Incremento A/ (mm) (?) (8) " n Inn 0.000 70.09 16.297 0.5 0.025 0.1 en las columnas (5).

o Figura 12.4 I (mm) 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 701 222018 ln(n) 16 14 12 10 0.0 0.8 i.2 0.4.15: Cristalización de urea. .6 0.12.

_ _ 1 m.28).838 x 108 númer° dí C"*3 'eS mm — dm y la velocidad de nucleación es: . CRISTALIZACIÓN Con estos datos es posible calcular la velocidad de crecimiento y nucleación de los cristales.0327 k / = l. Combinando estudios de laboratorio y estudios piloto. a) Velocidad de crecimiento. se obtuvieron valores de \& velocidad de crecimiento y nucleación mediante análisis con mallas a diferentes tiempos de residencia. ta „• = 3. B° = (3.Orden de nucleación.4. B° = n°G como: lnn° = 19.255xlOTnii"ter° J Ejemplo 12.31).702 CAPÍTULO 12. De acuerdo a la ecuación (12..765 entonces. manteniendo la masa total .38 h) \ ' b) Velocidad de nucleación. \ o. De acuerdo a la ecuación (12.3 ¿ —k .838x10» mm — c/77?.-de tal manera que: G = --_ ' (3.

1987.092 0.4. La densidad de los cristales es de 1.260 0.13).84 g/cm3. B° = kn(c-c*y combinando estas expresiones se obtiene B° = kN (G)' G = kg(c-c*) (12.23 g/cm3 y el factor geométrico de volumen <f>y = 1.042 0. Considerando los datos anteriores.960 6. Corrida T (min) 1 2 3 0 703 r< ( M™ \ ImtJ DO / num.4) y (12.33) donde: k /ir N La expresión obtenida en forma logarítmica se expresa como: . \ ^ ^ cm3 — min i 315 630 1.993 9.2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. de cristales por unidad de volumen constante e igual a 0. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 12. Todos los derechos reservados.729 Fuente: Moyers y Rousseau. Copyright ©1987. DISEÑO DE CRISTALIZADORES Tabla 12.019 13.12:4. derivar una expresión de la variación de la velocidad de nucleación con la velocidad de crecimiento. Solución: De acuerdo con las ecuaciones (12.2: Datos del Ejemplo 12.

0 -2.6 -2.704 CAPÍTULO 12. .4In(B') Q3_ 9. CRISTALIZACIÓN 9.4.16: Orden de nucleación del Ejemplo 12. de la cual se obtiene: 0.2 ln(G) -3. ln B° — ln kjy -f i ln G de tal manera que los datos de ln B° vs ln G se pueden ajustar a una recta de pendiente i y ordenada en el origen ln &/vEn la Figura 12.8-4 -3.19.98.16 se presenta la gráfica correspondiente a los datos de la Tabla 12.8 -2.4 Figura 12.8 -3.69.66 = de tal manera que.08.2.29.4 -3.59.46 10.6 -3.

Diseño de cristalizadores RPMSM.En un RPMSM el tiempo de residencia r es constante y la relación B°¡G también es constante. Contando con la expresión de la densidad poblacional y en conjunción con las expresiones de momentos.29) y de los parámetros G y B° que se obtienen mediante experimentación.16) y la ecuación (12.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de nucleación respecto a G (o a la sobresaturación).4. A continuación se ejemplifica lo anterior mediante el cálculo del momento 0.29) está completamente determinada a las condiciones de operación dadas. El parámetro &/v es necesario determinarlo en una corrida a nivel piloto o a escala real. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 705 El valor de 0. Esto es característico de moléculas grandes e indica que el mecanismo de nucleación no es muy sensible a la sobresaturación y que la nucleación secundaria es la dominante. ya que es dependiente de la escala. de tal manera que la densidad poblacional dada por la ecuación (12.33). 2 y 3 de la población de cristales. 1. Dado que i es específico del sistema se supone que este valor no cambia con la escala y puede determinarse mediante experimentos de laboratorio (cristalizador de 4 a 8 dm3). De acuerdo a la ecuación (12.12. Varias características de diseño de un cristalizador se derivan del uso de la distribución poblacional dada por la ecuación (12.29) el número total de cristales por unidad de volumen está dado por la expresión: NT = I n° exp ( — ) di Li T . se pueden determinan los momentos O. Momento Cero: Fracción del número total de cristales de tamaño entre O y /.. A continuación se presentan algunas de ellas: 1) Momentos. Con estos valores y la i determinada en el laboratorio se obtiene UN mediante la ecuación (12. Esto se realiza efectuando un análisis de mallas a la escala de interés para obtener G y B°.

3 se presentan las expresiones de los momentos restantes./ Ni = Ni = n°G> de tal manera que la fracción del total de la población es: (12. NT=n°Gr CRISTALIZACIÓN (12.34) El número de cristales por unidad de volumen de tamaño entre O y / es: .706 CAPÍTULO 12. La longitud de cristal a la cual la densidad de la masa de cristales es máxima se llama tamaño de cristal dominante //> La masa de cristales por unidad de volumen de solvente en un rango de tamaño de los cristales está dada por: .36) — 1 — exp(—X) donde X es una longitud adimensional dada por: X = ¿ Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los otros momentos. En la Tabla 12. 2) Tamaño de cristal dominante.35) fracción J fracción = n°Gr (12. la cual puede resolverse para obtener.

40) e igualando a O se obtiene: ID (12.( l + X)e. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 707 Tabla 12.12.O + X + ^ + p^Je-* cristales dM = pc<j>vl3ndl (12.4.40) derivando con respecto a / la ecuación (12.39) conducen a: dW di / (12.29) y la (12. Las ecuaciones (12.3 la masa total de cristal por unidad de volumen es: MT — 6(j>vpcn°(GT^ combinando las dos expresiones anteriores se tiene: (12.39) donde W es la fracción masa de cristales.A 1 longitud de n°(Gr}¿ los cristales l-(l + X+¿X')e-A 2 área de los 2^n°(Gr) 3 cristales masa de los ^vpcn°(GrY 3 l .41) .38) dW di n 6(<7r) n< 4 (12.3: Momentos de un cristalizador RPMSM (X = l/Gr).37) de la Tabla 12. Momento I Significado I Total I Fracción \-e~A número de n°Gr 0 cristales l .

Este procedimiento se muestra en el Ejemplo 12. Solución: De acuerdo a la Tabla 12. 4) Densidad del magma.708 CAPÍTULO 12.. (Datos del Ejemplo 12.3). La masa de cristales por unidad de volumen de solvente MT es función de los parámetros cinéticos n° y G (Tabla 12. y además puede ser medida independientemente de la distribución de tamaño de cristales. La densidad de los cristales es de 1. En un cristalizador experimental la densidad medida de cristales en el magma es de 450 g/dm3.335 g/cm3 y el tiempo de residencia es de 3.Evaluación de G y B°.255 x 107 número/dm? — h. El coeficiente de variación es una medida de la dispersión de la densidad de masa alrededor del valor ID y está dado por: En el caso de la distribución para el RPMSM este valor es aproximadamente del 50%. 3) Coeficiente de variación. Debido a lo anterior MT puede ser utilizada para corroborar velocidades de nucleación y crecimiento estimadas mediante análisis de mallas. Tal dispersión es muy amplia para ser aceptable para algunos productos cristalinos como el azúcar común.5.3). CRISTALIZACIÓN Este tamaño característico de los cristales frecuentemente es utilizado como base para el diseño de cristalizadores. Ejemplo 12. MT = 6 .3. Comparar la densidad experimental del magma con la estimada a partir del análisis de mallas.0327 mm/h y B° = 1.38 h.5. Los resultados de los análisis de mallas generan los valores de G = 0.

0327 ^p x3.12. .38 h\ = 458 9 MT dm3 El valor experimental de MT = 450 g/dm3 y el calculado de 458 g/dm3 sugieren consistencia de los datos. Ejemplo 12.335 — x ——.. c) La fracción del número de cristales totales con un tamaño igual o menor que el tamaño dominante. Un cristalizador RPMSM de 100 dm3 es alimentado a 50 dm3/h con una solución sobresaturada de sulfato de amonio.769 g/cm3 y de acuerdo a su forma <f>y = 1. Los cristales presentan una densidad pc de 1. éstos pueden ser utilizados para caracterizar una cristalización.88 x 107 número/'dm3 — h y la velocidad de crecimiento G es 0. MT a cm3 1. DISEÑO DE CRISTALIZADORES o bien.6.x cm3 103 mm3 0. Los estudios cinéticos indican que la velocidad de nucleación es de de 1. La suspensión de cristales es retirada a un flujo de 50 dm3/h.Cristalización de sulfato de amonio. El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parámetros cinéticos.255 x 107 = 6 x 1 x 1. 709 sustituyendo valores.056 mm/h. b) El número de cristales con un tamaño menor o igual al tamaño dominante. Estimar : a) El tamaño de cristal dominante.4.0327 ^ n 4 mm \ (0.

.056 (o.h 100 dm3 \ .336 mm x ' 10 ° dm3 50 ^r b) El número de cristales TV de tamaño igual o menor a ID es: o 6¿en.710 CAPÍTULO 12. Solución: a) De acuerdo a la ecuación (12. e) Predecir la fracción masa de cristales por tamaño (utilizar tamaños de mallas estándares). CRISTALIZACIÓN d) La densidad de la suspensión .e~ 3 50 ^ I = 3..41) el tamaño de cristal dominante es: ID = 3Gr /„ = (3)10. -f.88 x 10 -— 3 7 dm . / \ (B0T)(\-e~x) N N = nurn 1. N = TV = ndl (total de cristales)(fracción en el rango) de acuerdo a la Tabla 12.57 x 107 ""'" . ID = 0. .3. x -51 . TV = (n0GT)(l-e~x) y X = -^ = 3 con n° = B°/G A^ = sustituyendo valores.

masa retenida = ( 1 -f X -\ 1 1 e~ \ 2 6/ En la Tabla 12. . DISEÑO DE CRISTALIZADORES 711 c) De acuerdo a la Tabla 12.3.3 la fracción de cristales de tamaño en el rango O < / < /D es: (1 . w x fr = (6)(1) (1.(1 -f X + -X2 + -X3)e~x 2 6 de tal manera que la fracción de masa retenida en la malla de tamaño / es / v-2 Y3\ Frac. .769 mm / <7 \ / ero- \ / 1-88 x 107 3^ 1000 mm 3 .4. Las velocidades de crecimiento y nucleación.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva En un cristalizador RPMSM el control de la distribución de tamaño de los cristales es muy limitada.056 = h 50 4s£ MT = 560 -pam-3 e) De acuerdo a la Tabla 12.e~3) = 0.3 la densidad de la suspensión está dada por: MT = 6</>vpcn°(GT)4 sustituyendo valores con n° — B°/G. la fracción masa de cristales con tamaño menor o igual a / es: Fracción masa = 1 . están determinadas por las variables de operación y la geometría del cristalizador. \ X 0. 12.95 d) De acuerdo a la Tabla 12.4.4 se presentan los resultados obtenidos al utilizar la expresión anterior.12.

841 Masa retenida.3 72. lo cual altera el tiempo de residencia de los materiales que salen del cristalizador.33 22.31 3.65 1. los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau.712 CAPÍTULO 12.4: Resultados Ejemplo 12.420 0. . % 5. Esto permite obtener cristales de mayor tamaño. .3 48. El objetivo principal en la remoción de finos es la remoción continua de cristales cuyo tamaño sea menor al especificado.6 95.Modelo de remoción de gruesos. En el caso de un modelo combinado de remoción ideal de finos y gruesos llamado modelo R-Z .595 0. La extracción de líquido consiste en la remoción de líquido libre de cristales del cristalizador. Los efectos de cada dispositivo de remoción pueden ser descritos en términos de la función de densidad poblacional n. Malla Tamaño 20 A Y — l ~ Gr ( mm) 0.51 28 35 48 100 0. La remoción de gruesos consiste en remover los cristales cuyo tamaño sea mayor al especificado. Esto provoca un aumento de la densidad de cristales al interior del cristalizador y un aumento en el tiempo de residencia de éstos.149 5. Después de ser retirados los cristales se redisuelven y alimentan nuevamente al cristalizador. CRISTALIZACIÓN Tabla 12.4 7. 1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes: . La función de estos dispositivos puede visualizarse más fácilmente en términos de los modelos idealizados: .Modelo de extracción de líquido.4 Los cristalizadores continuos pueden hacerse más flexibles mediante el uso de dispositivos para la remoción selectiva de cristales.Modelo de remoción de finos.75 2.6 inciso e).297 0.

12. cuando Z = 1 no existe remoción de gruesos.43) 2..17 en un proceso de cristalización el rendimiento estará dado por: ..Para // < / < l 3. Un cristalizador con remoción tanto de finos como de gruesos.Para/ < //: —. De acuerdo con la Figura 12.. R: índice de remoción de finos. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 1. 4. Z: índice de remoción de gruesos. produce una distribución de cristales con tamaño de cristal dominante alto y bajo coeficiente de variación.4. lc: Tamaño máximo aceptable de los cristales. Cuando R = 1 no existe remoción de finos. 12.1 Gr 713 (12.donde: //: Tamaño mínimo aceptable de los cristales.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos En la optimización de un proceso de separación es necesario calcular la eficiencia en la recuperación de producto como función de las variables de diseño.Para / > lc —•.

5: Flujo másico de solvente en la suspensión de salida. Por lo tanto. CRISTALIZACIÓN Vapor » R» ntación Q <— -? 1 í Suspensión: Solución S Rc Cristales C Figura 12. El flujo de solvente Fs y la fracción masa libre de soluto /?a. [M/M].17: cristalizador continuo general. [M/t]. es la solubilidad del soluto en el solvente a la temperatura de operación. mediante los diferentes modos de operación de los cristalizadores: . Ra: Masa de soluto por masa de solvente en la alimentación. Rse: Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada. el rendimiento puede ser controlado en cierto grado. Rc: Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solución de salida. [M/M]. Otra variable que puede ser controlada en una cristalización es el flujo másico de solvente a la salida 5*. Rend. [M/i\. generalmente se fijan por las operaciones previas a la cristalización. [M/i\.46) Fs: Flujo másico de solvente en la alimentación. La fracción masa libre de soluto del soluto disuelto fíc. mediante un control de la temperatura o cambiando el tipo de solvente.714 CAPÍTULO 12. C: Flujo másico de cristales en la suspensión de salida. [M/Mj. = donde: a ~ S Rc F fí * s1 *-a (12.

Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el rendimiento y las composiciones de las corrientes en función de: las condiciones de entrada.12. así como administrar calor externo para controlar 5. la cantidad de solvente evaporado y las condiciones dentro del cristalizador. La conclusión de la discusión anterior es que para una Fs y Ra dados.4.48) se puede obtener la ecuación para el flujo de solvente. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 715 .47) (12. . el modo de la cristalización determina la recuperación máxima de soluto alcanzable.48) y el balance de solvente por: Fs = FsRse + S (12. De acuerdo a la Figura 12.47) y (12.17 el balance de masa total está dado por: Fs + FsRa = FsRse + 5 + C/+ SRc El balance de soluto está dado por: (12.En el modo de enfriamiento adiabático la cantidad de vapor liberada está fijada por los balances de energía.Cuando la cristalización es sólo por enfriamiento. el único control sobre el rendimiento es la temperatura.En los sistemas con evaporación S disminuye debido a la corriente de vapor producido y el rendimiento se incrementa. .En los sistemas con evaporación o en los sistemas combinados de enfriamiento adiabático con evaporación. de tal manera que ambos efectos contribuyen a incrementar el rendimiento de la operación. . .49) Combinando las ecuaciones (12. y una relación de solubilidad dada. A continuación se presenta este procedimiento. el diseñador puede controlar la presión para fijar la temperatura y por lo tanto /?c.

(1 . C = Fs[Ra . -(l-ft. ñend.51) El rendimiento dado por la ecuación (12.48) y (12.Cristalización por Enfriamiento Indirecto En este caso no existe evaporación de solvente por lo que: fl« = 0 y las ecuaciones (12..54) se obtiene: i + fi.52).56) .R~ Las ecuaciones (12.53) y (12.49) se puede obtener una ecuación para el flujo másico de cristales.)*.53) y (12. = ft. . CRISTALIZACIÓN S= 1 -\.46) puede también ser expresado como: C Rend.ric Combinando las ecuaciones (12.51) y (12.52) sustituyendo la ecuación (12.55) se simplifican para los modos de operación particulares que se describen a continuación.55) se expresan como: (12. Ra (12 53) La ecuación (12. = -—— rafia (12.51) en la (12.53) permite calcular el rendimiento mediante los datos de diseño Ra.716 CAPÍTULO 12. 1. La fracción masa de cristales en la suspensión de salida ST es: combinando (12.Rae)Rc] (12. de equilibrio Rc y de operación Rae.

55) se expresan como: Rend.57) (1258) 2.53) y (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 717 Rend.Cristalización Sólo por Evaporación En este caso la fracción masa de soluto en la alimentación es igual a la fracción masa en la solución de salida.] más [Calor liberado por cristalización por "salting out"] • y mediante la ecuación: FsRse\v = Fs(Ra+FsRcRseX} (12.Cristalización por Evaporación Adiabática sin Reflujo En este caso a diferencia de los dos casos anteriores.62) . además de los balances de masa se requiere efectuar un balance de energía para determinar la cantidad de solvente evaporado en el cristalizador.] más [Entrada convectiva de calor.60) (12. = Rse (12.. = RaD Rc Ra (12.12A.] es igual a \ [El calor liberado por la cristalización de enfriamiento.59) ST = -R"Rse p 1 + Ra — Rse (12. Este balance puede ser expresado en palabras como: [La velocidad de salida de calor por evaporación del solvente.61) 3.. Ra = Rc y las ecuaciones (12.

Se desea analizar la variación con la presión de operación del rendimiento y la concentración de sólidos en la corriente de salida de un cristalizador.. Los sistemas en los cuales ésto ocurre se llaman sistema tipo II o de rápido crecimiento. [cal/M].7. CRISTALIZACIÓN AT: Temperatura de alimentación menos temperatura del cristalizador.Re) + CPAT(l + Ra) "~ A.5 se muestran los datos de equilibrio para el sistema a cuatro presiones absolutas diferentes. Cp: Capacidad calorífica de la alimentación. (2) y (3) de la Tabla 12. de tal manera que las ecuaciones de enfriamiento adiabático son: _ \¡(Ra . \v: Calor de evaporación del solvente.(1 .65) Las ecuaciones anteriores pueden ser resueltas si se conoce la concentración de soluto disuelto en la suspensión de salida Rc. [cal/M]. [cal/M — grado]. .Rsf)Rc •tta (12 63) ' ST = "~ 1 + Hc — tiae " í ° c (12. en oposición a los sistemas tipo I donde la concentración de salida Rc es mayor que la de saturación debido al lento crecimiento en estos sistemas. [grados]. En las columnas (1).A/ + Rc Ra . A/: Calor de cristalización del soluto. Generalmente es aceptable suponer que esta concentración corresponde a la de saturación.718 donde: CAPÍTULO 12. El calor de .379 g de soluto por g de solvente y se alimenta a una temperatura de \00UC.Balances de masa y energía en un cristalizador adiabático. La solución alimentada al cristalizador contiene 0. Ejemplo 12.

944 0.028 0.502 0.63) y aparece en la columna (4) de la Tabla 12.65). Solución: Considerando un sistema de cristalización tipo II. el calor de fusión del cristal es de 33. g solv.347 0. el flujo másico de evaporación adiabática de solvente puede calcularse utilizando la ecuación (12. Todos los derechos reservados. 1987. Copyright ©1987. evap.5.890 0. Balances y Cinética En el diseño de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de la cinética de la cristalización con los balances de masa y energía.374 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 719 Tabla 12.969 0.556 cal/g—°C.072 0.4. Presión mm de Hg (1) 160 135 90 60 (2) T °C 65 60 50 40 (3) RC g soluto g solvente (4) Rse g solv.419 0.582 0. (5) Rend. Contando con la cinética de la cristalización es posible evaluar la sensibilidad de . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Estos valores aparecen en las columnas (5) y (6) de la Tabla 12.316 0. Calcular la fracción masa de cristales a la salida del cristalizador y el rendimiento bajo cada una de las presiones de operación.3 cal/g y la capacidad calorífica de la solución de 0.7.453 Fuente: Moyers y Rousseau. g cristales g soluto alim.64) y (12.400 0.043 0. El uso de la cinética de la cristalización para el análisis y diseño provee una nueva dimensión a las técnicas de diseño disponible.5. (6) ST g cristales g totales 0.835 0. alim. respectivamente.100 0.5: Datos y solución del Ejemplo 12. Tanto la fracción masa de cristales como el rendimiento aumentan al disminuir la presión de operación. vaporización del solvente es de 100 cal/g.12. El rendimiento y la fracción masa se calculan utilizando las ecuaciones (12.

Operación en serie.Remoción de gruesos. manteniendo constante MT en 0. . . Los criterios de diseño son los siguientes: . Ejemplo 12. . . .699(6') Ü46 num cm — min 3 donde G está en unidades de ¡mi¡rain y k^ en .84 g/cm3 generaron la expresión cinética siguiente: = 42. Se desea diseñar un cristalizador para producir 455 kg/h de un compuesto.720 CAPÍTULO 12.El rendimiento debe ser mayor a 0.95.8.La fracción de masa de cristales ST a la salida debe ser de 0.7.75% de la masa de los cristales debe tener un tamaño mayor a 100 .Densidad de la suspensión.Temperatura. Los datos y condiciones de operación se presentan en la Tabla 12. CRISTALIZACIÓN la distribución de tamaño de cristales a las diferentes parámetros de operación: .Diseño de un cristalizador continuo.Tiempo de residencia. .6 y los datos de equilibrio se presentan en la Tabla 12. Los estudios realizados a nivel laboratorio y a nivel piloto en un cristalizador RPMSM. .Sembrado.5..Remoción de finos.

8.6: Datos y condiciones de operación del Ejemplo 12.3 cal/g. Tabla 12.2. 33. Presión mmHg 160 135 90 60 40 T Cristalizador °C 65 60 50 40 30 masa soluto masa solvente Rc 0. Composición alimentación Temperatura alimentación Calor específico de la suspensión y solución Calor de evaporación del solvente Calor de cristalización Gravedad específica de los cristales Gravedad específica del líquido Factor volumétrico del cristal n O7Q g solvente ' 100°C. 1987.100 0. Todos los derechos reservados. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 721 Tabla 12.23. 1. 0. 1. Todos los derechos reservados.4. Copyright ©1987.043 0.8. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.072 0. Fuente: Moyers y Rousseau.556 cal/g — o. 0.018 Fuente: Moyers y Rousseau. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons . . 100 cal/g.84.028 0. 1987. Copyright ©1987.7: Datos de equilibrio del Ejemplo 12.

a) Balances de masa y energía.58) para enfriamiento indirecto. de tal manera que es factible la cristalización por enfriamiento.8 el modo de cristalización por enfriamiento indirecto. (12. . c) Dimensionamiento y especificación de equipo. En base a lo anterior se selecciona el modo de operación adiabáticc con adición de calor externo para producir una solución más concentrada. se pueden realizar mediante las ecuaciones (12.5. pero ni aún a 40°C (60 mm de Hg) satisface 1? condición de ST — 0.5.63). punto de corte de finos // y proporción de remoción de finos. CRISTALIZACIÓN cm 0 — mtn .722 CAPÍTULO 12. aún cuando se alcanza el rendimiento deseado. b) Estudio cinético: Efecto del tiempo de residencia. Considerando un sistema de cristalización tipo II y dos modos de cristalización: enfriamiento indirecto y enfriamiento adiabático.57) y (12.64) y (12. y mediante las ecuaciones (12. Los resultados correspondientes se presentan en la Tabla 12.0. sobre la distribución de tamaño de cristales. no permite cumplir con la especificación de diseño que establece una fracción masa de cristales a la salida ST = 0.8.7 sugieren una alta sensibilidad de la solubilidad del soluto a la temperatura. Los datos de equilibrio de la Tabla 12.46 Solución: El diseño del cristalizador se efectúa mediante los siguientes pasos: a) Elaboración de los balances de masa y energía.65) para enfriamiento adiabático. los cálculos de rendimiento y fracción masa de los cristales a la salida del cristalizador. El modo de operación de enfriamiento adiabático también alcanza el rendimiento deseado. De acuerdo a los balances de la Tabla 12.

35 0.89 0. ST ST 0.8: Balances de masa y energía para Ejemplo 12.25 0.97 0.93 0. ST = Ra — (1 — Rse)Rc 1 + Ra — Rse sustituyendo valores. Rend.379 .40 0. 0.8.18 puede desarrollarse de la siguiente manera: En la corriente de salida.4.Rse se obtiene: R.22 0.45 0. en un cristalizador con calentamiento externo.5 = 0.f = 0. El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.83 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 723 Tabla 12.74 0.(1 . La presión de operación será entonces de 90 mm de Hg (Tabla 12.26 0.Rse) x 0.7). 0.65 Este resultado indica que es necesario remover el 65% del solvente que entra para cumplir con ST = 0.81 0. Una vez tomada la decisión anterior se puede calcular Rse mediante la ecuación general (12.94 0.043 1 + 0. T°C 65 60 50 40 30 Enfriamiento Indirecto Enfriamiento Adiabático Rend.95 0.20 0.89 0.51 0.379 .5 = masa de cristales masa total .55).98 Considerando la conveniencia de una temperatura de operación intermedia que permita operar el condesador sin el uso de un agente condensante refrigerado.12.5.32 0.24 0. se sugiere emplear una temperatura de operación de 50°C.

18: Diagrama de flujo Ejemplo 12. Q V1 Soí Suspensión • =0. CRISTALIZACIÓN SO'C .724 CAPÍTULO 12.24 SRr = 18.379 g/g -£bRc=0.8.7. 455 O5 — — (5 + Sfíe) + 455 f como fíc = 0.76 FsRa El flujo de solvente evaporado es: .76 kg de soluto disuelto h El balance global de soluto es: FsRa = de tal manera que: 455 ^ + 18.043 g/g k * C =455 Kg/h Figura 12.65 g/g \/ Alimentación 100*C * F.379 ^ kg Fs = 1250 ^ // = 473. R« =0. kg de solvente _ = 436.76 li p s _ _ ~ 0. T= 500C) entonces .043 (Tabla 12.

96 El balance de energía permite calcular el calor adicional necesario.53) es: Rend.x 33.nn -~.818 x 10 cal . DISEÑO DE CRISTALIZADORES 725 FsR*r = 812. = 0.043 7^ x 0.379 Rend.x 100 Cal kg g x 100 °9 -— kg (0. — 0.556 ka x (100 - 0.(1 .0.12.0.3 — x ——kg kg g kg Q = 1.65 .043) l + 0.043 Rend.4.3 g x x cal kg kg 1000 q k 9j x 0.379 .65 -r.379 kq 7 % x 33. = Rg — (1 ~ RSe)Rc RO.65) x 0. 0.5 h El rendimiento de acuerdo a la ecuación general (12.379 . y está dado por: Salida de calor por evaporación del solvente = -f+ + Calor liberado durante la cristalización Entrada de calor por convección Calor liberado por Salíing — Out Calor suministrado y en forma de ecuación como: FsRse\v = FsRcRse\f de tal manera que: Q = 1250^ hr n«* 0.

se pueden combinar las expresiones siguientes: B° = kN(G? MT = *-£ / MT \$< para obtener la siguiente ecuación que permite relacionar r con G.726 CAPÍTULO 12. que de acuerdo al criterio de diseño al menos el 75% de la masa de cristales debe tener un tamaño mayor a 100 /¿m. El tamaño de cristal varía con tiempo de residencia y con el sistema de remoción de gruesos y finos. b) Estudio Cinético.87 -^- . Para explorar la influencia del tiempo de residencia en el tamaño de cristal deseado.5 El problema de diseño restante consiste en determinar como cumplir con la distribución de tamaño de cristales. la masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión está dada por: MT = -nr-rr455 [1250-(1250xO.95 2) ST = 0.84 -^r MT = 0.G5)] 0. De acuerdo a los balances de masa. > 0. CRISTALIZACIÓN Los balances de masa y energía permiten determinar los requerimientos para cumplir con dos criterios de diseño: 1) Rend.

i 3.32 V En la Tabla 12.2.85)2 . el parámetro X y la fracción masa de cristales de longitud menor a 100 /im De acuerdo a estos resultados el tamaño de los cristales disminuye al aumentar el tiempo de residencia.I e ¿ o / Frac.85 + ^-^.328 '"" la longitud adimensional es: A v x (107 min) • ' v = 100 (0.46 3 6x1.85): .í 1 + X -f -X2 + -X3 } e~x \ ¿ Para r = 107 mzn.328 -«?. Una disminución mayor del tiempo de residencia podría evitar .85 1 + 2. masa = 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 727 La fracción masa de cristales menores a / = 100 /¿m (Tabla 12.+ ^^. Esto se debe al mayor impacto de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación que sobre la velocidad de crecimiento." —min/ V ¿íw / G = 0.9 se muestran los resultados del resto de los cálculos del efecto de la variación del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento.699 ( y".3) está dada por: / 1 o 1 -A Y Frac. _.12. masa = 1 Frac. (2.4. masa .x 107 m¿n) V mtn / ^ = 2. Se selecciona el tiempo de residencia de 315 min para continuar el diseño.1 . ) (za«a) ' Vcrn.23 x 42.46 X~r __ (»• 87 mzn x """ / \ 0.85 La fracción de masa menor a 100 f¿m es: (2.

4 3.8 y una // = 60 /¿m son seleccionadas para el diseño final. Asimismo conforme R aumenta a // constante. masa < 100 nm 0.042 0.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fracción masa de cristales menor a 100 um. Una R = 1.094 0.19. la fracción de cristales menor a 100 /¿m disminuye.8 4.32 0. la fracción de cristales menor a 100 //ra también disminuye.7 min 107 315 630 1260 2520 Frac. se debe analizar el impacto del sistema de remoción de finos sobre ese parámetro de diseño. provocando que este sistema de tipo II se conviertiera en un tipo I.2 4. T G um/min 0. Una vez analizado el impacto del tiempo de residencia sobre el tamaño de los cristales. CRISTALIZACIÓN Tabla 12. Es obvio que conforme // aumenta a R constante. La figura también muestra tres combinaciones de // y R que permiten cumplir con la tercer condición de diseño que establece que el 75 % de la fracción masa de cristales tenga una longitud mayor a 100 fim. c) Dimensionamiento.60 0.728 CAPÍTULO 12. La masa de cristales en el interior del cristalizador se puede obtener a partir del flujo y el tiempo de residencia en el cristalizador.8 3.019 0.44 0. Este comportamiento se muestra en la Figura 12.68 el consumo de la sobresaturación.52 0.328 0.009 X Adim 2. de tal manera que: ka 455 -± n Masa de cristales = (315 mm) mi . Existen varias opciones para remoción de finos que se derivan de las posibles combinaciones entre el tamaño de corte lj y el índice de remoción R.

1987. Todos los derechos ¡servados.19: Sensibilidad del tamaño del producto al tamaño de corte e finos. Tomada de: Moyers y Rousseau. eproducida con el permiso de John Wiley and Sons. masa de cristales l< 100 Jim igura 12. Copyright ©1987.. . DISEÑO DE CRISTALIZADORES 729 Tamaño de corte de la trampa de finos _______ 20 Hm 40 ¿im 60 Hm Frac.

3 arn- x ^_ 1000 g = 4786 dm3 455 4786 dm3 kg — 0. cuyos volúmenes de producción son bajos (menores a 50 tons/dia) y la alimentación disponible es intermitente. 'j f i 2388.75 kg La masa de la suspensión en el interior del cristalizador es: . la forma de generar la sobresaturación o modo de operación determina en gran medida el rendimiento y la distribución del tamaño de cristales en la operación intermitente.75 kg r 0. 777.4. la operación intermitente tiene una mayor . La Figura 12.5 4a kg 4.095 Productividad — Productividad El área de la sección transversal del cristalizador deberá considerar el tamaño de corte de finos que se desea separar.388.730 CAPÍTULO 12. Sin embargo. .4 Cristalizadores Intermitentes La cristalización intermitente es muy utilizada en la fase de acabado de la producción de antibióticos. ácido cítrico y varios otros productos de peso molecular intermedio.5 kg susp..20 muestra el diseño conceptual del cristalizador. Masa de suspensión = Masa de suspensión = El volumen de la suspensión es: (2388. 12. CRISTALIZACIÓN Masa de cristales — 2.75 kg 0. Al igual que en la cristalizcición continua.x l^fni 5 cm. — 1 ZO _9_ v 1000 cm3 ' cm3 X dm3 v kg * 1000 g + 2388.84 -*.75 kg) * s.

'2. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 731 Vapor Flecha Cuerpo del cristalizador Tubo de tiro Mampara Tubo de circulación Alimentación Condensado Producto Condensado Figura 12. reservados.20: Diseño conceptual que satisface las condiciones de diseño del Ejemplo 12. Todos los derechos .8.4. Copyright ©1987. 1987. Tomada de: Moyers y Rousseau. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.

Debido a lo anterior. . existe un creciente interés en los experimentos intermitentes dado que se puede obtener más información en un solo experimento y de 1 cierta forma son más fáciles que los RPMSM. El desarrollo de modelos y el análisis de los cristalizadores intermitentes está limitado por la disponibilidad de datos cinéticos de velocidad de crecimiento de cristales y de de nucleación. el diseño de operaciones de cristalización intermitente requiere la generación de información experimental para determinar aspectos como: .Rendimiento potencial de la operación. Para obtener la información relativa a la nucleación. y mediante el control de las condiciones de mezclado y enfriamiento. Esto se evita mediante el sembrado de cristales. Los experimentos con cristalizadores intermitentes sembrados permiten generar expresiones cinéticas de crecimiento cuando se suprime la nucleación. . . Cuando ésta se genera por enfriamiento existen varias formas de realizarlo: .Enfriamiento con una fuente externa de temperatura constante.732 CAPÍTULO 12.Curva de solubilidacl-temperatura. CRISTALIZACIÓN dependencia de la forma como se genera la sobresaturación. . .Enfriamiento a sobresaturación constante. se requiere efectuar mediciones de distribución de tamaño.Enfriamiento a velocidad de transferencia de calor constante.Pureza de los cristales. Por otro lado. .Enfriamiento a velocidad controlada para optimizar el tamaño de cristal y la pureza.Permeabilidad del lecho de cristales. En términos generales los métodos de diseño y análisis de cristalizadores intermitentes están menos desarrollados que los de los cristalizadores continuos. \ > Uno de los principales problemas de los cristalizadores intermitentes es mantener la distribución de tamaño de cristales entre una corrida y otra. .

12.Distribución de tamaño de cristales. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 733 . son función de la sobresaturación que es variable en el proceso intermitente.4. Conforme aumenta el área de los cristales la velocidad de generación de sobresaturación por enfriamiento también se aumenta. Una de las desventajas de la cristalización intermitente sin control de la velocidad de enfriamiento. como la velocidad de nucleación #°. En los cristalizadores con control de temperatura se ha utilizado un enfoque empírico para determinar la curva de enfriamiento del sistema (la variación de la temperatura con el tiempo dentro del cristalizador) debido a que es difícil establecer la cinética del sistema. Esto se debe a que las velocidades de enfriamiento son más altas al inicio del proceso. Esto puede ser minimizado mediante un control de temperatura que permita una velocidad de enfriamiento variable. Por esta razón el enfoque de diseño utilizado en los cristalizadores continuos es poco útil para los cristalizadores intermitentes. inicialmente la generación de sobresaturación por enfriamiento es lenta debido a que los cristales son aún pequeños. generando un exceso de nucleación con la consecuente disminución de tamaño de cristal dominante. la temperatura final o el tiempo de operación. consiste en que este modo de operación produce generalmente un producto de baja pureza y baja uniformidad. Cristalización Intermitente: Enfriamiento Controlado y Nucleación Suprimida Los balances poblacionales para cristalizadores intermitentes son más complejos debido a que tanto la velocidad de crecimiento de los cristales 6?. En enfoque emírico se supone que al inicio de la cristalización tocios los cristales tienen el mismo tamaño y se busca determinar leí dinámica . En la cristalización intermitente con enfriamiento controlado. Esta curva es empleada para diseñar el sistema de control. así como efectos de incrustamiento sobre las paredes de enfriamiento que reducen la transferencia de calor. disminuyendo continuamente desde su valor inicial hasta su valor al final del proceso. mediante experimentos donde se varía: la concentración inicial de soluto.

por lo tanto.Mas<?i total de los cristales sembrados. * ( ÁT fjf f> fi \ ———: I cristal/ (12. Esto requiere que los cristales sean sembrados para iniciar el crecimiento. variable que depende de • la velocidad de crecimiento.734 CAPÍTULO 12. En este caso la variación de la masa de soluto de sobresaturación y el consumo de masa por nucleación pueden ser despreciados. Con este propósito es necesario realizar un balance de la cantidad de soluto de sobresaturación dentro del cristalizador el cual puede ser descrito en palabras como: [La variación de la masa de soluto de sobresaturación] es igual a [La variación de la masa de soluto de sobresaturación por efecto de la temperatura] más [La velocidad de consumo de soluto por crecimiento del cristal] más [La velocidad de consumo de soluto por nucleación] Las cristalizaciones intermitentes generalmente se desarrollan en la región metaestable para controlar el tamaño del cristal minimizando la nucleación.5) y (12.68) = ÍJ-Mls + Gtf donde: MS.67) (12. ls: Longitud de los cristales sembrados. Este balance puede ser expresado con ayuda de las ecuaciones (12.6) de la siguiente forma: ^ donde ÁT es el área de todos los cristales. . CRISTALIZACIÓN que debe seguir la temperatura para mantener una velocidad de crecimiento constante. simplificándose el balance anterior a los dos primeros términos del lado derecho.

69) en la ecuación (12.70) (12.12. es decir.72) puede ser integrada para obtener: M¿ V de* dT Gt Gt (12.11). Esta expresión puede simplificarse si se considera un intervalo corto de temperatura donde la variación de la solubilidad sea constante.72) dT La ecuación anterior permite obtener la variación de temperatura para mantener una velocidad de crecimiento de cristales constante.70) y (12. La ecuación anterior puede expresarse adimensionalmente utilizando la expresión de la longitud final del cristal.4. (12.66 ) se obtiene : de' dado que c* es función de la temperatura.71). /~i _ 1 — ~dt (c-c*) (12. + Gtj (12.74) donde tf e§ el tiempo necesario para alcanzar l¡. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 735 en la ecuación (12.71) dt (12.69) sustituyendo las ecuaciones (12. A partir de la ecuación (12. en este caso la ecuación (12. de* _ de* dT ~dt ~ ~dT~dt combinando (12.73) donde T0 es la temperatura a la cual los cristales inician su crecimiento.68) y (12. lf = l.74) se define un tiempo adimensional T dado por: .68) G es la velocidad lineal de crecimiento del cristal dada por la ecuación (12.

M.81 y la ecuación (12. (12.75) y se define una longitud adimensional 77 que caracteriza las veces que se incrementa la longitud del cristal respecto a su tamaño inicial dada por: I If-ls 1.79) se puede aproximar a: .77) de acuerdo a la ecuación (12.78) se obtiene la expresión adimensional: T —-lo T J- 1 + r / r +-(7?r) 2 (12.76) como: 1 Mf T/3 (12.76) sustituyendo (12.77) la masa final de los cristales menos la masa sembrada de los cristales está dada por: (12.76) en (12. Gt CRISTALIZACIÓN T = (12. de acuerdo a la ecuacio (12. T = Tn- V de* dT (12.80 la cual puede ser simplificada para ls bajos.75) y (12.78) combinando las expresiones (12.73) se obtiene: Mí. (12.79) suponiendo que la densidad de cristales pc permanece constante se puede derivar la siguiente expresión: M.77) y (12.736 CAPÍTULO 12.

12. Ejemplo 12.82). Estos criterios plantean mantener constante entre las escalas algunos parámetros como: .9. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 737 fc^r T —T r3 (12 82) - que es la expresión de la curva de enfriamiento que permite mantener un crecimiento constante y evitar la nucleación inicial excesiva. .La agitación. varios criterios de escalamiento se fundamentan en los aspectos de mezclado.La velocidad mínima del agitador que permita mantener la suspensión. . de la agitación y de la geometría del cristalizador.La velocidad de punta del agitador. Dado que generalmente el mecanismo de nucleación controlante a escala industrial es la nucleación secundaria. Escalamiento de Cristalizadores Intermitentes Para realizar el escalamiento de cristalizadores intermitentes se requiere desarrollar una expresión de la velocidad de nucleación como función de la velocidad de enfriamiento. Obtener la curva de enfriamiento para ácido succínico en el intervalo de enfriamiento de 30 a 20°(7 y un tiempo de operación de 120 min.Cristalización intermitente de ácido succínico. Solución: Utilizando la ecuación (12. .4..La potencia por unidad de volumen. .

21 se presenta la curva de enfriamiento que genera la expresión anterior .738 CAPÍTULO 12. Existen varias formas para generar la sobre- . Inicialmente la temperatura permanece constante luego baja abruptamente. que permite purificar un soluto mediante la formación de cristales.21: Curva de enfriamiento del Ejemplo 12. 12. La fuerza impulsora de la cristalización es la sobresaturación de la solución. Este comportamiento es característico de de la cristalización intermitente con control de temperatura (Qiu y Rasmuson.5 Sumario La cristalización es una operación de acabado ampliamente utilizada a nivel industrial. CRISTALIZACIÓN T-C 26- 20 40 60 80 Figura 12. 1991).9. 30 -T 30-20 T En la Figura 12.

El diseño de los cristalizadores continuos está apoyado por los balances de masa. Existen varios tipos de cristalizadores que pueden ser operados ya sea en forma continua o intermitente. energía y poblacionales que se realizan en este tipo de equipos. El diseño de los cristalizadores intermitentes se ha desarrollado en forma más empírica que el de los continuos. La sobresaturación que se logra en el cristalizador es la fuerza impulsora tanto de la nucleación (origen de los cristales) como de su crecimiento. . SUMARIO 739 saturación en la solución de interés.12.5. las cuales se basan ya sea en el enfriamiento de la solución o en su calentamiento al vacío. Ambos fenómenos se asocian con la cinética de la cristalización.

12 39. d) La velocidad de nucleación de cristales. c) La velocidad de crecimiento de cristales. 1991) en un cristalizador RPMSM de forma cilindrica de 15.322 mm/h d) Resp. 253. b) La variación del número de cristales con el tamaó de cristal.Se realiza una cristalización intermitente enfriando una solución de ácido cítrico de 60 a 40°C. 16 18 20 30 40 50 70 100 140 Fondo malla (rara) 1. a) Resp. En esta región la variación de la .850 0.180 1.600 0. cuando el cristalizador operaba en estado estacionario.106 Masa en la malla (9) 9.50 Los cristales tienen una densidad de 1. El tiempo de residencia fue de 0.2.42 22.622 h.En el estudio cinético de la cristalización por enfriamiento de NaiSO¿H<2O (Graber y Taboada. f) La densidad estimada de cristales.82 235.04 / de solvente. Calcular: a) La masa total de cristales en la muestra.425 0.464 g/crn3 y un factor geométrico de volumen de 0. con las siguientes características: Tamaño de abertura de Malla No. 240.212 0. CRISTALIZACIÓN 12..42 89.. 1.045 x 7 10 num/l -h e) Resp.740 CAPÍTULO 12.14 54.1.000 0.02 7.150 0.68 g / l f) Resp. se obtuvo una muestra de cristales contenidos en 2. 491 g c) Resp.300 0.8 g/l 12.2 era de diámetro y 39 era de altura.6 Problemas 12. 0. e) La densidad experimental de cristales.12 32.22 0.22 1.553.

10.77). La solubilidad del sulfato a la temperatura final es de 30. respectivamente. con factores geométricos de área y volumen de 3.3. La sal cristaliza como decahidrato y presenta una solubilidad a la temperatura final de 21. e) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12. La concentración de cristales sembrados es de 7.11 b) Resp.9 % 12.6.54 g/cm3. 1992).6°c para obtener cristales de FeSÜ4 • 77/20. c) El tiempo necesario del proceso.4°C hasta 26. PROBLEMAS 741 solubilidad de equilbrio del ácido cítrico es de 0. b) Estimar el rendimiento de la operación cuando se evapora el 3 % del peso total de la solución.Una solución salina que pesa 10. El calor . 2. La sobresaturación esperada durante la cristalización es de 0. d) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12. a) Resp. 78.18 h 12. El crecimiento de los cristales está controlado por la difusión con un coeficiente de transferencia de masa de 4.12.7 x 10~5 g/cm3.52.5 % b) Resp.000 Kg con 30% en peso de Na^COs se cristaliza en forma intermitente por enfriamiento hasta una temperatura de 20°C.En una cristalización intermitente se procesan 4..4. b) La velocidad de crecimiento de los cristales.1 y 0.2 g/cm3. 0. La capacidad calorífica promedio de la alimentación es de 0.042 cm/h c) Resp. La densidad de los cristales es de 1.006 g/cm3 —°C (Bohlin y Rasmuson.000 /¿m.5 Kg de FeSO^ anhidro por cada 100 Kg de agua. El tamaño final del cristal es de 1.7 cal/g°C. Los cristales al sembrarse tienen una longitud característica inicial de 90 //m. 81.. enfriándose de 54. a) Estimar el rendimiento de la operación cuando no existe evaporación de agua.82) a) Resp.5 x 10~5 cm/s Calcular: a) El incremento adimensional del tamaño de cristal 77.546 Kg de una solución acuosa que contiene 47 Kg de FeSO* por cada 100 Kg de agua.5 Kg de Na^COs anhidro por 100 Kg de agua.

Calcular: a) La masa anhidra de cristales. se somete a un proceso de cristalización intermitente al vacío.2 Kg b) Resp. -108. c) El calor removido cuando no hay evaporación de agua. 35.4. Resp.258 Kcal 12. b) El rendimiento de la operación. A esta temperatura la solubilidad del ácido es de 0.Una solución que contiene 200 g de ácido cítrico por cada 100 g de agua.59 g/g de agua. 47 % c) Resp.25 g/l 12.89 % .6. 683. Resp.. 0.7. 65. para las mallas 20. 4. 115.4 Kcal/gmol.42 % de masa retenida en la malla 65. 28.5..Obtener la distribución teórica de cristales de la corrida 2 del Ejemplo 12.Estimar la masa de cristales que se requiere sembrar en un cristalizador intermitente para alcanzar una densidad de cristales de 250 g/l. Estimar la cantidad de agua que es necesario evaporar para obtener una recuperación del 90% en esta operación. suponiendo que no existe nucleación y que la densidad del cristal permanece constante. cuando se desea incrementar la longitud característica del cristal de 100 a 1000 /¿?n. Resp. 33..742 CAPÍTULO 12. a una temperatura de 20°C. 100. CRISTALIZACIÓN de cristalización de los cristales hidratados puede considerarse igual a —4. 150 y 200. 12. a) Resp. 48.

Charmolue. Nucleation and growth of succinic acid in batch cooling crystallizer. Graber. laboratory. E. BIBLIOGRAFÍA 743 12. W. 9.7 Bibliografía Belter. R. Crystallization operations.W. R. R.. Education. New York. Y.H. 120-126. 273-305 Bennett. Miscellaneous Separation Processes. Moyers. 1991. Me Graw-Hill. 5th Ed. Quinta edición. AIChE Journal 37. y Hu.G. C. Eng. Rousseau. 17.E. H. R.). (Ed. 118-127. 1973.C.C. (Eds.A. A. 102-105.C.Serine obtained by methanol addition in batch crystallization. 1988. y Chilton. 1988. y Rasmuson. 8.H. M. 70. Mayo 23. C. The Canadian J. 1987. y Rasmuson. 10. of Chem. Application of controlled cooling and seeding in batch crystallization. En: Handbook of Separation Process Technology. En: Chemical Enginner's Handbook. 1992. 1991. Crystallization: An interesting experience in the Ch. Perry. P. R.) John Wiley and Sons. . 578-643 Qiu. T. 1991.W. y Rousseau. 1121-1128.C.L. New York. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. Eng. M. AIChE Journal 37.A. John Wiley and Sons. Matching crystallizer to material. Bohlin. Cussler.W. Chem.12. New York. Spring. y Rousseau. 11. R.E. Eng. L. 12931304. A.7. y Tabeada. Chem. 1-58 Bennett.

Asimismo. En el caso de productos biológicos una limitante en la selección del método de secado. es la temperatura que puede soportar el material de interés sin perder actividad. Tiene como propósito estabilizar el producto. se revisan los conceptos básicos del equilibrio (de los sistemas agua-aire. En la sección 13. se revisan las formas de efectuar una operación de secado y. Por esta razón.1 Introducción El secado es el último paso en la recuperación de ciertos productos biotecnológicos.2 sobre fundamentos. reducir su volumen o recuperar el solvente. las expresiones básicas para el cálculo de la velocidad de secado y la velocidad de desactivación de compuestos térmicamente lábiles. Siendo el secado una operación limitada por el equilibrio en la sección 13. se presentan los principales tipos de secadores utilizados en los procesos 745 . preservar su actividad. Consiste básicamente en la reducción del contenido de solvente del producto por medio de una evaporación o una sublimación. sin embargo los resultados que se logran pueden ser generalizados a otros sistemas. Existen varias formas de secar un material. de tal manera que las alternativas para estos materiales son más limitadas.3 sobre equipo. En la práctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia donde ésta se elimina es aire. el análisis del secado se basa fundamentalmente en los sistemas aire-agua.Capítulo 13 Secado 13.

• La velocidad de secado que determina el tiempo para llevar a cabo la operación. entonces el sólido pierde humedad. Asimismo. 13. en el caso centran su humedad aumenta. • Los métodos diponibles para realizar la operación. es la velocidad de desactivación del material de interés por efectos térmicos. .2 Fundamentos El análisis de la operación de secado requiere conocer las relaciones de equilibrio que implica la distribución de agua entre dos fases: la sólida del material a secar y la gaseosa del aire seco que sirve como medio para tal efecto. • Los efectos colaterales del secado.746 CAPÍTULO 13.4. Los principios de diseño de algunos tipos de secadores se presentan en la sección 13. entonces el sisterr estará en equilibrio. De acuerdo a lo anterior en esta sección se revisan los siguientes aspectos de la operación de secado: • Las relaciones de equilibrio que limitan la operación.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas Si un sólido húmedo se expone a una corriente continua de aire. Cuando la presión de vapor del agua del solio iguale la presión de vapor de la corriente de aire. es necesario conocer las diferentes formas en que puede ser conducida una operación de secado.2. pued ganar o perder humedad dependiendo de la presión de vapor que ejerz el agua del sólido. Una cinética necesaria de considerar en esta operación que no tiene paralelo en otras. Además. y de la presión de vapor de la corriente del air< Si la presión de vapor del agua del sólido es mayor que la presión d vapor del aire. se requiere el conocimiento de la cinética de secado que depende de la velocidad de transferencia de calor y de la velocidad de evaporación. 13. SECADO biotecnológicos.

En el eje de las ordenadas se gráfica la humedad relativa del aire definida como: Hr = presión parcial del agua en el aire. presión de vapor del agua pura. Este tipo de agua se localiza en los espacios entre las células de los materiales o en los capilares de precipitados porosos.1: Curva de equilibrio para secado de un sólido.13.1 y en el eje de las abscisas la humedad del sólido definida como: . La presión de vapor que ejerce la humedad contenida en un sólido depende de la forma de la humedad. Este comportamiento lo presenta el agua cuando está contenida en el interior de células. En la mayoría de los materiales biológicos se pueden distinguir dos formas del agua contenida en el sólido: agua libre y agua ligada. Se distinguen dos zonas características: la zona de humedad no ligada y la zona de humedad ligada. el tipo de sólido y la temperatura. El agua libre se caracteriza por ejercer una presión de vapor igual a la del agua pura. El agua ligada se caracteriza por ejercer una presión de vapor menor a la del agua pura. FUNDAMENTOS 747 Curva de humedad en et equilibrio ligada / ligada / Humedad . en algunos caldos los solutos alteran sus propiedades o forma enlaces con sustancias orgánicas.2.1 se presenta una curva de equilibrio típica de un material biológico a una temperatura dada. En la Figura 13. / el equilibrio / w w Contenido de humedad. (13. Kg humedad / Kg sólido seco Figura 13.

748 CAPÍTULO 13. la cual ha sido desarrollada a la presión de una atmósfera. estas relaciones de equilibrio agua-aire son requeridas para describir el comportamiento del aire que se utiliza en la operación de secado. Debido a que el agua no ligada se comporta como agua pura. es decir. a diferentes temperaturas y presiones. dado que éste generalmente es calentado antes de usarse. Las relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de cartas psicométricas como la de la Figura 13. las propiedades térmicas y las relaciones de equilibrio del solvente en el sólido y del aire que se utilice para secar. Asimismo. algunos de ellos referidos a la masa de aire seco. Para utilizar adecuadamente la carta psicométrica es necesario manejar varios términos.2. ya que en un proceso de secado esta cantidad puede considerarse constante. Un sólido con tal humedad estará en equilibrio con aire cuya presión parcial de vapor sea igual a la del agua pura. las relaciones de equilibrio de los sistemas aire-agua pueden ser utilizados para tal efecto. La humedad H de una mezcla aire-agua se define como la masa de vapor de agua por unidad de masa de aire seco. En la operación de secado se requiere conocer.3) como: _ a= P-r-P \M .1 comprende desde cero humedad hasta una humedad tal que la presión de vapor del sólido es igual a la del agua pura. 1. cuya humedad relativa sea igual a la unidad. En la zona de humedad no ligada. De tal manera que la Hr permanece constante e igual a la unidad. la humedad del sólido puede ser mayor pero su presión de vapor es constante e igual a la del agua pura. La zona de humedad no ligada que se muestra en la Figura 13. SECADO masa agua masa seca de sólido esta definición es útil cuando la masa de sólido es constante. masa agua (13 3V masa añ'e seco Utilizando la ecuación general de los gases ideales se puede expresar la ecuación (13. -Humedad. A continuación se describen diez de estos términos.

02 O 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Figura 13.2: Carta psicométrica agua-aire. Presión de una atmósfera.04 0. FUNDAMENTOS 749 0.13.2.10 0. .12 0.

SECADO Se puede deducir de la ecuación anterior que la humedad sólo depende de la presión parcial del agua y de la presión total del sistema.4).-Relación entre % H y Hr. de tal manera que: donde P¿§ es la presión de vapor del agua pura a la temperatura y presión dadas y HS es la humedad de saturación.-Porcentaje de humedad. cuando la presión parcial del agua en la mezcla es igual a la presión de vapor del agua pura . es decir %H = -^.1).5) y (13. El porcentaje de humedad se define como la relación porcentual de la humedad con respecto a la humedad de saturación. Es necesario advertir que el porcentaje de humedad no es igual al porcentaje de humedad relativa.Peso molecular del aire (29 g/mol). MA'. .x 100 (13. MB'. Una mezcla aire-agua está saturada a cierta temperatura y presión..750 donde: PA' Presión parcial del agua en el aire. Esto puede ser demostrado combinando las ecuaciones (13.6).Peso molecular del agua (18 g/mol). (13. CAPÍTULO 13. -Humedad de saturación. « •» y comparar este resultado con la ecuación (13. PT\ Fresón total de la mezcla aire. 2.agua. 3.6) Hs 4.

% H. Aplicando la ecuación (13. El aire de una habitación tiene una temperatura de 20°(7 y la presión es de una atmósfera. . H. H = 12 mm de Hg (760 .0146 Kg de agua Kg de aire seco (c) Mediante la ecuación (13.4).aplicando la ecuación (13.01 Kg de agua Kg de aire seco (b) En tablas de vapor puede encontrarse que a 20°C la presión de vapor de agua es de 17.5 mm de Hg (760.5) mmde Hg 18 Kc Kmol 29 Kmol Hs = 0.5).17. (b) La humedad de saturación. Solución: (a) La humedad H puede calcularse. %H = 68.5 mm de Hg. HS.Cálculo de humedad a partir de datos de presión de vapor.13.1. Calcular: (a) La humedad. La presión parcial del agua en el aire es de 12 mm de Hg. FUNDAMENTOS 751 Ejemplo 13. (d) El porcentaje de humedad relativa.1).4% (d) Aplicando la ecuación (13. 17.6) y los resultados anteriores..12) mm de Hg 18 29 Kc Kmol Kg Kmol H = 0. (c) El porcentaje de humedad. % Hr.2.

.33 KPa).5800 75 70.1 se presenta la presión de vapor para el agua pura a varias temperaturas en el rango considerado.1521 0.3958 3.0047 0.2. En la columna (3) de la Tabla 13.0340 33 19.Curva de 100 % de humedad. Construir una gráfica de la humedad de una mezcla aire-agua en el rango de O a 100 °C. considerando una presión total de una atmósfera y la presión parcial del agua en la mezcla como la correspondiente a la presión del agua pura a cada temperatura.1400 90 84.57% = ^ . La curva de 50 .7577 3 2. SECADO Tabla 13.1 se encuentran los datos de HS calculados mediante la ecuación (13. „ x 100 Ejemplo 13. El valor de Hs tiende a infinito conforme la presión de vapor se aproxima a la temperatura de ebullición del agua.1275 %Hr e 17. T(°C) PAS (KPa) 0.0640 18 5.0129 0.0324 0.3816 1. Estos valores son obtenidos de tablas de vapor.9400 60 38.1: Datos y solución del Ejemplo 13.5500 95 rr "d ( Kg de agua \ \Kg aire seco J 0.2) representa la solución gráfica de este ejemplo. La curva de 100 % de humedad cíe la carta psicométrica (Figura 13.5 mm de tig %Hr = 68.752 CAPÍTULO 13.5) a una presión total de una atmósfera (101. Solución: En las columnas (1) y (2) de la Tabla 13.2.

1. o Cs = CB + HCA donde: (13. FUNDAMENTOS 753 % de humedad de la carta psicométrica puede trazarse tomando la mitad de la distancia vertical entre la curva de saturación y el eje de la temperatura. Ejemplo 13.2) se localiza el punto 55°C y 20 % humedad. El punto de rocío de una mezcla aire-agua es la tempertura a la cual dicha mezcla (sin estar en contacto con agua) se satura al ser enfriada a presión total constante. .Cálculo del punto de rocío de una mezcla aire-agua.Capacidad calorífica del vapor de agua. CB'. y es el calor necesario para incrementar un grado centígrado la temperatura de una mezcla aire-vapor de agua. Estimar el punto de rocío de una mezcla aire-agua con 20 % de humedad que se encuentra a 55°C y a una atmósfera de presión.023 tendrán el mismo punto de rocío. Cuando una mezcla en su punto de rocío se enfría más alia de este punto. 6.Capacidad calorífica del aire seco.-Calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua. por Kg de aire seco de la mezcla. 5. horizontalmente se avanza hacia la curva de 100 % humedad y se lee la temperatura de rocío de 26. unidad de energía.5°C en el eje T. C A'.005 KJ/Kg aire seco —° K. a cada temperatura. En este proceso la humedad de la mezcla no cambia. 1.13. Solución: Sobre la carta psicométrica (Figura 13.7) Cs'.. El calor húmedo es la capacidad calorífica de la mezcla aire-vapor de agua.88KJ/ Kg vapor —° K.Calor húmedo de la mezcla en KJ/Kg aire seco —° K. Todas las mezclas con humedad de 0. de tal manera que se puede calcular el punto de rocío de una mezcla utilizando la carta psicométrica. el vapor de agua condensa formando una neblina o rocío.-Punto de rocío.2. KJ: Kilojoules.3.

754 CAPÍTULO 13. la ecuación (13.Cálculo del calor húmedo de una mezcla aire-agua. Utilizar el valor calculado para estimar el calor necesario para incrementar 15 grados la temperatura de 5 Kg de aire seco y su vapor acompañante.884// KJ Kg aire seco —° K (13. puede ser calculada con la siguiente expresión: Q = mBCs&T (13.8).7) puede expresarse como: Cs = 1. Q = 5 Kg de aire seco x 1. Cs = 1.884)(0.9) Ejemplo 13..156 — — x 15 °K : Kg aire seco —° K Q = 86.08) Kg aire seco —° K CS = 1. Calcular el calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua que se encuentra a 55°C y presenta una humedad //=0. Solución: a) El calor húmedo puede calcularse utilizando la ecuación (13. SECADO Dado que las capacidades caloríficas pueden considerarse constantes en el intervalo normal de temperaturas.08 Kg de agua /Kg de aire seco.005+ (1.7 KJ Q = 363 Kcal .005 + 1. KJ — b) El calor necesario puede calcularse utilizando la ecuación (13.8) Cuando no existe cambio de estado (evaporación o condesación) el calor necesario para incrementar la temperatura AT grados de una masa mjg de aire y su vapor acompañante.9).4.156 A g aire seco —° A .

-Curvas de saturación adiabática.. (13. si se toma como temperatura de referencia TS este balance se expresa como: . = CS(T . No fluye calor hacia dentro o hacia fuera del sistema y al fenómeno se le denomina proceso adiabático. Considérese un proceso como el que se muestra en la Figura 13.Volumen húmedo. = (1. FUNDAMENTOS 755 7.00283 + 0.005 + 1. En éste. una mezcla airevapor de agua a una temperatura T y una humedad //.Entalpia total.0045677) (T + 273) (13.12) 9.2. La entalpia total de un Kg de aire seco y su vapor acompañante referida a una temperatura T0.11) Cuando T0 — Q°C el calor latente \0 =2.10) 8.3. de tal manera que la mezcla aire-vapor al alcanzar el estado estable sale con una humedad saturada HS a una temperatura TS (el aire cede calor sensible para evaporar el líquido)..11) se expresa como: f kJ 1 : [Kg aire seco] Ent.T0) + H\0 (13.13. está dada por el calor sensible de la mezcla aire-vapor de agua más el calor latente del vapor de agua a la temperatura T0.884#)T + 2502# en la ecuación anterior T está en °C. se pone en contacto con agua a una temperatura TS (menor que T).502 KJ/Kg y la ecuación (13. Efectuando un balance de energía en la mezcla aire-vapor se obtiene. De acuerdo a la ley de los gases ideales el volumen húmedo puede calcularse mediante: m3 mezcla Kg aire seco VH = (0. entalpia a la entrada = entalpia a la salida. El volumen húmedo es el volumen total de una mezcla aire-vapor de agua por Kg de aire seco a la presión de una atmósfera. esto puede expresarse como: Ent.

Si este aire se enfria y humidifica adiabáticamente.14) Las curvas de saturación adiabática de la carta psicométrica (Figura 13. ' I Salida del gas frió \**N X HS-TS Agua de reposición H 2 0 • . Ejemplo 13. CS(T .Saturación adiabática.2) han sido construidas utilizando la ecuación (13.8) y (13.Ts) + H\s = CS(TS . b) La temperatura y humedad final si la mezcla sale saturada.Ts) + Hs\s combinado las ecuaciones (13.884#) (13. la mezcla presentará una temperatura y una humedad menor. localizadas sobre la misma linea de saturación adiabática.13) T . estimar: a) La temperatura y humedad final si la mezcla alcanza un 90 % de humedad.032 Kg de agua / Kg aire seco.. Solución: a) Sobre la carta psicométrica se localiza la temperatura y humedad que representa a la mezcla original.13) se tiene: H-Hs _ _Cs_ _ (1.005+ 1. Entonces esta mezcla se humidifica .3: Proceso adiabático. Se tiene una mezcla aire-vapor a 80°C con una humedad de 0.756 CAPÍTULO 13.Ts ~ ~ Xs ~ ~ \s (13.5. SECADO Entrada del gas „ _ H. T \ Jr x '' / A . m ¡ ) i ¡~n i ) \ ^ Ts Figura 13. En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar H$ y TS a la salida.14).

es posible determinar con relativa facilidad la humedad de mezclas aire-vapor de agua. Para determinar temperaturas de bulbo húmedo se puede utilizar un termómetro cuyo bulbo se recubre con una tela impregnada de agua. La temperatura de bulbo húmedo es la temperatura de estado estable que alcanza una pequeña masa de agua cuando se pone en contacto con una corriente de aire en condiciones adiabáticas. La lectura final de estado estacionario es la temperatura de bulbo húmedo (en contraposición. La importancia práctica del análisis anterior.05 10. a la lectura normal del termómetro se le llama temperatura de bulbo seco).049 Kg de agua Kg de aire seco b) Continuando sobre la misma linea de saturación adiabática hasta la intersección con la curva del 100 %.13.Temperatura de bulbo húmedo. .. hasta el cruce con la curva de 90 % de humedad donde se lee: T = 43°C H = 0. y con auxilio de la carta psicométrica. FUNDAMENTOS 757 y enfría adiabáticamente.2. Para sistemas aire-agua (únicamente) la descripción del proceso adiabático del bulbo húmedo puede realizarse en forma satisfactoria mediante la ecuación de saturación adiabática. Si el aire no está saturado se produce un descenso en la lectura del termómetro debido a la evaporación de agua de la tela. es que mediante mediciones de temperaturas de bulbo húmedo y bulbo seco. siguiendo una curva de saturación adiabática. se puede leer: Ts = 4Q°C Kg de agua Kg de aire seco Hs = 0. El termómetro se sujeta mediante una cuerda y se hace girar en el aire.

Determinación de humedad.Método no adiabático. Los secadores por aspersión y los secadores de tipo instantáneo operan de acuerdo a este método. .758 CAPÍTULO 13. se puede leer la humedad de 0.Método adiabático. 13. Solución: Se puede suponer que la temperatura de bulbo húmedo es igual a la temperatura de saturación adiabática. La temperatura de bulbo húmedo de esta mezcla es de 30°C.2 Métodos de Secado El método de secado que debe ser utilizado en un bioproceso depende del tipo de producto.. Recorriendo la curva de saturación adiabática de 30°C hasta la temperatura de bulbo seco de 70°C.2. SECADO Ejemplo 13. Una mezcla de aire-vapor de agua tiene una temperatura de 70°C. sus propiedades físicas. Calcular la humedad de la mezcla. su tolerancia a la temperatura y los requerimientos de proceso en cuanto a la forma de operación ya sea intermintente o continua. Son utilizados para secar partículas que no toleran altas temperaturas como proteínas unicelulares y enzimas.01 Kg agua/Kg aire seco.6. Métodos no Adiabáticos o por Conducción En el secado no adiabático el calor se proporciona en forma indirecta por conducción a través de una pared metálica. Generalmente los secadores no adiabáticos operan a presión reducida y se emplean para el secado . Método Adiabático Este método consiste en adicionar calor por medio de aire caliente. Los métodos de secado se pueden clasificar de acuerdo a la forma de transferir calor y eliminar el solvente en dos tipos: .

Se transfiere calor para evaporar un líquido.4 Efectos Colaterales del Secado Cuando el secado de un material no se realiza apropiadamente. . frecuentemente es necesario efectuar mediciones experimentales de la velocidad de secado.Se transfiere masa: como líquido o vapor al interior de sólido. FUNDAMENTOS 759 de cristales y precipitados. En el caso de productos biotecnológicos los daños típicos que se presentan en el secado son: endurecimiento. 13. además de las relaciones de equilibrio. donde las temperaturas de secado deben ser menores a 60° C. es necesario establecer relaciones que permitan determinar la velocidad del secado o el tiempo de secado.2.3 Velocidad de Secado En el diseño de secadores. granular. Debido a que el conocimiento de los mecanismos básicos del secado no es completo.13. y como vapor del sólido al aire. Los mecanismos de transferencia de masa están intimamente relacionados con el tipo de sólido a secar (homogéneo.2. deshidratación química y desnaturalización. capa exterior'seca e impermeable. se efectúa por sublimación de agua congelada empleando bajas presiones y temperaturas. Se emplea para secar proteínas terapéuticas que no toleran temperaturas arriba de las ambientales. Cuando se seca un sólido ocurren dos procesos fundamentales y en forma simultánea: . mientras que la forma de transferir calor depende del método de secado (adiabático o no adiabático). etc). El fenómeno de endurecimiento se presenta cuando la velocidad de secado es muy alta y el sólido forma una capa interior húmeda y una.2. que impide la evaporación y el secado . 13. El secado por congelamiento. un caso de secado no adiabático. Los factores que controlan la velocidad de estos procesos determinan la velocidad del secado. se presentan daños que afectan la calidad del producto.

Este proceso generalmente sigue una cinética de primer orden que depende de la concentración de agua.760 CAPÍTULO 13. [cal /mol]. SECADO apropiado. Generalmente es más conveniente utilizar una combinación de una temperatura baja con un tiempo alto de secado. E: Energía de activación del material. para evitar una desnaturalización excesiva.^ ---) Pr RTJ (13.16) que indica que entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado menor es el grado de desnaturalización. la temperatura y el tiempo. [t~1]. [°K]. La integración de la ecuación (13. de acuerdo a la siguiente expresión: ai donde: Pr: Medida de la concentración de la proteína no desnaturalizada. . La deshidratación química consiste en la eliminación de agua de la estructura molecular del producto y también se origina por una velocidad de secado alta.15) t =t produce la expresión: Pr = Pr (13.15) entre los límites: t = t0 Pr = Pr0 •"»-"•. R: constante de los gases ideales. k0: constante característica del material. T: Temperatura absoluta. [cal ¡mol —° K]. Este fenómeno puede evitarse desminuyendo la velocidad de secado. El tercer tipo de daño es la desnaturalización que sufren las proteínas en el secado.

. i «o exp I . « . = ^ — Pr0 . se desnaturaliza en un 28 %. Solución: Utilizando la ecuación (13. ™ FI -E . « « „ \ 10 min ¡ ™l moí-°A' ' In — ° — = &0 exp | v Pr0 .16) se pueden obtener dos ecuaciones que permiten determinar los parámetros k0 y E.Desnaturalización de catalasa.= 3.99 —E 1 30 min ™n"T' ' resolviendo las expresiones anteriores se obtiene: E = 23.0. Cuando se seca a 20°(7 por 30 min.22 x 10 min~ exp .0.2. .. FUNDAMENTOS Ejemplo 13. con T = 4°(7 y t=90 min.453 —.7.63 Pr. Estimar el grado de desnaturalización si el material se seca por 90 min a 4°C. se desnaturaliza 63 % de la enzima. mol k0 = 3.28 Pr0 \ 1.99 mo°^oK x 277° K I Pr0 -ET Pr Pr 1 = 1-10 Pr o i = 0. utilizando la misma ecuación. Pr i o In — .91 se desnaturaliza sólo el 9 % de la enzima.13. I mi. Pr I —23453 caí \ 15 l In —2.22 x 1015 min~l Con estos parámetros se puede estimar el grado de desnaturalización. . ^ 90 min Pr \ 1. 761 Cuando se seca a 37°C por 10 min una pasta concentrada de la enzima catalasa. .

762

CAPÍTULO 13. SECADO

13.3

Equipo de Secado

El equipo de secado es muy variado. Los empleados en los procesos biotecnológicos se pueden clasificar de acuerdo al método de secado empleado en: • Secadores adiabáticos. • Secadores no adiabáticos.

13.3.1

Secadores Adiabáticos

Los principales tipos de secadores adiabáticos (Quinn, 1983) son: - El secador por aspersión. - El secador instantáneo. - El secador de lecho fluidizado.

Secador por Aspersión
En los equipos de secado por aspersión (Figura 13.4) es posible secar soluciones o suspensiones de sólidos, rociando éstas en un recipiente a través del cual se hace pasar una corriente de aire caliente. Los secadores por aspersión son utilizados para la producción de grandes volúmenes de productos termolábiles como enzimas, levaduras y proteínas. Uno de los componentes claves del secador por aspersión es el atomizador que permite formar pequeñas gotitas de la mezcla, incrementando notablemente el área de secado, de tal manera que el tiempo del secado sea menor que el tiempo que dura la gota en alcázar la pared del recipiente. Existen dos tipos básicos de atomizadores: Los tipos disco giratorio (15,000 a 24,000 rpm) y los tipos de eyector a presión. El primero es más empleado en los procesos biotecnológicos debido a que presentan menos problemas de taponamiento y ofrece la posibilidad de controlar el tamaño de la gota controlando la velocidad del disco.

13.3. EQUIPO DE SECADO

763

Alimentación

X*Xx'

~NvO»

V\

Calentador de aire

Figura 13.4: Secado por aspersión. Tomada de: Brocklebank, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

764

CAPÍTULO 13. SECADO
Salida de aire

Calentador de aire

Figura 13.5: Secador instantáneo. Las capacidades de los secadores por aspersión son muy variadas. Las capacidades de evaporación varían de 1 Kg/h hasta 2 Ton/h de agua, con dimensiones típicas de 2 x2 x3.5 m para los modelos pequeños y de 10 x 5 x 12 ra para los modelos intermedios. Secador Instantáneo Los secadores instantáneos o flash (Figura 13.5) son utilizados para secar sólidos de baja humedad o sólidos difíciles de manejar por formar partículas muy pequeñas o ser muy pegajosos en forma seca (proteínas y almidón). En un secador instantáneo el material sólido que se va a secar se alimenta conjuntamente con aire caliente a un ducto, a través del cual el sólido viaja y se seca por acción del aire. Al final del ducto la corriente

13.3. EQUIPO DE SECADO

765

de aire-sólido se separa por acción de un ciclón. Parte de la corriente es recirculada para secar las partículas grandes que son más difíciles de secar. Si debido a su tamaño las partículas de la alimentación no pueden ser transportadas por el secador, el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de secado. Secador de Lecho Fluidizado El secador de lecho fluidizado (Figura 13.6) puede ser utilizado para secar rápidamente materiales sólidos que permitan su fluidización por medio de una corriente de aire caliente (Treybal, 1980). El material se alimenta a un lecho soportado por una malla inferior y se le hace pasar una corriente de aire caliente, de tal manera que las partículas del sólido se separan y forman una suspensión fluida, que permite su transporte hasta el punto de descarga. Los secadores de lecho fluidizado continuos pueden ser circulares, cuadrados o rectangulares en su sección de flujo. Pueden alcanzar capacidades de hasta 10 Ton/h de producto seco, mientras que los intermitentes son utilizados en escalas más pequeñas del orden de 500 Kg/carga.

13.3.2

Secadores no Adiabáticos

Los secadores no adiabáticos requieren un sistema de calentamiento y generalmente trabajan con sistemas de vacío. Los principales secadores no adiabáticos utilizados en biotecnología son: el tipo charola, el de doble cono, el tambor rotatorio y el liofilizador (De Vivo, 1983). Secador de Charola Los secadores de charola (Figura 13.7), son utilizados a escala piloto o para producciones bajas de productos de alto valor económico, suceptibles a temperaturas elevadas o a daño por manejo mecánico excesivo. En el secador de charola la muestra se coloca en las charolas y éstas dentro de una cámara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de vapor y la cámara cuenta con un sistema de vacío, lo cual permite el secado de la muestra a condiciones moderadas.

766

CAPÍTULO 13. SECADO
Alimentación de los sólidos

Salida de los sólidos secos

Figura 13.6: Secador de lecho fluidizado.

Conexión de vado

Puerta

Charolas

—(Conexiones para _T~ calentamiento

JJ,

¿J,

Figura 13.7: Secador de charola.

13.3. EQUIPO DE SECADO

767

Secador de Doble Cono
El secador de doble cono es un secador giratorio al vacío (Figura 13.8), que tiene dos conos unidos por sus bases por medio de un cilindro corto. Este recipiente gira sobre un eje para inducir el movimiento del material y evitar zonas de sobrecalentamiento. El secador cuenta con un sistema de vacío para facilitar el secado. Este tipo de secador es ampliamente utilizado en la obtención de productos biotecnológicos a escala industrial.

Secador Tipo Tambor Rotatorio
El secador tipo tambor rotatorio (Figura 13.8b) es un recipiente cilindrico horizontal que no gira y el movimiento del material se realiza por acción de agitadores internos que remueven el material de las paredes calientes del tambor.

Liofilizadores

Los liofilizadores son utilizados para obtener sólidos secos de alto valor comercial. Se emplean cuando los sólidos muy lábiles o frágiles para ser tratados por un método convencional de secado o una filtración, o bien son muy solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por precipitación o cristalización. La liofilización ha sido empleada para la obtención de enzimas, hormonas y otro tipo de proteínas de uso farmacéutico. En un proceso de liofilización (Figura 13.9) la solución a secar con una concentración entre 5-25 % peso/volumen se alimenta a un sistema de filtrado (0.2 (¿m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estéril. En el proceso de secado la solución primero se congela, y posteriormente se deshidrata mendiante un sistema de calentamiento y un sistema de vacío, acoplados de tal manera que el agua de la muestra siempre esté en forma sólida y su pérdida sea sólo por sublimación.

768

CAPÍTULO 13.

SECADO

conexiones para calentamiento conexión de vacío

motor

(a)

válvula de descarga

agitador

alimentación

conexión
de vacjo

\

motor válvula de descarga

(b)

Figura 13.8: a) Secador de doble cono b) Secador de tambor rotatorio.

13.4. DISEÑO DE SECADORES
placa de P--" calentamiento

769

muestra congelada chaqueta refrigerada cubierta seca núdeo congelado

producto seco

Figura 13.9: Proceso de liofilización.

13.4

Diseño de Secadores

Los métodos para el diseño de equipos de secado están íntimamente relacionados con la forma en que se transfiere el calor en el equipo y con el grado de complejidad de la descripción del mismo. Dos tipos de diseño de secadores son de particular importancia: • Diseño de secadores adiabáticos. • Diseño de secadores no adiabáticos.

13.4.1

Diseño de Secadores Adiabáticos

El diseño de un secador requiere de la determinación de valores experimentales. Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material sólido, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal menera que sólo se exponga la superficie del sólido a la corriente de aire que se utilice para secar. La variación de la humedad del sólido puede medirse por medio de una balanza. Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a las que se utilizarán a gran escala. La Figura 13.10 muestra una curva típica de un secado experimental. La Figura 13.10a muestra la variación del contenido de humedad de

770

CAPÍTULO 13.

SECADO

Tiempo

Contenido de agua

Figura 13.10: Curva de secado experimental. Tomada de: Porter ti a/, 1973.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill inc. Copyright ©1973. Todos los derechos reservados.

sólido (W) con el tiempo. Diferenciando estos datos se puede obtener la velocidad de secado y granearla contra el contenido de humedad como aparece en la Figura 13.10b, o contra el tiempo. Revisando la forma de las curvas de la Figura 13.10 se observan dos regiones: La región A-B de las curvas, donde la humedad del sólido desciende linealmente y la velocidad de secado se mantiene constante, llamada región de velocidad de secado constante; y la región B-C de las curvas donde la humedad decrece en forma más lenta y la velocidad de secado desminuye con el tiempo, llamada región de velocidad de secado decreciente. Las regiones características del secado pueden ser racionalizadas en

13.4. DISEÑO DE SECADORES función de los conceptos: - Agua libre en el sólido. - Agua ligada en el sólido.

771

En la región de velocidad de secado constante, se presenta la evaporación del agua libre, de tal manera que su movimiento a través del sólido por capilaridad o difusión es más rápido que su velocidad de evaporación. El secado se efectúa por evaporación de agua de la superficie saturada del sólido a través de la película estancada de aire localizada sobre éste. Cuando esta superficie empieza a perder el 100 % de saturación la velocidad de secado desminuye. El agua ligada empieza a evaporarse dentro del sólido, y el vapor a difundirse a través del sólido hasta el aire. Este proceso es más lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado. Debido a la situación descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso debe ser calculado sumando los tiempos de los períodos de secado constante y de secado decreciente. Velocidad de Secado constante Cuando el calor de evaporación en el período de velocidad de secado constante es proporcionado por aire caliente, se establece un equilibrio dinámico entre la velocidad de transferencia de calor del aire al sólido y la velocidad de evaporación. Bajo estas condiciones la superficie del sólido alcanza la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo. De acuerdo a la Figura 13.11 la velocidad de transferencia convectiva de calor q (energía / tiempo) está dada por: q = \\A(T-Ti) donde: h: Coeficiente de transferencia de calor entre la superficie del sólido y la película estancada de aire sobre ésta (análogo a los coeficientes de transferencia de masa), [cal/L2 —° —t}. A: Área expuesta al secado. [Z/ 2 ]. (13.17)

772

CAPÍTULO 13. SECADO

gas

T. H, C

Cj.Tj.Hj

Humedad hada la superficie

Figura 13.11: Transferencia convectiva de calor. T: Temperatura en el seno del aire. [°]. TÍ: Temperatura en la superficie del sólido. El flux másico de agua puede ser expresado como:

J = k(d - C)

(13.18) (13.19)

J = kp(Hi-H) donde:
J: Flux de agua. [M/L2 - t]. C{\ Concentración de agua en la superficie del sólido. [M/L3]. C: Concentración de agua en el seno del aire. [M/L3].

k: Coeficiente de transferencia de masa en la película estancada de aire sobre el sólido. [L/t]. p : Densidad de aire seco. [M aire seco/L3 de mezcla].
p: l/VH

El balance de agua en el sistema puede expresarse como:
m

dW = -JA dt

(13.20

13.4. DISEÑO DE SECADORES

773

donde m es la masa de sólido seco utilizado y W la humedad del sólido. Combinando las ecuaciones (13.19) y (13.20) se obtiene: (13.21)

dt

m

este resultado es difícil de utilizar debido a que generalmente las humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de la ecuación (13.21) se expresan en función de temperaturas combinando esa ecuación con el balance de energía. En un proceso adiabático la transferencia de calor del aire al sólido es igual al total del calor latente de evaporación, de tal manera que: Calor transferido = (Calor latente de evaporación) (Masa evaporada) o bien, q = XJA (13.22)

Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y (13.22) se puede obtener la siguiente expresión:

esta ecuación es equivalente a la ecuación (13.21), pero está expresada en función de dos temperaturas fácilmente medibles: la temperatura de bulbo seco del aire T y la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo Tt. Se puede calcular el tiempo de secado en el período de velocidad de secado constante integrando la ecuación (13.23) entre los limites siguientes: t=O W = W0 t = tc W=WC obteniéndose:

,, \\A(T -

(13.24)

774

CAPÍTULO 13. SECADO

donde tc es el tiempo para alcanzar la humedad crítica del sólido que es la humedad a la cual termina el período de velocidad de secado constante. Para el cálculo de tc es necesario calcular h. Este coeficiente depende de la geometría del secador: En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un sólido y una temperatura entre 45 — 150°C, el coeficiente de transferencia de calor puede ser evaluado con la ecuación, h = 0.0204 G°-8 donde: G: Flux másico de aire. [Kg/h — m 2 )]. h: Coeficiente de transferencia calor. [Watts¡m2 —° A']. En el caso de gases en flujo turbulento y sistemas aire-agua, también puede ser utilizada la analogía de Reynolds la cual establece una relación directa entre el coeficiente de transferencia de masa y el coeficiente de transferencia calor de la siguiente forma:
k = -^ pCp (13.26)

(13.25)

donde: k: Coeficiente de transferencia de masa dado por la ecuación (13.18). p: Densidad másica total del gas. Cp: Capacidad calorífica. [cal/M—0]. La ecuación (13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la ecuación (13.25) o con la (13.26).

13.4. DISEÑO DE SECADORES Velocidad de Secado Decreciente

775

En el período de secado de velocidad constante generalmente se evapora la mayor parte del agua contenida en el sólido, pero puede implicar sólo una pequeña fracción del tiempo total de secado. Por otro lado, el período de velocidad de secado decreciente puede involucrar una evaporación menor de agua pero una mayor fracción del tiempo total de secado. En el período de velocidad de secado decreciente la evaporación del agua (ligada) es más difícil, la velocidad de evaporación depende de su movimiento por difusión o capilaridad al interior del sólido en forma de vapor o en forma de líquido. El análisis detallado del período de velocidad de secado decreciente es complejo y su descripción se realiza en forma aproximada. Uno de los modelos más sencillos para describir este período establece una relación lineal de la velocidad de secado con la humedad, de la siguiente forma:
dt

= -aW

(13.27) v ;

donde a es una constante. La ecuación (13.27) puede integrarse entre los límites:
t = te t =t W =WC W =W
1

obteniéndose la ecuación siguiente: *-*« = -ln^
W

(13.28)

El tiempo total de una operación de secado puede calcularse sumando las ecuaciones (13.24) y (13.28):

En el diseño de secadores el cálculo del tiempo de secado permite su dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersión, el tiempo de secado debe ser menor al tiempo que dura la partícula en alcanzar la pared del secador, de tal manera que cuando esto ocurra la partícula ya este seca y deslice suavemente por la pared del secador. Es decir, el tiempo de secado determina el diámetro del secador.

776

CAPÍTULO 13. SECADO
Ejemplo 13.8 .- Secado en la región de velocidad constante.

Un material granular insoluble se va a secar en una charola de 45.7 x 45.7 x 2.54 cm. El material ocupa completamente la charola y se puede considerar que los lados y el fondo de la bandeja están aislados, de tal manera que el calor sólo se transmite por convección desde una corriente de aire que fluye paralela a la superficie a una velocidad de 6.1 m/s. El aire está a una temperatura de 65.6 °C y tiene una humedad de 0.010 Kg de agua/Kg de aire seco. Estimar la velocidad de secado del sólido. Solución: Para el cálculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuación (13.23):

m dW

h

El empleo de esta ecuación requiere calcular T t , h y A. a) Cálculo de T¿. Para una humedad de H = 0.010 y una temperatura de bulbo seco de 65.60C, mediante la carta psicométrica y utilizando la linea de saturación adiabática se puede encontrar, TÍ = 28.9°C b) Cálculo de h. Se puede utilizar la ecuación (13.25) con G = vp. Para el cálculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumer húmedo del aire. Utilizando la ecuación (13.10), , m3 de mezcla = (0.00283 + 0.00456//)(T + 273) Kg de aire seco m3 de mezcla = v(0.00283 + 0.00456 x0.01)(65.6 +273) ——; : M [Kg de aire seco

VH

VH VH

= 0.974

m3 de mezcla Kg de aire seco

La densidad de 1.0 Kg de aire seco y 0.01 Kg de agua acompañant
es:

13.4. DISEÑO DE SECADORES

777

_ 1_+0.01 El flujo másico es:

G =

s/ \
h — m2

m

G = 22,770

El coeficiente de transferencia de calor es:

h = 0.0204(22,770)°'8 Watts
h = 62.45

m2 -° K

c) Cálculo de A El calor de evaporación se obtiene de tablas de vapor a T, = 28.90C, este valor es: A = 2,433^ Kg y de acuerdo a la ecuación (13.23),
m dW dt
m c?VF A dt
es:

62.45

x x ^ x (65.6 - 28.9)°A' 2 , 4 3 3 x 1000 J

'

/^ de agua h — m2

el área de transferencia de acuerdo a las dimensiones de la charola

A = 0.457 m x 0.457 m /I = 0.209 m 2

778 CAPÍTULO 13. . SECADO F-(Kg/h) 25% (Kg/Kg) 758C Aire T=15 8 C H .9. El aire de salida tiene una temperatura de 750C.12: Secador por aspersión.709 dt h Ejemplo 13. La capacidad calorífica de los sólidos es de 0. en un arreglo como el que se muestra en la Figura 13.50 % G Calentador de aire 316 JSSL de antibiótico h T = 60°C. de tal manera que la velocidad de secado es: dW Kg de agua m—¡— = 0. Si se desea producir 316 Kg/h de antibiótico.Secado de un antibiótico. H= 5% Figura 13. estimar: a) El flujo de alimentación. y es calentado hasta 150°C en un intercambiador de calor utilizando vapor en forma indirecta.12. para secar una solución de antibiótico que contiene 25 % (Kg/Kg) de sólidos y se encuentra a una temperatura de 20°C. Se requiere utilizar un secador por aspersión. el cual sale con 5 % de humedad y a 60°C.4 Kcal/Kg — ° C y la temperatura de referencia es de 0°C.. El aire que entra al secador es tomado de la atmósfera a 15° (7 y con 50 % de humedad.

4. 67(# 2 -#i) = 884 n HI puede encontrarse con los datos del aire de entrada y la carta pisicométrica de la Figura 13.005 — Kg de aire seco El balance de energía está dado por: [Entalpia de la alimentación] + [Entalpia del aire a la entrada]: . c) El flujo de aire necesario y la humedad de aire a la salida.- "^ \ f r> r\r ^^ SO ^aOS \ Kg totales J hJ \ F = 1200 I<9 h \ Kg totales J b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de agua en los sólidos. Kg _ —r.75 h ) V Kg Kg\ f n. pueden calcularse mediante un balance de masa y un balance de energía. Entrada de sólidos = Salida de sólidos ( F} í f) 9*» "^ ~~ ~ ——' i / 01. Solución: a) El flujo de alimentación puede ser calculado mediante un balance de sólidos. DISEÑO DE SECADORES 779 b) La cantidad de agua evaporada en el proceso.13.2.0. #1 .0. Agua evaporada Agua evaporada = Agua a la entrada — Agua en el producto = 1200 —.05 — h J\ Kg ) Agua evaporada = 884 -r— h c) La humedad del aire a la salida y el flujo de aire.

8^ h La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuación (13.884)(0. [Entalpia del producto] -f [Entalpia del aire a la salida] La entalpia de la alimentación está dada por: {a de sólido SECADO 0.0)'C Kg de agua —°L = 8.152.4—solido.95 0 ] I o. o.005)} KJ Kg de aire seco J \4. o.4 K9 Kg sólido -° KQ\ ( Ka de aqua\ 1200 -± 0. {[1..780 CAPÍTULO 13.05 (60 .187 KJ .75 „ — h ) \ Kg ) Kcal \ Kg de agua —°C = 15.005 + (1.005)] (150) (2502)(0.12).300 I<Cal l5-0)'g h La entalpia del producto es: desóhdo 316 .C J (6o -ore — Kg 316 .

884)(//2)] (75)+ Kg de aire secoJ y4.4.320 2 = 0.3 GH2) resolviendo simultáneamente las ecuaciones de balance de masa y energía se obtiene: G = 30.300) + (39.187 KJ Kcal 18 G + 631.005 + (1.2 Diseño de Secadores no Adiabáticos En los secadores no adiabáticos la velocidad de secado depende de la velocidad de transferencia de calor. La velocidad de secado debe ser tal que evite la formación de zonas de sobrecalentamiento que dañen el material. Este tipo de secado se efectúa al vacío para remover rápidamente el vapor formado.3 GH-2 = h El balance de energía puede ser expresado como: (15.8) + (18 G + 631. . a través de una pared.0341 Kg de aire seco 13.33 G) = (8152.Secadores no adiabáticos giratorios.33 G Kcal h 781 de igual manera la entalpia de aire a la salida es: {[1. hacia el sólido que se desea secar. .Secadores no adiabáticos de torta estacionaria. DISEÑO DE SECADORES = 39.13. Dos tipos de secadores no adiabáticos son de particular importancia: .4.

se transfiere por la pared del recipiente y a través del sólido. De acuerdo con la Figura 13.30) donde: . el calor para producir la evaporación (o la sublimación) del agua.782 CAPÍTULO 13. Suponiendo que la velocidad de secado es lenta. El tiempo para lograr lo anterior se puede obtener realizando balances de energía. de tal manera que el calor transferido de la pared hacia el sólido es igual al valor de estado estacionario (constante) dado por: q = \iA(T0-Tz) que para el caso de sólidos puede ser expresada como: (13. Conforme el sólido se seca el frente desciende.13. Secado de Tortas Estacionarias Para calcular el tiempo de secado de sólidos en charolas o en liofilizadores se puede utilizar un modelo aproximado. Este calor permite que el agua se evapore a partir de una superficie móvil localizada a una distancia Z.13: Secado de tortas estacionarias. De acuerdo con el modelo el secado del sólido se logra cuando la distancia Z es igual a cero. aumentando la zona seca. no se transportan en el interior del sólido. SECADO límite del sólido sólido húmedo M Calor Figura 13. Este modelo implica que tanto el agua líquida ligada como la no ligada. Arriba de esta superficie el sólido está seco y abajo de ella húmedo.

[cal/L — t—°]. K: Conductividad térmica.32) donde: A: Área de la sección transversal de la charola. todo el sólido está seco y Z — O. T0: Temperatura en la base de la charola.31) y (13. [L2]. [°j. DISEÑO DE SECADORES h: Coeficiente de transferencia de masa. TZ' Temperatura en el frente de secado. Combinando las ecuaciones (13.13A.33) se puede expresar como: . A: Calor de evaporación. 783 El calor transferido puede ser relacionado con el movimiento del frente de secado por medio del balance de calor en estado estacionario: [Calor transferido] = (Agua e vaporada) (Calor de evaporación) o en forma de ecuación: (13.32) e integrando entre los limites.33) al final de la operación cuando t = t j . [M/L3]. q: Flujo de calor. la ecuación (13. [cal/M]. [°]. [cal/t]. [cal/ L2 — t—°]. t =t se obtiene: Z= Z (13. p0: Concentración de agua ligada y no ligada por volumen de sólido mojado.

33) también puede utilizarse para calcular la evolución del secado con el tiempo.34) Este resultado indica que el espesor de la torta es un factor importante en el tiempo de secado.784 CAPÍTULO 13. se mantiene constante al cambiar de escala. La ecuación (13. Si el espesor se dobla el tiempo de secado se incrementa cuatro veces. es decir: Í A Piloto V / Industrial 3 Esta ecuación supone que las condiciones a nivel piloto son iguak a las de nivel industrial: Las temperaturas.w )'] (13 35) ' El análisis anterior es sencillo y útil como punto de partida en el diseño de secadores no adiabáticos. por el área de secado por unidad de volu men. los niveles de vacío. La carga de materia se mueve constantemente. Secado Giratorio La descripción del secado en equipos giratorios como los secadores de tipo tambor o los de doble cono. de tal manera que las partículas contactan h superficie caliente en forma intermitente y en repetidas veces. SECADO [K(T0-TZ)\ (13. El diseño de este tipo de secadores se basa en determinaciones ex perimentales a nivel piloto y un escalamiento considerando que el pro ducto del tiempo de secado. . expresándola de la siguiente manera: Z [ (2K(T. como porcentaje o fracción de la zona seca 0. y ' porcentaje del volumen total que es ocupado por el sólido. es más compleja.-TZ)\Y 0 -T i -I = 1 p. durantí su residencia en el equipo de secado.

reducir su volumen y preservar su actividad. Entre los no adiabáticos se pueden citar los secadores tipo charola. Consiste en una reducción del contenido de humedad de los sólidos con el propósito de mejorar su estabilidad. Los secadores adiabáticos más utilizados son el de aspersión. de doble cono.13. los cuales se pueden clasificar mediante la forma en que se realiza el secado. Existen diversos equipos de secado.5. El secado no adiabático se realiza mediante un calentamiento indirecto del material de interés. tambor rotatorio y los liofilizadores. Las formas de realizar una operación de secado se clasifican en adiabáticos y no adiabáticos. . SUMARIO 785 13. el secador instantáneo y el de lecho fluidizado. En el secado adiabático se agrega aire caliente directamente sobre el material que se desea secar. El diseño de los secadores está basado en una combinación de la teoría de secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de interés.5 Sumario El secado es una operación empleada en la preparación final de los productos.

Resp.4.0175 Kg de agua/Kg de aire seco 13.9 °C. Resp. enfriando primero a 15.. hasta su humedad crítica de 0..5 x 2.2 Kg de agua/Kg de sólido seco.75 m/min.Una torta de filtrado se coloca en una charola de 30.%H = 60% 13. se encuentra a 32.3 h 13.54 cm.6 °C y su temperatura de bulbo seco es 48..6 °C para condensar vapor de agua y después calentándolo a 23. H = 0. Estimar el tiempo para pasar el sólido de una humedad inicial de 0..765 Kg de un alimento mediante.09 Kg de agua/Kg sólido seco.9 % 13.. se obtuvieron los siguientes datos: .Una mezcla ai re-vapor de agua tiene una temperatura de bulbo seco de 65. Calcular: a) El porcentaje de humedad del aire de la habitación.2 °C y a una atmósfera de presión.7 °C.2.5 x 30. El aire fluye en forma paralela a la superficie con una velocidad de 45. Resp.186 m 2 de área. Se seca por la parte superior con aire cuya temperatura de bulbo húmedo es de 26. Resp.6°C y una temperatura de bulbo húmedo de 32. Calcular la humedad de la mezcla.021 Kg de agua Kg aire seco.En el secado de una muestra de 3. (b) H = 0.El aire de una habitación tiene una humedad H de 0.0115 Kg de agua/Kg de aire seco.1.9 °C.3.5. SECADO 13. (a) Calcular la humedad y porcentaje de humedad iniciales.786 CAPÍTULO 13. t = 13. (b) Calcular la humedad y el porcentaje de humedad finales.Se desea secar aire con temperatura de bulbo seco de 37. (a) 67. b) El porcentaje de humedad relativa.6 Problemas 13.8 °C y temperatura de bulbo húmedo de 26.5 % (b) 68.2 °C.un flujo de aire sobre la superficie superior de una charola d< 0.

554 4.019 3. 0.17 Kg/Kg] e) Resp.0 Peso (Kg) 4.m2.0 4.885 4. 4.404 4. PROBLEMAS Tiempo (h) 0.4 0.978 3.8 1.05 Kg/Kg] f) Resp.1 h . b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y granearla contra la humedad del sólido.699 4.0 7. f) Estimar el tiempo para disminuir la humedad del sólido de 0. d) Estimar la humedad crítica.25 a 0.996 Kg/h .09 Kg/Kg. e) Estimar la humedad de equilibrio.808 4.6.0 12.955 787 a) Granear los datos de humedad del sólido W contra el tiempo.0 9.13.241 4.2 3.2 5.944 4. c) Resp.0 0.4 2. 0. 0. d) Resp.150 4. c) Estimar la velocidad de secado en el período de velocidad constante.

H. y Wells. Perry. 2 ed. Nonadiabatic drying. Principies. Process Design. (Ed. y Chilton C. New Jersey. J.). México. 331-362. M. 1988.F. 1973. Vogel. and Equipment. Asenjo.C. John Wiley and Sons. 1983. Gassolid systems. Noyes Publications.H. 5th Ed. P. R.Y. J. New York.A. McCormick.. . 1990. Lucas.E. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.). Porter. En: Separation Processes in Biotechnology. 1-121. Adiabatic drying. Process Design.. P. 12. J. E. Principies. 1983. R.E. y Hu. 11. Quinn. New York.7 Bibliografía Belter. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook. 20. 723-791. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook. Operaciones de Transferencia de Masa. Noyes Publications. 1980. New York.J.L. Downstream processing plant and equipment. H.. Marcel Dekker. H.788 CAPÍTULO 13.P.H. 12. New Jersey. De Vivo. 19. and Equipment.L. Cussler. 617-740. (Ed. En: Chemical Engineer's Handbook. W. SECADO 13. Vogel.C. D. 307-333.). (Ed. Brocklebank. Me Graw Hill. (Eds. Me Graw Hill.A.). R. 11. 317-330. Treybal.

electroforésis es necesario conocer las cargas externas de los productos. sólo para citar algunos ejemplos. precipitación. en la adsorción. selección y manejo de las operaciones de bioséparación. Finalmente en la sección A. Con el propósito de resaltar algunas características básicas de los productos biotecnológicos. compuestos extracelulares o compuestos intracelulares. en este apéndice se presenta una descripción general de la estructura y función de las células y sus principales compuestos. A.l Introducción En los procesos de bioseparación los productos finales pueden ser células enteras.2 de este apéndice se abordan algunos conceptos básicos sobre la estructura celular. lípidos. En la sección A. las cuales 789 . El conocimiento de las características básicas de estos productos es fundamental para el diseño. En las operaciones de liberación de producto es muy importante la naturaleza de la membrana y pared celular. en la sección A.3 se presentan las principales moléculas biológicas: proteínas.4 se establece la forma como puede describirse el crecimiento celular.2 Células y Virus En 1938 Matthias Schleiden y en 1939 Theodor Schwann establecieron que las plantas y los animales están compuestos de células. azúcares y ácidos nucleicos.Apéndice A Material Biológico A.

isotérmico. de moléculas orgánicas autoensamblables. operando bajo el principio de máxima economía en cuanto a partes y procesos.790 APÉNDICE A. El conocimiento actual de los organismos vivos. autorregulables y autoreplicables. Recientemente el hombre ha sido capaz de modificar el contenido genético de las células mediante la transferencia controlada de genes. 2. permite afirmar que un organismo vivo es un sistema abierto. el cual promueve múltiples reacciones secuenciales para la transferencia de energía y para la síntesis de sus componentes. 1989). Todos los seres vivos están compuestos de células y productos celulares. Los virus constituyen también una entidad biológica de gran importancia biotecnológica. por medio de catalizadores orgánicos que ellos mismos producen (Lehininger. MATERIAL BIOLÓGICO son la unidad básica de los seres vivos (Brachet. Sólo se forman células nuevas a partir de células preexistentes. Los organismos vivos pueden clasificarse dependiendo de la estructura y complejidad de sus células en procariotes y eucariotes. 1961). En la actualidad la teoría celular comprende dos ideas básicas: 1. desde los unicelulares hasta los vegetales y mamíferos. creando las células recombinantes. a pesar de no constituir propiamente organizaciones celulares. En esta sección se revisan las características básicas de cuatro tipc de organizaciones biológicas que participan en las bioseparaciones: • Células procarióticas • Células eucarióticas • Células recombinantes • Virus . Dentro de estas categorías se han agrupado desde los más simples hasta los más complejos.

El citosol es todo el material celular contenido por la membrana. CÉLULAS Y VIRUS 791 A. Dentro de los organismos procariotes se encuentran las bacterias y las algas cianófitas. Está compuesta de polisacáridos.5 a 3 finí.1 Células procarióticas Las células procarióticas son las primeras células que surgieron de la evolución biológica. Es en las moléculas de DNA donde se almacena la información genética que le permite a la célula reproducirse y vivir. membrana. Esta membrana es una característica común a todas las células y tiene funciones únicas.2. Aún cuando existen miles de especies diferentes de . en ellas se lleva a cabo la traducción del mensaje genético para realizar la síntesis de proteínas. razón por la cual en ocasiones el material nuclear (ácido desoxirribonucleico o DNA) puede agruparse en más de una región. entre las que destaca su papel como barrera altamente selectiva en la regulación del transporte de moléculas hacia adentro y hacia afuera de la célula. zona nuclear. Las dimensiones típicas de estas células van de 0. son tan sencillas que poseen únicamente una membrana celular y no contienen núcleo. La Figura A. así como sus principales componentes: pared celular.2. Bacterias Las bacterias son los organismos procarióticos de gran importancia biotecnológíca. La región nuclear está desprovista de membrana.l muestra la estructura de una célula de Escherichia coli (E. Los granulos están compuestos de polisacáridos y funcionan como almacenes de combustible. y su función es darle protección a la célula La membrana plasmática de las células procarióticas delimita a la célula y está compuesta por un 45% de lípidos y un 55% de proteínas. coli) que es una procariote típica. ribosomas y granulos. péptidos y lipoproteínas. Los ribosomas son estructuras supramoleculares conformadas por dos subunidades.A. La pared celular o membrana externa. es una estructura que encierra a toda la célula incluyendo la membrana plamática y aparece en algunas células procarióticas.

792 APÉNDICE A. . a) pared celular b) membrana plasmática c) zona nuclear d) ribosomas e) granulos f) citosol. coli).l: Estructura típica de una célula procariote (E. MATERIAL BIOLÓGICO Figura A.

2 se presenta una comparación de las principales características de estas bacterias(Tortora et a/. ya que el proceso de bioseparación que se diseñe debe contemplar la ruptura de la célula. 1989). En el segundo caso cobra especial importancia el conocimiento que se tenga sobre las estructura de la pared y de la membrana celular.2. Metabolitos primarios como aminoácidos. o que el producto permanezca dentro de la bacteria. pigmentos y polisacáridos. CÉLULAS Y VIRUS 793 bacterias. sin embargo presentan una gran diversidad fisiológica que les ha permitido desarrollarse en una gran variedad de habitats. Las diferencias morfológicas entre las bacterias no son muchas. . A las que tienen forma de bastón se les llama bacilos y tienen dimensiones del orden de 0. soportando pH's en el rango de 1 a 11. las células de estos organismos se caracterizan por presentarse solamente en una de tres formas diferentes: esférica o elipsoidal. En la Tabla A.A. Los productos que se obtienen mediante la fermentación con células procariotes pueden ser: Biomasa o protema unicelular. Metabolitos secundarios como antibióticos. En el estudio de la pared celular de bacterias se ha empleado la técnica de tinción de Gram que ha permitido clasificar a las bacterias en bacterias Gram positivas (Gram-(-) y bacterias Gram negativas (Gram). a las que presentan forma esférica se les llama cocos y presentan un diámetro del orden de 1 fim.l se presentan algunas de las células procarióticas que se utilizan para producir productos finales y metabolitos. En particular. Al utilizarse una bacteria para obtener un producto biotecnológico. se pueden presentar dos casos: que la bacteria excrete el producto como parte de su metabolismo. 1985). así como el de la ubicación del producto.0 firn de ancho por 2 a 3 //ra de largo. siendo capaces de desarrollarse tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas (Millis. proteínas y nucleótidos. y temperaturas entre O y 92°C'.5 a 1. cilindrica o de bastón y helicoidal o de espiral. En la Tabla A. Productos finales como solventes y ácidos.

circularía A. B. mesenteroides X.794 APÉNDICE A. mussouriensis B. subtillis ammoniagenes subtillis ammoniagenes L. coagulants E. Bacitracin Antibióticos de Estreptomices Cloranfenicol Eritromicina Kanamicina Lincomicina Estreptomicina Tetraciclina 5. fluorescens Antibióticos de Bacilos Colistina Gramicidina S. lincolnensis 5. aceti P. B. griseus S. venezuelae 5. canamyceticus S.l: Productos obtenidos de organismos procarioticos Producto Organismo Producto Enzimas Amilasa Asparagiiiasa Catalasa Fumarasa (3. . subtilis E. Todos los derechos resé vados. gluiamicum " " " " Lactasa Penicilin acilasa Peuiciliiiase B. ovalis L. delbrueckii P. acetobutylicum Z. carotovora M. coli E. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. polymyxa B.eniform. B. B. subtilis Organismo Ácidos (orgánicos) Acético Glucónico Láctico 2-Oxoglucónico Ácidos (amino) Glutámico Isoleucina Leucina Lisina Valina A. ammoniagenes B. eriytkreus 5. megaterium B. Copyright ©1985. coli E. subtilis B.is Nucleótidos Acido guanílico Acido Xantílico Polisacáridos Dextran Xantana B. mobilis Fuente: Millis.Glucanasa Glucosa isomerasa C. campestris Solventes/combustibles Acetona Etanol C. aureojaciens B. brevis B. 1985. lich. coli. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. lysodeikticus B.

Característica Reacción Gram Gram-Positiva Gram-Negativa Puede ser decolorada Retiene el cristal violeta y permanece y permanece roja de color púrpura Gruesa (multicapa) Delgada (simple) Virtualmente no tiene Bajo Abundantes Ausente Ausente Exotoxinas primarias Alta Alta Marcada Alta Alto Alto Ausentes Presente Presente Endotoxinas primarias Baja Baja (requiere pretratamiento) Mucho menos marcada Baja Capa de peptidoglucano Contenido de lipopolisacáridos Contenido de lípidos y lipoproteínas Ácidos teicoicos Espacio periplásmico Membrana exterior Producción de toxinas Resistencia a rompimiento físico Rompimiento de la pared celular por lisozima Suceptibilidad a detergentes amónicos Resistencia a secado .2.A.2: Características comparativas de las Bacterias Gram-f y Gram-. CÉLULAS Y VIRUS 795 Tabla A.

los organismos superiores como los vegetak y los animales. protozoarios y hongos.3 se presentan esquemas de células eucarióticé típicas: . En la Figura A. En las paredes de las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. Este rígido armazón. MATERIAL BIOLÓGICO Las paredes celulares de las bacterias Gram-f y Gram. que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte.2.(Figura A. Son células de mayor tamaño que las proca riotes alcanzando diámetros hasta de 20 jum. A. cada uno de los cuale realiza una función específica y está limitado por una membrana propia Son células que tienen un núcleo verdadero. En estas últimas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. animales. algunas de las más relevantes son las siguientes: . En las células eucariotica: las funciones se llevan a cabo en organelos. La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la de disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido Nacetilmurámico. las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (D-alanina.2) poseen una característica molecular común.796 APÉNDICE A. recibe el nombre de peptidoglucano o mureína. entrecruzadas covalentemente por medio de cadenas peptídicas. ya que éste esta confinadpor la membrana nuclear. Los microorganismos constituidos de célula eucariotes son: algas. en ambas existe un rígido esqueleto que está constituido por cadenas polisacáridas paralelas. El espacio periplásmico esta constituido por una sustancia semejante a un gel. puede verse en la figura qi existen algunas diferencias esenciales entre las células vegetales y 1. Dglutamina).2 Células Eucarióticas La célula eucariótica tiene un alto nivel de organización y presenta une estructura muy compleja. De este tipo de célula están constituidos además.célula animal y célula vegetal.

2. .A. a) bacterias Grarn-).b) bacterias Gram-.2: Estructura de la pared celular bacteriana. CÉLULAS Y VIRUS 797 pared celular capas de peptidoglucano (a) fosfolípido proteina capa de peptidoglucano lipoproteína lipopolisacarido fosfolfpido pared celular S membrana plasmática (b) fosfolípido Figura A.

El cultivo de células animales presenta problemas que aú: no se solucionan del todo y se encuentra en una etapa de desarrolle . mientras que los mohos se utilizan en le producción de ácido cítrico y antibióticos. En la sección anterior se prestó atención especial a las bacterias pues este tipo de microorganismos es de particular interés en la biotecnología. cuya función es similar a la de las células procarióticas: brindar protección a la célula. En la Tabla A. A diferencia de las células mi crobianas. Las levaduras tienen forma elipsoidal y miden de 1 a 5 fj. Los hongos son microorganismos de dos tipos: mohos y levaduras.m. presentan un diámetro entre 5 — 1 5 fim y una longitud entre 50 — 5000 /ira. Con frecuencia la células animales se cultivan o crecen formando tumores y actualment se están desarrollando nuevas técnicas tanto para su cultivo como par su cosecha. MATERIAL BIOLÓGICO En las células vegetales existe una rígida pared celular.3 se presenta una descripción de las estructuras celulares comunes a todas las células eucarióticas.798 APÉNDICE A. constituida por celulosa. Las células animales no presentan pared celular. que son los organelos en los cuales se lleva a cabo la captura de la energía solar y la conversión de la misma en energía química durante el proceso fotosintético. Los cloroplastos están ausentes de las células animales. Los mohos son hongos superiores con estructuras vegetativas llamadas miscelios. interesan particularmente los hongos. y sus funciones. Las levaduras son ampliamente usadas. Las células animales presen tan varias formas dependiendo del tipo de tejido al cual pertenecen ^ su diámetro aproximado es de 20 //m. por ejemplo en \¿ producción de bebidas y pan. la velocidad de crecimiento en las células animales es baja Su crecimiento presenta inhibición por contacto. Las células vegetales presentan cloroplastos. En el caso de las células eucariotes además de las células de organismos superiores. Recientemente también las células eucarióticas animales han sid( utilizadas en los procesos biotecnológicos. En la Tabla A.4 se presen tan algunos productos obtenidos a partir de algunas célula eucariote: (levaduras y mohos).

CÉLULAS Y VIRUS 799 Cuerpo de inclusión Citoplasma Vacuola Membrana celular Tilacoides Cloroplasto Figura A. b) célula vegetal. célula animal.A. .2.3: Células eucariotes típicas: a).

Control de la célula Lugar de síntesis ribosómica. Contiene enzimas que degradan material ingerido. regula el paso de materiales hacía dentro y fuera de la célula. las secreciones y desperdicios celulares. origen de vesículas intracelulares de transporte.3: Estructuras comunes de las células eucarióticas y sus funciones. Contiene al citoplasma. consta de RNA y proteínas. contiene nucléolo y cromosomas Cuerpo granular dentro del núcleo. hongos y algas) Lisosomas Vacuolas . algunos unidos al RE. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. comunica a la célula con otras. Transporta y almacena material ingerido. Síntesis de polipéptidos (proteínas) Modifica. Compuestos de un complejo de DNA y proteínas llamado cromatina. Sitio de síntesis de lípidos y de proteínas de membrana.800 APÉNDICE A. desperdicios y agua. Estructura Descripción Función Núcleo Celular Núcleo Nucléolo Gran estructura rodeada por una doble membrana. Cromosomas Sistema de Membranas de la Célula Membrana Celular Membrana limitante de la Célula viva Retículo endoplasmático (RE) Red de membranas internas que se extienden a través del citoplasma Ribosomas Aparato de Golgi Granulos compuestos de RNA y proteínas. ayuda a mantener la forma celular. otros libres en el citoplasma Compuesto de saculacioiies membranosas planas Sacos membranosos (en animales) Sacos membranosos (en plantas. ensamble de subunidades del ribosoma Contienen genes (unidades de información hereditaria que gobiernan la estructura y actividad celular). empaca (para secreción) y distribuye proteínas a vacuolas y a otros organelos. que acarrean proteínas en proceso de secreción.

ochraceus. A. radicóla Hidroxilación en F.Neutra Solvente/combustible Etanol A. A. acremonium F. A.ei A. oryzae. cereviseae A.A. 7. A.2. Todos los derechos reservados. lunata. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. A. Copyright ©1985. niger M.ieh.Alcalina . rn. CÉLULAS Y VIRUS 801 Tabla A. A. gossypii . niger A. oryzae S. A. 11 y 15 C. chrosogenum A. niger C. R. oryzeae. oryzae. niger S. niger A. 1985. oryzae. graminearum P.4: Productos obtenidos de organismos eucariotes Organismos Ácidos Cítrico Furnárico Glucónico Antibióticos Cefalosporina (C y P) Zeranol Penicilinas Enzimas a— Amilasa Catalasa Glucosa oxidasa Invertasa Lipasa Proteasa . nigricans.Acida . niger. oryzae. cereviseae Conversión de esteroides Deshidrogenación en 1 y 2 C.9. niger Vitaminas Riboflavina Adaptada de: Millis. A. niger R. oryzae A. niger A. A. nigricus A. javanicum 6.

coli. Debido a la simp cidad de las células procarióticas y a su alta velocidad de crecimient ha sido posible aplicar exitosamente en estas células las técnicas de ingeniería genética. 1985. Copyright ©1985.3 Células Recombinantes La manipulación de la molécula de DNA utilizando técnicas de inge niería genética ha permitido transformar células silvestres en célula recombinantes. Todos los derechos reservados. sólo que a las células recombinantes se le ha transferido o adicionado uno o más genes. activador del plasminógeno tisular. entre otros. Los microorganismos más utilizados para producir células recomb nantes son las bacterias y en particular la E. vacunas. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. anticuerpos monoclonales. . De est manera. con el propósito que 1 célula exprese la información que está codificada en tales genes. interferones.802 APÉNDICE A. insulin humana. A.5 se presentan algunos productos obtenidos a partir de este tipo de células. por medio del cultivo de células recombinantes ha sido posibl la obtención de productos tales como hormona de crecimiento. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A.2. La organización celular de la recombinante es la mism que la de la célula natural.5: Productos obtenidos de células animales Producto Interferón Urokinasa Vacunas virales: Influenza Enfermedad de Newcastle Rubéola Fiebre amarilla Adaptada de: Millis. Linea celular Leucocitos humanos Riñon humano Fluido Fluido Fluido Fluido de de de de embrión embrión embrión embrión de de de de pollo pollo pato pollo En la Tabla A.

El genoma se encuentra encerrado dentro de una cápsula constituida de proteína. Cada protema tiene en su forma nativa una forma tridimensional característica llamada conformación.000.6 se listan algunas proteínas de estos tipos y se especifican sus funciones. Los virus constituyen un material biológico cuya única función es la autoreplicación.3.000 daltons.3. BIOMOLECULAS.1 Proteínas Las proteínas son polímeros de alto peso molecular formadas por subunidades llamadas aminoácidos. Su genoma puede estar constituido por DNA o RNA pero nunca por ambos y constar de una o dos cadenas. En la Tabla A.000 y 40. Su tamaño varía entre 0. De acuerdo a su conformación las proteínas pueden clasificarse en fibrosas y globulares. El virus carece de membrana y no tiene citoplasma. A. 803 A.1 //m y su importancia radica en que son ampliamente utilizados en la producción de vacunas. El peso molecular de éstas oscila entre 5.A. En esta sección se estudia la estructura y principales propiedades de cuatro tipos de moléculas constituyentes de las células: • Proteínas • Carbohidratos • Lípidos • Ácidos nucleicos A. constituyen el 50% o más de su peso seco. Son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula. lo cual ocurre únicamente cuando parasitan a una célula.03 — 0.4 Virus. Existen muchas clases diferentes de proteínas y cada una de ellas se especializa en una función biológica diferente. 3 Biomoléculas. . En general los virus se clasifican por sus características morfológicas.2.

804 APÉNDICE A.6: Clasificación de las proteínas por su función biológica Tipos y ejemplos Enzimas: Hexoquinasa Citocromo c DNA-polimerasa Proteínas de reserva: Ovoalbúmina Caseína Ferritina Proteínas de transporte: Hemoglobina Mioglobina Seroalbúmina /?i-Lipoproteína Localización o función Fosforila glucosa Transfiere electrones Replica y repara DNA Proteíiia de la clara de huevo Proteína de la leche Reserva de hierro en el bazo Transporta O-¿ en la sangre de los vertebrados Transporta O-¿ en el músculo Transporta ácidos grasos en la sangre Transporta I/pidos en la sangre Proteínas contráctiles: Miosina Dineína Proteínas protectoras en la sangre de los vertebrados: Anticuerpos Fibrinógeno Trombina Toxinas: Toxina diftérica Venenos de serpiente Gosipina Hormonas: Insulina Hormona adrenocorticotrópica Hormona del crecimiento Proteínas estructurales: Proteínas de recubrimiento viral Glucoproteíiias a-Queratina Colágeno Elastina Mucoproteíiias Filamentos estacionarios en las miofibrillas Cilios y Bájelos Forman complejos con proteínas extrañas Precursor de la fibrina en la coagulación sanguínea Componente del mecanismo de coagulación Toxina bacteriana Enzimas que hidrolizan los fosfoglicéridos Proteína tóxica de la semilla de algodón Regula el metabolismo de la glucosa Regula la síntesis de corticoesteroides Estimula el crecimiento de los huesos Cubierta alrededor del cromosoma Recubrimientos celulares y paredes Piel plumas uñas pezuñas Tejido conectivo fibroso (tendones. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. carflago) Tejido conectivo elástico (ligamentos) Secreciones mucosas. fluido sinovia! .

16% de nitrógeno y de O a 3% de azufre. Dependiendo de su composición. 7% de hidrógeno.7: Clasificación de las proteínas conjugadas Proteína Conjugada Nucleoproteína Lipoproteína Glicoprote/na Hemoproteína Flavoproteína Metaloproteína Grupo Prostético Acido nucleico Lípido Oligosacárido Hierro Nucleótido de flavina Metal 805 Las proteínas fibrosas son insolubles en agua y en soluciones salinas diluidas. Ejemplos de esta clase de proteínas son el colágeno. .7 (Palmer. 23% de oxígeno. también los anticuerpos. 1991). Tabla A. Las simples son aquellas que por hidrólisis producen solamente aminoácidos y contienen generalmente 50% de carbono. lo que sugiere que la función de cada una de ellas puede estar determinada por la secuencia de aminoácidos de su cadena polipéptidica. Todas las enzimas son proteínas globulares.A. Todas las proteínas que se conocen tienen funciones diferentes dentro de la célula y están constituidas por únicamente 20 tipos de aminoácidos. Las conjugadas son aquellas que por hidrólisis producen no solamente aminoácidos. Las proteínas globulares por regla general son solubles en agua y tienen una función activa dentro de la célula. De acuerdo a la naturaleza química de este grupo las proteínas conjugadas se clasifican en los seis grupos que se muestran en la Tabla A. la a—queratina y la elastina. En consecuencia es importante conocer la estructura de los aminoácidos que las constituyen. las proteínas se dividen en simples y conjugadas. BIOMOLECULAS. sino también algunos componente orgánicos o inorgánicos. algunas hormonas y muchas proteínas de transporte como la hemoglobina.3. físicamente son muy resistentes y constituyen los elementos estructurales básicos del tejido conjuntivo de los animales superiores. La porción no aminoácida de la proteína conjugada se denomina grupo prostético.

triptofano y metionina Los grupos R de los primeros cinco son hidrocarburos alifáticos. Todos ellos tienen un grupo carboxilo libre y un grupo amino libre.806 APÉNDICE A. De acuerdo a esta clasificación existen dos clases principales de aminoácidos: con grupos R no polares y con grupos R polares. isoleucina.4: Fórmula de la estructura general de los a— aminoácidos encontrados en las proteínas Aminoácidos La Figura A. Los aminoácidos no polares o hidrofóbicos son: alanina leucina. excepto la prolina. MATERIAL BIOLÓGICO H I R-C-COOH I NHa Figura A. prolina. es decir.4 muestra la estructura general de los 20 aminoácidos que se encuentran en las proteínas. valina. Los aminoácidos se caracterizan además por una cadena lateral o grupo R sustituido en su carbono a. Los a— aminoácidos se han clasificado en base a la polaridad de sus grupos R. Los grupos polares pueden s< . enteramente covalente y es hidrofobia). es relativamente in soluble en soluciones acuosas y soluble en solventes orgánicos com< el hexáno. Aminoácidos con grupos R no polares: Un grupo no polar e. es más soluble en agua que un n polar debido a que en soluciones acuosas su estructura puede ser e. fenilalanina. el grup> R del último contiene azufre y los dos restantes contienen un anill aromático dentro del grupo R. puesto que el grupo amino está sobre el átomo de carbono a. Aminoácidos con grupos R polares: Un grupo R polar tieri carácter iónico y es hidrofílico. tabilizada por puentes de hidrógeno. Todos los aminoácidos encontrados en las proteínas son a— aminoácidos.

BIOMOLECULAS. Los aminoácidos tanto en forma cristalina como en solución. neutros. La histidina presenta un grupo funcional imidazol y posee propiedades límites. Propiedades ácido-básicas de los aminoácidos. arginina e histidina. Presentan carga negativa debido a que cada uno de ellos posee en el grupo R un segundo grupo carboxilo que se encuentra completamente ionizado y. Esto se traduce en altas constantes dieléctricas y altos puntos de fusión. 3. la cisteína cuya polaridad proviene de la presencia de un grupo sulfhidrilo y finalmente la glicocola. 807 1. Polares con carga negativa (ácidos): Los aminoácidos que presentan carga neta negativa a pH 7 son los ácidos aspártico y glutámico. Dentro de estos aminoácidos. pero a pH 7 menos del 10% de ellas poseen carga positiva. que en muchos casos se considera como no polar. cargado negativamente. En la Figura A. básicos o ácidos. 2. Polares con carga positiva (básicos): En este grupo se encuentran los aminoácidos que poseen carga neta positiva a pH 7. presentan una estructura ionizada que genera considerables momentos dipolares. por lo tanto. A pH 6 más del 50% de las moléculas de histidina poseen un grupo R cargado positivamente.5 se muestran las formas: no ionizada y de ion híbrido de los aminoácidos. De acuerdo con esta teoría. cuando un aminoácido en forma de ion híbrido cristalizado se disuelve . El comportamiento ácido-base de los aminoácidos se formula en términos de la teoría de Brónsted-Lowry. Todos ellos tienen seis átomos de carbono y son: lisina. En gran medida la comprensión del comportamiento de las proteínas está basada en el conocimiento de las propiedades ácido-base de los aminoácidos que la constituyen.3.A. la asparagina y la glutamina cuya polaridad proviene de sus grupos amídicos. treonina y tirosina que deben su polaridad a sus grupos hidroxilo. Polares sin carga : En este grupo se encuentran los aminoácidos: serina. la cisteína y la tirosina son los que presentan una polaridad más marcada.

Por ejemplo. Niveles Estructurales de la Proteína Comúnmente se emplean cuatro términos para designar los diferente. puede actuar como un ácido (donador de protones) o como una base (aceptor de electrones). MATERIAL H | BIOLÓGICO R— C— COOH NH2 R —c— COO Figura A. estructura terciaria y estructura cuaternaria.«-> H3N+CH(CH3)COOH las sustancias que poseen esta propiedad son anfóteras y se denominar anfólitos.808 H I APÉNDICE A. 6 a). s< encuentran unidos entre sí formando las llamadas cadenas peptídicas La estructura primaria como se muestra en la Figura A. niveles estructurales de la proteína: estructura primaria. 5: Formas de un aminoácido: a) no disociada b) de ion híbrido. con el grupo a— animo de el siguiente aminoácido de la cadena. si se disuelve alanina en agua ésta puede actuar en alguna de las siguientes formas (Lehninger. Est . en agua. Los aminoácidos que forman las proteínas. 1989): como ácido: H3N+CH(CH3)COO~ <-* H+ + H2NCH(CH)3COQcomo base: H+ + H3N+CH(CH3)COQ. es la s€ cuencia de aminoácidos que forma el esqueleto covalente de dichas ca denas. estructura secundaria. Estructura Primaria. Un enlace peptídico une el grupo a— carboxilo de un aminoácid.

.A. d) Estructura cuaternaria. Figura A. BIOMOLECULAS. 809 a) Estructura primaría: s«cu«ncfa d* aminoácidos R« R* R« R H H O H H O H H O H H O b) Estructura secundaria: hélice y laminar aminoácido c) Estructura terciaria.3.6: Niveles estructurales de la proteína: a) Estructura primaria b) Estructura secundaria c) Estructura terciaria d) Estructura cuaternaria.

6 b) se refiere al ordenamiento regular y periódico que presenta al menos parte de una cadena polipeptídica a lo largo de una dirección. Este tipo de estructura es estabilizada por los enlaces que se presentan entre los residuos aminoácidos de diferentes partes de la cadena. La direccionalidad del ordenamiento se pierde con la presencia de ciertos aminoácidos en este arreglo regular y se pasa a otro nivel estructural.810 APÉNDICE A. dos aminoácidos que . Debe notarse que debido al giro de la cadena peptídica. MATERIAL BIOLÓGICO es un enlace covalente altamente estable en el cual el grupo imino (NH-) del enlace no posee tendencia significativa a ionizarse o a captar protones en el intervalo de pH entre O y 14 y el enlace C-N (que posee 40% de carácter de enlace covalente doble) del enlace peptídico es relativamente rígido y no puede girar libremente. se ha encontrado que cada cadena polipeptídica tiene solamente una forma característica de doblamiento en esos puntos. Estructura Secundaria: La estructura secundaria de una proteína (Figura A. Sin embargo. puede presentarse otro tipo de enlace covalente que es el enlace disulfuro de la cisteina. Estructura Terciaria: El hecho de que existen aminoácidos que pueden ocasionar el cambio de dirección de la cadena. a este arreglo específico se le llama estructura terciaria. La estructura secundaria es característica en las proteínas fibrosas. En esta estructura los grupos R quedan fuera de la cadena y cada cadena presenta en un extremo un grupo a—amino libre y en el otro extremo un grupo carboxilo libre. Este actúa en algunas proteínas como enlace transversal entre dos cadenas polipeptídicas separadas o entre curvaturas de una misma cadena. Existe una amplia evidencia experimental que indica que el enlace peptídico es el único enlace covalente que existe entre los aminoácidos que forman la cadena. Cuando dos aminoácidos se unen por medio de este enlace se pierde una molécula de agua. Sin embargo. el cual es estabilizado por puentes de hidrógeno entre los grupos R de la misma cadena. conduce a que exista un gran número de diferentes posibles estructuras de la cadena originadas por la libre rotación alrededor de los enlaces en ese punto de doblamiento. por lo que se comunmente se dice que sólo se unen los residuos.

Esto es. interacciones electrostáticas. Por lo tanto las interacciones que mantienen la conformación de la proteína son diversas y complejas. En estas condiciones se dice que la proteína está desnaturalizada. Enlaces que Mantienen la Estructura de la Proteína Debido a los aminoácidos que conforman las proteínas. y que es posible que la proteína recupere su conformación nativa mediante un proceso llamado renaturalización. Conformación: A la estructura combinada secundaria. regiones neutras y regiones no polares. Cuando las proteínas globulares se exponen a pH extremos o a altas temperaturas pierden su conformación y consecuentemente su actividad. Las proteínas mantienen su actividad biológica sólo en un estrecho rango de temperatura y pH. pueden quedar espacialmente juntos en la estructura terciaria. La mayoría de las proteínas grandes. de tal manera que en su superficie existen regiones cargadas positivamente. ya sean globulares o fibrosas poseen dos o más cadenas polipeptídicas. 811 estén muy separados entre sí en la estructura primaria. Se ha encontrado que la desnaturalización no afecta los enlaces covalentes de la secuencia peptídica (estructura primaria). Se denomina conformación nativa y es la que le confiere actividad biológica y estabilidad a la proteína. interacciones de . negativamente. terciana y cuaternaria de una proteína se le llama conformación.A. efectos dipolares (puentes de hidrógeno). Las cadenas polipeptídicas de una protema poseen solamente una conformación en condiciones normales de temperatura y pH. éstas presentan características anfotéricas. siendo el efecto más visible de esto un descenso en su solubilidad. BIOMOLECULAS. Estructura Cuaternaria: La estructura cuaternaria se refiere a la estructura tridimensional completa de una proteína. la forma en que se disponen en el espacio las cadenas polipeptídicas individuales de una proteína que posee más de una cadena. Ese hecho sugiere que la secuencia de aminoácidos de la cadena polipeptídica contiene la información necesaria para especificar su conformación nativa. entre éstas se encuentran: enlaces covalentes (simples y dobles).3.

Por otra parte. la fuerza electrostática es mucho mayor. La distribución de los electrones entre los átomos produce una fuerza neta de atracción electrostática que mantiene unidos a los átomos y les proporciona una gran estabilidad. son las interacciones electrostáticas que se presentan entre los grupos cargados de éstas. sea bastante estable. Las características más importantes de estas interacciones son las siguientes: Enlaces Covalentes. en este enlace cada átomo aporta un electrón. lo que ocasiona que las moléculas no puedan rotar alrededor del enlace. el enlace covalente permite que los átomos unidos por él puedan girar libremente en torno al enlace. la distancia es menor y el enlace es mucho más rígido. La distancia entre los átomos que están involucrados en este enlace es de 2 a 4 A (Angstroms). Cuando un par de electrones es compartido por dos átomos se forma un enlace covalente. Las estructuras terciaria y cuaternaria de la proteína pueden involucrar interacciones electrostáticas entre aminoácidos con grupos R que . MATERIAL BIOLÓGICO van der Waals e interacciones hidrofóbicas.812 APÉNDICE A. e es la carga eléctrica del electrón. la cual está constituida de residuos de aminoácidos unidos entre si por enlaces covalentes peptídicos. r es la distancia entre los grupos y D es la constante dieléctrica del medio . Otro mecanismo que contribuye a la estabilidad de las moléculas de proteína. La interacción electrostática ocurre entre pares de grupos en el mismo medio. En este caso. Si dos átomos comparten dos pares de electrones entre ellos entonces se forma un enlace covalente doble. Otros enlaces covalentes que se presentan son los enlaces disulfuro (S-S-) de la cistina. Por lo antes mencionado puede esperarse que la estructura primaria de la proteína. éstos están involucrados en el mantenimiento de la estructura terciaria de la proteína. Interacciones Electrostáticas. La fuerza (F1) entre dos grupos (A y B) en una solución diluida está dada por la Ley de Coulomb: ZAZBe2 Dr* donde Z¿ y Zg son los números de unidades de carga acarreados por el grupo A y B respectivamente.

Los enlaces de hidrógeno son relativamente débiles comparados con los covalentes.5 y 5 A°. Hay muchas moléculas que tienen un momento dipolar eléctrico permanente. el cual se forma entre átomos de oxígeno (carga parcial negativa) de un grupo.5 Kcal/mol. Este efecto origina que el átomo con mayor densidad electrónica tenga una carga parcial negativa y pueda formar enlaces electrostáticos débiles con otro átomo que tenga una carga parcial positiva. sino que los electrones pueden asociarse más con uno de ellos que con el otro. como ya se dijo antes. Una molécula polar es capaz de atraer a otras moléculas que normalmente no presentan momento dipolar. Debido a este efecto las moléculas de agua presentan una alta estabilidad ya que todas ellas se unen por puentes de hidrógeno. la molécula de agua. Los enlaces de hidrógeno en agua líquida poseen una energía de enlace de aproximadamente 4. así como también entre los diferentes residuos aminoácidos de una misma cadena. el puente de hidrógeno presenta un efecto coligativo. 813 tengan cargas opuestas.3. Enlaces de van der Waals. por ejemplo entre lisina y ácido glutámico. El .A. produciéndose así una distribución asimétrica de carga entre los átomos llamada efecto dipolar. terciaria y cuaternaria de la proteína. Sin embargo. La distancia a la cual ocurren este tipo de enlaces está entre 1. BIOMOLECULAS. lo cual contribuye a incrementar la estabilidad de las estructuras secundaria. en particular. mientras que los enlaces covalentes H-O de la misma poseen una energía de enlace de 110 Kcal/mol. ocasionando que se intensifique la fuerza de atracción entre las moléculas de agua. En contraparte a su baja energía de enlace. cabe mencionar que en un medio acuoso un grupo cargado establece enlaces con el agua más fácilmente que con cualquier otro grupo cargado de la proteína. Cuando la proteína se encuentra en solución acuosa se pueden establecer enlaces de hidrógeno entre los diferentes péptidos de ésta y el medio. Efectos Dipolares En la formación de enlaces covalentes ocurre con frecuencia que el par de electrones no está igualmente compartido entre los dos átomos. El enlace más importante de este tipo es el enlace de hidrógeno o puente de hidrógeno. y átomos de hidrógeno (carga parcial positiva) en el otro.

los aminoácidos que presentan grupos R no polares (hidrofóbicos) no pueden establecer puentes de hidrógeno con el agua y con frecuencia forman regiones hidrofóbicas constituidas por varios aminoácidos no polares. oligosacácridos y polisacáridos. la~ estructura más estable para una proteína en solución acuosa será aquella que posibilite la formación del mayor número de enlaces de hidrógeno entre ésta y el medio acuoso que la rodea. Esto hace que este tipo de enlaces sea muy importante en la estabilidad de la estructura terciaria de la proteína. con n > 3. Estos enlaces juegan un importante papel en el tipo de estructura tridimensional que adopta la proteína. Enlaces no polares o Hidrofóbicos Los enlaces hidrofóbicos se realizan estre especies no polares y se explican mejor en el marco de los sistemas proteína-solvente. los cambios de fase. Ahora bien. la cohesión y la viscosidad. A. MATERIAL BIOLÓGICO campo eléctrico de la molécula polar produce una distribución asimétrica de densidad de cargas en la otra molécula. La fórmula general de los carbohidratos es ((7//20) n .3. las cuales normalmente se encuentran en el interior de la estructura proteica. Las moléculas de agua se unen entre sí por medio de enlaces de hidrógeno y son muy estables. Son mucho más débiles que los enlaces covalentes y de ellos depende además.814 APÉNDICE A. de tal manera que se crea un dipolo inducido en el mismo sentido al de aquella. . disacáridos. Los enlaces que resultan de estos efectos dipolares son llamados enlaces de van der Waals. Consecuentemente. El resultado es una fuerza de atracción entre ellas. la tensión superficial. Su radio de acción va de 10 a 1000 °A. Funcionan como elementos estructurales y en particular los polisacáridos funcionan como almacenes de combustible. Los carbohidratos se dividen en: monosacáridos.2 Carbohidratos Los carbohidratos o sacáridos son compuestos que se encuentran en todos los seres vivos. la adherencia.

8 se presentan los monosacáridos más comunmente encontrados en la naturaleza. Uno de los monosacáridos más importantes es la D.7: Estructura química de la D.glucosa 5 CHjOH CH2OH OH )H Figura A. Otro monosacárido de interés es el azúcar de cinco carbonos llamado D. Los monosacáridos de tres carbonos son llamados triosas.glucosa.acetil- .8).A. Un derivado importante de los monosacáridos es el ácido N . En solución la D. los de cinco pentosas y los de seis carbonos se denominan hexosas. 815 Figura A.glucosa Los monosacáridos o azúcares simples son los carbohidratos más pequeños y contienen de tres a nueve carbonos. En la Tabla A.7. BIOMOLECULAS.Ribosa (Figura A. La D-glucosa puede existir en dos formas isoméricas diferentes: a— Dglucosa y la (3— D.8: Estructura química de: a) Ribosa b) Desoxirribosa Monosacáridos: D.glucosa. debido a que es el principal componente de los ácidos nucleicos tanto en su forma natural como oxidada (desoxiribosa).3.glucosa se presenta comunmente con una estructura en forma de anillo como la que se muestra en la Figura A.

MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A.816 APÉNDICE A.8: Monosacáridos presentes en los sistemas biológicos Aldosas derivadas de aldehido CHO Clase Triosa (tres carbonos) Cetosas derivadas de ke tonas CHiOH HCOH CH2OH D-Gliceraldehido Pentosa (cinco carbonos) CHO C =O \ \ CH-zOH Dihiroxiacetona CH-¿OH C =0 HCOH HCOH HCOH CH^OH D-Ribosa Hexosa (seis carbonos) í7//0 HC 1OH HCOH HCOH CH2OH D-Flibulosa CHO \ HCOH HOí 7W HOí 7// HC1OH CH2OH D-Galactosa CH2OH \ C =O i 1 HOCH i 1 HCOH i 1 HCOH 1 CH?OH D-Fructuosa HOí 7// HC 1OH HC 1OH CH?OH D-Glucosa CHO \ HOCH i 1 HOCH \ \ HCOH i 1 HCOH i 1 CH2OH D-Manosa .

La a— amilasa son cadenas largas no ramificadas del monosacárido D.glucosa con enlaces a(\ —* 4) glucosídicos y» en los puntos de ramificación los enlaces son a (I —> 6) glucosídicos.glucosa unidas entre si por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. El glucógeno. Está constituido por el aminoazúcar N . interviene el monosacárido D-glucosa. La celulosa es un polímero lineal de la D.A. excepto en los puntos de ramificación donde el enlace que se presenta es a(l —> 6) glucosídico. BIOMOLECULAS.3. 817 murámico que es la unidad estructural más importante del esqueleto polisacárido de las paredes celulares bacterianas. trisacáridos y.(l —> 4). . También es un polisacárido de la D. El almidón es la forma principal de almacenamiento de energía en muchas plantas. en forma general a polisacáridos. parecido al almidón en estructura. Es el principal componente de la madera y el algodón. unidas entre sí por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. la celulosa y el glucógeno.glucosa que posee enlaces /?(! —* 4) glucosídicos. Se presenta en forma de cadenas mucho más ramificadas que las de la amilopectina. es el principal polisacárido de reserva de las células animales. Mediante este tipo de enlaces los monosacáridos dan origen a los disacáridos.glucosa. En las células hepáticas el glucógeno aparece en forma de granulos. se encuentra en dos formas: la a— amilasa y la amilopectina. Los enlaces glucosídicos más comunes son: el o.acetil-D-glucosamina unido mediante enlace éster al ácido D-láctico. Los monosacáridos pueden unirse entre sí mediante enlaces llamados glucosídicos. Se encuentra en cantidades importantes en el hígado (10% de su peso húmedo). La amilopectina forma cadenas ramificadas constituidas por unidades de D. el ¡3(1 —> 4) y el a(l -> 6) Polisacáridos En la síntesis de la mayoría de los polisacáridos como el almidón. La celulosa es componente estructural de las paredes celulares y es el polisacárido más abundante en el reino vegetal.

MATERIAL Tabla A. Debido a esta característica los lípidos se encuentran presentes en fases biológicas no acuosas.Esteroides . b) Formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico c) Componentes de la superficie celular relacionados con el reconocimiento de las células.Esfingolípidos .Fosfoglicéridos .Acilglicéridos .9). Desempeñan importantes funciones biológicas como: a) Componentes estructurales de las membranas. Los primeros se caracteriza] .Terpenos . la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos.Ceras - Glicerina 3 fosfato de glicerilo Esfingosina Alcoholes no polares de elevado peso molecular Simples (insapouificables) . en lípidos com piejos y lípidos simples (Tabla A. el cloroformo y el éter. de acuerdo a su estructura. Los lípidos se clasifican.Prostraglandinas A. las cuales sirven como almacenes de combustible Los lípidos además se presentan formando parte de moléculas más com plejas como las lipoproteínas y los glucolípidos.818 APÉNDICE A.3.9: Clasificación de los lípidos Tipo de L'pido Esqueleto BIOLÓGICO Complejos (saponifícables) . Dentro de las lípidos se encuentran las hormonas y las vitaminaí que son sustancias que presentan una alta actividad biológica. así come también las grasas.3 Lípidos Los lípidos son moléculas biológicas prácticamente insolubles en el agua y pueden extraerse de sus fuentes mediante solventes no polares como el benceno.

Un ácido graso insaturado se forma cuando se reemplaza un enlace saturado (-C — C—} por un enlace doble (—C = C—).9 muestra la fórmula general de los ácidos grasos saturados. La Figura A. 819 CH3 — ( CH2 )„ — C Figura A. lo que provoca que la cadena hidrocarbonada sólo presente dos tipos de configuraciones en sus enlaces dobles: .3. Los segundos no contienen ácidos grasos en su estructura y por lo tanto son no saponificables. La forma de cadena extendida que adopta este tipo de ácidos grasos es la de mínima energía. Los ácidos grasos saturados presentan cadenas hidrocarbonadas que pueden existir en un número infinito de conformaciones debido a que los enlaces simples que unen los átomos de carbono pueden girar libremente.A. En este tipo de ácidos.9: Fórmula general de los ácidos grasos saturados porque contienen ácidos grasos como componentes y también reciben el nombre de lípidos saponificables porque pueden producir jabones al reaccionar con álcalis. y entre los insaturados está el ácido oleico (Cis)Los ácidos grasos saturados e insaturados difieren en sus configuraciones estructurales. Ácidos Grasos Los ácidos grasos se encuentran en grandes cantidades en los sistemas biológicos como componentes de los lípidos complejos. Este no es el caso de los ácidos grasos insaturados. Los ácidos grasos más abundantes encontrados en las plantas y en los animales poseen un número par de átomos de carbono. BIOMOLECULAS. las cadenas hidrocarbonadas tienen entre 14 y 22 átomos de carbono. los ácidos grasos pueden ser saturados o insaturados. Entre los ácidos grasos saturados más comunes se encuentran el ácido palmítico (C\o) y el ácido esteárico (Cis). los sitios donde se unen los átomos de carbono por medio de un enlace doble presentan un doblamiento rígido en la cadena. Dependiendo de su cadena hidocarbonada.

ésto se debe a que su larga cadena hidrocarbonada no es soluble en soluciones acuosas. cuando un lípido polar (por ejemplo un fosfoglicérido) es colocado en una interfase aire . 10). bicapas y micelas lipídicas: Los lípidos son biomoléculas prácticamente insolubles en el agua. MATERIAL BIOLÓGICO la configuración cis y la configuración trans. Los liposomas (Figura A.lOd) son estructuras vesiculares formadas por bicapas completamente cerradas. Tanto las vitaminas como las hormonas son muy importantes en el funcionamiento normal de la célula y son requeridas por ésta en cantidades muy pequeñas. En la interfase aire .820 APÉNDICE A. mientras que las cabezas polares (hidrofílicas) están expuestas en la superficie. 10a se observa como se forman en agua los agregados llamados micelas. Los esteroides son lípidos que presentan una estructura básica general que se muestra en la Figura A. Los fosfoglicéridos forman también bicapas para separar dos compartimentos acuosos.agua (Figura A. Dentro de los primeros se encuentran algunas vitaminas y dentro de los segundos algunas hormonas. Este tipo de sistemas de bicapas tienen algunas propiedades físicas similares a las de las membranas protoplasmáticas y son objeto de estudio como modelos de membranas naturales. Lípidos Simples Los lípidos sencillos no contienen ácidos grasos como componentes estructurales. Monocapas. Dentro de éstos se encuentran las hor- . En este tipo de estructuras las colas hidrocarbonadas se orientan en forma opuesta al medio acuoso y forman una fase hidrofóbica interna. aparecen en las células y en los tejidos en cantidades menores que los lípidos complejos y algunos de ellos tienen una intensa actividad biológicas.lOb. Hay dos clases de lípidos sencillos: los terpenos y los esteroides. Todos los esteroides se originan del escualeno (Figura A . las cabezas polares y las colas hidrofóficas dan lugar a diversos arreglos (Figura A. l l b ) .lOc) se forma una monocapa con el grupo polar hidratado y la cola orientada hacia el aire. o en agua.agua. En la Figura A. sin embargo el grupo carboxilo que presentan es hidrofílico. 11 a. que se forman por exposición de suspensiones de fosfoglicéridos en agua con oscilación sónica. Debido a lo anterior. como se muestra en la Figura A.

10: Sistemas estables fosfoglicérido-agua.A. 821 Pared Agua Aire WLULLILÜUM Agua Agua Figura A. a) Micelas formadas en el agua. c) Monocapa en la interfase aire-agua d) Sección transversal de un liposoma. BIOMOLECULAS.3. . b) Bicapa de fosfoglicérido que separa dos compartimentos acuosos.

11: Estructura de algunos esteroides: a) Estructura básic general b) Estructura del escualeno c) Estructura del colesterol . MATERIAL BIOLÓGICO <?H. CH. Cf C Cl C-CH—CH2-CH1-¿-CH-CH2-CH2-C-CH-CH2-CH2-CH= C-CH2-CH-CH-C-CH2— CH.)2 CH. CH. CH. I HC—(CH2)3-CH-(CH.822 APÉNDICE A.' Figura A. b CH. CH.

Singer y G.A. El modelo mas usado de la estructura de membrana es el modelo del mozaico fluido de S. Los principales tipos de lipoproteínas son: lipoproteínas de transporte y sistemas de membranas. BIOMOLECULAS. 823 monas. En estos sistemas los lípidos y las proteínas se mantienen unidos mediante enlaces hidrofóbicos que se establecen entre las componentes no polares de estas biomoléculas. Este modelo establece que los fosfolípidos de las membranas se hallan ordenados en bicapas formando una matriz fluida de cristales líquidos y postula que las proteínas de la membrana son globulares. El colesterol (Figura A.J. Las hormonas pueden ser efectivas a niveles de 10~18 M en tejidos humanos. Este tipo de lipoproteínas transportan lípidos insolubles en agua entre los diferentes órganos por medio de la sangre. las cuales son controladores extremadamente potentes de las velocidades de reacción en los sistemas biológicos. Las lipoproteínas de transporte son complejos característicos del plasma sanguíneo. Los sistemas de membranas pueden llegar a constituir hasta el 80% de la masa celular seca total en algunas células eucarióticas. los estrógenos (hormonas sexuales femeninas). en forma de partículas muy pequeñas cuyo diámetro y peso permanece constante. en los cuales se fusionan las propiedades físicas de las dos biomoléculas. es el precursor de muchos otros esteroides dentro de los cuales se incluyen: los andrógenos ( hormonas sexuales masculinas). la progesterona y las hormonas adrenocorticales. L.lie) es un esteroide muy importante. Sistemas de Lipoproteínas Los sistemas de lipoproteínas son sistemas que se forman de la asociación de lípidos y proteínas específicas.4 Ácidos Nucleicos Los ácidos nucleicos son macromoléctilas en forma de cadena cuya función esencial es el almacenamiento y la transferencia de la infor- . en particular su alta resistencia eléctrica y su relativa impermeabilidad respecto de moléculas muy polares. Este modelo explica satisfactoriamente muchas de las propiedades y características de las membranas. A.3.3. Nicolson.

una molécula de ácido fosfórico. El nombre de desoxirribonucleótidos deriva de que la base esta unida a la pentosa 2-desoxi-D-ribosa (Figura A. El grupo fosfato que constituye los nucleótidos (Figura A. . guanina. MATERIAL BIOLÓGICO Base HO HO—P-0—CH. los nucleótidos son los componentes estructurales de los ácidos nucleicos. citosina y uracilo. 12). Nucleótidos Las unidades estructurales del DNA se denominan desoxirribonucleótidos y las del RNA se llaman ribonucleótidos. 12: Estructura general de los nucleótidos: a) Ribonucleótido b) Desoxirribonucleótido mación genética. la diferencia entre los ribonucleótidos estriba en la base que los conforma. ti mi na. Son componentes fundamentales de la célula y constituyen entre el 5 y el 15% de su peso seco. una pentosa y. 13) que pueden formar parte de un nucléotido: adenina. Al igual que los aminoácidos son los componentes estructurales de las proteínas. De igual manera. En los ribonucleótidos la base esta unida a la pentosa D-ribosa.12. Existen dos tipos de ácidos nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA). 12) se une . Como puede observarse en la Figura A. Las primeras dos son purinas y las tres restantes son pirimidinas.824 APÉNDICE A. Las diferencias químicas y físicas entre desoxirribonucleótidos radican en las diferentes bases que los constituyen. Hay cinco bases nitrogenadas (Figura A.0 OH OH H H Figura A. cada nucléotido está constituido por tres componentes: una base nitrogenada heterocíclica que es un derivado de purina o de pirimidina.

3. (1) Adenina (2) Guanina (3) Uracilo (4) Timina (5) Citosina .>¿. 825 Purinas NH. 13: Estructura de las bases de los nucleótidos. Nf^C^\ Pirimidinas O HNlT«>CH N H 1 ^N' H O U o 1 HNf^cA I I «.A. BIOMOLECULAS.CH -C./ NH2 'C^i^CH rfV H 5 Figura A.

Se ha considerado que la estructura del DNA propuesta por Watson y Crick. producto de sus grupos fosfóricos. Cada cadena consiste de grupos fosfato di-ester unidos a residuos de ¡3—D-desoxirribofuranosa (Ddesoxirribosa). C. MATERIAL BIOLÓGICO mediante un enlace áster al átomo de carbono 5 de la pentosa. cada una de ellas enrrollada alrededor del mismo eje. El sistema ATPADP es el sistema principal para la transferencia de energía química en la célula. sino también en forma de difosfatos o trifosfatos. es uno de los hechos más sobresalientes en el campo de la ciencia hasta nuestros días. por medio de enlaces 3'-5' (Figura A. El ADP y el ATP son ácidos relativamente fuertes que en su disociación producen tres o cuatro protones respectivamente. la estructura residual recibe el nombre de nucleósido. El diámetro de la doble hélice es de 20 °A y una vuelta se completa cada 34 A.14c). Crick postularon una estructura para el ácido desoxirribonucleico. Watson y Crick concluyeron que si la secuencia de bases de una cadena está dada. mediante los pares de bases: adenina (purina) con timina (pirimidina) y guanina (purina) con citosina (pirimidina). el 5'-difosfato de adenosina (ADP) y el 5'-trifosfato de adenosina (ATP). H. D. El desarrollo cíe los postulados anteriores ha conducido a lo que se ha .826 APÉNDICE A. Propusieron que dicha estructura está constituida por dos cadenas helicoidales antiparalelas. entonces la secuencia de la otra cadena se determina automáticamente. Todos los ribonucleósidos y desoxirribonucleósidos aparecen en las células no solamente en forma de monofosfatos. En particular. Propusieron además que las cadenas se mantienen unidas entre si por medio de puentes de hidrógeno entre las bases purinas y pirimidinas en sus formas tautómericas (Figura A. Watson y F.14b y Figura A. Consecuentemente estaba planteado un mecanismo de copiado para la transferencia del material genético. Cada vuelta de la cadena consta de aproximadamente 10 nucleótidos. Cuando el grupo fosfato de un nucleótido se separa por hidrólisis. DNA En 1953 J. De la complementaridad de la unión de las bases. para la adenosina se tiene el 5'-monofosfato de adenosina (AMP). 14).

14: Esquema del Acido Desoxirribonuleico: a) Estructura de una sola cadena. . 827 Pares de bases complementarías BaM (b) Esqueleto de azúcar-fosfáto Timina \ x°~—/ H x „ ¿~c^ ^-N n-^fS \ t \ M "--. BIOMOLECULAS.</ Puente de hidrógeno / 8 Adenina (a) Desoxirribosa (c) Figura A.A.3. b) Estructura de la doble hélice c) Bases purinas y pirimidinas unidas por puentes de hidrógeno.

el gene que tiene codificada la información para sintetizar una determinada proteína. siendo más complejo en los organismos superiores. La replicación completa del DNA sólo ocurre durante la división celular. Replicación del DNA: El proceso de replicación del DNA permite que la información genética sea perpetuada mediante su paso de una generación a otra. El dogma central establece tres procesos: • Replicación: Es el primer proceso y es el proceso mediante el cual el DNA produce moléculas hijas idénticas a la progenitura. La replicación del DNA produce dos dobles hélices. . La traducción del mensaje genético da origen a la síntesis de proteínas. mismas que actúan como moldes de dos cadenas nuevas (Figura A.828 APÉNDICE A. A este tipo de replicación se le llama replicación semiconservativa. El proceso de replicación del DNA es esencialmente el mismo en todos los organismos vivos. que establece que la información genética fluye del DNA al RNA y de éste a la proteína. Esta traducción se lleva a cabo en los ribosomas. La adición de cada nucleótido se realiza en la dirección 5' —> 3'. • Transcripción: Es el proceso mediante el cual se realiza el copiado del mensaje genético contenido en el DNA al RNA mensajero. 15). MATERIAL BIOLÓGICO denominado dogma central de la genética molecular. El inicio de la replicación del DNA es un proceso que antecede al fenómeno de la división celular y consiste en la separación de las dos cadenas de DNA. Esto sucede cuando se transcribe por ejemplo. pero existen con mucha frecuencia otros momentos de la actividad celular en los cuales se copia sólo una parte de la información genética. La síntesis de las cadenas nuevas ocurre por la adición de nucleótidos complementarios a las cadenas que sirven de molde. • Traducción: Es el proceso que permite traducir las unidades de información genética o codones a secuencias de aminoácidos en una cadena peptídica. cada una de las cuales tiene una cadena de la doble hélice original y una cadena nueva.

Freeman and Co. 829 Figura A. BIOMOLECULAS.3. Copyright ©1983. 15: Replicación semiconservativa de la molécula de DNA: Cada cadena de la doble hélice progenitora sirve como molde para generar dos cadenas hijas idénticas a ella.A.H. 1983 Reproducida con el permiso de W. . Todos los derechos reservados. Fuente: Watson et a/.

16 muestra la estructura de un segmento de ácido ribonucleico (RNA). se trascribe a una molécula intermediaria que puede moverse en el citoplasma: el mRNA o mensajero. La Figura A. A este grupo de tres nucléotidos se le llama codón o triplete. En la figura se puede observar además que la pentosa que forma parte del esqueleto de la cadena es una ribosa. Esto es. Este a diferencia del DNA. está constituido por una sola cadena de nucléotidos. El proceso de transcripción se realiza observando las siguientes dos reglas: siempre ocurre. indica el orden o secuencia de los aminoácidos en la cadena peptídica. Este mecanismo ha permitido explicar cómo la síntesis de proteínas que se efectúa en el protoplasma puede ser controlada por el DNA localizado en el núcleo. Ahora bien. Esta base es el uracilo (U). La información genética codificada en el DNA en su secuencia de nucléotidos. cuando en la cadena de DNA aparece una adenina en la cadena de RNA se agrega un uracilo. Sin embargo. al igual que la replicación del DNA. se tiene que las proteínas están constituidas por 20 tipos de aminoácidos diferentes. El proceso por el cual se lleva a cabo esta transcripción se muestra en la Figura A. Las bases que constituyen la cadena de mRNA son dos purinas: adenina y guanina y dos pirimidinas: citosina y uracilo. el cual es químicamente muy similar a la timina y en el apareamiento de bases para la síntesis del RNA ocupa el lugar de ésta. se copiarán de acuerdo a la demanda de proteínas que tenga el organismo. por una parte existen solamente 4 diferentes nucléotidos y por otra. Es importante hacer notar que existe una base en el RNA que no aparece en la cadena de DNA. La información para la síntesis de un aminoácido está codificada en tres nucléotidos. MATERIAL BIOLÓGICO La Transcripción del Mensaje Genético: El RNA Los genes estructurales que almacenan la información para la síntesis de proteínas. El orden en el cual aparecen los nuclétidos en la cadena de mRNA sintetizada. 17.830 APÉNDICE A. en la dirección 5' —> 3' y solamente una de las cadenas del DNA es copiada en una molécula de RNA mensajero en un tiempo dado. el DNA no es el molde directo que se usa en la síntesis de proteínas sino que la información codificada en el DNA se trascribe al RNA y es éste el que actúa como molde para la síntesis proteica. Por lo tanto existen 64 codones (permutaciones) de tres bases cada uno para los 20 .

3. 17: Transcripción del mensaje genético por medio de la síntesis de una cadena de mRNA . BIOMOLECULAS. 831 Base Base RNA Figura A.A. 16: Estructura de un segmento de ácido ribonucleico RNA Cadenas Cadena de RNA Figura A.

18 muestra . 10. La Figura A. es un codón de terminación del mensaje aminoácidos. El proceso de traducción del mensaje del mRNA se realiza en los ribosomas. En la Tabla A. Traducción del Mensaje Genético: Síntesis de Proteínas Cada molécula de mRNA da origen a una o varias cadenas peptídicas. 11 se muestran los significados de las abreviaturas para los aminoácidos y para las bases nitrogenadas. El conjunto de codones constituye el código genético universal y se muestra en la Tabla A. El primero es un ácido ribonucleico que se encuentra localizado en los ribosomas y el segundo es un RNA de trasferencia (tRNA) que actúa como adaptador en el ordenamiento lineal de los aminoácidos específicos conforme a la secuencia del ni RNA. También existen codones que actúan como señales de terminación del mensaje genético. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. 10: Código genético Codón Aminoácido Fen Leu " Leu Codón Aminoácido Ser Codón Aminoácido Tir Codón Aminoácido Gis TTT TTC TTA TTG CTT CTC CTA CTG ATT ATO ATA ATG GTT GTA GTA GTG TCT TCC TCA TCG CCT CCC CCA CCG ACT ACC ACÁ ACG GCT GCC GCA GCG TAT TAC TAA TAG CAT CAC CAÁ CAG Term* His Gln TGT TGC TGA TGG CGT CGC CGA CGG AGT AGC AGA AGG GGT GGC GGA GGG Term Trp Arg Pro He Met Val Tre AAT AAC AAA AAG GAT GAC GAA GAG Asii Lis Asp Glu Ser Arg Gli Ala Term. En este proceso intervienen además otros tipos de RNA: el rRNA y el tRNA.832 APÉNDICE A. de tal manera que existen aminoácidos que son codificados por más de un codón.

Los mRNA pueden ser traducidos simultáneamente por muchos ribosomas. A este triplete se le llama codón de iniciación y con frecuencia es eliminado después de la síntesis. 1989). En la parte inferior del segundo lazo se localiza un triplete denominado anticodón. La traducción del mensaje consta de tres fases: iniciación. Por esta razón. La traducción concluye cuando aparece un codón de terminación en el mRNA. Prácticamente todas las proteínas inician con el codón AUG que codifica para metionina. BIOMOLECULAS. 833 Tabla A.18a la estructura del tRNA presenta tres lazos. La síntesis de la cadena polipeptídica ocurre en la dirección: extremo amino (—NH^) a extremo carboxilo (COOH}. Una vez que se inicia la síntesis ocurre la elongación.ll: Especificación de las bases y los aminoácidos Nucleótidos G= A = T= C— Aminoácidos Ala Asn Asp Arg Gis Fen Gli Gln Glu His = = = = = = = = = = Guanina Alanina Timina Citosina Alanina Asparagina Acido aspártico Arginina Cisteína Fenilalanina Glicina Glutamina Acido glutámico Histidina Ile Leu Lis Met Pro = = = = = Ser ^ Tir = Tre = Trp = Val = Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Tirosiiía Treonina Triptofano Valí na como se realiza este proceso y la forma estructural del tRNA.3.A. una sola molécula de mRNA sirve para generar varias copias de la misma cadena peptídica (Balbás y Bolívar. . elongación y terminación. En este proceso se van agregando sucesiva y ordenadamente (vía los tRNA) los aminoácidos correspondientes a cada codón presente en la cadena de mRNA. Este anticodón esta formado por las tres bases complementarias al codón específico que aparece en la cadena de mRNA. En este momento termina la síntesis y la cadena peptíclica es liberada. Como puede verse en la Figura A.

c) Elongación de la cadena peptídica. b) Iniciación del proceso de síntesis.18: a). MATERIAL BIOLÓGICO Aminoácido (a) <D Ribosoma Aminoácido (b) Subunidades ribosomales de inicio segundo codon (C) trr (d) Figura A. d) Terminación del proceso de síntesis. .834 APÉNDICE A. Estructura del tRNA y síntesis de una cadena peptídica. a) Estructura del tRNA.

. En ingeniería genética el método más común para fragmentar el DNA es la digestión por enzimas de restricción. 2. no debe ser degradado. Esto es. Un método que permitas romper y unir enlaces fosfodiéster de moléculas de DNA. Para llevar a cabo la recombinación in vitro de una molécula de DNA. debe conocerse la ubicación de sus genes y su secuencia nucleotídica. la ingeniería genética requiere de los siguientes elementos: 1.A. Dentro de los vectores más usados se encuentran los plásmidos y algunos DNAs virales. Para que el vector de clonación sea fácil de manejar (Balbás y Bolívar. 1989) debe poseer las siguientes características : Adecuada caracterización funcional. La mayoría de estas enzimas reconocen secuencias de bases simétricas o palindrómicas en el DNA. Existen cuatro métodos para generar fragmentos de DNA: La digestión de la molécula de DNA con enzimas de restricción.3. Esto es. BIOMOLECULAS. Una molécula de DNA capaz de autoreplicarse. Síntesis química a partir de desoxirribonucleótidos. Ruptura mecánica del DNA en condiciones controladas. A este tipo de moléculas se les llama vehículos moleculares de clonación o vectores. A partir de moléculas de RNA. Caracterización estructural completa. El tamaño del vector debe ser pequeño con el fin de aumentar la eficiencia de entrada a la célula huésped Presentar estabilidad dentro del huésped. DNA Recombinante: Recombinación in vitro 835 Las moléculas de DNA recombinante (rDNA) son construidas en el laboratorio por medio de la ingeniería genética. y capaz de replicar también el DNA que se le haya unido.

Por una parte se extrae ui . Los plásmidos son pequeños DNAs circulares que se encuentran en forma natural fuera del genoma de algunas células y que se replican autónomamente. 4. Un método que permita seleccionar de un gran número de células a aquellas que han adquirido la molécula de rDNA. Un proceso muy usado en la ingeniería genética es la transformación. La transformación. 3. La transfección. Debe ser capaz de incrementar (amplificar) su número de copias. Los vectores más usados por su simplicidad y facilidad de manejo son los plásmidos. En la "Figura A. mismo que a su vez da lugai a una célula recombinante. 19 se presenta un esquema de el proceso mediante el cual se produce un DNA recombinante. Presentar múltiple sitios únicos de restricción dentro de los genes que se utilizan como marcadores. En la Figura A. MATERIAL BIOLÓGICO Es muy conveniente que el vector contenga genes que puedan usarse como marcadores para seleccionar las células recombinantes de las silvestres.19 se observan dos caminos paralelos que se unei para formar la molécula recombinante. Este proceso conlleva la entrada del vector a la célula a través de la pared y membrana celulares. Una vez dentro la molécula de rDNA puede replicarse autónomamente o recombinarse con el genoma de la célula receptora. Existen tres mecanismos mediante los cuales una molécula de rDNA puede ser introducido a la célula receptora: La conjugación. Un proceso mediante el cual se pueda introducir la molécula de rDNA a la célula receptora. con el fin de obtener grandes cantidades del vehículo por célula.836 APÉNDICE A.

3. Copyright ©1983. Todos los derechos reservados. . Freeman and Co. 837 plasmido fragmentado con enzimas d« restriocio'n \ DNA ^ /fragmentado X / con enzimas /~~~?~^ de restricción DNA pasajero marcador '(resistencia a antibióticos) Figura A. 1983 Reproducida con el permiso de W.H. 19: Representación esquemática de la clonación molecular del DNA utilizando un plásmido como vector. BIOMOLECULAS.A. Fuente: Watson et a/.

etc.20 se muestra un esquema del comportamiento típi< que sigue el crecimiento celular en un cultivo intermitente sujeto a L condiciones dadas por la ecuación (A. lo anterior puede expresare como: — = f(T. Enseguida tanto el plásmido como el DNA fragmentados se ponen en contacto y ocurre la recombinación.: En la Figura A.) dx (A. Por otra parte. En la fase lag se observa un crecimiento casi nulo de las células.. todas la células están sujetas a las mismas condiciones de temperatura (T). extracelular (metabolitos secundarios) o la ce lula misma. pH concentración de sustrato ( S ] . tiempo que dura esta fase se interpreta como el tiempo que tardan ] . En esta figura se observa varias fases en la curva de crecimiento.4 Crecimiento Celular. misma que se replicará y contendrá la información clonada. concentración de oxígeno (O). La célula así obtenida es una célula recombinante. del DNA fraccionado de la célula de interés. MATERIAL BIOLÓGICO plásmido de la célula seleccionada y se fracciona específicamente utilizando endonucleasas de restricción.0.838 APÉNDICE A. En un cultivo de células microbianas de tipo intermitente.. Independientemente de que el producto de interés sea intracelular (poi ejemplo una proteína). E crecimiento celular en este tipo de cultivo depende de las condicione mencionadas y puede ser expresado en términos del cambio con respect al tiempo de la concentración de células. es necesario cultivar las células con el fin de obtener e producto deseado. En este punto se obtiene una molécula de DNA recombinante o (rDNA). Las fases se originan por 1 cambios que experimenta la población celular debido a cambios en medio. se toma el DNA que se desea insertar o clonar. La molécula de rDNA se introduce dentro de la célula huésped y ocurre la transformación.l).PH. A. este DNA se rompe de la misma manera que el plásmido.S. A este DNA se le llama DNA pasajero o exógeno..

20: Representación esquemática del crecimiento celular en cultivo intermitente. Cabe mencionar que en la segunda fase (exponencial) la células sintetizan compuestos que les permiten crecer (duplicarse) y mantenerse vivas en el medio de cultivo. la curva de crecimiento puede expresarse con auxilio de la ecuación de Monocl que describe la relación entre la velocidad especia fica de crecimiento y la concentración . Después de esta fase se tiene la fase exponencial en la cual se observa un crecimiento muy rápido de la biomasa hasta un determinado tiempo. este tipo de compuestos no esta asociado al crecimiento celular y muchos de ellos tienen importancia comercial. En la fase estacionaria la célula excreta al medio productos llamados metabolitos secundarios. Cuando el crecimiento celular en un cultivo intermitente está limitado sólo por la cantidad de sustrato inicial. En este momento se considera que las células mueren debido a que no pueden mantener su metabolismo o por autolisis. CRECIMIENTO CELULAR. Finalmente en la fase de declinación o muerte las células empiezan a morir y la biomasa disminuye.A A. la terminación de la misma se considera que sucede por la carencia de algún nutriente o porque alguno de los productos que la célula secreta al medio inhibe el crecimiento poblacional. 839 (c) Figura A. A este tipo de compuestos se le llaman metabolitos primarios. a) Fase lag b) Fase exponencial c) Fase estacionaria d) Fase de declinación o muerte células en adaptarse al medio de cultivo. En la fase estacionaria el crecimiento celular cesa y la biomasa permanece constante. Se considera que en esta fase las células ya adaptadas crecen rápidamente debido a que en el medio encuentran todos los requerimientos nutricionales y ambientales para reproducirse. La fase exponencial es la de máximo crecimiento y la biomasa alcanza su valor más alto.

y Ks es el valor de S cuando /z = fimax/2Con frecuencia la velocidad del crecimiento celular se describe e términos del tiempo de doblado esto es.2) de la siguiente forma: dx 'Xl td = fr' JO / donde: .840 APÉNDICE A. J\ § " | ~ J (A. estableciéndose la siguiente expresión para el crecimiento celular: donde: x: Concentración de biomasa.3) para un caso particular. [M/L3] t: Tiempo.5 fJ>max En la Figura A. [t] fj. MATERIAL BIOLÓGICO de sustrato. del tiempo en el cual la ma¡ celular se duplica.: Velocidad específica de crecimiento. La expresión para /u se obtiene integrando la ecuacic (A. Puede observarse en la figura que la J velocidad máxima de crecimiento /ímar es el valor asintótico de la curv. [t~l] S: Concentración de sustrato limitante.21 muestra la representación gráfica de la ecuació (A.^"1] y la ecuación de Monod: .3 donde: l¿max' Velocidad máxima de crecimiento. [M/L3] Ka: Concentración de sustrato para /í = 0.

Una vez qi se ha realizado el cultivo de la célula y se tiene el producto de Ínter dentro de la célula misma o en el caldo de cultivo.A. 84 0. Xi =: Masa celular al tiempo t = O t¿: Tiempo de doblado para obtener: In2 por lo tanto el tiempo requerido para que la masa celular se dupliqi esta dado por: A. el paso siguiente es realización del mejor proceso para obtener el producto con la actividí y pureza deseada. . CRECIMIENTO CELULAR.0 Ks»0. El establecimiento ( dicho proceso es el objetivo del estudio de las Bioseparaciones.22 1 Figura A.4. VEl cultivo de las células se lleva a cabo en dispositivos llamad» biorreactores los cuales deben diseñarse con el fin de proporcionar éstas las mejores condiciones físicas para su desarrollo. con el menor costo posible.21: Representación esquemática de la variación de la veloc dad específica de crecimiento (/u) con el sustrato (S).

Lehninger.L. 1983. L. Palmer.J. 1. 1989. 1985.Y. C. Watson. España. J. Selecciones de Scientific American. . The Benjamin/Cummings Publishing Co. Tooze. 737. Permagon Press. Watson. 3ra Edición. México. J. A. Nature. New York. y Case. J. Ellis Horwood Ltd. New York. 1961. En: La Célula Viva. B. The organisms of biotechnology. D. Ediciones Omega. Molecular Structure of Nucleic Acids: A structure for deoxyribose nucleic acid.. New York. Scientific American. T.-Understanding Enzymes. y Crick. Recombinant DNA a short course.R. 1989. 11-30. MATERIAL BIOLÓGICO A. Murray. 31-35 Tortora. Inglaterra. D. D.Books. H. Bioquímica. N. 5 Bibliografía Brachet. 1953. M. Microbiology: An Introduction.).. La célula viva. (Ed.-J. C. F.842 APÉNDICE A. Funke. Editorial Blume. 1991. 2. y Kurtz. 7-18. G. En: Comprenhensive Biotechnology. Millis.

Montesinos O R.USUARIO: ESTE EJEMPLAR ES NUEVO. M. R I. Guzmán . Tejeda O R. B. NO LO MALTRATES POR FAVOR U. L BIBLIOTECA O A.

Montesinos C.Bioseparaciones Armando Tejeda M. USA. Roberto Guzmán Z. Department of Chemical Eng. Sonora. México. Depto. Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas Universidad de Sonora Hermosillo. México. <» c •"- University of Arizona Tucson. Arizona. de Matemáticas Universidad de Sonora Hermosillo. . Sonora. Rosa Ma. Editorial Unisón Hermosillo. México. Sonora.

Características de los Bioprocesos .2 1.2.5 Sumario 2.3 1. .2 Síntesis de Proceso 2.2 El Proceso 2.7 Bibliografía .4 1.Contenido I El Proceso de Bioseparación 1.1 Desarrollo de un Caso Base 2.1 Introducción 2.6 Problemas 2.2.1 Mercado y Especificación del Producto 2.3 Equipo 2.4 Diseño 2.4. Sumario Problemas Bibliografía 1 Introducción 2 Selección del Proceso 2.2 Fundamentos 2. .4. .1 1.5 Evolución de los Bioprocesos .

4 Factor G 4.1 Diseño de Centrífugas Tubulares 4.2.3 Sedimentación Centrífuga 4.4 Filtración Centrífuga 4.2 Pretratamiento de Caldos para BSL 74 3.vi CONTENIDO II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular.2 Centrífuga de Discos 4.3.2 Equipos de Sedimentación Centrífuga 4.3 Escalamiento 4.1 Ley de Stokes 4.3 Equipo de Centrifugación 4. .106 3.4.1 La Filtración como parte de los Sistemas de BSL 72 3.4. 65 3 Filtración 69 3.4.1 Introducción 4.7 Bibligrafía 110 4 Centrifugación 4.3.2 Sedimentación por Acción de la Gravedad 4.1 Filtros Intermitentes a Presión 80 3.2.2. .2.2 Filtración Continua 98 3.4.6 Problemas 111 111 112 112 .115 116 119 120 120 121 132 132 141 148 153 157 158 .3 Equipo de Filtración 80 3.4 Diseño de Equipo de Centrifugación 4.6 Problemas .4 Diseño de Equipo de Filtración 84 3.4.2.1 Filtración Intermitente 85 3.2.5 Sumario 105 3.3 Teoría de la Filtración 77 3.2.2 Fundamentos de la Centrifugación 4.4.5 Sumario 4. .2 Filtros Continuos al Vacío 81 3.2 Fundamentos 71 3.3.1 Introducción 69 3.1 Equipos de Filtración-Centrífuga 4.3.

2.2 Equipo de Extracción Continua 258 6.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido .3 Métodos de Rompimiento Celular 5.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5.1 Estructura de la Pared Celular 5. .1 Introducción 227 6. .CONTENIDO 4.3.2.3.2 Fundamentos 5.2.2.1 Tipos de Sistemas de Extracción Líquido-Líquido 229 6.7 Bibliografía 1 vii 162 165 165 166 167 168 169 174 178 178 190 196 199 200 212 215 218 221 5 Rompimiento de Células 5.4 Diseño de Equipo de Extracción 263 6.2.1 Extracción Intermitente 264 6.2.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5.1 Introducción 5.2 Homogeneizador de Alta Presión 5.4.3 Equipo de Rompimiento Celular 5.3. .3.4.3 Microfluidizador 5.3 Equipo de Extracción 256 6. . 243 6.2.2 Extracción Continua 273 .4 Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles .6 Problemas 5.4.2 Fundamentos de la Extracción 228 6.5 Sumario 5.7 Bibliografía III Concentración del Producto 223 6 Extracción 227 6.2 homogeneizador de Alta Presión 5.1 Equipo de Extracción Intermitente 257 6.4 Diseño de Equipo de Rompimiento 5. .3.3 Selección del solvente 242 6.4 Métodos de Permeabilización 5. 229 6.2 Sistemas Celulares de Secreción 5.4.2.

2.4.3 . 8.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes 342 7.4 Cinética de la Adsorción 324 7.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . 358 7.2.6 Problemas 408 7.4. 1C 8.2.vni CONTENIDO 6.3 Relaciones de Equilibrio 319 7.2 Matrices 8.2.3 Adsorción en Lecho Fijo 363 7.2 Fundamentos 309 7.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación .3 Extracción Fraccionaria Sumario Problemas Bibliografía 292 298 299 304 7 Adsorción.6 6.7 Bibliografía 413 IV 8.4.4 Diseño de Adsorbedores 342 7.5 6.2. 307 7.2 Purificación del Producto Introducción Fundamentos 8.2.4. 422 424 431 431 432 432 8 Cromatografía por Elución.4 Relaciones de Equilibrio 8.2 Tipos de Adsorbentes 310 7.2.5 Cinética de la Adsorción Equipo Cromatográfico 415 419 419 420 .3 Equipos de Adsorción 338 7.2.1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente 310 7.7 6.1 Introducción 307 7.5 Sumario 407 7.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación 8. .1 8.2.

2 Flujo Cruzado o Tangencial 10.6 Problemas 8.7 Bibliografía 9 Precipitación 9.5 Sumario 9.2 Módulos 10.4.1 Introducción 9.1 Procesos de Membrana 10.2 Fundamentos 10.3 Teoría de la Ultrafiltración 10.1 Cinética de la Precipitación 9.4.2.3 Precipitación por Afinidad 9.3 Equipos 10.3.1 Membranas 10.2.1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad 9.4 Diseño de Procesos de UF 10.CONTENIDO 8.4 Diseño de Columnas Cromatográficas 8.4.2.2.3 Equipo de Precipitación 9.2 Fundamentos 9. Pureza y Rendimiento 8.4. 495 516 522 525 525 527 533 543 544 545 547 547 548 548 554 555 573 573 574 579 581 .2.4 Diseño de Precipitadores 9.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución.6 Problemas 9.4.3 Escalamiento y Optimización 8.7 Bibliografía 10 Ultrafiltración 10.4.1 Modelos Cromatográficos 8.2 Diseño de Precipitadores 9.5 Sumario 8.2.1 Introducción 10.1 Objetivo de la UF ix 434 434 463 471 482 483 490 493 493 494 .3.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva 9.

.2.2 Fundamentos 12.1 Equipos de Flujo Libre 643 11.4.4. . .2.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación 646 11.589 610 611 615 11 Electroforesis 617 11.4.2 Teoría Electrocinética 619 11.3 Métodos de Operación 10.3 Fenómenos de Dispersión 629 11. 619 11. 665 669 669 670 671 677 679 12 Cristalización 12.3 Equipos 640 11.3 Equipos Electrocromatográficos 647 11.1 Teoría de Platos 652 11.7 Bibliografía 659 V Operaciones de Acabado 661 665 .2.2 Teoría Cinética 656 11.2.3.2A Selección del Modo de Operación 12.2 Fundamentos 618 11.2 Pureza de los Cristales 12.4 Diseño de la Unidad de UF 10.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación 12.4 Medios y Modos de la Electroforesis 636 11.2.1 Tipos de Cristales 12.2.5 Sumario 10.4.5 Cinética de la Cristalización .3.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas .4 Diseño 652 11.x 10.2.5 Sumario 657 11.1 Introducción 12.2 Mecánica de Fluidos 10.6 Problemas 658 11.2.6 Problemas 10.1 Introducción 617 11.3.7 Bibliografía CONTENIDO 583 586 .4.

1 Diseño de Secadores Adiabáticos 13. .3 Velocidad de Secado 13.2.2.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva 711 12.4 Diseño de Secadores 13.6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales687 12.1 Células procarióticas A.4.l Introducción A. .2 Diseño de Secadores no Adiabáticos 13.6 Problemas 13.2.3.2 Métodos de Secado 13.4.3. 13.5 Sumario 738 12.1 Introducción .2. 689 12.2 Fundamentos 13.3.2.2.2 Células y Virus A. 13.4.2 Cristalizadores Continuos .2 Secadores no Adiabáticos 13.1 Secadores Adiabáticos 13.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas 13.4.4 Diseño de Cristalizadores 693 12.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos 713 12.2.4 Cristalizadores Intermitentes 730 12.5 Sumario i .CONTENIDO xi 12.7 Bibliografía 743 13 Secado 13.1 Cristalizadores Intermitentes 689 12.6 Problemas 740 12.2 Células Eucarióticas 745 745 746 746 758 759 759 762 762 765 769 769 781 785 786 788 789 789 789 791 796 .7 Bibliografía A Material Biológico A.1 Cristalizador Continuo 694 12. 13.3 Equipo de Secado 13.4.4.3.3 Equipo de Cristalización 689 12.4 Efectos Colaterales del Secado .

4 Virus A.2.1 Proteínas A.3 Lípidos A.3.3.3 Biomoléculas A.3.2.3 Células Recombinantes A.5 Bibliografía CONTENIDO 802 803 803 803 814 818 823 838 842 .3.xii A.4 Crecimiento Celular A.4 Ácidos Nucleicos A.2 Carbohidratos A.