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TEJEDA-Bioseparaciones

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Parte I

Capítulo 1 Introducción
El cultivo de células con el objeto de obtener productos útiles, es una actividad que ha realizado el hombre prácticamente durante toda su historia. Recientemente a esta actividad se le ha denominado Biotecnología. Esta ha evolucionado a partir de los conocimientos generados en diversas disciplinas, tanto del área de las ciencias básicas como de las ingenierías. Hoy la Biotecnología puede ser definida como la colección de procesos industriales que involucran el uso de sistemas biológicos (Wang, 1988). Las operaciones que comprenden los procesos biotecnológicos a escala comercial, se han dividido tradicionalmente en operaciones previas (procesos "upstream") y operaciones posteriores o bioseparaciones (procesos "downstream"). Dentro de las primeras se considera la preparación del medio, la esterilización y el funcionamiento del biorreactor (Cooney, 1990). Los procesos de bioseparación como se muestra en la Figura 1.1, involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para la obtención del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas. En un proceso dado, la parte correspondiente a las bioseparaciones puede representar hasta un 60% del costo total de producción sin considerar las materias primas (Kalk, 1986). Debido a lo anterior, exite una relación inversa entre el precio de venta de un producto biotecnológico y la concentración de éste en el caldo del biorreactor (Figura 1.2). Puede decirse entonces que el éxito comercial de un proceso biotecnológico

6

CAPÍTULO!. INTRODUCCIÓN

depende en gran medida de la adecuada selección del proceso de bioseparación.

1.1

Evolución de los Bioprocesos

Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones de procesos biotecnológicos, en relación al tipo de bioseparaciones que éstos involucran. La primera generación comprende el conjunto de procesos desarrollados mediante cultivos de organismos no recombinantes, cuyos productos se obtienen en forma activa tanto si son intracelulares o si son secretados al medio de cultivo. En esta generación se encuentran los procesos de la Biotecnología tradicional como los de la producción de etanol, enzimas, ácido cítrico, y antibióticos. Los productos de estos procesos se presentan en concentraciones altas al inicio de la etapa de separación y no requieren de una extremada pureza para su venta. Los descubrimientos asociados con la Biología Molecular y la Ingeniería Genética logrados particularmente en las últimas dos décadas, han ampliado las capacidades biotecnologías del hombre. En esta etapa podemos situar una segunda generación de productos de la Biotecnología como la insulina humana, la hormona de crecimiento, y alfa interferón, entre otros. Estos son producidos intracelularmente utilizando células recombinantes de Escheríchia coli. Se caracterizan por encontrarse en bajas concentraciones dentro de la célula, son de elevado peso molecular, tienen propiedades similares a los contaminantes y requieren un alto grado de pureza. Ademas, generalmente al producirse en la célula no poseen actividad biológica por tratarse de cadenas peptídicas sin la conformación o estructura apropiada; lo que se traduce en la necesidad de aplicarles tratamientos fisicoquímicos adicionales para lograr el producto en su estado activo. La tercera generación de la Biotecnología, la podemos caracterizar por procesos mediante los cuales se obtienen productos extracelulares en células recombinantes, la mayoría de las cuales son eucarióticas. En estos sistemas se ha observado la capacidad no sólo de producir exógenamente el producto deseado, sino que éste se obtiene en forma activa. El factor VIII de la sangre y el agente trombolítico Activador

1.1. EVOL UCIÓN DE LOS BIOPROCESOS

Inoculo

Esterilización y preparación del medio

Producto intracelular

Esterilización del caldo si es recombinante

Producto extracelular

Rompimiento celular

' Remoción de desechos celulares

Separación celular

Recuperación y concentración del producto

Purificación del producto

Figura 1.1: Operaciones de un proceso biotecnológico: a). Operaciones previas b). Operaciones posteriores o bioseparaciones. Adaptada de: Bujurstrom, 1985.
Reproducida reservados. con el permiso de Me Graw Hill. Copyright © 1985. Todos los derechos

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

(g/i)
.Etanol .Acidocítrico MSG , Penicilina ,Treonina > Cefalosporína k—Gentamioina . Acido Giberflico . Enzimas a granel . Glucosa oxidas» Anticuerpos Enzimas d« investigación y diagnóstica Glio»roHosíatodeshidrogenas* LucHerasa Factor VIII Urakinasa Enzimasterapéuticas^"^

«O

1

»"* 10*

wr«

IOZ »' K)° I01 K)2 I03 K>4 K)5 «O6 KJ7 K)" «O9

Precio

de

venta

$/Kg

Figura 1.2: Relación entre la concentración inicial del producto en el caldo y el precio final de venta del producto. Fuente: Dwyer, 1984.
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright © 1984. Todos los derechos reservados.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS
Tabla 1.1: Características de los Procesos Biotecnológicos.
Característica Período Tipo de células Fortaleza de las células Conocimiento de propiedades básicas Conocimiento Tecnológico Primera
- 1975 No recombinantes Alta

Generación Segunda

Tercera

1975Recombinantes Alta
Bajo Bajo

1985Recombinantes Baja
Bajo Bajo

Alto Alto

Tabla 1.2: Características de los Productos Biotecnológicos
Característica Producto tipo Idealización Tamaño Actividad al secretarse Pureza deseada Similitud con contaminantes Valor Primera Antibióticos Aminoácidos Extracelular e intracelular Intermedio
Si

Generación Segunda Insulina humana
HC

Tercera Factor VIII
tPA

Intracelular Macromoléculas
No

Extracelular Macromoléculas
Si

Alta Baja Bajo

Muy alta Alta Alto

Muy alta Alta Alto

del Plasminógeno tisular (t-PA de sus siglas en inglés) son productos característicos de esta generación. Debido a su empleo con fines terapéuticos, estos productos deben ser obtenidos con un alto grado de pureza (Datar et a/, 1993) .

1.2

Características de los Bioprocesos

En la Tabla 1.1 y en la Tabla 1.2 se presentan algunas características asociadas a los procesos y a los productos de las tres generaciones de la Biotecnología, aquí descritas.

10

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

Los procesos biotecnológicos tanto de la segunda como de la tercera generación, se encuentran en una etapa de desarrollo que requiere ampliar el conocimiento de las propiedades fisicoquímicas de los productos y sus contaminantes, con el objeto de seleccionar las operaciones de separación adecuadas debido al alto grado de pureza requerido por los productos. Los aspectos de rendimiento y pureza del producto son básicos para determinar la viabilidad de un bioproceso, debido a que para lograr el grado de purificación requerido por este tipo de productos, generalmente la purificación debe realizarse en varios pasos. Un ejemplo de lo anterior se muestra en la Figura 1.3 con un diagrama de flujo del proceso para la obtención de insulina humana a partir células de E. coli recombinante. Las operaciones de bioseparación para un proceso deben seleccionarse cuidadosamente con el fin de que el costo sea mínimo. Es decir, si el rendimiento por paso de purificación es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un proceso no viable económicamente debido a su aún más bajo rendimiento global. La Figura 1.4 muestra como decrece el rendimiento global en función del número de pasos de purificación, considerando rendimientos por paso de 95 %, 90 %, 80 % y 60 %. Por ejemplo, si el rendimiento promedio por paso en un proceso de purificación de 10 pasos es de 60 %, el rendimiento global del proceso de purificación es de 0.6 %. Si debido a la desnaturalización del producto el rendimiento desciende a 30 % por etapa, el rendimiento global del proceso es 0.0006%. Esto significa que se require 1000 veces más cantidad de materia prima para lograr la misma masa de proteína purificada. Por otra parte si el rendimiento promedio por paso fuese de 95 %, el rendimiento total alcanzado sería del 60 % (Hearn y Anspach, 1990). Ejemplo 1.1: Estimación de la pureza y el rendimiento de una enzima en un proceso de purificación. En el desarrollo de un proceso para la obtención de una enzima a partir de E. coli, se sabe que ésta tiene un 80 % de humedad y que el 60 % de su peso seco es protema. El proceso de purificación de la enzima consta de 4 pasos (Figura 1.5). En la tabla siguiente se presenta

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

11

Salida delire este'ril

Esterilizador continua (A)

i

uu
. i[ J

Tanques de m

l±LJJ

Sedimentador 1 Sedimentador2 o*1 (B) » ' filtra de aire esteVH

TSrfii r tííH i hi
I •** t Fermentadorde producción (O) Centrifugas

Tanque de almacenamiento

intercambiador de calor

e
(E)

'—.

Compresor Tratamiento de i* desechos Tanque de
* 4•sterilizaáon

^ t t
1 1 1

otras corrientes de desecho CNBr formato

nn i_r
.f , 1

Reactor para eliminación de CNBr (H)

Reactor de solubilización

Figura 1.3: Representación esquemática del proceso para la obtención de Insulina Humana. Fuente: Datar y Rosen, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

12

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

Del tratamiento d«CNBr

bufer tris

enzimas

Reactor de cuMonaáón (K) bufer bufer Iris tris*NaCt _,;•?

ü?
T
d**«eho i HiPLC (O) enzimatico (NJ

^
desecho (M) acetato de amonio

Reactor de renaturalización (L)

3r
1

IjU
Uhrafihraeión vapor PRODUCTO Reactor de cristalización (Q) Centrifugación Evaporador instantáneo

Figura 1.3: Continuación.

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

13

Rendimiento ( % )
100 _

95%

90%

4 6 8 Número de pasos

Figura 1.4: Representación gráfica del rendimiento global de un proceso de purificación de un producto biotecnológico en función del número de pasos. Fuente: Hearn y Anspach, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

14

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

la cantidad de enzima y de proteína total al final de cada paso. Proteína Enzima Fracción total (g) total (g) enzima xlO~ 3

Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Crom atografía gel

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

Se desea obtener el factor de purificación de la enzima en cada paso, el rendimiento por paso y el rendimiento global.
/-'

Solución:
El factor de purificación, el rendimiento por paso y el rendimiento global del proceso se presentan junto con los datos del problema en la tabla siguiente:
Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Cromatografía
gel

Prot. tot. (g)

Enzima tot. (g)

Fracción enz. XlO~ 3

Factor de purific.

% Recup* ración Por etapa Global

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

1 5 30 150

100 75 80 75

100 75 60 45

a). El factor de purificación se obtiene mediante el cociente de la fracción de enzima en cada paso, entre la fracción de enzima inicial. b). El rendimiento en cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en cada paso, entre la cantidad total de enzima al inicio del paso. c). El rendimiento global al final de cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en ese paso entre la cantidad total de enzima inicial.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS

15

Rompimiento celular con sulfato de amonio

i Precipitación

Fracción colectada

35

40

45

50

55

60

70

100

% de saturación Cromatografía de intercambio iónico

Carga

Elución Número de fracción

Cromatrografia de filtración por gel

Producto

Número de fracción

Figura 1.5: Proceso hipotético de cuatro pasos para la purificación de una enzima.

16

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

El conocimiento tecnológico de los procesos biotecnológicos de segunda y tercera generación es limitado. Actualmente es necesario profundizar en los métodos de escalamiento de algunas operaciones, ya que generalmente se han adaptado a escala comercial a partir del laboratorio. En el proceso de escalamiento es necesario considerar los volúmenes y normas del mercado para el producto (Nuil, 1987). La Biotecnología ha adoptado con éxito operaciones de la Ingeniería Química, en la purificación de productos biotecnológicos tradicionales. Sin embargo, existen limitantes para lograr ésto cuando se trata de obtener productos característicos de la segunda y tercera generación. Existe una necesidad real de desarrollar procesos de bioseparaciones apropiados, con la participación de bioquímicos y biólogos con el propósito de lograr, tanto la pureza deseada del producto, como la eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).

1.3

Sumario

Los procesos de bioseparación involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Las bioseparaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para obtener un producto biotecnológico en las condiciones de pureza y actividad requeridas. La economía de los procesos biotecnológicos depende en gran medida de las operaciones de bioseparación que involucran, de tal manera que la correcta selección de estas operaciones tiene un fuerte impacto en el éxito del proceso.

1.4.

PROBLEMAS

17

1.4

Problemas

1.1 .-Efectuar un análisis comparativo en relación a las operaciones de separación que utilizan, de los procesos para la producción de ácido cítrico, penicilina e insulina. 1.2.- Un proceso para la recuperación de hidroxibutirato deshidrogenasa consta de tres pasos: Un rompimiento de las células para liberar la enzima intracelular, seguido de dos pasos de adsorción/ desorción por afinidad. En la siguiente Tabla se presentan los datos obtenidos de actividad de enzima y proteína total al final de cada paso. Calcular la actividad específica, el índice de purificación y el % de recuperación. Paso Rompimiento Ads/Des (1) Ads/Des (2) Actividad Total Proteína Total (Unidades) (mg) 6,860 6,800 5,380 76,200 2,200 267

1.3.- Completar la siguiente tabla relacionada con la purificación de una enzima:
Vol.
Material Extracto ler. piso
mi
500
50

Conc. prot. mg/ml
14 10

Prot. total "IR
7 60

Act. enzim. U/ml

Act. total U

Act. esp. U/mg

Rend. Total Etapa

Fac. purif.

1.4.- En un proceso biotecnológico para producir una enzima que se encuentra en desarrollo, se obtiene una concentración de 0.1 mg/ml de la enzima en el caldo inicial. Si a los proyectos se les exige un margen sobre ventas del 50 %, estime el costo de producción máximo del producto utilizando la Figura 1.2

18

CAPÍTULO!.

INTRODUCCIÓN

1.5

Bibliografía

Bujurstrom, E. 1985. Biotechnology. Chem. Eng. Feb. 18. Me Graw Hill. New York. 126-158. Cooney, C. L. 1990. Separations for biotechnology. Trends in Biotechnology. 8, 338-340. Datar, R.V., Cartwright, T. y Rosen, C.G. 1993. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. Bio/Technology. 11, 349-357. Datar, R. y Rosen C. G. 1990. Downstream process economics. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 741-793. Dwyer, J. 1984. Scaling up bioproduct separatíon with high performance liquid chromatography. Biotechnology. 2, 957-964. Hearn, M. T., y Anspach, B. 1990. Chemical, physical and biochemical concepts in isolation and purification of proteins. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 17-63. Kalk, J. P. y Langlykee, A. F. 1986. Cost estimation for biotechnology projects. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. Demain, A.L. y Solomon, N. (Eds.). American Society for Microbiology. New York. 363-384. Nuil, H. R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook of Separation Process Technology. Rousseau, R.W*, (Ed.). John Wiley & Sons. New York. 982-995. Wang, D. I. C. 1988. Biotechnology: Status and perspectives. AIChE, 84-18, 1-21.

Las metodologís utilizadas para 19 . particularmente en su secuencia de operaciones de bioseparación. En este capítulo en la sección 2. Por ejemplo.1 Introducción El desarrollo de un proceso biotecnológico para la obtención de un producto de interés comprende varios aspectos. Un aspecto central en el diseño de un bioproceso. 1990). (Kelly. aún cuando la factibilidad técnica de un proceso dado pueda ser atractiva. debido al alto costo que éstas representan. fundamentalmente los económicos relacionados con el mercado y los técnicos que involucran el diseño del proceso . bajo las restricciones presupuéstales establecidas. es la especificación de la secuencia de operaciones de separación que se requieren. Los equipos más comunes para realizar dichas operaciones se describen en la sección 2. En el diseño de un proceso es necesario un trabajo completo y cuidadoso que permita desarrollar y evaluar varios esquemas de operación con el propósito de aproximarse al diseño óptimo. 1987).Capítulo 2 Selección del Proceso 2.2 se presenta los principales aspectos económicos y técnicos a considerar para la selección de un proceso biotecnológico.3. El estudio de mercado permite evaluar el potencial económico del proceso y es requisito indispensable para la formulación del proyecto a desarrollar. el valor esperado del producto pudiera no justificarlo (Knight.

1: Elementos para la selección de un bioproceso.1): • Económicos: Relacionados principalmente con el mercado y las especificaciones del producto.5. • Técnicos: Relacionados directamente con el el proceso.Operaciones y secuencia -Escala • Etapas o tiempo por operación -Costo PRODUCTO Figura 2. .20 MERCADO CAPÍTULO 2. la selección apropiada de la secuencia de bioseparaciones para un proceso se establecen en la sección 2. SELECCIÓN DEL PROCESO ESPECIFICACIÓN DEL PRODUCTO PROCESO .2 Fundamentos Los factores que intervienen en la selección de un proceso biotecnológico son de dos tipos (Figura 2. 2.

Productos de alto valor.50 Datos de: Spalding. En los productos libres de competencia. Productos de alto volumen de producción. Con frecuencia las especificaciones sobre pureza . pero existe una tendencia hacia un incremento en la competitividad del mercado.00 $ 100.1): 1. bajo volumen de producción y libres de competencia. especificando claramente la pureza y recuperación que se desea obtener. en mercados muy competitivos. de Dosis Masa 21 1 2 GENENTECH Diversas t-PA BST* $ 2000. como la BST. Sin embargo. 1991. FUNDAMENTOS Tabla 2. la economía del proceso cobra especial importancia (Spalding. * Somatotropina de Bovino 2.2. El mercado de los productos biotecnológicos puede enmarcarse entre dos casos extremos (Tabla 2.000 5 X 10* 10 Kg 100 Tons.1: Influencia del mercado en el precio del producto. 2. Caso tipo Compañía Producto Precio por dosis Demanda Anual (USA). El primer paso en la selección de un proceso es la definición del objetivo del mismo. ya que determina el precio del producto. como el t-PA.1 Mercado y Especificación del Producto El mercado es un factor muy impoortante para el establecimiento de un bioproceso. es posible que se seleccione el primer proceso exitoso que se logre en el laboratorio. si el mercado del producto aumenta y aparecen nuevos competidores.2. Es en esta transición donde el diseño adecuado de los bioprocesos presenta especial relevancia. 0. Actualmente varios productos biotecnológicos modernos están libres de competencia. No. 1991).2.

Generalmente existe una propiedad diferente que es la base primaria para la separación. SELECCIÓN DEL PROCESO del producto son establecidas por regulaciones legales o por el mercado. Tal y como se observa en la . así como la propiedad en que se basan. En este trabajo sólo se abordan estas últimas. 1987). Las especificaciones de recuperación son fijadas para asegurar la economía del proceso. se observa que hay una secuencia preferencial aunque no estricta. así como su pureza y la recuperación deseada. Idealmente la recuperación debe ser una variable dependiente del diseño de proceso. el siguiente paso es determinar que operaciones son capaces de realizar la producción y la separación del producto. Número de etapas por operación. Operaciones de Separación y su Secuencia Una vez definido el producto (o productos) que se desea obtener. Los métodos de separación usados con más frecuencia.22 CAPÍTULO 2. en la búsqueda de la optimización del mismo.2 En un análisis realizado con datos de 100 artículos publicados sobre purificación de proteínas. En la práctica. con la cual se desarrollan las operaciones de separación (Bonnerjea y Hoare. La escala del proceso. se muestran en la Tabla 2. 2.2.2 El Proceso El diseño de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que es necesario realizar antes de construir una planta productiva. El objetivo del diseño de un proceso de separación es explotar esta diferencia en las propiedades en la forma mas económica. debido a limitaciones de tiempo esta fase no siempre se concluye (Nuil. 1986). y tiene como objetivo definir las principales características del proceso como: La secuencia de operaciones de proceso. Las operaciones de separación se basan en las diferencias que existen entre las propiedades físico-químicas de los componentes presentes en el caldo de cultivo. El costo del proceso.

Método (Operación) Propiedad Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Ultrafiltración Intercambio Iónico Diálisis Electrodiálisis Membranas Líquidas Electroforesis Cromatografía Filtración por Gel Presión de vapor Distribución entre fases b'quidas inmiscibles Punto de fusión o solubilidad Sorción superficial Difusividad y solubilidad Tamaño molecular Equilibrio Difusividad Carga eléctrica y movilidad iónica Difusividad y equilibrio Carga eléctrica y movilidad iónica Depende del tipo de fase estacionaria Tamaño y forma molecular .2. FUNDAMENTOS 23 Tabla 2.2.2: Operaciones de separación y su propiedad básica.

después la cromatografía de intercambio iónico. Cualquier proceso de separación que se escoja. Copyright ©1986. Esto es importante porque varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte . Escala de Operación Frecuentemente la escala de operación es el factor económico determinante en la selección entre procesos de separación alternativos. SELECCIÓN DEL PROCESO i 2 a 4 s Afinidad e __ Homogmizactón Intercambio iónico Filtración «n G«l PrecipiUción Figura 2. Esta secuencia es valida generalmente en el caso en que el producto sea una proteína.2: Secuencia de operaciones utilizadas en un proceso de purificación de proteínas.2 frecuentemente la homogeneización va seguida de una precipitación. 1986. deberá ser compatible con la escala industrial a la cual se va a diseñar. Fuente: Bonnerjea et al. la realidad es que cada producto presenta una secuencia de separación óptima diferente. Figura 2. la separación por afinidad y finalmente la filtración por gel.24 CAPÍTULO 2. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co.

este límite superior se debe a una restricción impuesta por un fenómeno físico inherente a la operación de separación. En tal caso. mientras que en otros casos el límite superior se debe simplemente a las limitaciones que ofrece la fabricación de equipo comercial.2. FUNDAMENTOS 25 industrial. Las operaciones de separación que aparecen en la Tabla 2. siempre y cuando no haya formación de mezclas azeotrópicas entre los componentes que serán separados.1 tienen diferente habilidad para realizar una separación en una sola etapa. La electroforesis en cambio. La adsorción es una operación que consiste de . Número de Etapas por Operación Otra variable importante en la selección de un proceso de separación (Figura 2. puede ser necesaria una planta piloto para probar la operación integrada del proceso. Muchas operaciones de separación tienen un límite respecto de la capacidad máxima que pueden manejar y esto limita la escala de producción para la cual esa operación puede ser considerada. entonces la única forma de tener confiabilidad a gran escala es usando múltiples unidades en arreglo paralelo. es el número de etapas de contacto que se realizan por operación. Cada operación de separación tiene en sí misma una determinada confiabilidad que es producto de la experiencia y conocimiento de la misma.3 se pueden observar las capacidades máximas en una sola etapa de algunas operaciones de separación. Así se tiene que la destilación es la operación más confiable de los procesos de separación por el conocimiento que de ella se tiene. En la mayoría de los casos una operación de una sola etapa es más económica que una operación de etapas múltiples. En la Tabla 2. En algunos casos.2. La extracción requiere de al menos dos etapas de contacto para separar un flujo de alimentación en dos corrientes y obtener el producto en condiciones aceptables. Debido a consideraciones de confiabilidad del diseño. es una operación que se realiza a pequeña escala.1). Así por ejemplo. todas las operaciones deben ser incluidas en la planta piloto aún cuando no se requieran pruebas individuales de confiabilidad de cada una de ellas. la destilación es una operación capaz de separar una mezcla binaria en una sola etapa.

45x106 kg/año de flujo de agua 1000 kg/año de producto O. Operación de Separación Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Límite Comercial por Operación Simple Sin límite Sin límite 10-70xl06 kg/año Sin límite 0. Todos los derechos reservados. Copyright ©1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2. con varios módulos por unidad 0.45xl06 kg/año flujo de agua por módulo. . con varios módulos por unidad 450xl06 kg/año de ' flujo de agua 0. 1987.OQxlO6 kg/año de líquido 100 kg/año de producto Ultrafiltración Intercambio Iónico Electrodiálisis Electroforesis Separaciones Cromatográficas Filtración por Gel Fuente: Nuil.45xl06 kg/año de flujo de agua por módulo.26 CAPÍTULO 2.3: Capacidades máximas por operación.

Esto comprende la estimación del costo total del producto y del capital necesario para la inversión. FUNDAMENTOS 27 dos etapas. sino que .Como se muestra en la Tabla 2. el costo total del producto se divide comunmente en dos partes: costos de fabricación y gastos generales. la separación requiere varias etapas. se requieren etapas de procesamiento adicionales para obtener el producto con la pureza deseada. los costos fijos y la parte proporcional de los gastos generales de la planta.2. cromatografía. dado que separan el producto por dilución. y la filtración en gel. debido a que éstas constituyen la'mayor parte de estos costos. en caso de que esto no sea así.2. Costo Total del Producto. la adsorción en si misma. Los costos de las materias primas son más relevantes en sistemas de producción basados en procesos biológicos que en plantas químicas convencionales. se debe estimar el costo del mismo. conjuntamente con los ingresos esperados. determinan la rentabilidad del proceso. En los costos de fabricación se ubican los costos de operación. Teóricamente la ultrafiltración puede separar dos solutos de alto peso molecular si la diferencia en tamaño molecular es del orden de 10. En el caso de las operaciones de electroforésis. que se ha identificado el producto que se desea obtener y se ha establecido el proceso. mientras que en los convencionales sólo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke.4. 1986).. En los procesos de producción biotecnológicos. esto es. En los primeros las materias primas pueden representar del 30 al 80 % del costo de producción. Costos Una vez que ha sido definido el objetivo de la separación. En cualquier caso de los señalados anteriormente. Ambos parámetros. no solamente las materias primas principales (aquellas que se convierten directamente a producto) tienen un impacto significativo sobre la economía del proceso. requieren etapas de concentración posteriores. Dentro de los costos de operación directos se puede resaltar los costos de las materias primas que son consumidas directamente en el proceso de producción del producto o que son usadas en la recuperación del mismo. y la regeneración del adsorbente.

operación e. IV. Materias primas y suministros a. c. VI. Depreciación B. vapor electricidad agua tratamiento de desechos II. laboratorio g. materia prima primaria b.28 CAPÍTULO 2. mantenimiento f. salarios y estímulos b. Seguros D. horas extras C.4: Factores que intervienen en el costo total del producto. Servicios a. Renta III. materia prima secundaria c. d. Impuestos C. fletes d. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2. Proporción de Gastos Generales de la Planta Administración Mercadotecnia Investigación y Desarrollo Para estimación de costos: Costo de Fabricación (CF) = I+II+IH Gastos Generales (GG) = IV+V+VI Costo Total del Producto =CF-f GG - . V. b. Costos Fijos A. Costos de Operación Directos A. Mano de obra y supervisión a. otros B. I.

esto es. Costos Fijos ( 1 1 % ) III. ' La parte proporcional de los gastos generales de la planta que se le asignan al producto. Estimación del Capital de Inversión.3 se presenta una estructura de costos típica para un producto biotecnología). construcción y . enzimas inductores y materiales de recuperación. del 10 al 40 %. En la Figura 2. Gastos Generales (20 % ) de °0stos ?ara un Producto biotec- también las materias primas secundarias como cofactores..El capital de inversión total se conforma del capital fijo y del capital de trabajo. Los sueldos y salarios representan una fracción importante del total de los costos de fabricación. Costos de Operación Directos (59 % ) II. influyen considerablemente en los costos de producción.2. Los costos fijos comprenden la depreciación de maquinaria y equipo impuestos y seguros principalmente. FUNDAMENTOS 29 I.2. Proporción de Gastos Generales de la Planta ( 1 0 % ) IV. El capital fijo se refiere a todos los fondos necesarios para el diseño. son aquellos que se requieren para la operación eficiente de la planta pero no son asignables directamente al producto y se estiman entre el 10 y 50 % de los sueldos y salarios (Kalk y Langlykke.

como son los proyectos biotecnológicos.Producción de somatotropina porcina. El capital de trabajo es la inversión necesaria para la operación normal de la planta una vez contruída. Los costos de arranque son difíciles de estimar y pueden ir desde menos del 5 % del capital de inversión fijo para una planta basada en una tecnología ya establecida. se cuenta con los siguientes datos: 1. Técnicos: Concentración celular al final de la fermentación en peso seco 35 g/i Peso proteína/peso celular: 57 % Proteína SP/proteína total : 20 % Recuperación total esperada: 25 % Duración del ciclo de fermentación: 30 h Días de operación anual: 330 días . SELECCIÓN DEL PROCESO arranque de la planta. hasta más del 50 % del capital fijo para nuevas tecnologías donde no se tiene experiencia.00 dlls. Para producir SP mediante un cultivo de células recombinantes. y comprende los requerimientos de sueldos e inventarios. Ejemplo 2. (base: 1988) 2. Cuando se administra a cerdos la hormona somatotropina porcina (SP) se incrementa la velocidad de su crecimiento hasta en un 30 % y disminuye su contenido de grasa.30 CAPÍTULO 2. Mercado: Producción estimada = 6. Cada cerdo requiere de una sola dosis de 200 mg. Cuando se comparan dos procesos de separación alternativos.1.000 Kg/año Precio por dosis de 200 mg = $6. se escoge el que requiere mayor capital solamente si la rentabilidad generada es tan grande que justifica la diferencia de requerimientos de capital entre ambas alternativas. Es en este punto donde se hacen las estimaciones de escala del proceso y la estimación del costo de los equipos necesarios para las operaciones previas y las bioseparaciones.

Si se considera el volumen de fermentación como el 70 % del volumen total del fermentador. . entonces el volumen de fermentación V/ es: Vj = 32.500 / Considerando este fermentador se realizan las siguientes estimaciones de costos. = 22. „ x ___ ? x * 0.037 / dias x ciclo x "24 h ^ ~ ~ .015.2..784 I/ciclo puede ser manejado por un solo fermentador. FUNDAMENTOS Impuesto sobre la renta (ISR): 45 % 3.000 Kg * 35 f = 6.2 Kg 0. .25 Kg = 210.57 (b) Volumen de fermentación total (Vt): 210. Estimados: (a) Producción de peso seco celular: 31 ™™ = 6000 — año 0.500 Kg/año 1 Kg 1 Kg 1 Kg x .015.784 I ¡ciclo Este volumen de 22.2.037 / ~ (c) Volumen por ciclo de fermentación Vc = Vc 6.

141.618.00 Subtotal: 1.00 Subtotal: 2. El costo promedio del producto.420. servicios e investigación y desarrollo: 10.949.00 Subtotal: 13.581. .864.00 1. construcción y contratos: Capital de trabajo. 2.420.680. Gastos generales de planta: IV.720.00 000.00 $ 17. (A) Materias primas y suministros: (B) Mano de obra y supervisión: (C) Servicios (agua.00 580.00 1.763.880.756.054. Costos (dlls.191.00 $ 31. 2 meses de materias primas.00 487. SELECCIÓN DEL PROCESO 4.153. base 1988) I.756.600.579.579.141.00 85. electricidad y tratamiento de desechos): II.236. vapor. Investigación y Desarrollo: Total: 6.100.679.00 2.00 1.050.00 7.848.873. Mercadotecnia: VI.518. El retorno sobre la inversión. Costos de operación directos.165.746.000.975.00 293.00 Subtotal: 5.00 587. (A) Depreciación: (B) Impuestos: (C) Seguros: (D) Renta: (E) Mantenimiento: III.315. Administración: V.469. instalación e instrumentación: (B) Instalaciones eléctricas: (C) Edificios: (D) Instalaciones: Inversiones diferidas.500.780.951. (A) Ingeniería.592.00 13.00 Subtotal: Total: 1. Costos fijos.976.585.00 5. Capital de inversión: Inversiones fijas.32 CAPÍTULO 2.950.00 2.00 2.939.00 Estimar para este proceso: 1.00 15. (A) Equipo de proceso.00 000 000.

000 Kg/año Costo promedio = 2.270 2.000 £j£ x ^92 Menos costo anual Utilidad bruta Menos 45 % ISR Utilidad neta Mas depreciación 180.236/ano G ost o F promedio = --6. 932 $/Kg = $92. .939.236 162. 2. Costo porcentual del producto por concepto. FUNDAMENTOS 3.016 El retorno sobre la inversión RSI expresado en porcentaje.000 17.2.494 89.324. esto es: $17.264.264016 3.592.746 Flujo de efectivo neto $ 92.2.083. está dado por el cociente del flujo efectivo neto y el capital de inversión por 100. por lo tanto: RSI $3115300 RSI = 296% Esto significa que el proyecto es muy atractivo bajo las condiciones establecidas.000.764 73. 33 Solución: 1. Cálculo del retorno sobre la inversión: Ingreso anual: 6.592.407. Costo promedio del producto: El costo promedio del producto se obtiene mediante el cociente del costo anual y la producción estimada del producto. El costo porcentual de cada concepto del producto.

.315./0 ~ ' Total: 100.236 X 1UU ~ O.592. La Tabla 2.763.746 17. así como centrífugas tubulares.054.592.236 1.592.8 4% 17.236 X 2. Remoción de insolubles: Con frecuencia se usan sistemas de filtración al vacio.469.848 17.592.864 .236 1.000 . .. de discos con descarga intermitente o de canasta. sistemas de filtración intermitentes. 17. Varios tipos de equipos pueden ser empleados para una misma operación y la selección depende en gran medida del tipo de producto que va a obtenerse.592.00 % 2.1VO 2.939.873 y 1 00 . Algunos de los equipos más usados en cada una de esas etapas son los siguientes: 1. SELECCIÓN DEL PROCESO Este costo está dado por el cociente del costo de cada concepto entre el costo de operación: Concepto Materias primas y suministros Servicios Depreciación Mantenimiento Gastos generales Inversión y desarrollo Otros Costo porcentual 6.581 17. 17.34 CAPÍTULO 2.8% 100 16 7% x iuu .236 X 1.592.5 muestra las operaciones más comunes por etapa en función de las características de los procesos y productos biotecnológicos.236 X 8.500.3 Equipo Parte importante en la selección de un proceso biotecnológico consiste en determinar el equipo necesario para realizar una determinada operación.1 D .

Extracción por solventes .2.Destilación Extracción en dos fases acuosas Adsorción Precipitación Ultrafütración Purificación .3.Ultrafiltración .Adsorción .Abrasión .Adsorción .Cromatografía . EQUIPO 35 Tabla 2.5: Operaciones de bioseparación empleadas de acuerdo a las características del proceso Generaciones Etapa Primera Segunda Tercera Remoción de Insolubles Filtración Centrifugación - Filtración Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Rompimiento .Cromatografía .Permeabilización Concentración .Electroforesis .Homogeneización .

4. Purificación: En esta etapa se emplean diversos sistemas cromatográficos que se traducen en la utilización desde equipos muy sencillos como puede ser una simple columna. evaluación y optimización. Rompimiento celular: En esta etapa los equipos que más se manejan son los homogeneizadores y los molinos de perlas. la teoría y el apoyo computacional disponible. dependiendo de la presentación con que se va a lanzar el producto al mercado. . Optimización: Determinación de las condiciones para lograr el valor óptimo de una función objetivo. pueden utilizarse liofilizadores secadores y cristalizadores. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. También son utilizados en esta etapa sistemas de electroforésis.4 Diseño El diseño de un proceso biotecnología) comprende diversas actividades basadas en la experiencia. hasta equipos muy sofisticados como los utilizados en cromatografía liquida de alta resolución. así como también tanques agitados y lechos empacados con diversos tipos de adsorbentes. Concentración: En la concentración del producto se emplean extractores que pueden funcionar en forma continua o intermitente. Acabado: En la etapa de acabado. 2. Entre estas actividades podemos destacar las siguientes: Síntesis: Establecimiento de las operaciones del proceso o diagrama de flujo. se derivan del diagrama de flujo seleccionado. 3.36 CAPÍTULO 2. Análisis: Modelación y establecimiento de los valores de las variables del proceso. seguridad y confiabilidad del proceso. Evaluación: Economía. 5. El éxito de un diseño depende fuertemente de la síntesis del proceso ya que las tres actividades restantes: análisis.

el diseñador de proceso determinará los costos de operación y capital con el mayor detalle posible. — Método heurístico — Método algorítmico — Sistemas expertos 2. ni las descripciones cuantitativas de los métodos de separación están suficientemente desarrollados. para encontrar en forma rápida el diseño óptimo. Este nuevo caso base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base óptimo.1 Desarrollo de un Caso Base En la práctica normal el caso base representa el juicio cualitativo del ingeniero de diseño y presupone ser el proceso de separación más económico que pueda ser desarrollado dentro de las restricciones que en tiempo y dinero tiene el proyecto (Nuil. lí)87). Cuando el caso base ha sido evaluado. En esta sección se describen los dos enfoques complementarios utilizados para la selección de un proceso: • Desarrollo de un Caso Base. dado que ni los algoritmos computacionales.4. El proceso alternativo se evalúa con las mismas restricciones que el caso base. entonces éste nos lleva a un nuevo caso base de diseño.2.4. Si el proceso modificado tiene costos de operación y capital más bajos. DISEÑO 37 Actualmente existe un gran interés por el desarrollo de métodos computacionales para el diseño de procesos que incluyan la síntesis de los mismos y que permitan el análisis y la evaluación de diversas alternativas. Una vez que el caso base ha sido seleccionado. se hace un juicio sobre el más próximo proceso económicamente competitivo. . • Síntesis de procesos. Sin embargo. En la práctica los procesos rara vez se seleccionan de esta manera. estos métodos cada vez son más utilizados como apoyo en algunas fases de la selección del proceso.

Si el rompimiento de la célula se lleva a cabo por métodos mecánicos.38 CAPÍTULO 2. Hacer las separaciones mas caras y difíciles al final. El método heurístico. 3. 2. 2. son producto de este tipo de trabajos. como las usadas en el diseño de procesos de purificación de proteínas a gran escala: 1. la aproximación heurística no garantiza la solución óptima. Primero remover el componente más abundante. Al basarse en la experiencia. el sentido común y la intuición del ingeniero. Primero remover lo que sea mas fácil. el método algorítmico y los sistemas expertos. Si el producto es intracelular. es decir la secuencia de operaciones para transformar una serie de materias primas en productos. Método Heurístico El método heurístico trata de limitar las alternativas posibles para un proceso usando reglas desarrolladas a través de diseños previos y la experiencia. Existen reglas heurísticas más específicas que las mencionadas anteriormente. Si la célula cultivada es de mamífero.2 Síntesis de Proceso La investigación que se realiza para seleccionar un proceso. se requiere romper la célula. Aún así. Algunas de estas reglas heurísticas son generales y aplicables para la síntesis de procesos de bioseparación. el producto es extracelular. 4. 3. se requiere precipitar los ácidos nucleicos. Seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes. SELECCIÓN DEL PROCESO 2.4. se llama síntesis de proceso. . Cuatro de tales reglas heurísticas son (Petrides et a/. estos métodos han probado ser una herramienta valiosa en la optimización de la estructura del proceso. 1989): 1.

es menor que 60 g/l. DISEÑO 39 4. En el caso de los productos intracelulares. La recuperación y purificación de los productos extracelulares es comparativamente más fácil de realizar que la de los productos intracelulares. Si la concentración de la proteína total al final de la recuperación y antes de la purificación. En el desarrollo de un diagrama de bloques para un nuevo proceso. es necesario distinguir entre productos extracelulares e intracelulares. en el desarrollo de bases de conocimientos para sistemas expertos (Prokopakis y Asenjo. Si la alimentación para la purificación por cromatografía no es un caldo claro. Si uno o dos pasos de intercambio iónico producen una pureza similar a la de cromatografía de afinidad. se seleccionan para cada etapa las operaciones alternativas posibles. Posteriormente. 8. Aproximación Heurística para la Selección de un Proceso de Bioseparación. Este tipo de reglas son utilizadas conjuntamente con otras aún más específicas.Se presenta en esta sección una aproximación heurística de la síntesis de un proceso de bioseparación de materiales biológicos típico (Petrides et a/. 5. se requiere concentrar el producto. consiste en desarrollar un diagrama de bloques de sus principales etapas. 7. La filtración en gel se puede utilizar como una etapa de separación intermedia sólo para la eliminación de sales.4. 1989). El primer paso en la síntesis de un proceso. 6. las operaciones que se utilizan son las siguientes: .4 1.. se requiere un pretratamiento. La filtración por gel se puede utilizar como un paso de acabado sólo para separar fracciones proteicas. 1990). debe escogerse el intercambio iónico.2. El desarrollo del diagrama de bloques está basado en la estructura general que se prqsenta en la Figura 2. Etapas de Recuperación Primarias: Productos Intracelulares.

4: Diagrama de flujo de un proceso de bioseparación.40 CAPÍTULO 2. . 1989. Todos los derechos reservados. Copyright ©1989 AIChE. SELECCIÓN DEL PROCESO BtORREACTOR Producto intracelular COSECHA DE CÉLULAS Centrifugación Microfirtración UKrafütración Producto extraoelular REMCOON DE BIOMASA Filtración al vacío Centrifugación Microfiltración Ultrafiltradón Filtración en prensa Filtración en cámara Rotación ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Homogenización Molino d« perlas Choque osmótico EXTRACCIÓN DELPROOUCTO Solventes orgánicos REMOCIÓN DE DESECHOS Centrifugación Micfufilb ación Filtración al vacío Filtración por presión Polímero -s Ruidos supx Adsorción Micelas inv« Destilación RENATURAUZACION Solubilización Reoxidación CONCENTRACIÓN Ultrafiltradón Evaporación Osmosis inversa Precipitación Cristalización Extracción Adsorción Destilación Especificaciones de afta pureza Especificaciones de baja pureza PURIFICACIÓN FINAL Adsorción Filtración gei Eledrodialisis Diafiltración Electroforesis DESHIDRATAOON Secado por aspersión Secado por Ikrfilizaoón Secado en lecho fluidizado Figura 2. Reproducida con el permiso de American Institute of Chemical Engiixeers. Fuente: Petrides et al.

la filtración por membrana es la que produce mejores resultados. Con filtración por membrana se recuperan todas las células. DISEÑO 41 (a) Cosecha de Células: El primer paso en un proceso para la recuperación de productos intracelulares es la cosecha de células. Cuando el flujo es mayor que 20 //m 2 — h. Para microorganismos más pequeños pueden usarse técnicas de coagulación para aumentar el tamaño de la partícula que sedimentará. Para altas capacidades (varios m3/h) solamente se puede disponer de homogeneizadores.4. Dentro de éstos se puede destacar el uso de la digestión enzimática para liberar proteína intracelular de bacterias gram-positivas.2. Remover primero el líquido extracelular. . también se utilizan métodos químicos. la centrifugación y la filtración por membrana son las únicas técnicas usadas para cosecha de células a gran escala. siempre que no se presente rompimiento o lisis. microfiltración o filtración por presión. La filtración por membrana tiene ventajas para cosechar células pequeñas como la de E. coli. así como el choque osmótico que puede utilizarse para liberar proteínas del espacio periplásmico. está en completa concordancia con la primera regla heurística: primero remover el componente más abundante. (b) Rompimiento de Células: Con frecuencia el segundo paso en la obtención de productos intracelulares es el rompimiento de la célula. Otra ventaja de la filtración por membrana es la recuperación del producto. La centrifugación tiene ventajas para microorganismos grandes (diámetro mayor que 2 mieras y densidad mayor que 1030 kg/m3). la disolución lipídica para el caso de bacterias gram-negativas. Como se establece en la Figura 2. Para el rompimiento celular. El rompimiento de bacterias y levaduras es realizado por homogeneizadores a alta presión o con molinos de perlas. (c) Remoción de Desechos Celulares: Una vez que la célula se rompe y el producto es liberado. Con la centrifugación siempre se pierden de 1 a 5 % de las células. los desechos son eliminados por medio de una o varias operaciones como: centrifugación.4.

SELECCIÓN DEL PROCESO Cuando el producto es soluble. Este es un problema común de muchas proteínas eucarióticas producidas por microorganismos procariotes. La separación del producto de los desechos y su concentración simultánea puede ser alcanzada utilizando técnicas de extracción-adsorción utilizando ya sea adsorbentes de afinidad o de intercambio iónico. las células rotas y el producto son mezclados en un tanque agitado con un adsorbente. Los sistemas de dos fases acuosas han sido aplicados para la recuperación de proteínas.42 CAPÍTULO 2. Posteriormente se pueden usar detergentes para remover otros contaminantes. Cuando se usan microfiltros para remover los desechos. Posteriormente sigue un paso de lavado en el cual muchos de los desechos y contaminantes son eliminados. . deben ser acompañadas de una operación de filtrado para eliminar las partículas más pequeñas. debido a que éstas pueden ocasionar problemas en etapas de bioseparación posteriores. La separación del producto de los desechos puede ser llevada a cabo también por extracción con solventes orgánicos o con algunas soluciones de polímeros. En este proceso. se requiere posteriormente realizar una diafiltración. coli. por ejemplo la hormona de crecimiento producida por E. éste es recuperado en la fase ligera de una centrífuga o en el filtrado de un filtro. La purificación es realizada por resuspensión y recentrifugación de la fase pesada en 2 o 3 pasos. Estos pueden ser separados de los restos celulares con una centrífuga de discos. Cuando el producto es insoluble (por ejemplo los cuerpos de inclusión). Las proteínas recombinantes forman cuerpos de inclusión dentro de la célula huésped. Las centrífugas son eficientes para la separación de partículas grandes como los restos celulares. de tal manera que cuando se usen para este efecto. principalmente en las de cromatografía. debe ser separado primero de otras partículas y posteriormente tratado para que adquiera su forma activa.

los filtros prensa y los filtros con membranas. el producto se encuentra diluido. Osmosis inversa. Se requiere que el coeficiente de partición del sistema sea alto para poder llevar a cabo la concentración del producto en el menor número de etapas de contacto. No hay una alternativa única para todos los productos. Extracción. i. la purificación es llevada a cabo mediante operaciones de alta resolución. La presión de operación típica varía entre 0. particularmente en la obtención de antibióticos.2. Ultrafiltración: Es una operación usada ampliamente para la concentración de proteínas. Después de una primera clarificación del caldo obtenido del biorreactor o una vez rota la célula. Evaporación. En esta operación los equipos más empleados son: la centrífuga decantadora.2 y 0. Si el producto es insoluble y se encuentra desnaturalizado. Extracción: La extracción con solventes es una operación ampliamente usada en la concentración de productos biotecnológicos. . Si el producto es soluble. entonces primero se renaturaliza y después se purifica. ii. 43 (a) Eliminación de Biomasa: La eliminación de biomasa es el primer paso que se realiza en un proceso de separación cuando el producto es extracelular. DISEÑO Etapas de Recuperación Primaria: Productos Extracelulares. Una vez realizada la separación primaria del producto ya sea éste intracelular o extracelular. para su concentración las operaciones alternativas son: Ultrafiltración. primero es necesario concentrarlo. Este paso se ajusta a la segunda regla heurística.h.4. Precipitación y Destilación. Cada uno de ellos tiene ventajas y desventajas según el tipo de producto y tipo de célula.5 MPa y el flujo promedio entre 20 y 50 l/m2 . haciendo de la selección un problema difícil. 2. Operaciones de Alta Resolución. (a) Concentración.

v. Estas unidades compiten en el mercado con la ultrafiltración y la osmosis inversa para la concentración de compuestos tanto de alto como de bajo peso molecular. las operaciones de purificación finales son normalmente la cromatografía y la ultrafiltración. Purificación. Precipitación: Es una operación usada para concentración y purificación. Comúnmente se usan sales. Estos cuerpos de inclusión pueden ser solubilizados mediante el uso de sales y agentes reductores. (b) Renaturalización. la operación de purificación final consiste sólo en la eliminación del solvente. Después que la proteína desnaturalizada es solubilizada. Al final se obtiene una solución de proteína diluida. frecuentemente forman cuerpos de inclusión en la célula recombinante. vi. Para productos de alta pureza.44 CAPÍTULO 2. Evaporación: Se utilizan evaporadores de películas delgadas los cuales operan a bajas temperaturas (40—50°(7) al vacío. distinguiéndose los productos farmacéuticos por su alta pureza en comparación a la de los productos industriales. La precipitación es usada para remover contaminantes. se eliminan los solubilizantes utilizando cromatografía o diafiltración. solventes y polímeros para la precipitación selectiva de compuestos de interés. . Las proteínas eucarióticas producidas por organismos procarióticos. Las operaciones para la purificación final dependen fuertemente de la pureza requerida del producto. Para productos de pureza relativamente baja como las enzimas para detergentes. SELECCIÓN DEL PROCESO iii. iv. Osmosis Inversa: Se usan unidades con membranas de tamaño de poro pequeño para la concentración de soluciones de productos con bajo peso molecular. Operan a altas presiones (4 a 6 MPa) y a bajas temperaturas. 3. Destilación: En los procesos de bioseparación esta operación se utiliza generalmente para la recuperación de solventes orgánicos.

tiene dos aplicaciones principales: remoción de pequeñas moléculas de las proteínas y remoción de proteínas contaminantes de la proteína producto.4. i. Puesto que el la carga depende del pH y la fuerza iónica. Es una operación altamente eficiente ( más del 90 % ). están basadas en las interacciones específicas entre biomoléculas. la de filtración por gel y la de afinidad.2. En la selección de la secuencia de estas operaciones debe observarse la cuarta regla heurística: "seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes. la filtración por gel es lenta comparada con otras técnicas cromatográficas. la selección normalmente está determinada por el pH al cual es estable el producto que se desea purificar. Es una operación apropiada en cualquier etapa de la purificación del producto y particularmente lo es para el manejo de grandes volúmenes de material con baja concentración de producto y gran cantidad de contaminantes. Cromatografía de Intercambio Iónico: Esta separación se basa en la diferencia de la carga molecular de las biomoléculas. iii. Su limitante es el alto costo de los materiales (ligandos) involucrados. . Normalmente se requiere de una secuencia de varias operaciones cromatográficas para alcanzar la pureza deseada del producto. DISEÑO 45 (a) Cromatografía: Es una operación que se realiza al final de un proceso. en concordancia con la regla heurística "hacer las separaciones más difíciles y caras al final". En el fraccionamiento de proteínas. entre otras. Cromatografía de Afinidad: Las separaciones por afinidad o reconocimiento molecular. cualquier anión o catión en un soporte puede ser usado para realizar la separación. ii. Cromatografía de Filtración en Gel: Este tipo de cromatografía separa moléculas en base a su tamaño molecular. En la práctica sin embargo. Existen diferentes tipos de cromatografía como la de intercambio iónico.

A cada operación unitaria de la superestructura se le asocia una variable binaria (una variable que sólo puede tomar los valores O ó 1) y se construye una formulación óptima. removiendo cualquier contaminación bacteriana. Generalmente el problema consiste en separar una mezcla que tiene TV componentes: /4. y esta separación puede ser realizada mediante M métodos de separación. Acabado. Una limitante de estas membranas es la incapacidad para la remoción de pirógenos y virus. SELECCIÓN DEL PROCESO Las operaciones de acabado comprenden aquellas que se realizan para la esterilización y estabilización del producto. Las técnicas más comunes de deshidratación para productos inestables son la liofilización y la cristalización. es en teoría el único camino válido para desarrollar un proceso óptimo. aplicadas a la optimización estructural de un proceso. se basa en el uso de la programación lineal (o no lineal) entera mixta (MILP o MINLP de sus siglas en inglés). Los microfiltros de membrana son utilizados para esterilizar soluciones biofarmacéuticas. A continuación se presenta una descripción de estas técnicas para una situación particular. . Actualmente la línea principal de investigación en técnicas de programación matemática. (7. B. Para incrementar la vida del producto se utilizan como agentes estabilizadores algunas sales como sulfato de amonio. Esto se basa en el hecho de que todas las secuencias posibles para el procesos pueden considerarse rigurosamente. Para minimizar el riesgo de contaminación el agua utilizada deberá estar libre de pirógenos. Algunos productos son más estables como sólidos. cloruro de calcio o cloruro de sodio. CAPÍTULO 2. Método Algorítmico El uso de algoritmos matemáticos para desarrollar la síntesis de un proceso.46 4. La idea principal de estas técnicas es la formulación de una superestructura que consiste en un diagrama de flujo que contiene todas las posibles alternativas de diseño.. . La síntesis consiste en obtener la . El desarrollo de estos algoritmos se lleva a cabo mediante técnicas de programación matemática.

En el caso de la destilación el orden de los compuestos de la mezcla es (ABC).5. (BC\ 4. se muestra a superestructura que origina el problema de separación de la mezcla ternaria considerando sólo los métodos de separación alternativos: destilación y extracción. En el caso de la extracción el orden en el cual se encuentran los componentes de la mezcla es (BAC). Se parte de una mezcla ternaria (ABC) y como resultado de una separación o varias separaciones de la mezcla se obtienen los subgrupos: 1. Se denominan fase ligera y fase pesada a los componentes adyacentes entre los cuales tiene lugar la separación.4. 5. (A). (ABC). En el extractor las separaciones que tienen lugar son: (B/AC) o (BA/C). extracción 3. lo que significa que el componente B tiene mayor solubilidad que el componente C. En la parte superior de dicha figura se muestra el proceso utilizando como operación de separación la destilación y en la parte inferior se muestra la separación por extracción. 6. . 2. destilación y 2. La destilación o la extracción pueden ser usadas en cualquier nivel de la separación.2. (AB). Los componentes en cualquier mezcla están colocados en orden descendente con respecto a la propiedad característica en la que se basa el método de separación. Para desarrollar este problema se hacen las siguientes consideraciones: 1. (£). En la Figura 2. 7. 4. Los métodos de separación son: 1. lo que significa que el compuesto A tiene mayor volatilidad que el compuesto C. DISEÑO 47 secuencia óptima de separación utilizando el costo total como función objetivo. 3. La función primaria de una etapa de separación es separar los dos componentes adyacentes. (C) 2. De esta manera pueden tener lugar dos separaciones en la columna de destilación: (A/BC) o (ABIC). (AC).

5: Superestructura de todas las secuencias de separación alternativas para una mezcla ternaria. Todos los derechos reservados. .48 CAPÍTULO 2. Fuente: Prokopakis y Asenjo. 1990. Copyright ©1990 . SELECCIÓN DEL PROCESO (ABC)] ->(AB/C) DESTILAaON EXTRACCIÓN -H (B/A) -H (A/B) -4(BAq -J (A/C) Figura 2. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

La función objetivo está sujeta a las siguientes restricciones: 1. 4. Se introduce una variable binaria 3/í. presión (P) y flujo (F). Se definen los siguientes índices: i: subgrupo j: método de separación empleado k: fase ligera obtenida en la separación 2. Una y solamente una separación que involucre al subgrupo con N componentes (mezcla original) de. Cualquier subgrupo que haya sido procesado no puede aparecer nuevamente en otra separación. Esta variable es función de parámetros operacionales como : temperatura (T). para la obtención de la secuencia de separación de costo mínimo. por medio de la destilación y cuya fase ligera es A.jt. Esta función puede puede formularse como: i 3 k de tal manera que el costo total CT sea mínimo.¿.4.jk para cada operación. cuando mucho una separación que involucre a ese subgrupo puede existir en la secuencia.be existir en la secuencia.¿. para cada operación.1 se asocia a la separación que se realiza en el grupo ABC '. 3. • .2) 2. Por ejemplo la variable binaria 3/1. M N-l £ £ y^k = l j=l k=\ Para « = 1. • 2" . Se establece la función objetivo que permite la optimización del proceso.2. DISEÑO 49 Para sistematizar el análisis se emplean las convenciones siguientes: 1.1. Para cualquier subgrupo. . Se define la variable costo C¿.1 (2.

entonces: M p=l Nm-l E *«*. Si la separación (i. Una vez que el diseñador ha alimentado al sistema experto (SE) con datos relativos al producto y a la fuente de .3) 3..j. J V . . Sistemas Expertos Un sistema experto es un programa de computadora diseñado para tomar decisiones fundamentadas en una base de conocimientos y en un sistema de inferencia. Cualquier separación (i. g=l g=l M Nn-l p=l Resolver el sistema de ecuaciones a que da lugar la ecuación (2. En particular.. . .es el número de componentes en el subgrupo. SELECCIÓN DEL PROCESO M Ni-1 Z/ZX¿fc = 1 P<*™¿ = 3. En algunos casos la formulación matemática de un problema de secuenciación de operaciones de separación puede simplificarse. entonces existe una y solamente una separación para para cada uno de los dos subgrupos. dando indicaciones al programa que le permitan la eliminación de algunas operaciones de separación.50 CAPÍTULO 2.k) produce dos subgrupos.j. los tres conjuntos de ecuaciones de restricción dados en la formulación anterior conjuntamente con las restricciones de los parámetros operacionales. y su complejidad aumenta conforme aumenta el número de métodos de separación considerados y el número de componentes de la mezcla respectiva. Por ejemplo: nunca usar la cromatografía de afinidad en presencia de partículas celulares o no usar la centrifugación después de la filtración. garantizan la viabilidad de la solución (Prokopakis y Asenjo.k) existe.1 j=i k=i donde TV.1) no es fácil. Sean m y n dos subgrupos. 1990). (2.

localización dentro de la célula y concentración. éste genera el diagrama de bloques de todas las etapas del proceso. el diseño de la secuencia de las operaciones de recuperación y purificación utilizando un sistema experto. peso molecular. En la Figura 2.6: Diagrama de operación de un sistema experto. En los procesos biotecnológicos para obtención de proteínas.6 se muestra un diagrama de operación de un SE. hidrofobicidad superficial.2. DISEÑO Parámetros generales Parámetros específicos Base de datos 51 Sistema Experto . Posteriormente el sistema decide sobre la operación unitaria particular que . Este diagrama contiene una descripción de aquellas operaciones en la secuencia de separación que deben ser llevadas a cabo para para obtener el producto con el rendimiento y pureza deseada por el usuario. el sistema debe ser capaz de generar un proceso de recuperación. se inicia con la respuesta del usuario a preguntas básicas sobre el producto y sobre la célula de la cual se va a obtener.Base de conocimientos • Sistema de inferencia Secuencia de Proceso Figura 2. donde se va a obtener. Una vez que se ha alimentado la información básica al sistema. Una pregunta típica es la siguiente: ¿Qué tipo de célula está siendo crecida para generar la proteína en cuestión? ó ¿cual es la concentración?. Se preguntará también sobre algunas propiedades de la proteína de interés que puedan afectar el proceso de separación.4. como son: punto isoeléctrico.

Funcionamiento de los sistemas expertos. Datar y Rosen. Solución: 1.52 CAPÍTULO 2. coli recombinante Producto de interés: proteína Localización celular: intracelular Nombre: insulina Presentación en el mercado: cristales de insulina Parámetros Específicos Peso molecular Hidrofobicidad Punto isoeléctrico Curva de titulación Base de datos sobre liberación diferencial del producto Base de datos de equilibrio en dos fases . Ejemplo 2. SELECCIÓN DEL PROCESO debe emplearse en cada etapa.ENTONCES". para la obtención de insulina pura a partir de un caldo de E.2. 1990. Se desea seleccionar un proceso mediante un sistema experto.. Deben alimentarse al SE los parámetros que caracterizan al proceso que en este caso son: Parámetros Generales Tipo de célula: E. coli recombinante que produce TrpE-Met-proinsulina intracelularmente (Prokopakis y Asenjo. 1990). En este tipo de sistemas la información cualitativa se proporciona mediante conjuntos de reglas inferenciales «SI .

el sistema cuenta con ponderaciones heurísticas que auxilian la selección. como son: concentración. coli y al conocimiento experimental que se proporciona al SE. viscosidad. 4.4.2.6 0.4 SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Bacteria Centrífuga de Discos Microfiltración 0. Una vez que se ha definido el equipo de cosecha deberán establecerse los parámetros de la corriente de salida de la unidad. El SE consulta al usuario sobre estos parámetros ya sea que hayan sido medidos o estimados estimados.5 0. DISEÑO 53 2. 3. Cuando existen equipos alternativos para realizar la misma operación. El sistema experto revisa las reglas de la base de conocimientos para seleccionar el equipo de cosecha (EC). SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Levadura Centrífuga de Discos Microfiltración 0. usando las siguientes reglas: . densidad y otro¡s.5 En este caso debido a las características de la E. El SE decide sobre las operaciones siguientes en base a la información que le proporcione el usuario sobre la localización del producto. éste elige la opción "centrífuga de discos" para la operación de cosecha de células.

54 SI ENTONCES CAPÍTULO 2. Posteriormente el SE selecciona el equipo requerido para cada una de las operaciones. En el caso de la operación de rompimiento celular. En este caso como la proteína de interés es intracelular. 1. utiliza las siguientes reglas para seleccionar el equipo de rompimiento celular (ER). SELECCIÓN DEL PROCESO Microorganismo = El Producto es Extracelular Mamífero SI ENTONCES El Producto es Intracelular Se Requiere Rompimiento Se Requiere Separación de Desechos Se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos El Producto es Extracelular No se Requiere Rompimiento No se Requiere Separación de Desechos No se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos 5. el SE establece la necesidad de realizar operaciones de rompimiento celular y separación de desechos. .

4.2. DISEÑO 55 SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Bacteria Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = y las proteasas son altas Agregue un inhibidor de proteasas al medio Bacteria SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Levadura Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Hongo Molino de Perlas Medio 2. . El sistema decide la separapación de los cuerpos de inclusión del homogeneizado utilizando el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha celular.

6. 7. c se muestran en la Figura 2. el equipo más adecuado será aquel que se haya utilizado experimentalmente Alta Alta SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = EC = Alta Mediana o Baja Separación en Dos fases .7 las tres primeras operaciones generadas con el SE. Se establece la necesidad de solubilizar los cuerpos de inclusión con una solución de ácido clorhídrico-guanidina (GuHCl) y ¡3— mercaptoetanol en un reactor químico. Se establece la necesidad de concentrar la solución de TrpE-Metproinsulina.56 CAPÍTULO 2. 6. Hasta este punto del proceso la TrpEMet-proinsulina obtenida se encuentra formando cuerpos de inclusión. para obtener una solución de TrpEMet-proinsulina. Para decidir sobre el método de concentración y el equipo (EC) el SE utiliza las siguientes reglas: SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = IMPRIME: Debido a que ambas operaciones tienen una eficiencia alta. SELECCIÓN DEL PROCESO Con las letras a.

8. 9. La concentración de proinsulina se incrementa mediante una evaporación.6 0. La solución obtenida en g está compuesta de proinsulina. DISEÑO SI Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = y la Eficiencia de la Interacción Hidrofóbica = ENTONCES EC = 57 Baja Baja Baja Precipitación (sulfato de amonio) En los procesos establecidos para la obtención de insulina. El SE cuenta con reglas para la selección del equipo de alta resolución (EAR) como las siguientes: SI ENTONCES Bioespecificidad es posible EAR = EAR = EAR = Cromatografía Cromatografía Iónico de Alta Cromatografía Hidrofóbica de Afinidad de Intercambio Resolución de Interacción 0.3 0. El concentrado se somete a un tratamiento en un reactor químico para liberar la proinsulina. El concentrado de proinsulina cruda se renaturaliza en un reactor químico. Una vez renaturalizada la proinsulina debe ser purificada en una operación de alta resolución. que podrán separarse por un proceso de ultrafiltración para obtener un concentrado de proinsulina cruda (operación h de la Figura 2. fragmentos de TrpE y residuos de metionina.4. 10. la concentración se realiza mediante una precipitación. Se decide utilizar el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha de células para separar el precipitado de la solución anterior.2.1 . 11.7).

SELECCIÓN DEL PROCESO SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = IgG Monoclonal Cromatografía de Afinidad Bioespecífica Cromatografía de Intercambio Iónico (1 o 2 etapas) 0. entonces éste decide que la operación de purificación de insulina proveniente del reactor enzimático (en el cual la proinsulina se transformó en insulina) debe ser una cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).8 12. 13.. Si el usuario a su vez pregunta "¿por qué?". Una pregunta puede ser: "¿Tendrá el producto usos terapéuticos?".98% y debe estar libre de pirógenos".6 0.7 y que producen la insulina humana recombinante. de la Figura 2. seleccionando para ello las operaciones o. el sistema responderá: "Si el producto va a tener uso médico la proteína debe tener una pureza de 99. Al llegar a ciertos puntos de la secuencia el SE puede hacer preguntas adicionales al usuario. purificada al 99.7. p. De lo antes expuesto se desprende que los sistemas expertos pueden ser una herramienta muy útil en la síntesis de procesos de bioseparación. </. Cuando el usuario responde "sí" a la pregunta del SE. Finalmente se puede mencionar que para la selección de las operaciones de acabado el sistema toma en cuenta la presentación del producto en el mercado. para poder determinar la operación más apropiada. . m de la Figura 2.9%.4 SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = No está Definido Cromatografía de Afinidad Cromatografía de Intercambio Iónico 0.58 CAPÍTULO 2. operaciones /. lista para su comercialización.2 0.

cotí (b) Rompimiento de Células con homogeneizador Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina + desechos (c) Separación por Centrifugación con centrífuga de discos Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina (d) Solubilización en reactor químico con GuHCI Solución de TrpE-Met-Proinsulina (e) Precipitación en reactor Precipitado de TrpE-Met-Proinsulina Figura 2. . DISEÑO 59 Fermentador (a) Cosecha de Células con centrifuga de discos Células de E.7: Diagrama de bloques para el proceso de obtención de insulina humana.4.2.

7: Continuación.60 CAPÍTULO 2... SELECCIÓN DEL PROCESO (f) Concentración por Centrifugación con Centrífuga de Discos i Concentrado de Trp E -Met-Proinsulina (g) Separación Química de Trp-Met-Proinsulina en Reactor Químico Proinsulina + TrpE + Metionina \r (h) Separación por UHrafittración Concentrado de Proinsulina cruda 1r Secado con Evaporador Centrífugo ir Concentrado de Proinsulina cruda (i) Renaturalización en Reactor Químico Proinsulina activa en solución \r Purificación en Columna de Intercambio iónico Proinsulina activa 1'2 Figura 2. .

2...4. .9 % de pureza Figura 2.7: Continuación. DISEÑO 61 (i) Transformación en Reactor Enzimático ir Purificación > 99 % con HPLC Insulina Insulina Pura \r (n) Concentración por UKrafiltraáón Concentrado de Insulina ir (o) Cristalización en Reactor Químico Cristales de Insulina6-Zn2 ir (P) Concentración con Centrífuga de Discos Pasta cristalina de Insulina6-Zn2 \r (q) Secado con Evaporador instantáneo Insulina Humana Recombinate 99.

sin embargo el proceso final generalmente es obtenido mediante una combinación de la teoría y la experiencia de que se dispone. Existen varios métodos que contribuyen a seleccionar el proceso de bioseparación óptimo. SELECCIÓN DEL PROCESO 2.5 Sumario La selección de un proceso de separación para la obtención de un producto biotecnológico se basa fundamentalmente en el mercado del producto y en sus especificaciones. .62 CAPÍTULO 2.

6.00 $30.Se cuenta con los siguientes datos para producir insulina recombinante: (A) Mercado: Producción (B) Costos anuales: año 1: año 2-10: 1. 2. $53.00 $31.468.00 $2.00 (C) (D) (E) (F) Depreciación: Inversión fija y diferida: Capital de Trabajo: ISR: 45% Estimar el precio de venta para obtener un Retorno Sobre la Inversión (RSI) de 40%.. 2...6 Problemas 2.3.El proceso de obtención de una enzima consta de cuatro operaciones de separación.766.00 $2. Resp.742.2.1.Desarrollar un diagrama de flujo de un proceso para la obtención de un producto biotecnológico. Estime la recuperación global del proceso. PROBLEMAS 63 2.2.00/Kg .525.664.877.000 kg/año $34. cada una de ellas presenta una eficiencia de recuperación del 80 %.

En: Handbook of Separation Process Technology. Prokopakis. New York. y Rosen. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology. D.). Datar. 229-240. Synthesis of downstream processes. L. 9. Demain. W. W. R. Downstream processing: Key to slashing production cost 100 fold. M. American Society for Microbiology. New York. R. y Evans. En: Separation Processes in Biotechnology. Nuil. S. L.200-201. 4. 1990. P. Knight. J. R. 8.. Biotechnology. 1987. B. y Asenjo. Petrides. 351-391. New York.. Downstream process economics. C. Protein purification: The right step at the right time.). Kalk. Oh. John Wiley & Sons. H. (Ed. Bio/Technology. B. 1991. 1987. 741-793. (Ed. (Eds.7 Bibliografía Bonnerjea. M. Selection of a separation process. (Ed. Bio/Technology. Asenjo. . J.). En: Separation Processes in Biotechnology.). A. Rousseau. Bioseparations: Media and modes. y Solomon. P. 22. 954-958. General processing considerations. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. R. G. Spalding. 197-225. 1990. A.). y Langlykee. 571-601. 982-995. F. A. New York. Cooney. C. New York. 4.64 CAPÍTULO 2. M. Rousseau. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. 1986. Marcel Dekker Inc. Kelly. 1986. 363-384. J. 1990. P. J. (Ed. An introduction to biochemical process design. New York. R. R. Shuler. y Hoare. Cost estimation for biotechnology projects. Asenjo. 1989. En: Handbook of Separation Process Technology. John Wiley & Sons.). AIChE. L. A. J. N. J. Marcel Dekker Inc. A. (Ed.

.Parte II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular.

que son utilizadas en las primeras etapas de recuperación del producto de acuerdo a las tres primeras reglas heurísticas de la selección del proceso de separación. eficiencias y costos. En las operaciones de remoción los principales insoluoles que se consideran son células enteras. respectivamente. y la centrifugación. la selección depende de varios factores como el tipo de célula. en esta parte se revisan las relacionadas con la remoción de insoluoles y la ruptura celular. Cuando el producto de interés es intracelular después que las células han sido separadas del caldo es necesario romperlas. empleada en la separación de levaduras.67 Del conjunto de operaciones que integran normalmente un proceso de bioseparación. bacterias y células de mamíferos. . Las operaciones típicas de remoción de insolubles son la filtración tradicional. restos celulares y cuerpos de inclusión. Estas operaciones se tratan en los capítulos 3 y 4. la disponibilidad de equipos. Para la remoción de insoluoles de un caldo pueden ser utilizados diversos tipos de equipos. En el capítulo 5 se presentan los principales equipos que se emplean en esta operación a nivel industrial y los principales factores para su diseño. muy utilizada para la separación de hongos filamentosos.

1): . En la filtración de lecho profundo los sólidos se depositan dentrc del medio filtrante. .Filtración de lecho profundo. de tal manera que no hay un depósito de sólido sobre la membrana sino una concentración del caldo. . se depositan sobre el medio filtrante formando una pasta.Filtración con formación de torta o filtración convencional.1 Introducción La filtración consiste en la separación de un sólido de un fluido por acción de un medio filtrante y un gradiente de presión. . membrana (cruzado). En la filtración con formación de torta los sólido. De los tres mecanismos de filtración descritos.Filtración por membranas (Microfiltración y Ultrafiltración).Capítulo 3 Filtración 3. La filtraciói por membrana se realiza utilizando membranas especiales de tamaru de poro muy pequeño. Normalmente en los procesos biotecnológicos se utilizan tres tipos de mecanismos de filtración (Figura 3. que generalmente operan con flujo paralelo a 1. dos son de partícula interés en las bioseparaciones sólido-líquido: La filtración convencionc y la filtración con membranas.

Filtración con formación de torta f\ > Retenido Membrana Filtrado c). FILTRACIÓN Suspensión a). Filtración de lecho profundo ll ii Suspensión Suspensión Medio filtrante b). Filtración con membrana Figura 3.70 CAPÍTULOS. .1: Mecanismos de filtración.

selección y operación racional de los diferentes equipos de filtración. FUNDAMENTOS 71 El objetivo este capítulo es presentar los aspectos fundamentales de la filtración convencional y su aplicación a la filtración de caldos biológicos.3. De particular interés es observar como esta teoría puede ser utilizada en la filtración de caldos biológicos.2 de este capítulo se centra la atención en los fundamentos de la filtración convencional. Los principales equipos que se utilizan en este tipo de filtración se presentan en la sección 3. En la sección 3. Debido a la naturaleza de los caldos que se manejan en bioseparaciones. • La teoría de la filtración convencional. y frecuentemente la decisión es instrumentar una combinación de estos dos tipos de operaciones. La sección 3. . En base a lo anterior.3. • El pretratamiento de caldos biológicos.2. La filtración por membranas se revisa en el capítulo 10.2 Fundamentos La filtración convencional forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones Sólido-Líquido (BSL). Un aspecto fundamental en el tratamiento de la operación de filtración es la teoría básica existente.4 se dedica a presentar los aspectos más relevantes del diseño de filtros convencionales. 3. la cual contribuye al diseño. es común que éstos sean pretratados mediante agentes físicos o químicos para mejorar su comportamiento en las operaciones de separación sólido-líquido a que van a ser sometidos. Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente es necesario seleccionar entre una operación de filtración y una operación de sedimentación (como la centrifugación). esta sección se ¿entra en tres aspectos fundamentales: • La filtración como parte de los sistemas de BSL.

2) consta generalmente de una o más etapas (Tiller.2: Etapas y métodos de las BSL. . . .Separación de sólidos. La concentración de sólidos permite una separación gruesa de sólidos que disminuye el volumen a manejar.72 Caldo CAPÍTULOS. reservados. Copyright ©1974. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.Postratamiento. entre las que destacan las siguientes: .1 La Filtración corno parte de los Sistemas de BSL Un proceso de separación sólido-líquido (Figura 3. Todos los derechos 3. Adaptada de Tiller.Pretratamiento.2. El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la separación. 1974 ). .Concentración. y puede disminuir los . FILTRACIÓN líquido liquido Figura 3. 1974.

líquido. Cuando esto no ocurre. Entre mayor sea esta diferencia la separación es más fácil. .1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los requerimientos del proceso. La mayor parte de los sólidos es obtenida en la etapa de separación .Filtración. Requerimientos del Proceso Flujo Intermitente o continuo % Separación Postratamientos Esterilidad Propiedades del Caldo Tamaño de partícula densidades Viscosidad Tiempo sedimentación % Sólidos Tipo de torta Espumeo Toxicidad Labilidad Características del Equipo Capacidad Intermitente o continuo Tamaño de partícula Conc.Sedimentación. las propiedades del caldo y los equipos disponibles. En la Tabla 3. En el diseño y selección del proceso de BSL es necesario considerar varios factores de orden técnico que deben conjuntarse para una adecuada decisión. 1979) que dan origen a las operaciones de: . En general todos los sistemas mecánicos de BSL están basados en dos principios (Svarovsky. son los sedimentadores por gravedad y las centrífugas. . FUNDAMENTOS 73 Tabla 3.2. la diferencia puede ser aumentada aparentemente aplicando una fuerza centrífuga o incrementando la densidad de la partícula por medio de una coagulación o una floculación.3. Los sólidos recuperados pueden requerir un postratamiento de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso. En el proceso de sedimentación la separación se basa en una diferencia de densidad entre la fase sólida y la fase líquida.1: Factores para el diseño y selección de procesos de BSL. Los principales equipos utilizados en BSL que se basan en el principio de sedimentación. máxima Capacidad de lavado Esterilidad Claridad descarga costos del proceso global de separación sólido.

. .). es posible utilizarlo conjuntamente con un filtro como una operación de concentración previa a la de acabado que realiza la filtración. .2.Parte considerable de la información. dentro de los cuales se puede destacar los siguientes: . FILTRACIÓN En la filtración la separación se logra utilizando un medio físico que no permite el paso de sólidos a través del cual el fluido se hace pasar por medio de un gradiente de presión. de tal manera que en el diseño y selección del equipo las pruebas experimentales directamente con el material. permeabilidad. así como el conocimiento de las propiedades básicas de los medios (porosidad. Sin embargo. En el diseño de filtros puede ser suficiente los datos obtenidos en el laboratorio. y la experiencia. está en manos de las compañías fabricantes y/o distribuidoras del equipo. En el diseño y selección de sistemas para BSL es necesario considerar algunos factores de orden práctico que permiten complementar los análisis que se efectúan en cada uno de los capítulos de esta parte del libro. pero no recuperan el 100% de los sólidos. etc. tiempo de sedimentación. juegan un papel muy importante. 3. En general los sistemas de sedimentación son más baratos y pueden operar continuamente.La escala de experimentación varía con el tipo de operación.Varias combinaciones de equipos pueden ser técnicamente factibles para lograr una determinada separación .2 Pretratamiento de Caldos para BSL Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por medio de pretratamientos físicos. tratándose de materiales biológicos el número de posibilidades se reduce considerablemente. químicos o biológicos con el objeto de .El análisis teórico que se dispone de las BSL es limitado. aún cuando el sedimentador no alcance la separación deseada.74 CAPÍTULOS. En el caso de centrífugas es generalmente necesario realizar pruebas a nivel piloto o a escala industrial. la experiencia y los equipos para pruebas experimentales. Sin embargo.

Las partículas coloidales (tamaño en el rango de una miera) no sedimentan fácilmente debido a que por acción de sus cargas superficiales forman suspensiones muy estables llamadas soles. Coagulación y Floculación Debido a que los caldos biológicos sujetos a BSL presentan partículas muy pequeñas (0. Los . que permiten formar partículas más grandes y densas. Los polielectrolítos pueden ser aniónicos. Pretratamiento Térmico El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad.2. Estos producen un efecto combinado (Figura 3. La coagulación también puede ser efectuada empleando sustancias que varíen el pH del caldo y por lo tanto la carga superficial de las partículas.5 a 100 /¿m). A continuación se describen tres tipos de pretratamientos comúnmente empleados para caldos biológicos. los pretratamientos para incrementar el tamaño de partícula facilitan su manejo. FUNDAMENTOS 75 facilitar estas operaciones. Los electrolitos más empleados son derivados de iones polivalentes positivos como fierro. En el caso de caldos de células recombinantes esta operación es obligada por cuestiones de seguridad ambiental. catiónicos o neutros.Van Der Waals entre ellas. En el proceso de floculación se utilizan sustancias químicas sintéticas de alto peso molecular llamadas polielectrolítos. Por otro lado. En el proceso de coagulación se emplean electrolitos simples que neutralizan las cargas repulsivas superficiales de las células o partículas. Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes químicos. aluminio y calcio. esta operación es de uso limitado cuando se manejan productos termolábiles. a diferencia de las suspensiones formadas por partículas de mayor tamaño que sedimentan con relativa facilidad.3) ya que actúan neutralizando las cargas superficiales de las partículas y provocan su atrapamiento por medio de las redes que forman.3. lo cual genera fuerzas de atracción del tipo de London. su volumen y romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores.

3: Mecanismo de floculación. formando un polvo con características apropiadas como AF. que permite romperlos por acción térmica o de presión. de tal manera que se facilite su filtración. . FILTRACIÓN Figura 3. Estas sustancias se adicionan al caldo antes de la filtración y/o se utilizan como precubierta del filtro.76 CAPÍTULOS. Las perlitas se obtienen de vidrios volcánicos que contienen de 2 a 5% de agua. materiales disponibles comercialmente son derivados de la poliacrilamida. polietilenimina y la poliamina. y mejorando la incompresibilidad y permeabilidad de los sólidos. Es importante señalar que los pretratamientos químicos son de uso limitado dado que implican la adición de sustancias al caldo que pueden agregar toxicidad o impurezas a éste. 1990) y las perlitas. Los AF actúan como adsorbentes de las partículas coloidales mejorando el tamaño de partícula. Las tierras diatónicas son restos de esqueletos de pequeñas plantas acuáticas prehistóricas que se obtienen de depósitos naturales. Los AF mas utilizados son las tierras diatónicas (Rees. Uso de Ayudas-Filtro En las operaciones de filtración convencional se emplean sustancias sólidas llamadas Ayudas-Filtro (AF).

La aplicación de . La selección implica un compromiso entre el flujo deseado y la claridad aceptable.Al final del ciclo la precubierta de AF debe ser removida. La precubierta de AF permite retardar el taponamiento del filtro. Esta se efectúa haciendo pasar una suspensión a través de un medio permeable que retiene los sólidos utilizando un gradiente de presión. entre más rápido se desee efectuar la filtración. fue formulada en 1856 por el geólogo Francés D'Arcy. la dosis necesaria es mayor.Primero se forma una precubierta de AF sobre el medio filtrante haciendo reciclar sobre éste una lechada de AF.4) puede ser definida como la separación de los sólidos de un líquido. . Asimismo. FUNDAMENTOS 77 Con el uso de los AF la filtración se convierte en una operación de tres pasos: . La dosis de AF que es necesario agregar continuamente es función directa de la concentración y compresibilidad de los sólidos del caldo. disminuye la caída de presión y produce un filtrado de calidad uniforme. 3. La teoría de la filtración convencional se deriva de los estudios de la mecánica de fluidos en medios porosos. La ecuación que describe el movimiento de fluidos newtonianos a través de medios porosos. Existen diversas marcas comerciales de AF que difieren básicamente en el tamaño de partícula. al cual se le agrega continuamente una dosis de AF.3 Teoría de la Filtración.2. . La filtración convencional (Figura 3. Esto permite que las características de la superficie de filtración se mantengan uniformes.2. lo que hace necesario aumentar la incompresibilidad y porosidad del material sólido. ya que para aumentar la velocidad de filtración se requiere un mayor gradiente de presión. Los de partículas más grandes facilitan la filtración pero producen filtrados más turbios.Una vez formada la precubierta se inicia la alimentación del caldo a filtrar. facilita su limpieza. La adición continua de AF al caldo es uno de los métodos más efectivos para minimizar los costos de filtración.3.

78 CAPÍTULOS. 0 * 0 0 o°o0¿o°o0o0c?o0o0cP Medio filtrante •i lll lflll • r Filtrado EQUIPO DE FILTRADO Figura 3. °: Temperatura.4: Concepto de filtración. Las dimensiones fundamentales se representan como: F: Fuerza. L: Longitud. Las unidades básicas empleadas en la mayor parte del texto corresponden a las del Sistema Internacional de medidas (SI). M: Masa.1) Las unidades de los miembros de las ecuaciones se presentan en términos de dimensiones fundamentales y entre paréntesis cuadrados. puede ser escrita como: v= donde 1 : kAP V* (3. esta ecuación al caso particular donde se desprecian los efectos gravitacionales (lechos cortos). FILTRACIÓN • «/ i O Fuerza impulsora Presionó Vacío N 4> Suspensión • o« . í: Tiempo. 1 .

k: Permeabilidad del lecho. [Z/2].3) y (3. [L]. ó: . [F/L2]. [L/t]. se puede obtener la ecuación diferencial básica de la filtración convencional: »íí A dt En la ecuación (3.3) R es la resistencia total a la filtración. AP: Caída de presión a través del lecho. [M/L — t].2) y expresando la relación i/k como una resistencia /?. Combinando la ecuaciones (3. cuando el número de Reynolds modificado es menor a 5.5) sólo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas en régimen laminar.3. i\ Profundidad del lecho filtrante. Esta resistencia puede expresarse como la suma de dos resistencias en serie: R = Rt + Rm (3. La velocidad de filtración puede ser descrita en términos del volumen de filtrado y el área de filtración (dos parámetros más fácilmente medibles) como: Combinando las ecuaciones (3. fj. FUNDAMENTOS 79 v: Velocidad superficial de líquido (flujo volumétrico por área de filtración).4) donde Rt es la resistencia de la torta y Rm es la resistencia del medio filtrante.1) y (3.: Viscosidad del fluido.2.3) y (3.4) se obtiene: } A dt ^ ' Las ecuaciones (3.

3. p es la densidad del fluido y e es la fracción de espacio vacío del lecho. 1982).5: Clasificación de filtros. es alimentada continuamente al filtro.1 Filtros Intermitentes a Presión En los filtros intermitentes a presión la solución que contiene el sólido a separar.3 Equipo de Filtración Existe una gran variedad de filtros (Figura 3.3. Estos tipos de filtros se pueden dividir en dos grandes grupos: Filtros intermitentes a presión.5) cuyo mecanismo de filtración es la formación de torta (Moir. 3.6) donde dp es el diámetro de partícula o diámetro del poro en la torta.80 CAPÍTULOS. <5 (3. FILTRACIÓN Lecho Marcos y Placas Batch a presión < Elementos Filtros Torta Charolas Hojas 1 Continuos al vacio Uttrafiltradón Membrana Microfiftractón Figura 3. Filtros continuos al vacío. Una vez que se acu- . En general las biofiltraciones cumplen con esta condición.

La unidad de filtración está formada por un marco que contiene dos placas formando una cámara de filtración.2 Filtros Continuos al Vacío Los filtros continuos más utilizados en las bioseparaciones. de tal manera que pueden operar continuamente por períodos largos de tiempo con flujos entre 200-1000 //m 2 — h (Petrides et a/. tienen una relación de área/volumen relativamente alta y son utilizados cuando los volúmenes de filtración son bajos.3. En los filtros intermitentes al finalizar cada ciclo de filtración la torta debe ser descargada manualmente. Los filtros de marcos y placas normalmente operan en contacto con el ambiente y no son recomendables para cuando se trabaja con sustancias tóxicas. charolas o tubos). Los filtros constan de varias de estas unidades que operan en paralelo produciendo un sólido bastante seco. Este tipo de filtros se distinguen de los intermitentes por el hecho de que al girar permiten una descarga continua de la torta.7). 1989).3.6): . principalmente en la producción de antibióticos. recomendables sólo para bajas escalas de producción.Filtros prensa de marcos y placas. 3.Filtros de cámara con elementos filtrantes (hojas. Los filtros de cámara con elementos filtrantes toman su nombre del tipo y orientación de los elementos filtrantes. Operan en ambientes cerrados. . Los filtros intermitentes de uso más amplio son los filtros de marcos y placas. Este tipo de filtros pueden ser agrupados en dos categorías (Figura 3. EQUIPO DE FILTRACIÓN 81 muía una determinada cantidad de sólido sobre el medio filtrante. Normalmente utilizan ayudas-filtro en dosis equivalentes a la concentración de sólidos del caldo que origina un problema de deseche de sólidos. limpiar el filtro e iniciar un nuevo ciclo. son los tipo tambor rotatorio al vacío (Figura 3.3. . por lo que este tipo de equipos puede tipificarse como de mano de obra intensiva. la operación es interumpida para descargar la torta.

6: Filtros intermitentes. FILTRACIÓN Placas Marcos + Filtrado Suspensión Filtro de placa y marcos Tela Placas Suspensión Marcos Mecanismo de filtrado Espacio torta Figura 3. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Tomada de: Svarouvsky. . Todos los derechos reservados. Copyright ©1979.82 CAPÍTULOS. 1979.

.3..6: Continuación..3. EQUIPO DE FILTRACIÓN 83 Mecanismo de descarga de torta Suspensión nitro horizontal con hojas verticales Venteo nitrado Tubos Formado de torta e lápade extema del tubo Suspensión Filtrado Suspensión Filtro tubular Filtro de hojas Figura 3.

3. En segundo término se revisa este mismo desarrollo pero para el caso donde la torta es compresible.7: Vista lateral de filtro continuo tipo tambor. • Filtros Continuos. En primer término se revisa el caso de la filtración intermitente donde la torta es incompresible y la filtración se realiza con un gradiente de presión constante.4 Diseño de Equipo de Filtración En esta sección se centra la atención en el uso de la teoría fundamental de la filtración en el diseño de dos tipos de filtros: • Filtros Intermitentes. se aborda el diseño de los filtros continuos con tortas compresibles que es el caso más común para las filtraciones de caldos biológicos a gran escala. FILTRACIÓN Rotación Sistema de ' aspersión Descarga torta Caldo Figura 3. que es el tipo de filtración más comúnmente empleada en bioseparaciones a escala moderada.84 CAPÍTULOS. . Finalmente.

la resistencia de la torta varía conforme avanza el tiempo de filtración al irse acumulando sólidos. Este desarrollo sólo será referido al caso en el cual la caída de presión es constante. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 85 3. ya que el seguimiento del volumen del filtrado con el tiempo es relativamente fácil de medir. la resistencia específica de la torta puede ser variable o no.3A. 1982): . las cuales son características de materiales biológicos. Sin embargo.4. el tamaño de la partícula del sólido y la compresibilidad de la torta. En la filtración intermitente con caída de presión constante. Este tipo de filtración es especialmente útil en la adquisición experimental de datos para diseño. Esta variación depende de la naturaleza de la torta. como en la de flujo constante . Tanto en el caso de la filtración intermitente a caída de presión constante. Esto puede expresarse como: . .1 Filtración Intermitente En la filtración intermitente con formación de torta la separación depende de varios factores dentro de los que destacan la permeabilidad de la torta que forme el sólido que se desea separar. se produce una disminución gradual del flujo conforme aumenta el espesor de la torta. Posteriormente este tratamiento se aplica al caso particular de tortas compresibles.La filtración intermitente a flujo constante. inicia con el tratamiento de tortas incompresibles cuya resistencia específica es constante. La filtración intermitente a flujo constante se produce debido a que algunos tipos de bombas producen el mismo flujo a diferentes cabezales. Filtración Intermitente: Tortas incompresibles y AP constante En el caso de tortas incompresibles la resistencia de la torta puede suponerse directamente proporcional a la cantidad de sólidos (peso seco) depositados por unidad de área.La filtración intermitente con caída de presión constante. Desde el punto de vista de los parámetros de operación dos tipos particulares de filtración intermitente son industrialmente importantes (Brown. El análisis general de la filtración intermitente que se desarrolla en este capítulo. el tamaño del poro de la torta.

FILTRACIÓN (3.8) se tiene: di ~ p [ap0 (£ La ecuación (3.10) puede ser utilizada para la obtención de parámetros de filtración en equipos intermitentes a presión constante.86 Rt = aw CAPÍTULOS. entonces la ordenada en el origen toma el valor de cero y la ecuacióa se reduce a: V (3J1) . = <*P.» l • ' La ecuación (3. e integrarla con las siguientes condiciones iniciales: para t =Q V=0 y obtener la siguiente ecuación: M V ta V V2AP/ A + .5) y (3.9) puede escribirse en su forma recíproca. Combinando las ecuaciones (3. -r (3-8) donde p0 es la cantidad de masa sólida seca por unidad de volumen libre de sólidos o volumen de filtrado del caldo a separar. La ecuación (3.10) se presenta cuando la resistencia del medio es despreciable.7) puede ser expresada en términos de parámetros más fácilmente medibles: R.7) donde w es la cantidad de sólidos secos depositados por unidad de área y a es la resistencia específica de la torta. Guando se gráfica At/V vs V/A se produce una línea recta con: pendiente = ordenada en el origen = 2AP AP Un caso particular de la ecuación (3.

Otro caso particular de la filtración intermitente con caída de presión constante se produce cuando se desea asegurar una formación uniforme de la torta evitando flujos altos al inicio de una corrida.9) se efectúa en el rango de caída de presión constante.) i ^rim _ ' V = Vs (V-VS) 2AP A AP v (312) ' la que nos permite calcular parámetros experimentales al graficar: (t-t. Bajo estas condiciones la integración de la ecuación (3.3.4.8). con las condiciones iniciales para t = ts obteniéndose la ecuación: (t-ts)A _ anp0(V + V.8: Caída de presión contra tiempo en una filtración intermitente. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 87 Cido de Operación Rujo constante Caída de Descarga AP Figura 3.)A (v-vs) vs A . que inducen la penetración de sólidos sobre el medio filtrante. En este caso la caída de presión se incrementa gradualmente hasta alcanzar una caída de presión constante (Figura 3.

2 atmósferas).13) se puede obtener la ecuación para describir la filtración intermitente de tortas compresibles con caída de presión constante: Ai = pa>p0 V ^ V 2AP -* A 1 AP V ' ' Ejemplo 3. . Los datos pueden ser correlacionados en una gráfica log(a) vs log(AP).6 y AP > 0. En una filtración intermitente a presión constante con un filtro de laboratorio de 110 era2 de área y una caída de presión de 70. En estos casos la resistencia específica puede ser correlacionada con el gradiente de presión mediante la siguiente ecuación empírica (Silverblatt et al. Combinando las ecuaciones (3. Es bien conocido que los cultivos de actinomicetos como el Streptomyces griseus presentan una gran resistencia a la filtración (Aiba et a/..1. Este varía de cero para una torta incompresible a 0. y s es el índice de compresibilidad.13) donde a1 es una constante relacionada principalmente con el tamaño y forma de las parículas de la torta.000 N/m 2 . La mayoría de las tortas de material biológico son compresibles. 1972).8 para una torta altamente compresible (la correlación es aceptable para s < 0. 1974): a = a'(AP)5 (3. La determinación experimental de 5 y a1 requiere la realización de varias corridas de filtración con caída de presión constante a varios niveles. FILTRACIÓN Filtración Intermitente: Tortas compresibles y AP constante La compresibilidad de una torta se caracteriza por un aumento de su resistencia específica al aumentar el gradiente de presión que actúa sobre la torta.88 CAPÍTULOS.10) y (3.Filtración de actinomicetos. Entre mayor sea el valor de s el efecto de la presión sobre la resistencia de la torta es más severo. en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro.

55 154.10) para calcular la resistencia específica de la torta. De acuerdo a la Figura 3. obteniéndose los datos que aparecen en las primeras dos columnas de la Tabla 3..2: Estimar la resistencia específica de la torta a y la resistencia del medio Solución: En base a la ecuación (3. Estos cálculos se muestran en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3. se calculan primeramente los grupos At/V y V/A. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Tabla 3.4. .Cálculo de la resistencia del medio.1.61 89 19 80 210 380 700 978 1215 100 200 300 400 500 600 650 se procesa un caldo de una concentración de 0.73 77.64 104.10) y los datos que se presentan.45 179.00 3.7 y una temperatura de 10°C).9 .91 205.30 5. a). .9 la ordenada en el origen es cero y por lo tanto la resistencia del medio no tiene un valor significativo: b).2 y se presentan en forma gráfica la Figura 3. Datos t ( s ) V(cm 3 ) Cálculos V/A (cm) At/V (s/cm) 0.91 20.00 2.3.50 4..015 Kg/1 peso seco de células y una viscosidad de 0. De acuerdo al resultado del inciso a) se utiliza la ecuación (3.Cálculo de la resistencia específica de la torta. a un pH de 3.00 5.2: Datos y cálculos de filtración del ejemplo 3.82 44.90 1.0011 N — s/ra2 (el caldo se adicionó con 1% de tierras diatomeas.

9: Datos de filtración ejemplo 3. .1. FILTRACIÓN zoo Figura 3.90 CAPÍTULOS.

3.3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 91 pendiente = ——¿ F 2AP /120 -40 _ 2 V4-1. i La viscosidad del caldo fue de 2 x 10~3 N-s/m2 y la masa de sólidos secos por unidad de volumen de filtrado de 40 Kg/m3 Estimar: a).. se obtuvieron los datos que aparecen en las columnas 1 y 2 de la Tabla 3. b). en un filtro de laboratorio de 110 cm2 de área a una presión de 19. la velocidad de filtración promedio disminuye.45 x 1011 cm Optimización de la Filtración Intermitente.El número de ciclos del filtro por día.. Por otro lado. el tiempo total de descarga y limpieza del filtro se incrementa.000 $• 28..0011 x . Solución: . conforme se incrementa el tiempo del ciclo./ cm " 2x70.Cálculo del número de ciclos óptimo para una filtración intermitente.23. si cada operación de descarga y limpieza del filtro tiene una duración de 0. En el siguiente ejemplo se aborda este tipo de problema.88-^ x 140.015 cm° a = 2. Ejemplo 3.2.En la filtración intermitente se presenta un problema de optimización relacionado con el tiempo de duración de cada ciclo o tiempo de procesamiento de un lote de caldo: Si el tiempo de duración de cada ciclo se acorta. En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperación de un antibiótico.000 a= .6 x 104 N/rn?.4.La resistencia específica del caldo a..5 h y el filtro opera 24 h al día.

0 126 3.0 0.10).0 860 7.3. Datos t(s) V x 10 m 9 1. .0 240 4.045 0.0 8910.018 2530. Tabla 3.0 0..027 4620.009 0.055 11183.14 x 1012 m b). Estos cálculos se presentan en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3.0 0.0 4 3 FILTRACIÓN Cálculos Ai IV (s/m) VI A (m) 990.0 610 6. a partir de los datos es necesario calcular los grupos At/V y V/A. (pendiente)(2)(AP) x 104 -^ a = (232451. El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado por ciclo Vc mediante la siguiente expresión: 24 h 0. Mediante una regresión lineal es posible obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuación.3 a)..7 -V a = ( 2 x II a = 1.0 405 5.036 6600.0 0.3: Datos y cálculos de ejemplo 3.5 + 1 V.El número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = donde tc es el tiempo de filtración por ciclo.3 0.2.0 46 2.92 CAPÍTULOS.De acuerdo a la ecuación (3.064 13514.

= 24 ciclos 0..En el caso de los filtros de marcos y placas.3.4.3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 93 la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada. La alimentación a cada marco se hace de man'era independiente de tal manera que cada superficie de filtración actúa en paralelo respecto al flujo de alimentación. El siguiente ejemplo se refiere a este procedimiento.Filtración de cristales de un esteroide.. Con datos de una filtración de laboratorio de una suspensión de un esteroide se desea diseñar un filtro intermitente de marcos y placas.5fc Filtración Intermitente en Paralelo. cada marco consta de dos caras de filtración. es decir: dVL_d_ I ti dt ~ dt \tc + 0.5 /*+ 0. Debido a lo anterior los datos de diseño de este tipo de filtros pueden ser generados en un filtro intermitente de laboratorio. se obtiene el tiempo de duración del ciclo para el cual el volumen total de filtrado es máximo.11) para obtener: v de tal manera que: -v derivando la expresión anterior con respecto al tiempo del ciclo e igualando el resultado a cero. Ejemplo 3.05 de donde se obtiene que el tiempo óptimo t* : f* = 0. entonces puede ser utilizada la ecuación (3. .5 h el número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = 24 h .

0: (0. 253 era3 12.Estimación de parámetros a partir de datos de laboratorio.5 cm 9780 s 1. Los datos de los resultados del laboratorio son los siguientes: Peso seco de los cristales Volumen de la torta Profundidad de la torta Tiempo de filtración Gradiente de presión Torta incompresible 0.01 Kg/cm2 si Estimar el número de marcos de 430 x 430 x 30 mm y el tiempo de filtrado. sustituyendo valores en la expresión anterior se obtiene: Ha (9780 5)(1.01 x 109 s — cm' b)..063 Kg. El cálculo se basa en el hecho t[ue el volumen de todos los marcos del filtro debe ser suficiente para alojar el volumen de la torta húmeda. Solución: a). de tal manera que : .. FILTRACIÓN Las pruebas de laboratorio se realizan en un tubo de vidrio con una malla en el extremo inferior de resistencia despreciable.11) arreglada de la siguiente forma: lia _ t&PA2 2p0 ~ W2 donde W = p0V es el peso seco de la torta. para procesar 40 Kg/lote de peso seco de producto. De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuación (3. Suponer que la bomba de alimentación produce una presión a la entrada del filtro de 0.Cálculo del número de marcos necesarios para la filtración de 40 Kg peso seco del esteroide.94 CAPÍTULOS.063 Kg)< = 1.68 Kg/cm2 y que descarga a la atmósfera.

El tiempo de filtración puede ser calculado mediante la modificación de la ecuación (3.001 N-s/m 2 10g/l .4.Cálculo del área de filtración del filtro prensa.01 x 109 t = 206 s Kg x (40 Kg)< (0. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 95 Número de marcos = Número de marcos = volumen torta húmeda volumen de un marco Ka\( 253 cm3 ^ A Q.11).Cálculo del tiempo de filtración en el filtro prensa. Área de filtración Área de filtración Área de filtración — Arta por marco x 2 x Número de marcos = (43 x 43) cm2 x 2 x 29 = 107..3 era2 0. t = APA* s — cm t = (1.242 era2 d). Se desea correlacionar la resistencia específica de la torta que forma una levadura con la caída de presión.4.. El área de filtración para filtros prensa de marcos se calcula tomando en cuenta que por cada marco existen dos placas o superficies de filtración.242 cm2)2 Ejemplo 3.Cálculo del índice eje compresibilidad.68 ^ ) x (107.3. para lo cual se realizan pruebas de filtración bajo las siguientes condiciones: Área de filtración Viscosidad Masa de sólido seco por volumen de filtrado 9.Q63 (43 x 43 x 3) cm3 Número de marcos = 29 c).. .

para lo cual es necesario el cálculo de a para cada corrida mediante la ecuación (3. FILTRACIÓN Las pruebas se realizan a cuatro gradientes de presión diferentes.00 2 1.36 12 2.60 4 3.68 Atm x '•»'*"< f Atm cm ai =4.13) permite calcular el índice de compresibilidad.96 CAPÍTULOS.10) obteniéndose los siguientes resultados: Corrida AP Pendiente Ordenada Num.10 Estimar el índice de compresibilidad s para este material.04 3 8 1. x 10 *f x Ofit x 2 x 0.001 *? x a. Solución: El empleo de la ecuación (3.10).00 2. Atm. pendiente = 2AP Para la primera corrida se tiene: 0.40 5 1. s/cm2 1 0.68 26 3. Origen s/cm.Estos valores son los siguientes: . Los datos de cada corrida fueron correlacionados mediante la ecuación (3.13 x 10 10 De igual manera pueden obtenerse a 2 > «3 y #4.

6 -0.10: Resistencia específica contra caída de presión.2 Log AP 0.04 3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 97 10.4 Figura 3.42 .9Log a 10.13 5.10.13) en una gráfica log(AP) vs log(a).58 xlO 10 xlO10 xlO 10 xlO 10 Los datos de a y AP para cada una de las corridas pueden ser correlacionados de acuerdo con la ecuación (3.36 2. Corrida Número 1 2 3 4 AP Atmósferas 0. tal como aparecen en la Figura 3.61 7.51 6.8- 10.68 1.7- 10.2 0.3.4.40 a cm/g 4. Se puede estimar con la pendiente de la curva el valor: s = 0.

Esta ecuación es útil para diseño de filtros continuos a partir de datos de filtración intermitente.Lavado de la torta.Formación de la torta. . Formación de la torta En los procesos de filtración intermitente el área de filtración es constante y el espesor de la torta varía con el tiempo de filtrado. La ecuación (3. . Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtración en sí y el tercero es un aspecto de diseño mecánico. * (j>: Ángulo de formación de la torta. Esta ecuación cuando la resistencia del medio es despreciable puede ser expresada como: Vf 2AP1. En la filtración continua se puede suponer que el espesor de la torta es constante y el área de filtración varía con el tiempo. .A donde tj es el tiempo que dura un paso de la formación de la torta y Vf es el volumen de filtrado colectado en ese período. A es el área expuesta de filtración por ciclo o por revolución. Esta sección enfatiza lo referente a los dos primeros pasos.98 3. La ecuación (3.15) puede ser expresada en términos de los parámetros de diseño siguientes: Q: Flujo de filtrado. [Radianes].Descarga de la torta. [L3/t].2 Filtración Continua CAPÍTULOS.14) puede ser adaptada a la filtración continua.7) el ciclo de filtración consta de tres pasos principales: .4. FILTRACIÓN En un filtro continuo (Figura 3.

19) pueden ser utilizadas para predecii cambios de la velocidad de filtración con respecto a cambios de las variables de diseño y operación en filtros continuos al vacío. (3.4. El tiempo que dura cada etapa de filtración se puede relacionar con el ángulo de filtración y la velocidad de giro del tambor.9) Las ecuaciones (3.16) y (3. [L].18) y (3.17) se obtiene el flujo defiltración: V P<*Po i ) o en términos de la velocidad de formación de la torta W = p0Q : 2 ¡JLOí' (3. L: Longitud del tambor. R: Radio del tambor. 99 Entonces es posible relacionar el volumen de filtrado de un ciclo por unidad de área.3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN TV: Velocidad angular del tambor. donde 27rRL = Área lateral del filtro. mediante la ecuación siguiente: Combinando las ecuaciones (3.15). [ t~1]. . con el gasto Q : T= Vj Q . [L].

Inicialmente el líquido de lavado produce un desplazamiento hidráulico del filtrado retenido por la torta. Un factor de diseño es el tiempo requerido para aplicar el líquido de lavado o tiempo de lavado.100 CAPÍTULOS. FILTRACIÓN 1.11). En esta técnica el líquido de lavado se aplica directamente sobre la superficie de la torta.. Si el lavado continúa parte del soluto contenido en el interior de la biomasa puede pasar al líquido de lavado mediante mecanismos de transferencia de masa (Figura 3.00 „_ Caso ideal: desplazamiento hidráulico ~ 0. Debido a lo anterior el análisis de la etapa de lavado se efectúa en dos pasos: 1. siendo la más utilizada la de lavado por desplazamiento. el cual depende de la naturaleza de la torta. En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada depende del volumen del líquido de lavado que se emplee.01 volum«n d* liquido d« layado volumen d« liquido retenido Figura 3.11: Mecanismos de lavado. Lavado de la torta Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro.Cálculo del volumen de lavado en función de la recuperación de soluto que se especifique. mediante un lavado se remueve del soluto retenido en el líquido y en la masa celular de la torta.10 - Control de la transferencia de masa 0. . Existen diferentes técnicas de lavado.

20) La ecuación (3.. Volumen de liquido de lavado n = Volumen del liquido retenido por la torta (3.9) con Rm = O y a = a'APs se escribe: . En base a lo anterior. Conforme la eficiencia de lavado disminuye debido a los mecanismos de difusión y mezclado. para lograr una determinada extracción del soluto. se puede suponer que el gasto durante la fase de lavado es constante dado que el líquido de lavado no tiene sólidos. la razón del volumen del líquido de lavado al volumen de líquido retenido se incrementa. el volumen necesario de líquido de lavado sería equivalente al volumen del líquido retenido por la torta (fracción vacía del lecho).12). esto no ocurre en la práctica.Si el desplazamiento por lavado del líquido retenido en la torta extrajera todo el soluto. Cálculo del tiempo de lavado.Para el cálculo del tiempo de lavado. 101 Cálculo del volumen del líquido de lavado.3. Este gasto puede igualarse al gasto final de la fase de filtrado.. pero debido a lo complejo del fenómeno frecuentemente se utilizan correlaciones empíricas que ofrecen buenos resultados. Existen varios análisis teóricos para correlacionar los parámetros de lavado. debido a los fenómenos de difusión y mezclado en el lecho.20) puede ser utilizada en gráficas semilogarítmicas para correlacionar datos de lavado (Figura 3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 2. la ecuación (3.. Una correlación empírica que ha sido utilizada para materiales biológicos está dada por la siguiente ecuación: r = (l-e)n donde: Soluto retenido en torta Soluto inicial en la torta e = Eficiencia de lavado. Sin embargo.Cálculo del tiempo de lavado en función del tipo de torta. Con estas correlaciones es posible calcular el líquido de lavado necesario para lograr un determinado porciento de extracción. La operación de lavado sería 100 % eficiente.4.

FILTRACIÓN Predomina el desplazamiento hidráulico 3.102 LOO CAPÍTULOS.0 ! _ Volumen líquido de lavado ~~ Volumen liquido retenido Figura 3.23) . dV_ dt El gasto cuando V = V/ es constante e igual a: (3.21) dV_ dt ~ Integrando la ecuación (3.22) donde V¿ es el volumen del líquido de lavado y ti es el tiempo de lavado requerido. se obtiene la siguiente ecuación: VL = (3.12: Curvas de lavado.22) con los límites: (3.

I/D (3-26) Se dispone de un filtro tipo tambor rotatorio continuo de 3 m de diámetro y 4. Debido a las características de la torta se espera un 80% de eficiencia en el lavado y que la torta retenga 1% del volumen de filtrado. b). c). a). ir V.Estimar el tiempo de filtrado. Con este filtro se desea separar un caldo de eritromicina. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Combinando las ecuaciones (3..25) en términos de parámetros de diseño.15) y (3..2 rpm con un ángulo de filtración efectiva dej65°.El tiempo de lavado.5.25) Es conveniente expresar la ecuación (3.23) se obtiene: 103 VL A = i-3 ii/2 — *L (3-24) Los volúmenes y tiempos. Bajo estas condiciones: 2AP era2 Se desea extraer el 99% de los solutos retenidos en la torta.24) obteniéndose: . como la relación de volumen de lavado a volumen retenido n.15) y (3. el cual puede ser operado a 1. de filtrado y lavado. de tal manera que r = 2-^ = 2n/ tf VR Vf Ejemplo 3.Filtración continua al vacío. El caldo pretratado se puede suponer incompresible. Solución: . y la relación de la fracción del líquido retenido con respecto al volumen del filtrado /. se relacionan directamente mediante las ecuaciones (3. La resistencia del medio filtrante es muy pequeña comparada con la resistencia de la torta.= 2^ (3.3..3 m de largo. El filtro opera a 51 cm de mercurio de vacío..El gasto que puede manejar el filtro.4.

104 CAPÍTULOS.El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la ecuación (3.18). La ecuación (3. Mediante la ecuación (3.Cálculo del tiempo de lavado. De acuerdo a los datos del ejemplo : * r = (1 .272 L/h c). entonces la ecuación anterior se puede expresar como: sustituyendo valores: /2?r x ^ x 2?r x 1.Cálculo del tiempo de filtrado. FILTRACIÓN a). de tal manera que..2 (El ciclo del filtro es de 50 segundos) b).17) permite estimar el tiempo de filtrado en base a los parámetros del filtro.2 min"l\l/2 Q = 150 C mx430 C T n( -g» _^-J x Q = 4520 cm /5 O = 16..e)" 3 cm2 mtn / .. = RL( V>0i'pc por las características de la torta s = O y a' = a. 2?r x 1.20) se calcula n.

SUMARIO^ r O •" J 105 Q O c 0.8)* . considere la compresibilidad característica de las tortas que forman los material biológicos.5 Sumario La filtración es ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicc para remover sólidos de líquidos. La teoría básica conjuntamente co algunos experimentos de laboratorio permiten el diseño y operació racional de los procesos de filtración.5.01 = (1 .86 Volumen de lavado Volumen retenido Aplicando la ecuación (3. entonces. El filtro más empleado en bioseparaciom es el filtro continuo tipo tambor operado mediante vacío. y en men< proporción el filtro intermitente de marcos de placas. tanto para la operación intermitente como para la continua . 3. Los procedimientos de diseño de filtros que se presentan.86) tL = 0. -.26) conociendo que el volumen retenido e 0.01 volumen del filtrado.01)(2. n = 2..5 s 3. iL = (9 s)(2)(0.o '- o. i Los equipos de filtración empleados en bioseparaciones operan m< diante la formación de una torta sobre una superficie filtrante por accic de un gradiente de presión.

Los datos de filtración son los siguientes: Estimar el tiempo de filtrado para procesar 5000 1 de este caldo en un filtro de 1.Los datos de filtración de S..180). 18 m2 3. 12 h 3. griseu a un pH de 3. Calcular el área de filtración necesaria para procesar 1000 1 de este caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.8 y a 2 atm de presión. At/V) siguientes: (3. El área de filtración empleada fue de 100 crn2 y el gradiente de presión de 1.5 m2 de área.037 Kg/m3 l¿ = 0.70) y (6.2 cp y un contenido de sólidos de 5 g/1.2.3.s/m2 Marcos = 430 x 430 x 30 mm Los datos obtenidos durante el experimento aparecen en las primeras tres columnas de la Tabla siguiente: .106 CAPÍTULOS.8 m de agua.001 N . si el proceso se realiza con un gradiente de presión igual al empleado en el laboratorio.1. donde V/A está en cm y At/V en s/cm.. FILTRACIÓN 3.Se efectuaron pruebas de filtración con un filtro prensa de marcos y placas bajo las siguientes condiciones: Po = 10.En la filtración a nivel laboratorio de un caldo para la recuperación de gentamicina. Resp. se ajustan a una recta que pasa por los puntos (V/A. Resp. la solución presentó una viscosidad de 1.6 Problemas 3..

1..9 2..4. obteniéndose los datos siguientes: t(s) V x 106 20 40 60 120 180 300 420 (m3) '9.2 2.0 8587.5 22.Resp.3 1.8 5642.) s/m3 m 0.3 4484.0 45.5 1.40 0.069 x 1011 m/Kg b).54 a).0 61. Rm = 6.8 1.4 0..a V m3 (V + V.22 0.6 1.10 0.36 0.5 1.1 1.3 4609.7 1.28 0.7 8399.44 0.52 0.32 0.4.61 x 1010 m"1 3..1 5244.5 1. a = 1.Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de ayudas-filtro se procesa en un filtro prototipo de 35 cm2 de área y a una presión de 99.5 6826.3.5 Estimar: a).5 1.1 1.0 2.9 1.30 0.2 7727.6.16 0.990 7V/m2.Resp.)/(V-V.5 1.2 1.1 0:04 0.5 1.)/A (t-f.0 35.4 4757.7 1.5 16.5 7274. PROBLEMAS Datos t s 447 1262 1886 2552 3381 3686 4043 4793 5652 6610 8680 9256 Cálculos 107 P N/m 2 0.5 1.5 6604.5 .0 74.

.3 m2 de área y la solución tiene una p0 de 0. 3.. 674..71 s/m CAPÍTULOS.Resp.707 0.Se desea filtrar un caldo que contiene cristales de un antibiótico.500 0. Resp: 23 horas.. a= 1. 1980) cuya resistencia específica ha sido correlacionada con la expresión empírica .Resp.5 s/m2 b).//a/>0/2AP.4.108 Estimar : a). Las pruebas de filtración en el laboratorio presentan los siguientes datos: Área = 89 crn2 AP = 2.7. 3.6..Considerando los datos del ejemplo 3. 5367.Calcular el tiempo de filtrado si la descarga del filtro se localiza a 3 m de altura..25 x 10n(AP) .28 g/cm3.34 t(s) 10 20 30 100 era3 V (litros) 0..3.5. La presión a esta escala es la misma.8.Estimar Rm y a' para la filtración del ejemplo 3.Cuántos marcos se requieren si la dimensión de éstos es de 75 x 75 x 3 crn b)..6 m de Hg o = 0. 3.Las levaduras forman tortas compresibles (Gerstenberg y Sitting. FILTRACIÓN 3.866 Estimar el tiempo de filtración si el volumen que se desea filtrar es de 7300 litros en un filtro de 1. a). a).356..

29 % b). chrysogenum (de 86 h de cultivo) en un filtro utilizado para medición de biomasa en linea.6 h 3..6.9.Resp. produjo los siguientes datos: AP (cm de Hg) tiempo de filtración 10 271 20 191 30 163 40 138 Estimar el índice de compresibilidad de la torta considerando despreciable la resistencia del medio. PROBLEMAS donde a tiene unidades de cm/g y AP de atmósferas. en un filtro piloto de 5 m2 de área con una caída de presión de 4 atmósferas..3 rpm a 0.. b). Resp.Calcular el incremento en flujo de un filtro continuo tipo tambor giratorio al vacío cuando: a).5 rpm.52 3..3. 109 Estimar el tiempo necesario para procesar 3000 1 de un caldo que contiene 30 g/1 de la levadura y presenta una viscosidad de 1.Se incrementa de 30 a 40 % el porcentaje de área sumergida (área sumergida/ área total de filtración). 15 % . 19. 0.El procesamiento de 30 cm3 de un caldo de P..Se incrementa la velocidad del filtro de 0. a).2 cp. Resp.10.Resp. manteniéndose el resto de los parámetros constantes..

Technol. Eng.). Eng. 1972. Eng. 117-119. 1979. New York. (Ed. Filtration and allied operations. New York. 63-76 Rees. Chem. Moir. Shuler. y Sitting.110 CAPÍTULOS. Eng.F. H. 1980. T. M. Ch.H. Academic Press.. 76-79.L. Selecting batch pressure filters.N. L. 355-356. 19-31. Gerstenberg. Biochemical Engineering.M. Chem. Ch. Recovery of fermentation products. Eng. Julio 26. Let diatomite enhance your filtration.B. 1990. N. Julio 2. 58-63. . 52. Designing batch pressure filters. Humphrey. AIChE. Chem.E. 1982. C. 351-391 Svarouvsky. Agosto 30. FILTRACIÓN 3. Cooney. 1989. y Evans. W. Petrides. 47-57. Bench-Scale design of SLS systems. Julio 26. D. Brown.7 Bibliografía Aiba. Abril 29. A. 1974. 1. Tiller. 1982. R. L.L. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.R. D. y Mills. Eng..P. Chem. An intoducction to biochemical process design. S. F.

o la adición de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o de producción excesiva de desechos contaminantes.2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la centrifugación que se derivan de la Ley de Stokes la cual describe 111 .1 Introducción La separación de substancias de diferente densidad mediante movimiento giratorio se conoce como centrifugación. especialmente cuando los caldos no son fácilmente filtrables. En la sección 4.5 g/cm3) pueden ser separados de los restos celulares por centrifugación en dos o tres pasos. Cuando se utiliza la centrifugación la diferencia entre la densidad de los sólidos (células o partículas) y el caldo. separación de precipitados proteicos (Bell et a/. se incrementa por la acción de las fuerzas centrífugas que se generan por las altas velocidades de rotación de los equipos que se emplean (Bjurstrom. 1982). Estos últimos debido a su tamaño (de 0. utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la separación.3-1. La centrifugación es una de las principales operaciones utilizada para la separación de células de caldos biológicos (Wiesmann y Eider.3 a 1 /zm) y alta densidad (1.Capítulo 4 Centrifugación 4. La centrifugación también es empleada en la remoción de desechos celulares de caldos de células que han sido sujetas a rompimiento. 1983) y para recuperación de productos insolubles como los cuerpos de inclusión. 1985).

Existen diferentes tipos de centrífugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y su aplicación depende de varios factores análogos a los mencionados para la filtración en la Tabla 3. La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partícula en un medio continuo ésta se acelera (F = ma). sino que también ofrece un apoyo adecuado para su correcta operación.1). Se puede suponer que para las suspensiones diluidas características de los caldos biológicos esta ley es aplicable. 4.2. La sección 4. no sólo para poder especificarlos y dimensionarlos. está descrita por la Ley de Stokes (Figura 4.1.1 Ley de Stokes La velocidad de sedimentación de una partícula esférica en un medio continuo para Reynolds menores a 1 (región de resistencia viscosa). esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales: • La Ley de Stokes. • La sedimentación por acción de la gravedad. En base a lo anterior.4 se centra en los aspectos básicos del diseño de centrífugas. • La sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. Este movimiento puede ser causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrífuga. • El factor G 4.112 CAPÍTULO 4. hasta que . CENTRIFUGACIÓN los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad. En la sección 4. La teoría de la sedimentación está basada en la Ley de Stokes que establece los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad.3 se hace una descripción general de estos equipos. Esta permite desarrollar algunas predicciones del comportamiento de los equipos centrífugos.2 Fundamentos de la Centrifugación El estudio de las separaciones sólido-líquido por centrifugación está basado en la teoría de la sedimentación.

4A i 9^2 3 |Q4 2 5^ O.A. Copyright ©1964.2.4. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 11 1O 9 \ \ ir Ie ' a 10 2 S \ l'°: 1 ii "i* 2 9 2 1 2 s \ L \ S k 1 \ ^^* \ Asíntota *=-|¿- SV í •X ís -^ ñ > s v. Fuente: Bird et a/.1: Factor de fricción para esferas. 1964.. 9^22 -> •^1 := •«_> — • ^^ m^m •5: 1 = 0.1 1( 32 3 6^22 9l(J2 9 t 2 9 ^2 Número d« Reynolds Re = Ou. Todos los derechos reservados. . Reproducida con el permiso de Reverte S. /><lí Figura 4.

114 CAPÍTULO 4. [L/t]. De acuerdo a lo anterior. Es importante hacer notar que si la partícula parte del reposo en el proceso de sedimentación. .: Densidad del fluido. [M/L — t]. VQO'. pp: Densidad de la partícula.1) donde: dp: Diámetro de la partícula. [M/L3]. [L]. a: Aceleración. \í\ Viscosidad del fluido. Al alcanzar el equilibrio de fuerzas la partícula se mueve a la velocidad constante VQQ (velocidad terminal). (4. Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partículas pueden agruparse en la fuerza de empuje descrita por el principio de Arquímides. [L/t2]. y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de fricción) descrita por la Ley de Stokes. CENTRIFUGACIÓN alcanza una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada. [M/L3]. Velocidad terminal de la esfera. . el balance de fuerzas para una partícula en equilibrio en un medio continuo se expresa de la siguiente manera: Fuerza de aceleración = Fuerza de flotación -f Fuerza de arrastre Para el caso de partículas esféricas el balance anterior puede expresarse como: . />£. y en una sedimentación centrífuga la fuerza es la del campo centrífugo. conforme la velocidad de la partícula se incrementa la fuerza de arrastre se incrementa. En una sedimentación libre la fuerza que actúa sobre la partícula es la de la gravedad.

Sedimentación por acción de la gravedad.2) es la siguiente: «" = donde: A/> = pp — pL Se puede expresar la velocidad de sedimentación de la partícula en dos casos límites de interés: . De acuerdo a la Ley de Stokes si la aceleración de la sedimentación es la de la gravedad.1) puede ser modificada para presentarse como una expresión de la Ley de Stokes.Sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 115 La ecuación (4. 4.2 Sedimentación por Acción de la Gravedad En varios procesos de separación sólido-líquido la fuerza impulsora de la sedimentación es sólo la de la gravedad.2.4. . . [L/t2]. de la siguiente manera: (pp . La velocidad de sedimentación por gravedad de una sustancia.3) es: ( (A 4) (4 A\ - donde: a = g: Aceleración de la gravedad. la velocidad de sedimentación que se obtiene por medio de la ecuación (4.2) O La velocidad de sedimentación de una partícula de acuerdo a la ecuación (4. [L/t]. vg: Velocidad terminal en un campo gravitacional. proporciona información básica necesaria para el diseño de cualquiera de los procesos de sedimentación.2.PL) (4.

5). debido a que los equipos al girar producen una mayor aceleración de las partículas (Brunner y Hemfort. [í"1]. u>: Velocidad de rotación en radianes. Varias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios inherentes a las ecuaciones (4. Algunos caldos biológicos son muy viscosos propiedad que dificulta la sedimentación. Las células contienen más del 70 % de agua por lo que su densidad es muy semejante a la de los caldos. [L/t2]. por lo tanto el parámetro A/9 puede ser muy bajo. CENTRIFUGACIÓN 4.4) y (4. r: Distancia radial del eje de rotación a la partícula.3 Sedimentación Centrífuga En las separaciones centrífugas sólido-líquido la velocidad de sedimentación es mayor que la sedimentación libre o gravitacional. ya que ésta es proporcional al cuadrado del diámetro de la partícula. a continuación se presentan algunas de ellas: El diámetro aparente de las bacterias es del orden de diez veces menor que el de las levaduras. Bajo estas condiciones la velocidad de sedimentación derivada de la ecuación (4. por lo que su velocidad de sedimentación es cien veces menor. [L].3) es: 2 r donde: a =w2r: Aceleración centrífuga. .116 CAPÍTULO 4.2. 1988). La velocidad de sedimentación puede ser incrementada en un equipo centrífugo aumentando la velocidad de rotación o la distancia de sedimentación (diámetro de la centrífuga).

1 también se presentan correlaciones de factores de fricción para casos diferentes a la Ley de Stokes.2) puede ser expresada como: 24 o donde: = AKf A: Área característica. [Adimensional. K: Energía por unidad de volumen. f : Factor de fricción... suponiendo que ambas tienen la misma densidad y están sujetas al mismo campo centrífugo1 en una centrífuga de tubos (Figura 4. El principio de separación por centrifugación diferencial se basa en las diferentes velocidades de sedimentación de las partículas.2) los cuales giran perpendicularmente al eje .En el caso de hornogeneizados biológicos las diferentes partículas celulares suelen ser separadas por centrifugación diferencial.1.] En la Figura 4. Ejemplo 4.4. [L2].5) y a la geometría del sistema. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 117 Para obtener una expresión para flujo no laminar la ecuación (4.Separación centrífuga diferencial. Estimar el tiempo de sedimentación relativo de una partícula celular de diámetro 5 /zm (núcleo) con respecto al de una de diámetro de 1 fim (mitocondria). [M/Lt2]. Solución: De acuerdo a la ecuación (4.. = — = dt 18/i . la velocidad de sedimentación está dada por: dr v.2.

1986 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.118 CAPÍTULO 4. CENTRIFUGACIÓN s Fuerza Centrífuga Figura 4. Copyright ©1986. Fuente: Bailey y Ollis. La expresión anterior puede ser utilizada para el cálculo del tiempo de sedimentación integrando entre los límites: una vez realizada la integración se obtiene la expresión siguiente: t= In Ri Aplicando la expresión anterior a cada partícula.2: Centrifugación diferencial. (al núcleo N y a la mitocondía M) se pueden obtener las siguientes proporciones: ÍN M ÍN = 25 . Todos los derechos reservados.

05 .05 g/cm3 de densidad.. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones (4.1) ^3 x = 2471 s 4 2 18 4.5) se obtiene: . ÍM es el tiempo que tarda la partícula M en avanzar de R\ a /22Ejemplo 4.) cm' x (1. Aplicando la expresión desarrollada para el tiempo de sedimentación en el ejemplo anterior se tiene: _ ~ >< 0-01 l±r. Estimar el tiempo para lograr una sedimentación completa de las levaduras de la suspensión. Solución: Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estén más apartadas del fondo del tubo.4.Tiempo de sedimentación.2.2. es decir en la superficie del líquido del tubo. La centrífuga gira a 400 rpm . que es una medida relativa de la velocidad de sedimentación de una partícula en un campo centrífugo con respecto a su velocidad de sedimentación en el campo gravitacional. >< h f (10 x 10. La distancia del eje de giro a la superficie del líquido en los tubos es RI = 3 cm y la longitud del tubo es de 10 cm .4) y (4. Las propiedades del caldo se pueden suponer iguales a las del agua.4 Factor G En la caracterización y escalamiento de centrífugas frecuentemente se emplea el factor G. Análogamente. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 119 donde tjy es el tiempo que tarda la partícula N en avanzar de R\ a R<¿.2. La centrífuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar levaduras con diámetro de Stokes de 10 //m y 1.

de cámara múltiple.6) G puede ser referida a un radio característico el cual generalmente es el radio exterior del campo centrífugo. el diámetro del tazón de la centrífuga (o punto de interés) D en mm y G es adimensional. Estos equipos funcionan como un filtro.4). decantadoras y de discos.1 Equipos de Filtración-Centrífuga Los equipos de filtración centrífuga constan de una tina o canasta perforada la cual está recubierta con un medio filtrante (una tela o membrana). • Equipos de Sedimentación Centífuga: Centrífugas tubulares. En esta sección se presentan los principales equipos de centrifugación existentes de acuerdo a su clasificación. Esto permite desarrollar expresiones prácticas para estimar la G como la siguiente: G = 5. La principal clasificación de los equipos de centrifugación se basa en el diseño de su tazón o tina. sólo que la fuerza impulsora del filtrado es la centrífuga y no una diferencia de presión (Figura 4. o líquidos de sólidos (Svarousky.6 x W~7N2D donde N está en rpm. .3. 1979).3).3 Equipo de Centrifugación La filtración y la sedimentación centrífuga constituyen los principios básicos de los principales equipos de centrifugación que se emplean para separar líquidos. de tazón sólido. La suspensión de sólidos es alimentada a la tina que al girar a altas velocidades provoca el depósito de sólidos sobre el medio filtrante y la salida de líquido claro. CENTRIFUGACIÓN (4. 4.120 CAPÍTULO 4. y en la forma como se descargan de los sólidos sedimentados (Figura 4. en dos grupos: • Equipos de Centrifugación-Filtración. 4.

EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 121 Tubular Cámara múltiple Sedimentadoras « Tazón sólido Decantadoras Discos Centrífugas < Filtrantes Figura 4.4. i Las centrífugas sedimentadoras se pueden utilizar en operaciones de separación sólido-líquido tanto para remoción de biomasa (clarificación) como para recuperar sólidos durante la cosecha celular.3. En las operaciones de clarificación el caldo a procesar generalmente contiene una baja cantidad de sólidos. del orden del 1 %.2 Equipos de Sedimentación Centrífuga En los equipos de sedimentación centrífuga también llamados de tazón sólido o canasta no-perforada (para distinguirlos de los de canasta perforada). 4.3: Clasificación de centrífugas. En las operaciones de recuperación de sólidos las corrientes de salida pueden . semintermitente o continua. En relación a la forma de descargar los sólidos las centrífugas sedimentadoras pueden operar en forma intermitente.3. la suspensión se alimenta a un tazón que se hace girar provocando que los sólidos se colecten sobre una pared y el sobrenante se recupere por rebosamiento o por acción de un colector de líquido. y el objetivo es producir un líquido claro de tal manera que en las operaciones de separación posteriores la interferencia por sólidos sea mínima.

Copyright ©1987. CENTRIFUGACIÓN Alimentación -#• nitrado Figura 4. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Jolm Wiloy and Suns. 1987.4: Centrífuga de canasta perforada. . Fuente: Jacobs y Penney.122 CAPÍTULO 4.

5: Centrífuga tubular. durante la operación de la CT la suspensión es alimentada por la parte inferior y los sólidos sedimentan en la pared del tubo. Conforme se forma la torta el área de flujo se reduce y el tiempo de residencia del líquido disminuye. La torta tiene que .5. Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o proteínas. contener hasta un 40 % de sólidos en volumen.4.1 //m. Como se observa en la Figura 4. A continuación se efectúa una breve descripción de los principales tipos de centrífugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 123 Sobrenadante Alimentación Figura 4. o una turbina de aire o vapor (Figura 4. Este tipo de centrífuga es uno de los mas eficientes y sencillos. Centrífuga Tubular Las Centrífugas Tubulares (CT) consisten básicamente de un tubo vertical esbelto que gira a altas velocidades por la acción de un motor eléctrico.5). Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sólidos en el sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turbidez. El líquido claro se colecta por rebosamiento en la parte superior. capaz de separar partículas hasta de 0.3.

La descarga de sólidos y mantenimiento de estos equipos es más difícil que el de las centrífugas tubulares. con capacidad entre 500 y 3. con una capacidad de hasta 100 1/h.000 rpm desarrollando campos de hasta de 12. el cual puede girar hasta con 15. así como mayor capacidad de manejo de sólidos. Este tipo de equipo no permite el lavado de la torta.5 y 60 litros dependiendo del material y el número de cámaras.000 y 8. con velocidades de rotación entre 5. CENTRIFUGACIÓN ser descargada manualmente.000 G. La capacidad de manejo de sólidos varía entre 2. Estas centrífugas consisten de una serie de tazones concéntricos con deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensión. lo cual puede ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se trabaja con sustancias tóxicas o células recombinantes. . Su operación permite la clasificación de las partículas conforme pasan de una cámara a otra. Los tipos más comunes constan de 2 a 6 cámaras. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia del líquido. Un modelo típico de laboratorio consta de un tubo de 4.6) fueron creadas para incrementar la capacidad de manejo de sólidos de las centrífugas tubulares. en relación al de la centrífuga tubular. respectivamente.124 CAPÍTULO 4.5 cm de diámetro por 76 cm de longitud. Este tipo de centrífugas presentan algunos modelos completamente sellados para minimizar problemas de formación de espuma y aerosoles. La capacidad de sólidos es de 2 a 4 Kg por lote.400 rpm. ya que la centrífuga tiene que ser desmantelada para sacar los sólidos.5 cm de diámetro por 25 cm de longitud. el cual puede girar a una velocidad de hasta 50. Los modelos industriales típicos cuentan con un tubo de 11.000 G. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en la última cámara. desarrollando campos hasta de 62.000 y 9. por lo que su operación es intermitente.500 1/h. produciendo campos entre 5.000 rpm.000 G. Centrífugas de Cámara Múltiple Las centrífugas de cámara múltiple (Figura 4. El diámetro de los equipos de cámara múltiple varía de 335 a 615 mm.

6: Centrífuga de cámara múltiple. Fuente: Axelsson.4.3. Todos los derechos reservados. Copyright ©1985. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 125 Alimentación Sobrenadante Figura 4. 1985. . Reproducida con el permiso de Ekevier Science Inc.

La alimentación de la suspensión se efectúa en el fondo de el tazón. Las centrífugas de tazón sólido normalmente son operadas con su eje en posición vertical. En algunos modelos el ciclo se controla por medio de un detector del espesor de la torta. CENTRIFUGACIÓN Rasador Torta Sobrenadante Figura 4. Los sólidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la centrífuga y los sólidos muy compactos pueden descargarse) utilizando una cuchilla interior de la centrífuga que permite raspar la pared del tazón para des- . Centrífugas de Tazón Sólido Las centrífugas de tazón sólido (Figura 4. La forma de descarga de los sólidos depende de su naturaleza.126 Alimentación —»• CAPÍTULO 4. el cual al girar permite que los sólidos se depositen sobre la superficie de la pared del tazón y el sobrenadante se obtenga por rebosamiento en la parte superior en forma continua.7) o centrífugas intermitentes son muy similares a las centrífugas tubulares pero menos esbeltas.6 mientras que el de las tubulares es de 4-8.7: Centrífuga de tazón sólido. su relación de longitud a diámetro es de alrededor de 0. El líquido residual sobre la torta puede ser removido utilizando un tubo rasador móvil.

Las industriales tienen tazones entre 95-125 cm con capacidades volumétricas de 100 a 300 litros. Un tipo especial de centrífuga intermitentes es la de tazón triple (Figura 4. Todos los derechos reservados.8: Centrífugas de tazón triple.3.000 rpm por lo que los campos centrífugos son menores que los de los otros equipos.600 a 6.4.7 a 27 litros. con capacidades volumétricas de 2. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 127 j Sobrenadante Alimentación Figura 4. al . Las centrífugas intermitentes en su versión de laboratorio presentan tazones de 15 cm de diámetro y las de planta piloto entre 23-53 cm. El tazón contiene un tornillo transportador que gira en la misma dirección.5-3. pero a una velocidad ligeramente superior o inferior que el tazón (entre 5 .9) 'se caracterizan por un tazón horizontal con una sección cilindrica y una sección cónica. con una relación de longitud a diámetro entre 1. prender la torta. Centrífugas Decantadoras o de Tornillo Las centrífugas decantadoras (Figura 4.8). 1979. Ambos tipos de descarga se realizan a través de la parte inferior de la centrífuga. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.5. En las centrífugas decantadoras la suspensión es introducida a través de perforaciones por un tubo axial concéntrico a la flecha del tornillo. Las velocidades de rotación son de 1.1 0 0 rpm de diferencia). Copyright ©1979. Fuente: Svarousky.

8 y 1890 1/min. Los sólidos que se depositan en la pared son transportados y descargados continuamente por el extremo cónico de la centrífuga. 1985. el aumento de longitud en la sección cónica permite la obtención de tortas con menor contenido de agua. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyrigllt ©1985.128 CAPÍTULO 4. Entre más larga sea la sección cilindrica mayor es la clarificación alcanzada. Fuente: Axelsson. La longitud de la sección cilindrica y la sección cónica pueden variar de acuerdo a las aplicaciones. pero un menor escurrimiento de la torta en la sección cónica.9: Centrífuga decantadora. Todos los derechos reservados. respectivamente. Entre mayor sea el nivel de líquido dentro de la centrífuga se obtendrá una mejor clarificación. CENTRIFUGACIÓN Alimentación Sobrenadante Sólidos Figura 4. Existen diversos diseños de centrífugas decantadoras. donde escurren antes de salir. final de la sección cónica o de compresión de sólidos. La descarga de sólidos varía de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h. Los diámetros de los tazones varían de 15 a 140 cm para los modelos piloto e industriales. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en el extremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del líquido en la centrífuga. Por otro lado. La disminución de la velocidad de rotación del tornillo transportador aumenta la capacidad de desagüe de la torta . con alimentaciones entre 3.

b) Tazón abierto. La centrífuga de tornillo es una de las más utilizadas en bioseparaciones principalmente para manejo de grandes cantidades de sólidos como es el caso del tratamiento de aguas residuales.3.4. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Alimentación 129 I Sobrenadante t Figura 4. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados.5 a 2. Centrífuga de Discos La centrífuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en forma de conos truncados. El rotor de la centrífuga provoca el giro tanto de los discos como del tazón de la centrífuga (Figura 4.10: Centrífugas de discos.0 mm. pero disminuye la capacidad de manejo de sólidos. Las centrífugas de discos son las más utilizadas en BSL.10). Fuente: Jacobs y Penney. a) Retención de sólidos. 1987. del orden de 0. uno sobre otro. El ángulo que forman los conos con la vertical varía entre 35 y 50° dependiendo de la apli- . Los discos constan de bordos internos que permiten mantener pequeñas separaciones entre ellos. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.

Existen diferentes centrífugas de discos en relación a la forma de descarga de sólidos. Las de boquilla para la descarga continua de sólidos. las principales son las siguientes: Las de operación intermitente con respecto a la descarga de sólidos. Entre la pila de discos y el tazón existe un espacio que permite la acumulación de los sólidos. y fluye hacia arriba entre las placas hacia la salida en la parte central superior del equipo. Alimentación CENTRIFUGACIÓN _«.130 CAPÍTULO 4.. Debido a la fuerza centrífuga los sólidos se depositan en la cara interna de los discos. Durante la operación de la centrífuga de discos la suspensión es alimentada continuamente en el fondo del tazón a través de la parte central de la flecha. . cación particular. o.. también llamadas de retención de sólidos. Las de tazón abierto de descarga intermitente de sólidos. resbalando hacia la cámara colectora debido al ángulo de los discos. Descarga de sólidos Figura 4.10: Continuación . Las de válvula tipo boquilla de descarga intermitente de sólidos.

8 a 1. Debido a la forma de su descarga de sólidos. Sus ciclos varían de 0. Esta frecuencia es controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores de turbidez en el líquido de salida.3. La descarga de sólidos se realiza por medio de un sistema hidráulico que permite abrir y cerrar los orificios de descarga entre las piezas. Las suspensiones que pueclen ser manejadas. alcanzan hasta un 10 % en volumen de sólidos. Tal precisión no puede ser lograda por las centrífugas de tazón abierto.500 1/min. Este tipo de centrífugas permite manejar caldos con contenido de sólidos hasta del 10 % . Las centrífugas de disco de tazón abierto (Figura 4.10b) constan de dos piezas cónicas unidas horizontalmente por sus caras más grandes. Los valores típicos son de 0. La centrífuga tiene que ser detenida y descargada manualmente o con auxilio de un forro que se coloca previamente sobre la pared del tazón. Las fuerzas centrífugas varían de 5. El espaciamiento de las boquillas debe prevenir zonas muertas de depósitos de sólidos.500 1/min. es que son especialmente útiles para caldos biológicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la viscosidad alta. El número y el tamaño de las boquillas se ajusta de tal manera que exista un flujo continuo de sólidos.000 G.3 segundos de apertura por minuto de operación. este tipo de centrífuga es recomendable sólo para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1% en volumen de sólidos. La ventaja de este tipo de centrífugas. La duración y frecuencia de la apertura de la descarga depende de la cantidad y fluidez de los sólidos.4 a 1. debido a que generan campos de hasta 15. En las centrífugas de boquillas con descarga continua éstas se sitúan en la periferia del tazón.4. La capacidad de sólidos varía de 5-20 litros y los flujos de 0. Las centrífugas de discos en general poseen una gran capacidad de .07 a 0.000 a 7. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 131 En las centrífugas de retención de sólidos (Figura 4.10a) éstos se acumulan hasta que la cámara se llena. En las centrífugas con válvulas tipo boquilla la descarga de sólidos se controla con este tipo de válvulas situadas en la periferia del tazón.13 a 0. La principal ventaja de este tipo de unidades es que pueden manejar suspensiones más concentradas. sin que éstos se acumulen.10 segundos de apertura por minuto de operación.000 G y los gastos de 3.000 a 8. El diámetro de los tazones de las centrífugas de retención de sólidos varía de 24 a 44 cm y las fuerzas centrífugas de 5.000 G.

CENTRIFUGACIÓN sedimentación debido principalmente a su gran área. y la viscosidad del líquido). a sus cortas distancias de sedimentación y a los altos campos centrífugos que generan. • Escalamiento de Centrífugas. lo cual puede visualizarse .132 CAPÍTULO 4.4.4 Diseño de Equipo de Centrifugación El diseño de los equipos de centrifugación está basado en la teoría de sedimentación.2. requieren de medidas de higiene y seguridad especiales como: Manejo mecánico seguro. los equipos que operan por filtración centrífuga presentan variantes de diseño respecto a los dos anteriores. las propiedades del caldo (tamaño de partícula.más fácilmente en el caso de las centrífugas tubulares debido a la sencillez de su geometría. 4. Protección contra ruido y daños corporales. • Diseño de Equipo de Filtración Centrífuga. Este análisis puede ser extendido al caso de las centrífugas de discos. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos : • Diseño de Centrífugas Tubulares. • Diseño de Centrífugas de Discos. explosiones o diseminación de sustancias tóxicas o contaminantes. 4. Por otro lado. diferencia de densidad entre el sólido y el líquido. . Por otro lado. Protección contra incendios.1 Diseño de Centrífugas Tubulares En el diseño de los equipos de centrifugación se debe considerar los siguientes hechos: De acuerdo con la teoría de sedimentación desarrollada en la sección 4.

11 muestra una centrífuga tubular que al girar forma una capa anular de líquido sobre la pared del tazón. Esto constituye una condición de diseño para este tipo de centrífugas. el tiempo de sedimentación en el equipo debe ser igual o menor al tiempo de residencia de las partículas impuesto por el flujo o gasto volumétrico. de su velocidad de giro y de las propiedades del caldo. La Figura 4. la velocidad de rotación y el radio del giro de la centrífuga.11: Esquema de una centrífuga tubular. La posición de las . z ** Interfase liquida Alimentación t i Figura 4. El gasto determina el tiempo de residencia de las partículas en un equipo dado. La velocidad de sedimentación cojuntamente con la distancia de sedimentación. Para producir un líquido libre de sólidos.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 133 Torta í Ro m Sobrenadante OOU Trayectoria de^x las partículas u. determinan el tiempo de sedimentación. El gasto manejable en una sedimentación centrífuga depende de la geometría específica del equipo. determinan la velocidad de sedimentación que se puede lograr en un equipo de sedimentación centrífugo.

134 CAPÍTULO 4. En el análisis primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga. [L/t].R\) donde: (4. El área de flujo es igual a la sección transversal de la capa anular de fluido y está dada por: = 7r(R20 .La alimentación es una solución diluida. Tiempo de Residencia La velocidad del fluido en el sentido axial está dada por: dz donde: Q: Gasto volumétrico.8) . posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geomertría de la centrífuga. CENTRIFUGACIÓN partículas en esta capa varía tanto por el flujo convectivo axial como por la sedimentación radial. [L2]. vz: Velocidad de la partícula en el sentido axial.Las partículas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes. . . [L3/i\.La distancia entre la superficie del líquido y la pared de la centrífuga es constante. .Las partículas se distribuyen uniformemente en la capa anular. A: Área de flujo. Se puede desarrollar un análisis sencillo e ilustrativo de la centrífuga tubular mediante las siguientes suposiciones: . .No existe retroflujo (flujo tapón).

. [L].10) Tiempo de Sedimentación y Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícula. esto es: * donde: L: Longitud de la centrífuga. [L]. Distancia radial del eje de giro a la superficie del líquido.8). [Lj.4. [t]. puede ser obtenido a partir de la Ley de Stokes considerando el movimiento de la partícula en el sentido radial. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Ri'.Tiempo para el 50 % sedimentación. Tiempo para el 100% de Sedimentación y Gasto Volumétrico . .4. 135 Con los límites de integración apropiados se puede obtener una ecuación para el tiempo de residencia de las partículas dentro de la centífuga empleando las ecuaciones (4. que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular. se consideran dos casos de interés: ..Tiempo para el 100 % de sedimentación. o más difícil de sedimentar). (4 9) ' La integración de la ecuación anterior permite obtener la expresión para el tiempo de residencia de la partícula siguiente: (4.7) y (4.El tiempo de sedimentación ts de una partícula localizada en la superficie de la capa anular del fluido en R\ (que es la más alejada de la pared. R0: Distancia del eje de giro a la pared del tazón. tr: Tiempo de residencia de la partícula.

136 CAPÍTULO 4. CENTRIFUGACIÓN dr vr = — = —- dt V (4. puede alcanzarse mediante la igualación de las ecuaciones (4.Es una práctica común en las bioseparaciones sólido-líquido.10) y (4. Este resultado permite obtener una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular para producir un líquido claro o lograr un 100 % de sedimentación.14).12) V ' y la expresión para el tiempo de sedimentación de la partícula en este caso es: Es más conveniente expresar la ecuación (4.. el que los equipos se especifiquen para la remoción del 50 % de las partículas de una suspensión de un tamaño dado o tamaño de corte. para obtener: La condición de diseño donde el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual al tiempo de residencia. .13) en términos de vg dada por la ecuación (4.15) En el resultado anterior es importante hacer notar que el flujo es función de las propiedades del caldo contenidas en vg. Esta expresión es la siguiente: Q = [«. y de las características de la centrífuga contenidas en el paréntesis cuadrado de la derecha.]• <J (4.11) ' en este caso inicialmente la partícula se localiza en RI y en el momento ta de alcanzar la pared en R01 de tal manera que: ' dr d¿Apu> fts — = * / dt r 18/í J0 (4.4). Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.

Si se considera que en la capa anular del líquido de una centrífuga tubular las partículas del sólido se distribuyen uniformemente.R250)L = 7r(RlQ . éstas se encontrarán en cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual área transversal.17) La ecuación (4. (4.16) (4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 137 Otra interpretación del tamaño de corte. El radio R50 que divide la capa anular en dos subcapas de igual volumen puede obtenerse de la igualdad siguiente: *(Rl .4.4.R\)L de tal manera que: (4. es la de especificar el tamaño de partícula para el cual todas las partículas mayores sedimentan en mayor proporción y todas las menores de ese tamaño sedimentan en menor proporción.2 f t s — = —— / dt r 18/í JQ (4-18) El resultado de la integración anterior expresado en términos de vg es: (4.19) v ' R50 donde ts es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentación.19) se obtiene la expresión para el tiempo de sedimentación en términos de parámetros medibles.17) y (4.10) y (4.20) La igualación de las ecuaciones (4.11) debe ser integrada para este caso con límites nuevos para expresarla en la forma siguiente: * dr c??0A/9a.20) permite obtener una expresión para el flujo para este caso: . Combinando las ecuaciones (4.

El concepto sigma ha sido muy utilizado en el campo de la sedimentación centrífuga desde que éste fue desarrollado (Ambler.24) es la expresión básica del concepto sigma. Sigma es un área característica de cada tipo de centrífuga y se utiliza para efectuar comparaciones y escalamiento de equipo.R\ CENTRIFUGACIÓN 9 ln (4. 1957). el cual es una constante que contiene sólo parámetros relacionados a la geometría de la centrífuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo). .22) Definición de Sigma..1 ln »~2 RO .21) puede ser expresada de otra forma considerando la siguiente igualdad: T 2 ln 2 '"/* para obtener: 2 R0 r*¥•) .24) La ecuación (4. 7TU>2¿ tf2 _ (4.. Por otro laclo vg se relaciona sólo con las propiedades del caldo y es independiente del tipo de centrífuga.22) de la siguiente manera: Q' = donde: E= (4. La ecuación (4.23) (4. .V*) .21) donde Q' es el flujo para sedimentar el 50 % de las partículas de diámetro c/so en una centrífuga tubular.138 CAPÍTULO 4. En el caso de la centrífuga tubular el valor de sigma puede ser definido a partir de la ecuación (4.

001 vn = x9. Solución: a) Para el cálculo del flujo manejado eri la separación de células se supone que todas las partículas de la suspensión sedimentan.001 N . La aplicación de este concepto a problemas de escalamiento se revisa en la siguiente sección. c) Calcular el flujo para separación completa de los restos celulares. entonces se utilizará la ecuación (4.s/m2 J* 3 A. obteniéndose también una expresión para sigma. 50 Kg/m Carac.004 N—s/m2 al salir del equipo de rompimiento celular. Centrífuga N 20.3. Se pide : a) Calcular el flujo manejado en la separación de células. coli de un caldo diluido en una centrífuga tubular.2 m 0 dp 10-6 m Se desea utilizar la misma centrífuga para separar restos celulares de diámetro promedio 0. Al separar células de E.5 x 10~6 m. Ejemplo 4.022 m Ri 0.011 m L 0.8^ N —S m-s .2) se presenta para las centrífugas de discos un desarrollo análogo al efectuado para la centrífuga tubular. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 139 En la subsección (4.4.Separación Centrífuga.4.15). en la separación de células.4. b) Calcular la relación de flujos para claridad completa de sobrenadante con respecto al flujo para 50 % de corte. Se estima que la viscosidad del caldo se incrementa a 0.000 rpm R 0. se obtiene un líquido claro bajo las siguientes condiciones: Propiedades del caldo 0.. para lo cual es necesario calcular primero Vg- Sustituyendo datos en la ecuación (4.4) se tiene: (10-6m)2(50) 18 x 0.

31 { §.-T5ln rr g = 3.22).7 X 10~ 6 22. vg = 2. \2 2 ..2) 2 Q' = 42.— s CENTRIFUGACIÓN Mediante ecuación (4.7 x 10.94 .140 CAPÍTULO 4.l) cm x\ In 5 2(2. sustituyendo valores se tiene: _ 2 x 2.X 7T X (2*X™'°0°Y V 60 / S~2 X 20 C77? Q = — 980 ^ cm x .97 <3 = 14.2) -(l.19 l- por lo tanto: Q' _ 42.= 2.7 x 1(T8 s 6 vg = 2.19 ¿ <9 ~~ 14.15): 2.31 a b) Para el cálculo del flujo para un corte del 50 % se utiliza la ecuación (4.7 x 1Q-6 aa x TT x (27rx620°'000)%-2 x 20 cm 980 3? 2 2 2 (2.

15) y obtener: Qc & MC Donde el subíndice R se refiere a los restos celulares y el C a las células enteras de tal manera que: acUR 3.97 2¿ x (0.5 x 10-4)2 cm2 x 0.89 [ a La reducción del tamaño de partícula y el aumento de viscosidad reduce dramáticamente la capacidad de la centrífuga.97 cm QR = -77 5 16 QR = QR = 0.15) y (4. entonces se puede intuir que la expresión para el cálculo del flujo en este caso también es diferente.4.22) que: Q' 2/ "gf En la expresión anterior es importante hacer notar que cuando la película de fluido al interior de la centrífuga es muy delgada.12).01 QR = (1 x 10-4)2 cm2 x 0.4. R\ tiende a R0 entonces: c) Para facilitar los cálculos se puede calcular el cociente de los flujos de cada tipo de caldo empleando la ecuación (4. .4. 4.2 Centrífuga de Discos En esta sección se desarrolla un análisis para la centrífuga de discos análogo al efectuado para la centrífuga tubular. La geometría del sistema es diferente (Figura 4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 141 También puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.04 -Jv ' cm—s 3 3.

En el sentido angular se supone que el líquido gira a la misma velocidad que los discos. Primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga.12. Tiempo de Residencia en una Centrífuga de Discos En una centrífuga de discos la partícula que se desea sedimentar se mueve por convección y por sedimentación. El flujo se presenta tanto en la dirección angular como en dirección paralela a los discos.12: Esquema de una centrífuga de discos.142 CAPÍTULO 4. CENTRIFUGACIÓN Figura 4. Si los ejes de referencia se fijan como aparece en la Figura 4. de tal manera que el flujo en cada espacio es Qn = Q/n. y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geometría de la centrífuga. el . El movimiento convectivo es paralelo a los discos y el movimiento por sedimentación es en sentido horizontal. donde n es el numero de espacios formados entre los discos . En el análisis se supone que el flujo global Q se divide equitativamente entre los espacios formados por todos los discos. posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación.

vx.13.4. Una condición necesaria para alcanzar una separación efectiva. En el desarrollo de la expresión para vx se supone un arreglo geométrico sencillo como se muestra en la Figura 4. La velocidad vx varía con la distancia x dado que el gasto es constante en toda la sección de cada película y dado que la sección transversal de flujo disminuye conforme x aumenta (se supone que el líquido es incompresible).13: Perfil de velocidades en una centrífuga de discos. La velocidad vx también varía en el sentido y formando .Para obtener una expresión del tiempo de residencia de una partícula en una centrifuga de discos es necesario primero desarrollar una expresión para la velocidad de la partícula en el sentido £. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 143 Figura 4.4. movimiento producido por sedimentación tiene componentes tanto en x como en y.. Expresión para vx. es la resultante de la velocidad convectiva del fluido (aquí se supone que la partícula se mueve a la misma velocidad que el fluido) y la componente en x de la velocidad de sedimentación que se opone a este movimiento. es que la velocidad convectiva de la partícula sea mucho mayor que el componente de la velocidad de sedimentación que actúa en sentido opuesto. de tal manera que la velocidad neta de la partícula en la dirección x. En el siguiente desarrollo se parte de este supuesto cuando se analiza la velocidad de la partícula en el sentido x.

26) —a áp_ donde a es el espesor de la película y P la presión.27) conduce a: Qn= I Q [*** rf APa 2 [ .25) dx dy2 Esta expresión puede ser integrada dos veces entre los límites: a Para y = .28) (4.28) se tiene que: (4. CENTRIFUGACIÓN un perfil de velocidades con vx = O en las superficies de los discos.29) 47T7Y¿ ..26) y (4. Si se considera una sección de película de longitud L. cuando se desprecian los efectos inerciales. La integración de la ecuación (4. /2y\] 1-1 7rAP« 3 r Qn = 6/¿L Combinando las ecuaciones (4. la ecuación de movimiento para este sistema puede ser escrita de la siguiente forma: (4.144 CAPÍTULO 4. donde la velocidad vx sólo depende de y pero no de x. donde Qn es el flujo volumétrico entre dos discos de la centrífuga.27) Jo 7^¿ 8/^L L \a J. La ecuación (4.26) se puede expresar en términos de Qn si se integra a lo largo del área de flujo con los límites apropiados. se considera que el sistema se encuentra en el estado estacionario y el flujo es laminar. Considerando que la área de flujo puede ser aproximada por un rectángulo de ancho a y largo 2?rr entonces: dydz (4. vx = O Para y = — . vx = O y obtener la expresión: APa2 (4.

De la ecuación (4. (4.30) describe el perfil de la velocidad de la película así como su comportamiento en diferentes planos en función de la velocidad promedio.Tiempo para el 100 % de sedimentación .30) se puede obtener una expresión para un diferencial de tiempo de residencia de la siguiente forma: dtr = -p--=) i _ f^) 2 1 ñara / [ dx V . y = |].31) V a/ J Cálculo del Tiempo de Sedimentación y el Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícu la.32) . y = ^r). Tiempo para el 100 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.En este caso la partícula más difícil de capturar se localiza en la parte inferior derecha de la película eni (x = O .. y la parte mas lejana en la que puede sedimentar es en la parte superior izquierda de la película en [x =(R0 — Ri)/senO . al igual que en en las centrífugas tubulares se consideran dos casos de interés: . .Tiempo para el 50 % sedimentación.30) La ecuación (4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN o bien en términos del flujo volumétrico total: u = 145 * ( 3Q \ x 4ri7rra (4.4.4. La velocidad de sedimentación en el sentido radial está dada por la Ley de Stokes: dr u2r — = vg— dts g por lo tanto: . que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga de discos. (4.

\(R0 .31) y (4.35) puede ser integrada utilizando el cambio de variable u = (R0 — xsenO) y los límites siguientes: —ü x = O.33) La condición de diseño que establece que el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igualando las ecuaciones (4.34) de acuerdo a la geometría del sistema se puede efectuar el siguiente cambio de variables: dy — cosOdr r = R0 — xsenO con estas nuevas variables la ecuación (4.IT) Para rara n Qg .xsenO)2 x cosOdx (4.34) se transforma en: /o \ (2y\ 2 2a l .146 CAPÍTULO 4.33) para obtener la expresión: 9dr 4nirra dX I -(**)' V a / (4.35) la ecuación (4. y — — L¿ x = R0 — RI a . = -gL (4. y= — senO 2 obteniéndose: ^ Rocoto (4. CENTRIFUGACIÓN dt.36) La ecuación anterior también puede ser expresada en función del parámetro E de la siguiente manera: .

36).4. coli mediante una centrífuga de discos. vn = (0.05 .Para calcular el gasto que puede manejar la centrífuga para un corte del 50 %.4.400 rpm viscosidad ángulo 38° Solución: El gasto de la centrífuga de discos puede ser calculado mediante la ecuación (4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 147 Q = vgX (4.02 xlO'3 8.02) ¿ x 980 ^ 18 x 1.8 x 10~4 cm)' (1.05 g/1 número de discos 72 densidad del medio 1.= 2vgZ (4.6 cm densidad celular 1.1.36). coli en una centrífuga de discos (Brunner. Estimar el gasto volumétrico para producir un líquido claro de E.. 1983) bajo las siguientes condiciones: Datos Centrífuga Datos caldo radio externo diámetro celular 0.02 x x x . debido a la separación tan pequeña de los discos una buena aproximación está dada por: Q.37) donde E para este caso está definida por la expresión dentro del paréntesis cuadrado de la ecuación (4..4).3 inciso b).1 cm radio interno 3. Ejemplo 4. De acuerdo a la ecuación (4.Separación de E.02 g/1 velocidad 1.36).38) donde E está dada por la misma expresión que la de la ecuación (4.4.(ver ejemplo 4. Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.8 fim 8. Para aplicar esta ecuación es necesario calcula: primero vg.

02 x 1(T6 — s en seguida se calcula S de la ecuación (4._ — s' 3 x 980 2? j V 6 0 ) ¿í/l /"v I £¿ \ I ¿iH XN <J-±W \ 2 x(S. .63) cm3 x co¿ 38 E .4.39 x 107 cm2 5 <3 = 75. En la selección de equipo de centrifugación una combinación adecuada de los principios teóricos con pruebas experimentales directamente con el material. Por otro lado. las velocidades de sedimentación que se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas para el caso de las centrífugas tubulares.. Este enfoque es debido a que los equipos disponibles se construyen en tamaños específicos. es lo más recomendable. uno basado en el tiempo equivalente de centrifugación y otro en el área de centrifugación.148 CAPÍTULO 4.3 Escalamiento En el análisis de la operación de la sedimentación centrífuga se han desarrollado expresiones para el cálculo del gasto manejable por una centrífuga de una geometría particular. CENTRIFUGACIÓN v9 = 1. de tal manera que gran parte del problema de separación centrífuga se reduce a una selección del equipo más que a un diseño específico para un trabajo particular.02 x 10~6 — x 7. .36). Existen dos enfoques para el escalamiento de datos.l3 -3. L = / x 72 \ /2?r x8400\ 2 . pero pueden resultar hasta dos veces mayores de las realmente obtenidas en las centrífugas de discos.35^ S Q = 271 | 4.39 x 107 cm2 El gasto volumétrico que puede manejar la centrífuga es: Q = 1.7..

000 100.6) y t es el tiempo necesario para producir una centrifugación aceptable.39) puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. Las muestras se hacen girar a velocidades específicas a diferentes tiempos hasta producir un sobrenadante claro. El valor de Gt obtenido se usa para la selección de equipos a escala industrial. de tal manera que la igualdad: G& = G2t2 (4.000 5 75. El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una . Esta área característica o factor S ha sido empleada para escalar equipos con similitud geométrica. Partícula Núcleo Mitocondria Ribosomas G t (min) 149 600 15. La consistencia de los sólidos puede ser estudiada preliminarmente utilizando una varilla de laboratorio sobre la torta después de decantar el sobrenadante.1: Valores de Gt. Las pruebas de sedimentación sobre las muestras se pueden realizar en el laboratorio en una centrífuga de tubos o en una centrífuga de tazón.000. 1985). donde G está dado por la ecuación (4.2 se presentan los rangos de los factores E para diferentes tipos de centrífugas. En la Tabla 4. En Ja Tabla 4.000 Gt (min) 5 3.1 se presentan valores de Gt característicos de algunas partículas biológicas.000 60 6. Factor Sigrna La expresión para calcular el parámetro Sigma de cada tipo de centrífuga es característica de cada geometría particular (Axelsson.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Tabla 4.000 Tiempo Equivalente Este enfoque consiste en determinar el producto Gt. Los subíndices 1 y 2 se refieren a las escalas estudiadas.

al de las partículas de interés en una suspensión dada.65.500 2.000 .000 400 . se establece que las velocidades de sedimentación son iguales en ambos medios. Este supuesto es más utilizado cuando se escalan centrífugas del mismo tipo. 1988).000 CENTRIFUGACIÓN Fuente: Moir. obteniendo la siguiente expresión: PP ~ PL pe . m2 20 .41) . Tabla 4. Centrífuga Intermitente Decantadora Tubular Discos E .3. Todos los derechos reservados.120.23) se obtiene: Oí (4. Para calcular el diámetro equivalente de las partículas de cuarzo.PA 1/2 (4. El tamaño de partícula a que se refiere la Tabla 4. En la Tabla 4.150 CAPÍTULO 4.3 está basado en la sedimentación en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2. de tal manera que: y utilizando la ecuación (4.200 150 .2: Factores Sigma. Copyright ©1988.40) Se debe recordar en este punto que la selección del equipo de centrifugación debe combinar la teoría. 1988 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.3 se presenta una guía general para la selección de centrífugas sedimentadoras.2. la experimentación directa con el material (incluyendo pruebas a nivel piloto) y la experencia (Moir. misma suspensión la velocidad de sedimentación de las partículas es independiente de la escala.

7.000 0.5.9.25 .10 1 .8.1.1.000 500 .500 1.890 Prueba de Consistencia de los sólidos torta firme torta firme lodo lodo lodo torta firme torta firme lodo .000.000 .500 5.800 2. 1988 Reproducida con elpermisode Me Graw Hill Inc.5.3.000 2 .5.200 0.3 Flujo de la Alimntación 1/min 8.5 .5 .000 .5 .torta Fuerza g Máxima 12.8.120 1.3: Guía para la selección de centrífugas.000 .200 0.000 G (min) 2 .3 0.8.335 38 .4.5 .1 . Características manejables de la Alimentación Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tamaño de Partícula mieras 0.000 .5.500 3.10 1 .10 1 .200 0.000 .10 0.200 Caractrísticas de Procesamiento Adaptada de: Moir.000 5.1.200 0.250 3.15.20 2 .000 Método de descarga de sólidos Intermitente Intermitente Continuo Intermitente Intermitente Intermitente Intermitente Continuo Contenido Sólidos % < 0. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 151 Tabla 4.16.20 1 . Copyright ©1988.3.5 .000 5.38.000 14.60 Capacidad lavado de torta Ninguna Ninguna Moderada Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Moderada Prueba de Sedimentación a 1.4.780 3.570 0.000 5. .200 2 . Todos los derechos reservados.000.5 1 -5 2-20 < 10 < 10 <1 1-5 2 .8 .8.

Área de centrifugación.000 1/h en una centrífuga similar. pp: Densidad de la partícula en suspensión. [M/L — t]. [M/L3]. Solución: Se puede utilizar la ecuación (4. Ejemplo 4. [M/L — t].. Estimar el área necesaria para manejar un flujo de 1. [M/L3]. CENTRIFUGACIÓN pe'. 2 nivel industrial. [M/L3]. HA'. sustituyendo valores.Viscosidad del líquido. El área característica de la centrífuga es de 233 ra2. dp: Diámetro partícula.Viscosidad del agua. dc: Diámetro equivalente de una esfera de cuarzo. Una centrífuga de discos de laboratorio produce un sobrenadante claro con una alimentación de 2. [L]. p¿: Densidad del agua. HL'.Densidad del cuarzo (2. PL: Densidad del líquido . [L]. 1 nivel laboratorio.5.1 1/h de una solución diluida de células.000 m 2 (2.1 ///O .152 donde: CAPÍTULO 4.65).40) para el caso de manejo de un flujo claro a la salida de la centrífuga: [M/L3]. <2 2 £i (1000 ///i)(233 m 2 ) Qi = 111.

4 Filtración Centrífuga La filtración centrífuga combina los dos principios de separación mecánica: filtración y centrifugación. y por acción de la fuerza centrífuga se forma una torta homogénea sobre la pared de la tina.4.14: Filtración centrífuga.4.4. En esta sección el tratamiento se limita al de geometría cilindrica. La canasta perforada tiene un radio R0 y está recubierta de un medio filtrante de resistencia despreciable. En un instante t durante la operación.sólido se localiza en RTGeneralmente el interés de diseño es contar con expresiones para el cálculo del gasto volumétrico manejable por la centrífuga y del tiempo de filtrado para realizar una determinada operación en un equipo dado. 4. La aplicación de este método ha conducido al desarrollo de diferentes tipos de equipos de diferentes geometrías y formas de descarga de la torta. . Considérese una tina o canasta de una operación de filtración centrífuga (Figura 4.14) donde se alimenta la suspensión a tratar. la superficie del líquido está localizada en RI y la interfase líquido. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 153 Figura 4.

Combinando las ecuaciones (4. está relacionado con la ecuación de D'arcy para medios porosos. CENTRIFUGACIÓN El gasto volumétrico a través de la torta en una operación de filtración centrífuga.44) puede ser integrada entre R0 y RT para encontrar la caída de presión en la torta: El gradiente de presión generado por el movimiento circular del líquido puede ser calculado utilizando la expresión: (4.46) entre R0 y R\ se puede encontrar una expresión para el gradiente de presión generado por la fuerza centrífuga. Integrando la ecuación (4.42) ar donde v es la velocidad superficial de filtrado.43) v ' (4 44) - la ecuación (4. Esta expresión es: . Debido a que la torta no es plana el área de filtrado varía con r.46) donde pi es la densidad del líquido.43) se obtiene: (4.42) y (4. y se relaciona con la velocidad de filtración (variable a lo largo del espesor de la torta) mediante la siguiente expresión: v = -Q— donde t es la altura de la canasta de la centrífuga. En el instante t el flujo volumétrico Q en la dirección radial es constante a lo largo del espesor de la torta. entonces la ecuación de D'arcy debe expresarse en forma diferencial como: -dP (4.154 Gasto Volumétrico Q CAPÍTULO 4.

45) para obtener una expresión del gasto volumétrico en cualquier instante ¿.48) puede ser utilizada para desarrollar una expresión para calcular el tiempo necesario para procesar un volumen de caldo dado (o una torta de un espesor físicamente alcanzable).50 ) se puede definir el diferencia de volumen de filtrado siguiente: dV = Po (4. El gasto volumétrico Q puede ser relacionado con el volumen de filtrado por la ecuación: (4. R? disminuye conforme transcurre el tiempo de filtración (al aumentar el espesor de la torta). . DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 155 (4. obteniéndose: (4. Tiempo de Filtración-Centrífuga La ecuación (4. - T/ _ _ I" / 02 D2 \ fí\ ÍA CQ\ donde px es la densidad de la torta en peso seco por unidad de volumen. Es necesario efectuar primero algunos cambios de variables.48) La ecuación anterior concuerda con el hecho que durante una operación de filtración centrífuga.47) La ecuación (4.4.47) puede ser sustituida en la ecuación (4. disminuyendo también Q.51.49) dt Por medio de un balance de masa en la película cilindrica que forma la torta se obtiene que: . A partir de la ecuación (4.4.

49) y (4.52). Entonces es preferible realizar estas mediciones en equipo de laboratorio apropiado para la filtración centrífuga.O RT = O t =• t — RT se obtiene: .51) e integrando la expresión resultante entre los límites: i . Ejemplo 4.600 litros de una suspensión que contiene 0.R\] (4.6. Las propiedades del líquido pueden ser consideradas iguales a las del agua.. Para tal efecto es necesario calcular primero la Idealización . Una vez llena la centrífuga y girando puede formar una película de 5. (4.1 g/cm3 de sólidos secos de torta húmeda. tiene un radio de 51 cm y una altura de 45 cm.156 CAPÍTULO 4.5 cm de líquido y torta.52) el tiempo de filtrado es función de la resistencia específica de la torta entre otros parámetros. Solución: ción (4. Las pruebas de laboratorio indican que la torta que forma esta suspensión tiene una resistencia específica de 2. Se desea estimar el tiempo de filtración centrífuga de 1.67 x 1010 cm/g y una densidad de 1. La centrífuga que se va a utilizar gira a 650 rpin. Debido a que la torta puede sufrir compactación cuando se expone a un campo centrífugo.52) donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor (R0 — RT) • De acuerdo a la ecuación (4.Tiempo de Filtración.02 (//cm3 de una hormona. CENTRIFUGACIÓN Combinando las ecuaciones (4. las mediciones de resistencia específica hechas en equipos de laboratorio de filtración intermitente pueden conducir a resultados incorrectos.48).

desechos. precipitados y cuerpos de inclusión) de caldos biológicos.52) cm2 '_5T 48. el gasto manejable en una centrífuga depende de la geometría específica del equipo. De acuerdo con la teoría de la sedimentación. SUMARIO 157 de la superficie de la torta RT mediante la ecuación (4.1-Ay ^ cm—o cm 2x X x 48. Existen varios tipos de equipos para efectuar la operación de centrifugación los cuales pueden operar tanto en forma intermitente como en forma continua. permite operar y diseñar racionalmente los equipos de centrifugación.67 x 1010p x 1.6 min La centrifugación se emplea para separar diversos tipos de sólidos (células.92 cm2 (512 -45.50) de tal manera que: 0.. de la velocidad de giro y de las propiedades del caldo que se desea procesar.9 é v -l-21n 51 48^9 t = 8.02 x 1600 x 103 cm311/2 1.52) el tiempo de filtrado es: t = -l-21n4? 0.1 -^j x TT x 45 era crn1* = 48. .01-^ x 2. La teoría de la sedimentación combinada con la experimentación en equipos pilotos.9 era entonces de acuerdo a la ecuación (4.

.Resp...Resp.18 l/min .La velocidad a la que debe girar la centrífuga para obtener un 95 % de recuperación.Una centrífuga tubular que gira a 4.670 m2 4. logra recuperar el 60 % de sólidos. Estimar el gasto volumétrico que puede manejar este equipo en la separación de restos celulares de E.3.Sedimenta libremente.000 rpm y se desea una recuperación del 95 %.Estimar el área característica de centrifugación para procesar 3.000 rpm cuando se alimenta con un caldo de levaduras a razón de 12 1/min..000 rpm. Resp..682 x 10~3 N .1.03 g/cm3. 4.15 ra y gira a 3.2.7 Kg/m3. 82.Resp.01 x 10~3 N-s/ra2 y una densidad de 1.. La viscosidad del caldo es de 2.600 G. La película que forma el líquido al girar tiene un espesor de 5 cm.. 8. CENTRIFUGACIÓN 4.4 x 72.35 x lO"6 m/s b). a).18 l/h 4. Las células del caldo presentan un diámetro promedio de 1 ¡¿m y una densidad de 1096. La diferencia de densidad entre las partículas y la solución es de 0. 1. Resp.. b).Se localiza en un punto r = 0..4.5 cm gira a una velocidad tal que genera un campo de 15.34 x 10~3 m3/s de un caldo de cultivo bacteriano.Resp.6 Problemas 4.000 Kg/m3. en agua a 20° C con una viscosidad de 1.El flujo que puede ser alimentado a la centrífuga cuando gira a 4. a). 2.845 rpm b). Sabiendo que la recuperación es inversamente proporcional al flujo.04 x 10"3 m/s 4. cuando: a). estimar: a). b)..Una centrífuga tubular de 12.158 CAPÍTULO 4..25 firn y se encuentran en una solución con 4 cp de viscosidad.s/ra2 y su densidad de 997 Kg/m3.100 Kg/m3 de densidad. 1.. coli que presentan un diámetro promedio de 0.Estimar la velocidad de sedimentación de una partícula de 5 de diámetro y 1.

6. a)..Estimar el número de centrífugas con capacidad de 400 1/h de homogeneizado para realizar el paso iv).Resp. a).. PROBLEMAS 159 4. ii).En una operación para la obtención de una enzima se utiliza un sistema de extracción de dos fases acuosas inmiscibles.5.000 / de un caldo celular que contiene 0.. Las propiedades de las fases son las siguientes: Fase Ligera (B) Nombre PEG 4000 9 % Densidad 1046 Kg/m3 Viscosidad 0.Establecer de que otra forma se puede realizar este proceso. La salida de la fase pesada en la centrífuga se localiza a una distancia radial RB — 0.8 ///. Una vez realizada la extracción las fases se separan mediante una centrífuga tubular.. c).. iii).. Los restos celulares obtenidos en este paso tienen la mitad del diámetro de las células originales y el caldo es cuatro veces más viscoso.15 /// de células (base húmeda de sólidos) es necesario realizarlo de acuerdo a las siguientes tres etapas: i).008 Kg/m-s Temperatura 20°C Fase Pesada (A) Nombre ( Dextrano T 5000 2 % Densidad 1144 Kg/m3 Viscosidad 0. Este paso debe ser realizado en menos de 15 horas para evitar degradación del producto.6.Estimar el tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo... iv).5 ///. d).000 rpm..34 h 4.Separación de los restos celulares del homogeneizado. La salida de la fase ligera se localiza en RA — 0.008 Kg/m-s Temperatura 20°C La centrífuga gira a 12..Estimar el tiempo necesario para el paso iv). 11. tiene un radio externo R0 = 0.Concentración del caldo hasta 0..25 h c)..Rompimiento de las células mediante un homogeneizador.05 ra y una longitud L = 0.022 ra mediante un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera.9 m. b). .2.4.Resuspensión del caldo en una solución amortiguadora apropiada hasta 0.El procesamiento inicial de 30.Resp.. 2 b).02 ra.

160 CAPÍTULO 4.8.. c). CENTRIFUGACIÓN de tal manera que la interfase líquido-líquido se forma a una distancia RÍ mayor que R¿...Utilizando la ecuación (4. a).15) calcular la velocidad de sedimentación mínima para la fase pesada en la fase ligera. a).La extracción líquido-líquido del ejemplo anterior se desea escalar utilizando una centrífuga más grande donde: RB = 0. realizar los siguientes cálculos: Sea: 1: Operación en el equipo menor..000 rpm.Calcular (Ri)2 c).. 730 m2 ..Calcular (Qs)2 e). 3. 4 //m 4. 2: Operación en el equipo mayor..76 x 10~2 m 4.Resp.5:1 de fase pesada a fase ligera. a)....78 x 10~5 m3/s c). b).. d). L = 1. c).Resp..Calcular la posición de la interfase. Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 x 10~4 rn3/s en la centrífuga más chica se tiene una separación adecuada de las fases.06 m.Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase ligera al girar.Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase pesada al girar. b).Calcular el flujo de la fase ligera que se alimenta a la centrífuga.Resp.Desarollar una expresión para el cálculo de la posición de la interfase suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.7..066 m..Calcular el día metro mínimo de las gotas de fase pesada para obtener un 100 % de separación de las fases. a).Calcular el gasto total que puede manejar la nueva centrífuga..5 m y N = 8. a). 7...Calcular (E3)2 d). RA = 0.Calcular (£5)1 b).La centrífuga del problema anterior se alimenta con un flujo de 1 x 10~4 m3/s de una mezcla de las fases que se encuentra en una proporción de 3. d).Resp..

000 l/rnin de una suspensión que contiene 20 % de levaduras. PROBLEMAS c).. ¿Qué gasto se puede manejar para lograr 80 % de recuperación en la misma centrífuga?. En pruebas de laboratorio la suspensión puede clarificarse en 6 min a 1.01 g/cm3..10.000 rpm.782 m 2 161 d). Se desea descargar los sólidos continuamente. Estimar el tiempo para sedimentar la mitad de las partículas si se supone que éstas se distribuyen en forma uniforme en la suspensión. . 4. Cuando la centrífuga está operando los tubos giran perpendicularmente al eje y el fondo de los tubos se localiza a 9 era del eje.Se desea procesar 1. 4. En base a los datos anteriores y utilizando la Tabla 4r3 efectúe la selección de una centrífuga.6. con una centrífuga de tubos que opera a 8. Las propiedades del líquido pueden ser tomadas como las del agua. La torta que forman los sólidos es bastante fluida..9. 4.4..000 G.Resp.Una centrífuga de discos recupera el 50 % de células a un gasto de 10 l/min.56 x 10~4 m3/s 4. 6.Se desea procesar una suspensión diluida de levaduras de 10 /zra de diámetro y densidad de 1.11.Resp. Los tubos se llenan con la suspensión hasta una altura de 5 cm..

A. 1985. Alan R. Ind.. Hoare.F. New York. W.N.R.E. Stewart. Cussler. 18. Phase segregation. Vol 8. New York. H.W. Brunner. Axelsson. . Alemania. New York. Jacobs. 47-75.7 Bibliografía Ambler. P. Bell. Centrifugation equipment: Theory.A. y Hu. México. 1. M. K. 1985. Downstream Processing. Westfalia Separators AG. 53. Biothechnology. Vol. 21. y Penney. 325-330. Rousseau. Ed. Feb. CENTRIFUGACIÓN 4. A. E. y Ollis. S.. Oxford. Biochemical Engineering Fundamentáis.L. New York. 1-72. Reverte. 6. (Ed. L.H. R. John Wiley and Sons. 1983. 1-50. John Wiley and Sons. 1988. 1961. 129-196. Fenómenos de transporte.H y H. Me Graw Hill. Moo Young. New York. En: Comprehensive Biotechnology. Mizrahi. 26. 1964. E.M. (Ed. 1986. Springer-Verlag. Separators in biotechnology: A new challenge to the centrifuge manufacturer?. D. Pergamon Press. M. Eng. 1987.B. K.E. Eng. 3. Liss. Chem. J. 429-433. Bailey. Segunda Edición.. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. 6-14. 1988. 126-158. 10. 1983. Oelde. En: Handbook of Separation Process Technology. W. Advances in Biotechnological Processes. W. Bjurstrom. P. Cap.J. En: Advances in Biochemical Enginnering /Biotechnology. The formation of protein precipitates and their centrifugal recovery. C.). Centrifugation. Sección 2. Centrifugal Separation in Biotechnological Process. Chem. Belter.). y Dunnill. Brunner.A.J. En: Downstream Process: Equipment and Techniques. R. 3. Hemfort.).162 CAPÍTULO 4. Bird. (Ed. D. y Lightfoot.

24. Marzo 28. L. Adv. 1988. H. Biochem. Eng. Chemical. 1982.N. Svarousky. . 1979.7. 119-171. Julio 16. U y Binder. Biomass separation from liquids by Sedimentation and centrifugation. Eng. Wiesmann. Chem. D. Sedimentation centrifugas. Eng. Sedimentation. 42-51. BIBLIOGRAFÍA 163 Moir.4. centrifugaron and flotation. 93-105.

165 . Cuando el producto de interés es intracelular (Tabla 5. una vez realizada la cosecha de células una operación necesaria para la liberación del producto es el rompimiento de la célula misma (Petrides et al. Esto hace necesario contar con técnicas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la producción de proteína intracelular. los cuales pueden estar en forma activa o en forma desnaturalizada. Sólo algunas células presentan mecanismos de secreción celular del producto de interés. La técnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamaño de los desechos resultantes y la influencia que estos tendrán en las operaciones que se utilicen para su separación. 1989). Otras proteínas de interés permanecen en el espacio periplásmico entre la membrana y la pared celular. Algunos de los productos biotecnológicos producidos a escala industrial son extracelulares y no requieren ser extraídos de la célula. Algunas proteínas eucarióticas recombinantes producidas por microorganismos procariotes no son secretadas por la célula recombinante y constituyen productos intracelulares.Capítulo 5 Rompimiento de Células 5. Las proteínas intracelulares desnaturalizadas con frecuencia forman cuerpos de inclusión insolubles.1 Introducción El rompimiento celular es una operación unitaria de gran importancia industrial. Asimismo. técnica es función del tipo de microorganismo que contiene al producto de interés.1). la.

Los métodos de recuperación menos severos involucran una alteración química de las cubiertas celulares o permeabilización que facilita la salida del producto. Esporas.166 CAPÍTULOS. HC. Requiere además del conocimiento de los sistemas que permiten a ciertas células secretar los productos de interés en forma activa. En este capítulo en la sección 5. Protema A.4. Esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales para el análisis de la operación de rompimiento: • Estructura de la pared celular. Glucocinasa.3 se centra en los equipos de rompimiento que se utilizan a nivel industrial. Existen varios métodos para la recuperación de productos intracelulares. 5. DNA. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5.1: Productos que requieren de una ruptura celular. particularmente en relación a su estructura externa (Asenjo.2 se presentan los fundamentos de la operación de rompimiento. Meningitis. 1-Asparaginasa. Ejemplos Insulina. . evitando con ésto la necesidad de romper la célula para recuperar el producto. Copyright ©1992.2 Fundamentos La recuperación óptima de productos intracelulares requiere del conocimiento de la estructura de las capas externas que protegen a las células: la membrana y la pared celular. 1990). Tipo de Producto Proteínas Recombinantes Enzimas Vacunas Otros Adaptada de: Foster. El diseño de estos equipos se discute en la sección 5. Proteína G. Invertasa. Mitocondrias. los más drásticos involucran el rompimiento completo de la célula. Todos los derechos reservados. La sección 5. Tétanos. Toxinas. 1992 Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co.

debido al relevante papel que tienen las bacterias como la E. En las células Gram positivas la enzima lisozirna se u t i l i z a para el rompimiento celular ya que su mecanismo de acción es el rompimiento .2. 1988). La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos.1 Estructura de la Pared Celular En esta sección se describe brevemente la estructura de las paredes microbianas. debido a que las bacterias poseen una elevada presión osmótica interna y a que frecuentemente pueden hallarse expuestas a diferentes condiciones ambientales externas. En las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte. 167 5. FUNDAMENTOS • Sistemas celulares de secreción. • Métodos de rompimiento celular. El espacio periplásmico está constituido por una sustancia semejante a un gel. las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (como D-alanina y Dglutamina). particularmente la estructura de las paredes bacterianas. coli como organismos huésped de varios productos biotecnológicos recombinantes (Wang. En éstas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. • Métodos de permeabilización celular.2. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la del disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido N-acetilmurámico.5. Las paredes celulares de las bacterias son rígidas y porosas. Las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas poseen una característica molecular común: en ambas existe un rígido esqueleto peptidoglucano o mureína.

Las proteínas no son secretadas por las células. deben considerarse las caracterís ticas estructurales de la célula para la selección adecuada de la técnic de rompimiento. Cuando se utiliza E.Las proteínas no se producen en forma activa. son de gran importancia en desarrollo de los procesos correspondientes. permite que las células Gram-positivas sean más sensibles a la acción de la lizosima que las Gram-negativas. La pared celular de las levaduras consta de dos capas: una capa externa formada de un complejo manano-proteína y una capa interne de glucano. como en el caso de algunas proteínas. Cuando es necesario romper completamente la célula recombinant* para liberar el material intracelular. Las paredes celulares de las bacterias Gram-negativas que presentan dificultad al rompimiento por la lizosima. En la producción de proteínas de interés comercial los mecanism de secreción y la modificación post-traduccional que sufren algunas < estas proteínas en su ruta de secreción. sin embargo este tipo célula presenta dos problemas característicos : .2 Sistemas Celulares de Secreción Se llama secreción al movimiento de un soluto a través de la men brana celular hacia el exterior de la célula. que en este tip. La diferencia en el grosor de la capa de peptidoglucano y su ubicación. coli para la producción de proteínas recomí nantes se obtienen rendimientos muy altos. pueden romperse en molinos de perlas de vidrio.o de células se localizan en la parte externa. permaneciendo er . 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de los enlaces glucosídicos del esqueleto polisacárido del peptidoglucano.168 CAPÍTULO 5. . éstas queda atrapadas en el espacio periplásmico o entre la membrana y la pare celular. 1989).2. Una vez roto el esqueleto de esta manera. la célula se expande con la consecuente ruptura de la membrana y liberación del contenido celular (Lehninger. También se considera corr secreción cuando.

5. y complejas operaciones de recuperación y purificación. conjuntamente con la eliminación de la operación de ruptura que ésto implica. la digestión enzimática y el tratamiento alcalino. ha conducido al empleo de otro tipo de células recombinantes diferentes a la E. coli.El. reacciones equivalentes a las de modificación post-traduccional "in vivo". Dentro dé los primeros se encuentra: el choque osmótico. la disolución lipídica.3 Métodos de Rompimiento Celular Una gran variedad de técnicas de rompimiento celular son usadas en el laboratorio. particularmente en el caso de las proteínas de uso clínico. . El primer proceso industrial que utiliza células recombinantes de mamífero (células de ovario de hámster). coli disminuyen el riesgo de transmisión de proteínas carcinogénicas. Métodos Químicos Choque Osmótico. el proceso para la obtención de la proteína de interés debe incluir operaciones de rompimiento celular.2. pero sólo algunas de ellas a escala industrial. 1993).. Los productos de E. rompimiento de células por medio de choque osmótico se fundamenta en el conocimiento del fenómeno de osmosis.2.2) pueden ser divididos en métodos químicos y métodos mecánicos. pero presentan riesgos potenciales de generación de respuestas inmunológicas. Los métodos de rompimiento celular (Tabla 5.5. Cuando se presentan los problemas mencionados anteriormente. Dentro de los segundos se encuentran la agitación con abrasivos y la homogeneización. se emplea para la obtención del agente trombolítico llamado "Activador del Plasminógeno Tisular" (t-PA de sus siglas en inglés) (Datar et a/. El hecho de que varias de las modificaciones post-traduccionales sean realizadas en las rutas de secreción de las células que tienen esta capacidad. FUNDAMENTOS 169 protoplasma en forma insoluble formando precipitados llamados cuerpos de inclusión. La pureza y seguridad de los productos de ambos tipos de procesos es de gran importancia.

Método Químico Técnica Choque osmótico Disolución lipídica Digestión enzimática Tratamiento alcalino Principio Ruptura osmótica de membrana Desestabilización de la pared celular por solventes org. lysodeikticus tratados con lisozima Mecánicos Molido en Molinos de Perlas Homogeneización Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Adaptada de Scopes.2: Métodos de rompimiento celular. Digestión de la pared celular Solubilización de membranas por saponificación de b'pidos pequeño Las células son prensadas entre perlas de vidrio Las células se rompen por fuerzas de corte al pasar por un orificio pequeño Ejemplos Ruptura de glóbulos rojos Rompimiento de levaduras por tolueno M. . Todos los derechos reservados. Copyrigllt ©1994. 1994 Reproducida con el pernüso de Spriiiger-Verlag.170 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5.

FUNDAMENTOS 171 a) 1 = 0 C.2. Figura 5. La presión osmótica es la fuerza que debe aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo osmótico producido.1: Osmosis y presión osmótica.5. La presión osmótica es una de las propiedades coligativas de las soluciones. El rompimiento celular por choque osmótico consiste en la carga de un volumen dado de células dentro de agua pura (con frecuencia se utiliza el doble del volumen de las células por volumen de agua). La factibilidad del uso de este método depende de la resistencia mecánica de las células de interés. La célula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo osmótico del agua hacísu interior. = C. de tal manera que: .1). < C2 [conc. Cuando una membrana semipermeable separa dos soluciones de diferente concentración de soluto (Figura 5. depende del número de partículas de soluto por unidad de volumen pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y de la forma de sus partículas. Esta expansión puede conducir a su lisis o rompimiento. se produce un movimiento neto de agua a través de la membrana hacia el compartimento que contiene el soluto más concentrado. En el equilibrio el potencial químico de las soluciones acuosas es igual en ambos lados de la membrana celular. Se puede desarrollar una expresión para el cálculo de la presión osmótica necesaria para romper una célula a partir de la definición de equilibrio químico. H2OJ b) t = t C.

172 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS /¿//2o (externo) = ^H2o(interno) (5-1) El potencial químico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia y una corrección en la presión. Tomando el contenido celular como una solución diluida. [/ /mol]. el volumen parcial del agua VH^O es aproximadamente igual al volumen molar del agua V//2o.1) se expresa como: ¿4o + VH. la ecuación (5. y Xi es pequeña. El tolueno es absorbido dentro de los lípidos de .x. [/ — atm/mol].2) Esta relación es llamada ley de van't HofF y en ella c\ es la concentración del soluto 1. Disolución Lipídica. El potencial químico interno involucra un valor de referencia. Un gran número de solventes orgánicos han sido investigados en el laboratorio para ser utilizados con este fin. VH^O' Volumen parcial molar del agua. La técnica de disolución lipídica es relativamente simple.Oy (5. De esta manera se tiene: VH*O y finalmente: — P — —RTr íP e — i j — —/t-í Cj (^ ^} ^ü..oPe = ¿4o + VHí0Pi + RTln(l . sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las actividades biológicas. x\ : es la fracción molar de soluto dentro de la célula. de tal manera que para una solución ideal incompresible.) donde: /4o: P°tencial de referencia.La extracción por solventes ha sido usada para la disolución selectiva de ciertos componentes celulares. la corrección en la presión y una corrección para la concentración de la solución. se añade a la suspensión celular un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10% de la biomasa.

para una liberación eficiente de los materiales intracelulares (Edebo. Digestión Enzimática. Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parámetros de solubilidad sean apropiados para los lípidos de la pared celular pero inadecuados para disolver al producto de interés localizado dentro de la célula.2. lo que produce la expansión de la pared y la ruptura de ésta. Esto casi nunca se conoce entonces es necesario realizar experimentos. El benceno es efectivo pero es carcinogénico y altamente volátil.. El alto costo de las enzimas no permite que esta técnica sea usada ampliamente en el rompimiento celular a nivel industrial a pesar de ser altamente selectiva (Andrews ti a/. . FUNDAMENTOS 173 la pared celular. provocando el rompimiento de la pared y consecuentementemente la ruptura de . 1969). El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de interés.La digestión enzimática consiste en el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompimiento celular. Otros tipos de solventes además del tolueno también son efectivos para este propósito. 1990). Esta enzima rompe el enlace (3 1-4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetil glucosamina de la capa de peptidoglucano de la pared celular. Esto se debe a la baja solubilidad del protoplasma a estos pH's y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la pared celular como de condiciones favorables de solubilidad. En la práctica los solventes con similares parámetros de solubilidad atacarán a las células en forma similar.1a célula. Una de las enzimas más utilizada en la digestión enzimática de bacterias es la lisozima. A pH's menores de 5 las células no se rompen aún cuando la pared celular haya sido destruida por digestión. El tolueno también es carcinogénico pero es menos volátil. Para la aplicación de la técnica de disolución lipídica se requiere hacer con anticipación un buen número de experimentos de laboratorio.5. para verificar los parámetros de solubilidad que reflejen las interacciones lípido-solvente.

1987). esto es. Para poder alcanzar rendimientos altos. existe un gran interés en el empleo de estos métodos alternativos a la ruptura mecánica empleada a nivel industrial. 1985.2) consisten en alterar la estructura de la pared y la membrana celular para facilitar la difusión del producto hacia el exterior de la célula. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Métodos Mecánicos En el rompimiento dé células a gran escala se han preferido los métodos mecánicos. varios de los cuales son iguales a los empleados en el rompimiento celular . particularmente en la homogeneización de leche y productos lácteos (obviamente la ruptura celular no es una homogeneización).4 Métodos de Permeabilización Los métodos de permeabilización (Figura 5. El paso repetido de la suspensión celular a través de los equipos de rompimiento produce una distribución amplia del tamaño de los residuos de la pared celular.174 CAPÍTULOS. Existen diversos métodos para realizar la permeabilización celular. 5. Las técnicas empleadas son: la molienda húmeda en molinos de perlas agitados a alta velocidad y la homogeneización a alta presión (Bjustrom. Kula y Schütte. El uso del homogeneizador se originó en la industria alimenticia. Estos equipos han sido adaptados para utilizarse en la desintegración celular. La desintegración celular no es una tarea fácil si se considera la alta resistencia mecánica de las paredes celulares y el tamaño tan pequeño de los microorganismos (1-10 /¿m).2. El uso del molino de perlas se originó en la industria de la pintura por la necesidad de obtener mezclas homogéneas de los pigmentos constituyentes de la pintura. El equipo que se utiliza en estas técnicas originalmente fue diseñado para otros usos. Debido a los problemas asociados con la purificación de productos obtenidos por rompimiento celular. extendiéndose hasta por abajo de las 3 fim. En esta operación es importante controlar el tamaño de los desechos celulares debido a que la separación sólido-líquido posterior depende del tamaño de las partículas. con frecuencia se requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino. obtener un grado de desintegración celular mayor que 90%.

2. Todos los derechos reservados. pero se realizan a condiciones más leves. Reproducida con el permiso de Marcel Deker Inc.3).2: Comparación conceptual de permeabilización (lado derecho) y rompimiento mecánico (lado izquierdo) Fuente: Naglak et a/. Estas estructura? tienen una porción hidrofílica (generalmente iónica) y una parte hi drofóbica (generalmente un radical orgánico). Por ejemplo. FUNDAMENTOS 175 Figura 5. coli. principalmente E. agentes caotrópicos come guanidina y urea. y agentes quelantes como el EDTA (Naglak et al 1990). mediante presión osmótica controlada es posible liberar proteínas localizadas en el espacio periplásmico de células Gram negativas. capaces de interacciona: tanto con el agua como con un lípido. La base de una solubilización efectiva radica en la estructura quími ca del detergente o agente solubilizante (Figura 5. La naturaleza anfipática se mantiene si los detergentes son anió . 1990. esto permite que sean empleado: para solubilizar la pared de las bacterias Gram negativas. detergentes aniónicos y no iónicos como el dodecil sulfato de sodio (SDS) y Tritón X-100. Varios de los trabajos sobre permeabilización han sido desarrollados en bacterias gram-negativas. Como resultado de k anterior. usando solventes como tolueno al 5%. todos los detergentes son anfipáticos. Copyright ©1990.5.

176 CAPÍTULO 5. poli disperso) CH3(CH2).100 (no iónico. . Fuente: Belter et a/.5N*(CH3)3Br OH Taurocolato de Sodio (aniónico) OH NCH2CH2SO3 Na OH OH Figura 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Dodedl Sulfato de Sodio (SDS) (aniónico) CH3(CH2)nS03Na Sultanato de Sodio (aniónico) CH3(CH2)9- SCf. Copyright ©1988. 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechos reservados.3: Estructuras químicas de agentes solubilizadores. Na Bromuro de Cetiltrimetil Amonio (CTAB) (catiónico) Tritón X .

A concentraciones de guanidina cercanas a 2 M. coli) utilizando una solución 0. Este sulfonato es más efectivo que los sulfates alcalinos en la ruptura de células. Por esta razón. FUNDAMENTOS 177 nicos. se libera cerca del 50% de la proteína intracelular (Naglak ti a/. Los detergentes no iónicos comerciales como el Tritón X-100 están menos definidos químicamente. El sulfato puede estar ligado a un anillo bencénico formando un sulfonato semejante al que se muestra en la Figura 5. algunas proteínas como las que se encuentran en cuerpos de inclusión. arriba de esta concentración la solubilidad de los lípidos varía linealmente con la concentración de detergente como se muestra en la Figura 5.2 M de guanidina.lactamasa ha sido recuperada con toda su actividad (de E. conservan toda o parte de su actividad biológica.5.4. las proteínas pueden desnaturalizarse aún cuando este proceso sea irreversible.3.1 M de guanidina y 0.2. donde los iones de calcio pueden reaccionar con ellos para formar precipitados insolubles). La desventaja de los jabones convencionales como permeabilizantes. casi no hay disolución de lípidos. Se ha encontrado que con la permeabilización con guanidina a concentraciones de 6 M. puede ser evitada reemplazando el grupo carboxílico con un grupo sulfato. Dentro de los materiales amónicos se encuentran los jabones los cuales son sales de los ácidos grasos. Debido a que la permeabilización química puede ser llevada a cabo en un simple recipiente agitado.5% de Tritón. catiónicos o no iónicos. en concentraciones de 0. Las moléculas de este detergente tienen también una porción hidrofóbica y una hidrofílica. El aspecto importante de estos detergentes es su habilidad para solubilizar lípidos de la pared celular y de esta manera modificar la estructura de la célula. La parte hidrofílica no es un sulfato sino un alcohol. Permeabilizando la célula de E. 1990). La proteína recombinante /3 . donde este grupo permanece ionizado (los jabones no son efectivos en aguas duras. Existe una concentración a la cual los lípidos repentinamente comienzan a solubilizarse. Debido a que los jabones presentan un grupo carboxilico sólo son detergentes efectivos a pH altos. En soluciones muy diluidas de detergentes. este método de permeabilización celular puede ser muy apropiado para algunos productos recombinantes . por esta misma razón los sulfonatos no son fácilmente degradados microbiológicamente. coli con guanidina y Tritón X-100. sus costos de operación y de inversión .

3 Equipo de Rompimiento Celular La operación de rompimiento celular a nivel industrial actualmente se realiza en tres tipos de equipos de rompimiento mecánico: • Molinos de Perlas de Alta Velocidad. • Microfluidizadores. • Homogeneizadores de Alta Presión. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5.4: Efecto de la concentración de detergentes sobre la disolución de lípidos.178 CAPÍTULO 5. Fuente: Belter et a/. 5. La principal desventaja de la permeabilización con respecto a los métodos mecánicos y a la lisis enzimática.5) constan fundamentalmente de un cilindro en posición horizontal (o vertical) llamado .1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad (Figura 5. es que libera menos proteína por unidad de tiempo. 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. 5.3. son más bajos que los de los métodos de rompimiento celular mecánicos. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

planta piloto y producción a escala industrial. El tipo de agitador está directamente relacionado con el transporte de energía óptimo de las partes en rotación a las perlas de vidrio.000 l/h. El agitador produce el movimiento necesario de la masa celular y las perlas de vidrio. un agitador (Figura 5. Mecanismo de Desintegración Celular El transporte de energía cinética desde el agitador a las perlas de vidrio se efectúa por fuerzas de adherencia en combinación con fuerzas de desplazamiento. El volumen de la cámara de molienda se activa a través de la aceleración de las perlas en dirección radial formando capas de corriente de diferente velocidad. El tipo de flechas e impulsores que se utilicen depende de la aplicación concreta que se le dará al molino. lo que dificulta el escalamiento de datos. Los molinos de perlas agitados a alta velocidad que se encuentran disponibles en el mercado. conjuntamente con la frecuencia y la fuerza de las colisiones entre las perlas.6) que consiste de una flecha giratoria sobre la que se monta un sistema de discos. La relación óptima se encuentra entre 1:2. Desafortunadamente los modelos de laboratorio no son geométricamente similares a los usados a nivel industrial. y con las propiedades de la superficie y del impulsor. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 179 cámara de molienda.5. Los volúmenes varían entre 50 mi y 250 litros para equipos de laboratorio. Los discos o impulsores pueden montarse sobre la flecha ya sea en forma concéntrica o excéntrica. y una gran cantidad de pequeñas perlas de vidrio que son los elementos activos de molienda. Una variante del molino de perlas es el molino de cámara múltiple. Los discos presentan perforaciones cubiertas con membranas que permiten el paso del material celular pero no así el de las perlas. El material celular se introduce por uno de los extremos de la cámara de molienda . barras o anillos que provoca el movimiento del contenido del molino. Estos últimos permiten manejar flujos de hasta. Las fuerzas de corte generadas. 2.3. son la causa de la desintegración de .5. Los perfiles de velocidad diferencial generan considerables fuerzas de corte dependiendo de la velocidad y el tamaño de las perlas de vidrio. Ambas relacionadas con el diseño geométrico.5 y 1:3. difieren en la relación de longitud a diámetro de la cámara de molienda.

. Fuente: Schütte y Kula. 1990 Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. b) corte transversal. Copyright ©1990.180 CAPÍTULO 5. Todos los derechos reservados. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Medio (b) Figura 5.5: Esquema del Molino de Perlas: a) vista lateral.

excéntrico. a) concéntrico b) Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Copyright ©1987 .3. Fuente: Kula y Schütte. Todos los derechos reservados. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 181 Impulsor Concéntrico Impulsor Excéntrico Figura 5.5. 1987 AIChE.6: Diferentes arreglos de impulsores.

3 y algunos de ellos son discutidos a continuación. debido a que proporciona mayor información técnica al agrupar varios parámetros relacionados con la velocidad de agitación. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5.182 CAPÍTULO 5. Los más importantes para la desintegración celular se muestran en la Tabla 5. las células. se toma un promedio de velocidades periféricas U el cual es calculado cíe acuerdo a la ecuación: —_ Dmirn 60 x 1000 (5. Parámetros Operacionales El molino de perlas está caracterizado por un gran número de parámetros (Kula y Schütte. Todos los derechos reservados. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Parámetros Operacionales. Para impulsores montados excéntricamente. La velocidad periférica normalizada de los anillos se utiliza para comparar molinos diferentes.4) . El agitador es responsable de la transferencia de energía y de la activación de las perlas en la cámara de molienda. 1987). Velocidad del agitador Velocidad de alimentación de la suspensión celular Diseño del agitador Tamaño de las perlas de vidrio Carga de las perlas de vidrio Concentración celular Temperatura Adaptada de: Kula y Schütte. Velocidad del Agitador.3: Molino de perlas agitado. Copyright ©1987 AIChE.

[mm]. En microorganismos pequeños como las bacterias. no existe una relación lineal entre el grado de desintegración celular y la velocidad periférica.d2/4 ¿J\/ ^ 1^ ** / donde: Dm: Diámetro promedio de los anillos excéntricos.4) se utiliza directamente el diámetro del impulsor. Para un flujo de alimentación constante.5. n: Velocidad angular del agitador. la energía necesaria para manejar el agitador. de la carga de perlas y de la velocidad del agitador.7 muestra el efecto de la velocidad del agitador sobre la desintegración de Sacharomises cerevisiae en un molino de perlas agitado de 4 litros. [mm]. Velocidad de Alimentación de la suspensión celular. e: Diámetro de la flecha del agitador. Normalmente la velocidad periférica fluctúa entre 5 y 15 ra/s. lo cual puede ser atribuido a los cambios en la distribución del tiempo de residencia con la variación de la velocidad de agitación. [rpm]. . d: Diámetro de los anillos del agitador. la velocidad periférica óptima para este tipo de molino se encuentra alrededor de 10 m/s (1900 rpm). y con ésta la frecuencia de colisión. Paralelamente la temperatura se incrementará dependiendo de la carga de perlas la cámara de molienda. Se puede observar que a una velocidad periférica de 8 m/s (1500 rpm) se obtiene la velocidad óptima para la desintegración celular (velocidades mayores producen sólo más calentamiento). Al incrementar la velocidad periférica la fuerza de corte generada se incrementa. En el caso de impulsores concénticos en la ecuación (5. El flujo permisible en un molino de perlas es función del volumen del molino. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR con: •*-^ Yft 183 n ~~~ —(2\/e2 4. [mm]. La Figura 5.3. La erosión de las perlas también se incrementará y con esto.

Copyright ©1987 AIChE.10 -o 5 ~ 1000 1500 2000 Velocidad del agitador (rpm ) 2500 Figura 5.184 CAPÍTULO 5. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers.7: Efecto de la velocidad del agitador sobre la liberación de enzima y proteína intracelular en S. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 20 ^ 20H í . cerevisiae. Molino de perlas: Netzsch LME4. Fuente: Kula y Schütte. Todos los derechos reservados. .

El patrón se sitúa entre los patrones de mezclado ideal conocidos: el tipo tapón (sin mezclado) y el tipo tanque continuo completamente agitado (100 % agitado). Diseño del Agitador y Efectos del Mezclado.G) cuyo volumen es de 4 litros. Para levaduras sin embargo. El comportamiento de un molino de perlas depende en gran medida del patrón de flujo y mezclado que produce el agitador. Por lo tanto. la liberación de enzima intracelular a partir de Brevibacterium ammoniagenes disminuye en forma más marcada con el incremento en la razón de alimentación (esto se debe principalmente a la diferencia de tamaño y a la mayor resistencia de la pared de las bacterias Gram positivas). Por otra parte.3. es aconsejable operar los molinos de perlas a altos flujos de alimentación y utilizar varios pasos para alcanzar el rendimiento requerido. Selb. puede ser operado con flujos de alimentación mayores de 100 l/h. esto no se cumple. etc) que permiten establecer la distribución de tiempos de residencia de los elementos del fluido en el molino (Levenspiel.8 muestra la poca influencia del flujo de alimentación sobre el grado de desintegración de Sacharomyces cerevisiae. Considerando los tiempos de residencia y la demanda de energía. El rompimiento celular es función de la velocidad del agitador y del flujo de alimentación de la suspensión. El comportamiento de mezclado en un molino de perlas puede ser determinado mediante técnicas con trazadores (tintas. en los agitadores de . Sin embargo. El consumo de potencia del molino depende en primer lugar de la velocidad del agitador y sólo ligeramente del flujo de alimentación. es inversamente proporcional al flujo de alimentación. F. La Figura 5. 1972). desde 10 a 100 l/h produce un decremento en el grado de desintegración del microorganismo de solamente 18%.R. los flujos de alimentación altos pueden ser más económicos. lo que significa idénticas velocidades de transporte axiales a través de la cámara de molienda. En teoría el grado de desintegración celular alcanzado por paso. Esta funcionalidad es lineal sólo si los microorganismos son transportados como flujo tapón (sin mezclado axial). EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 185 El molino Netzsch LME4 (Netzsch-Feinmahltechnik GmbH. sales. Un incremento de un orden de magnitud en la velocidad de alimentación.5.

cerevisiae y B. ammoniagenes Figura 5. Todos los derechos reservados.8: Efecto del flujo de la alimentación sobre la liberación de fumarasa en S. Fuente: Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. ammoniagenes. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS too60 - 60- 40 - 20 - 20 40 60 80 100 Velocidad de Alimentación (l/h) Fumarasa: (o) de S.186 CAPÍTULO 5. . cerevisiae: (•) de B. Copyright ©1987 AIChE.

La distribución de la concentración de tinta en la corriente de salida puede ser correlacionada directamente con la distribución normalizada de tiempos de residencia.5. los molinos comerciales se presentan efectos que provocan el mezclado de todas las partículas introducidas en la cámara. Puesto que la célula está presente en la cámara de molienda con una .9 muestra la distribución dé tiempos de residencia en un molino Netzsche LME 20 en respuesta a un pulso de colorante. usando tres tipos diferentes agitadores con la misma cámara.20. tendrá la misma probabilidad de dejar la cámara de molienda que un microorganismo que haya entrado en ella previamente. un microorganismo a la entrada de la cámara que tiene un tiempo de residencia igual a cero. Ocasionalmente.8- E 0. Todos los derechos reservados. Fuente: Kula y Schütte.4- 0.6- A\ **t- 0. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Copyright ©1987 AIChE.0- 0. En general se requieren cuatro o cinco tiempos de residencia ideales para cambiar completamente el contenido de la cámara de molienda. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 187 1.9: Efecto de la geometría del agitador sobre el tiempo de residencia.3. a un flujo de alimentación de 180 l/h.0 e =-T *R Figura 5. La Figura 5.

Con los tres tipos de agitadores a que se refiere la Figura 5.5 mm. Algunas observaciones experimentales indican que el tamaño óptimo de las perlas depende del tipo de célula: para levaduras.5 mm y para bacterias menores que 0. no es idéntico al tiempo de residencia ideal IR.2 y 1. al disminuir el diámetro de las perlas aumenta su tendencia a flotar produciendo el efecto contrario. Existe un diámetro óptimo para las perlas. Una carga baja de perlas produce una eficiencia baja. Esto permite incrementar. En molinos de laboratorio pueden utilizarse perlas hasta de 0. La carga de . Por otro lado.9 se ha observado que un incremento en la velocidad de rotación produce una distribución más amplia de tiempos de residencia. Con perlas de 0. Dada una relación de volumen del molino a volumen de perlas. Tamaño de las Perlas de Vidrio.4 mm para facilitar su separación continua. Carga de Perlas. la eficiencia de los molinos y explica por que la velocidad de alimentación aparentemente no afecta considerablemente el grado de desintegración alcanzado en un solo paso. se requieren diámetros mayores a 0. Esto aumenta la frecuencia de las colisiones entre las perlas y por lo tanto la eficiencia de la ruptura. Las enzimas localizadas en el espacio periplásmico son más fácilmente liberadas utilizando perlas de vidrio mayores en relación a las utilizadas para liberar enzimas protoplasmáticas (Keshavarz et a/. Se ha observado también que un incremento en la velocidad de alimentación produce una distribución más estrecha de tiempos de residencia con los tres tipos de agitadores. Sin embargo a escala industrial el tamaño de las perlas debe ser mayor 0. el número de perlas aumenta al disminuir el diámetro de éstas. el tiempo de residencia promedio ¿.2 mm. La cantidad de perlas que debe ser cargada al molino depende del tipo de células y del tamaño de las perlas.188 CAPÍTULOS. 1987).5 mm se recomienda una carga del 85 % y de 80 % cuando las perlas son de 1 mm. mientras que una carga alta genera mayor consumo de potencia y libera más calor. Empíricamente se ha determinado que la carga óptima de un molino fluctúa entre el 80 y 90 %. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS probabilidad y períodos de tiempo diferentes. En la desintegración celular se utilizan perlas de vidrio libres de plomo con un diámetro entre 0.5 mm.

(0.375)+0. Ejemplo 5. „-* la fracción vacía está dada por: _ . 189 (5.2V. Volumen del agitador (discos o barras y flecha). EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR perlas se define como: Carga = ^ donde: Vp: Volumen del lecho de perlas. Vc = Vt. [L3].1. Estimar la fracción de volumen vacío de la cámara del molino cuando la carga es del 80%.. — r raccion = Fracción = 0. Va'.5 Cuando la carga de perlas es del 80% el volumen de las perlas es igual al volumen libre total VM- .375) + 0.375. [L3]. Solución: De acuerdo con la ecuación (5..2VC r racción = — — 'C combinando las expresiones anteriores.5).5) Vt: Volumen de la cámara de molienda. [L3].5. (VJ)(0.Carga de un molino de perlas. El lecho formado por las perlas de un molino tiene una porosidad de 0.3.8V C )(0.Va.

1 y 0.10). 5. en un molino Dyno KD5. se utiliza una bomba de alimentación para transportar la suspensión celular con una presión entre 0. 1987). mientras que las de los equipos industriales tienen de tres a cinco. 5. Efecto de la Temperatura La temperatura de molienda facilita el rompimiento celular pero puede afectar al producto. El peso húmedo de células óptimo para la desintegración celular en un molino de perlas agitado se encuentra entre el 40 y 50% . Se ha reportado un grado de desintegración idéntico para células de levadura en concentraciones de 4 a 20% de peso seco de células. Durante una operación normal. sin embargo existen otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidizador.5 Kwh aproximadamente cerca de 6000 kcal/h tienen que ser removidas por el sistema de enfriamiento. donde la suspensión es comprimida hasta 60 MPa. El homogeneizador de más amplio uso es el Mantón-Gaulin. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Concentración de la Suspensión Celular.2 Homogeneizador de Alta Presión Los homogeneizadores de alta presión son los equipos más ampliamente utilizados para el rompimiento celular á gran escala (Keshavarz ti a/.190 CAPÍTULO 5. en los equipos de laboratorio las bombas constan de uno o dos pistones.5 MPa (millones de Ráscales) a la bomba de alta presión. en un molino Netzsch LME20 que consume una potencia de 7. La concentración de células en la suspensión no afecta considerablemente la efectividad de la desintegración celular. El número de pistones de la bomba depende del tamaño del homogeneizador. En general el rompimiento celular se realiza a una temperatura de entre 5 y 15 °C. Un homogeneizador de alta presión del tipo Manton-Gaulin consta de dos partes principales: una bomba de pistón de alta presión y una válvula. La generación de calor disminuye con el decremento de la concentración celular mientras que el consumo de energía por unidad de peso se incrementa. Es difícil llevar un control preciso de la temperatura puesto que una gran parte de la energía introducida por el agitador dentro de la mezcla es transformada en calor. Por ejemplo. se abre cuando la presión excede un valor . La válvula acoplada a la bomba (Figura.3.

la fuerza del choque sobre el anillo es directamente proporcional a la presión de operación y es la causa principal del rompimiento. parece razonable suponer que en el homogeneizador de Gaulin. á í suspensión celular * r. Todos los derechos reservados. donde las células se someten a turbulencia. En experimentos realizados cuyos resultados se muestran en la Figura 5.11.. Copyright ©1987 AIChE.Unidad de cuchilla. Mecanismo de Desintegración Celular La desintegración celular se inicia cuando la suspensión celular pasa a alta presión por la válvula de descarga.Unidad plana b). y después de cambiar dos veces de dirección choca contra un anillo de impacto.3. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 191 Válvula plana anillo de impacto suspensión celular producto homogenizado Válvula de cuchilla anillo de impacto \ / • / . i \ í*< producto ) homogenizado Figura 5.5. determinado. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. cavitación y esfuerzos de corte líquido. Fuente: Kula y Schütte.10: Configuración de las válvulas usadas en el homogeneizador: a). .. La suspensión de células es liberada a través de la válvula con una velocidad muy alta.

Enzima glucosa -6-fosfato hidrogenasa.192 CAPÍTULO 5. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Todos los derechos reservados. . ( o ) plana Figura 5. Fuente: Kula y Schütte.11: Rompimiento de Sacharomyses cerevisiae con homogeneizador a alta presión usando diferentes válvulas. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 50- 20 30 40 50 Presión (MPa) Válvula: ( + ) de cuchilla. Copyright ©1987 AIChE.

Presión de operación Diseño de la válvula Concentración celular Temperatura 193 — — — Adaptada de: Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Instituía of Chemical Engineers. Copyright ©1987 AIChE.4: homogeneizador de alta presión. En la Figura 5. No existe forma de diferenciar entre la liberación de proteínas del espacio periplásmico y las protoplasmáticas. 1990). La homogeneización no es efectiva para la desintegración de algunas bacterias Gram-positivas que presentan una pared celular muy gruesa y aparentemente no pueden ser desintegradas en el homogeneizador de alta presión. por lo que no es recomendable como rompimiento selectivo. Sin embargo.11 se muestra como varía con la presión .4 se listan los parámetros Operacionales que tienen influencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presión (Kula y Schütte. Todos los derechos reservados.5. Para lograr un rompimiento eficiente de células la presión de operación del homogeneizador debe ser superior a 35 MPa (la industria alimenticia opera sus homogeneizadores a una presión de 35 MPa). Parámetros Operacionales En la Tabla 5. Parámetros Operacionales. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR Tabla 5.3. Como puede observarse el número de parámetros es menor que los correspondientes al molino de perlas lo que facilita la optimización de este tipo de procesos. al menos a presiones hasta de 55 MPa. El método de rompimiento por homogeneización no es selectivo. se ha realizado con éxito el rompimiento de levaduras y de bacterias Gram-negativas como la Alcaligenes eutrophus (Harrison et a/. 1987). Presión de Operación.

y para una presión dada el incremento es mayor si se utiliza una válvula de cuchilla.10 se muestran las configuraciones de las válvulas que se usan con más frecuencia en los homogeneizadores: la unidad plana y la unidad de cuchilla. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de operación en un solo paso. La constante específica de la velocidad de homogeneización varía directamente con la temperatura hasta un valor de 30°C. que a 30 MPa. la enzima liberada en un solo paso representa solamente cerca del 45% de la cantidad total presente en la suspensión. Durante una operación se empieza a observar liberación de proteína soluble a presiones mayores que 10 MPa. Aún así. En la Figura 5. se requieren tres pasos a . por abajo de esta presión la cantidad de enzima liberada es aproximadamente igual para ambos tipos de válvulas. En general las presiones de operación más usadas son de 55 MPa. Durante la homogeneización la temperatura de la suspensión celular es un parámetro que no se mantiene constante y por lo tanto es difícil correlacionarlo. Diseño de la Válvula. La desintegración celular es independiente de la concentración de células de levaduras en concentraciones entre 100 y 600 gramos de peso seco por litro. Se han observado diferencias de alrededor de 40% en este parámetro en el rango de 5 a 30°C. Sin embargo. En la Figura 5.194 CAPÍTULO 5. se puede observar que por arriba de una presión de 20 MPa la válvula de cuchilla libera mayor cantidad de enzima que la válvula plana. Concentración de la Suspensión Celular y Temperatura. Se puede observar que a 55 MPa hay tres veces mas enzima en la fracción libre de células. En la Figura 5.11 se muestra el comportamiento de los dos tipos de válvulas en el rompimiento celular como una función de la presión de operación. la liberación de la enzima D-glucosa-6fosfato-deshidrogenasa de S. La presión de operación del homogeneizador depende del producto que se desee liberar. cerevisiae. se puede observar que la cantidad de enzima liberada aumenta con la presión.12 se presenta el comportamiento de la liberación de una enzima en función del tiempo de recirculación a tres diferentes presiones y para dos tipos de válvula. sin embargo para liberar ADN se requieren presiones por arriba de 25 MPa.

( ) ISMPa Figura 5.8- / J / / <" S .12: Efecto del tipo de válvula sobre la liberación de enzima Fuente: Kula y Schütte. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 195 1.f / s ^ 0."' -o 50 s ss X) A . 10 o 20 o 30 o 40 : -«« 60 Tiempo de Recirculación ( min ) Válvula: ( o ) de cuchilla: ( * ) plana Presión: ( ) 55 MPa: ( ) 30 MPa.0- O / // I 1 0.3.' // // /•*' s j? I // ''•'' ''•' 0.6- / .r 5. Copyright ©19Í AIChE.4nn 0.2. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. ./"' K?*r~"£~*. Todos los derechos reservados.

ROMPIMIENTO DE CÉLULAS una presión máxima de 55 MPa y a 30°C para alcanzar una desintegración celular mayor del 90%. Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los serpentines de enfriamiento que también presenta el Manton-Gaulin. Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presión manejada con aire y una cámara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de contrapresión. Mediante este mecanismo la energía de entrada se disipa casi instantáneamente produciéndose la ruptura celular.3 Microfluidizador El microfluidizador es un homogeneizador de alta_4^esión_que tiene un mecanismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin.14). la cámara de rompimiento puede colocarse en un baño de hielo. Los límites de operación del microfluidizador están dados por: la presión de aire requerida para manejar la bomba. las propiedades fisicoquímicas del líquido bombeado y la presión máxima de trabajo permitida que es de 140 MPa. se puede montar sobre una charola de acero inoxidable de 30 x 35 cm. 1989) son las siguientes: Es muy compacto. como se muestra en la Figura 5. lo que lo hace compatible con operaciones de flujo continuo. 5. Seguidamente las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared estacionaria de la cámara de rompimiento (Figura 5.196 CAPÍTULO 5. La suspensión celular se divide en dos corrientes haciéndola pasar a presión a través de dos microcanales de sección transversal de 2 x 100 //ra.3. Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparación con el homogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et a/. Permite flujos más bajos (2 — 23 l/h con presiones de operación de 10 — 95 MPa] y maneja volúmenes menores (30 m/).13. . Puede alcanzarse un rompimiento celular más eficiente (en el caso de bacterias).

BA: bomba accionada por aire. CC: cámara de contrapresión. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 197 Figura 5. Fuente: Sauer et a/. Todos los derechos reservados. Copyright ©1989. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.3.5. SE: serpentín de enfriamiento. RP: regulador de presión. .13: Diagrama del Microfluidizador. CR: cámara de rompimiento. MP: medidor de presión. V: válvula. C: contenedor.

Todos los derechos reservados. Ambos efectos contribuyen a. del tamaño de los restos celulares y de la concentración celular en el proceso de ruptura utilizando un microfluidizador. puede presentarse un incremento hasta de 80°C en la temperatura de la suspensión celular. Copyright ©1989. El microfluidizador permite mantener incrementos de temperatura menores a 20°(7 en la cámara de rompimiento. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5. que es la parte de mayor temperatura. Por otro lado. incrementar la eficiencia de la operación. el tiempo durante el cual las células están expuestas a temperaturas elevadas es muy corto. . Si el homogeneizador no tiene un sistema de enfriamiento eficiente de la cámara de rompimiento. Generalmente cuando se trabaja con presiones altas es necesario enfriar el sistema.14: Representación esquemática de la cámara de rompimiento del microfluidizador. Es relativamente fácil de operar. Temperatura de Operación.025 a 0. Parámetros Operacionales A continuación se describe el efecto de la temperatura.198 CAPÍTULO 5.04 segundos. lo cual puede ocasionar la desnaturalización de la proteína de interés. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. dado que el tiempo de residencia de las células en la cámara de rompimiento es de 0. Fuente: Sauer et a/.

generándose suspensiones de menor viscosidad. de cerca de 27° C después del segundo y aproximadamente de 28°C después de tres pasos. dado que es posible pasar el caldo del fermentador directamente al microfluidizador para efectuar la ruptura celular. La suspensión celular se alimentó a una presión de 60 MPa y a un flujo de 18 l/h.4. Ambos efectos facilitan la separación de los restos celulares durante la centrifugación.6 gramos de peso seco por litro tiene implicaciones en el diseño óptimo del proceso de bioseparación. se encontró que el microfluidizador puede romper células que se encuentran en soluciones cuyas concentraciones varían de 5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 199 En estudios sobre el rompimiento de células de E. De esta manera puede eliminarse la operación de cosecha de células. El costo del proceso en forma integral puede ser menor aún cuando las etapas de concentración y purificación posteriores a la ruptura también se vean modificadas. 1989). Este efecto disminuye al aumentar el número de pasos (Agerkvist y Enfors. El microfluidizador produce restos celulares de mayor tamaño que los producidos en el homogeneizador Manton-Gaulin. 1990).5.6 a 174 gramos de peso seco por litro. 5. se enfrió la cámara de rompimiento por inmersión en un baño de agua helada para proporcionar enfriamiento adicional al proporcionado por el serpentín del equipo. La temperatura de la suspensión a la entrada varió entre 8 y 10°C. o disminuir el grado de concentración necesario previo a la ruptura. Después del primer paso la temperatura a la salida fue aproximadamente de 23°C. coli (Agerkvist y Enfors 1990). coli (Sauer et a/. En investigaciones realizadas con E. Tamaño de los restos celulares. Concentración Celular.4 Diseño de Equipo de Rompimiento En esta sección se presentan los principios de diseño de los dos tipos de equipos más empleados en el rompimiento celular a nivel industrial: . El hecho de que en el microfluidizador puedan manejarse concentraciones hasta de 5.

En una operación intermitente. El grado de rompimiento logrado puede ser determinado de dos formas: .Directamente: Contando el número de células intactas por unidad de volumen.200 CAPÍTULO 5.Operación Continua.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos formas: . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS • Molino de Perlas de Alta Velocidad. . En el caso de productos de tipo proteico la determinación de proteína total y/o la actividad enzimática son mediciones comúnmente utilizadas.6) . • homogeneizador de Alta Presión. Durante la operación se cierra la salida de suspensión y se agita a la velocidad establecida. o cuando se desea efectuar experimentos para generar datos de diseño.Indirectamente: Mediante la medición de un componente liberado durante el rompimiento. El balance de masa de proteína liberada puede ser expresado mediante la ecuación siguiente: dfí (5. El rompimiento celular intermitente en molinos de perlas agitados a altas velocidades sigue una cinética de primer orden. 5. .Operación Intermitente. inicialmente se carga el molino con las perlas y la suspensión celular.4. Operación Intermitente Los molinos de perlas pueden ser operados en forma intermitente cuando el volumen de la suspensión celular a tratar es bajo.

[M/L3] t: Tiempo de operación. [t'1} La ecuación anterior puede ser integrada arreglándola de la siguiente forma: f O JO I dt m — 0 (5 7) ' Para obtener la ecuación de la operación intermitente: (5.4.15 se muestra la liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae utilizando un molino Netzsch LME20 con diferentes tipos de agitadores. En el caso de la molienda intermitente el tiempo de operación t es igual al tiempo de residencia de las células en el molino. de la concentración celular y de la temperatura. [L3] Rm: Concentración máxima de proteína obtenible.5. de la carga y tamaño de las perlas.8) /tm ít De acuerdo a la ecuación anterior las gráficas de IníRmHRn-R)] vs t producirán rectas de pendiente k y ordenada al origen cero. [M/L3] R: Concentración de proteína liberada en el tiempo t. El resultado muestra claramente que la desintegración celular sigue una cinética de primer orden independiente . DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 201 La ecuación anterior establece que la velocidad de liberación de la masa de proteína (células rotas) es proporcional a la masa de proteína presente no liberada.Volumen libre del molino. donde: VM. En la Figura 5. del tipo y velocidad del agitador. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden que depende del tipo de célula.

15: Liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae en experimentos con recirculación para diferentes tipos de agitadores. Todos los derechos reservados.0 S 10 20 30 Impulsores: ( A ) de postes: ( o ) de discos. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.70.50. ( a ) excéntrico.202 CAPÍTULO 5. Fuente: Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engiiieers. .1 0.20. Copyright ©1987 AIChE. Figura 5.30.6- _ D? 0.4 -\ I KW E 0.

700 a).Calcular la constante cinética para la liberación de proteína.Cinética de rompimiento intermitente.000 0. la ecuación (5.1081 0.0979 0.675 2.625 1.3870 ...0000 0. Solución: Las constantes cinéticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las ecuaciones (5.Calcular la constante cinética para la liberación de enzima.0000 0. Los cálculos necesarios son los siguientes: tiempo (s) 00 15 30 45 60 1n ln rtm Rm-R in A A m—A 4 0.1883 0. Observándose también diferentes valores de k para cada tipo de agitador.025 2.4. Rx 102 (Kg/Kg) 0. cerevisiae.150 6.150 2.9).2421 0.8) y (5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 203 del tipo de agitador. b).8) puede ser expresada como: In — A = kt (5.425 10.000 Áx 102 (mol/min-Kg) 0. En el rompimiento intermitente para la obtención de una enzima de S. se utilizó un molino de perlas de alta velocidad de 4 litros obteniéndose los siguientes datos: tiempo (s) 00 15 30 45 60 Max.525 3.5.2877 0.000 1.2910 0.2.4193 0.9) Ejemplo 5.150 1.. En el caso que el grado de rompimiento sea seguido mediante la actividad enzimática /I.

k = 6.Mediante un ajuste de los datos por mínimos cuadrados se puede obtener para la liberación de proteína la constante. A diferencia de la operación intermitente. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a).. [L3/t]. para la liberación de enzima la constante es: ib = 6.Volumen libre del molino.De igual manera. Grado de Mezclado en un Molino de Perlas. [t]. En el diseño de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de dispersión de los tiempos de residencia de las células en el molino. F: Flujo alimentado al molino.984 x 1(T3 s~l b). en una operación continua el tiempo de residencia varía para las diferentes células de la suspensión.. generándose una distribución de tiempos de residencia de la población celular. [L3]. ha sido simulado utilizando el modelo de "Reactores continuos en serie tipo tanque perfectamente agitados".412 x 1(T3 s~l Operación Continua Durante la operación continua del molino de perlas la suspensión celular a tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada continuamente en el extremo opuesto.204 CAPÍTULO 5. El tiempo de residencia medio t de la distribución de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia ideal ÍR dado por: donde: ÍR: Tiempo de residencia ideal. VM'. El grado de desviación del flujo tapón ideal en los molinos de perlas comerciales. Mediante el uso de este modelo los experimentos con pulsos de tinta permiten determinar el número .

Utilizando un tiempo adimensional definido por: (5.G n ) n av (tí 1 1 (5. . el balance de la masa de tinta para cualquier etapa n está dado por la expresión: -0. Cn: Concentración de tinta en la etapa n.13. 1990).10) puede expresarse como: \r1f~i C* \ -TT-.12. [M/ L3]. (5.YV(C n _i .4. Al aplicar un pulso de tinta en la primera etapa de una serie de tanques perfectamente agitados.5.) donde: N: Número de etapas de la serie.11J\ con las condiciones: e<o 0=0 d =o d = A^Co <9 > O C0 = Q Para la etapa número 1 la ecuación de balance se reduce a: ¿e y la forma integrada es: I ' ^r = -N ¡ dO JNC0 (5.0) la ecuación (5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 205 de tanques perfectamente agitados en serie a que equivale el grado de mezclado que se presenta en el molino (Shütte y Kula.

puede ser determinado a partir de los datos experimentales de concentración contra tiempo que resultan al aplicar un pulso de trazador. Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa TV se tiene que: CN _N»ffN C0 ~ ( En los estudios de mezclado al cociente CN/CQ se le denota como E y es una medida de la distribución de tiempos de residencia del fluido dentro del recipiente (Levenspiel.206 CAPÍTULO 5. y que el rompimiento sigue una cinética de primer orden. etapa y efectuando la integración correspondiente. Para relacionar el número de etapas con la eficiencia de rompimiento es necesario realizar un balance de proteína liberada (células rotas) considerando que el molino consta de . Eficiencia de los Molinos de Perlas. es posible obtener una expresión para la concentración en la segunda etapa./V etapas tipo tanque perfectamente mezclados en serie. El balance de proteína liberada en la primera etapa de la serie está dado por: .14) Co Sustituyendo la expresión anterior en la ecuación de balance para la segunda. puede ser empleado para calcular la eficiencia de rompimiento esperada.15) respecto a 6 e igualando el resultado a cero para obtener: N = —I— (5. 1972). De tal manera que el número de etapas a que equivale el grado de mezclado de un molino. El número de etapas de un molino de perlas obtenido mediante experimentos de pulsos. La aplicación práctica del desarrollo anterior puede visualizarse derivando la ecuación (5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de tal manera que: Q.16) ] ] j donde 9max es el tiempo adimensional al cual E es máxima.= Nexp(-N0) (5.

IcV*. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden. ¿fí.5. t: Tiempo de operación. _. -mjt . DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 207 donde: RI: Concentración de proteína liberada en la etapa 1.4. jn .* . [¿-1] La ecuación anterior puede ser expresada en función de un tiempo adimensional dado por: y obtener.20) " NF La ecuación anterior también puede ser expresada como: Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa TV se tiene: . y--~7fi •»•"!/ lm-R\) (5.19) La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: O= O RI = O ú 0=_ E> Rl D = Rl y obtener: / kV\f i \ (5. [M/L3].

45 1.3 101.074 0.72 0.5 2132.18 0. se carga de perlas de tal manera que la fracción de volumen libre es de 0.028 0.8 21.54 0.861 0.8 14.722 0.3 1.0 2682.0 16.5 15.097 0.90 1. Un molino de perlas tipo piloto con cámara de 4 litros de volumen.9 1.0 545.208 CAPÍTULO 5.89 3.5 1625.5 820.22) Ejemplo 5..5 52. .0 352.7 85. Los datos de concentración a la salida del molino aparecen en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente : t(s) 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 (1) (2) C(U) 11.185 0.0 47.0 135.5 1305. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Rr = 1 + NF ) — RN kV¡ (5.27 1.402 0.046 0.5 47.0 220.016 0.0 2325.5 2542.Determinación del número de etapas equivalentes de un molino de perlas.550 0.07 (5) E 0.005 a).1 8.35 2.99 2.8 5.2 93.009 0.3.5 (4) e 0.908 0.442 0.3 65.119 0.278 0.17 2.332.71 2.0 1187.787 0.1 0.81 1.09 1.48 respecto al volumen de la cámara.. se introduce un pulso de tinta al molino cuando éste opera en forma estacionaria con un flujo de 50 l/h.5 27.5 32.6 Suma = (3) CAí 287.0 82.Calcular el tiempo de residencia ideal.0 107.53 2.4 3.63 1.36 0. Para determinar el número de etapas del molino de acuerdo al modelo de tanques en serie.

I O Utilizando la ecuación (5.5.De la Figura 5.Estimar el número de etapas N.4.15 Unidades C c). d)...Calcular la eficiencia por etapa si k = 1. Vma..Calcular la eficiencia global de las N etapas... Solución: a).x = U.Obtener la gráfica de E vs 0. c)..24 s b).5 ° ~ T38^4~ CQ = 118.El valor de CQ puede ser estimado mediante la expresión: Co= M De acuerdo a los cálculos de la columna (3) de la Tabla anterior... d)..93 x 10~2 s~l f).16) se obtiene: .El tiempo de residencia ideal está dado por: 209 ÍR = -y/ x 0.48 x 3600 f 4 VM ** = 50¡ ÍR = 138.Estimar el valor de CQ. _ 16332. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO b).16 muestra la gráfica de estos datos.16 se puede determinar que cuando E presentí un máximo. e).En las columnas (4) y (5) de la Tabla anterior aparecen los cálculos del tiempo adimensional 9 y la concentración adimensional E La Figura 5.

5 2.0 e =t/t n Figura 5.0 0.210 CAPÍTULO 5.0 1.5 1.0 2.3.16: Distribución de tiempos de residencia del ejemplo 5. .5 3.0 3. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.5 4.0 0.

La eficiencia de rompimiento en cada etapa de acuerdo con la ecuación (5.20) es: Eficiencia = * ~^ V NF ) el valor del grupo entre paréntesis de la expresión anterior es: WM _ __ _ (1.667)" = 7. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 211 N = i-o.716 de tal manera que: RN -0. N = -—íN = 4 e).87 La eficiencia global de rompimiento en el molino es del 87% .4.667 i -t- = 0.22).°-667 de tal manera que: Eficiencia Eficiencia = 0.5.24s) _ .La eficiencia global puede ser obtenida a partir de la ecuación (5. ^ Rm — R = (1+0.4 f)...93 x 1Q-2 _ s-l)(m.

k : Constante cinética de primer orden. [1/pasos] La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: N =0 N =N R =0 R= R (5. [M/L3]. Rm\ Concentración máxima de proteína que puede ser liberada. (5. de tal manera que: ~ = k'(Rm . [M/t2L}.R) donde: R: Concentración de protema liberada (células rotas) después de N pasos.25) . [M/L3]. N: Número de pasos a través de la válvula del homogeneizador.2 homogeneizador de Alta Presión La desintegración celular en un homogeneizador de alta presión a una presión fija dada puede ser descrita mediante una cinética de primer orden respecto al número de pasos. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5.4.212 CAPÍTULO 5.24) Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una dependencia con la presión dada por: k' = k"Pa donde: P: Presión de operación.23) obteniéndose la ecuación: \»~~ = k'N nm — n (5.

En la recuperación de /3 galactosidasa de E. La presión de operación utilizada fue de 60 MPa La cantidad de proteína liberada después de cada paso se presentí en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente: .25) se obtiene: ln Rm D D Rm — R = k"NPa (5.26). se hace pasar poi un microfluidizador tipo M-110 una suspensión celular que contien* 47. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO fe": Constante dimensional de rompimiento. [M~at2aL2a /pasos].4.Rompimiento de E.26) El proceso de rompimiento celular descrito por la ecuación (5.4. Sin embargo.9 y para E. Rm — R donde 6 es un exponente que varía con el tipo de célula y tomí valores entre 0. coli. coli a = 2. la fracción de enzima liberada respecto a la enzima total presente depende de la localización de la enzima particular dentro de la estructura celular (Sauer et a/.5.27. Combinando las ecuaciones (5. coli en un microfluidizador. es independiente de la concentración celular. de la temperatura.00 (Sauer et al. y de la concentración inicial de células en el caso de levaduras.28 y 1.6 g/l en peso seco. Un valor típico para levaduras es a = 2..24) y (5. Microfluidizador En el caso del microfluidizador la cinética de rompimiento presenta una cierta dependencia no lineal con el número de pasos expresada mediante la ecuación: ln m =k"NbPa (5. es independiente de la presión de operación. Por otra parte.2. 213 a: Parámetro constante en rangos limitados de presión. 1989). 1989). I Ejemplo 5. se ha reportado que la actividad de enzima liberada en relación a la proteína total liberada.

-Estimar el número de pasos para liberar el 93 % de proteína en este proceso.0 96. Mediante un ajuste por mínimos cuadrados de estos datos se obtiene: k P¿'¿ = 0. Solución: De acuerdo a la ecuación (5.688 y para P=60 MPa.219 6. Los cálculos necesarios se muestran en la columna (3) de la Tabla anterior.214 CAPÍTULO 5. k" = 8.Estimar el valor de la constante cinética de rompimiento considerando que para este caso a = 2..27) el grado de rompimiento para este caso puede ser expresado como: In Rr Rm — R de tal manera que de la pendiente de la gráfica de ln[Rm/(Rm — R)] contra TV es posible estimar k".0 99.0 88.El número de pasos requeridos para una liberación del 93 % de proteína es: .560 2.120 3.R)] 63. b)..2 y 6 = 1.994 1. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS (1) Paso 1 2 3 5 10 (2) ' (3) % Proteína Liberada ln[Rm/(Rm .9 0.0 79.908 a).4 x 10~5 MPa~2'2 b).

Existen varios métodos para efectuar esta operación.00-0. coli utilizando un molino de perlas tipo Dyno Mili. Estos datos muestran que el Microfluidizador permite manejar mayores concentraciones de biomasa y produce un rendimiento mayor de enzima activa.93 / 0. La ruptura celular utilizando el molino de perlas permite la obtención de un mayor porcentaje de enzima activa en un número menor de pasos en comparación con el homogeneizador. Comparación de los Métodos Mecánicos de Ruptura Celular La Tabla 5. el tamaño medio de los restos celulares que se producen en un paso es mayor que el encontrado en las mismas condiciones en el homogeneizador Manton-Gaulin. 5.5.5 Sumario I El rompimiento celular es una operación necesaria cuando el producto de interés se localiza al interior de la célula.000084 x 602-2 N = 3. .5. La Tabla 5.6 muestra los datos para la liberación de la enzima {3 galactosidasa de células de E. El diseño de los molinos está basado en ecuaciones empíricas y en en experimentos piloto. A nivel industrial sólo se emplean los molinos de perlas agitados y los homogeneizadores de alta presión. un homogeneizador tipo Manton-Gaulin y un Microfluidizador. Sin embargo. SUMARIO 215 yy _ 1.5 muestra datos de producción de algunas enzimas utilizando el molino de perlas y el homogeneizador Manton-Gaulin.88 pasos Se necesitan 4 pasos de molienda. Además. la producción de proteína en el molino es en general menor que la obtenida en el homogeinizador.

solub. Pasos Prod. cercus Brevibacterium ammoniagenes E. solub.5: Comparación de métodos de rompimiento celular. kg/h 91% 95% 88% 4 60 98% 95% 1 1 70 40 4 3 60 65 84% 85% 95% 92% 2 3 3 2 16 12 7 20 82% 10% 89% 84% 3 4 3 3 67 67 65 * Actividad solubilizada ** Netzsch LME 20 *** Gaulin M3 Adaptada de: Kula y Schütte. Copyright ©1987 AIChE. kg/h 86% 1 60 homogenei zador * * * Act. Todos los derechos reservados.* No. Pasos Prod. . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. coli Laclo bacillus confuius Enzima liberada D-glucosa 6. Microorganismo Levaduras Saccharomyces carlsbergensis Saccharomyces cerevisiae Candida boidinii Bacterias B.* No. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers.fosfato deshidrogenasa D-glucosa 6-fosfato deshidrogenasa Formato Deshidrogenasa Leucina deshidrogenasa Fumarasa Penicilina acilasa D-Lactato deshidrogenasa Molino de Perlas** Act.216 CAPÍTULO 5.

833 489. coli con diferentes métodos. SUMARIO 217 Método Ruptura de células de E.6 47. 806 465. 800 486. Todos los derechos reservados.2 47.4 66 76 82 58 75 78 501 414 217 457 180.G alactosidasa tamaño a Pico(s) biomasa Proteína 10 s~l Actividad media 100 s~l (mPa s) (mPa s) (nm) (nm) (9/1) (%) (%) Molino de Perlas* 2 min.5. MantonGaulin** 1 paso 2 pasos 3 pasos Microflui dizador** 1 paso 1 paso 1 paso 2 pasos 3 pasos 5 pasos 10 pasos 49.6 47. 3 min. Peso seco liberación de Distribución de Viscosidad de /3. 457 191 113 8 8 30 6 6 101.9 73.4 48. 4 min. 800 468 445 51 35 28 10 6 26 15 10 7 6 *Dyno Mili KDL a diferentes tiempos promedios de residencia ** homogeneizador Adaptada de: Agerkvist y Enfors. . 1990 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.5.5 49. Copyright ©1990.6 62 65 63 79 88 96 100 62 61 61 76 87 97 100 693 693 673 480 451 493.5 62 72 79 62 74 79 612 553 529 461. 787 471.4 48.6 47. 777 63 38 19 28 19 14 48.6 47.5 49.

300 0.225 10 0. un flujo de alimentación de 50 l/h y una carga de perlas del 85 %.325 15 0. 5.6 Problemas 5.85 mm . 1500 rpm b..55 y 0.2 .437 .365 0. Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades superiores a la óptima.90 22.88 22.090 0.525 25 0.037 0. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5..1.R)] de residencia (min) 0.00 a.94 23.650 30 0.Resp.R)] Agitador 2 Tiempo log[# m /(#m .150 5 0.218 CAPÍTULO 5.En estudios de liberación de proteína intracelular en función de la velocidad del agitador empleando un molino de perlas tipo Netzsch LME 4.160 0.35 22.060 3 0.La desintegración celular intermitente con dos tipos de agitadores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes datos: Agitador 1 Tiempo de residencia (min) 3 5 10 15 20 25 30 log[fl m /(# m . Bajo estas condiciones se obtuvieron los siguientes datos: Proteína liberada rpm 1200 1500 1750 2000 2250 (mg/ml) 15.225 0. se utilizó una suspensión celular de concentración de 50% (peso/volumen).425 20 0. con perlas de diámetro entre 0. Estimar la velocidad óptima para el agitador. a)..

Resp. Resp. Calcule el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento con cada tipo de agitador.15) y (5.4. a).6. b. Calcular cuanto representa este valor del correspondiente al 100 % de conversión trabajocalor.50(7 por cada 6.Una suspensión celular que contiene la bacteria gram negativa Alcaligenes eutrophus.En un rompimiento celular utilizando un homogeneizador es posible lograr 80 % de rompimiento bajo las dos diferentes condiciones siguientes: Condición 1 2 Presión (MPa) 90 50 Pasos 1 3 .Ha sido reportado (Bjustrom.05 x 10~4 MPa~2-2.5. 5 pasos. Cuando se opera a una presión constante de 15. a).. 5. 1985) que el calor liberado por compresión adiabática durante un proceso de homogeneización puede elevar la temperatura de la corriente que entra al homogeneizador 1.Estimar el número de pasos necesarios para lograr el 63 % de rompimiento.895 MPa de presión de operación.1990) .16) mediante el desarrollo descrito en el texto..5.33 min 5..Resp.Estimar la constante cinética k para cada tipo de agitador.Resp..2 MPa la constante k" del homogeneizador toma un valor 5.015 min~l b)... a). se hace pasar por un homogeneizador APV Gaulin 15M 8BA con el propósito de estudiar la recuperación de poli(3.Si la presión de operación se duplica en cuantos pasos se obtendrá el mismo rendimiento.hidroxibutirato (PHB) un termoplástico potencial (Harrinson et al ..3.6. t\ = 53... b). 5. ki = 0. PROBLEMAS 219 a)..Obtener las ecuaciones (5. 91 % 5.

a)...7.Estimar los parámetros cinéticos del homogeneizador. 5....Graficar la distribución teórica de E vs 9 de un molino de perlas al que se le ha aplicado un pulso de tinta. para valores de TV de 1.Resp..Indique la forma que adopta la distribución conforme TV crece. a).56 x 10~4 MPa~1-87 b).8.. 10 y 20. b). respectivamente.22) mediante el procedimiento descrito en el texto . jfc" = 3.. 3.Comparar la energía por unidad de masa de alimentación necesaria para cada condición.Obtener la ecuación (5.Como se explica que C pueda ser mayor que CQ. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a).Que condición se recomienda para realizar la ruptura.220 CAPÍTULO 5. b). 5. .. 5. c).Resp. 67 % de diferencia. 2.

S. y Chase. D. 1987. Academic Press. 1985. London. Differential product reléase from yeast cells by selective enzymatic lysis. L. En: Separations for Biotechnology. 36. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.). S. y Hu. England. 349-357. R. 2. Eng. 1990. coli cell desintégrales from a bead mili and high pressure homogenizers. Pyle. Biotechnology and Bioengineering. 21-28.L. J. 1988.S. 1992. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. A. Desintegration of cell. 1990. R. T. D.A. 1969. (Ed. John Wiley &. England. Harrison. D. 1990. 77-88. E.. 1539-1541. J. 249-271. The effect of culture history on the disruption of alcaligenes eutrophus by High Pressure homogenisation. Cartwright. 38-47. y Dunnill. Biotechnology: Fermentation and downstream processing. Chem. C. D. Wei-Shou. En: Fermentation Advances. Dennis. Belter.). Andrews. H. L. . Foster.. England. y Rosen.. . Bjustrom. L. E. A.V. B. Elsevier Applied Science. Hoare. Datar. (Ed. P.). I. Sons. D. 11. Elsevier Applied Science. New York. Characterization of E. (Ed. Huang. (Ed. En: Separations for Biotechnology.T. Cell disruption: Breaking up is hard to do. M. En: Separations for Biotechnology. y Enfors. 1993. Keshavarz. P. 10. y Asenjo.. 11-20. Cell disruption and removal of insolubles. Edebo. A. Biotechnology. Pyle.).5. Perlman. Pyle.7 Bibliografía Agerkvist. 18. Bio/Technology. Ed. J. Elsevier Applied Science. 1083-1089. Asenjo. BIBLIOGRAFÍA 221 5.L. Biochemical engineering aspects of cell disruption. 1990. Cussler.7. 126-159. En: Separations for Biotechnology. B.

. 31-42.J. 7. M. y Evans. B. D. H.C. H. 3.B. M. Marcel Dekker.). M. Bioquímica. Springer-Verlag. Sauer. 107-141. An introduction to biochemical process design. A.J.L. T. 1990. 1989. New York. 62-79. Biotechnology Progress. M. 177-205. Shuler. 1972. 1989.A. D. Asenjo. Purification of proteins and the disruption of microbial cells.R. Petrides. (Ed. Hettwer. y Wang. Levenspiel. Marcel Dekker. Cooney.P. England. . Chemical permeabilization of cells for intracellular product reléase. 1990. R. 1330-1342. 3.. 5.A. D. Naglak. 1. Naglak. y Hudson. J.. Kula. L. Protein Purification: Principies and Practice. y Kula. England. Wang. Disruption of native and recombinant E.). y Glick. J. Ediciones Omega. Pyle. New York.R.J.18.I. C. J. 1989.. Protein reléase from the yeast Ichia pastoris by chemical permeabilization: Comparison to mechanical disruption and enzymatic Lysis. (Ed. y Schütte. España. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Verral.). H. 351-391.Y. coli in a high-pressure homogenizer. D. Schütte. Lehninger. T. New York. 1990. New York. (Ed. 1988. (Ed. AIChE. New York. y Wang. En: Separations for Biotechnology. L. 9. Elsevier Applied Science. Segunda Edición. 1-21. Chemical Reaction Engineering.Y. 1987. H. Bead mili disruption. Robinson. En: Separations Processes in Biotechnology.R. L. Asenjo. Biotechnology and Bioengineering. 41-71.). 33. 242-308. 55-64. Barcelona. Scopes. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology. T. 1994.(Ed. Ellis Horwood Limited. 84. John Wiley and Sons. En: Separations Processes in Biotechnology. Biotechnology: Status and Perspectivas.222 CAPÍTULO 5. M. C.). O. S.

Parte III Concentración del Producto .

la adsorción cuando se realiza por af una técnica de separación altamente selectiva y necesaria en la purificación de productos en los cuales se requiere de una alt< .Esta parte trata sobre las operaciones de extracción y c que son utilizadas para concentrar los producto diluidos de L biológicos que son obtenidos en la etapa de separación de solide la extracción como la adsorción son técnicas de separación selectivas. Sin embargo.

. En las operaciones de extracción la solución de la que se va a extraer el soluto se llama alimentación y el líquido con el cual se pone en contacto la alimentación se denomina solvente. El producto de la operación rico en solvente se llama extracto y el líquido residual de donde se separó el soluto es el refinado. Las sustancias que componen la solución original se distribuyen de diferente forma entre las dos fases líquidas y se logra un cierto grado de separación.Separación de la mezcla en dos fases líquidas inmiscibles. . mismo que puede incrementarse mediante el contacto sucesivo entre los dos líquidos. En muchos procesos tradicionales de la Ingeniería Química la operación de separación más usada es la destilación debido a su simplicidad. La extracción líquido-líquido se realiza básicamente en dos pasos: .1 Introducción La extracción líquido-líquido es una operación que permite la recuperación de un soluto de una solución mediante su mezcla con un solvente.Capítulo 6 Extracción 6. El solvente de extracción debe ser insoluble o soluble en grado limitado en la solución que se va a extraer y el soluto a extraer debe presentar una elevada afinidad por el solvente de extracción.Mezcla íntima del solvente de extracción con la solución a procesar.

La extracción también puede ser usada para remover impurezas de una corriente. Los principios básicos de la extracción convencional líquido-líquido pueden ser extendidos a los sistemas de extracción de dos fases acuosas inmiscibles que son más empleados en la recuperación de proteínas y en la separación de algunas sustancias biológicas. así como también la relativa facilidad con que se pueden escalar los procesos extractivos. La extracción es una técnica de separación que posee algunas ventajas que la hacen atractiva para los procesos de bioseparación.3. mientras que la extracción que utiliza dos fases acuosas inmiscibles se utiliza para concentrar proteínas y separar componentes biológicos. Sin embargo. En este capítulo en la sección 6. Entre ellas se encuentran la vasta experiencia y desarrollo tecnológico alcanzado en muchos años. a su baja volatilidad y a las concentraciones tan bajas que se manejan. El establecimiento de los aspectos termodinámicos básicos de la extracción permiten visualizar algunos caminos que contribuyen a realizar esta operación en forma más racional. La operación de extracción implica el uso de tres tipos de sustancias cuando menos: el soluto de interés y los componentes puros de cada una de las dos fases.228 CAPÍTULO ti. La extracción agua-solvente orgánico se emplea ampliamente en la industria de los antibióticos.2 se abordan los aspectos fundamentales de la extracción.4. Los equipos más utilizados para realizar operaciones de extracción se presentan en la sección 6. particularmente contribuyen a una selección adecuada del solvente de extracción y de las condiciones de operación. en muchas bioseparaciones la destilación no puede ser utilizada debido a la sensibilidad de los productos a la temperatura. y los aspectos básicos del diseño de extractores intermitentes y continuos se revisan en la sección 6. La interacción de estos componentes y/o la presencia de más solutos o solventes genera cierto grado de complejidad de la operación. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos: .

es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua. • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar.2. • Química de la extracción. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas.• Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido. Aún en ausencia de interacciones específicas.1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: . . Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicos en soluciones acuosas. Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles. En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico. • Selección del solvente. le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua.Las fases pueden ser completamente o parcialmente miscibles. 6. En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas. .2.La naturaleza de las fases.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés. i 6. las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos. . En este último caso.

Las fases pueden ser completamente o parcialmente irascibles. • Química de la extracción. En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico. 6. Aún en ausencia de interacciones específicas.La naturaleza de las fases. Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles. 6. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas. En este último caso. Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicoí en soluciones acuosas. • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles. . es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua.6. le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua. . En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas. . • Selección del solvente.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar.1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: .2.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés.2. las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 229 • Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido.2.

= í (6.3) En extracción se define el coeficiente de partición como la relación de las concentraciones de soluto en el equilibrio.1) El potencial químico de las fases está dado por: H°(R) + RT ln AR = fi°(E) + RT In AE (6. es decir: (6. La ecuación (6. En el caso de soluciones diluidas ideales la concentración es una medida apropiada de la actividad.2) donde AE y AR son las actividades del soluto en las fases E y R respectivamente. x es la concentración de soluto en la fase ligera J5. La ecuación (6.4) es conocida como Ley de la distribución de Nerst y establece que en el equilibrio existe una relación constante de las actividades del soluto en las dos fases para una temperatura dada.5) o bien como: (6.de los gases ideales y T es la temperatura.6) .4) donde: Kp es el coeficiente de partición. es decir: K. o fase correspondiente a la alimentación. de tal manera que la ecuación anterior se puede escribir como: /jf(R) + RT ln y = fjf(E) + RT ln x (6.3) puede escribirse como: (6. al alcanzarse el equilibrio los potenciales químicos del soluto en ambas fases son iguales. o fase rica en solvente y y es la concentración de soluto en la fase pesada R. EXTRACCIÓN Cuando un soluto es repartido entre dos fases E y R formando soluciones diluidas.230 CAPÍTULO 6. R es la constante .

01 0.00 120.01 32. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.1: Coeficientes de partición para algunos solutos de interés. 1988.0 a pH 4.20 0. 25°C Antibióticos a pH 7.ermodinámico es conveniente puntualizar las propiedades del coeficiente de partición en la extracción. Glutámico Celesticetina Eritromicina Novobiocina Penicilina F Penicilina K Proteínas Glucosa isomerasa Catalasa Solvente n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua Amil acetato/agua Butil acetato/agua Amil acetato/agua Amil acetato/agua PEG 1550/fosfato de potasio PEG/dextrano crudo Kp 0. donde AG° es cambio en energía libre en el estado estándar. El coeficiente de partición varía con el nivel de concentración de equilibrio.00 0.El coeficiente se define sólo en un punto de equilibrio.10 Observaciones.6. Debido a la importancia del equilibrio }.0 a pH 6. En la Tabla 6. Compuesto Tipo Aminoácidos Soluto Glicina Lisina Ac.0 a pH 6.5 a pH 4. No se aplica a todas las concentraciones posibles de encontrar en un sistema. sino únicamente en el equilibrio verdadero.00 3.00 Adaptada de: Belter ei al.1 se muestran los valores del coeficiente de partición Kp para algunos solutos de interés en sistemas específicos. .00 0.04 100. En este sentido nc debe confundirse con la constante de equilibrio del sistema. El logaritmo natural del coeficiente de partición Kp es proporcional a la diferencia de los potenciales químicos en los estados estándar de las fases puras.00 0. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 231 Tabla 6.07 110. Todos los derechos reservados.0 3. Copyright ©1988.0 a p H 10.00 0.06 12. .2.

232

CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN

- Para sistemas diluidos el coeficiente de partición puede considerarse constante e igual a la constante de equilibrio. - La constante Kp a una temperatura dada, es independiente de la concentración o presión global del sistema. - La magnitud de la constante Kp, determina la extensión a la cual procederá una extracción particular bajo condiciones establecidas. Un valor alto de Kp indica que en el equilibrio la concentración de soluto en el extracto es mayor que en el refinado. - Los valores de Kp deben ser determinados experimentalmente. Cuando se gráfica el potencial químico \i contra la concentración de soluto en la fase ligera x (Figura 6.1), en condiciones tales que una pequeña cantidad de fase ligera E esté en equilibrio con un exceso de fase pesada R, se tiene lo siguiente: debido a que R está presente en exceso, el potencial químico f¿(R) es constante, mientras que /¿(E) varía con la concentración x. En la intersección de //(-£") y 1¿(R) se puede localizar la concentración x, en equilibrio, de soluto presente en E. Cuando la concentración x aumenta, f¿(E] aumenta y se aproxima a fí°(E). Entonces se puede establecer que los cambios en el tipo de solvente cambian la concentración x en equilibrio. Por ejemplo, para el solvente 1 la concentración de equilibrio es x\ y para el solvente 2 la concentración de equilibrio es #2, entonces se puede concluir que el solvente 2 favorece esta extracción. No sólo los cambios en el tipo de solvente pueden mejorar la extracción, sino también los cambios en el soluto que afecten su potencial químico fj,°(E). Cambios en el Solvente Lo primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extracción es cambiar el solvente de extracción, esto es, elegir uno cuyo potencial químico en el estado estándar esté más próximo a ^°(R). Desafortunadamente esto no es fácil de lograr debido a que la teoría termodinámica

5.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

233

Fracción mol de soluto ( x ) en fase ligera

Figura 6.1: Comportamiento del potencial químico en función de la concentración x de soluto.

234

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

no puede predecir con segundad los potenciales químicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es posible utilizar enfoques aproximados para estimar 1¿°(E) utilizando parámetros de solubilidad, en el cálculo de coeficientes de partición . De acuerdo con esto, el coeficiente de partición Kp dado por la ecuación (6.4) puede ser expresado como:

donde V¿ son los volúmenes molares parciales del solvente pesado /?, el solvente ligero E, y el soluto A respectivamente, y Si son los parámetros de solubilidad correspondientes. El grado de disolución de sólidos en líquidos varía considerablemente con la naturaleza del sólido y del líquido, la temperatura y en grado menor con la presión. En todos los casos el límite de solubilidad es la saturación. En un sistema de un solvente y un soluto particular, la concentración de saturación a una temperatura y presión dadas es constante y no depende de la manera en que se prepara la solución. La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto en un solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayoría de las sustancias absorben calor al disolverse y son más solubles a una temperatura elevada. Para estimar el parámetro de solubilidad del soluto de interés ¿u, es necesario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas solubilidades Si sean conocidas. Una vez determinado 8¿ se pueden estimar los coeficientes de partición para nuevos solventes a partir de los valores Si conocidos. Estas son sólo estimaciones que pueden servir de guía para nuevos experimentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parámetros de solubilidad para algunos solventes.

Cambios en el Soluto Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extracción ya sea por razones económicas o técnicas, entonces es necesario ver la posibilidad de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se desea obtener mediante la extracción, los posibles cambios deben ser de caráter reversible.

FUNDAMENTOS DE LA

EXTRACCIÓN

235

Tabla 6.2: Parámetros de solubilidad para algunos solventes. Solvente Amilacetato Disulfuro de carbono Tetracloruro de carbono Cloroformo Ciclohexano Tolueno Agua 8 (ca/ 1 / 2 era -3/2)
8.0

10.0 8.6 9.2 8.2 8.9 9.4

Cambios en el Soluto por Pares de Iones.- Los cambios en c soluto dependen del comportamiento iónico que éste pueda tener. Si < soluto tiene comportamiento iónico y es posible encontrar un materií que permita suprimir esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces 1 unión del soluto a este material permitirá aumentar la solubilidad d< soluto en el solvente de extracción. Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hech de que un soluto que es iónico en el agua, formará un par-ión sin carg neta en un solvente orgánico. Esta formación de par-ión se puede ejemplificar de la siguiente m, ñera: Si de una solución acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extr; el catión utilizando cloroformo, se tiene: _ [N(C4H9)¿ en cloroformo] g)4 en agua] _
(6.

Si se agrega acetato de sodio a la solución acuosa de cloruro < tetrabutilamonio y se realiza nuevamente la extracción, se encuentra en cloroformo] = 132 en agua]
(6.

Puede observarse que en el primer caso se extrae una solución diluí de par - ion de N(C^H^]\Cl" y que en el segundo caso, se obtiene u

236

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.3: Contraiones típicos usados en extracción por pares de iones.
Ion

Estructura Química CH3COOCH3(CH2)2COO-

Observaciones Simple, no es muy soluble en solventes orgánicos. Más soluble en solventes orgánicos que el Acetato. Sólido Puede formar núcelas. Puede permanecer iónico en solventes orgánicos. Puede formar núcelas. Puede formar cristales líquidos. Puede degradarse en varios solventes.

Acetato Butirato Tetrabutilamonio Hexadeciltributilamonio Perfluoroctanato Dodecanato Linolato Tetrafenilboruro

(C 4 #9)4W-

CH3(CH2)1&(dH9)3N+ CF3(CF2)6COO~ CH3(CH2)10COOCH3(CH2)tCH = CHCH2CH = (CH2)7COOB(C6H5)4~

Adaptada de: Belter ef al, 1988. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

solución más concentrada de par - ion de CH^COO El empleo de pares iónicos, requiere de la selección de contraiones solubles en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como sales grasas y se listan en la Tabla 6.3 Cambios en el Soluto por pH.- Algunos productos que son de interés biotecnológico como las proteínas o los constituyentes de éstas los aminoácidos, son sensibles a cambios en el pH por lo que el conocimiento y comprensión de las propiedades ácido - básicas de los aminoácidos es sumamente importante en las bioseparaciones de proteínas. Muchos de los solutos.que se desean aislar son ácidos o bases débiles, su extracción puede ser fuertemente afectada por cambios en el pH. Un ácido débil puede ionizarse parcialmente en agua y no ionizarse significativamente en un solvente orgánico.

0.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

237

El ácido débil RCOOH, en solución acuosa, se disocia de la siguiente manera: RCOOH ^ RCOO- + //+ así que su constante de disociación Ka está dada por:

[RCOO-)R[H+]R [RCOOH]R

(

'

Cuando este ácido débil se distribuye entre dos fases, una orgánica E y una acuosa R, el coeficiente de partición aparente agrupa las concentraciones de la forma ionizada y no ionizada del ácido en la fase acuosa. Este coeficiente de partición se expresa como:

"

[RCOOH}B [RCOOH}R + [RCOO-]R

(

'

Combinando las ecuaciones (6.10) y (6.11) se obtiene:

donde K{ es el coeficiente de partición intrínseco de las especies no ionizadas definido por:
Ki

_ [RCOOH}E ~ [RCOOH]R

(6J3)

se sabe que pKa — — logA^, entonces si se combinan las ecuaciones (6.12) y (6.13) se obtiene:
log 10

-¿•}-l\=pH-pKa Kr

(6.14)

En la Tabla 6.4 se muestran los valores de pKa para algunos solutos de interés biológico. El desarrollo anterior para el caso de una base débil es análogo y conduce a: (6-15)

238

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Las ecuaciones (6.14) y (6.15) muestran que el coeficiente de partición puede ser alterado cambiando el pH de la solución acuosa. Los cambios en el coeficiente de partición pueden ser usados también para seleccionar el pH al que debe extraerse preferentemente un soluto determinado. Para dos soluto A y B la selectividad de la separación está dada por /?, donde:

Kr(B)
(6.16) es un indicador del grado de pureza que se puede lograr en un sistema de extracción determinado. Ejemplo 6.1.- Disociación de ácido propiónico. El pH de una solución 0.1 M de ácido propiónico es de 2.935. Determinar: a).- La constante de disociación aparente Ka. b). El pKa del ácido. c).- El grado de disociación del ácido. Solución: a).- La constante de disociación de un ácido está dada por la ecuación (6.10), en este caso se tiene que:
í^-a —

_ [//+] (CH3 - CH;\
[CH3 - CH2 - COOH]

dado que la concentración de la solución es de 0.1 M, [C//3 - CH2 - COOH} + [//+] - 0.1 M y a un pH de 2.935, la concentración de H+ es
[//+] = L J
-—^ = 1.16 x 10~3 M

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

239

Tabla 6.4: Valores de pKa para algunos solutos biológicos. Bases y Ácidos Simples Compuesto pKa Acido Acético 4.76 2.14 H3P04 CH3NH+ 10.6 Aminoácidos Compuesto pK-2 pKi COOH aNH+ Leucina 2.36 9.6 1.82 Histidina 9.17 Lisina 2.18 8.95 Péptidos Compuesto pKi pffi COOH aNH+ 3.06 Gly-Gly 8.13 2.34 Ala 9.69 Gly-Asp 2.81 8.60 Ala-Ala-Lys-Ala 3.58 8.01 Antibióticos Compuesto pK'a* Cefalosporina C 3.9 5.3 7.6 Lincomicina (base libre) Penicilamina 1.8 , (carboxil)

+ + +

pKs Grupo R
6.0 10.53 - pK3 Grupo R

+ -f +

+ -I-f -f

4.45 10.58

+ 44-

10.5

Adaptada de Belter, P.A. et a/, 1988.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

240 de tal manera que:

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

[C//3 - CH2 - COOH] = 9.88 x 10~2 M sustituyendo en (6.10) estos resultados se obtiene: (1.16 x 1Q-3 M) (1.16 xlQ- 3 M) ~~ 9.88 x 10-2 M = 1.36 x 10~5 M

a

Ka

b).- De acuerdo a la definición de pKa->

pKa

= log(—-)

pKa =

pKa = 4.87
c).- El grado de disociación es igual a la concentración de ácido disociado entre la concentración inicial de ácido, de tal manera que:

Ejemplo 6.2.- Separación de dos tipos de penicilina. En el sistema agua-amilacetato la penicilina "K" y la penicilina "F" tienen valores de KÍ de 215 y 131, respectivamente. Sus pKa's son de 2.77 y 3.51. Si se desea recuperar penicilina "F", determinar como se alcanza mayor pureza del producto: Si se extrae a pH 3.0 o a pH 4.0. Solución: La selectividad de la extracción está dada por la ecuación (6.16). Para aplicar esta ecuación es necesario calcular primero Kp mediante la ecuación (6.14), para cada penicilina a cada uno de los pH's de interés. Para la penicilina "K" a un pH de 3.0 se tiene:

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA

EXTRACCIÓN

241

log10

- 1 = pH - PKa = 3.0 - 2.77 - 0.23

por lo tanto: Kp(uKn) = 79.68 Para la penicilina "F" a un pH de 3.0 se tiene:
log 10

\

= pH - PKa = 3.0 - 3.51 = -0.51

por lo tanto: KP(«F") = 100.0 se tiene entonces que:
A

KP("F") 100.0 ^("/n 79.68 = L26

El cálculo de /fp para las dos penicilinas a pH = 4.0 se realiza de manera similar, encontrándose para este caso que:
A = 2.67

Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pH's respectivos se muestran en la siguiente Tabla:

PH

3.0 4.0

KP("K») 79.68
12.00

KP(UF») 100.00 32.00

' o_ A'pC'F") P ~ KP("K")

1.3 2.7

Estos resultados indican que si la extracción se realiza a un pH = 4 se obtiene la penicilina "F" en forma más pura, aún cuando la extracción es más difícil dado que el A^C'/7"') = 32 es menor que el correspondiente al pH=3.0.

242

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.5: Criterios utilizados en la selección de solventes. Selectividad. Coeficiente de partición adecuado para el producto. Grado de solubilidad. Facilidad de recuperación. Densidad. Tensión superficial. Estabilidad para el soluto. Inocuo

6.2.3

Selección del Solvente

En la operación de extracción generalmente es posible seleccionar el tip de solvente que se va emplear para realizar la extracción ( Mattiasso y Ling, 1989). Para tomar esta decisión es conveniente considerar h siguientes características (Tabla 6.5) del solvente:

Selectividad.- En el caso de que se desee además de concentrar logn un cierto grado de purificación, el solvente debe ser selectivo pai el soluto de interés. Coeficiente de partición.- Entre mayor sea el coeficiente de partició menor es la cantidad necesaria de solvente. Grado de solubilidad.- Entre más insoluble sea el solvente en la a mentación, la extracción se realizará más fácilmente. Facilidad de recuperación.- Por cuestiones económicas es necesario qi el solvente pueda ser recuperado para su reutilización. Densidad.- La separación de las fases una vez que se efectúa la e tracción, es más rápida entre mayor sea la diferencia de densid. entre las fases.

6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

243

Tensión superficial.- Un solvente con una tensión superficial alta, facilita la coalescencia de las emulsiones, en la separación de las fases. Estabilidad para el soluto.- El solvente no debe alterar al producto. Otras.- El solvente debe ser inocuo, esterilizable, no-inflamable, barato y disponible en las cantidades deseadas.

6.2.4

Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles

Cuando se opera con sistemas biológicos hay un número limitado de solventes que pueden ser usados en los procesos de extracción, esto es debido a que algunas de las biomoléculas de interés como las proteínas, son desnaturalizadas por los solventes orgánicos (Mattiasson y Rajni, 1991). Una técnica de bioseparación que preserva la actividad de las biomoléculas, en este caso de las proteínas, es la extracción en sistemas de dos fases acuosas inmiscibles (SDFA). En la Tabla 6.6 se listan algunos sistemas que pueden ser usados para formar sistemas de dos fases acuosas. En general los sistemas de dos fases acuosas se pueden clasificar en dos tipos: - Los sistemas polímero-polímero. - Los sistemas polímero-sal. Los sistemas de dos fases acuosas inmiscibles polímero-polímero se forman cuando dos polímeros como el polietilen-glicol (PEG) y el dextrano (un carbohidrato) se mezclan en presencia de agua. En el caso de los sistemas polímero-sal, el sistema se forma por la mezcla en agua de un polímero y una sal como el fosfato de potasio. El hecho común de estos sistemas es que ambas fases son acuosas, el contenido de agua de cada fase varía entre 85 y 99 %. Los sistemas de dos fases se caracterizan por presentar una baja tensión interfacial en el rango de 0.0001 a 0.1 dÍ7ia/an. El tiempo de sedimentación (separación de las fases) sólo por acción de la gravedad es

244

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.6: Sistemas de dos fases acuosas. Componente 1 Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Ficoll Componente 2 Dextrano Hidroxipropil de almidón Fosfato de potasio Sulfato de potasio Dextrano Referencia Albertsson (1986) Tjerneld (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986)

Fuente: Albertsson et a/, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

de 5 min a varias horas debido a la pequeña diferencia de densidades y a la relativamente alta viscosidad entre las fases. El tiempo de separación puede reducirse utilizando centrifugación a baja velocidad (Albertsson et al, 1990). El hecho de que ambas fases sean acuosas y tengan una tensión interfacial tan pequeña, proporciona un medio ambiente tal que permite que las biomoléculas y partículas celulares puedan repartirse entre las fases conservando su actividad (Diamond y Hsu, 1990). La extracción en SDFA es un proceso sumamente atractivo para la separación de enzimas y proteínas de interés biotecnológico debido principalmente a que: - El escalamiento es sencillo y puede realizarse a partir de datos de laboratorio en forma confiable, dado que el coeficiente de partición no varía con la escala. - La transferencia de masa es alta y el equilibrio se alcanza con poca energía de mezclado. - Se puede realizar en forma continua. - Los polímeros le confieren estabilidad a las proteínas.

6.2.

FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

245

15-

10.

O

5

10
% (w/w)

15
Dextrano

Figura 6.2: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al, 1991
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1991. Todos los derechos reservados.

- La separación puede ser selectiva y rápida. - La separación puede efectuarse a temperatura ambiente debido a su rapidez. - Es más económica que otros procesos. Diagramas de Fases Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagramas de fases únicos donde se granean la composición de las fases en el equilibrio. La Figura 6.2 muestra un diagrama de fases para el sistema PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. La curva binodal característica de estos sistemas pasa por los puntos DPC.

246

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

- El punto P representa el punto crítico y es el punto donde teóricamente la composición y los volúmenes de ambas fases son iguales. - El punto A se sitúa en una región a la izquierda de la curva binodal donde el sistema consta de una sola fase. - El punto B se localiza en una región donde coexisten las dos fases y representa la fracción peso de cada uno de los componentes de una mezcla formada por fases de composición C y D. - Las lineas como la CBD se conocen como lineas de unión. Si se considera la linea de unión que pasa por los puntos Ql, Q2 y Q3, todos los puntos están formados por fases de igual composición, pero en diferente proporción de volumen. La proporción de volúmenes de las fases conjuntamente con el coeficiente de partición constituyen un factor de diseño fundamental de la extracción. La proporción de volúmenes de las fases puede obtenerse gráficamente utilizando balances de masa. Considérese la linea CBD de la Figura 6.2 y sea: M: Masa total del sistema de dos fases. [M]. ME'- Masa de la fase rica en PEG. [M]. MR: Masa de la fase rica en dextrano. [M]. qE'. Fracción masa de PEG en fase rica de PEG. [Adim.j. PE'- Fracción masa de dextrano en fase rica de PEG. [Adim.]. qpt: Fracción masa de PEG en fase rica de dextrano. [Adim.]. PR: Fracción masa de dextrano en fase rica de dextrano. [Adim.]. entonces el balance de masa total del sistema es: M = ME + MR el balance de PEG es: (6.17)

$.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

247

MqM = MEqE + MRqR

(6.18)

combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:

R

qE - qM

La diferencia de fracciones masa de la ecuación anterior puede encontrarse gráficamente en la Figura 6.2. Asimismo por triángulos semejantes se puede demostrar que:

= BC
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos. Cuando la densidad de las fases es muy próxima, la relación de volúmenes de las fases está dada por:

f = R BC

(6.21)

donde E y R son los volúmenes de la fase superior e inferior, respectivamente. Comportamiento de las Fases El comportamiento de un sistema polímero A-polímero B-agua, depende de las interacciones entre las moléculas presentes. Estas interacciones pueden ser puentes de hidrógeno, fuerzas de van der Waals o iónicas, interacciones dipolo-dipolo e interacciones hidrofóbicas. En un sistema pueden presentarse simultáneamente varios tipos de estas interacciones dependiendo del tipo de polímeros que formen el sistema. Los polímeros que se utilizan para los SDFA se caracterizan por su capacidad para formar puentes de hidrógeno con el agua, de tal manera que las interacciones polímero A- polímero B están en competencia con las interacciones polímero A-agua, polímero B-agua. Si las interacciones polímero-agua son más fuertes que las interacciones polímeropolímero, entonces estas últimas son menos frecuentes. Entonces se for-

TV (6. En general la partición de proteínas en sistemas de dos fases está definida por el coeficiente de partición ~ K. conformación molecular. EXTRACCIÓN man regiones en cada uno de los polímeros que están estadísticamente excluidas de interaccionar.. presión y composición dadas. . Los polímeros que se repelen debido a este efecto se denominan polímeros incompatibles. representan la fase superior y la fase inferior respectivamente. pH. En el caso de los sistemas polímero-sal-agua la segregación de las fases se puede deber al grado de hidratación del grupo éter del PEG.de los componentes como: ¿ = 1.. Un estado de equilibrio se caracteriza por presentar energía de Gibss mínima a una temperatura. Este efecto de regiones excluidas de los polímeros produce la separación de fases en la mayoría de los sistemas de dos fases acuosas polímero-polímero. En un sistema de dos fases acuosas la separación de fases ocurre en aquellas mezclas cuya energía de Gibss es menor cuando el sistema existe como dos fases que cuando permanece como una.22) donde la prima (') y la doble prima (").248 CAPÍTULO 6. bioespecificidad de la proteína. electroquímica.2. 1989).23) . y N es el número total de componentes. fuerza iónica.. tamaño molecular. Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento teórico de la partición o distribución de las proteínas en los sistemas de dos fases acuosas a partir de considerar una serie de factores que afectan la partición de este tipo de soluto en el equilibrio.~ (6. Factores que Afectan al Coeficiente de Partición Los estudios empíricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han mostrado que la partición de proteínas es una función compleja que depende de factores tales como: hidrofobicidad. temperatura y concentración de la proteína (Baskir et a/. El criterio de equilibrio puede ser expresado también en términos de los potenciales químicos //. concentración del buffer.

Esta ecuación es equivalente a la ecuación (6. K° incluye otros factores tales como la solvatación del soluto en las fases. respectivamente. tamaño y conformación. de bioespecificidad. tiene influencia sobre el reparto del biomaterial debido a que altera la composición de las fases y cambia el número de interacciones proteína .25) A continuación se describe el efecto específico de algunos de estos parámetros sobre el fenómeno de partición en dos fases acuosas (Figura 6. Es útil expresar el coeficiente de partición en la forma logarítmica de la ecuación (6.. bioe. éste se puede expresar como el producto de varias contribuciones: Kp = K° • Kdq • Khf • Kbioe • Kíam • Kconf (6. Las moléculas de peso molecular muy grande como el ADN y los virus se reparten casi por completo en una sola fase. ¿am. de tal manera que las proteínas grandes tienden a repartirse menos uniformemente que las proteínas pequeñas (Figura 6. El coeficiente de partición de una proteína en un sistema dextrano/polietilen-glicol se incrementará si el peso molecular del polietilen- . Tamaño de las Biomoléculas.6. entre el soluto y los polímeros que forman las fases. las partículas extremadamente grandes como las células.4). se distribuyen entre la interfase y una de las fases o pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et a/. hidrofóbicas.3). y conf. /i/.Las moléculas pequeñas como los aminoácidos se distribuyen uniformemente entre las fases.50) misma que se puede escribir como: In Kp = ln K° + In Kelq + In Kh¡ + In Kbioe + In Ktam + ln Kconf (6. Debido a la dependencia del coeficiente de partición Kp de los factores arriba mencionados. Con las partículas más grandes la partición no es tan uniforme. respectivamente..24) donde los subíndices: elq.El peso molecular de los polímeros utilizados en los sistemas de dos fases. Peso Molecular de los Polímeros.polímero. indican las contribuciones que sobre el coeficiente de partición tienen las propiedades electroquímicas.4). 1989). FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 249 donde [P]i y [P]2 son las concentraciones de soluto en este caso proteína en las fases 1 y 2. Sin embargo.2.

2. 4. Incrementar el número de cadenas laterales amino. Figura 6. PEG 1.250 CAPÍTULO 6. Todos los derechos reservados. Disminuir el número de cadenas laterales carboxilo. EXTRACCIÓN Características del Sistema: 1. Incrementar el peso molecular del Dextrano. Disminuir el pH del sistema abajo del Pl 3. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Promover interacciones específicas. 3. Copyright ©1991. Se incrementa Kp Disminuye Kp 1. Reducir el peso molecular del PEG. Incrementar el número de cadenas laterales carboxilo. 2. Adaptada de: Huddleston ti a/. Disminuir el número de cadenas laterales amino. Incrementar el pH arriba del Pl 2. Disminuir los residuos hidrofóbicos. Incrementar los residuos hidrofóbicos 2. . 1991. 3. 3.3: Factores que afectan al coeficiente de partición. Reducir el peso molecular del Dextrano. Características de la Proteína de interés. Incrementar el peso molecular del PEG 1.

reservados.05 50 PMxIO" Figura 6. Copyright ©1989. 1989. Todos los derechos .4: Efecto del peso molecular de las biomoléculas en el coeficiente de partición de una enzima.1 0. Fuente: Baskir. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.0- a-Amilasa (bactarial) ABS üsozima (pollo y pavo) Papaína Tripsina a-Quimiotrípsina Transferrina (humana) ft • Galactosidasa (d* EcoiiVM y WL) 0. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 251 20Ovalbumina 1.6.2.

5 : Composición del Sistema 12 % de Oxido de Polietilen Glicol ( OPE ) 1 X de Dextrano ( Dx ) T. 1990). Todos los derechos reservados. Copyright ©1989.252 CAPÍTULO 6. Cuando la proteína está en su pH isoeléctrico. suma de todas las . 10000 20000 30000 40000 Peso Molecular del OPE Figura 6.pH. Inversamente. la. glicol se reduce o el peso molecular del dextrano se incrementa. Carga de la Protema. la proteína incrementa su carga negativa y/o reduce su carga positiva. como se muestra en la Figura 6. Fuente: Baskir et a/. Cuando el pH de la solución cambia desde valores ácidos a básicos.5.. Estos grupos generalmente tienen diferentes valores de pK. la partición de la proteína decrecerá si el peso molecular del polietilen-glicol se incrementa o el peso molecular del dextrano se reduce.5 . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.500 EXTRACCIÓN 0.Muchas proteínas y enzimas contienen un gran número de grupos cargados o que pueden cargarse en solución variando el. 1989. pueden utilizarse polímeros de diferente peso molecular para optimizar la separación de proteínas de diferente tamaño (Albertsson et al. 1.5: Efecto del peso molecular de los polímeros en el coeficiente de partición. Las proteínas con peso molecular elevado son más influenciadas por cambios en el peso molecular de los polímeros que las de peso molecular bajo. Consecuentemente.

1989) . Modelo Empírico de Bronsted. los cambios en el pH pueden inducir también cambios conformacionales en la estructura de la proteína que alteran su partición..Si la concentración de la proteína permanece baja (un orden de magnitud más baja que la concentración del polímero). ésta no afecta significativamente al coeficiente de partición. Las proteínas pueden inclusive formar fases separadas si su concentración es suficientemente alta. quien desarrolló una relación aproximada para describir el efecto del tamaño de la partícula sobre el coeficiente de partición. Sin embargo. Esta diferencia de potencial resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la partición de las biomoléculas cargadas ..26) . Con frecuencia se observa que cuando se agregan sales a un sistema de dos fases en concentraciones entre 100 y 200 mM. a altas concentraciones de proteína es posible que la concentración afecte el coeficiente de partición ya que pueden alterarse significativamente las propiedades del sistema.El primer modelo sobre la partición de partículas en sistemas de dos fases acuosas fue propuesto por Bronsted (Baskir et a/.Además de los efectos del pH mencionados en el párrafo anterior. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 253 cargas es cero. Esta relación es: Kp = exp donde: (6.. El pH de la Solución. Concentración de la Proteína. de los cuales se presentan tres a continuación.2. se crea una distribución de diferencia de potencial entre las fases. En todos los demás pH's la proteína tiene una carga neta.6. Modelos para el Coeficiente de Partición en Sistemas de Dos Fases Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir el coeficiente de partición en un sistema dado.

Modelos Termo dinámicos Generales. a. Zii Carga total sobre la partícula.. A: Área superficial de la partícula.27) donde: /¿?: Potencial químico en el estado estándar. 7: Energía superficial de la partícula en una fase dada. También incluye la diferencia de potencial entre las fases. $: Potencial eléctrico en la fase. . [M/mol]. J-: Constante de Faraday. EXTRACCIÓN M: Peso molecular de la partícula que se particiona.254 CAPÍTULO 6. hidrofobicidad de la partícula y composición iónica del sistema. = ^ -f KT In di -f /^7 -f 2¿. pero no considera la influencia de otros factores sobre el mismo coeficiente. N0: Número de Avogadro. /z.26) muestra que tan sensible puede ser el coeficiente de partición al tamaño de la partícula. (Baskir et al 1989). /c: Constante de Boltzmann T: Temperatura absoluta. A: Constante que expresa tanto las características de las fases como las de la partícula que se particiona. la energía de superficie. el área y la carga.Los modelos termodinámicos para determinar el coeficiente de partición toman en consideración la influencia de varios factores como la carga.: Actividad. (6. El potencial químico se expresa como una función de factores relacionados con la partícula tales como: la concentración. La ecuación (6.

es el coeficiente de fugacidad para la partícula y m t es la concentración molal de la partícula en la fase. A7 es la diferencia en la energía superficial de la partícula en las dos fases y A ^ es la diferencia en la distribución de potencial entre las dos fases. T} 2 . .2.KT In KÍ = A/..6. En el equilibrio los potenciales químicos de las fases son iguales y la ecuación (6..? + «T In ^f + ¿( A7) + '" ~ (6-28) donde A/¿? es la diferencia de potenciales químicos en los estados estándar en las dos fases.-)i (/Oí o como: . Este es un modelo en el cual los potenciales químicos se expresan en términos de la molalidad de los componentes del sistema. la carga de la partícula Z{ y de la diferencia de potencial entre las dos fases A^. de tal manera que la ecuación (6.Otro modelo que puede ser usado para describir el comportamiento de un sistema de dos fases acuosas.A . la fugacidad se aproxima a la unidad.A¿¿.29) en la ecuación anterior la diferencia en los potenciales químicos del estado estándar es una constante. -«T In -—— . fue propuesto por Edmond y Ogston (Clark. En este modelo los potenciales químicos de los: solutos 2 y 3 (polímeros) se escriben como: .27) puede expresarse como: TI '2 A O . FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN En la ecuación anterior la actividad se puede expresar como: 255 donde /.28) puede ser escrita como: z KÍ = A/¿° + A( A 7 ) + ' ° (6. Modelo de Edmond y Ogston. En el caso de una solución infinitamente diluida (cuando no hay interacciones partícula-partícula). 1989).-f /C-Tln —— -f A(¿\~f). -\ (m. de tal manera que en una serie de experientos con una misma partícula los cambios en KÍ son resultado de cambios en la energía superficial de la partícula A7.

«3.3^2) (6. . A su vez los equipos de operación continua pueden ser de contacto por etapas o de contacto diferencial.32) donde MI es el peso molecular del solvente (agua).7). Esta interacción se lleva a cabo en el solvente agua. De acuerdo a la forma en que estos equipos pueden ser operados se dividen en extractores intermitentes y extractores continuos. EXTRACCIÓN (¿2 = (¿2 «2.256 CAPÍTULO 6. Cuando los parámetros de interacción son conocidos las ecuaciones de Edmond y Ogston pueden ser usadas para describir el comportamiento de las fases. 02. //° es el potencial químico para el componente i en el estado estándar. y está dado por: RTMl 1000(m 2 + m3 -f (6.30) (6.3^3) RT(ln m3 + a3)3m3 + «2.3 Equipo de Extracción Existen diferentes tipos de equipos para realizar una operación de extracción (Tabla 6. m¿ es la concentración molal de soluto.2. dos moléculas del polímero 3 y una molécula del polímero 2 con una molécula del polímero 3.3 y «2.31) donde R es la constante de los gases ideales. o por mediciones termodinámicas independientes en los sistemas binarios. Otra característica de los equipos de extracción es la forma en que las fases se separan una vez realizada la extracción.3 son los coeficientes que caracterizan la interacción de dos moléculas del polímero 2.2^2 + «2. respectivamente. El potencial químico del agua se obtiene aplicando la ecuación de GibbsDuhem. lo cual puede realizarse sólo por gravedad o por medio de una fuerza centrífuga. 6. Los parámetros de interacción a^j de este modelo pueden ser determinados ajustando las ecuaciones a datos experimentales de equilibrio.

6. En esta sección se presentan algunos equipos de extracción agrupándolos en: • Extractores intermitentes • Extractores continuos 6.3.7: Clasificación y ejemplos de equipos de extracción. En la Figura 6.6(a) se muestra un mezclador sedimentador típico donde el mezclador o agitador está completamente separado del sedimentador. En la Figura 6. EQUIPO DE EXTRACCIÓN Tabla 6.6(b) se muestra . En la Figura 6. La fase acuosa y la fase orgánica se alimentan al mezclador y las fases mezcladas se separan en el sedimentador.una combinación .6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extracción.3.1 Equipo de Extracción Intermitente En la extracción itermitente o de una etapa la solución que contiene el soluto de interés se mezcla con el solvente y posteriormente las fases se separan. Separación de las fases por: Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Centrifuga Tamaño de gotas Agitación Agitación Gravedad Gravedad Agitación Agitación Agitación Pulsos Deflectores Westfalia y Robatel Podbielniak y Alfa Laval Intermitente Equipo Continuo Etapas múltiples Columnas de contacto diferencial M-S 257 M-S* Aspersor Platos perforados Lecho empacado Aspersión tipo Rushton-Oldshue Discos giratorios Tipo Karr platos y empacadas * M-S Mezclador-Sedimentador En los equipos de extracción el control del tamaño de las gotas de la fase dispersa puede realizarse por medio de agitación mecánica o por pulsaciones.

En general una de las fases se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas y debe existir un tiempo de contacto suficiente para que se realice la extracción. Para obtener una transferencia de masa eficiente con frecuencia se usa un mezclador mecánico que proporciona un contacto íntimo entre las dos fases líquidas. si los líquidos son mezclados ligeramente se formarán gotas . sin embargo. Las gotas pequeñas producen áreas interfaciales grandes que provocan una extracción más rápida. EXTRACCIÓN de mezclador-sedimentador.3. 6. . En el diseño de equipo de etapas múltiples hay un compromiso: Si los dos líquidos son mezclados intensamente pueden formar gotas pequeñas las cuales permitirán una extracción rápida pero una separación lenta.258 CAPÍTULO 6. Cuando la extracción involucra reacciones químicas el tiempo de contacto puede ser muy importante.Equipos continuos de etapas múltiples.2 Equipo de Extracción Continua Esencialmente existen dos tipos de equipos para realizar extracciones en forma continua: . Este dependerá del flujo a ser procesado y de las propiedades físicas de ambos líquidos. pero todas las modalidades involucran extracciones intermitentes repetidas. En la Figura 6. las gotas no deben ser tan pequeñas como para que el tiempo de sedimentación o coalescencia subsecuente resulte demasiado largo.7 se muestra un sistema de este tipo donde el flujo de alimentación y solvente se suministran a contracorriente en una serie de mezcladores sedimentadores.Equipos continuos de contacto diferencial Equipo de Extracción de Etapas Múltiples El equipo utilizado en extracción de etapas múltiples varía ampliamente. Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extracción en etapas múltiples o a contracorriente. El tamaño del mezclador debe dimensionarse para proporcionar suficiente agitación y tiempo de contacto para lograr el equilibrio entre las fases.

3. x a E. . mezclador sedimentador integrado. b). ay a) o R. X. mezclador sedimentador separado. X 0 En . XA E0 .6: Esquema de equipos utilizados en la extracción intermitente: a).6.jfc E0 . x O±D b) Figura 6. EQUIPO DE EXTRACCIÓN 259 .

mismo que lo dispersa hacía arriba en forma de gotas muy pequeñas. \ ) L* Figura 6. Las columnas de aspersión presentan por regla general bajas eficiencias debido al poco .apa 1 Etapa 2 Etapa 3 E. Algunos extractores de etapas múltiples como los Westfalia y los Robatel emplean fuerzas centrífugas para separar las fases durante la extracción. la extracción es lenta. Tanto el líquido pesado como el líquido ligero se pueden introducir dentro de la columna como la fase dispersa. EXTRACCIÓN Et. proporcionan contactos diferenciales donde el mezclado y la sedimentación se suceden en forma continua y simultanea.t. pero la separación más rápida.t.260 CAPÍTULO 6.x ^AT i JL ¿L— U>~ L] ^AJ 1 cJo _ ^AJ 1 A ^ J\ C*0 •A _ñ \ t 'j L] \ \ . En la Figura 6. ¥ . El líquido ligero se coliga o junta en la parte superior y sale.7: Mezcladores sedimentadores conectados a contracorriente en etapas múltiples. Equipo de Extracción Diferencial Las columnas de extracción empacadas y las de aspersión. habrá menos área de contacto. El líquido ligero entra a través de un distribuidor de tovera en el fondo. En algunos casos el líquido pesado se dispersa hacía abajo sobre la fase ligera continua que se va elevando.8 se puede observar que en una columna de aspersión el líquido pesado entra por la parte superior y llena la columna formando la fase continua y sale por el fondo. grandes.

sin embargo esto se ve compensado por la gran mejoría que se tiene en la transferencia de masa. En la Figura 6. Estos empaques promueven la unión de las gotas y la redispersión de las mismas a intervalos frecuentes a lo largo de la columna.10) proporciona un método seguro y eficiente en los procesos de extracción líquido-líquido.EQUIPO DE EXTRACCIÓN salida del líquido ligero 261 coalescenda de la ¡nterfase líquido pesado gotas elevándose líquido ligero tobera de rociado Figura 6. El contacto entre las fases puede mejorarse proporcionando una superficie mayor. misma que puede incrementarse aplicando una pulsación oscilante a los fluidos contenidos en la columna. Las columnas empacadas tienen una eficiencia mayor que las de aspersión.9 se presentan esquemas de tres diferentes tipos de columnas de extracción. Las gotas dispersadas se juntan debajo de cada plato y vuelven . Evidentemente en este tipo de columnas se pierde capacidad debido al espacio que ocupa el empaque.10 muestra una torre de extracción de platos perforados donde se dispersan las gotas del líquido ligero que tienden a elevarse.8: Columna de extracción por aspersión. mezclado y como consecuencia su uso es reducido en la industria. La columna de platos perforados (Figura 6. Esta superficie es proporcionada al rellenar la columna con un empaque como los anillos de Rasching o las sillas de Berl. El esquema de la Figura 6.

x _ñ E. EXTRACCIÓN E. . R.262 CAPÍTULOS. x empacado ET. y Figura 6.~D discos • E0.9: Columnas de extracción: a) Lecho empacado b) Aspersión tipo Rushton-Oldshue c) Discos giratorios.

5.4 Diseño de Equipo de Extracción Esta sección se centra en los aspectos relevantes del diseño de de tres sistemas de interés en bioseparaciones: • Extracción intermitente.4. • Extracción continua • Extracción fraccionaria . a formarse por encima de éste al pasar a través de las perforaciones. 6. Algunos equipos de extracción diferencial utilizan la fuerza centrífuga para el manejo de las fases como el extractor Podbielniak y el extractor Alfa Laval. El líquido pesado fluye hacia abajo de los platos donde se pone en contacto con las gotas y después pasa hacia el plato inferior. Al igual que en las columnas empacadas.10: Sección de una columna de extracción de platos perforados. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 263 Liquido pesado O Elevación de gotas del disolvente ligero O O O •O o _Coalescencia del disolvente Figura 6. la eficiencia de separación en las columnas con platos perforados puede incrementar mediante pulsaciones que promueven la coalisión y dispersión de la fase dispersa.

consiste en poner en contacto íntimo la solución a tratar con el solvente de extracción y formar dos fases. El proceso de extracción en una sola etapa se presenta en la Figura 6. Después de este contacto y una vez que se ha alcanzado el equilibrio.Métodos Analíticos . En este proceso es conveniente que el contacto se realice con un alto grado de turbulencia para obtener altas velocidades de transferencia de masa.. 6.1 Extracción Intermitente La extracción intermitente.4. Existen dos métodos para el cálculo de extractores intermitentes que dependen de la información disponible y de la complejidad de ésta.11: Esquema de un proceso de extracción en una sola etapa. EXTRACCIÓN Solvente E.264 CAPÍTULO 6.11.x Figura 6. las fases deben separarse. también llamada extracción de una sola etapa.Métodos Gráficos . El separador está incluido en la etapa debido a que la extracción del soluto persite en tanto las dos fases se encuentren en contacto y hasta que se alcance el equilibrio. .

esto es. la concentración final del soluto puede sei obtenida en algunos casos en forma analítica mediante el empleo de doí ecuaciones. Esta combinación de ecuaciones conduce a: . El balance de masa para el soluto. En esta ecuación se supone qi E y R son constantes. x es la concentración de solu en el extracto al final de la extracción . La ecuación (6.12 es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (6.33) en la ecuación (6. x0 es la concentración inicial de soluto en el solvente < extracción y generalmente es igual cero. se sustituye el valor de x dado por ecuación (6. referido a la Figura 6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN Método Analítico: Extractores Intermitentes 265 El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. Como generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúar hasta alcanzar el equilibrio. Para encontrar una expresión para calcular la concentración al fin de la extracción o de equilibrio.4. La primera de ellas es una relación de equilibrio para la: soluciones que intervienen en el proceso y la segunda es un balance d< masa para el soluto.6. Cuando la relación de equilibrio es lineal se tiene: x = Ky (6. y K es la constante d equilibrio. la coi centración del soluto que permanece en la alimentación después de extracción.3< donde y¿ es la concentración de soluto en la alimentación o fa: pesada. y es la concentración de soluto en el refinado.33) es la ecuación de una recta que pasa po el origen. La segunda relación es un balance de masa que indica que en ( proceso de extracción: el soluto inicial = al soluto final.34). El valor para y se obtiene manera similar.33 donde x es la concentración del soluto en la fase ligera E] y es 1 concentración del soluto en la fase pesada /?.

266

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

. X0

E. x

«o . XA

ay

Figura 6.12: Esquema para el balance de masa del soluto en extracción intermitente.

x=

Ky,

(6.35)

y=

1 +F

(6.36)

donde F es el factor de extracción y está dado por:
171

KE
R

(6.37)

El factor de extracción reúne dos factores de diseño importantes, la constante de equilibrio y la relación de las fases. Es posible desarrollar una expresión para calcular el rendimiento de la operación o la fración extraída p, definida por:
p=
Ex

(6.38)

misma que puede ser escrita en términos del factor de extracción para dar:
F \ +F

(6.39)

6A. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

267

Consecuentemente la fracción de producto no recuperado es igual a uno menos la fracción extraída. Las expresiones desarrolladas son diferentes en el caso que la extracción se realice de la fase pesada a la ligera. Ejemplo 6.3.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldo de fermentación. En la recuperación de productos de fermentación con frecuencia se emplean extractores agitados. En este caso se ponen en contacto 10 litros de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/1 del producto que quiere extraerse con 1 litro de un solvente orgánico. Si el coeficiente de distribución es 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcule la fracción extraída de producto. Solución: El esquema que representa el sistema de extracción es similar al de la Figura 6.12. El balance de masa para el soluto en este sistema es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex como inicialmente en el solvente de extracción la concentración del producto es cero, el balance de masa del soluto queda como: RoVA = Ry + Ex (a)

combinando la ecuación anterior con la ecuación de equilibrio x = Ky y suponiendo R0 = /?, se obtiene la concentración del soluto en el solvente de extracción en el equilibrio. Esta concentración está dada por:

X

=

KyA

con

F=

KE

sustituyendo los datos del problema se tiene:
=

R

_ 10 /

la concentración x es:

268

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

*AS

T ~™~—

KyA = 20(10 g/l) - 66.6 g/l 1 + F 1+2

y la fracción extraída p es:

Ex P = Ry A

F 1 + F

1+2

= 0.666

después de la extracción el porcentaje del producto en el extracto es de 66.6% y en el refinado es de 33.3%. Si se desea extraer casi todo el producto se deberán realizar más etapas de contacto entre las fases 0 aumentar el volumen del solvente de extracción. Ejemplo 6.4.- Sistema de dos fases acuosas para separar virus. Se emplea un sistema de extracción de dos fases acuosas para separar y concentrar virus de un caldo biológico. El volumen inicial V0 de la solución que contiene los virus es de 3 x 10~3 m3 y el volumen inicial V de la solución de polímeros es de 1 x 10~4 m3. El coeficiente de partición Kp es de 4 x 10~4. Una vez que se mezclan ambas soluciones el volumen R de la fase pesada formada es de 5 x 10~5 m3. a).- Estimar las veces que se concentró la solución o grado de concentración obtenido. b).- El rendimiento de la operación. Solución: a).- El grado de concentración GC puede ser expresado como:

GC =

y
C0

donde C0 es la concentración de partículas en la solución original. Mediante un balance de virus se puede obtener la siguiente expresión:

5.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN combinando ambas expresiones se obtiene:
V y ° xE + yR

269

GC = GC =
donde:
F=

V0

R

Para utilizar la ecuación anterior es necesario calcular primero el valor de E mediante un balance,

entonces,

E = (3 x 1(T3 + 1 x 10~4 - 5 x 10~5) m5 E = 3.05 x 10~3 m3
y el grado de concentración está dado por:
3 x 10~3 m3
ín i n *> 1\ )x(3.05xlO(5 x 10~5 m 3 ) (\ + i 1 . (4xlO- -;v;1U 5—3 - 771 ^ ' \ OXn
4 3

GC =

m

GC = 58.57 b).- El rendimiento de la operación puede expresarse como:

y R p= CV 0 0
combinando la expresión anterior con la del balance de virus se obtiene:

270

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

P = xE + yR
y en términos del grado de concentración:

yR

R
sustituyendo valores,

p = (58.57) 0.976 97.6%

5 x 1Q-5 m3 3 x 10~3 m3

Método Gráfico: Extractores Intermitentes En la solución de problemas de extracción intermitente se emplean con mucha frecuencia métodos gráficos. Estos métodos son útiles en situaciones en las que el equilibrio es complejo y no se ajusta a una relación lineal como la ecuación (6.33). Al igual que el método analítico el método gráfico también depende de dos ecuaciones básicas: una relativa al equilibrio y otra al balance de masa del soluto. La relación de equilibrio establece que la concentración x del soluto en el solvente de extracción después de que las fases se ponen en contacto, es una función que depende de la concentración y del soluto en el refinado,
=
f(y)
(6.40)

Atendiendo al esquema de la Figura 6.12 la ecuación para el balance de masa del soluto es:

R0yA = Ry + Ex
consecuentemente:

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

271

línea de equilibrio -

(*.y)

(* - " o )

Fracción mol de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.13: Extracción intermitente: En la intersección de la línea de operación con la de equilibrio se obtienen las concentraciones que se alcanzan al final de la operación.

(6.41) La ecuación anterior es la de una recta llamada línea de operación cuya pendiente es m = —R/E y cuya ordenada al origen es b — Ry¿/ E Si se grafican los datos de equilibrio (ya sea en forma de una ecuación o de datos tabulados) y la línea de operación como se muestra en la Figura 6.13, en la intersección de las curvas se obtienen los valores de equilibrio y y x.
Ejemplo 6.5.- Extracción de un aminoácido.

La relación de equilibrio entre el tolueno y el agua pura en la extracción de un aminoácido no esencial está dada por:

272

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

En = 4.7 0.006 M

E =4.7 I x =

Ro-1

yA=o

R =1 I

Figura 6.14: Esquema de la extracción de un aminoácido en un sistema intermitente tolueno- agua. Ejemplo 6.5.

*> = (0.001 Estimar la fracción de aminoácido extraída al poner en contacto 4.7 litros de solución de tolueno, con una concentración 0.006 M del aminoácido, con un litro de agua. Solución: El esquema del proceso se presenta en la Figura 6.14: El balance de masa para el aminoácido es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (a)

de tal manera que la expresión de linea de operación está dada por:

y = ~^(x0 - x)
sustituyendo valores se obtiene:
y

p

=4.7(0.006 - x

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

273

0.012 -

(0.006 . 0)

Figura 6.15: Curva de equilibrio y línea de operación para el sistema tolueno- agua. Ejemplo 6.5. En la Figura 6.15 se muestra la curva de equilibrio y la línea de operación para este sistema. En la intersección de estas dos líneas se puede encontrar la concentración y de soluto al final de la extracción. Esta concentración en el equilibrio es:

y = 0.012
la fracción extraída p es:

Ex0 _ (LO /) (0.012 2^ P = ~ (4.7 /) (0.006 2^ P = 0.43

P

=

Ry

6.4.2

Extracción Continua

El tratamiento del diseño de extractores continuos puede dividirse en : - Extracción en etapas múltiples - Extracción diferencial

274

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

E, xn

E. xn-i

E.x2

E.x,

En. Xo

n-1
R.y 3

2
R.y 2

1
R.y,

\

Figura 6.16: Esquema de un proceso de extracción a contracorriente en etapas múltiples.

Extracción en Etapas Múltiples
En la extracción intermitente se usa una sola etapa para transferir el soluto de la fase acuosa a la fase ligera. Para transferir más soluto puede repetirse el contacto mezclando la corriente de salida de refinado con disolvente nuevo. De esta manera se logra un mayor porcentaje de extracción del soluto, sin embargo este procedimiento emplea una mayor cantidad de solvente y da lugar a la formación de corrientes muy diluidas. Para emplear menos solvente y obtener una corriente de extracto de salida más concentrada, generalmente se usa un contacto a contracorriente en etapas múltiples como el que se muestra en la Figura 6.16. En este esquema cada etapa está identificada por un número, iniciando con el número 1 a la derecha. La solución pesada R0 (alimentación) entra a la cascada por el lado izquierdo y el solvente puro o fase ligera E0 entra por la derecha. Las concentraciones con las que sale cada uno de los líquidos de cada etapa son las correspondientes al equilibrio. Por ejemplo, el líquido ligero que deja la primera etapa tiene una concentración de equilibrio Xi. El líquido pesado que deja la segunda etapa tiene una concentración de equilibrio y 2 Dos métodos son comúnmente utilizados para analizar este tipo de operaciones: - El método Analítico

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN - El método Gráfico

275

Método Analítico: Extractores Continuos Multietapas.El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. Debido a que generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúan hasta alcanzar el equilibrio, la concentración final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma analítica, mediante el empleo de dos ecuaciones: una relación de equilibrio y un balance de masa. Cuando el equilibrio puede ser expresado por una relación lineal para la etapa n se tiene: xn = Kyn (6.42)

El balance de masa para el soluto debe realizarse en cada etapa. De acuerdo a la Figura 6.16 dicho balance para la primera etapa es: Ry2 + E0x0 = Ryi + EXl (6.43)

Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las de equilibrio y el solvente está libre de soluto x0 = O, las ecuaciones (6.42) y (6.43) se combinan para obtener: 2/2 = (F + l)i/i (6.44)

como se mencionó anteriormente F — EK/ R es el factor de extracción. Para la segunda etapa el balance de masa es: Ry3 + Exl = Ry2 + Ex¿ (6.45)

y de acuerdo a la relación de equilibrio, x\ = Ky\ y x 2 = K y<¿ de tal manera que:

combinando la ecuación anterior con la ecuación (6.44) se obtiene:

276

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

2/3 = (1 -f F + F2)yi

(6.46)

mediante este procedimiento se puede obtener una expresión para el cálculo de la concentración de soluto en la fase pesada a la salida en función de la concentración a la entrada, el factor de extracción y el número de etapas, de la forma: j/n+i - (1 + F + F2 + ... -f F n ) yi que también puede escribirse como: (6.48) La ecuación (6.48) puede ser utilizada de varias formas: - Si se conoce la concentración de la alimentación yn+i, el factor de extracción F y el número de etapas n, entonces se puede calcular la concentración del soluto a la salida t/i, y por lo tanto la fracción extraída. - Si se conoce la concentración de soluto a la entrada en la corriente de alimentación y la concentración deseada a la salida y el factor de extracción F, entonces se puede calcular el número de etapas necesarias para el proceso de extracción. - Si se conoce la fracción que no es extraída yi/yn+i y el número de etapas, se puede conocer el factor de extracción F; esto permite seleccionar flujos adecuados para E y R. El cálculo de las concentraciones de salida permite estimar el rendimiento o la fracción extraída p, que en este caso está dado por : (6.47)

P

Exn

Ryn+i

combinando la ecuación anterior con las ecuaciones (6.42) y (6.48),

De la ecuación (6.49) se desprende que cuando F es muy grande, p se aproxima a 1. Por otro lado, cuando F tiende a cero también p

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE

EXTRACCIÓN

277

tiende a cero. En el caso particular cuando F es igual a la unidad, se cumple que p = n/(n + 1). Ejemplo 6.6.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldb de fermentación en una extracción por etapas. En una operación de extracción se ponen en contacto 10 l/rnin de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/l del producto que se desea extraer, con un flujo de 1 l/min de un solvente orgánico. Si la constante de equilibrio es de 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcular la fracción extraída de producto en un sistema de extracción de tres etapas.

Solución: De acuerdo a los datos yn+i = 10 g/l; K = 20; R = 10 l/min] E = 1 l/min y n = 3. La fracción extraída puede ser obtenida mediante la ecuación (6.49} y es necesario calcular primero el factor de extracción, entonces:

F =
P —

EK
v

(1 min' (20) -4-) v /

10-4mtn
F = 2

la fracción extraída o recuperada en el solvente de extracción es:

F(Fn - 1)
P =
Fn+l
3

_

1

2(2 - 1) 24 - 1 0.93

Otro camino para resolver el problema no tan directamente, consist en utilizar la ecuación (6.48) para calcular la concentración de soluto

278

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

la salida en el refinado y\ . Conociendo este valor se puede encontrar la fracción no extraída y la fracción extraída. Se tiene entonces:

10

n

g

7-

la concentración de salida de soluto en el refinado es:
10 9/1
15

9/1

/7

la fracción no extraída es igual a la concentracón y\ dividida entre concentración de soluto en la alimentación, de tal manera que:
0.66 g/l —-—77- = 0.066 10 g/l
., , fracción no extraída

y la fracción extraída p es: p = 1 - 0.066 = 0.93 Ejemplo 6.7.- Extracción continua de penicilina.Se extrae penicilina de un caldo de fermentación utilizando isoamilacetato como solvente orgánico en un arreglo tipo cascada a contracorriente. Los flujos de la fase orgánica y de la fase acuosa son E — 10 l/min y R = 100 l/min, respectivamente. El coeficiente de partición de la penicilina a pH=3 es K = 50. Si la concentración de penicilina en la alimentación es de 20 g/l, calcular el número de etapas necesarias para obtener una concentración de 0.1 g/l de penicilina en la corriente de salida. Solución: El número de etapas puede ser calculado mediante la ecuación (6.48) y para lo cual primero es necesario calcular el factor de extracción,

.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

279

o

KE

(50)(10 l/m) 100 l/min F = 5
F

el número de etapas puede obtenerse mediante la expresión: /Fn+l

2/1
20 f

V F
5 n+l

_

0.1 f 5-1 n = 3.15 n = 4

Método Gráfico: Extracción continua de Etapas Múltiples.Al igual que en la extracción intermitente, los métodos gráficos son muy usados en ingeniería en la solución de problemas de extracción poi etapas. Se requieren dos tipos básicos de relaciones: una relación d( equilibrio y un balance de masa. La relación de equilibrio se expresa como:
n

= f(yn)

(6.50;

El balance de masa global para el soluto, es decir en todo el equipo es de la forma:
f H = -j¡(yn+i
R

(6.51

las ecuaciones (6.50) y (6.51) pueden granearse sobre el mismo plan< coordenado para obtener las líneas de equilibrio y operación, respecti vamente. En la Figura 6.17 se muestra una gráfica de este tipo. Cuando interesa calcular del número de etapas n requeridas en un operación de extracción, el procedimiento es el siguiente (Figura 6.17"

280

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Línea de operación Línea de equilibrio

8 2
0)

X)

Alimentación

i

II

o 5

<yA)

Concentración de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.17: Análisis gráfico de una extracción a contracorriente en etapas múltiples.

En x\ se traza una linea horizontal. x — 0). .. . utilizando butil-acetato cor solvente. La constante de equilibrio K de este sistema tiene un val de 57 al pH 3.8. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 281 .6. Solución: Solución gráfica. xn] En este punto la concentración del soluto en el refinado iguala excede la concentración en la alimentación. se traza una línea vertical en 7/1.Se calcula la concentración de soluto en la corriente de la alimentación en la parte final de la cascada t/i.Se localiza sobre la gráfica el punto (y1? x = 0).Una vez localizado el punto (y\. El flujo de la fase acuc R es de 450 l/h y el de la fase orgánica E es de 37 l/h. x\] de la línea de equilibrio. .En la intersección de la linea vertical con la curva de equilibrio se localiza el punto (yi. El número de etapas se determina contando el número de escalón* trazados. x\].Se repite el procedimiento anterior hasta alcanzar el punto (y n +i. .En la intersección de la linea horizontal con la línea de operación s localiza el punto (1/2.. mediante la ecuación (6.5 al que se realiza la extracción.Extracción por etapas de Actinomicina D. Se desea extraer Actinomicina D de un caldo de fermentación q contiene 260 mg/l de este antibiótico.51).Para calcular gráficamente el número de eta es necesario obtener una expresión para la curva de operación media . Calcular el número de etapas necesarias para lograr el 99% de cuperación del antibiótico. Ejemplo 6.4. . Este punto representa la intersección de la línea de operación con el eje de las abscisas. .

1 . para lo cual es necesario calcular primero la concentración de soluto a la salida en el refinado. Una vez obtenidas las curvas se puede estimar el número de etapas mediante el proceso de trazado de escalones sobre la curva.2 yn+l .Dado que la relación de equilibrio es lineal. j J yi = 0. Las curvas resultantes se muestran en la Figura 6.6.l J y en este caso el factor de extracción es: _ (57)(37 l/h) _ ~ 450 l/h ~ de tal manera que: yn+i ^ 0. Se puede estimar que el proceso de extracción se completa en tres etapas. de tal manera que: 2/n+i = -= r.0.69)" +1 .51).6 mg/l la expresión para la curva de operación es: ¡i• \ 450 xn = —(yn+i .1 4. el cálculo también puede realizarse mediante el método analítico por medio de la ecuación (6.2.69 . En este caso es necesario utilizar dos escalas debido al rango tan amplio de variación de las concentraciones. 0) y la pendiente de 57.18.31. Se traza la línea de operación a partir del punto (2.62 [mg/l] la relación de equilibrio para este caso está dada por: Para realizar el cálculo gráfico se traza la curva de equilibrio utilizando el punto (O.01 yn+] = (4.y\) = 12.282 CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN \ la ecuación (6. Solución analítica.01 y n+1 \ F . Dado que se desea recuperar el 99% del soluto esta concentración es: . 0) y la pendiente 12.01 x (260 mg/l) = 2.48)..

6. linea de operación Figura 6. .4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 283 a). lm«a de equilibrio b).8.18: Etapas requeridas en la extracción de actinomicina de Ejemplo 6.

La concentración de soluto a la entrada en la fase ligera E es x0 = O y a la salida es XL. EXTRACCIÓN rearreglando y tomando logaritmos se tiene: In370 = (n + l)ln4.52) donde T/* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto x en la fase ligera. La primera de ellas es una relación de equilibrio similar a las utilizadas en extracción por etapas y está dada por: x = Ky* (6. El soluto se transfiere de una fase a otra a través de un contacto íntimo entre éstas. sin embargo se considera que en el futuro jugará un papel importante en bioseparaciones.8 se requieren tres etapas para esta extracción lo que coincide con el resultado obtenido por el método gráfico. en una altura dada de la columna. El balance de masa que resulta para este proceso a cualquier altura de la columna es: Ry + E(x0) = Ry0 4.53) . el resultado de este proceso es una extracción significativa del soluto deseado. En esta figura se puede observar que la concentración de soluto a la entrada en la fase pesada R es y^. Este tipo de extracción no es usado comunmente para el asilamiento de moléculas biológicas importantes.Ex (6. y a la salida es y0. Extracción Diferencial Cuando el contacto de la fase pesada y la fase ligera se efectúa en forma continua. se dice que la extracción se realiza en forma diferencial.284 CAPÍTULO 6.19. La segunda relación es un balance de masa tomado en la base de la columna como se muestra en la Figura 6. Sin embargo. pero no se llega a alcanzar el equilibrio. El análisis de la extracción diferencial depende de tres relaciones básicas.69 por lo tanto n = 2.

6.4.19: Esquema idealizado de una columna de extracción diferencial. . y en el volumen A A z o "o Figura 6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 285 LT "• Xo i r Concentración x.

El balance de masa en el diferencial de volumen se puede escribir entonces como: O . y el área de contacto es un factor muy importante para lograr una extracción rápida y eficiente. las cuales no están en equilibrio.R(y*+*z . dz (6.rA&z (6. La velocidad de transferencia r es proporcional al área superficial de las gotas por unidad de volumen.286 CAPÍTULO 6.56) En la extracción diferencial una fase se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas. la ecuación (6. La linea de operación del proceso está dada por la expresión ( 6.54 ). La velocidad de transferencia /• también es proporcional .54) donde x y y son las concentraciones de soluto en la posición z.yz) .55) se puede escribir como: ^-.y0) (6. Debido a que no hay producción de soluto el término correspondiente también es nulo. En la Figura 6.55) si se divide la ecuación anterior entre AAz y se toma el límite cuando Az —* O. donde r es la velocidad de transferencia volumétrica. La tercera relación es un balance de masa del soluto que expresa la velocidad con que éste se transfiere de la fase pesada a la fase ligera.19 se muestra el esquema para el balance de masa en este diferencial de volumen y que se expresa en palabras como: Acumulación de soluto en fase R = Entrada de soluto —Salida de soluto -^-Producción — Transferencia Este balance puede ser simplificado considerando que la acumulación es nula. Este balance se realiza en un diferencial de volumen AV = AAz. La velocidad de transferencia de soluto de la fase R a la fase E está dada por rA Az. EXTRACCIÓN que también puede ser escrito como: /? x = —(y .

52) se obtiene la expresión. densidad y flujo.57). y* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto en la fase ligera x. La longitud del extractor está dada por: rL L = I y de acuerdo a la ecuación (6.57) donde a es el área superficial de contacto por unidad de volumen. .4. La tercera relación requerida para el análisis de la extracción diferencial se obtiene combinando las ecuaciones (6.0. Esto permite calcular la longitud del extractor diferencial utilizando para ello laí ecuaciones (6.58) : dz L= R fyL __dl dy íyL kaA Jy0 y x ~K mediante la ecuación (6.58) está en función del diferencial dz.f< . á dy (y . Esta depende de las propiedades físicas de los fluidos en contacto tales como viscosidad. La constante k tiene dimensiones de velocidad.54).58) Una vez obtenidas estas tres relaciones se puede describir como se relacionan entre si para obtener una ecuación de diseño. De acuerdo a lo anterior r se puede escribir como: r = ka(y — y*) (6.»*) .56) y (6.52) y (6. y k es una constante de velocidad llamada coeficiente de transferencia de masa. (6. por lo tanto: L= R dy (y . DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 287 a que tan lejos está la concentración y del equilibrio. La ecuación (6.

my .54) se obtiene.y0 fyL dy dado que F = EK/R.9.Separación de una mezcla racémica de leucina. Ejemplo 6.59) que aparece dentro de los paréntesis cuadrados se le llama en ingeniería "altura de una unidad de transferencia" HTU (de sus siglas en inglés).(y .59) se puede escribir como: L = (HTU}{NTU] (6.60) es la base para el diseño de un proceso de extracción diferencial líquido-líquido. » * * ~ » - " ' Al término de la ecuación (6.. EXTRACCIÓN R ( ^ x = -j.60) La ecuación (6.y0} entonces: L= R fyL dy y . la ecuación anterior se puede escribir como: L= R F kaA(F-l) Jy0 y + JÍT (6 59) finalmente integrando se obtiene: R ka A.288 de la ecuación (6. 1992). Los módulos de fibras huecas constituyen una alternativa atractiva respecto aj uso de equipos de extracción convencional debido su alta relación área/volumen (Ding et a/. La expresión (6. CAPÍTULO 6. Se utiliza una unidad de fibras huecas operando a contracorriente para separar 1-leucina de d-Ieucina bajo las siguientes condiciones: . tiene unidades de longitud y es una medida de la eficiencia del equipo. El término que aparece entre llaves es una cantidad adimensional llamado "número de unidades de transferencia" NTU ( de sus siglas en inglés) que permite medir el grado de dificultad de la extracción. Valores grandes de NTU significan mayor dificultad en la extracción que valores pequeños.

Solución: Se requiere utilizar la ecuación (6.8 cm3/h 0.331 d-leucina Los microporos de las fibras se rellenaron con gel de polivinil-alcoho de tal manera que los solutos difunden a través de los poros sin que la¡ fases se mezclen.2 cm3/h 76.4. si bajo las condiciones enunciadas la recuperación de d-leucin. ExL Ryi . DISEÑO DE EQUIPO DE Fase extractóla ligera Fase acuosa Longitud de la unidad Diámetro de las fibras Número de fibras Flujo de la fase acuosa R Flujo de la fase orgánica E Coeficiente de partición K EXTRACCIÓN 289 N-n-dodecil-1-hidroxiprolina en octanol Agua (conteniendo 1-leucina y d-leucina) 64 cm 240 /¿m 96 19.97 %. en la fase ligera fue del 99. por la expresión: Ex¡ P = ~Ryi otra expresión necesaria es la del balance global del soluto que es: ExL = R(yL .6.y0) combinando las dos ecuaciones anteriores.59) para estimar el parámetro k y expresarla en términos de la recuperación p que en este caso está dad. Estimar el coeficiente de transferencia de masa volumétrico ka de sistema.

)(4.324 . .59) puede expresarse como: L L- [kaA\{F-\ \VL(1-P) o bien como: L= ~ R ' kaA La expresión anterior permite calcular fca. para lo cual es necesario obtener primero el área de flujo A.34 x 10~2 cm2 también es necesario calcular el factor de extracción F.0.290 CAPÍTULO 6. -' 3 ~^ i / / i _ 0. (96) ÍTT x (240 x 10~6 m)' l A = 4 A = 4.324 el coeficiente de transferencia de masa está dado por: 10 9 cm3 /i /i 3600 5 2 2 £ _ 1 i or.8 F —_ 19.331 x 76. R 0.1 ka \\ . que es la suma del área transversal de las 96 fibras.2 2£Í _ F = 1.43 x 10~ C77i ) 1.9997 \ 1.9997^ = 526 x 10 Un método simplificado para el diseño de columnas considera a la columna formada por un conjunto de platos teóricos o etapas ideales..324 \ (64 c7/?. EXTRACCIÓN en base a lo anterior la ecuación (6.

.4.0. Este extractor funciona como una columna de platos perforados enrollada sobre un eje giratorio que favorece el flujo a contracorriente de las fases. XL = TT (y.5 moles de solvente/min 10 % Calcular: a).3 x 1(T4 moles de . Este tratamiento da origen al concepto de altura equivalente a un plato teórico HETP (de sus siglas en inglés). DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 291 El número de platos teóricos N de una columna de contacto diferencial se calcula mediante los métodos empleados para la extracción continua de etapas múltiples.L ~ yo) . La extracción de penicilina a partir de una fase acuosa mediante una fase orgánica debe realizarse a pH ácido.10..54).El número de etapas teóricas de la operación. Se cuenta con los siguientes datos de operación de un extractor tipo Podbielniak: Coeficiente de partición Conc.Extracción diferencial de penicilina. Esto puede lograrse en un extractor diferencial centrífugo tipo Podbielniak. penicilina en el solvente Flujo de alimentación Flujo de extracto Pérdidas de penicilina O 70 moles de agua/min 3. Solución: a). 3. Es recomendable que esta extracción se realice en un tiempo corto debido a que la penicilina es inestable a pH ácido.La fracción mol de penicilina en el extracto de salida... b). P moles de agua enicilina Conc.La fracción de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante la ecuación (6.61) 25 (fracción libre soluto). de penicilina a la entrada r (6. de tal manera que: L = (HETP)(N) Ejemplo 6.

48) que en este caso se puede escribir como: Vr. F = KE R mol 7fl mo min F = 1. Craig como . Este proceso de extracción también es conocido como extracción Craig (debido a que fue desarrollado inicialmente por L. fase pesada R pura.6 6.25 entonces el cálculo del número de etapas mediante la ecuación (6. se pone en contacto con una serie de tubos que contienen originalmente.El número de etapas teóricas puede ser calculado mediante la ecuación (6.1 = n = 4. EXTRACCIÓN [3.94 x 10 _3 moles de penicilina moles de solvente b).4 )] gg o c mol min xL = 5.4 -(0. El resultado de este proceso es la separación de los distintos solutos contenidos en el solvente E.C. F -I se requiere calcular el factor de extracción..25.3xlO.1 0.4.1)(3.3 Extracción Fraccionaria La extracción fraccionaria es una técnica de separación en la cual una fase ligera E que contiene varios solutos.3xlO.48) modificada es: 1.292 70 CAPÍTULO 6.

Se agitan los tubos 1 y 2 hasta alcanzar el equilibrio. . El fundamento se muestra en la Figura 6.Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. .0.Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. éstos pueden separarse entre si por medio de la extracción fraccionaria. se transfiere al tubo 2. . el resultado es una distribución del soluto A entre las fases E y R en cantidades iguales.4.5.Inicialmente el soluto A (64 unidades) se encuentra disuelto en un volumen de fase ligera E y se localiza en el tubo 1 junto con un volumen de fase pesada R. donde cada fase en ambos tubos contiene 16 unidades de soluto A. .El tubo 1 se agita hasta alcanzar el equilibrio. La extracción fraccionaria consiste de repartos repetidos de una mezcla de solutos entre dos disolventes inmiscibles.El solvente E de la capa superior del tubo 1.Se repite el proceso las veces que sea necesario. donde un soluto A que posee un coeficiente de partición entre los disolventes E y R dado por: KP(A) = í± = 1 yA es extraído por este proceso de la siguiente forma: . . DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 293 extracción a contracorriente) o como extracción fraccionaria con una fase estacionaria. . Cuando se tiene un solvente conteniendo varios solutos que poseen diferentes coeficientes de partición. .Inicialmente los tubos del 2 al 7 contienen volúmenes iguales de disolvente puro R.20 (a).Se separa la fase ligera de los tubos y se añade al siguiente de la derecha. La extracción fraccionaria se fundamenta en la diferencia del coeficiente de partición de los solutos. es decir 32 unidades en cada una. . puesto que el coeficiente de distribución KP(Á] = 1. .

b) Gráfica para cada tubo y varios solutos.294 CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN í Disolvente E Tubo Disolvente R 1 2 3 4 5 6 DDDnn IlaaaaD DDnnHHE nnnn nnn mnnn nn 1 DD n ri no] fio n 2 5 [ M O l [10 H0Bülll3 Total y Tubo 1 6 15 20 15 6 1 1 2 3 4 5 6 7 20 - 3 4 5 Número de tubo Figura 6.20: Extracción de Craig: a) Esquema del principio de extracción fraccionaria con una fase móvil. .

6. se puede ver en la gráfica de la Figura 6.21.20 muestra los resultados de siete transferencias. posee un coeficiente de partición. la mezcla de solutos A. se emplean 100 o más etapas de distribución para separar mezclas de aminoácidos o de proteínas.20 (b) la distribución de los solutos B y C en concentraciones arbitrarias de 64 unidades cada uno. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 295 El esquema de la Figura 6.4. en la extracción fraccionaria el soluto desarrolla un perfil d concentraciones distribuido a través de todos los tubos. Comunmente en la práctica real de laboratorio. KP(C) = — = 3. mayor es 1< cantidad de soluto desplazada en cada transferencia.0 ye La figura indica que a mayor coeficiente de partición Kp. ácidos nucleicos.33 y el soluto C.20 (b). en cada uno de los siete tubos. La cantidad total de soluto A. . B y C se separará por complet< en tres picos después de un número determinado de transferencias. lípidos y aminoáci dos. lo cual no s presenta en otro tipo de procesos de extracción. El soluto B. también se muestra en la Figura 6. Este principio también sirve de base para las operaciones croma tográficas que se revisan posteriormente. KP(B) = — = 0. Otra forma de repre sentar la extracción fraccionaria es mediante el esquema que se muestr en la Figura 6. Con el fin de comparar la forma en que se distribuyen varios solutos con diferente coeficiente de partición. La extracción fraccionaria con una fase móvil es de aplicación ge neral y puede emplearse como técnica de bioseparación para diferente tipos de solutos como: proteínas. Perfil de Concentración A diferencia de los procesos de extracción vistos en las secciones an tenores. Debido a que cad< soluto se mueve independientemente del otro de acuerdo a su coeficient< de partición.

. P -•': q w:.296 CAPÍTULO 6. pq P2 P2 q2 pq pq pq q2 Equilibrio Transferencia 3 Agitación Equilibrio Transferencia 2pq q3 P2q q3 3pq3 pq3 P 3q 3pq3 J J J J J 4pq 3 Figura 6. EXTRACCIÓN Transferencia 0 Agitación Equilibrio Transferencia 1 Agitación Equilibrio Transferencia 2 Agitación 100 Zmí • q ::.21: Representación esquemática de la distribución de la concentración de un soluto en la extración fraccionaria con una fase móvil.

Aislamiento de ácido quenodeoxicolico.P ) Este perfil tiene un máximo cuando r = np.21 se muestra la distribución de soluto en cada tubo después que se realiza la transferencia y se alcanza el equilibrio. La fase pesada es agua y la fas ligera es n-butanol.62) donde: F= EK r= 1.63 Ejemplo 6.3.2. 1 (6.n+1 Cuando el número de transferencias n es muy grande la ecuaciór (6.La concentración de soluto en dicho tubo.62) se aproxima a una distribución gausiana y se tiene que: (r — np)' exp -: ' v > ' [2*np(l-p)]l»~"f\ 2np(l. Una vez que se realizan las 400 transferencias. Se muestra que al final de la cuarta transferencia. (en ambas fases) depués de las n transferencias está dado por: r!(n — r)! pr+l(l-P)n-r (6.. la proporción de las fases se ajusta de tal maner que el factor de extracción F sea igual a uno. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 297 En la Figura 6. la distribución de la concentración en los tubos sigue una forma binomial. b). determinar: a). . El ácido biliar quenodeoxicolico es aislado mediante una extracció de Craig usando 400 transferencias.. cuando la recuperación en cada etapa es p...11.. Cuando la extracción fraccionaria se realiza con n transferencias la fracción / de soluto original que se encuentra en el tubo r.El número de tubo de máxima concentración.4..

63) la fracción de soluto / tiene un máximo cuando r = np.47) por: /(r.La fracción de soluto en el tubo 200 después de 400 transferencias está dada de acuerdo a la ecuación (6.04 esto significa que solamente el 4% de la concentración de soluto original está presente en el tubo de máxima concentración después de 400 transferencias.400)-0. . EXTRACCIÓN a). En el caso de productos como las proteínas se utilizan sistemas de dos fases acuosas inmiscibles que permiten el manejo de estos productos en forma más apropiada.298 Solución: CAPÍTULO 6. El tubo que tiene la concentración máxima de soluto es: r = np = 400 = 200 b).n) = /(200.400)= [27r(400)(0.5 Sumario La extracción es una operación que se emplea para concentrar solutos de interés a partir de caldos biológicos. 6. Existe una gran variedad de equipos para realizar la operación de extracción y ésta puede realizarse en forma intermitente o continua. En la extracción se emplean diversos solventes que pueden ser seleccionados combinando criterios establecidos y la teoría que se dispone. ya que en este punto el valor de la exponencial es máximo e igual a uno..5)] 1 /2 /(200. Los métodos dé diseño de los extractores pueden ser gráficos o analíticos y están basados en relaciones de equilibrio y balances de masa.-De acuerdo a la ecuación (6.5)(0. Se basa en la diferencia de solubilidad de los solutos entre dos fases: el caldo biológico y el solvente de extracción.

065 620 7.6.? b).01 M presenta una disociación del 4 % a 25 °C..Resp.¿Qué sistema recominda a para realizar la extracción. se mezcla con un volumen V de una solución que contiene dos polímeros dando origen a dos fases acuosas inmiscibles (E -f R) entre las cuales se reparte el soluto. se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de partición intrínseco es igual para ambas especies. c). a).8.Resp.En la separación de Ajmalicina de pKa = 6.... en un sistema de dos fases acuosas inmiscibles en el cual las enzimas C y D presentan coeficientes de partición de KpC = 0. PROBLEMAS 299 6. . b). b). 4...Un volumen V0 de solución con una concentración C0 del soluto de interés. R y Kp.. pH 4 2 6 8 10 12 (3 31.465 21.4.621 31. 6. 6.Estimar la proporción E/R para que la masa de C en la fase ligera E sea igual a la masa de D en la fase pesada/?. dos alcaloides vegetales de estructura muy semejante.3 1.2. 8.Calcular el valor de Kp/Ki para ambas especies a los pH de 2.77 6. En el caso que el soluto se distribuya preferentemente en la fase superior £".011.. 10 y 12. expresar el grado de concentración (GC) y el rendimiento (p) en función de V0.3 y Serpentina de pKa = 10.5 y KPD = 0.6.1 6. 4.Calcular su pKa b).. 6..3.Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2. 10 y 12. 4. respectivamente.6 Problemas 6.1.Se desea separar una mezcla que contiene igual cantidad de masa de dos enzimas.Una solución de ácido acético al 0. a). a).Calcular su constante de disociación... E. 8.

El coeficiente de partición de la estreptomicina en el sistema a un pH de 4 es de 40..Resp. 7 l/min 6. se muestran en la Tabla siguiente: .. 3 y 10 etapas... la longitud de la columna está dada por: Ka A F .4 % y 87 % 6.6. 96.Demostrar que en una extracción diferencial con yi. Estimar el flujo de fase ligera E para reducir la concentración de estreptomicina en la solución de 10 a 0.resp. se emplea como fase extractiva aceite de jojoba sulfurado (acomplejante de Hg II) disuelto en queroseno.. 1 etapa: 5 g/l. = O y con extracción de soluto de la fase E a la fase /?. en el cual el factor de extracción empleado es igual a 3.¿Cuántas etapas se recomiendan para realizar esta extracción. Resp. Los datos obtenidos en cinco etapas de extracción intermitente utilizando extractante fresco (20 g/l de aceite sulfurado de jojoba) en cada una de ellas. b).Una solución que contiene 20 g/l de estreptomicina se procesa en un sistema continuo de etapas múltiples.. b).En el desarrollo de un proceso (Wisniak et al .Estimar el rendimiento y la pureza de la extracción de la enzima (7... a).5. si la relación E/R es la determinada en a).Se extrae estreptomicina de un caldo de cultivo utilizando un solvente orgánico.8. 6. El flujo de la fase pesada R es de 150 l/min. 1990) para la eliminación de mercurio(II) de corrientes industriales de desecho..2 g/l. en un sistema de extracción a contracorriente de 5 etapas.7.300 CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN b). 2.Calcular la concentración de estreptomicina en el refinado a la salida en los casos que el sistema conste de 1. El coeficiente de partición del Hg(IÍ) en el sistema agua-aceite de jojoba (queroseno) varía directamente con la concentración de jojoba en el queroceno e inversamente con la concentración inicial de Hg(II) en la fase acuosa.1 1 in x0.Ky0 6.? a).

Estimar la cantidad de fase orgánica necesaria para procesar un litro de solución acuosa en una etapa y obtener la misma eficiencia que la alcanzada en las cinco etapas..60 2..09 Coeficiente de partición 301 Etapa 1 2 3 4 5 KP 6.9.82 % c).005 0.00 0. Respuestas para etapa 3 a)..99.4 54.63 6..PROBLEMAS Fase acuosa ppm de Hg(II) Final Inicial 1091.090 2. La viscosidad de la fase dispersé es de 24 x 10~3 Kg/m .499.Calcular la relación de fase acuosa a fase orgánica empleada en cada etapa (R/E)..Na^SO^ para extrae] amiloglucosidasa de la fase ligera dispersa (PEG 4000) hacia la fase continua (Na^SO^}.0 100..89. e). La enzima presenta un coeficiente de partición er el sistema de 0.En una columna empacada con anillos rashing se utiliza ur sistema de dos fases inmiscibles PEG 4000 . c).s..00 146..8 % b).. b).000 0.0345 (Patil et a/.Calcular la cantidad de fase orgánica por litro de fase acuosa utilizada en cada etapa y la cantidad total para las cinco etapas.400 146.En base a los resultados anteriores que proceso se recomienda si el límite tolerable de Hg(II) es de 0.000.005 ppm. f)..Calcular la eficiencia de recuperación de cada etapa.6 555. La resistencia a la transferencia de masa se localiza en la fase ligen dispersa y puede ser caracterizada mediante el coeficiente de transfe rencia de masa dado por: ka = 6 x ID ' donde: 7 I . d).40 19.600 19.Calcular la eficiencia de recuperación global al final de cada etapa. 1991).0 12.0 a).

¿Que flujo R recomienda a para esta operación? a).. para producir una disminución del 20 % de la concentración de enzima de la fase ligera.302 CAPÍTULO 6. ^: Viscosidad de la fase dispersa.Obtener una gráfica de la longitud necesaria de la columna en función de R para las condiciones de extracción anteriores. alimentada con un flujo de 985 mm3/s de fase dispersa y 68 mm3/s de fase pesada.¿Cuál de los 9 sistemas recomienda? 6.. d).10. EXTRACCIÓN v: Velocidad superficial de la fase dispersa.Las proteínas pueden ser extraídas sin ser desnaturalizadas con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol OT. [Kg/m — s].E/R = 1 y número de transferencias de 30.E/R = 0. en los siguientes casos: a).En un sistema de extracción fraccionaria tipo Craig los componentes B y C de una mezcla presentan coeficientes de partición de KPB = 0. [s~1]..11. y posteriormente desorberse a un pH diferente. respectivamente. c). Se está estudiando una solución acuosa que contiene 0. ka: Coeficiente de transferencia de masa. 60 y 90.33 y KPC — 3.Resp. Obtener el perfil de concentración de cada uno de los solutos a lo largo de los tubos. b)..Determinar la longitud necesaria de una columna de 56 mrr de diámetro interno. 1053 mm 6. 60 y 90.. cuya relación de equilibrio está dada por: x = 2. c). Debido a que la cantidad de proteína solubilizada depende fuertemente del pH.[m/s]... a)..9?/* donde x es la concentración de proteína en la fase orgánica y y* es la concentración de equilibrio en la fase acuosa. La relación volumétrica ..2 y número de transferencias 30. 60 y 90. Las proteínas se solubilizan dentro de las micelas que forma el detergente.0..E/R = 5 y número de transferencias de 30. b).2% en volumen de proteína. las proteínas pueden ser extraídas con el solvente orgánico a un pH dado cercano al punto isoeléctrico.

í . Calcular la concentración del refinado a la salida y la fracción extraída cuando se utiliza una columna de extracción diferencial de 2. y = 0. en la cual el HTU (basado en la concentración acuosa) es 0. PROBLEMAS 303 entre las fases es de 6.8 litros de solución orgánica.6.04 p = O. Resp.6.0 m.85 m.8 litros de solución acuosa por cada 3.

(Ed. 1989. 1988.. AIChE J. Extractive bioconversions in aqueous two-phase systems.. Racemic leucine separation by hollow-fiber extraction. Asenjo J. W.A.B. Ding.. 381-388. 541 . M. K.B. Marcel Dekker Inc. M. Baskir. Johansson. EXTRACCIÓN 6. of Chem. Clark. (Eds. K. 173-188. y Rajni. 270-292. Biotechnology and Bioengineering. G. y Ling. J. AIChE J. Mattiasson. T. Enfors. W. Mattiasson. y Tjerneld.. y Hudson.. L. 1493-1498. y Cussler E. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. T. Cussler.7. Carr.A. Suter. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. J. K.. Enzime mass transfer coefficient in aqueos tvvo phase system using packed extraction column. 1992. U. Diamond. T.). Kohler. N. Protein partitioning in two . F. A. J.B. 99-143. M. Aqueous two-phase separations. Flanagan. The molecular basis of partitioning in aqueous two-phase systems. Mattiasson.S. B.7 Bibliografía Albertsson. . Thermodynamics of protein partitioning in aqueous two phase systems. Veide.phase aqueous polymer systems. En: Extractive Bioconversions. Huddleston. H.).J. E. Patil.I. y Holst. Hsu. (Eds. Ellis Horwood Limited. Hatton. y Hu.L. 34. Marcel Dekker Inc. A. 287-319. Protein partitioning in PEG/Dextran aqueous two . Eng.M. New York. New York. 9. W. En: Separations for Biotechnology. En: Separation Processes in Biotechnology. New York.. Sawant.R.W. Jafarabad. A.10. Verral. P. Extraction in aqueous two-phase systems for biotechnology. 69. 5. New York.A. John Wiley & Sons. S. 1991. Shuler. 1989. y Joshi J.558 Belter.. 147-181. P. B. A. 1987.. O.. (Ed. 38. 1991. T. D. 1017-1024.).phase systems. S.). 1990. R. 1990.304 CAPÍTULO 6.G.L. New York. TibTech. B. 36. The Canadian J. y Lyddiatt. 548-556.. J. 1991.

1990. G. J. Ind.. Chem. -• • - . Extraction of mercury(II) with sulfurized jojoba oil. 29.7.6.. Res. D. Eng. Schorr. Zcovsky. y Belter S. BIBLIOGRAFÍA 305 Wisniak. 1907-1914.

Una vez concluida la adsorción es necesarií lavar la columna con una solución que no provoque la desorción de soluto de interés. La concentración de uno o varios solutos de un caldo por medio d( la operación de adsorción requiere cuatro pasos (Figura 7. 307 . Es importante resaltar que el análisis de las etapas de adsorción lavado y elución. operación conocida com« elución. es análogo. Al efectuarse la ad sorción el soluto se une preferentemente a la superficie del adsorbent< respecto a otros solutos. Finalmente se efectúa la recuperación del soluto uti lizando un fluido que favorezca la desorción.Capítulo 7 Adsorción. Primen el adsorbente y la solución se ponen en contacto.1). En este capítulo sólo se revisa lo referente la etapa de adsorción por considerarse que los principios aquí expuesto pueden extenderse al análisis de las otras etapas. 7. Debidc a la naturaleza de estas fuerzas el fenómeno es fácilmente reversible La adsorción es esencialmente un fenómeno de superficie y debe distinguirse de la absorción la cual implica la penetración de una sustancia en el cuerpo de otra.1 Introducción La adsorción es una de las operaciones más utilizadas en la etapa de concentración de caldos acuosos diluidos. Mediante la adsorción las moléculas de un soluto se concentran en una superficie sólida por la acción de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el sólido.

ADSORCIÓN.1: Etapas de la adsorción. Copyright ©1990. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Adsorción e Lavado de impurezas Elución de soluto Figura 7. Todos los derechos reservados. 1990. . Fuente: Clonis.308 CAPÍTULO 7.

. etc. las curvas de equilibrio de los sistemas llamadas isotei mas de adsorción y los aspectos básicos de la cinética de la adsorciór En la sección 7. o simplemente para la obtención de datos experimentaleí La formulación de algunos de estos modelos requiere: .3 se describen los principales equipos' utilizados en la operaciones de adsorción y en la sección 7. • Los tipos de adsorbentes.2 Fundamentos Las operaciones de adsorción son utilizadas en la obtención de varié tipos de productos biotecnológicos como aminoácidos. paralelo.Los balances de masa y energía del sistema de adsorción específic (intermitente.2 de este capítulo se presentan los fundamentos d la operación de adsorción. v taminas y proteínas. Debido a lo anterior.El establecimiento de la rapidez de la adsorción con respecto a lo fenómenos difusivos y cinéticos de superficie. como la química de la adsorción. FUNDAMENTOS 30 En el análisis de la operación de adsorción. al igual que en otra operaciones de transferencia de masa. antibióticos. 7. .El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacida de adsorción de los sistemas.Las condiciones iniciales y de frontera del sistema. los tipo de adsorbentes. continuo. se utilizan modelos para el diseñe análisis de alternativas (columnas en serie vs. .4 se presentan los principie para el diseño de tales equipos.7. serie. cada vez existe una maye necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operació (principalmente en el contexto del procesamiento de caldos biológicos de los cuales se pueden destacar cuatro: • Los tipos de adsorción según el tipo de interacción soluto-adsoí bente. En la sección 7. columnas en paralelo) optimización. .2.).

En este proceso de selección los principales parámetros a considerar son las propiedades físicas del adsorbente.2): . forma de la partícula y tamaño.Hidrofóbica . es de fundamental importancia la capacidad de adsorción del sólido. el adsorbente . La adsorción por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el adsorbente y el soluto. se pueden distinguir cuatro tipos básicos de adsorción (Figura 7. Actualmente se utilizan:diferentes tipos de adsorbentes en la operación de adsorción. tales como: resistencia mecánica.2 Tipos de Adsorbentes En el establecimiento de un sistema de adsorción es necesario seleccionar cuidadosamente el tipo de adsorbente que se va a utilizar. • La cinética de la adsorción. En el caso de la adsorción física.Física . área por unidad de volumen. ADSORCIÓN. 7.Por afinidad En la adsorción física las fuerzas de atracción entre el soluto y el adsorbente son de tipo London-van Der Waals. CAPÍTULO 7. porosidad interna y del lecho.2. La adsorción hidrofóbica se produce por interacciones entre regiones hidrofóbicas del soluto y el adsorbente.310 • Las relaciones de equilibrio. 7.Iónica .1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente De acuerdo al tipo de interacción del soluto con el adsorbente. En la adsorción iónica la diferencia de cargas entre el adsorbente y el soluto genera atracciones electrostáticas más fuertes y selectivas. lo que caracteriza a este tipo de adsorción como altamente selectiva. Asimismo.2. la cual está fuertemente influida por su carga y su relativa hidrofobicidad.

7.2: Tipos de adsorción. FUNDAMENTOS 311 interacciones van der Waals interacciones electrostáticas adsorbente /. a) Física b) Iónica c) Hidrofóbica d) Afinidad. (a) (b) hidrofcibica adsorbente Figura 7.2. .

5). Los adsorbentes iónicos sintéticos están formados por matrices de polímeros unidos lateralmente. En la Tabla 7. ADSORCIÓN. En la adsorción por afinidad el adsorbente consta de dos partes. Las resinas de estireno-divinilbenceno catiónicas se producen en un paso por acción de un ácido sobre el grupo'benceno.1 se presentan algunas características de estas matrices. y en menor grado la silica gel (Figura 7. Las resinas basadas en esteres acrílicos tienden a ser más efectivas para remover solutos polares de solventes no polares.3: Adsorbentes físicos. También son utilizadas como adsorbentes resinas sintéticas. /?\ A /K /N Carbón activado Sílíca gel Figura 7. se efectúa una animación. dextrano y agarosa (Figura 7. poliacrilamida (o derivados). se produce una cloro-metilación del benceno.3). El ligando se une a la matriz por medio de un brazo que evita impedimentos estéricos en un determinado arreglo (Figura 7. Las matrices utilizadas en la adsorción por afinidad son fabricadas de: celulosa. el soporte o matriz y el ligando. A la matriz se le unen grupos funcionales que le dan la capacidad de intercambio iónico. . más utilizado en bioseparaciones es el carbón activado (vegetal). Los inorgánicos como las zeolitas son poco utilizados. Las amónicas se producen en dos pasos: Primeramente. Los adsorbentes utilizados en intercambio iónico pueden ser inorgánicos o sintéticos (Figura 7.4). En el segundo paso.312 CAPÍTULO 7. Las resinas no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorción de solutos no polares a partir de solventes polares. Las matrices de celulosa activada también son muy utilizadas para adsorción por intercambio iónico.6). celulosa modificada.

H* I Aminación N (CH3)3 N (CH3)2 Resina anión ica CH3 CH2N .4: Continuación.CHCr CH. Base débil Figura 7.7.CH3Cr CHN . -CH-CH. FUNDAMENTOS 313 A A I Zeolitas /\ /\ Figura 7.- CH-CH. b) Adsorbentes de intercambio iónico derivados del estireno-divinil benceno.. .4: Tipos de adsorbentes de intercambio iónico: a) Adsorbentes inorgánicos.- i H2S04 Clorometilación I Resina catiónica SO..2. -CH-CH.

N<í. derivados de celulosa c) Adsorbentes de intercambio iónico A. ADSORCIÓN. Todos los derechos reservados.. ^. Copyright ©1988. CH. >. CHjOH -O OH °~VOH OH OH x^ O_ CHoOH CH2OR R = -PO 3 H 2 -SO2OCH2CH2NH2 . v xá. . 1988. ^.. x «.4: Continuación. v N¿. «. v Nc«. Reproducida con el permiso de Academic Press. «.CH2COOH -CH2CH2NR2 -CH 2 CH 2 NR 3 *X' -C-CH 2 -CH 2 -COOH Ó Figura 7.5: Adsorción por afinidad. a) Soporte de sílice b) ligando fijo c) ligando móvil parte hidrofóbica d) ligando móvil parte hidrofílica e) piridina f) protema Fuente: Torres et al. Y NcHr^"LP Figura 7.314 CAPÍTULO 7.txc«..NCÍ¡.

7. Copyright ©1985. Fuente: Yarmush Colton. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.2.6: Matrices de adsorción por afinidad. FUNDAMENTOS 315 Soporte (marca) Matrices comerciales Estructura química CH2OH •O Agarosa OH Materiales silíceos (vidrio de poro controlado. Spherosil) — O — Si — OH — O — Si — OH I O Poliacrilamida rv(CH2 — CH — ) Ofe — CH — C — (CH2 — CH — I C= 0 I NH NH f NH C= 0 Copolímero de Hidroximetil metacrilado CH2 1 -C 1 -CHz COOOH2CH2OH CH» CH3 1 1 C CH2— C CH2 C— 1 1 1 OOOOHZCH2OH CO CO 1 1 0 o 1 CH2 OH2 1 CH2 1 O 1 CO -C 1 -CHz CCH3 COOOH2CH2OH 1 1 CH2 1 0 1 CO CH2 — C CH2 1 COOOH2CH2OH C — CH21 CH3 CH2OH Celulosa OH Figura 7. Todos los derechos res vados. 1985. .

Posteriormente se puede unir un radical por medio de un grupo amino para formar un derivado de la isourea. Sondas para obtención de ácidos nucleicos.Bioespecíficos amplios: Cofactores y lectinas. . . de ligandos Costo Sílice buena alta buena baja bajo bajo Material Celulosa | Poliacrilamida buena buena alta alta buena baja baja baja bajo alto medio bajo ADSORCIÓN. aminos y carbonilos. Tabla 7.1: Propiedades de matrices. lo cual se efectúa mediante dos pasos químicos. Antígenos para adsorción de anticuerpos.316 CAPÍTULO 7. Inicialmente se activa la matriz con bromuro de cianógeno. del ligando y de la estabilidad de éstos.7 se presenta uno de los procedimientos utilizados para activar una matriz de agarosa. Proteínas acarreadoras para obtención de hormonas. los cuales dependen del tipo de grupo funcional sobre la matriz. Propiedad Estabilidad Reactividad Permeabilidad Especificidad No. Generalmente los grupos funcionales utilizados son hidroxilos. Agarosa buena baja buena alta alto alto Existen varios procedimientos para inmovilizar el ligando en la matriz. .Bioespecíficos estrictos: Sustratos para adsorción de enzimas. Los ligandos son moléculas de alta afinidad por el soluto de interés y pueden ser de varios tipos (Figura 7.Pseudoespecíficos biológicos: Aminoácidos. .Pseudoespecíficos no biológicos: Colorantes y Metales. En la Figura 7.8): .

2. Todos los derechos reservados. . b) Reacción del éster de cianato con un derivado amino para obtener un derivado de isourea. Fuente: Yarmush y Colton.c> C=NH ||_(X> Amidocarbonato o ^-o— c— NH Carbamato b) '/A 3—CN + NHj—R- Figura 7.H _ = -° Ester de aanato ¿24. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. FUNDAMENTOS 317 OH BrCN.7: a) Activación de matrices con bromuro de cianógeno. Copyright ©1985. * .I 7. 1985.

Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Adaptada de: Vijayalakshmi. ugandos Pseudobioespeáficos Figura 7. 1989. Copyright ©1989. .8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. Todos los derechos reservados.318 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN.

pero puede ser utilizada para aproximar las otras isotermas en la región de baja concentración de soluto. En los procesos de adsorción que se presentan en las bioseparaciones existen cuatro tipos básicos de isotermas (Figura 7. cálculo de eficiencias y costos de la adsorción. La isoterma lineal es menos común. Las isotermas nos permiten estimar el grado de purificación que puede ser alcanzado. determinándose K con la ordenada en el origen y n de la pendiente de la recta que se obtiene. 1966). la lineal. Las isotermas irreversibles son características de sistemas altamente específicos. En este tipo de experimentos generalmente se pone en contacto cantidades iguales del adsorbente con soluciones de soluto de diferentes concentraciones y se mide las concentraciones una vez alcanzado el equilibrio. Las isotermas son parte esencial para modelar la adsorción y por lo tanto para el diseño.1) donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el líquido de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente. FUNDAMENTOS 319 7. la cantidad de adsorbente requerido.7. Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas por medio de una gráfica log-log de los datos experimentales.2. Cuando las isotermas de adsorción son cóncavas hacia el eje de las abcisas o sea cuando n < 1. Las isotermas tipo Freundlich normalmente se presentan en sistemas-' de adsorción por intercambio iónico. n es una constante adimensional y K es una constante cuyas unidades dependen de n.3 Relaciones de Equilibrio El análisis de los procesos de adsorción requiere de datos de equilibrio que se expresan normalmente como isotermas de adsorción. la adsorción por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. la de Langmuir y la irreversible (Hall et a/. ya que se puede obtener una buena adsorción aún a concentraciones bajas de . la isoterma se llama favorable. y la sensibilidad del proceso respecto a la concentración del producto.9): la isoterma de Freundlich.2. Tanto K como n deben ser obtenidas experimentalmente. La isoterma de Freundlich se describe por medio de una ecuación exponencial empírica de la siguiente forma: q = Ky" (7. y es la concentración de soluto en la solución.

Copyright ©1988. .320 CAPÍTULO 7. Todos los derechí reservados. ADSORCIÓh Freundlich (común ^ empírica) Figura 7.9: Isotermas de adsorción más comunes. Fuente: Belter et a 1988. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.

Las isotermas lineales pueden ser descritas por la ecuación de una recta que pasa por el origen de la forma: 9 = Ky (7.7. En este caso q = q para cualquier valor de y. coexisten sitios ocupados por soluto y sitios vacíos. se llaman desfavorables. la adsorción puede ser expresada en forrr de una ecuación química de la siguiente forma: . Estas constantes deben ser obtenidas experimentalmente.3: 9 <io y q0 de tal manera que en una gráfica cartesiana de l/q vs 1/y. se puede obtener una recta de pendiente Kd/q0 y ordenada en el origen l/q0. Las isotermas concavas hacia el eje de las ordenadas o sea para n > 1.2. Un caso particular de la isoterma de Langmuir se presenta cuand< K¿ es muy pequeña y la adsorción es irreversible. unidades de q0 y K¿ de esta isoterma son las mismas que las de q y y respectivamente.La. En este caso es preferible manejar los datos experimentales con la forma reciproca de la ecuación 7. FUNDAMENTOS 321 soluto. En un momento dado durante 1 adsorción. La forma de las isotermas de Langmuir puede explicarse mediant un mecanismo teórico bien fundamentado.2) en este caso los datos experimentales se grafican en coordenadas cartesianas para determinar K. La ac sorción en el sentido directo es proporcional a la concentración de solut y a la concentración de sitios vacios. Se propone que sobre la su perficie del adsorbente existen sitios específicos en los que las partícula de soluto se unen reversiblemente. En el sentido inverso la adsorció es proporcional a la concentración de sitios ocupados. Las isotermas tipo Langmuir están dadas por expresiones de la siguiente forma: q= V°y i-? Q^ (7 3) - donde q0 es la capacidad máxima del adsorbente y K¿ es la constante de equilibrio de desorción. De acuerdo a lo anterior.

7) Combinando las ecuaciones (7.6) y (7.9 donde HR representa los sitios de intercambio iónico en estado ñor mal del adsorbente. ADSORCIÓN...-j. [sitios total es][soluto] [sitios ocupados]J = — — : 1 F Kd + [soluto] v(7. y—.8). por el ion que normalmente está unido a la superficie del adsorbente La expresión final depende del número de iones de soluto que se Ínter cambian por ion de adsorbente.3) puede ser obtenida a partir de la expresión (7.= —7-rr. Las isotermas de intercambio iónico pueden ser racionalizadas er forma análoga.8 l debido a que q es proporcional a la concentración de sitios ocupados y q0 a la concentración de sitios totales.322 CAPÍTULO 7.6) El número total de sitios activos para la adsorción es constante e igual al número de sitios vacíos más los sitios ocupados o sea: [sitios totales] — [sitios vados] -j. y NaR representa los sitios de intercambio una ve que ha sido intercambiado el ion de soluto.— KI [sitios ocupados] (7. En el caso de un intercambio monovalente característico de la resinas sintéticas la adsorción puede ser expresada como: Na+ + HR ^ NaR + //+ (7. es decir este mecanismc fundamenta la expresión de Langmuir. o están ocupados por el ion de soluto o están ocupado. En equilibrio la constant de desorción está dada por: . la ecuación (7.7) se puede llegar a la expresión: . en este caso los sitios de adsorción en ur momento dado.. Sin embargo. soluto -f sitios vados ^ sitios ocupados (7-5) En el equilibrio se puede definir una constante de equilibrio de desorción K¿ de acuerdo con la siguiente expresión: k-2 [soluto][sitios vados] I<d .[sitios ocupados] (7.

En el caso de adsorciones iónicas no monovalentes el análisis análo frecuentemente conduce a expresiones tipo Freundlich.2.10a los datos no se ajustan a una isoten lineal.2.ñ] y q0 es proporcional a [R ]. Ejemplo 7. Los datos de equilibrio de la adsorción de ASB en Q-Sefarosa presentan en la Tabla 7.. Encontrar la expresión matemática de la isoterma que mejor ajuí los datos. FUNDAMENTOS [Na+][HR] [NaR][H+] 32 (7.1: como q es proporcional a [7Va. entonces la isoterma no es del tipo Freundlich. La gráfica log-log de los datos (Figura 7. .10) y (7.11) se puede obtener la cuación: [NaR] = [RT][Na +1 Kd[H+] + [Na- (7. siempre y cuando la concentración [H+] pe manezca constante. como en el caso de que se utilice una soluci< amortiguadora.10b) no produce u linea recta.H La concentración de radicales R totales en la superficie del adso bente está dada por: [R~] = [NaR] + [HR] (7. adsorción iónica monovalente puede ser descrita por medio de una e presión tipo Langmuir.Adsorción de Albúmina de Suero de Bovii (ASB) a pH = 7 en un adsorbente aniónico Q-Sefarosa. acuerdo con la Figura 7.1. Solución: La solución se presenta en forma gráfica en la Figura 7.7.10.1 Combinando las ecuaciones (7.

0125. En el caso que la adsorción sea bastante rápida.0333 0. el sistema pe manecerá esencialmente en equilibrio y el modelo se simplifica.477 1.885 1. Copyright ©1990. Tabla 7.0130 0. Sin embargo.05 30.752 1. mediante el empleo de coeficientes d transferencia de masa.0375 x 10~3. El estudio de an .2.20 56.00 1. columna.70 1. La oí denada en el origen es 0.37 0.00 78.00 -1. con de la configuración del sistema (intermitente.00 76.324 CAPÍTULO 7.640 1.10 -1. por lo que q0 = 80 mg/ml. Todos los derechos reseí vados.2: Datos de equilibrio. La pendient de la recta es igual a 1. composición y presión).25 i/q 0.81 0. para el desarrollo del modelo de la adsorció es necesario poder establecer.11).50 0. entonces K¿ = 0. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.083 mg/ml. la velocidad de la adsorción o el tiempo necesari para alcanzar una cierta separación (Figura 7.00 2.0229 0. y mg/ml q mg/ml Log(y) 0. E la mayoría de los casos las interacciones soluto-adsorbente no ocurre instantáneamente.0128 Fuente: Draeger y Chase.10c). etc. temperatura.894 ADSORCIÓN i/y 20.4 Cinética de la Adsorción El estudio de las isotermas de adsorción nos permite determinar par un sistema soluto-adsorbente dado.30 43.) y d tamaño del equipo donde se realizará la operación.0135 0.00 0.60 Log(q) 1.00 10.0177 0. el grado de separación que pued ser logrado y la sensibilidad del proceso con respecto a la concentració del soluto. 1990.85 0.53 -0.00 73. 7.00 0. Los datos ajustan la isoterma de Langmuir (Figura 7.30 4. La velocidad efectiva de la adsorción depende tanto de las cond cienes de operación (flujo.70 0.00 5.868 1.

00 2.4 1.2. a).50 log(y) 0.8 log(q) 1.0 -1 50 -1.50 Figura 7. b).Ajuste de datos.00 1.00 Figura 7.Isoterma lineal 2.10: Continuación.00 y (mg/ml) 3. ...isoterma de Freundlich.6 1.1. FUNDAMENTOS 32 80 — 70 — 60 q (mg/ml) 50 40 30 20 10 0.2 1...10: Ejemplo 7.7..00 -0.00 0.0 1.

ADSORCIÓN.015 0.Isoterma de Langmuir.020 1/q 0.326 CAPÍTULO 7...10: Continuación.010 0.000 I 10 I/y I 15 Figura 7.c)..005 0.030 0. . 0.025 0.

de Masa Modelo del Adsorbedor Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 7. .2.11: Diseño de adsorbedores. Copyright ©1990. FUNDAMENTOS 327 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T. Adaptada de: Wang. 1990.7. Todos los derechos reseí vados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

el soluto tiene que pasar del seno de la fase líquida a 1 superficie del adsorbente (Figura 7.Resistencia de la película del líquido que rodea el adsorbente.. ADSORCIOh bos efectos se divide en dos grandes conceptos : .Resistencia a la difusión dentro del poro. Para que un partícula de soluto pueda ser adsorbida en la superficie de un poro de adsorbente. Mecanismos de Transporteí El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer la expresiones de la rapidez de la adsorción a nivel local.Debido a que el área de 1 superficie interior del poro es mucho mayor que la superficie ext< rior. . es decir con siderando el comportamiento de una partícula de adsorbente o un ele mentó de volumen de un sistema. . .El soluto una vez situad en el sitio de adsorción se une a éste por medio de una reaccic de superficie.Los efectos de mezclado.. la cual es un proceso finito pero generalmente mí rápido que los procesos anteriores.Los mecanismos de transporte (físicos y químicos). En los procesos de adsorción se utilizan materiales porosos que ofre cen una gran área por unidad de volumen con el propósito de recupera la mayor cantidad de soluto posible en un volumen dado. generalmente la adsorción se efectúa principalmente denti del poro.Resistencia a la reacción en la superficie. . Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este preces que pueden visualizarse principalmente como: ..Pr mero el soluto difunde desde el seno del líquido a través de 1 película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente.Resistencia a la difusión en el seno del adsorbente. .12). por lo que el soluto debe difundir a través del líquido i interior de los poros.En algunos tipc de adsorbentes el soluto difunde a través del seno del adsorbent< A este fenómeno se le conoce como difusión en la fase del adsoí bente.328 CAPÍTULO 7..

. FUNDAMENTOS 32 a) Resistencia a la difusión al interior del poro d) Resistencias de la superficie Resistencia de la película de líquido Figura 7.12: Resistencias en la adsorción.2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Adaptada de: Levensj 1962. Todos los den reservados. Copyright ©1962.7.

El parámetro a puede ser correlacionado con la porosidad del leche 6 (volumen del líquido sin incluir el líquido de los poros/volumen de lecho) y el diámetro de la partícula de adsorbente dp de acuerdo a le expresión: (7. En este caso la expresión de la velocidad d< adsorción puede expresarse como: R=kLa(y-y*) donde: &£.14) «p . [M/(T—L2—M/L3 líquido)] (7. Cuando la resistencia de la película es mucho mayor que la de poro o la de la reacción de superficie. la velocidad de adsorción est. y: Concentración de soluto en el seno de la fase líquida. ADSORCIÓN Control de la resistencia en la película. en equilibrio cor la concentración de soluto en el adsorbente.12. controlada a nivel local por el flujo del soluto a través de la películ que rodea al adsorbente.: Coeficiente de transferencia de masa.330 CAPÍTULO 7. y*: Concentración hipotética de soluto en el líquido.. [M/L3]. resistencia de la película o la del poro o una combinación de ambas controla la velocidad de adsorción local.13 a: Área de adsorbente por unidad de volumen de lecho (adsorbente 3 líquido). Particularmente. R: Velocidad de adsorción referida al volumen del lecho (adsorbente y solución).Las resistencias an teriores no actúan sólo en serie o en paralelo como puede apreciarse ei la Figura 7. [L2/L3]. [M/L3]. por volumen del líquido). [M/L3t]. la resistencia de la difusión en el por* no puede relacionarse directamente con las otras dos. Generalmente 1. (En la literatura también se utiliza R' = R/e velocidad de adsorciór.

Reynolds y Schmidt dados por las siguien tes relaciones: Sh = kLdf (7. son los númeroí adimensionales de Sherwood.: Para tanques agitados: -2/3 7 18 dp Para columnas: ' \PL^AB (7. . [m2/s].2C (7. : Viscosidad. fc¿ generalmente se puede correlacionar con una expresión de la forma: Sh = Cl-i. excepto en los casos en que la partícula de adsorbente es pequeña y la difusividad en el poro grande. donde Ci.45/?e1/2Sc1/3 estimándose la difusividad mediante la expresión: = 9. Re y Se.19 S/i-2-f 1. [Kg/m — s]. ^2.Difusividad. FUNDAMENTOS La resistencia de la película por si misma rara vez controla la rapidez de la transferencia de masa.17 (AB En el caso de proteínas se han utilizado las siguientes correlacione para estimar &£. y Sh.16 (7.7.2.21 donde: AB'.15.C2(Re)a(Sc)b (7. Para sistemas de adsorción en columnas.4 x 1(T15 T (7. a Y b son constantes.

q: Concentración de soluto en la fase sólida. [(L2/t)]. CAPÍTULO 7. [L].q) ? (7. ADSORCIÓN Control de la difusión del soluto en el seno del adsorbente.La difusión en la fase sólida del soluto una vez que ha pasado del sene del líquido a la fase sólida.22) suele ser aproximada utilizando una fuerza impulsora lineal de la siguiente forma: | = ^sksa(q* . [M/L3].332 T: Temperatura. se presenta en algunos sólidos homogéneos permeables como las resinas que se utilizan en intercambio iónico o en adsorbentes con porosos cubiertos con películas móviles.23) or donde Ra es el radio externo de la partícula. o en líquidos utilizados para impregnar la partícula porosa. [°K]. MA\ Peso molecular soluto. r: La coordenada radial al interior de la partícula.24) q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de la fase líquida. La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: R=-aDs^\r=Ra (7. ips es un factor de corrección . Considerando una geometría esférica uniforme el balance de soluto en la partícula está dado por: donde: Da: Difusividad efectiva del soluto en la fase sólida. La ecuación (7.

-: Porosidad de la partícula al soluto de interés. qi\ Concentración de soluto en la fase sólida. ks es el coeficiente de transferencia de masa (L 3 (total)/área-tiempo).27) puede ser escrita como: | dt <9r2 2% r dr (7. e. [L3/Z/3].e)i¡>sksa(q* . Para el caso en que la acumulación del soluto al interior del poro sea mucho menor que la velocidad de la adsorción la ecuación (7.q) k*a se correlaciona con la difusividad mediante la ecuación: (7.)f (7. FUNDAMENTOS 333 Dimensional que se introduce al linearizar la expresión. (7. ot \ dr2 r or -d-.Cuando la velocidad de adsorción está controlada por la difusión del soluto al interior de los poros de la partícula de adsorbente.a = 600. el balance de soluto al interior de la partícula está dado por la expresión: o. [M/L3].27) yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro. hasta el sitio de adsorción..25) k<.>2. [ L 2 / t ] .26) Control de la difusión del soluto en la fase líquida al interior de los poros. Con la linearización anterior la expresión de la velocidad de transferencia de masa por unidad de volumen de lecho es: R= (1 . [M/L3]. Dp: Difusividad efectiva del soluto al interior del poro.28) La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: r=Ra .

33) Control de la reacción de superficie. Dos expresiones comunmente utilizadas principalmente para sistemas de intercambio iónico.30) donde Y0 es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de los poros) y DAB es la difusión molecular del soluto en un líquido libre de adsorbente. reversible o irreversible.334 CAPÍTULO 7. son: Cinética reversible de primer orden: R = e(kiy . q es la concentración promedio de soluto en el adsorbente. de un cierto orden. La ecuación (7. para líquidos la difusividad Dp puede ser expresada como: Dp = ^^ *o (7. qx es la concentración de la fase sólida en equilibrio con la concentración y A de la solución que se va a tratar y ifrp es un factor de corrección por linearización.32) donde q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de líquido . puede aproximarse utilizando una fuerza impulsora lineal como la siguiente: VA de tal manera que. kpa puede correlacionarse con la difusividad efectiva del poro mediante la siguiente expresión: f^ (7.28). En las expresiones cinéticas más utilizadas la reacción de superficie es tratada como una reacción química.Generalmente la reacción de adsorción en la superficie del adsorbente es mucho más rápida que los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante..34) . ADSORCIÓN. r) H= ysp'vp ^*f — *j) (<-! <tc\\ (7.k2q) (7.

FUNDAMENTOS Cinética reversible de segundo orden: R - (7. v: Es la velocidad superficial de flujo. Es conocido que para flujo laminar de líquidos en lechos empacadc (caso más común) el número de Reynolds basado en el diámetro de h partículas del lecho es menor a 10. Esta situación es característica de columna. Sin embargo. Uno de los modelos más utilizados para describir la desviación de comportamiento ideal del flujo al interior de columnas. donde k\ y k% son las constantes cinéticas de adsorción y desorción respectivamente.36 donde: E: Es el coeficiente de dispersión axial. debido .2. difusión molecular o dispersión axial). en función d( cual se puede definir un coeficiente aparente de transferencia de mas dado por: (7. que en el proceso de escalamiento de columnas este efecto puede se importante. es el modelo d flujo tapón con dispersión (Figura 7. Efectos de Mezclado La velocidad de adsorción efectiva también puede disminuir por efecto. [L/t]. [L2/t]. Bajo esta consideración el númei I .35. donde los efectos de la dis persión axial debida a remolinos y de la difusión molecular. es necesario considerar algunos aspectos fundamentales d este fenómeno. largas donde se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o ei el mezclado (espacios muertos. se agrupa! en el concepto del coeficiente efectivo de dispersión axial. En la construcción de algunos modelos de adsorción no se considerai los efectos de mezclado y de flujo no ideal.13).7. de un mezclado imperfecto. q0 es la capacidad máxima de adsorción del adsor bente.

14: Dispersión en lechos empacados.336 CAPÍTULO 7. 1962. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.13: Modelo de flujo tapón con dispersión. Todos los derech reservados. 1962. piel.1 1000 2000 Re = Figura 7. Todos los derech reservados. Copyright ©1962. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1962. ADSORCIÓI Perfil plano de velocidad Fluctuaciones debidas a difusión molecular y turbulencia - Figura 7. Pe: 0. . Adaptada de: L venspiel. Adaptada de: Leven.

la cinética de la adsorción puede ser descrita en forma más adecuada utilizando un modelo donde la combinación de resistencias (por ejemplo película y poro) describen en forma más precisa la cinética.37) permiten obtener una expresión para el coeficiente aparente de transferencia de masa por dispersión. la combinación de resistencias se presenta por medio de un coeficiente de transferencia de masa global que agrupa el efecto de las resistencias individuales. En estos casos. ~^ = r~ + r ( T ' 39 ^ donde K0 es el coeficiente global de transferencia de masa referido a la fase líquida.7.38) Resistencias Combinadas En la elaboración de un modelo cinético se puede suponer que una resistencia a la transferencia de masa es la controlante. FUNDAMENTOS 337 de Peclet (el cual es una medida del grado de dispersión en la columna) toma un valor constante de 2 (Figura 7. de tal manera que la expresión de la velocidad de adsorción se puede aproximar a: R = kda(y . lo cual simplifica la solución matemática del modelo de adsorción.2. . Si se considera como ejemplo el caso de la resistencia de la película y la del poro actuando en serie. para el cálculo del coeficiente global se deben sumar los inversos de los coeficientes individuales (para equilibrios lineales).14) entonces.y*) (7. Pe = ^ = 2 hi .37) donde Pe es el número de Peclet (adimensional). Las ecuaciones (7. Para el establecimiento del coeficiente global de transferencia de masa es necesario fijar la forma en que las resistencias individuales están relacionadas: en serie o en paralelo. (7.36) y (7. Sin embargo en algunos sistemas.

Este tipo de arreglo se considera útil para el tratamiento directo de caldos . en forma intermitente o continua (Figura 7. Estas columnas pueden ser operadas simulando un sistema a contracorriente mediante el sistema de carrusel (Figura 7. 4- Adsorbente 0 ° O 0 Oo O4.338 CAPÍTULO 7.— So o ° 0 cd"^ O 00°° ° 0 00°° o °O o (a) Tanque agitado intermitente 0 °O o*" —V (b) Tanque agitado continuo Figura 7. pero resultan muy útiles en la experimentación de laboratorio para la obtención de datos de diseño. Los equipos industriales de adsorción más empleados son los tipo columna de lecho fijo.15: Sistemas de adsorción tipo tanque agitado.— Ad Adsorbente 0 o 0 0 bo Solución 0 o 4. Las operaciones de adsorción pueden llevarse a cabo en tanques agitados. En este tipo de arreglo se cuenta con varias columnas operando en serie. <^_ _^> <=__ _--> r - 0 0 O ° 0 Q(~\ 0*. simulándose una operación a contracorriente. La columna agotada se descarga y posteriormente se convierte en la columna final de la serie. se avanza la posición de la alimentación a la siguiente columna. Este tipo de sistemas son poco usados a nivel industrial por incosteables. En los equipos de lecho fluidizado las partículas de adsorbente se suspenden mediante un flujo ascendente de la solución de interés.16). Cuando se agota la columna que está siendo alimentada. ADSORCIÓN.15).

EQUIPOS DE ADSORCIÓN F XA' 339 oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo T y(Ut) F a) Columna de lecho fijo Solución Alimentación • "1 A ~l B 1 c L_ ~l r E de lavado Qdol D L_ L_ 1 ^^^ Se)luc»ón as otada Alimentación Solución de lavado Cido2 T Producto Solución agotada . .?°dn0ae Alimentación Cido3 77 T Solución Producto agotada b) Sistema de Carrusel Figura 7.3.7.16: Adsorción en columnas.

suprimiendo la operación sólido-líquido previa a la adsorción. con sólidos en suspensión. ADSORCIÓN. . Con esta misma intención existen desarrollos donde se emplea una combinación de un tanque adsorbedor y uno desorbedor operando en forma continua (Figura 7.17).340 CAPÍTULO 7.

3. . Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright ©1990 y con el permiso de Nature Publishing Co. 1990 y Pungor et a/.17: Adsorción en caldos completos. Todos los derechos reservados.7. Copyright ©1987. Adaptada de: Gailliot et a/. 1987. EQUIPOS DE ADSORCIÓN Solución agotada 341 y Sólidos celulares Altura de lecho expandido Altura de lecho sedimentado - Solución de lavado J a) Adsorción en lecho fluidizado F Alimen lactón Soluá ande lav¡UlO Solu ción de e ución Etapa de adsorción 0 o dbo °oo 0 ° 0 °n° O O o^cT O~o O° 0^> IX F+ ' v 0 <PoOo~ J> O°OoO "M f XI 0 o d0 V o o 0 ° 0 °n° 0 O Etapa de desorción O F Producto b) Adsorción continua con recirculación de adsorbente Figura 7.

7. En esta sección se revisa la integración de estos cuatro aspectos en el diseño de arreglos específicos de sistemas de adsorción. los balances y las condiciones de frontera.4.2 y 7. ADSORCIÓN 7.3 se han revisado los primeros dos aspectos.Etapas necesarias o longitud de una columna. gran parte de los datos de equilibrio o las . . A escala industrial estas operaciones son poco utilizadas por incosteables.Cantidad de adsorbente necesario. . debido a que los balances y condiciones de frontera son característicos de cada tipo de arreglo. • Las columnas empacadas de lecho fijo. • El tanque agitado con alimentación continua. las expresiones de la velocidad de adsorción.Concentración de soluto al final de la adsorción (pérdidas o eficiencia).342 CAPÍTULO 7. En las secciones 7. En general los arreglos más comunmente empleados son: • El tanque agitado intermitente.11) permite estimar algunos parámetros importantes como: .4 Diseño de Adsorbedores El diseño de adsorbedores mediante modelos (Figura 7.Tiempo necesario para llevar a cabo el proceso. . se agita la suspensión y posteriormente se separa la fase líquida y sólida. Sin embargo.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes En una operación de adsorción tipo tanque agitado intermitente el adsorbente se agrega a la solución dentro de un tanque. Como se estableció en la introducción de este capítulo la formulación del modelo requiere de los datos de equilibrio de sistema. Las operaciones de este tipo son utilizadas cuando la capacidad del adsorbente es muy alta.

Si se proporciona un tiempo de contacto adecuado se alcanza el equilibrio entre las fases. las operaciones de lavado y elución se realizan en tanques agitados en forma intermitente.41) donde F es la cantidad de la fase líquida y S la cantidad de adsorbente (se suponen constantes como es el caso para soluciones diluidas de caldos biológicos).18 puede ser expresado como: FyA + SqA = Fyi + Sq2 (7. Es importante mencionar que en algunos casos. Asimismo. La expresión de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo * de adsorción. . una alternativa de diseño es utilizar curvas de equilibrio prácticas que tomen en cuenta directamente la eficiencia de etapa.4. por lo tanto el adsorbente y la solución están en equilibrio al término de la operación (o bien una etapa real si se utilizan curvas de equilibrio modificadas).7. q¿ y <?2 son las concentraciones de soluto en el adsorbente al inicio y final del proceso. llamada linea de operación. ya sea en forma gráfica o en forma analítica. y sólo requiere de la combinación de ¡Jas expresiones de equilibrio y los balances de masa. DISEÑO DE ABSORBEDORES 343 cinéticas de adsorción para otro tipo de diseños son obtenidos en este tipo de arreglos. En el análisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa ideal. Bajo esta consideración el análisis de este tipo de operación se simplifica. Por otro lado. y A y 2/2 son las concentraciones de soluto en el líquido al inicio y final del proceso. considerando tiempos de contacto menores a los del equilibrio real.41) puede arreglarse para expresarse como la ecuación de una línea recta. respectivamente. La ecuación (7. por ejemplo: q = Kyn (7.40) El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7. si el tiempo de contacto es menor que el necesario para alcanzar el equilibrio la operación no será 100 % eficiente. En el caso de adsorciones lentas. Considérese una operación tipo tanque agitado intermitente.

donde la curva de equilibrio utilizada para la ilustración refleja una adsorción favorable (n < 1). Ejemplo 7. ADSORCIÓN ^o o o 0 °0'°0 o db o O 0 0 OO t=0 (a) Sq.40) y (7.42) La solución gráfica de las ecuaciones (7. '••::••.18c. 92 = qA + . sólo cuando la concentración en la solución es muy baja la concentración del soluto en el adsorbente .56 g de este antibiótico pueden ser adsorbidos por cada gramo de resina. #2) al final del proceso.Adsorción de estreptomicina.2/2) (7.42) se representa en la Figura 7. La estreptomicina se recupera utilizando adsorción por intercambio catiónico. t=t (b) Sq Curva equilibrio y (c) Figura 7.344 CAPÍTULO 7.. Debido a que la curva de equilibrio es muy favorable para este proceso. La intersección de la curva de equilibrio con la línea de operación permite calcular las concentraciones de equilibrio (7/2. Se ha observado que 1.2.18: Adsorción intermitente.

.Adsorción de fenilalanina. La adsorción de fenilalanina en un adsorbente de poliestireno (amberlita XAD-2) puede ser descrita por la siguiente isoterma: q = 6.000 / de un caldo de fermentación que contiene 6 g/l de estreptomicina en una operación intermitente. Solución: El balance de masa para esta operación es: S(q-2 . Esto implica que sería adecuada una operación continua . sin embargo el problema que significa el movimiento continuo de los sólidos.4.QA) = F(yA .000 1x6 g/l 1-560/0 — 384.y2) con los valores: <M = 0 q2 = 1.56 g/g 7/2 = 0 se puede calcular S: s = s = S FyA <12 100. conlleva a utilizar con más frecuencia operaciones semi-continuas. Si se ponen en contacto 300 g de adsorbente con 2 litros de solución que contiene 15 g/l de fenilalanina. estimar: . Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100.3. DISEÑO DE ADSORBEDORES es 345 menor de este valor. Ejemplo 7.615 0 de adsorbente. Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente.1 x 10~V'9 donde q tiene unidades de g/g y y de g/l.7.

02 (15.04 0.6 g/l 2/2 .346 CAPÍTULO 7.19. a) La curva de operación y de equilibrio se grafican en la Figura 7.08 0.0) o. por lo tanto: 92 = 0. permite encontrar la ecuación de la línea de operación.06 q (g/g) 0. ADSORCIÓN o.oo i 10 I 12 I 14 i 16 Figura 7.19: Solución gráfica del Ejemplo 7.0420/0 = 8. a) Las composiciones en el equilibrio.3.io 0. el punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operación. Solución: Utilizando el método gráfico el balance de masa para esta operación (ecuación 7.42). b) El porcentaje de recuperación.

La principal impureza en el proceso de obtención de cefalosporina C es la DAC-C.Adsorción de Desacetilcefalosporina C (DACC). : con una concentración de 2 g/l. Solución: Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solución analítica al problema. Del balance de masa se obtiene: en el equilibrio: 92 . DISEÑO DE ABSORBEDORES b) El porcentaje de recuperación puede ser expresado como: FyA - 347 FyA y A -y2 15-8. utilizando amberlita XAD-2 modificada.0877/2 . La isoterma de adsorción de esta impureza en amberlita XAD — 2 — CHi — CH<¿ — Br.8. Si se utiliza un proceso intermitente en equilibrio. para recuperar el 90 % de la impureza?.4. está dada por la siguiente expresión: donde q está en g/g y y en g/l.6 ~~l^~ RE = 43 % RE = Ejemplo 7.7.C .. adsorbente es necesario agregar a 2 litros de una solución de DAC .0. ¿ qué cantidad de f h . a un pH de 2.4.

el cual como ya se ha mencionado depende del mecanismo controlante de la adsorción.2 g de soluto/litro del balance de masa. La adsorción se efectúa utilizando proteína A inmovilizada en una matriz de Sefarosa B en una solución amortiguadora al 0. El equilibrio del sistema es tipo Langmuir. En el siguiente ejemplo se revisan algunos de los casos particulares de la adsorción intermitente.000 daltons Kd = 0. Se desea predecir la variación de la concentración de ImG en un sistema experimental intermitente (Figura 7.348 y de acuerdo a la recuperación deseada. #2 = 0. S = 206. Este proceso está descrito por el modelo en estado no estacionario del proceso.9 g En la adsorción intermitente puede considerarse el proceso de transición del sistema de su estado inicial hasta su estado final. ADSORCIÓN Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la intersección de la curva de operación con la de equilibrio.96 A/? = 28 Kg/m 3 Proteína: MA = 150.1 M de tris HC1 a pH=7 y a 25° C. Ejemplo 7. Datos: Adsorbente: dp = 90 x 10'6 m GÍ = 0.0174 g de soluto ¡g de adsorbente y-2 = 0.5. CAPÍTULO 7..Adsorción de Inmunoglobulina G (ImG) en protema A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sistema intermitente.019 mg/ml q0 = 40 mg/ml Dp = 6x 10~12 m2/s .20).

DISEÑO DE ADSORBEDORES 349 Adsorbente en suspensión Filtro Baño de agua agitado Figura 7..20: Sistema experimental de adsorción intermitente con agitación. .4.

Solución: Para mostrar el uso de modelos cinéticos.Masa molecular de la proteína. ADSORCIÓN Solución: p = 1000 Kg / m3 HL = 9.5 x 10~4 Kg/m . a) Cálculo de la difusividad: 1 T DAB = 9. 1.5 mg/ml El coeficiente de transferencia de masa de la película puede ser estimado en este sistema intermitente utilizando la siguiente correlación: . [Daltons].s e = 0. [m2/s] T: Temperatura absoluta.5 x 2 771 S -4 DAB = 5.__ = 9.5 x 10~n - .31 / 1*1 \PPD AB donde pp es la densidad del adsorbente.4 x 10~15 x 298 9. [°K] MA'.99 yA = 0.350 CAPÍTULO 7.4 x 10 -15 donde: i: Difusividad molecular. en este ejemplo se desarrolla una solución empleando tres modelos diferentes. A/9 es la diferencia de densidad entre el adsorbente y el líquido y m es la viscosidad del líquido. Primero se pueden realizar los cálculos comunes a las tres soluciones. La difusividad de la proteína puede ser estimada por medio de la siguiente correlación empírica: .n Q1 0.

31 351 1028 x5. de tal manera que: q = 80</* el balance de soluto en el líquido es: (A) eV J = -RV el balance de soluto en el adsorbente es: (B) (C) la transferencia entre las fases: R=kLa(y-y*) combinando las expresiones A. se tiene: (D) .JA. B y D.+ 90 x 10-6 m + 0.. ' La relación de equilibrio está dada por una aproximación lineal al equilibrio en el rango O < y < 0. DISEÑO DE ABSORBEDORES b) Cálculo del coeficiente de transferencia de masa: 2 x 5.5.5 x líT11 =£ kL = -2.5 x 10-11 = X (1028 £f) kL = 4 x 1(T6 6 Solución 1. En esta solución se supone un equilibrio lineal y que el coeficiente de transferencia de masa de la película controla la rapidez de la adsorción.Equilibrio lineal y control de la película.

352 CAPÍTULO 7. kLa \ kLayA (F) í integrando ( G ) con las condiciones: t=O y = yA se puede obtener: c ( donde: e c _Bt kLa K(l-e) (H) (> La ecuación (H) describe la variación de la concentración de soluto en la fase líquida conforme transcurre el tiempo de adsorción t. q = q se obtiene la linea de operación. ADSORCIÓN \ combinando B y C e integrando con las condiciones: y = yA .99) 90 x 10~6 m a = 666 m"1 kLa kLa = = 4 x 10~ 6 — x 666 m"1 s 2. q = o y =y .66 x 10~ 3 5~ J TTL . AL a . Cálculos Numéricos: = 6(1~ up 6(1 -0. j \ \ q = 7f~y(^ ~ y) sustituyendo (F) en (E) y rearreglando: dy .

21 se muestra la variación de la concentración de soluto en la fase líquida en función del tiempo de adsorción.224 ezp(-6. La expresión de equilibrio está dada por: q y = °* El balance global de soluto: 1 —£ . se presentan los resultados para ki = 1 x 10 m/s para fines de comparación.mi _ y (H) queda expresada como: 0.99 2. tal y como lo predice la expresión anterior con ki — 4 x 10~6 m/s. En esta solución se considera que el equilibrio es de tipo Langmuir y la resistencia controlante está localizada en la película de líquido.66 x 10~3 mg/s .99) 353 + B = 6.4.276 + 0.011 x 10~3 ¿) g k b t* y = ' — = 0.66 x 10~3s~1)(0.Equilibrio de Langmuir y película controlante. DISEÑO DE ABSORBEDORES Utilizando (I): 2.66 x lO"3^1 0.011 x 10~3 s~l Utilizando (J): (2.5 mg/ml) 80(1 -0. Asimismo.553 + 0.66 x 80x(l-.011 x 10'3 í) ^ «E r^r ^ p^ sas?- En la Figura 7.. Solución 2.447 ezp(-6.7.99) C = 1.

a) fc¿ = 7 x 10~7 771/5 b) &L = 4 x 10~6 m/s La velocidad de transferencia de soluto por: R = kLa(y . Solución 3.354 CAPÍTULO 7. B y D.5. ADSORCIÓN 0.21: Ejemplo 7.y*) El balance de soluto entre las fases por: dy (C -y Las ecuaciones A.0 I 160.7 I 120.9 0. en lugar del valor obtenido median la correlación.22 se muestra la curva obtenida utilizanc un valor de ki = 7 x 10~7 m/s.0 t (min) Figura 7. para obtener la variación de la concentracic con el tiempo..Adsorción intermitente de ImG. con el objeto de aproximar más el modelo a los dat< experimentales. En este modelo se supone que la velocidad de adsorción está conti .0 200.Equilibrio tipo Langmuir y resistencias cornt nadas poro y película. pueden ser resueltas utilizando un métod de integración numérico. En la Figura 7. Equilibrio lineal y película controlante..

yl dt La relación de equilibrio: (C) .Adsorción intermitente de ImG.8- y/y* 0. se supone que en la superficie del adsorbente la concentración de proteína en el líquido está en equilibrio con la concentración de proteína en el sólido. Modelo y datos experimentales. Asimismo.5. 1989. Datos de: Horstman y Chase.7.4- 0. El balance de soluto al interior del poro es: '•»-& (A) donde Ra es el radio de la partícula.0- "T" 50 1 I ' ' ' ' I ' ' 100 150 M' 200 Tiempo (min) Figura 7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 355 0. Cinética lineal..2- 0.22: Ejemplo 7. El balance de soluto entre las fases en la superficie del adsorbente: .4.\r-Ra = ki(y — yi] \r=¡ 3r El cambio de la concentración en el seno del solvente : P (B) dy £-7T = -kia(y . relacionadas por una expresión tipo Langmuir. Equilibrio tipo Langmuir. lada por la transferencia de la proteína a través de la película que rodea la partícula del adsorbente y por la difusión efectiva de la proteína al interior de los poros del adsorbente.

356 CAPÍTULO 7. 7^ = 0 or de acuerdo a la regla de derivación de la cadena. dqj Kdq0 2 (H) d dyi _ dt e (K¿ + y i) dt 2 (I) combinando el resultado anterior con la ecuación (A). 2 dyi rdr l - c - d r Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensiona utilizando el siguiente cambio de variables: T = Dpt Efectuando el cambio de variables se obtiene el siguiente sistema d< ecuaciones: . ADSORCIÓN y las condiciones iniciales y de frontera. r\ 7 r\ r =0 (F) v ' dt dyi dt (G) derivando la ecuación (D) dqi Kdq0 dyt (Kd + y.-)2' combinando las ecuaciones (G) y (H). y.

4.23 se presenta la curva obtenida mediante este método..6- y/yA I 0. Datos: Horstman y Chase. 2 dr z dz (K) (L) dw dr -3(l-e)NSH e (w — Wi (M) donde NSH es un grupo adimensional dado por: NSH = D (N) Este sistema de ecuaciones puede ser resuelto por integración con diferencias finitas.23: Ejemplo 7. En la Figura 7.5.4-4 > I' ' ' ' 100 r 1! l' 200 Tiempo (min) Figura 7. . DISEÑO DE ABSORBEDORES 357 Película-Poro 0.Adsorción intermitente de ImG. 1989.7. Equilibrio Langmuir y resistencias combinadas película y poro.

4. donde inicialmente se coloca el adsorbente en solvente puro.24) alimentando al tanque adsorbedor. 7.Durante la operación el adsorbente se mantiene en el interior del tanque y la corriente agotada se retira continuamente del tanque . Una vez que se alcanza cierta concentración de soluto en la corriente de salida. ya que no presenta los problemas de taponamiento con la biomasa como cuando se trata de procesar estos caldos directamente en columnas de lecho fijo. se puede considerar que el tanque está perfectamente agitado. ADSORCIÓN Figura 7.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo Otro tipo de arreglo utilizado en procesos de adsorción industriales es el adsorbedor tipo tanque agitado con alimentación continua. En una primera aproximación para obtener el modelo del proceso del proceso.24: Sistema de adsorción tipo tanque agitado continuo. Una aplicación particular de este arreglo es en el procesamiento de caldos de fermentación completos (con una filtración gruesa previa en cribas vibradoras). un flujo F de solución con una concentración de soluto y A. se interrumpe la operación y se recupera el soluto concentrado en el adsorbente. La operación se efectúa (Figura 7.358 CAPÍTULO 7. de tal manera que la concentración de soluto a la salida es igual a la .

De acuerdo con la figura aún en ausencia de adsorción. la concentración de soluto en la solución será baja por un cierto tiempo. la concentración de soluto en la superficie del adsorbente q y la concentración de soluto en la solución de salida t/. hasta que se alcance la saturación del adsorbente. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.4. Por otro lado. Todos los derechos reservados. si la adsorción es muy rápida. 1988. lo que se traduce en una operación en estado no-estacionario. una vez ocurrido lo anterior la concentración aumentará siguiendo un patrón muy semejante al caso en que no existe adsorción. la concentración de soluto en la corriente de salida varía con el tiempo. Por lo tanto.7. En el caso general la velocidad de adsorción es intermedia entre los dos casos descritos anteriormente. Copyright ©1988.25. Fuente: Belter et a/.25: Concentración en el líquido de salida de un adsorbedor continuo tipo tanque agitado. concentración de éste en la solución dentro del tanque. En este sistema la cantidad de soluto adsorbido sobre la superficie de adsorbente varía con el tiempo. Para un adsorbedor continuo tipo tanque agitado el modelo que . El comportamiento cualitativo del sistema puede representarse de acuerdo a la Figura 7. son ambas funciones del tiempo de operación. DISEÑO DE ADSORBEDORES 359 y(t) Adsorción rápida Tiempo t Figura 7.

es el caso donde la velocidad de adsorción puede ser aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorción es lineal. El caso más sencillo que permite obtener un modelo mediante integración analítica. y A y y son las concentraciones de soluto a la entrada y la salida. a es el área de adsorbente por unidad de volumen de mezcla. ADSORCIÓN describe la adsorción. Como se presentó en sección 7. y es la concentración de soluto en el seno del líquido. Para este caso la velocidad de transferencia de masa está dada por: R = ka(y-y*) (7. la expresión de la rapidez de la adsorción y las condiciones de frontera.45) donde k es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa. respectivamente.360 CAPÍTULO 7.44) el balance de soluto en el adsorbente: V(l-e)— = VR donde V es el volumen de la mezcla (solución y adsorbente) en el adsorbedor.2. El balance de masa del soluto en la fase líquida se puede expresar en palabras como: velocidad de acumulación — velocidad de entrada — velocidad de salida — velocidad de adsorción £V< = F(yA dt ~y)-VR (7-43) (7. debe integrar la isoterma de adsorción. el balance de masa. El flujo de alimentación es F. La fracción de volumen de líquido ( sin incluir el líquido en los poros) al volumen total de la mezcla es e. la velocidad de adsorción depende de los mecanismos controlantes de la transferencia de masa. De tal manera que la expresión para R depende del sistema particular y debe ser determinada experimentalmente. La velocidad de adsorción de soluto por unidad de volumen de la mezcla de adsorción es R. y ?/* la concentración .

donde el primer paso consiste en una filtración para la eliminación de micelio y esporas.Recuperación de antibióticos por adsorción. Como alternativa a los procesos tradicionales de recuperación de antibióticos.7.. El adsorbente empleado inicialmente está libre de soluto y su constante de equilibrio lineal es 110.45 ) y (7.4. En un estudio piloto se desea estimar el tiempo para obtener el 90% de recuperación de un antibiótico de una corriente de alimentación que fluye a razón de 3 l/h con una concentración de 1 mg/l de antibiótico.43).47) que es la la expresión de la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción.rl ^ (7.rl * r T2t r2 . La isoterma de adsorción lineal se puede expresar como: q = Ky* (7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 361 hipotética de líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente. (7. se desea analizar la posibilidad de una recuperación directa del producto por medio de adsorción iónica en un arreglo tipo tanque agitado continuo. (7. en la expresión anterior: 2A -Br2 = 2A A = 1 B = 4+ ^ d + (l-e)K = fcaF eA'(l-e)V Ejemplo 7. La relación de volumen de líquido a .46) es: y* -y yA r erii r2 .46) La solución de las ecuaciones (7.44).6.

8. /„' Fyxdf .-> / ~ V \ / 1 1\ I /-i /-.46 /T1 Se puede definir el grado de recuperación mediante la siguiente presión: .63 h~2 Asimismo r\ y r2 están dadas por: l 1 2 2 Y .rrz-r! + 115 f f ^ r -r 2 2 .59 /i' ) . Jo FyÁdt combinando la expresión anterior con la ecuación (7.126 /T1 r2 = -84./„' Fyoíf Recuperación = — . B y C están dadas por: A = 1 3¿ 62.8 2 B = 84. /o* efectuando la integración. Solución: Las constantes A.4 h~l.8 (I -0. Como primera aproximación se puede considerar que la resisten< controlante es la de la película con un kia = 62.4 h~l í (0.. I ^ "I 0.4(1)(10. .362 CAPÍTULO 7.63 /i' ) i 2 rj = -0. JO Recuperación = f'dt. ADSORCIC volumen total que va a ser empleada es de 0.59 /T (62.8)(l/) 0.8)110 C = 10.47). -==_ (-84.JO' V i .59 h~ ) ± v/(84. El volumen de reacci es de un litro.4 ft-*)(3 {) •*-* /.

En la descripción de la adsorción en columna se utilizan gráficas de la variación de la concentración de soluto la salida de la columna con el tiempo.e"0-126*) + 1.4. Durante su paso por la columna el soluto es adsorbido en el lecho y la solución agotada es obtenida en el fondo de la columna.3 Adsorción en Lecho Fijo La adsorción en lecho fijo es la operación más empleada a escala industrial para la concentración de caldos ."~~~ 7. se pueden distinguir tres zonas en el lecho de adsorción: . . En tin tiempo intermedio (t -f di] cuando aún no se agota la columna.1)1I .8 x 1Q~ 5 (1 .r .(r -r!)V r2t .75 h 7.4. Una vez que la concentración de soluto a la salida alcanza una cierta concentración.1 r 2 . Este tipo de operación se efectúa en columnas empacadas con adsorbente. _ t T .440f ) '~~ t de donde: t — 1.26 se presenta un esquema de adsorción en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada sólo para efectos explicativos). DISEÑO DE ADSORBEDORES 363 n 2— (e r i t -1)4. Por la parte superior de la columna se alimenta la solución que contiene el soluto de interés. se interumpe la operación y se recupera el soluto concentrado. Estas gráficas son llamadas curvas de ruptura.r 1TV ) 2 2 t/ sustituyendo valores.f 7. U • Í7 .95(1 . A esta técnica también se le conoce como Cromatografía Frontal.(e ) / Recuperación = -—-. Curva de Ruptura En la Figura 7. La parte de la figura llamada "Lecho de Adsorbente" muestra como se va cargando de soluto el adsorbente del lecho conforme transcurre el tiempo.e .8 .

26: Adsorción de soluto y curva de ruptura en columnas.t) Tiempo Lecho de Adsorbente Solución de Salida t<t (a) (h) (b) ZE ZTM ZNU (c) 0) (d) (k) (e) (I) = t« (m) t>t. (g) (n) Figura. X(L. . ADSORCIÓN . XA .7.364 CAPÍTULO 7.

de tal manera que la concentración de soluto en el adsorbente es igual a la que tenía inicialmente qx. la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y ( L .14. la ZTM se acerca a la salida de la columna y la ZNU tiende a desaparecer. í). DISEÑO DE ABSORBEDORES 365 La Zona de Equilibrio (ZE) donde el adsorbente se encuentra en equilibrio con la concentración de soluto y A de la solución de entrada. Se pueden ditinguir tres eventos importantes en esta parte de la figura: Para tiempos menores a ÍR cuando la Zona de Transferencia de Masa aún no llega a la salida de la columna. de tal manera que se ha incrementado la concentración de soluto en la solución de salida alcanzando el valor de diseño ya. donde la funcionalidad / depende del tipo de equilibrio.¿) . La Zona No Utilizada (ZNU) donde no se ha presentado adsorción. Conforme transcurre la adsorción la ZE va ocupando toda la columna. La Zona de Transferencia de Masa (ZTM) donde la concentración de soluto en el adsorbente varía a lo largo de la zona. En la misma Figura 7. Este valor es la máxima concentracón de soluto permitida en la solución de salida y representa las pérdidas de soluto tolerables en el proceso. En esta zona la concentración de soluto en el adsorbente es constante e igual a q = f(yA). es muy baja e igual a la mínima detectada por el adsorbente yx (para fines prácticos esta concentración puede tomarse como cero). El tiempo ÍR marca la terminación del ciclo de adsorción. En el tiempo de ruptura ÍR la Zona de Transferencia de Masa ha alcanzado la salida de la columna.26 la parte "Solución de Salida" muestra como varía la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y(Z/. conforme transcurre el tiempo de adsorción. En caso de continuar la operación la concentración de soluto en la solución de salida seguirá incrementándose hasta igualar la concentración de soluto y A- .

<t:tr».í-^v*í--v --•'-•'*•-'*'-•--.. se llama Curva de Ruptura. O Calcular la duración del ciclo de una colun/na que opera con un flujo dé^flO l/min de una solución que contiene o g/l de estreptomicina. y ( L ..•••"-.^^... . ** Ejemplo 7.8.. La forma particular que toma la curva de ruptura depende tanto del tipo de equi* ^f^^. t ) vs ¿.v-^iJU. Los datos de equilibrio muestran que q0 — 110 g/l.^ librio del sistema que se trate.•*•>*•*<••. La columna está empacada con 10. Ejemplo 7.„-.27 se presenta un esquema de la columna y de la curva de ruptura para este ejemplo. utilizando adsorción por intercambio iónico.\ Suponer que en el rompimiento toda la columna está en equilibrio con la solución de entrada.^.. ní (10 //mtn)(6 g/l) Ai = 260 min Ai = 4.*.•**-• ¡J -.....-.'.-. como de los mecanismos de transporte involucrados..56 g/g (Payne.i r é®4 ¿f.. 1989)..-.•-.^^^^ .366 CAPÍTULO 7.3 h En la Figura 7.---...-^J..-. '•• ..>.--=.Adsorción en una columna ideal.7. ADSORCIÓN La curva que describe la concentración de soluto en la solución de salida en el tiempo.Adsorción de lisina.000 <?jde una resina cationica cuya adsorción máxima es: q0 = 1.v3-. .. .. Se desean producir 8000 ton/año de lisina a partir de un caldo que contiene 20 g/l de este aminoácido. Solución: El balance de masa global en la columna es: FyAAt = q0S despejando Ai y sustituyendo valores se tiene: Ai = Ai = Fy..

4. DISEÑO DE ABSORBEDORES 367 y (i.7.3 Tiempo (h) Figura 7. í .27: Columna y curva de ruptura para Ejemplo 7.t) F=10l/min y A -6g/i Curva de ruptura ideal o -4.7.

.37 x 104 {_ 20? x n / ñó~? S = 9763 * de r**ina h c) Cálculo del volumen del adsorbedor: V = St V = 9763 | x 4 h h V = 39. 1 U 9 v Ifl ano 3 - v A. Se estima que el ciclo tiene una duración de 4 horas (adsorción. dia i 24 h 20 f 4 F = 5.. yA 171 _ _ _ O S A. producción £4 -—- . JdLB£^^ %Ja-£ü£3¿a-Jde^^ nálisis frontal)..368 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN Estimar las dimensiones volumétricas de un sistema de 3 adsorbedores en carrusel.37 x 10 l/h b) Cálculo de la cantidad de resina necesaria en proceso: 6 C* __ ~ 5. 310 atas oír» año J" v A. permite diseñar columnas para lograr ci recuperación. Solución: a) Cálculo del flujo total a procesar (3 turnos 310 días laborables). 000 / Se requieren 3 adsorbedores de 39 m3 cada uno. estimar las pérdidas y determinar el tiempo ¿# de cada .. elución y lavado). o . en el cual cada lecho es lavado y eluído una vez que está completamente agotado.

. Bajo estas condiciones.9y¿ donde y A es la concentración de soluto en la solución a la entrada. 1982). Una guía general es considerar: yR = Q.28). .Los métodos basados en la teoría de equilibrio Los dos primeros métodos no están basados en la obtención de modelos a partir de relaciones de equilibrio y balances de masa. Esta variedad de métodos se debe principalmente a que las expresiones matemáticas de las curvas de ruptura son difíciles de manejar en algunos casos. Existen diferentes métodos para predecir la forma de la curva de ruptura entre los cuales se encuentran: . Análisis Aproximado Este método es especialmente útil para isotermas de adsorción favorables.Los métodos basados en la teoría cinética.7. así como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para ia fase de adsorción (Yang y Tsao. mientras que los métodos tercero y cuarto si lo están. .Los métodos aproximados. La concentración yp.Los métodos basados en la teoría de platos. se supone que la adsorción se desarrolla formándose una zona de transferencia de masa dentro de la columna con un perfil de concentración constante que viaja a lo largo de la columna (Figura 7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 369 ciclo. y la concentración y3 que corresponde a la concentración a la salida cuando el lecho se considera agotado. Para caracterizar la curva de ruptura se seleccionan dos concentraciones.lyA ys = 0. Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve a lo largo del lecho con una velocidad constante i?. de ruptura que es la máxima concentración que se puede tolerar a la salida. en el tiempo IR .4.

ADSORCIÓN Concentración d« la solución de alimentación = (c) Zona de adsorción i Zona de adsorción Concentración del efluente = tiempo Figura 7.370 CAPÍTULO 7. .28: Adsorción con patrón constante.

14. En base a lo anterior la fracción de lecho utilizado O está dada por: f(yA)L ¡(y*) .i?A¿ donde ti = — IR y L la longitud de la columna. Combinando las expresiones anteriores se obtiene: Í (7. El tiempo que tarda en salir la ZTM de la columna es A¿ = t$ — tp_. considerando simétrica la curva de ruptura.49) RJ (7. Por lo tanto se puede establecer que la longitud de la columna que está saturada Zs en el tiempo IR es : Zs = MR . de tal manera que : En la zona de saturación: q = f(yA) y en la ZTM : donde la funcionalidad dependerá del tipo de isoterma.48) (7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 371 existe una zona en la parte superior de la columna donde el adsorbente está saturado y una zona en el fondo de la columna donde se localiza la ZTM.51) IR Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fracción de lecho que está utilizado cuando termina la operación o sea en el tiempo ¿#.50) La longitud de la ZTM ZA está dada por: ZA = L^ (7.

Además. Teoría de Platos Cuando se utiliza la teoría de platos la columna se modela mediante una serie de etapas en equilibrio como se muestra en la Figura 7.29.29. el balance de masa de soluto en la fase líquida en la etapa n. ADSORCIÓN 0=1 -2* (7 52 ' > La fracción de lecho utilizado dada por la ecuación (7. la longitud de la columna y la velocidad de alimentación deben permanecer iguales en ambas escalas para mantener el mismo patrón de adsorción.372 CAPÍTULO 7.53) donde: n: Número de etapa. Esto conduce al diseño de columnas poco esbeltas con poca caída de presión en Jas cuales debe asegurarse una distribución uniforme del líquido. . Una limitación del empleo de la teoría de platos es que sólo puede ser utilizada para sistemas con isotermas lineales. di n dt (7. puede expresarse en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en el líquido = Velocidad de entrada de soluto . Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7. en su forma original esta teoría es de uso limitado por su incapacidad de predecir el número de etapas o la altura real de cada etapa y el efecto del cambio de las condiciones de operación sobre el comportamiento de la columna. En este proceso.Velocidad de adsorción de soluto y por medio de la ecuación : n.52) debe ser obtenida experi mentalmente y puede ser utilizada para escalamiento. De acuerdo a dicha figura la cantidad de adsorbente está fija en cada etapa y el líquido fluye a través de todas las etapas transportando al soluto. El empleo de esta teoría permite diseñar columnas en forma muy sencilla.Velocidad de salida de soluto .

.29: Teoría de platos en adsorción. Etapa 2 Figura 7.4.7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 373 Etapa F 1 y.

54) se obtiene: l(e + (I.En el tiempo t = O.c)K)V}$ = F(yn. e: Volumen de líquido por volumen de etapa. del líquido + vol.yn) (7.55) (7.53) y (7. La solución del anterior sistema de ecuaciones se facilita definiendo un tiempo adimensional mediante la siguiente expresión: T = Ft {(e + (1 .55) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: .En cualquier tiempo t=t.4. adsorbente). yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n (masa de soluto por volumen de solvente). yn — O para n = 1.54) donde el término en el paréntesis cuadrado de la izquierda de la expresión anterior representa un volumen hipotético. F: Flujo de alimentación (constante entre etapas para soluciones diluidas).3. . 2..374 CAPÍTULO 7..E)K)V] o bien en términos del volumen de lecho Vc = NV. La ecuación (7.N t/( al i mentación) = y A . .1 . ADSORCIÓN V: Volumen de la etapa (vol. El modelo supone que cada etapa está en equilibrio de tal manera que para isotermas lineales: qn = Kyn combinando las ecuaciones (7. qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n (masa de soluto por volumen de adsorbente).

56) yn = (7.e)K]Vc donde N es el número de etapas. La forma integrada de la ecuación (7. conduce a una expresión de la siguiente forma: (7.58) se puede encontrar que la expresión (7.60) donde: . la distribución de Poisson se aproxima a una distribución normal.57) La ecuación anterior puede ser expresada de forma más compacta manejando su forma diferencial: dyn dr (n-1)! (7. La ecuación (7.59) De acuerdo a la definición de media y desviación estándar._ dr ~ VA exp 1 T -T ' (7.58) que representa una distribución de Poisson. DISEÑO DE ADSORBEDORES 375 T — NFt ((e + (\ .4.55) queda expresada como: dyn La solución de la ecuación (7. con ayuda de la ecuación (7.56) está dada por: (7.30 que conforme se incrementa el número de etapas.59) tiene una media r0 = N y una desviación estándar a A = yN cuando n — N (a la salida de la columna).7. Puede observarse en la Figura 7. entonces se puede efectuar la siguiente aproximación: dyn _.59) para el caso de n = N.

io- 0. ADSORCIÓN 0.376 CAPÍTULO 7.00 \ 50 100 I 150 Figura 7.05 - = 100 0.30: Aproximación de la distribución de Poisson a la distribución Normal.5 N= 10 o. .

000 0.816 0.862 0.834 0.925 0.787 0. DISEÑO DE ADSORBEDORES Tabla 7.000 0.986 0.5 0.994 1.201 0.994 0.212 0.934 0.0 377 0.754 0.124 0.977 0.000 0.984 0.995 1.671 0.995 1.988 0.596 0.884 0.992 0.529 0.494 0.812 0.998 0.7 1.634 0.090 0.717 0.902 0.287 0.179 0.989 0.792 0.830 0.954 0.7 0.995 0.705 0.276 0.990 0.975 0.698 0.986 0.3.870 0.873 0.604 0.135 0.0 0.973 0.821 0.930 0.8 0.962 0.223 0.329 0.825 0.989 0.970 0.765 0.960 0.992 0.971 0.957 0.4 1.995 1.000 0.985 0.r) dr La ecuación (7.952 0.759 0.993 0.908 0.993 0.3 0.678 0.112 0.999 0.6 0.101 0.923 0.2 1.999 0.987 0.975 0.485 0.588 0.893 0.961 0.369 0.9 2.168 0.980 0.457 0.572 0.308 0.157 0.475 0.244 0.4 0.984 0.045 0.521 0.1 1.797 0.946 0.967 0.847 0.896 0.034 0.000 y Erf es la función error dada por: -"*dri Los valores de esta función simétrica están dados en la Tabla 7.982 0.447 0.942 0.965 0.936 0.446 0.994 1.340 0.802 0.31 se presenta la curva de y(L.913 0.918 0.976 0.866 0.3: Valores de la función error Erf(x).538 0.627 0.938 0.7. En la Figura 7. 0.771 0.776 0.611 0.60) puede ser expresada en función del tiempo real utilizando la definición de T para obtener: .736 0.983 0.503 0.657 0.4. En la misma figura se presenta la curva para la derivada de la función: _1_ VA dy(L.910 0.079 0.940 0.851 0.642 0.619 0.555 0.980 0.318 0.951 0.419 0.987 0.730 0.887 0.949 0.011 0.266 0.921 0.899 0.234 0.428 0.988 0.742 0.1 0.981 0.9 1.843 0.982 0.839 0.958 0.859 0.724 0.890 0.389 0.409 0.6 1.438 0.993 0.916 0.880 0. r} vs r para el caso de N = 100.3 1.563 0.972 0.056 0.877 0.955 0.994 0.990 0.978 0.991 0.932 0.255 0.991 0.649 0.023 0.000 0.807 0.968 0.546 0.580 0.855 0.711 0.379 0.974 0.664 0.349 0.928 0.685 0.905 0.991 0.979 0.359 0.8 1.992 0.997 0.297 0.190 0.512 0.990 0.0 1.781 0.068 0.2 0.146 0.5 1.944 0.947 0.399 0.748 0.691 0.964 0.966 0.

31: Curva de ruptura por teoría de platos con N=100. ADSORCIÓN i — Figura 7.378 CAPÍTULO 7. .

62) describe la curva de ruptura que predice la teoría de platos. relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones iniciales y de frontera del sistema. Teoría Cinética Los modelos de columnas de adsorción que se enmarcan dentro de la teorías cinética se desarrollan mediante la combinación de balances de masa.Velocidad .32. DISEÑO DE ABSORBEDORES 379 (7. Sin embargo. Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experimentales y la determinación de los parámetros hipotéticos N y HETP dados por la ecuación : HETP = - (7.63) donde HEPT es la altura equivalente de un plato teórico (de sus siglas en inglés).Velocidad de entrada de soluto por dispersión .61) o bien como: (T 4\ y(M) = y 1 + Erf t-tt 22<0 (7.Velocidad de salida de soluto por convección -f. La teoría de platos no permite predecir la forma de la curva de ruptura cuando cambian las condiciones de operación.62) \/Ñ donde la desviación estándar a está dada por 4=. Considerando una sección de una columna como la que se muestra en la Figura 7. La ecuación (7. el balance de soluto en la fase líquida en un elemento de volumen puede ser expresado en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en la fase líquida = Velocidad de entrada de soluto por convección . relaciones de equilibrio.4. con este propósito suelen combinarse frecuentemente los resultados de la teoría de platos con los de la teoría cinética que se presenta en la siguiente sección.

t) Figura 7. ADSORCIÓN Entrada de A por convección Entrada de A por dispersión Az Adsorción de A Acumulación de A Salida de A por convección Salida de A por dispersión y(L.32: Componentes del balance de soluto en un elemento d< volumen de una columna de adsorción. .380 CAPÍTULO 7.

es dec de la forma que adopta el término R de la ecuación (7. v es h velocidad superficial del fluido (F/A). En un sistema isotérmico y despreciando los efectos radiales este balance puede ser escrito como: Ai dz Edy A dz dividiendo entre AV = A&z y tomando límites. se obtiene la ecuación diferencial que describe el balance de soluto en una columna: dy _ JET.7.) qi también introduce variabilidad al modelo. La diversidad de modelos existentes para lechos empacados de a cuerdo a la teoría cinética. poro.64) 2 dt dz dz donde E es el coeficiente de dispersión axial basado en el área transversal del lecho (este coeficiente debe distinguirse del coeficiente D el cual está basado en el área transversal sólo del líquido). resistencias combinadas. el modelo puede no considerar los efectos de flujo no ideal contemplados en el térmii de dispersión axial (Tabla 7.4. etc. d y _ v— _ ft ± (7. se deriva por un lado de los diferente mecanismos que pueden controlar la velocidad de transferencia de mas entre las fases (película. R es la velocidad de transieren cía de masa entre las fases por unidad de volumen del lecho (sólido -\ líquido). Además. y por oti lado de la forma de la curva de equilibrio (lineal.Velocidad de adsorción de soluto por el sólido.En algunos casos la acumulación en la (ase líqui . DISEÑO DE ADSORBEDORES 381 de salida de soluto por dispersión ..). Langmuir. Modelo Cinético : Equilibrio no Lineal Favorable y Fuer Impulsora Lineal. 2 En los siguientes párrafos se presentan algunos modelos particular de la teoría cinética.64).4). etc.

Si la velocidad de transferencia de masa está controlada sólo por la película de fluido que rodea la partícula de adsorbente entonces. En estos casos el retardamiento de la curva de ruptura sólo obedece a los mecanismos de transferencia de masa.67) combinando las ecuaciones (7.67) se obtiene el siguiente par de ecuaciones: .66) sólo depende del mecanismo controlante de la transferencia de masa.382 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN Tabla 7.68) ..DO) /i-r /?/>\ El término R de las ecuaciones (7. R = kLa(y . Tipo de Equilibrio Lineal Favorable Desfavorable Irreversible Resistencia Controlante Poro Superficie Película Combinadas Efecto Mezclado Flujo ideal tipo tapón Flujo tapón con dispersión axial es mucho menor que la acumulación en la fase sólida (equilibrios favorables) y la dispersión es despreciable.64) se puede escribir como: r> -v— = R oz (7.v— = kLa(y -y*) dy (7.y*) (7.65).65) y (7.= -/t \ a r~> (7.66) y (7.65) El balance de masa del soluto sobre el adsorbente se puede expresar como: a — £)TT. (7.4: Algunos factores a considerar en un modelo cinético de adsorción. Bajo estas condiciones la ecuación (7. A continuación se presentan algunos casos particulares: Caso 1 : Control de la transferencia en la película.

68) y (7..K T = -y — y VA - 2M y = J_ 9* donde: £: Distancia axial adimensional. X' Concentración adimensional de soluto en el líquido.c) = kLa(y .En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto en el seno del sólido y de acuerdo a la ecuación (7. Y: Concentración adimensional de soluto en el adsorbente.69) Estas ecuaciones pueden expresarse en forma adimensional (solución universal) utilizando el siguiente cambio de variables: zkLa v kLa (t . DISEÑO DE ABSORBEDORES 383 (I .y ' ) (7.69) adimensionalizadas se expresan: Caso 2 : Control de la difusión del soluto en el seno del sólido del adsorbente. Las ecuaciones (7.25): .4.7. yA' Concentración de soluto en el líquido a la entrada de la columna. <//?: Concentración de referencia del soluto sobre el adsorbente. T: Tiempo adimensional medido a partir de que la solución alcanza el punto z.

(7.75) conduce a: dy ^pkpa(q* . ( Z£ -v x = Y = q/qR obteniéndose la siguiente expresión : -| = f = ( y *. ADSORCIÓN R= (l-e)VaX<7*-<?) (7.66) y (7.71) La combinación de las ecuaciones (7.e)^sksa(q* .q) v-— = (7.r ' (7 74) ' Caso 3 : Control de la difusión del soluto al interior del poro.e)^t = (I .75) La combinación de las ecuaciones (7.= (\-e}il>sksa(q*-q) (I .73) estas dos ecuaciones pueden ser expresadas en forma adimensional con: = ipsksa [t \ .66) y (7.384 CAPÍTULO 7.72) (7.65).76) .65).71) conduce a: -v^. (7..En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto al interior del poro del adsorbente y de acuerdo a la ecuación (7.32): R = ^*y q) QR/yA (7.q) (7.

79) Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional utilizando el siguiente cambio de variables : zk¿a í = T = v (<-V tí VA .78) c/c. DISEÑO DE ADSORBEDORES 385 1 n- j ~ (7.7.v— = kda(y .77) Las dos ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional con: zijjpkpd í = T — JM X Y = = obteniéndose la siguiente expresión : = (y* .Y) (7.y*) uz y el balance de soluto sobre el adsorebente como: (7.65) se puede aproximar a: dy .. C/T Caso 4 : Control de la dispersión. la ecuación (7.4.Si el mecanismo controlante de la transferencia de masa es sólo la dispersión axial.

utilizando un coeficiente global de transferencia. permiten definir el concepto de número de unidades de transferencia de una columna de adsorción de acuerdo al tipo de mecanismo controlante. Asimismo el análisis puede extenderse para el caso donde exista una combinación de mecanismos controlantes.. Este número se define como la expresión que adimensionaliza la ecuación de balance. De acuerdo a lo anterior: NTUL = (7. Las ecuaciones adimensionales de cada uno de los cuatro casos anteriores. como en el caso de las operaciones que se realizan en tanques.En las columnas de contacto diferencial no existen etapas reales de contacto y separación. que es una medida de la dificultad de la operación. Número de Unidades de Transferencia (NTU).386 CAPÍTULO 7.82) yA N = z^a v 4) NTUd = — v (7. Debido a lo anterior estas columnas se caracterizan utilizando el número de unidades de transferencia. ADSORCIÓN \ y x = — i Y = — ' obteniéndose la siguiente expresión : _9x dí ' El análisis presentado para cada uno de los casos anteriores puede ser extendido para el caso en que el mecanismo controlante sea la reacción de superficie. Sin embargo.85) . como se ha planteado anteriormente este mecanismo generalmente no es el controlante.

89) zv Los valores de NTU pueden ser estimados con las ecuaciones anteriores y con correlaciones para cálculo de parámetros de acuerdo a la geometría del sistema y a las condiciones de operación. (7.s.26).gR(l -e) -e) (7. Dentro de éstos se puede destacar el caso desarrollado en la literatura para equilibrios favorables llamado "Patrón constante" (Hall et a/.p y c/.32) y (7. la difusión en el seno del adsorbente. El mecanismo controlante es aquél cuya NTU sea el menor. las concentraciones adimensionales de la curva de ruptura son función de f y r.D. DISEÑO DE ADSORBEDORES 387 donde los subíndices L.36). En este caso la curva de ruptura es característica de cada mecanismo controlante. respectivamente. Sin embargo.86) yA p (l Wzi/>.88) (7. . estas ecuaciones han sido resueltas para algunos casos particulares.4.87) (7. Si se utilizan las correlaciones (7.7. es decir: r ) (7-90) No existe una solución general para estas ecuaciones diferenciales. la difusión dentro del poro o la dispersión. En términos de los grupos adimensionales anteriores. 1966). las ecuaciones anteriores pueden expresarse como: NTUL = NTUS = NTUn = NTUd = v (7. Asimismo se puede citar los resultados que se obtienen cuando la curva de equilibrio es lineal o cuando se usa el modelo de adsorción a contracorriente. especifican que el mecanismo controlante es la película. estas mismas expresiones pueden ser utilizadas para el cálculo de parámetros utilizando datos experimentales. Por otro lado.

ADSORCIÓN Estos dos últimos casos se presentan en los siguientes párrafos.-v^. (7. . 10 cual permite precisar la metodología del uso de los modelos cinéticos.93) (l-e)ff = * Condiciones iniciales y de frontera. (7.. en el caso de que el control de la transferencia de masa esté dado por una resistencia lineal es: Relación de equilibrio.El proceso es isotérmico. R = ka(y-y*) Balance de soluto en el adsorbente.92) Velocidad de transferencia de masa.La distribución y el tamaño de las partículas del adsorbente son uniformes.La fuerza impulsora de la adsorción es lineal.R (7. Con las consideraciones anteriores el sistema de ecuaciones que describe el comportamiento de la columna. .91) óz (7. .No existe dispersión en la columna. O .388 CAPÍTULO 7. Modelo Cinético: Equilibrio Lineal y Fuerza Impulsora Lineal en el Líquido.La acumulación de soluto en la fase líquida es despreciable.94) .La relación de equilibrio es lineal. 9 = Ky' Balance de soluto en fase líquida. . . Este modelo puede ser aplicado cuando se utilizan razonablemente las siguientes consideraciones: .

94) conduce a las siguientes dos expresiones: dy_ _ dz (7. x = O.4.95) (7. y = JM La combinación de las ecuaciones (7. Y = 0.91)-(7. V = O. DISEÑO DE ADSORBEDORES 389 t = 0. V z.98) con las condiciones: r = 0. 9 = 0 ¿ > O. V r .96) Estas dos ecuaciones conjuntamente con las condiciones iniciales y de frontera.97) (7.e) obteniéndose el siguiente sistema de ecuaciones: (7. pueden adimensionalizarse con las siguientes variables: zka v T = X = •y — fi KyA y K(l .7. z = 0.

1 0.001 10 20 50 200 500 1000 000 Figura 7.99 0. Las ecuaciones (7.33 se presenta una solución gráfica de la ecuación (7.98 CAPÍTULO 7.2 0. Copyright ©1973.995 0.97 ) y (7. obteniéndose la siguiente expresión para la curva de ruptura: X = 1~ (7.02 0.002 0.33: Solución gráfica de la ecuación de la curva de ruptura. 0. Todos los derechos reservados. resistencia lineal. En la Figura 7.390 0. Sin embargo. y J0 es una función Bessel de primera especie y orden 0. Fuente: Vermeulen et al.4 0. Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son análogos para cada . Modelo cinético: equilibrio lineal.9 0.99) donde i = \/—T. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. 1960).95 0.5 0. ADSORCIÓN :i 0.7 06 .98) han sido resueltas utilizando transformadas de Laplace (Bird et «/.99).01 0.05 0. es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables al caso particular.3 0.998 0. 1973.999 0. Esta gráfica puede ser usada para evaluar ka a partir de datos de laboratorio o predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones.8 0.005 0.

El balance de soluto entre la salida de la columna y un punto z está dado por: F(y . el balance de soluto entre las fases está dado por: y*) (7.86)-(7. Volumen líquido en la columna mucho menor que el volumen procesado. S es un flujo hipotético de adsorbente. de tal manera que en la parte superior de la columna el adsorbente está en equilibrio con la solución de entrada y en la parte inferior la solución está libre de soluto.La curva de ruptura tiene igual forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et a/. Mecanismo de transferencia de masa lineal. De acuerdo a la ecuación (7.34).En una adsorción de lecho fijo la zona de adsorción se mueve hacia abajo de la columna. Modelo de Adsorción de Lecho a Contracorriente.0) = S(g .64) y las suposiciones del modelo. de tal manera que £ o el número de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuación (7. Dispersión despreciable.89).7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 391 uno de los casos donde un mecanismo es el controlante. se supone que el adsorbente se mueve hacia arriba a contracorriente del fluido. El modelo supone que la longitud de la columna es infinita. En el modelo de adsorción de lecho a contracorriente.4.. debido a que para un equilibrio lineal Y* — Y = x~X*. de tal manera que la zona de adsorción en la columna permanece estacionaria (Figura 7. El modelo supone además: Adsorción isotérmica.0) (7.100) que es la curva de operación del sistema. 1966).99) es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7.101) dz .

. ADSORCIÓN F S q =0 Figura 7.34: Modelo de adsorción de lecho a contracorriente.392 CAPÍTULO 7.

de tal manera que: dz = /" (y . de tal manera qu« N = NTU Esta aproximación permite correlacionar la pendiente de la curva c rompimiento con variables de operación. coi los resultados de la teoría cinética con un mecanismo lineal controlant y equilibrio lineal.y*) JyA dy integrando se obtiene: dy y o bien. de tal manera que para cae uno de los casos estudiados se tiene lo siguiente: . resumidos en la ecuación (7.102) [HTU][NTU] La aplicación de este método requiere una integración numérica de datos de laboratorio para evaluar fca.La combinación de modelos obtenidos por medio de la teoría de platos con modelos obtenidos por medio de la teoría cinética.Teoría Cinética (Equilibrio lineal). lo cual es útil para establecer las relaciones necesarias para mantener los mismos perfiles de concentraciór (pérdidas. etc.) entre dos escalas de operación d( interés.. tiempo de operación. permite mantener la estructura sencilla de la teoría de platos y poder correlacionar el efecto de los cambios en las variables de operación sobre la forma de la curva de ruptura.7. Una primera aproximación a este enfoque es la combinación de lo resultados de la teoría de platos resumidos en la ecuación (7.99). con el cual se pueden efectuar estudios de escalamiento.4.62). L= (y-y*) (7. Combinación Teoría de Platos . DISEÑO DE ADSORBEDORES 393 La ecuación anterior puede integrarse para encontrar la longitud necesaria de la columna para lograr un determinado grado de separación.

entonces.21). v J por ecuación (7. N V L Cuando el mecanismo controlante es la difusión del soluto en el seno del adsorbente.14). de acuerdo con la ecuación (7. de acuerdo con la ecuación (7.37) y (7. 1/2 por ecuación (7.87): L Sí el mecanismo de control es la difusión del soluto al interior del poro.394 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN VA y_ = l l + Erf\ ±-r\ _25_ 2 v/JV (7.103) ! Cuando el mecanismo controlante de la adsorción está localizado en la película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente.89): . de acuerdo a la ecuación (7.86). de acuerdo con la ecuaciones (7.88): yv L En el caso que el mecanismo controlante sea la dispersión.

es una constante de proporcionalidad.4. en una columna empacada.10~6 m IV. = 1 para control de la difusión en el sólido.71 mg/ml de esta proteína. Ejemplo 7. a partir de una solución que contiene 1.35. DISEÑO DE ABSORBEDORES 395 Lv N ~ T«P De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que: N -Kvn¿n+l 4— (7.. El volumen del lecho es de 2. Se utiliza una columna de 1 cm de diámetro empacada con agarosa con proteína A inmovilizada para adsorber ImG.019 = h 11 —43 ™ .1 mi con una porosidad de 0.7. con = 1/2 para control de la película.104) V y n n n n donde K.9. el = 0. Datos del adsorbente: \-G dp = 90 x. El equilibrio es tipo Langmuir.96 A/9 = 28 Kd f rrr mi 9 = 0. = O para control de la dispersión.Adsorción de Inmunoglobulina G en proteína A inmovilizada en una matriz de agarosa. = 1 para control de la difusión al interior del poro.

5 x 1Q- m2 — s Datos de la Columna: Dc = 1 c m A = 0.35. . b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fracción de lecho ocupado cuando y/yA = 0. c) Comparar los datos experimentales con la predicción del modelo de platos.396 Datos solución: pL = 1000 CAPÍTULO 7.1 2 F = 0.5 x 10~4 m —s Dp = 3.4 s min 11 DAB = 5.785 cm2 Correlaciones: El coeficiente de transferencia de masa puede ser estimado utilizando la siguiente correlación: 1/3 DAB V PL ) \PLDAB La curva de ruptura experimental se muestra en la Figura 7. Se pide: a) Estimar gráficamente el porcentaje de pérdidas si se deja correr la adsorción hasta que y/yA = 0. ADSORCIÓN ¡ TU" UL = 9.9 xlO.1.1. suponiendo que el lecho se agota a los 200 min. d) Comparar los resultados experimentales con la predicción del modelo cinético: equilibrio lineal-resistencia lineal.

9 0 ) Pérdidas Pérdidas = = 0.35: Curva de ruptura experimental ImG-Proteina A. e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de lecho continuo.7.9 % b) La fracción de lecho ocupado de acuerdo a !a ecuación (7. la cual de acuerdo a la curva de ruptura experimental es : (0. Datos de: Hortsman y Chase. Solución.0 ) ( 1 1 0 . DISEÑO DE ABSORBEDORES 397 _y VA O ' " 'é¿ ' ' ÍOO 150 200' ' '¿V ' 300 ' ' ' ' t (min) Figura 7.52): . 1989.4.a) Las pérdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresión: L ydt Pérdidas = -^— En forma aproximada la expresión anterior equivale a el área del triángulo bajo la curva de ruptura en el punto de ruptura.1 .

1973): Cálculos: Área de la sección transversal de la columna: . ADSORCIÓN c) El Modelo platos está dado por la ecuación (7.99) que puede aproximarse a (Vermeulen et -a/.398 CAPÍTULO 7.62): + ^-/f í t - De la Figura 7.5 yA t0 = 140 min Para -^ = 0.36 se muestra la curva de ruptura de acuerdo a este modelo.33 min En la Figura 7. La curva de ruptura en este caso está dada por la ecuación (7.35 se pueden obtener dos pares de datos para calcular Para -^ = 0.1 tR = 110 min Con estos dos puntos sobre la curva de ruptura se puede estimar a «-i 110-140 con auxilio de la Tabla 7.3 se obtiene: <j = 23. d) Modelo Cinético.

36: Curva de ruptura. DISEÑO DE ADSORBEDORES 399 0. Modelo de platos.7. Ejemplo 7.2 O ~ 200 t (min) 300 Figura 7.4 0.4.8 0. .6 0.9 c.

5 x 10-11 ^ = 3xlO-6s Área por volumen de lecho: kL a = 6(1 - 6(1 -0.333 m"1 a = .3 x 10~5 ^ x 1000 *'"N 1/2 2 + 1.45" x • 9.400 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN A = A Velocidad superficial: = —¡— 0.35) 90 x 10~6 m a = 43.4 mtn sa 0.785 cm2 8.5 x 10-4 lOOO^f x 5.3 x 10~5 — s Coeficiente de Transferencia de Masa: Utilizando la correlación proporcionada se puede calcular x 1Q-6 m) 5.785 cm2 F 4 TT x 1 cm2 A = t? = u = 0.5 x 10-11 sji 90 x 10~6 m x 8.

37a se observa que el ajuste del modelo a la curva real es muy pobre.35 8. en la ecuación de equilibrio.13 s~l s Variables adimensionales: _ V 777 401 í (2. En la Figura 7.346 y de acuerdo a la ecuación (7.5 muestra algunos valores de estos cálculos. e) Modelo Contracorriente.37 se muestran los resultados en forma gráfica. se produce un ajuste más adecuado (Figura 7.3 x 10-5 ^ = 41.3X10-5 ?xig^E 25(1 -0.5 x 10~5 m/s.38. L = 'f . La Tabla 7. en el rango de O a T/¿. Utilizando el mismo modelo con K = 33 y ki — 1.8 (í-f) . En la Figura 7. La curva de operación que se muestra en la parte superior de la Figura está comprendida entre los puntos (O.13 s'1) (8. 0) y [ yA.37b).6) 3 donde i está dado en segundos.102).138) el empleo de este modelo implica una integración como la que se muestra en la parte inferior de la Figura 7.<l(yA) }• La curva de equilibrio se obtiene dando valores a y. ka . DISEÑO DE ABSORBEDORES Coeficiente de transferencia de masa volumétrico: kLa = 3 x 10~6 — x 43.e) = Q 10 J -1 /i V 2.35) r = 8 x 10~ (¿-112.333 m~l = 0. De acuerdo a la ecuación (7. El área bajo la curva de la Figura 7.4.67 cm)(0.7.67 cmxO. Los valores de y* se obtienen con valores de q tomados de la curva de operación y sustituidos la ecuación de equilibrio.38b es de 1.

.60. Ejemplo 7.37: Curva de ruptura.9d.80. ADSORCIÓN i.o0.37: Continuación.. K = 33 y kL = 1.20 O 50 100 150 t (min) 200 250 Figura 7.40.402 CAPÍTULO 7.80.60.Modelo cinético lineal. Modelo cinético lineal.9d.20 50 100 150 200 250 t (min) Figura 7.o- y_ Xa 0.40. K = 25 y kL = 3 x 10'6 m/s i. Ejemplo 7.5 x 1CT5 m/s .

2000 0.0001 0.8 002.0 005.0077 0.2694 36.1000 0.1345 31.1 020. Ejemplo 7.7 022.5274 42.7009 1.7099 1.7.0006 0.4258 39. y 1.675 cm 0.0001 q* 42.5: Cálculos para el modelo contracorriente.1 202.4031 12.3498 0.7 002.4.0500 0.8276 08. DISEÑO DE ADSORBEDORES 403 Tabla 7.3265 14.9 e.1243 y* 1.1 010.2487 00.1594 26.5272 42. En la teoría de equilibrio en la cual todos los efectos cinéticos se ignoran.9583 i/(y-y*) 111.5150 42.8 011. La forma de los perfiles de concentración y por lo tanto de las curvas de ruptura puede ser modificada considerablemente por efectos cinéticos.0100 0.0003 0.7095 1. la respuesta dinámica se estima con la suposición que existe .6657 1.2 L = x 10~5 ^ x 100 cni 2.0012 0.9740 02.00417 s~l (1.5273 42.5000 0.5250 42.7 101.2 033. en el sentido que no introducen nuevos patrones de comportamiento.0025 0.7090 1.0050 q 42. pero éstos siempre son secundarios.2435 00.0300 0.4349 04.7050 0.7461 00.4870 01.6236 1.5026 42.5261 41.346) Teoría de Equilibrio La forma cualitativa de la respuesta dinámica de una columna está determinada completamente por las relaciones de equilibrio. sino que sólo modifican el comportamiento pronosticado a partir de consideraciones de equilibrio.

4 I 1.38: Modelo lecho a contracorriente. b) Integración gráfica.9e.2 y (mg/ml) I 1.6 Figura 7. Ejemplo 7. a) Curvas de equilibrio y operación.404 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN I 1. .

7..4..4 l 1.6 i 0.8 i 1 y (mg/ml) i l 1.38: Continuación.6 i 1.2 i 1. .4 i 0. DISEÑO DE ADSORBEDORES 405 i/y-y* 0.2 i 0.8 Figura 7.

= O (7.108) . así como para el análisis del comportamineto de sistemas complejos. dy. Por regla de la cadena: (7.105) R = (l-£)-J. dt dy dz W(y) = ----j- (7. La utilidad del enfoque de la teoría de equilibrio puede ser ilustrado considerando el caso simple de un sistema en el cual el flujo es ideal y se alcanza el equilibrio local. ADSORCIÓN un equilibrio local a través de la columna.dq] dy _ dy £) V dy\ 8t ~ ~ dz rearreglando. Bajo estas condiciones la ecuación (7. R (7. flii f) 7i r\ii f\ p.106) dq dq dy dt dy dt combinando las ecuaciones anteriores se obtiene: dy^ = _ dy__(l_ \^[dy_ _ .107) A partir de la ecuación anterior se puede definir W(y) como la velocidad del frente de concentración de una onda.64) se reduce a: e— = — v— con.406 CAPÍTULO 7. Este enfoque ha sido útil para el análisis preliminar de columnas.

7.5. En el estudio de la adsorción son de fundamental importancia cuatro aspectos: Los mecanismos de adsorción de acuerdo al tipo de interacción soluto-adsorbente. En tales situaciones la onda debe ser sustituida por el frente de choque.7. se compensa con los efectos dispersivos y la onda no se altera a lo largo de la columna (Ruthven. pero se realiza más frecuentemente en columnas de lecho fijo. .5 Sumario La adsorción permite procesar soluciones diluidas para concentrar solutos mediante su inmovilización reversible en sólidos especializados llamados adsorbentes. las relaciones de equlibrio de los sistemas y la cinética de la adsorción. La descripción de la dinámica de la adsorción es relativamente compleja y puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a diseños que varían desde los puramente empíricos hasta los muy sofisticados. 1987). Cuando la isoterma es favorable dq/dy disminuye al aumentar la concentración y la velocidad de onda aumenta. La operación de adsorción puede realizarse en forma intermitente o continua en tanques agitados. La zona de transferencia de masa tiende a desaparecer debido a que se forman perfiles invertidos ilógicos. los tipos de adsorbentes disponibles. En el comportamiento llamado de patrón constante el efecto de compactación de la onda cuando el equilibrio es favorable. La zona de transferencia de masa se ensancha conforme avanza la onda a través de la columna. SUMARIO 407 Cuando la isoterma es desfavorable el término dq/dy de la ecuación anterior aumenta al aumentar la concentración y la velocidad de onda disminuye. formando un patrón llamado proporcional.

ADSORCIÓN 120 110 100 090 oao 070 q (mg / mi) 060 050 040 030 020 010 0.3. 7. .4 1.2.8 y (mg / mi) Figura 7.6 si la adsorción se deja a correr 2.39. 7. Todos los derechos reservados. 7. Copyright ©1990.Un volumen de 2 litros de una solución proteica con una concentración de soluto de 0..Estimar el porcentaje de pérdidas del Ejemplo 7. Estimar la concentración final de soluto en el adsorbente.4 0.408 CAPÍTULO 7.2 0.6 1. Fuente: Skidmore et al.Calcular las constantes k¿ y q0 para el sistema Albúmina-S Sefarosa FF a pH=5 y T=25C° a partir de la Figura 7. se mezcla con 50 mi de adsorbente en una operación intermitente y se obtiene un 90 % de recuperación..8 1. 1990.39: Curva de equilibrio para albúmina.6 0.5 mg/ml.5 horas.1.6 Problemas 7. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.0 1..2 1.

4. (Ver Problema 22L4 de Bird. F = 50 cm 3 /mm. y por lo tanto incrementar la recuperación..99). K y F. el procesamiento de caldos completos en columnas puede originar problemas de taponamiento de éstas.Encontrar la expresión matemática para q(t) en el caso del adsorbedor tipo tanque agitado continuo. y que el equilibrio es lineal con K = 0. se ha estudiado como una alternativa para disminuir las pérdidas asociadas a varios pasos de recuperación.5 m/h y el coeficiente volumétrico de transferencia de masa toma un .6. kL = 10~4 m/5.7.. A = 0. Este sistema ha sido utilizado en la recuperación de novobiocina (Payne. si la velocidad de flujo de líquido permisible es de 1. 7. Analizar el efecto sobre la curva de ruptura de — 20 % de variación en ki..9.Obtener la ecuación (7.5..Simular el perfil adimensional de un adsorbedor utilizando el modelo de la teoría de platos con ¿0=30 min y: a) N=50 b) N=100 c) N=300 7.785 cm2 y L = 10 cm. entonces una alternativa es el uso de adsorbedores continuos tipo tanque. 7. considerando los parámetros restantes constantes.7. utilizando una relación de flujos de 10 a 1.33 /i.015 l/g adsorbente. la relación de adsorbente a flujo es S/F = 98 g — h/l y la concentración de la solución a la entrada y A — 2 g/L Considere un tanque perfectamente agitado en el cual la solución y el adsorbente siempre están en equilibrio.6. 6 = 0. Determinar la altura necesaria de la columna para recuperar el 96 % de cefalosporina.a.El procesamiento directo de caldos completos para la recuperación de productos extracelulares. 1989)..8. 1960) 7. 7. Sin embargo.. Obtener la variación de la concentración de novobiocina en la salida del tanque si el tiempo de residencia en el tanque VL/IF = 0.Se utiliza una columna de intercambio iónico de lecho móvil para separar cefalosporina de un caldo de fermentación que contiene 5 g/l del antibiótico.La curva de ruptura de una columna puede simularse adecuadamente mediante un modelo cinético lineal con K = 150.35. PROBLEMAS 409 7.

1 g/l.86. ADSORCIÓN valor de 12 h~l.= P + (1 -P)exp(-Bt) VA estimar los parámetros P y B. La relación de equilibrio del sistema es: q = 25y'/2 donde q está en g/l de resina mientras que y en g/l de solución. utilizando una columna de 5 era de diámetro y 50 cm de longitud.11.. 1987). La alimentación a la columna tiene una concentración de 4 g/l y se desea que la corriente de salida contenga solamente 0. P = 0. Considerando el modelo de adsorción intermitente (equilibrio lineal y control de la película) siguiente: ^. Resp.6 ra 7. y a los 30 min de 5.. Resp.410 CAPÍTULO 7..1) Estimar el flujo manejable por la columna. En esta columna el coeficiente de transferencia de masa volumétrico esperado es de 9 h~l. Para tiempos muy grandes el valor es de 7.39 ( Pungor et a/.12.755.103 7. Resp.En la adsorción intermitente de /3-galactosidasa la relación de la actividad inicial de la enzima en la solución a la actividad de la enzima en solución a los 10 min es de 2.En la adsorción intermitente de albúmina en un adsorbente de Sefarosa la curva de equilibrio se puede aproximar en forma lineal a: .10.Un nuevo antibiótico se va a separar de un caldo de fermentación mediante una operación de adsorción en lecho fijo. 150 l/h 7.135 y B = 0. L = 0. La relación de equlíbrio del sistema es: q = 20J/1/2 y la linea de operación está dada por: 9 = 5(y-0.

PROBLEMAS 411 q Los parámetros de la adsorción son: kL = 5 x 10~6 m/5 e = 0.En una columna de lecho fijo empacada con S Sefarosa se realiza la adsorción de albúmina bajo las siguientes condiciones: q = kL dp l3Qy(aprox.99 dp = 105 x 10-6 m yÁ = 2 mg/ml Representar gráficamente la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción.6.6 x 10~6 m/s = 105 x 10~6 m e = 0.7.35 y A = 1 mg/ml Dc = 1 era L = 2. obtener una representación gráfica de la curva de rompimiento del sistema.3 era F = 1 cra3/ra¿n Mediante el modelo cinético de resistencia en la película y equilibrio lineal.En condiciones de adsorción muy favorables (irreversible). la forma de la zona de transferencia de masa de la columna es independiente del tiempo (patrón constante). Bajo estas condiciones y con el control de la resistencia a la transferencia de masa al interior del poro ..13. suponiendo una sola resistencia controlante y equilibrio lineal.14.) = 5. 7. 7..

v = 0.2737Vrt/p .v = 0. a)..Arsanílico para adsorber anticuerpos monoclonales bajo las siguientes condiciones: dp = 0..0.v = 0.020 cm/s a2.015 cm/s a3.¿Que significa el punto de intersección de las tres curvas? ..1 y una columna de 15 x 60 era ..Graficar x vs volumen alimentado (Ft — eV) en el rango de 70 a 86 litros.01 era v L e ^ VA = = = = 0.010 cm/s b).412 CAPÍTULO 7.6 18.Gra. c). 1985): X =1 - . permite representar varias condiciones de operación.. ADSORCIÓN (modelo adecuado para algunos procesos de afinidad). y está dada por (Arnold et a/. la curva de ruptura adimensional es única. en los siguientes tres casos: al.5 era 0.Acido.1 el modelo se ajusta a los datos experimentales con NTUP = 8.-1 Cuando se emplea una columna de Sefarosa 4B.ficar la curva de ruptura para el escalamiento del sistema con qn/yA = 18.011 cm/s 16.. para cada uno de los tres casos anteriores.

C. A. Res.The characterization of affinity columns by pulse techniques.M. y Wilke. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.W. Fenómenos de Transporte. 401-445. Cussler.N. 30. Pore and solid diffusion kinetics in fixed-bed adsorption under constant .A. Draeger.C. John Wiley and Sons.A. 370-375. y Zwarik. Schuler. C. W. 1960.D. M.. B. Eagleton. Eng.7 Bibliografía Arnold. 22-27. G. 13. H. y Lightfoot. J. Elsevier Applied Science..(Ed. Bird.A. 1990. BIBLIOGRAFÍA 413 7.. Blanch. B9-B36. 325-334.7. 2. L. 1985. y Chase. 183-207. John Wiley and Sons. •f.pattern conditions. y Vermeulen. 22. New York. Chem.Predicting the performance of affinity adsorbers. Fluidized bed adsorption for whole broth extraction. Stewart. 1988. 1962.F.7. K. 212-223. 426-489. 1989.L. Marcel. Dekker. Wilson. 1990. R. New York. Ed.. Belter. y Chase.H. Biotechnology Progress.J. D. L. Gleason. 6. Modelling the affinity adsorption of immunoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. 5. E. Des.A. New York. N. 6. México.B. 1989. Y. Hall. T. 5.). Payne. 1966. J. W. En: Separations Processes in Biotechnology. Journal. H. Reverte S..A. F.). O. London.E. (Ed). 14. Asenjo.R. Modelling of protein adsorption in liquid fluidized beds. Chem. IEC Fundamentáis. 67.L.J.. H. En: Separations for Biotehnology 2.. Pyle. 1. "3* ?§r . II. 243-254. P. Gailliot. Clonis. AIChE. J. F. Process affinity chromatography. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. 145-179. 1990. (Ed. Eng.L. Horstmann. Chemical Reaction Engineering. Levenspiel.R. E..P. Acrivos. Bioseparations of traditional fermentations products.. y Hu.

. (Eds. 411-418. 71-76. 1990. H.A. (Ed.. y Hiester. Yang. y Kilpatrick. M. M. Carbonell.K. J. D.). (Ed. Fifth Edition. A. En: Comprenhensive Biotechnology.Y. 507-521. Asenjo. Klein. 1973. C. Ruthven. Affinity surfactants as reversibly bound ligands for high-performance affinity chromatography.L. Adsorption kinetics and adsorption column dynamics. 604-608. G.A.B. y Cotton. 7. 1989. Flechter.). G. En: Fundamental of Adsorption.M. Bio/Technology. 1988. Springer-Verlag. Vijayalakshmi. Torres. Guzmán.A. New York. Me Graw Hill. 1987. Vermeulen. 1-50. y Chilton. Analytical Biochemistry. ADSORCIÓN Ptmgor.L. Pseudobioespecific ligan affinity chromatography. Liapis. Wang. Dekker. 1982. 32.K.). 5. 12.K. 1985.J. New York. y Tsao. Cordón. N.. 1990.).T. R. 1987. B. En: Chemical Engineer's Handbook. N. Skidmore. H. Murray. New York. Marcel. Modelling single-component protein adsorption to the catión exchanger Sepharose FF. En: Separations Processes in Biotechnology.H. C.G. Horstmann..L. Adsorption and ion exchange. (Ed.L. Affinity chromatography.. y Cooney C. of Chromatography. Afeyan. 25. Ion exchange in purification. N. M.L. . G. 359-400. Packed-bed adsorption theories and their applications to affinity chromatography.. D. A. (Ed. E. 1-18 Yarmush. R. En: Advances of Biochemical Engennering. 16. 498. TibTech. J.414 CAPÍTULO 7.F. T.I. y Chase. C.R. Continuous affinity-recycle extractions: A novel potein separation technique. J. 171. Permagon Press. 113-128. N.). Perry. New York.

Parte IV Purificación del Producto .

En el capítulo 9 se presenta la operación de precipitación. muy característico de esta operación. En los capítulos 10 y 11. la ultrafiltración y la electroforesis. . que requiere un enfoque fuertemente fisicoquímico.417 Una vez que los caldos biológicos han sido concentrados el paso siguiente dentro de un esquema general de separación. es la purificación del producto de interés. En esta parte se presentan los principios generales de las operaciones más utilizadas para efectuar esta purificación: la cromatografía por elución. por lo que es la primera operación tratada en esta parte. la precipitación. La cromatografía por elución puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir la adsorción en lecho fijo. se presentan las operaciones de ultrafiltración y electroforesis dado que sus principios permiten una presentación más unificada.

El adsorbente constituye la fase estacionaria de la columna. sino que sólo se carga en forma controlada una porción de ésta.. radica principalmente en la dilución del soluto.1 Introducción La cromatografía por elución es un método para separar en sus componentes (resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propósito de puricar productos de interés. Una vez colocada la mezcla se hace pasar un líquido que favorezca la desorción llamado eluyente (fase móvil). Por'ejemplo. Sin embargo. 8. En la operación de una columna cromatográfica se aplica una pequena cantidad de muestra en la parte superior de la columna. En la elución por gradiente la composición del eluyente se varía gradualmente. La decisión entre emplear adsorción frontal o cromatografía por elución en una separación. En la cromatografía por elución isocrática la composición del eluyente se mantiene constante durante el proceso. la operación 419 . La operación de una columna de cromatografía es similar a la de una columna de adsorción. Esta se efectúa en columnas empacadas con adsorbentes que pueden ser sólidos. en la cromatografía por elución la columna no se satura completamente con soluto. sólidos porosos o geles. Conforme avanzan los solutos sobre la columna éstos se separan permitiendo su purificación. si se desea remover dos compuestos orgánicos A y B muy similares que se encuentran diluidos en agua.Capítulo 8 Cromatografía por Elución.

2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la cromatografía. describiendo las principales técnicas cromatográficas.2 Fundamentos Existen varias técnicas cromatográficas basadas en la interacción de una fase móvil líquida y una fase estacionaria.3 se revisan los principales equipos utilizados en las operaciones cromatográficas. las relaciones de equilibrio y cinéticas que son utilizadas en esta operación. Cada soluto tiene diferente grado de retención en la columna de tal manera que la velocidad de avance de cada uno es diferente. Cinco aspectos fundamentales permiten distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas: • El tipo de principio de separación que emplea cada una de ellas. siendo el soluto A el más lento y el soluto C el más rápido. En la sección 8. llamada cromatograma. 8. En la cromatografía por elución el soluto se purifica a expensas de cierto grado de dilución. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. tipos de adsorbentes.420 CAPÍTULO 8. En la Figura 8. la selección apropiada es la cromatografía por elución.1 se ilustra la separación cromatográfica de una mezcla de tres solutos. se han desarrollado otros modos intermedios como la cromatografía por desplazamiento y la de recirculación.2. . si estos mismos compuestos se desean separar entre sí con una alta pureza a partir de una muestra concentrada. • La relación de equilibrio. Por otro lado. • Las características de las matrices que utilizan. En la sección 8.4 se presentan algunos de los modelos para el diseño de equipos cromatográficos que nos permiten predecir y analizar los perfiles de concentración o cromatogramas. • La presión a la que se desarrollan. Para abordar el tema de cromatografía por elución en la sección 8. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna. mientras que en la adsorción el soluto se retiene en la columna y posteriormente se eluye concentrado. Un detector de solutos a la salida de la columna obtendría una gráfica como la de la Figura 8. apropiada es una adsorción frontal.

Adaptada de: Belter et al. 1588. .8. A. O) Eluyente Eluyente > Tiempo Eluyente "A*M A " A AA A > F^ •f Eluyente 0TO D 0 0 D 0 0 Eluyente < o D aD' 1 D D ° OD1 - D 00°0° O o ooo Figura 8. Todos los derechos reservados.2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988.1: Esquema de una columna de cromatografía. FUNDAMENTOS 421 Eluyente » Columna empacada con adsorbente Inyección de muestra (componentes O.

Cromatografía Líquido-Líquido En la cromatografía líquido-líquido se utiliza un adsorbente sólido impregnado con un líquido que funciona como fase estacionaria. Tiempo Figura 8. . Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación De acuerdo al principio utilizado para la separación se pueden distinguir < tres tipos básicos de cromatografía por elución: . 1988.2: Cromatograma típico. La separación de los solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de partición de cada uno de los solutos de la mezcla entre las fases líquidas (estacionaria y móvil). Adaptada de: Belter et al.422 CAPÍTULO 8. • La cinética de la adsorción. . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.Cromatografía líquido-líquido. Copyright ©1988.2.Cromatografía de filtración en gel o cromatografía por exclusión.Cromatografía por adsorción. Cromatografía por Filtración en Gel La cromatografía por filtración en gel utiliza partículas fabricadas de geles porosas que actúan como mallas moleculares que permiten separar . 8.

Cromatografía por intercambio iónico. Cromatografía de adsorción simple. .Física. pero por su bajo costo es utilizada a nivel industrial.La cromatografía por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el soluto de interés y el adsorbente. FUNDAMENTOS 423 moléculas en función de su tamaño. Los adsorbentes utilizados en esta cromatografía . Cromatografía por afinidad.De interacción hidrofóbica.. Cromatografía por Adsorción La cromatografía por adsorción emplea adsorbentes en los que los solutos a separar presentan diferentes grados de retención.. Cromatografía de interacción hidrofóbica y cromatografía de fase inversa.Por intercambio iónico. Existen varias modalidades caracterizadas básicamente por el tipo de adsorbente que emplea.8. llamadas cromatografía de adsorción: . Este tipo de cromatografía es muy empleada en la purificación de proteínas.De fase inversa. se basan en la interacción entre las regiones hidrofóbicas de moléculas como las proteínas y los grupos hidrofóbicos de los adsorbentes empleados. .2.La cromatografía por intercambio iónico se basa en la interacción electorostática entre los grupos cargados del soluto y los grupos cargados de los adsorbentes utilizados en ésta.Se caracteriza por la unión del soluto al adsorbente por fuerzas débiles del tipo de van Der Waals. ... . Este tipo de cromatografía es comunmente empleada en las últimas etapas de los procesos de obtención de proteínas.De afinidad. Este tipo de cromatografía es poco selectiva entonces se utiliza poco a nivel analítico.Tanto la cromatografía de interacción hidrofóbica como la de fase inversa.

presentan grupos químicos llamados ligandos que son altamente específicos para la unión con los solutos. Poliacrilamida (Marca Biogel P) Polimetacrilato (Marca Spheron) poliestireno Polisacáridos Celulosa (Marcas Whatman. Superosa.3 muestra la estructura de algunas de las matrices empleadas en cromatografía. 8. Sílica porosa Vidrio de poro controlado (Marca Spherosill) Hidroxiapatita Polímeros orgánicos sintéticos. La Figura 8.2.424 CAPÍTULO 8. En algunos casos estos materiales se modifican químicamente para incrementar su especificidad. En general los materiales de las matrices pueden ser de cuatro tipos: Materiales inorgánicos. Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente están hechas de materiales que forman geles de alto poder hidratante./V -bisacrilamida-dextrano (Marca Sephacryl) .2 Matrices Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para fabricar los soportes (empaques) de las columnas cromatográficas. Cellulofine y Sephacel) Dextrano (Marca Sephadex) Agarosa (Marcas Sepharosa.) Compuestos: polímeros orgánicos-polisacáridos. los cuales se comercializan en forma de pequeñas esferas cuyo diámetro varía entre 10 y 100 /¿ra. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.. Poli-N. Ultrogel A y BíoGel.

Fuente: Janson. Todos los derechos reservados. FUNDAMENTOS 425 CH2OH n B HO n OH OH H H n NH2 C=O I — CHa—CH — CHa—CH — CHz—CH— C=O I HN C= O I NH2 D HN I C=O I CH2— CH — CH2— CH — CH2— CH — I I r I HN c= o c— o NH2 I n Figura 8.3: Estructuras de matrices. b) Dextrano (di 1-6). c) Agarosa.2. Reproducida con el permiso de VCH Publishers. d) Poliacrilamida entrecruzada. a) Celulosa (fi 1-4). Copyright ©1995. .S. 1989.

Cromatografía Líquido-Líquido. pero debido a su bajo costo es utilizada escala industrial. Las geles de dextrano entrecruzadc (Sephadex) y las de poliacrilamida. Este tipo de geles son empleadas en cromatografía de intercambio iónico y de afinidad donde se requieren poros más grandes.. Las geles macroporosas se obtienen por entrecruzamiento y agregación de polímeros. utilizada en el laboratorio. el volumen de las aerogeles es independiente del solvente. a continuación se presentan algunos ejemplos parti culares.En la cromatografía de fil tración en gel se emplean básicamente geles de microporos de dextran o poliacrilamida. De acuerdo a su comportamiento con relación al solvente. Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de geles: microporosas y macroporosas (Figura 8.En la cromatografía líquido líquido se emplean partículas de tierras diatónicas impregnadas coi propilen-glicol. Las geles compuestas se forman al introducir geles de microporos en los poros de las geles de macroporos. para combinar las ventajas de ambos tipos de materiales. Tipo de Cromatografía y Tipo de Matriz Existe una relación directa entre el tipo de cromatografía y el tipo d< matriz empleada. Cromatografía de filtración en gel. Este tipo de geles son utilizadas en cromatografía de filtración en gel y tienen baja resistencia mecánica. Las geles microporosas se obtienen por entrecruzamiento puntual de polímeros lineales como el dextrano y la poliacrilamida. . se pueden distinguir dos tipos de geles: xerogeles y aerogeles. Las xerogeles se caracterizan por arrugarse e hincharse en la ausencia y presencia del solvente. como la agarosa y la poliacrilamida macroreticular. pertenecen a las xerogeles.4). Esta técnica es poco selectiva por lo que no es mu. Por otro lado. poliestireno y polimetacrilato sor aerogeles.426 CAPÍTULO 8. respectivamente.. sílica. CROMATOGRAFÍA Agarosa-dextrano (Marca Superdex) Agarosa-poliacrilamida (Marca Ultrogel AcA) POR ELUCIÓN. mientra* que las geles de vidrio poroso.

. c) Agarosa. Fuente: Janson.2. a) Celulosa.8. 1989. b) Polímeros entrecruzados como poliacrilamida y dextrano.4: Matrices microporosas y macroporosas. FUNDAMENTOS 427 (b) (c) Figura 8. Copyright ©1995. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de VCH Publishers.

5: Grupos funcionales de adsorbentes iónicos. Como ya se ha mencionado este tipo de adsorbentes son poco selectivos.Los procesos cromatográficos basados en la adsorción simple de solutos en un adsorbente sólido poroso. .. utilizan adsorbentes como alúmina y sílica-gel. dependiendo del grupo iónico (Figura 8.428 CAPÍTULO 8. pero debido a su bajo costo este tipo de cromatografía también se aplica sólo en separaciones en procesos industriales. La cromatografía por intercambio iónico es una de las más utilizadas a nivel industrial para la purificación de diferentes tipos de compuestos. Las resinas utilizadas son de dos tipos: catiónicas y amónicas. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN /J-OCH2COO Carboximetil 2 Fosfato -OCH2CH2SO3 Sulfoetil Sulfopropil © XCH2CH3 OCH2CH2N( I CH2CH3 n Dietilamino-etil ' *"' Chfe Chb CH2 CH3 Trietilamino-etil Figura 8. Cromatografía por adsorción.5).

Estos iones interactúan con los grupos cargados de las proteínas como es el caso de los residuos de histidina. la fase estacionaria consiste de una matriz con ligandos no polares (Figura 8. La separación se basa en el hecho de que algunas moléculas como las proteínas presentan residuos externos no polares. de tal manera que en soluciones no acuosas estos tienden a interaccionar con los ligandos no polares de los soportes. En la cromatografía de fase inversa no se utilizan solventes de baja polaridad para eluír. Para eluír las proteínas se utiliza una solución con concentración salina baja o un solvente de baja polaridad. En la cromatografía con iones metálicos. se basa en el hecho que cierto tipo de estos colorantes interactúan fuertemente con los grupos aniónicos de las proteínas. Los colorantes asemejan estructuras biológicas como los cofactores . el adsorbente contiene iones metálicos inmovilizados sobre el soporte por medio de grupos quelantes como el ácido iminodiacético. por ejemplo: sulfato de amonio a una concentración cercana a la de precipitación de la de la proteína. Las interacciones hidrofóbicas entre la proteína y el ligando del soporte. En las técnicas cromatográficas de interacción hidrofóbica y fase inversa. FUNDAMENTOS Fenil C6Hs- 429 Octadeál Octil Butil Etil Figura 8. El tipo de iones más utilizados son el Cu+2 y el Zn +2 .S.6). se fortalecen utilizando medios con altas concentraciones salinas.2. La cromatografía que utiliza colorantes como ligandos.6: Grupos funcionales comunes de la cromatografía de interacción hidrofóbica y de fase inversa. para evitar la desnaturalización de las proteínas. y ese es su rasgo distintivo respecto a la cromatografía de interacción hidrofóbica.

S03H S03H SO3H(m/p) H03S SO3H H03S 03H H03S 03H S03H S03H Figura 8. b) Rojo A. c) Naranja A. . .430 CAPÍTULO 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.7: Colorantes utilizados como ligandos. a) Azul A.

Tipo Baja Moderada Alta Presión (atm) 1 2-50 51-350 Diámetro ((¿m) 90-100 30-50 5-10 NAD y ATP y permiten la interacción con ciertas proteínas.8. Estaí isotermas son iguales a las descritas en el capítulo anterior. la cromatografía líquida se puede clasificar en cromatografía de presión baja. En la Tabla 8. presión moderada y presión alta (la cromatografía líquida a presión alta es característica de la técnica llamada cromatografía líquida de alta resolución. HPLC de sus siglas en inglés). .$. Dichas isotermas son generalmente no lineales mostrando comportamientos tipo Langmuir o Freundlich.7). más fáciles de unir a las matrices y más estables (Figura 8. las relaciones de equilibrio se expresan por medio de isotermas de adsorción o curvas que relacionan la concentración en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y de! soluto en la fase móvil. Otro tipo de cromatografía utiliza ligandos biológicos altamente específicos para ciertos sustratos.2.4 Relaciones de Equilibrio En el análisis de columnas cromatográficas. 8.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación De acuerdo al tamaño de partícula y a la presión de operación que emplea. Las diferentes modalidades de la adsorción por afinidad se presentan en la Figura 7. La ventaja es que son más baratos que dichos cofactores.1: Tipos de cromatografías de acuerdo a su presión de operación.2.2. FUNDAMENTOS 431 Tabla 8.1 se presentan las presiones y el tamaño de partícula características de cada una de ellas. 8.

8. Las columnas empleadas en cromatografía HPLC tienen diámet de hasta 80 cm y altura de lecho de 120 era (Figura 8. las cuales pueden ser descritas mediante un mecanisrnc de cinco pasos: 1. Reacción reversible del soluto con el adsorbente (la reacción pued involucrar adsorción. de tal manera que son los que controlan la velocidad glob de transporte del soluto. 8. 3. Difusión del soluto del seno del líquido a través de una películ. En el caso de geles blandas la longit necesaria de la columna se alcanza por medio de sistemas de varias columnas cortas. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Las columnas para cromatogra en gel tienen relaciones L¡D muy bajas. Contradifusión del soluto en el poro hacia la superficie del adsoí bente.3 a 3.3 Equipo Cromatográfico Los principales equipos cromatográficos son columnas fabricadas plástico. de líquido que rodea al adsorbente. Este t: de columnas deben ser empacadas utilizando sistemas hidráulicos ( permitan el manejo adecuado del empaque. 5. en el rango de 0.5 rn. vidrio o acero inoxidable. Generalmente uno o dos de los pasos descritos anteriormente son 1< más lentos.8).5 Cinética de la Adsorción Algunos modelos utilizados para describir una operación cromatográfica toman en cuenta las resistencias a la transferencia de masa involucrada? en el proceso. 4. reacción y desorción de superficie). a través de la película de líquido.432 CAPÍTULO 8. c diámetros máximos de 1. Contradifusión del soluto de la superficie del adsorbente hacia seno del líquido. . Difusión del soluto dentro del poro del adsorbente.2. 2.

3. Copyright ©1991.8: Columna cromatográfica. . Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Kluwer Acadeiiüc Publishers. Adaptada de: Nicoud y Perrut.S. EQUIPO CROMATOGRAFICO 433 Salida Distribuidor Bomba Figura 8. 1991.

particularmente en el arreglo tipo columna de lecho fijo. y puede ser situado en el rango lineal de cualquier tipo de isoterma (en la región de baja concentración). ha creado la necesidad de llevar a escala de proceso las técnicas que tradicionalmente se utilizan sólo a nivel laboratorio. Una de las técnicas que ha recibido más atención en este sentido es la cromatografía. Es en esta transición donde los conocimientos ingeníenles juegan un papel muy importante. El trabajar con muestras pequeñas permite tener una buena separación de los solutos de la mezcla (resolución) a expensas de un bajo rendimiento o cantidad de muestra que puede ser procesada. utilizan isotermas lineales para describir las relaciones de equilibrio que se presentan en éstas.1 Modelos Cromatográficos Varios modelos empleados para el análisis y diseño de columnas cromatográficas que operan bajo condiciones isocráticas.4 Diseño de Columnas Cromatográficas La obtención de productos biotecnológicos con grados de pureza y mercados cada vez mayores. • Los procedimientos de escalamiento y optimización de la columna. 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Sin embargo.4. • Los criterios para la evaluación técnica del comportamiento de la columna: Resolución. de tal manera que el rango de concentraciones en la columna es bajo. es conveniente . que se observan experimentalmente en algunos cromatogramas. Tres conceptos se combinan para lograr un diseño apropiado de estas columnas cromatográficas: • El modelo de la columna. Pureza y Rendimiento. 8. La suposición de una isoterma lineal se puede justificar en función de que un gran número de sistemas cromatográficos se trabajan con muestras pequeñas.434 CAPÍTULO 8. debido a que por su simplicidad dichos modelos pueden ser resueltos analíticamente para obtener los perfiles de concentración tipo campana de Gauss.

Sin embargo. Actualmente se cuenta con algunas técnicas cromatográficas que emplean otros principios como es la cromatografía por desplazamiento y la de cambio cíclico de la zona de adsorción. este modelo tiene sus limitaciones en lo que se refiere al diseño y escalamiento de columnas. Cada etapa puede visualizarse como un adsorbedor tipo tanque de volumen constante. por lo que su uso es cada vez más limitado. esto puede lograrse incrementando el volumen o la concentración de la muestra (Figura 8. Bajo estas condiciones la aplicación de los modelos lineales también es limitada. La teoría cinética. principalmente para los sistema cromatográficos muy selectivos como los de afinidad. Cuando la elución es por gradiente.9). A nivel preparativo la cromatografía por elución se utiliza bajo condiciones de sobrecarga con el propósito de incrementar la productividad de la columna. Modelo de Platos Teóricos o Etapas El modelo de platos teóricos es uno de los más usados el análisis de la cromatografía por elución. mientras que el adsorbente permanece fijo en su tanque respectivo (Figura 8. En el desarrollo del modelo de platos teóricos se supone que la columna se comporta como una serie de etapas en equilibrio.10). Existen tres enfoques básicos para la obtención de estos modelos cromatográficos de columnas: La teoría de platos. El solvente fluye de un tanque hacia el otro. las relaciones de equilibrio varían conforme cambia la composición de los eluyentes y los modelos basados en isotermas lineales no son aplicables directamente. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 435 establecer que este enfoque tiene sus limitaciones .8¿. Teoría de platos y Teoría cinética combinadas. El balance de masa del soluto para la etapa ?i puede ser escrito como: . donde tampoco son aplicables los modelos basados en isotermas lineales. Esta sección sólo se refiere a los principios básicos de la cromatografía por elución isocrática en columna y principalmente a los modelos basados en isotermas lineales.

9: Cromatografía analítica y preparativa. b Sobrecarga de volumen. a) Analítica.436 CAPÍTULO 8. . Todos los derechos reseí vados. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN Figura 8. Copyright ©1986. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. 1986. c) Sobrecarga de concentración. Fuente: Kno: y Pyper.

8.4.t) Etapa F 1 y. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 437 y(L. Etapa 2 Figura 8. .10: Modelo por etapas.

£ : Volumen del líquido por volumen de etapa. para t < O.Fyn . . La ecuación (8.e)VE-£ \it cLt donde: VE'. Inicialmente ninguna etapa contiene soluto. yn = O para n = 1.3) es equivalente a un balance de masa de un tanque de volumen V* con entrada y salida). .3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: 1.2) se obtiene: {[e + (1 .Volumen de la etapa (líquido más adsorbente).Fyn-i .438 CAPÍTULO 8.2. El modelo supone que cada etapa está en equilibrio y que la relación de equilibrio está dada por una isoterma lineal.1) (8-2) Combinando las ecuaciones (8.1) y (8.e)K] VE] % . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.3) donde la cantidad entre corchetes es un volumen hipotético de líquido V* = [e + (1 — E)K\VE que contiene al soluto de las fases líquida y sólida (de tal manera que la expresión (8. F: Flujo de alimentación. de tal manera que en cada etapa la relación de concentraciones puede ser expresada como: qn = Kyn (8.(1 . Acumulación en el liquido — Entrada — Salida — Adsorción lo cual pude ser expresado mediante la siguiente ecuación: 7T ...yn) (8.F(y n _. qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n. yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n.N .

puede aproximarse con la ecuación de una distribución de Gauss. característica de los cromatogramas que se observan experimentalmente en comatografías de laboratorio donde la cantidad de muestra es pequeña. yi = yA (lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se alimenta a la primera etapa en el tiempo cero es M = V*y¿). La forma integrada es: yn = y A donde el tiempo adimensional r está dado por: T = (8.8.5) o bien como el volumen total del lecho Vc se puede expresar como: Vc = entonces la ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 439 donde N es el número total de etapas en la columna.6) La ecuación (8.5) también puede ser expresada de la siguiente forma: r = NFt (l-e)K]Vc (8. Al inicio de la operación de la columna se inyecta un pulso muy corto de tal manera que: para t = O. Para N grandes (mayores a 30) ésta se aproxima a una distribución de Gauss (Figura 8.4) es la expresión de una distribución de Poisson.4) Ft (£ + (l-e)K]VE (8.4. 2. En el modelo de platos teóricos la variación con el tiempo de la concentración de soluto a la salida de la columna. de tal manera que: .11).

os N=100 o.11: Aproximación de la distribución de Poisson a la de Gauss.440 CAPÍTULO 8. .oo 50 I 100 150 Figura 8.io- o. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN N = 10 o.

10) puede encontrarse en cualquier texto de probabilidad y estadística que la expresión entre corchetes de la ecuación anterior vale uno. ÍT^: Desviación estándar del perfil de concentración de soluto.7). La ecuación (8. sustituyendo dt por V*dr/F. de tal manera que: . TO: Tiempo adimensional para el cual la concentración de salida es máxima (tiempo adimensional de retención). yoo M= I Jo la cual puede ser aproximada a Fydt (8. Para poder utilizar dicha ecuación es necesario relacionar estos parámetros con el sistema físico particular.9) la ecuación anterior se integra combinándola con la ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 441 (r y = y»exP -Hr-5^ (8-7) donde: y0: Concentración máxima de soluto a la salida de la columna.4.7) relaciona la concentración y con los parámetros yo ? oA Y TO] Y con la variable r. y multiplicando y dividiendo por (2 de tal manera que: M= exp dr} (8. De este balance se obtiene la expresión de la masa M de soluto alimentada al sistema.8) M= Fydt (8.8. El parámetro y0 puede ser relacionado con el sistema mediante un balance de masa en toda la columna.

de tal manera que: (8. es posible relacionar a A y TO con el número de etapas de la columna. yo = (8.13) (8.16) (El tiempo real de retención de un soluto en la columna. es función del tiempo de residencia del fluido en la columna (V^/F). la porosidad e del lecho y la constante K. Mediante las definiciones de media y desviación estándar. entonces: t0 = (l-e)K]Ve (8.17) .7) puede ser escrita en términos de las características y condiciones de la columna como: y = yoexp (í-0 2_ N (8.11) como M = V*yA. (8.5) se puede definir un t0.15) como TO = N. la ecuación (8.4). CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.442 CAPÍTULO 8.12) que es la expresión que se busca para el primer parámetro.\ lizando la ecuación (8. entonces. dado por: 7-n ~~ — * NFt0 (l-e)K]Ve (8. y \it\.14) Mediante la ecuación (8.) Finalmente.

la cual es una medida de la eficiencia de ésta.18) (8.8. Una vez calculada N y contando con la longitud de la columna L. de tal manera que: t= V F Vo (8. mediante la siguiente ecuación: HETP= - (8.17) es una distribución normal que tiene un máximo en t = t0 igual a: yo = y una desviación estándar: (27TJV) a= x/TV La ecuación (8. considerando un flujo constante.4. dichas ecuaciones han demostrado ser útiles en el análisis de la dispersión y la resolución de los picos de un cromatograma.21) Asimismo. DISEÑO DE COLUMNAS > CROMATOGRAFICAS 443 La ecuación (8. Sin .19) F y entonces. se puede obtener la altura equivalente de un plato teórico (HETP de sus siglas en inglés) de la columna..17) y (8.20) Aplicación del Modelo de Platos. y = yoexp (*-') __ N (8.Las ecuaciones (8.17) también puede expresarse en términos del volumen V de solvente añadido a la columna.20) pueden ser utilizadas para estimar el número de etapas de una columna a partir de datos experimentales de concentración contra tiempo.

Solución: Se puede utilizar la ecuación (8. Estimar el número de etapas teóricas de esta columna. no pueden ser utilizadas para predecir el número de etapj o la altura equivalente de un plato teórico. Consecuentemente.5 s. Métodos gráficos para determinar N..1. 0. CROMATOGRAFÍA POR ELUClól embargo.22) . ni para predecir en forma el cambio de las condiciones de operación de la columna afectí su comportamiento. Ejemplo 8. 1991) produce un cromatograma con un pico cuyo tiempo medio de retención es de 32. El ancho del pico cuando la concentración es la mitad de la máxima es de 1. N = 2287 Es importante hacer notar que entre más ancho sea el pico del cromatograma.5 = exp 2_ N aplicando logaritmos en ambos lados de la expresión anterior se obtiene.Cálculo del número de etapas en la cro-1 matografía de Inmunoglobulina G. Una de las más utilizadas emplea la siguiente expresión: W2 (8.60 s.Existen varias formas para calcular N a partir de un cromatograma gausiano. mayor eficiencia de la columna. La cromatografía de perfusión-afinidad de alta resolución de Inmunoglobulina G (Fulton et a/.17) para determinar el número de etapas teóricas de la columna. N será más pequeña y por lo tanto HETP más grande. la HETP es una medida de la amplitud de un pico cromatografía) (eficiencia de la columna).444 CAPÍTULO 8.. Sustituyendo valores. Entre menor sea HETP. y viceversa.

2- JL Xo 0.4- 0.6- 0. .12: Cálculo del número de unidades de transferencia en forma gráfica.2-J 55 Tiempo (min) Figura 8.4.8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 445 1.8- 0.

Para realizar el cálculo es necesario determinar el ancho del cromatograma.13. t0 = 41 min sustituyendo valores.12 el numero de etapas teóricas obtenidas en la cromatografía de transferrina. Estimar a partir del cromatograma que se muestra en la Figura 8. La teoría de platos es muy utilizada debido a que permite una rápida caracterización y una comparación sencilla entre columnas Ejemplo 8. sólo si: .. Solución: Utilizando la ecuación (8. descritos en la Figura 8. Caso 1.Un pulso inyectado a una columna no sufrirá ningún cambio a la salida de la columna. Para iniciar la revisión de algunos modelos cinéticos es conveniente describir cuatro comportamientos generales de una columna cromatográfica operando en modo elución ¡socrática.2.22) se puede calcular N. CROMATOGRAFÍA POR donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre las rectas tangentes que pasan por los puntos de inflección del cromatograma.. Este enfoque resulta más complejo que el de la teoría de platos pero permite mejorar la descripción y comprensión de estos sistemas. relaciones de equilibrio y expresiones cinéticas.446 CAPÍTULO 8. W = 49 min — 33 min = 16 min y el tiempo de retención. N = N 16(41 min)'' (16 min)2 = 105 Modelos Basados en la Teoría Cinética Los modelos basados en la teoría cinética describen el comportamiento de una cromatografía mediante los perfiles de concentración de los solutos obtenidos mediante balances de masa.Cálculo gráfico del número de etapas teóricas.

4. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 447 Casal Caso 2 Caso 3 Caso 4 Figura 8.8.13: columna. Descripción cualitativa del comportamiento de una .

Caso 3. tendrá un tiempo de retención igual al del caso 3. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. . . . La dimensión de estos efectos dependerá de de la naturaleza de la adsorción. pero con cierto grado de dispersión.Los solutos no reaccionan (no se adsorben) con el adsorbente. Caso 4. . . pero una mayor dispersión. Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de concentración de las colunas cromatográficas desde el punto cinético. los cuales presentan diferentes grados de complejidad y difieren entre sí en: .Un pulso inyectado a una columna donde exista un cierto grado de flujo no ideal debido a un empaque deficiente o a fenómenos de difusión axial.Los efectos de mezclado que incorporan.Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorción y efectos de flujo no ideal simultáneamente. dt donde: dz2 dz . pero no exista adsorción. La elaboración del modelo de la columna se inicia con el balance de masa de.El número y tipo de resistencias a la transferencia de masa que toman en cuenta..448 CAPÍTULO 8. soluto en la fase líquida en una sección de la misma. La técnica cromatográfica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos en un mismo adsorbente. sufrirá un retardo y un cierto grado de dispersión al pasar por la columna.Los solutos no penetran al interior del adsorbente.Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido.. Caso 2. .La cinética en la superficie del adsorbente. presentará un tiempo de retención promedio igual al del pulso del caso 1.El flujo en la columna es idel o tipo tapón..El tipo de equilibrio que consideran.

debido a la dificultad experimental de mediciones que puedan distinguir entre los diferentes mecanismos de control). [L]. 449 v: Velocidad superficial (flujo por área de sección transversal de columna).25) donde y* es una concentración hipotética en el líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente (en algunos casos la k^a se toma como un coeficiente que agrupa todas las resistencias. Modelo Cinético Lineal. En este punto es importante recordar que los balances de masa y las relaciones de equilibrio para columnas cromatográficas son iguales que los de adsorción en columna. [M/L3].¡ 8A.y*) (8. la velocidad de transferencia de masa del líquido al adsorbente puede ser expresada como: R = kLa(y . [M/L3 — t]. z: Distancia axial.24) A continuación se revisan dos modelos cinéticos de diferente grado de complejidad. E: Coeficiente de dispersión axial. y: Concentración de soluto en el líquido. [L3/L3]. el modelo cinético lineal y el modelo cinético general.Este modelo supone que sólo una resistencias controla la transferencia de masa. [L/i\. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS e: Fracción vacía del lecho.. [L2/t]. . ambos consideran relaciones de equilibrio lineales. t: Tiempo. El balance de soluto sobre el adsorbente complementa al balance anterior y puede ser expresado como: /2 = (l_ e )|? (8. R: Velocidad de adsorción de soluto en el adsorbente. [t]. mientras que las condiciones iniciales son diferentes. En el caso que la resistencia en la película sea la controlante.

Resistencia a la difusión al interior de la partícula.NTU (8.26) dv kLa(y-y*) = -v-^ (8.Adsorción reversible de primer orden sobre la superficie de los poros (isoterma lineal). .El modelo cinético general para describir una columna cromatográfica es más complejo e incluye los efectos de: .28) al término entre paréntesis cuadrados de la ecuación anterior se le llama altura de una unidad de transferencia HTU (de sus siglas en inglés).25) y (8.Dispersión axial.23) se transforma en: R = -v Combinando las ecuaciones (8.Resistencia a la transferencia de masa en la película. y al término entre corchetes se le llama número de unidades de trasferencia NTU (de sus siglas en inglés).26) se obtiene: (8. El modelo supone además que la dispersión axial y la acumulación en la fase líquida son despreciables. . . entonces la ecuación (8.27) Esta ecuación puede ser integrada para obtener la longitud necesaria de la columna para un determinado grado de separación. L L= ¡ dz = V dy y -y") (8. Modelo cinético general: Teoría de momentos.29) La ecuación anterior puede ser utilizada para calcular la longitud necesaria de una columna cuando se conoce k^a. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. de tal manera que la ecuación anterior puede ser expresada como: L = HTU. .450 CAPÍTULO 8.. Los modelos cuando la resistencia controlante es otra son análogos.

yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro. 1. Balance de soluto interfacial en la superficie del adsorbente: Dp-^-\r=Ra = kL(y . Balance de soluto en el seno del líquido de la columna: 2 dy dy D y c1 d y " (Q Q n \ 6— = £-T-T — v-" ri (0. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 451 Estos efectos se integran mediante un modelo pseudocontinuo descrito por el sistema de ecuaciones que se lista a continuación. R es la velocidad de transferencia de masa de soluto entre el líquido y el adsorbente por unidad de volumen de lecho.31) donde: e: porosidad del lecho.\r=Ra dp or (8. t j \ _^^^^_ ^ ( § w <jy \ donde </.33) . es la porosidad de la partícula de adsorbente al soluto de interés. dp: Diámetro de la partícula de adsorbente.60) ¿ ot oz oz En la expresión anterior.yl)\r=Ra (8.8.r.4. l ~dt~ — ¡ip i __^_^_ + _^_ Q i ( "--" ~ ~ '"" ( _ i /1 £». R——i Dp-. dada por: /"»/1 \ O 6(1 — e) oyi. Ra: Radio de la partícula. Balance de soluto al interior del poro: £>. Dp: Difusividad del soluto al interior del poro del adsorbente. es la concentración de soluto en el adsorbente y e. r: Distancia radial del centro de la partícula a un punto dado en la partícula de adsorbente. 3. 2.

34) donde &i es la constante cinética de la reacción de superficie en el sentido directo y K es la constante de equilibrio de la reacción de superficie.L)tndt (8. pero la | solución no pudo ser invertida para obtener la expresión de la concentración a la salida como una función del tiempo.O y = yA r 2 r 2 =0 >O >O = 0 2 = 0 t > tp £/ = O donde íp = Vp/F es la duración de un pulso rectangular de volumen Vp inyectado a la columna. Las condiciones iniciales y de frontera del sistema de ecuaciones anterior son: en: para: í>O t =0 ¿= O O < í < ¿p se tiene: fr = O y =O yi . rnn m J™y(t.34) fue resuelto en el dominio de de las Transformadas de Laplace (Furusawa et a/. oo mn= y(t. Adsorción reversible de primer orden en la superficie del adsorbente: (8.35) de tal manera que el momento absoluto n es. 4. La solución en el dominio de Laplace fue utilizada para calcular los momentos del perfil de concentración del soluto dados por las expresiones siguientes: La ecuación para el momento u del perfil de concentración del soluto en un lecho de longitud L es.L)tndt Jo (8.452 CAPÍTULO 8. El sistema de ecuaciones (8.30)-(8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. 1976).36) .

453 .39) y de acuerdo al modelo está dado por. Se puede utilizar la expresión del primer momento absoluto para estimar la porosidad de lechos cuando el soluto es tan grande que e. el tipo de empaque y de la constante de equilibrio. . rn J?y(t.¿)<ft (8. el tiempo de retención de un soluto en la columna depende del tiempo de residencia del eluyente.e W l + ^l + f ' tp v De acuerdo a la ecuación anterior. de tal manera que la ecuación (8.El primer momento absoluto o tiempo de retención promedio dado por: ^£y(t. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS y el momento central n..L)(t- Jo 2/0 roo / Dos momentos tienen un significado físico y son de particular interés en cromatografía: 1.. = O y no existe adsorción.El segundo momento central es una medida de la dispersión del pico y está dado por: Í8 40) 4fn (8 ' ' J~y(t.SA.L)tdt ^ /o°°y(*.39) se reduce a: tp _ Le 2.L)dt y de acuerdo al modelo general. L e + ( l .

6 cm de diámetro.41 La ecuación anterior muestra que la dispersión del pico respecto al tiempo de elución o segundo momento central. su uso está restringido a sistemas que presenten isotermas y expresiones de transferencia de masa lineales. Sin embargo. el coeficiente de difusión efectiva al interior del poro. 12 (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.454 CAPÍTULO 8. la constante de equilibrio.. el coeficiente de dispersión y los parámetros del empaque. El método de momentos elimina la necesidad de una solución numérica del sistema de ecuaciones de conservación de la columna. es función de varios parámetros como el coeficiente de transferencia de masa en la película. Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimación de parámetros para diseño. utilizando pulsos de 1 -mi en una columna de 1. 1985) los tiempos de retención promedio de mioglobulina y albúmina de suero de bovino (ASB). variando su longitud entre 26 y 31 cm. Sin embargo. como la difusividad efectiva de partícula.3 . la constante cinética de adsorción. Los estudios se realizaron bajo condiciones . los coeficientes de dispersión que se determinen en una columna de laboratorio pueden ser muy diferentes a los de una columna industrial.Estimación de la porosidad de un adsorbente. Ejemplo 8. pero sólo de aquellos que no varian con la escala. las constantes cinéticas de adsorción y la porosidad de la partícula. Se determinaron (Arnold et a/. Otra desventaja del método de momentos es que la solución no se obtiene en el tiempo real y no se puede predecir el efecto de los parámetros o variables de diseño sobre los perfiles de concentración.

v Para Albúmina: _ | = 0.692 v La porosidad de la columna se estimó utilizando datos de tiempo de residencia de azul de dextrano (molécula que no penetra en los poros del adsorbente ni se adsorbe) y fue de e = 0. A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque e¿. la ecuación (8.39) se puede expresar como: entonces.35)e¿ e¿ = 0. = [e sustituyendo valores en la expresión anterior para el caso de la mioglobulina se tiene: 0.000) y Mioglobulina (PM = 17.35.500) .35)e¿ £¿ = 0.35+ (1 -0. Los resultados se correlacionaron con L/v y se ajustaron a las rectas: Para Mioglobulina: Mi - 2 = . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 455 de no-adsorción (columna equilibrada con solución amortiguadora de elución K = 0). utilizando Sefarosa CL-4B (100 /im).4.69 = 0.35 + (l-0.8.52 El adsorbente presenta diferente porosidad dependiendo del tamaño del soluto: BSA (PM=67. Solución: En el caso que no existe adsorción (K=0).87 = 0.8 sustituyendo valores para el caso de la albúmina se tiene: 0.

17) se puede obtene el perfil de concentración en función de las variables de operación.28) y (8. . ecuaciones (8. todos los desarrollos efectuados han producido expresiones en las que la HETP (medida del grado de dispersión del pico) se relaciona con parámetros que permiten predecir el comportamiento de la columna.29): J N = NTU= !^L v (8. Modelos Combinados: Teoría de Platos y Teoría Cinética Las teoría de plato es sencilla en su desarrollo matemático.4 .Una primera aproximación para la obtención de expresiones de HETP en función de variables de operador de la columna.42 y combinando esta ecuación con la ecuación (8. considerando que ambos modelos describen ui comportamiento gausiano similar. pero no puede ser usada para predecir el comportamiento de columnas a partir de datos fundamentales. Sobre este tipo de enfoque dos tipos de modelos resultan de particular interés: . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.43) la desviación estándar del pico está dada po por otro lado se sabe que: HETP=— yv (8.El modelo combinado lineal. Modelo Combinado Lineal.. de tal manera que de acuerdo a la. es igualar el número de platos teóricos de la teoríí de platos (N) con el número de unidades de transferencia (NTU) de modelo cinético lineal. Se han efectuado diferentes intentos para superar esta limitación de la teoría de platos.El modelo de van Deemter.456 CAPÍTULO 8. y = yoexp 2v En la ecuación (8.

HETP = v (8. con silanos como brazos espaciadores y 1-prolina como ligando..67 kL = l. La cinética de adsorción puede suponerse que es controlada por el coeficiente de transferecia de masa de la película.llv La difusividad del d-aspartamo en estas condiciones es 0.7 x 10 -5 cm /s. Se puede utilizar la ecuación (8. La cromatografía de d-aspartamo (Belter et al.0045 era de diámetro.16) para obtener A'. rellena de partículas esféricas de 0. 1988) en sílica gel modificada. c) N. el cual puede ser estimado por medio de la siguiente correlación: -0. La viscosidad y densidad pueden ser tomadas como las del agua. Se pide calcular: a) La constante de equilibrio del sistema. 2 Solución: a) Cálculo de la constante de equilibrio.8A.38 y el flujo utilizado fue de 2 cm3/min. cr2 y HETP de acuerdo al modelo lineal combinado. sino en función de características físicas del sistema . para lo cual es necesario calcular primero el volumen del lecho Vc: V. cuando se utiliza una columna de 25 cm de longitud y 0.4. = 7r(0. produce un cromatograma en el cual el tiempo de elución del d-aspartamo es t0 = 62 min y la desviación estándar a = 3 razn. d) El efecto de variaciones de ±20 % de la longitud de la columna. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 457 y se puede expresar el HETP no sólo en términos de un parámetro hipotético TV. b) N y HETP de acuerdo al modelo de platos.46) Ejemplo 8. sobre N y t0. La fracción vacía de la columna se estimó en 0.41 era)' x 25 cm .41 era de diámetro.Cromatografía de aspartamo.

38 62 min x 3.458 CAPÍTULO 8.132 T7iin _„ 60 s = 0. N N = -\ 622 min2 = 15—^ 6¿ min¿ = 427 N por la definición de HETP dada en la ecuación (8.45) y (8. De acuerdo con las ecuaciones (8.0585 cm = c) Cálculo TV.132 cm2 x 25 cm = 3. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.42).16) y sustituyendo valores se tiene: tnF K = K = 1 . Para tal efecto primero se calcula la velocidad superficial v. cr2 y HETP con el modelo combinado lineal.0. Vc Vc = 0.25 cm . X v = 0.. cm 2 min .46). HETP HETP HETP L^ ~Ñ 25 cm = 427 = 0. Para calcular TV se utiliza la ecuación (8.30 cm3 K = 60 b) Cálculo de N y HETP con el modelo de platos.30 cm3 rearreglando la ecuación (8.45).

a — i.01 -f- -0.25 — x 0.17 x 0. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 459 El coeficiente de transferencia de masa se calcula utilizando la cor rrelación dada de tal manera que: cm = 1.67 cm~1)(25 cm) 0.4.8.0045 cm a = 826. N = TV = v (5.67 x 10-J — s X El cálculo del área interfacial es: 6(1-g) dp 6(1 .7 x 10~5 sai cm = 5.67 cm'1 entonces.0045 cm x 0. s 468 De acuerdo a la ecuación (8. x ———* -0.25 ss.01 JbL x 0.0.86 . 62 min \/468 2.46).42 kL s \ 0.67 0.25 22.38) a = 0.67 x 10~3 sa)(826.

POR ELUCIÓN. Modelo de van Deemter. HETP HETp = °-^= HETP (2. 1956) es uno de los más conocidos para cromatografía por elución. Esta es la ventaja de este tipo de modelo. Este último fue utilizado en forma simplificada para el caso de un sistema con isoterma de adsorción lineal y una columna larga. 1952).86 min) 2 x 25 cm (63 min)2 = 0.El modelo de van Deemter (van Deemter ti a/. El resultado fue obtener una expresión para HETP en función de los parámetros . nos permite hacer predicciones con la variación de ciertos parámetros..67 x 10~3 ^f)(826. CROMATOGRAFÍA De la ecuación (8. Una columna de 20 cm representa la reducción de un 20 % en longitud de tal manera que: (5. = [0.67 cm~ 1 )(20 cm) _____ TV = 374 por otra parte: í.460 CAPÍTULO 8. es decir.6 min De la misma manera se pueden efectuar los cálculos para L — 30 era (+20%).38) 60] x "-"E cm^x 20 cm rntn t0 = 49.052 cm d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo combinado lineal. Estos autores combinaron los resultados de la teoría de platos con los del modelo cinético de Lapidus y Amundson (Lapidus y Amundson.38 + (1-0. de tal manera que el perfil de concentración del soluto a la salida de la columna también sea gausiano como el de la teoría de platos.47).

[L].47) puede ser despreciado.8. resistencia a la transferencia de masa en la película y al interior del poro. Demostrar <que para el caso de perfiles de concentración gausianos la teoría de momentos y la de van Deemter producen resultados idénticos. Una versión reciente (Arnold et a/. [L2/t].5. Ejemplo 8.48) En el caso de cromatografía líquida de moléculas de tamaño grande (por ejemplo proteínas). DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 461 considerados por Lapidus y Amundson para su modelo cinético. E = rjDAB + iv (8. ?/: Tortuosidad del lecho. En la expresión anterior el coeficiente de dispersión axial E se considera que está conformado por dos contribuciones: la difusión molecular en la dirección axial y un término de mezclado que es proporcional a la velocidad. el segundo término del lado derecho de la ecuación (8. 1985) de la expresión de van Deemter es: 12 HETP = (8 47) ' donde: t\ Longitud de mezclado. esto es. . DAB'..4.Coeficiente de difusión del soluto.Comparación de los resultados de la teoría de momentos con el modelo de van Deemter. la expresión de van Deemter considera todos estos efectos en tiempo real. Dado que el modelo de Lapidus y Amundson incluye los efectos de dispersión axial (difusión molecular y mezclado).

47) en su versión más popular y simplificada se escribe como: HETP = A + .39). (8. Las partículas de diámetro pequeño.+ Cv v donde: El término A es función del tamaño y uniformidad del adsorbente de la columna.48) y las condiciones particulares: tp A = O g conducen a: \íl Hj J. producen valores bajos de A. cuando se considera que existe equilibrio sobre la superficie del adsorbente (sólo existen las resistencias de la película y del poro) y que el pulso alimentado es de duración corta. ya que esto determina la longitud y uniformidad del mezclado.41).49) . (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Solución: En el caso de perfiles gausianos se cumple que: de tal manera que: HETP = La expresión anterior conjuntamente con las ecuaciones (8. i )momentos — \f* KJi i )van Deemter j La ecuación de van Deemter (8. (8.462 CAPÍTULO 8.

8. . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 463 K f El término B se relaciona con la difusión molecular axial. Se observa que existe una velocidad óptima debido a los efectos opuestos de los términos B/v y Cv. Para una columna particular es posible encontrar la ecuación de van Deemter efectuando mediciones de HETP a tres velocidades diferentes. de acuerdo al modelo de van Deemter. es decir.14 se muestra el efecto de la velocidad superficial en la columna sobre el HETP. 8. Cuando el rendimiento de una operación disminuye conforme la pureza deseada aumenta. el término Cv se incrementa. Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna. Este término puede ser despreciado en el caso de cromatografía líquida y particularmente cuando el soluto es una molécula grande como una proteína. análisis rápido de un componente o una alta productividad. Si la velocidad superficial se incrementa.4. del coeficiente de distribución del soluto y de las velocidades de transferencia. Pureza y Rendimiento El objetivo de un proceso cromatográfico puede ser alguno o algunos de los siguientes: alta purificación de un componente. El término C representa la dispersión del pulso debida a la resistencia a la transferencia de masa.4.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución. esto significa que al ser mayor el tiempo de retención hay más tiempo para que el pulso se disperse por difusión molecular. En la Figura 8. Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna. el tiempo para lograr el equilibrio es menor. Esto significa que a mayor velocidad superficial en la columna. estos objetivos no pueden lograrse simultáneamente. el término B/v aumenta. Este término es función de la geometría de la fase estacionaria. Si la velocidad superficial en una columna disminuye. a incrementar el HETP.

CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. 1982. no-equilibrio Calidad de empaque Difusión longitudinal U Figura 8. . Pureza.Este factor es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente (Figura 8. Rendimiento. Resolución En la cromatografía por elución un objetivo puede ser el separar los componentes de una muestra en forma satisfactoria. La teoría cromatográfica permite evaluar el comportamiento de una operación mediante el uso de tres criterios: Resolución.464 CAPÍTULO 8. Copyright ©1982.15 a y b ).. La medida del grado de separación de dos componentes en una operación cromatográfica se conoce como resolución o eficiencia de separación. Todos los derechos reservados. La resolución de una columna depende de dos factores: La selectividad de la columna.14: Efecto de la velocidad superficial sobre HETP. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Fuente: Janson y Hedman.

Generalmente una Rs =1.51) donde .5 es satisfactoria.15 c y 8. La eficiencia de la columna.Rs es la resolución. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 465 Factor de separación pobre.16 una separación completa de dos picos puede lograrse cuando las rectas que definen la amplitud de la base de los picos W'.50) W = 4<r (8.8.4.15: Efecto de la selectividad y de la eficiencia sobre la resolución.Este factor está relacionado con el grado de dispersión de los picos (Figura 8. Numera de platos pequefio Factor d« separación bueno Número de platos pequeño Respuesta c) d) Factor de separación pobr Número de platos grande ^ < | >X ^ ^ SS _j Factor de separación bueno Número de platos grande \ ¿ / \ * \ / / / ' ^ A t / / 1* $ ^ | i^O t ' +/ y j/ ^ o<N vo J <. .15 d). se intersectan abajo del eje t. v ^ ^^ ^ t i/s Tiempo ^ Figura 8. Puede ser demostrado que cuando esto sucede: Rs = 2( * Q2 "* Ql) > 2 (8.. Si se considera la Figura 8.

(c) Mejorar la selectividad. (a) Empacar más uniformemente la columna y/o disminuir el tamaño de las partículas del empaque. . Para incrementar A¿ = t02 — t0\. (b) Optimizar el flujo. 2. Por ejemplo. pero existen algunas lineas generales como las siguientes: 1.16: Medición de la resolución. (c) Reducir el tamaño de la muestra.466 CAPÍTULO 8. (b) Aumentar la cantidad de la fase estacionaria.50) puede ser utilizada conjuntamente con los modelos cromatográficos apropiados para analizar este tipo de acciones y generar las decisiones correspondientes. selecionando otra fase estacionaria u otra fase móvil. La ecuación (8. Para disminuir el ancho de los picos. Una resolución adecuada puede ser difícil de obtener cuendo se trata de resolver una mezcla de componentes con propiedades similares. como en la separación de mezclas de proteínas. En este caso la mejor forma para mejorar la resolución depende del tipo de cromatografía. Respuesta Tiempo Figura 8. se puede estimar la longitud necesaria de una columna para alcanzar una determinada resolución. (a) Incrementar la longitud de la columna L. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.

.4. esta resolución es demasiado baja. Calcular la resolución lograda en una columna de filtración en gel en la que se separa un anticuerpo de una impureza y se obtienen los siguientes resultados: Anticuerpo Impureza 7. Entre mayor sea la pureza requerida.51). existe un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza deseada. Wl = 4<7! = (4)(0.8.6.42 0.2 h W2 = 4<r2 = (4)(0.Cálculo de la resolución de una columna. empleando los modelos revisados.600 0.175 43 í0(h) <7(h) y0 Solución: 6.80 82 Se puede calcular el ancho de las bases de los picos W utilizando la ecuación (8. en el intervalo de t a t está dada por: .50). Considerando que en una operación cromatográfica la masa eluída del soluto j de una mezcla. menor rendimiento puede ser obtenido. Es posible efectuar un análisis de pureza y rendimiento de columnas. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 467 Ejemplo 8.80 h) = 3.7 h la resolución se calcula con la ecuación (8.175 h) = 0. Pureza Cuando se tiene una resolución muy baja debido a propiedades muy semejantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productividad.

F: Flujo de solvente en la columna. SE3 = / Fyjdt jt donde: jí Masa del soluto j eluída en el intervalo de tiempo. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.53) y (8. SE.53)] donde n es el número de solutos presentes. yji Concentración del soluto j a la salida de la columna.55) combinadas con los modelos que describen los perfiles de concentración en las columnas. es decir: PRj = Jt ^=JtlFy. PRj.52) la pureza del soluto j. se define como la razón de la masa de soluto j obtenida en el intervalo de t a t. t o rendimiento REj puede entonces expresarse como: fi Fy3dt reo „ .dt ti Fyj y¿dt 8..468 CAPÍTULO 8. . respecto a la cantidad aplicada en la muestra original. Jo Fyjdt Las ecuaciones (8. La masa total de soluto j inyectada a la columna está dada por: r (8. entre la masa total obtenida en ese mismo intervalo. Rendimiento El rendimiento de una operación cromatográfica puede ser definido como la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo. nos permiten calcular y/o predecir (según el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas. (8.54) = I Fyjdt Jo la proporción de soluto j recuperada en el intervalo de t a.

45 g.4.Pureza y Rendimiento La Figura 8.17 muestra los prefiles de concentración del anticuerpo y la impureza del Ejemplo 8.17: Perfiles de concentración del Ejemplo 8.6.63 g y 0. respectivamente (se usa el subíndice 1 para el anticuerpo y el subíndice 2 para la impureza). Puede observarse un traslape de los picos de estas sustancias debido a la baja resolución de la operación. Ejemplo 8. .55) se obtiene una expresión para el rendimiento en función del tiempo. si la masa de anticuerpo y la masa de impureza alimentadas a la columna son 1. Describir la variación de la pureza y el rendimiento del anticuerpo con el tiempo de operación.7.17) y (8.7.8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 469 90- Anticuerpo 80706050- Impureza 40-^ 302010- 0 10 t(h) Figura 8. Solución: Combinando las ecuaciones (8..

60 V = 1 + Erf ( 2 .N/2(0. PRr '/' Fy0i exp [-^l^p-J di + Jt' Fyoi exp [-^l^~J dt utilizando la definición de función error la expresión anterior puede expresarse como: sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene: fíF 1 ILJ\ RE2 'Í-6.53). obteniéndose: = -\Erf J 2 -Erf cuando i — O la expresión anterior pued e aproximarse a: 1 + Erf i — ¿oí La variación de la pureza con el tiempo de operación se obtiene combinando las ecuaciones (8.175)J.>/2(0. — 82 REl 82 REl + 43 .42V 1 + Erf [ . REi = ü"= 1 y ° iexp i (^oj. t' - La expresión anterior puede integrarse expresando la integral del numerador como una diferencia de integrales y utilizando la definición de la función error.17) y (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.8)JJ 1 ' í-7. — 1 2 pp.470 CAPÍTULO 8.

En general las técnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la imposibilidad del diseño de este tipo de equipo mediante modelos . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 471 o. Se puede constatar en la figura el hecho de que en una operación de separación generalmente se pueden obtener altas purezas o altos rendimientos.18. Los resultados sobre los cálculos de los rendimientos y la pureza de anticuerpo se muestran en forma gráfica en la Figura 8.18: Perfiles de pureza y rendimiento del Ejemplo 8. pero no ambos.7. 8.8.4.3 Escalamiento y Optimización El escalamiento de una columna cromatográfica consiste generalmente en determinar el diseño de la columna que permita cumplir con una productividad mayor a la de la columna empleada en la obtención de los datos para el el diseño.4.o Figura 8.

Incrementar el flujo volumétrico a procesar. 2. concentración del producto y duración de cada ciclo. 3. estrictamente teóricos (Gibbs y Lighfoot. rendimiento. 1986). manteniendo la concentración y el tamaño relativo de la muestra. 1. Características de flujo: El escalamiento de columnas presenta varios problemas asociados al flujo dentro del lecho: . En el caso de muestras más concentradas generalmente se producen isotermas no lineales y efectos de interferencia de los solutos en la adsorción.Incrementar la concentración de la muestra. Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas cromatográficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes. En algunos casos sólo se busca incrementar la producción. Restricciones: El escalamiento además de cumplir con el objetivo fundamental de incrementar la productividad (o al menos la producción). debe también cumplir con las restricciones del proceso en cuanto a pureza. 4. . que se traducen en una disminución del grado de purificación obtenible. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. . Criterio de escalamiento: Existen varias alternativas no excluyentes que pueden servir de base para realizar el estudio de escalamiento como: .Incrementar el volumen de la muestra. Objetivo del escalamiento: Generalmente el objetivo de un escalamiento es incrementar la productividad. En estos casos no puede ser aplicado el concepto de HETP desarrollado para sistemas lineales. que produce un perfil de concentración no gausiano a la salida de la columna (Figura 8. permite conservar la linearidad del proceso. El incrementar sólo el flujo volumétrico. Cuando se incrementa la concentración y/o el volumen de la muestra se produce una condición de sobrecarga.472 CAPÍTULO 8.9).

En el proceso de escalamiento generalmente también se busca optimizar la columna fijando criterios de máxima productividad o mínimo costo. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 473 .El incremento de la longitud de la columna es imposible sin reducir la velocidad de percolación debido a que generalmente las caídas de presión de las columnas de laboratorio están en el límite del colapso de los adsorbentes empleados. 1960). Método de escalamiento mediante modelos. La caida de presión en una columna empacada en régimen laminar está dada por la ecuación de Blake-Kozeny (Bird et a/. donde v es la velocidad superficial y está dada por la relación: 4F donde D es el diámetro de la columna. de particular importancia son el tiempo t/t0 y el número de unidades de transferencia NTU o de etapas teóricas N. . En el proceso de escalamiento es fundamental tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan de la expresiones diferenciales que describen los perfiles de concentración en la columna. Dinámica de la columna. (8 57) ' 5. Es importante distinguir dos métodos de escalamiento comunmente empleados en cromatografía: Método de escalamiento directo.El incremento del diámetro produce problemas de distribucción del flujo y de incremento del gradiante de presión por disminución de soporte por la pared. . Geometría: Los parámetros básicos que define la geometría de una columna y que pueden ser modificados son: c/p. Dc y L. 6.8.4.

Este método permite determinar el tamaño y las condiciones de operación de la escala nueva en forma rápida. Estas restricciones requieren que la dinámica de la columna no cambie. la cual es función de la concentración de entrada principalmente. consiste en seleccionar como parámetro de escalamiento un incremento del flujo de la columna. requiere mantener iguales ?/0. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Una limitación de este método es la escasa información que genera sobre los mecanismos cinéticos controlantes. 21 (¿""O = y0 exp _ N mantener los perfiles iguales durante el escalamiento. la concentracción máxima de soluto. Si el escalamiento es sólo a través del incremento de flujo. Caso de escalamiento directo de un sistema lineal. 1990). TV y t/t0.. El número de etapas cuando sólo un mecanismo controla la rapidez de la adsorción puede ser expresado como: . A continuación se presenta caso particular de escalamiento directo con el proposito de ilustrar este método. el método de escalamiento directo se parte de un diseño óptimo desarrollado generalmente a nivel laboratorio (puede ser teórico) y se supone que los fenómenos difusionales no varían dentro del rango de escalas que se estudia. puede considerarse igual en ambas escalas. Generalmente las restricciones son de igual pureza y rendimiento en ambas escalas (Cowan ti a/.474 CAPÍTULO 8. 1987). o sea y0l = y0in donde los subíndices I y II se refieren a cada una de las escalas. Escalamiento Directo La mayoría de los procesos cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio (Wang. para cada uno de los solutos en ambas escalas (escalas 1 y 2). El perfil de concentración de los solutos a la salida de la columna debe mantenerse igual en ambas escalas. lo que permite mantener la linearidad del proceso.Uno de los enfoques más utilizados en el escalamiento de columnas cromatográficas. En este caso lineal los perfiles gausianos están dados por la relación ya conocida.

lo que permite mantener t0 y N constantes entre las escalas. de tal manera que su razón se mantenga constante. La solución comúnmente empleada consiste en usar columnas poco esbeltas (gordas) con dp . 1988). Sin embargo.58) o mecanismo controlante de la cinética. con una columna de menor volumen y conservando la misma caída de presión (Wankat y Koo.59) v Como primer alternativa se puede considerar incrementar Z)c. incrementar simultáneamente L y v produce un efecto dramático sobre la caída de presión. En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse el diámetro del empaque utilizado a nivel laboratorio d p . es posible realizar el escalamiento y obtener una mejor resolución. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 475 N = ^ (8. no es posible hacer este cambio sin alterar el perfil de concentración dado que el valor de N cambia con todos estos parámetros. entonces el problema de optimización de la columna escalada se traduce en encontrar el diámetro de columna que produce el menor costo del producto. el tiempo de retención está dado por: t0 = [e + (l-e)K](8. en casi todos los casos de un sólo mecanismo controlante. Esto permite aumentar la producción (no la productividad). sin embargo. de tal manera que la relación L/v sea igual en ambas escalas.56). Como tercera alternativa se puede considerar mantener dp igual para ambas escalas e incrementar v y L. es preferible utilizar cada columna en varios ciclos procesando alícuotas del material inicial. al aumentar el área de flujo o diámetro de columna. de acuerdo a lo que establece la ecuación (8. independientemente del valor que tome n en la ecuación (8. De tal manera que el proceso .58) Asimismo. Para reducir los costos asociados a la inversión inicial en las columnas. También se puede considerar incrementar Dc y dp.4. dp y L. L y v iguales a las de la columna de escala laboratorio. sin embargo esto también conduce a un cambio en el valor de N.8.

7. 1982): Transferrina t0 (min) 41 <j (min) 4 Sales 88 4 Se pide: a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90% de rendimient< de transferrina. b) Si se desea incrementar la productividad de la columna mante niendo la misma geometría y suponiendo que la etapa controlante es te que la desviación estándar es proporcional a v~í. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN de escalamiento y el de optimización.1 + Erf i -41 2x4 . se utiliza una columna cromatográfica de 5 cm de diámetro y 15 cm de longitud. empacada con sefacril S-200 superfino (dextrano). 80 % de la cual es transferrina y 20 % sales (como NaCl). La alimentación consiste en una solución diluida que contiene una mezcla de solutos.476 CAPÍTULO 8. calcular la velocida de alimentación máxima y el tiempo del ciclo necesario para obtener u rendimiento de 99% de transferrina con 98% de pureza (transferrina^ y sales=2. Ejemplo 8. Con el propósito de separar una proteína de sus sales acompañantes. escalas I y II). 0.90 = .. 1987). se desarrollan simultáneamente (Janson y Hedman.8. Guarido la columna se opera a 10 cm/h se produce una separación caracterizada de la siguiente manera (Janson y Hedman.Optimización de una columna. Solución: a) De acuerdo a la ecuación desarrollada en el Ejemplo 8. 1 + Erf ( t-t 0\ sustituyendo valores.

8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS de tal manera que. como a oc t>~2 ? se pueden desarrollar la siguientes relaciones: = (-)* \viij utilizando la ecuación (8. . la pureza de la transferrina en la masa total colectada en un intervalo de tiempo está dada por: masa de transferrina masa 7T~j total (masa de transferrina)(RE\) (masa de transferrina](RE\] -f (masa de sal^RE?) PR\ - Por otro lado. se obtiene: ton Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de ecuaciones: (0.4.8) (REu). 477 ¿90% =46.1 min b) De acuerdo a las expresiones también desarrolladas en el Ejemplo 8.59).7.

.65 12. . De acuerdo a lo anterior el resultados es: vtl = 93 cm t = 7. puede ser diferente. Calcular cr// y ton para ambos solutos. siempre y cuando el mecanismo controlante se mantenga en ambas situaciones. .478 CAPÍTULO 8.4 min Esto representa aumentar 9. La suposición de v¡¡ será correcta cuando ésta sea del 98 %. Suponer una t?//. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Los resultados sugieren que a nivel laboratorio la optimización consiste en incrementar la velocidad manteniendo una resolución o pureza adecuada. !_ 2 1 2 12. . Calcular t de la ecuación de rendimiento de transferrina.3 veces la velocidad en la columna. La Figura 8. . Calcular el rendimiento de sal.65 410 880 VJ1 Erf | LJf» "\ El sistema anterior puede ser resuelto mediante el método de cálculo siguiente: . Con los datos anteriores calcular la pureza de la transferrina. El análisis anterior es válido.19 muestra los perfiles de los solutos para el caso base y la situación nueva. También es importante hacer notar que para otro tipo de cromatografía la expresión de la desviación estándar utilizada en este ejemplo.

19: Perfiles de concentración del Ejemplo 8.000- 3.000 Escala I Escala I 10 20 30 40 50 t (min) 80 90 100 Figura 8.000- 1> 2.500§ 3.4. . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 479 4.5002.5000.0001.0000.8.5001.8.

Química del sistema: Tipo de eluyente. Escalamiento Mediante Modelos La mayoría de los sistemas cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio. dado que el objetivo en éstos es incrementar la productividad y no la resolución de todos los componentes.20 se presenta la metodología para el escalamiento mediante el uso de modéleos de columnas. por medio de una simulación por computadora. volumen y tamaño de muestra. aún cuando producen buena resolución. Por otro lado. 1988). Esto se debe a que las resistencias por difusión dentro de la partícula y los fenómenos de dispersión son menores con partículas pequeñas. L y dp. Los casos de escalamiento directo no lineal escapan al alcance de este trabajo pero existen varias publicaciones especializadas que pueden ser consultadas (Wankat y Koo. . En la Figura 8. el escalamiento directo conduce a la utilización de una fracción muy pequeña del lecho cromatográfico.La operación del sistema: Flujo. . así como el impacto que sobre los perfiles producen los cambios en: . . Estas partículas pequeñas no siempre son las más adecuadas en un proceso industrial.La geometría del sistema: Dc. los experimentos que se realizan más que tener como objetivo desarrollar una optimización de la columna. aspecto que también impacta el costo. concentración. tipo de adsorbente y tipo de isoterma. poca dispersión y tiempos cortos de ciclo .480 CAPÍTULO 8. están orientados a la validación del modelo y a la obtención de los parámetros del mismo. Las limitaciones del escalamiento directo han conducido a tratar de incorporar metodologías ingeníenles al diseño de las columnas. Cuando se utiliza este enfoque. Los modelos desarrollados son utilizados para predecir los perfiles de concentración a la salida de la columna. . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Este enfoque conduce a utilizar partículas muy pequeñas (5-100 //m) que incrementan el costo del proceso.

. de Masa Modelo Cromatografía) Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 8. Adaptada de: Wang. Copyright ©1990.20: Metodología para escalamiento y optimización de columnas. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 481 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.8. 1990. Todos los derechos reservados.4.

Los modelos cromatográficos presentados en este capítulo son particularmente útiles cuando se trata de seguir este enfoque de escalamiento. tiempo de ciclo. Las columnas cromatográficas han sido escaladas principalmente a partir de columnas de laboratorio.482 CAPÍTULO 8. pero existe creciente necesidad de apoyar el diseño de las columnas mediante el empleo de modelos. de tal manera que sea posible obtener un diseño óptimo bajo restricciones de costos. 8.Modo de operación. . productividad. Existen varias formas para llevar a cabo una operación cromatográfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las condiciones en las que se realiza. Las operaciones cromatográficas se desarrollan generalmente en columnas empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a presiones moderadas como a altas presiones.5 Sumario La cromatografía por elución se utiliza para obtener productos biotecnológicos con un alto grado de pureza. . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. pureza y concentración.

8. son de 800 y 815 5.49).4. demostrar que: a-1 F . (a) Calcular la resolución para estos compuestos en la columna. PROBLEMAS 483 8.100 etapas teóricas para ambos compuestos. a partir de la ecuación (8..Obtener una expresión para la v óptima y la altura equivalente de un plato teórico (HETP) mínima.6 Problemas 8. donde: — _ u i K! -f- AI 1: Soluto 1 .—-.8. Calcular el número de platos teóricos de la columna bajo estas condiciones. La columna se puede considerar que tiene 8..El ancho W de un pico es de 50 s y el tiempo de retención es de 50 min.42 (b) Suponiendo que los tiempos de retención son iguales.3.Los tiempos de retención de los compuestos A y B. respectivamente...i Rs .2.Utilizando el modelo de platos teóricos y considerando iguales la altura equivalente de un plato teórico para dos solutos que se desea separar. R: 57.1. R: 45..-—N* esta ecuación se conoce como la ecuación fundamental de la cromatografía lineal.500 8.600 8.6. estimar el número de etapas para obtener una resolución de 1. R: 0.

.Constante de equilibrio del soluto 2. 8. estimar la resolución que se obtiene en una columna de 50 c??i. ¡ Demostrar que bajo estas condiciones..13u donde HETP está en metros y v en m/s.7.Utilizando la expresión del problema 8.En la separación de albúmina de suero de bovino (ASB) y mioglobulina (Mg). Estimar la resolución esperada si la columna tiene un diámetro de 7.6. K-2'. a: Selectividad k{: Factor de capacidad del soluto 1. K\: Constante de equilibrio del soluto 1.. La altura equivalente de un plato teórico para la mioglobulina está dada por: 6. ¡ donde el subíndice 2 corresponde al soluto más lento. k'2: Factor de capacidad del soluto 2.8 y kMg = 1. entonces: W\ — W-¿. se determinó que los factores de capacidad de los solutos son: kASB — 0.4.6 ni. k'\ Factor de capacidad promedio. mediante una columna de laboratorio de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).En el caso de la cromatografía líquida de alta resolución puede considerarse que el ancho de los picos es igual.1.5 x 10~3 m y una longitud de 0. si en una columna de 20 era la .58 8.484 2: Soluto 2 CAPÍTULO 8.17 x 10~4 m/s Resp. Rs = 1. 1 I •i | 8.5. El volumen de la muestra es de 10~7 m3 y la velocidad superficial en la columna es de 2. e: Porosidad del lecho. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.2 x l(T 5 -M.

El volumen de elución (V0) de la ASB es de 1. se empaca con 0.. Calcular el volumen para obtener un rendimiento del 95% de lincomicina A.8. R: 1. rendimiento y pureza.2 /i. el cual tiene una concentración de ASB de 5 Kg/m3 y 10 Kg/m3 de glucosa. pureza y rendimiento dados por las condiciones del problema utilizando la computadora. respectivamente.2%..Una columna de laboratorio ( Ghose. Cuando esta mezcla se corre en una columna de laboratorio..8 (considere como única variable la longitud de la columna). El volumen vacío de la columna (e V] se midió utilizando el polímero de alto peso molecular dextrano y fue de 1. 650 y 700 litros de elución.6.5 y 0.95 x 10~4 m3.05 x 10~4 m3 y el de glucosa de 2. se colecta el 2. El volumen utilizado de muestra es de 2 x 10~6 ra3.10. c).02 m de diámetro. 15.05 x 10~4 m3 (en cromatografía en gel donde la cantidad de líquido en los poros de la matriz es considerable.Cuando se procesa una mezcla de Lincomicina A y B. produciéndose un lecho empacado de 100 cm de altura. R: 780 1 8.. los tiempos de retención son de 9.Simular el efecto de variar la proporción de soluto a 50:50% sobre los perfiles de concentración. a). PROBLEMAS 485 resolución obtenida es de 0. esta medición con dextrano no incluye el volumen de .7 y 8.Una mezcla contiene 70% de una droga y 30% de una impureza.. La cromatografía se desarrolla utilizando agua como eluyente.8% y 50% de lincomicina A a 600.065 Kg de Sephadex G-100 cuyo poder hidratante es de 0.Simular los perfiles de concentración.003 m3/Kg de gel seca.9. b)...7 h y la desviación estándar de 0. respectivamente. d).Repita la simulación para una proporción 90:10% 8. 1990) de 0. La columna se utiliza para separar una mezcla de albúmina de suero de bovino (ASB) de glucosa.Calcular el rendimiento de la droga si desea separarse mediante cromatografía y obtener una pureza del 99%.27 8. en una columna de partículas de celulosa.8.

El coeficiente de partición de los solutos A (ASB) y B (glucosa) está dado por: donde Vc es el volumen total del lecho de la columna y Kp¿ y K son los coeficientes de partición.11. d).06 m de diámetro y 3 m de lecho manteniendo la relación de volumen vacío a volumen total constante (¿K/K) = c¿e? y 1a realción de volumen de los poros a volumen total constante. (V0)A = 2. dicho líquido V¿).Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica.. Comparar la ecuación (8. Determinar los volúmenes de elución de la ASB y de la glucosa en la nueva columna.16) con la (8. a). La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna. c).486 CAPÍTULO 8. El volumen de los poros V¿ puede ser calculado con la expresión: K = aWr B donde a es la masa seca de gel y WT la capacidad hidratanten de la gel. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. b). Resp. adsorbente}. Resp. 1. ¿Cuál es el significado físico de A'p?.39) para su uso en cromatografía en gel. a). \§j Ky de. Demostrar que en cromatografía en gel el modelo de van Deemter conduce a: _ Vc(l-e)ep ~ V.76 Kg 8. . Se desea escalar la operación de esta columna a una columna de 0.834 x 10~3 m3 b).

Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0. en el rango de O < P < 0.00//f<7 y tiene una vida de 2. . CE'..1. L = nt: Número de ciclos en la vida del adsorbente.02 Kg deproducto/Kg de adsorbente — ciclo. [$/Kg de adsorbente]. CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. P: Productividad promedio. Obtener una expresión del impacto del costo del adsorbente sobre el costo del producto. 0. n: Duración del ciclo. [h]. En una operación cromatográfica el adsorbente tiene un costo de $10. Resp.12.5 h y la productividad promedio P es de 0. CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. CR: Impacto del costo del regenerante sobre el producto. regenerante y eluyente sobre el producto.5 y 1. La operación se efectúa de tal forma que se inyecta una muestra cada 2.000 h. [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo]. CA = $0. CT'. Impacto del costo del adsorbente. [h]. [ciclo/h].625//f <jr de producto 8.0. [ciclo¡h]. [§/Kg]. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el producto. PROBLEMAS 487 p: Productividad promedio.05 c). n: Duración del ciclo. [§/Kg].Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica. a).8.6. b). considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. t: Tiempo de vida del adsorbente. [$/Kg]. [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo]. c). t: Tiempo de vida del adsorbente. Impacto del costo del eluyente sobre el producto. [§/Kg].

C = 14 s 8.05 cm.14.10 g/l a los 670 s. la cual se eluye con un flujo de 5 cra 3 /ram.19 0.12 0. B = O.En la cromatografía de ASB se obtienen los siguientes datos: v^f 0. [$/Kg de adsorbente — ciclo]. obteniéndose dos picos con las siguientes características: . M: Costo de eluyente.En una separación cromatográfica de albúmina y hemoglobina se aplica una muestra que contiene un gramo de cada una de estas proteínas.15..26 Estimar los parámetros A. [§/Kg de adsorbente — ciclo de regeneración]. y C de la ecuación de van Deemter para la columan empleada.. A = 0. Demostrar que: 8. Resp. TV = 47 y HETP = 0. Lft'. B.13. CROMATOGRAFÍA POR R: Costo del regenerante.005 0. Estimar el número de etapas teóricas y la altura equivalente de una etapa teórica.En una separación cromatográfica se obtiene un pico de hemoglobina con una concentración máxima de 0.22 g/l a los 820 s y una concentración de 0.015 HETP (cm) 0. Ciclos por ciclo de regeneración.35 cm 8.488 CAPÍTULO 8..010 0. si la columna utilizada tiene una longitud de 16.5 cm Resp.

25 g/l 680 s 0. máxima Tiempo de elución Conc.El valor experimental para la difusión en el poro en una matriz de agarosa es de 3.5 8.8.. //: Viscosidad del solvente=0. Comparar este valor con el que se obtiene mediante la correlación para este tipo de geles (Boyer y Hsu.01 g/cm — s Cf.04 *g/cm? ..1307v (M1/3 + 1245) CÍ/21 V uM1/3 / L ' J J donde: Ai: Peso molecular de la mioglobina= 16890 Da. €i = 0.16.La porosidad de un lecho medida con azul de dextrano es de 0. Calcular la porosidad interna del empaque de la columna para esta proteína.10 g/l 670 s 489 Calcular el rendimiento y la pureza de la albúmina a los: a). 1. 1992): Dp = 8. T: Temperatura=293 °K. Resp.5 cm de altura y 2.775 8.1 y PR = 0.17. PROBLEMAS Albúmina Hemoglobina Conc.6.11 g/l 600 s 0. 600 5 c). Para albúmina RE = 0.5 cm de diámetro con un flujo de 5 cm3/mw su tiempo de retención es de 680 s. Resp. Concentración de polímero en la partícula de adsorbente^ 0.4. 500 s b).34 x 10'10 (-7777^ 1 exp [-0. en un tiempo t Tiempo t 0.9 x 10~7 cm2/s.200 s b). Cuando se corre albúmina en una columna de 16.22 g/l 820 3 0.

1992. 2. y Hedman.J. 1986. 259-272. 11. y Sweetenham. Suzuki. (Eds.T. Eng. 1988. Rev. Cussler. México. Antibody quantification in seconds using amnity perfusión chromatography.B. Meys. 490-498. P. H. 1976. Bird.B.N. Chem. S. John Wiley and Sons.). Janson J. Ellis Horwood. 38. B9-B23. E. C. 43-99. 1987. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. .7 Bibliografía Arnold. A. P. En: Adv. Várady. Janson J. y Hsu. Scaling up gradient elution chromatography. Experimental studies of restricted protein diífusion in agarose matriz. Catal. Fiechner. Fenómenos de transporte. J. C. y Afeyan. J. Ed... T. 25. Jansen. y Hu. New York. 1982. 9. Blanch. 10..N. y Hedman. SpringerVerlag.. 9-13.. Ghose. M. Reverte. L. R. M.P..R. Belter.. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.. Gosling. Stewart. 1985. (Ed. W. Eng. y Lightfoot E.S. AlChE. Boyer. 152175. P. Verral.490 CAPÍTULO 8. IEC Funcl.F. 1.S. Fulton. Gibbs S. 25. Large scale chromatography of proteins. Sci. 229-264. 183-219.P. 7. Ellis Horwood. Biochem. M. 8. M. R.H. 2.. New York. 1964.M. New York. 30. y Wilke. Biotechnology Progress. W. y Lighfoot E. F. P. y Smith. W. Biotechecniques. Cowan. C. 3. Modeling for scale-up and optimisation of packed-bed columns in adsoption and chromatography. Analysis of affinity separations. Furusawa.L. Bioprocess Computations in Biotechnology. 226-231. On the optimization of process chromatography of proteins.. 1991.K. England. 1990. T. Eng. J. M.).E. G. J. 1.A.M. y Hudson.H. 13. J. 43-76. 1. 1987. Vol.W. En: Separations for biotechnology.

Asenjo. Y.A: y Cabral. 1952. C. L. J. Chem. Zuiderweg.C y Koo. of chromatography. y Klinkenberg. A. Phys. 1987. Wankat. y Amundson. Longitudinal diffusion and resistance to mass transfer as causes of nonideality in chromatography. Ion exchange in purification. R. 1956. 219-237. AIChE Journal. Sci. Ladisch.). J. J. John Wiley and Sons.). Bungay. (Eds. BIBLIOGRAFÍA 491 Knox J. 1990. y Perrut.J.S. N.L. Costa.). scale-up and optimization of chromatographic processes. 6. J. Framework for maximizing throughput in preparative liquid chromatography. Marcel Dekker.R. 984-988. G.J. (Eds. J. 1-56. M. Chem.R. 1006-1019. The effect of longitudinal diffusion in ion exchange and chromatographic columns. Scaling rules for isocratic elution chromatography.A. y Pyper.M. New York. 359-400. F. M. New York.8. (Ed.R. P. 56. y Belfort. En: Advanced Biochemical Enginnering. 12. 1988. Lapidus. Eng. 5. 1991. N. 363. . Nicoud. van Deemter. 34. Separation by sorption. 1986. Kluwer Academic Publishers. 381-413. H. H. Mathematics of adsorption in beds VI. En: Separation Processes in Biotechnology. 9. Netherlands. En: Chromatographic and Membrane Processes in Biotechnology.. 271-289..7. Wang. Operating modes.M.

entre otras. La precipitación de proteínas y la subsecuente recuperación del precipitado.1 Introducción Algunos productos biotecnológicos presentan solubilidades que varían con la temperatura. la fuerza iónica y con la constante dieléctrica del medio. Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos mediante la operación de precipitación. las siguientes: 1. Es una operacicn que se adapta fácilmente a gran escala. 3.utiliza es sencillo. el pH. Los agentes precipitantes seleccionados no deben producir desnaturalización del soluto y deben proveer una mayor estabilidad del soluto en el precipitado que en la solución. En la precipitación se concentra el soluto de una solución convirtiendolo en sólido mediante la acción del agente precipitante. 493 .Capítulo 9 Precipitación 9. . son de las operaciones más importantes para la recuperación y purificación de proteínas tanto a nivel laboratorio como a escala industrial. Las ventajas de usar la precipitación para la concentración y purificación de solutos SOD. El equipo que .en forma continua. Puede realizars. por lo que es una operación que se usa con frecuencia al inicio de un proceso de bioseparación. 2. Teóricamente la precipitación debe producir un soluto concentrado y puro.

3 se hace mención de los equipos utilizados en esta operación y en la Sección 9. La precipitación por disminución de la solubilidad de la proteína de interés se efectúa por medio de un agente precipitante. Afinidad Ligandos 4. 9. . Este puede ser una sal neutra como el sulfato de amonio. un agente que altere el pH de la solución". En la sección 9. En la Sección 9.4 se presentan algunos aspectos del diseño de dichos equipos. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos éstos son baratos. o algún polímero como el polietilenglicol. Principio Agente Precipitante Disminución de la solubilidad Sales (Sulfato de Amonio) pH (Precipitación isoeléctrica) Solventes (etanol) Polímeros no iónicos Desnaturalización selectiva. PRECIPITACIÓN Tabla 9.2 se revisan los fundamentos de la precipitación incluyendo algunos métodos para la precipitación de proteínas. acetona o éter. un solvente orgánico como etanol.1: Pincipios de la precipitación de proteínas. Este capítulo se enfoca a la precipitación de proteínas debido a su gran interés biotecnológico.1).494 CAPÍTULO 9.2 Fundamentos La precipitación de proteínas puede realizarse empleando diferentes principios (Tabla 9.

La proteína permanece en solución cuando termodinámicamente es más favorable estar rodeada por el solvente que estar en un agregado con otra proteína formando una fase sólida. La protema puede insolubilizarse ya sea cambiando las características de su superficie. FUNDAMENTOS 495 En la desnaturalización selectiva se producen cambios en la conformación de las proteínas contaminantes con el propósito de aislar en la solución la proteína de interés. o cambiando el solvente que la rodea. • Precipitación por Desnaturalización Selectiva. las proteínas que presentan mayor hidrofobocidad (por contar con mayor cantidad de aminoácidos hidrofóbicos en su superficie) precipitan más fácilmente que las de menor hidrofobocidad.2. Debido a su naturaleza anfotérica cuando una proteína se encuentra en solución acuosa produce complejas interacciones con la solución que la rodea.2. .9. En el primer caso las proteínas tienen una baja solubilidad y en el segundo caso una alta solubilidad.1) presentan regiones hidrofóbicas. pH y algunos solventes orgánicos. Un tipo reciente de precipitación lo conforman los métodos que se basan en la capacidad que tienen las proteínas de formar complejos mediante la interacción de los sitios activos de éstas con ligandos específicos. Particularmente. y regiones hidrofílicas cargadas ya sea positiva o negativamente. 9.1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad El hecho de que las proteínas sean moléculas anfotéricas se debe a que sus superficies (Figura 9. En esta sección se revisan los tres métodos básicos de precipitación: • Precipitación por Disminución de la Solubilidad. utilizando como agentes precipitantes temperatura. De lo anterior se desprende que la estructura de la proteína determina su solubilidad. • Precipitación por Afinidad. cuando se agrega un agente precipitante a la solución. Como el cambiar las características de la superficie de la molécula puede implicar cambiar la proteína misma.

Precipitación isoeléctrica. PRECIPITACIÓN wm Regiones hidrofóbicas Figura 9. . . .Precipitación con solventes.496 CAPÍTULO 9.Precipitación con polímeros no iónicos. Precipitación con Sales Una de las técnicas más ampliamente utilizadas para la purificación de enzimas es la llamada precipitación por insolubilización por salado o "salting out". Se realiza agregando altas concentraciones de sales a la solución en leí que se encuentra la proteína para producir su precipitación.1: Esquema de la distribución de carga y de zonas hidrofóbicas en una molécula de proteína típica. generalmente se opta hacer cambios en el solvente que alteren la solubilidad de la proteína.Precipitación con sales. . Los métodos utilizados para la precipitación de proteínas que se revisan en esta sección y que están basados en la disminución de la solubilidad por alteración del solvente son: .

la primera del lado izquierdo de la figura. 1990). FUNDAMENTOS 497 Insolubilización por salado [Sal] Figura 9. En esta figura se pueden apreciar dos regiones.2.2: Efecto de la concentración de sal en la solubilidad de proteínas: Regiones de solubilización por salado e insolubilización por salado. dejando las regiones hidrofóbicas en libertad de combinarse intennolecularmente (Glatz. y la otra donde la solubilidad de la proteína disminuye a medida que la concentración de sal aumenta llamada región de insolubilización por salado o "salting out". Aquellas proteínas que presentan mayor número de regiones hidrofóbicas sobre su superficie. Mecanismo: Una descripción simplificada del mecanismo de insolubilización por salado está basada en el hecho de que la adición de las sales elimina el agua de la protema hidratada.2 muestra una curva característica de la solubilidad de una proteína como una función de la concentración de la sal en el medio. El punto máximo de esta curva es característico de cada tipo de proteína. La Figura 9. donde la solubilidad de la proteína se incrementa con la concentración de la sal. forman agregados y precipitan más . llamada región de solubilización por salado o "salting-in".

Este ordenamiento lo produce el contacto entre regiones hidrofóbicas de la proteína con la solución acuosa. rápidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofóbicas. Una descripción más detallada de la precipitación con sales es la siguiente (Scopes. Este ordenamiento es inestable termodinámicamente comparado con el que presentan las proteínas sin solvatar conjuntamente con las moléculas de agua libre.498 CAPÍTULO 9. Si la precipitación de proteínas utilizando sales se presenta como una serie de tres procesos. esta disolución puede ser representa por: .3. de tal forma que en el primer proceso se considere la disolución de la proteína en agua. 1994): Cuando las moléculas de proteína están en solución las moléculas de agua presentan un ordenamiento como el que se muestra en la Figura 9. Debido a esta propiedad hay proteínas que pueden permanecer en solución a altas concentraciones de sal. PRECIPITACIÓN Figura 9.3: Ordenamiento de las moléculas de agua frente a las regiones hidrofóbicas de la molécula de proteína.

1) donde nH2O representa el agua ordenada alrededor de los residuos hidrofóbicos de la proteína P (el proceso tiene una AS° y una AG° negativas y por lo tanto una A//° también negativa). En el segundo proceso que es hipotético. el cambio en la entalpia se espera que sea aproximadamente el inverso del que presenta el proceso de la ecuación (9. se considera a dos moléculas de proteína en disolución que podrían unirse al interactuar a través de sus residuos hidrofóbicos.B~ • n2H2O (9. En este segundo proceso se tiene que A5° es grande y positiva.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipitación de proteínas (insolubilización por salado) basado en el proceso descrito anteriormente.2) donde (P — P') representa el agregado de proteína que puede ser formado. FUNDAMENTOS 499 P + nH2O -> P • nH2O (9. De esta unión se liberaría agua por medio de la siguiente reacción: P •niH20 + P' • n2H2O -+(P. A (7° puede ser pequeño y su signo depende de la magnitudes de AS0 y A//°. Puesto que la proteína es soluble no ocurre el agregado dado por la ecuación (9. El proceso completo puede describirse de la siguiente manera: P-P' + (ni + ni)H20 + (AB)aai-* P .2).9.niH2O + B' • n2H2O (9.5) La Figura 9. .4) (9. las moléculas de agua liberadas de acuerdo al proceso hipotético de la ecuación (9. En el tercer proceso se agrega una sal a la solución.P') + (ri! + n2)H2O (9. Esto es: (AB)ml + (ri! + n2)H2O -> A+ .2) son atrapadas por la sal.P' + A+ •niH2O 4. AG° a bajas concentraciones de sal será positiva para una proteína soluble en agua.2.3) para esta reacción A//° es positiva.1). se producen agregados de proteína y éstos precipitan.

Debido a lo anterior los modelos de precipitación son de carácter empírico. Las sales que contienen aniones polivalente tales como sulfates y fosfatos tienen valores de ra mayores qui las sales univalentes. m: Pendiente de la curva de insolubilización por salado. es característica de cada proteína e independient< del tipo de sal. independiente del pH y de la temperatura. de sal] (9.6' la ecuación (9. Los cationes polivalentes como el calcio o e magnesio disminuyen los valores de m. En esta ecuación: S: Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina A: Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura Esta constante usualmente toma un valor mínimo en el punt( isoeléctrico.5) es la ecuación de una recta con pendiente m y ordenada al origen A. pero varía con el tip< de sal y de proteína. .500 CAPÍTULO 9. Esta e. En este modelo la solubilidad de la proteína está dada por: log S = A — m[conc. PRECIPITACIÓN + Sal Solución salina (Agregado que Precipita) Figura 9.4: Esquema de la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. Ecuación de la Precipitación con Sales: El mecanismo de precipitación descrito anteriormente proporciona una explicación para la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. sin embargo la teoría de este fenómeno aún está en desarrollo. Uno de los más ampliamente utilizados es el de Cohn.

Naturaleza'de la Sal: La naturaleza de la sal que se utiliza en el proceso descrito por la ecuación (9.9. el de una enzima pura y el de una mezcla de enzimas.5: Solubilidad de aldolasa de músculo de conejo a pH 7.0 en solución de sulfato de amonio: (o).5 permiten apreciar el grado de ajuste del modelo dado por la ecuación (9.6 se muestra otro ejemplo experimental de precipitación de proteína que obedece la ecuación (9.0 60 2.5) (la escala de las ordenadas es logarítmica).5) para dos casos. Los datos experimentales que se presentan en la Figura 9. Copyright ©1994. solubilidad de la enzima pura. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. (-f) solubilidad en una mezcla de enzimas de músculo de conejo: aldolasa. En la Figura 9.8 M Figura 9. gliceraldehido fosfatasa deshidrogenasa y lactato deshidogenasa en proporciones 3:3:3:1. Se observa para este último caso una ligera desviación respecto al comportamiento teórico. Todos los derechos reservados. 2. En esta figura se observa que el comportamiento lineal depende de la concentración inicial de la enzima. FUNDAMENTOS 501 o- TJ 1 -H -2- 50 2. Fuente: Scopes.3) es un aspecto muy importante . piruvato kinasa.4 70 % Sat. 1994.2.

PRECIPITACIÓN E 10 T3 'E D í '« 1 1-1 0. .4.2.5- Fuerza iónica ( moles/1) 0.6: Efecto de la concentración de enzima en la insolubilización por salado de fumarasa por sulfato de amonio a 6°C.502 CAPÍTULO 9. Todos los derechos reservados.2. (o) 15.1 4 5 6 30 40 50 60 % de saturación Figura 9. ( + ) 25. 1983 Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Concentraciones iniciales de enzima (unidades/mi): (A) 5. Adaptada de: Bell etal. Copyright ©1983.

Las sales que producen mejores resultados.Determinación de la solubilidad de piruvato quinasa de músculo de conejo. para minimizar la dilución.1. Ejemplo 9. FUNDAMENTOS 503 que debe considerarse. En un experimento de precipitación de la enzima piruvato quinasa con sulfato de amonio a pH 7. 4. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que requiere el método. esto es. una mayor precipitación de la proteína. son aquellas que producen deshidratación de las regiones hidrofóbicas y fomentan la hidratación de las regiones polares de la proteína.. sin interaccionar directamente con ésta. Las sales que producen enlaces e interactúan directamente con la proteína tienen efectos desestabilizadores.9. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea diferente a la de la solución para facilitar su separación. 1994): . 5. algunas de ellas son las siguientes: 1. Añadir la sal en forma sólida y no como solución.2. se obtuvieron los siguientes resultados (Scopes. Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series de Hofmeister): citrato'3 > tartato'2 > SO'2 > F~ > IO^ > H2PO~ > CH3COO. Existen reglas heurísticas para seleccionar la sal más adecuada para un proceso de precipitación. Los cationes son efectivos en el siguiente orden: NH+ > K+ > Na+ 3.> Cl~ > C/03 > Br~ > N0~ > CIO~ > I~ 2.

258 3.34 M de sulfato de amonio es: S = 1. 1 PRECIPITACIÓN S (mg/ml) 0. La ecuación de solubilidad para la enzima piruvato quinasa está dada por: logS" = 10.079 0. De acuerdo a la ecuación (9.salina] b). Dato No. los valores experimentales se ajustan por mínimos cuadrados y se abtiene que A = 10.540 — 4.60 2.34 M de sulfato de amonio. Calcular la solubilidad de la enzima para una concentración !. . se tiene que la solubilidad de la enzima a una concentración 2.4918 mg/ml Precipitación Isoeléctrica Otra técnica para precipitar proteínas se basa en la disminución de su solubilidad en el punto isoeléctrico.316 1.7 muestra la gráfica correspondiente.162 2 3 4 Concentración sulfato de amonio (M) 2.salina] donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva. Solución: a).24 a).5) la solubilidad de la enzima está lada por: log S = A — m[conc.04 CAPÍTULO 9.50 2. Determinar los parámetros de la ecuación de solubilidad A y m.43. b). Para determinar los valores de los parámetros de la ecuación anterior.540 y m = 4. La Figura 9.37 2. Sustituyendo el valor de la concentración salina en la expresión anterior.43 x [conc.

.4 70 % saturación 2. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Copyright ©1994. A este pH la molécula es incapaz de desplazarse en un campo eléctrico. Existe un pH llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de la proteína es cero. A este tipo de precipitación se le llama precipitación isoeléctrica.2.En punto isoeléctrico el efecto de las fuerzas electrostáticas entre las proteínas es casi nulo. . Todos los derechos reservados.Cuando la proteína se encuentra a un pH diferente de su pH isoeléctrico. Mecanismo: Las proteínas por su naturaleza anfotérica presentan una carga neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH bajos. y en consecuencia las moléculas de proteína tienden 'a unirse y a precipitarse. FUNDAMENTOS 505 -2 - 2. 1994. las moléculas proteicas poseen una carga eléctrica neta del mismo signo.0 2. En estas condiciones la solubilidad de la proteína es mínima.Las atracciones electrostáticas son bloqueadas por pequeños agregados de moléculas. Fuente: Scopes. Debido a esto existe una repulsión electrostática entre las moléculas ocasionando que su solubilidad se incremente. En la Figura 9.8 se muestra el tipo de interacciones que se presentan entre moléculas cargadas: .7: Variación de la solubilidad de la enzima piruvato quinasa en función de la concentración de sulfato de amonio. .9.8 M Figura 9.

debido a que los ácidos son baratos r varios de ellos como el fosfórico. En la Tabla 9. atracción nínima a pH isoeléctrico.2 ¡e muestran pH's isoeléctricos de algunas proteínas.idad de proteína no precipitada con respecto al pH. clorhídrico y sulfúrico son aceptables :n productos alimenticios. atracción. c).8: Representación esquemática del efecto de las fuerzas electrostática sobre la proteína: a). La precipitación isoeléctrica :omunmente se realiza a pH's ácidos. cabe hacer notar que hay algunas )roteínas como las globulinas. La principal desventaja de usar ácidos es su >otencial de producir daños irreversibles a la proteína. Selección del agente precipitante. b). La Figura 9.9 muestra una curva típica de la variación de la can. En esta figura Duede observarse que existe un pH al cual la fracción de proteína no precipitada es mínima. que presentan una solubilidad conside•able aún cuando se encuentren en su pH isoeléctrico. Sin embargo. . Cada proteína tiene un pH isoeléctrico característico por lo que la precipitación isoeléctrica puede utilizarse como una operación de pu•ificación de proteínas. éste es el pH isoeléctrico.506 CAPÍTULO 9. PRECIPITACIÓN •f \ Baja interacción * + en el punto isoeléctrico Figura 9. repulsión.

6 0.. FUNDAMENTOS 507 0.2 pH igura 9.2.ración inicial del extracto acuoso.4 0.9: Efecto del pH sobre la concentración de . expresada como una fracción de la concen. 1983. 7 . Fuente: Bell et al. leproducida con el permiso de Springer-Verlag. Todos los derechos reservados.8 0.proteína de soya jue permanece en solución. Copyright ©1983.

2 6.0 5.10) consiste en considerar un desplazamiento global del agua por el solvente. Este efecto se debe principalmente a que el solvente presenta una constante dieléctrica menor que la del agua. Cuando se agrega un solvente orgánico como etanol o acetona.8 7.0 4. Proteína Pepsina Ovoalbúmina Seroalbúmina Ureasa (3 -Lactoglobulina 71 . se producen agregados de moléculas proteicas que tienden a precipitar.0 Precipitación con Solventes La precipitación de las proteínas de una solución también puede realizarse mediante la adición de un solvente orgánico ligeramente polar. lo cual significa que los iones en solución acuosa presentan interacciones más débiles que en otros medios. lo cual produce un incremento en las fuerzas de atracción entre cargas opuestas y una disminución en el grado de ionización de los radicales de la proteína. a una solución acuosa de proteínas (a un pH y temperatura dados).508 CAPÍTULO 9. y en consecuencia una disminución de la solubilidad de ésta. Mecanismo: El agua se caracteriza por su alta constante dieléctrica (Tabla 9.0 9. Otra forma de explicar la precipitación por solventes (Figura 9.6 4.3).Globulina Hemoglobina Mioglobina Ribonucleasa Lisozima pH ~ 1. PRECIPITACIÓN Tabla 9.0 5.6 6.6 11.2: pH's isoeléctricos de algunas proteínas. conjuntamente con una inmovilización parcial de las moléculas .

0 21. K > una constante que toma en cuenta la constante dieléctrica original el medio acuoso. 1983) que está dada por: log S = log S0 -f — (9. cuación de la precipitación con Solventes: La expresión que tlaciona el cambio en la solubilidad de una proteína en su punto oeléctrico con un cambio en la constante dieléctrica del medio es una cpresión empírica (Bell et a/. FUNDAMENTOS Tabla 9.3: Constantes dieléctricas de algunos líquidos a 20°(7. lisma que varía dependiendo de la cantidad de solvente agregada. El solvente puede desplazar las oléculas ordenadas de agua de las regiones hidrofóbicas estimulando precipitación de la proteína.3 1. Líquido Agua Metanol Etanol Acetona Benceno Hexano 509 D 80.0 33.2. se lleva a cabo a temperaturas tan bajas uno —100(7. agua por la hidratación del solvente. la precipitación de proteínas de plasma imano utilizando etanol.turas bajas. elección del solvente: La mayor desventaja de la precipitación con )lventes es la desnaturalización que puede sufrir la proteína por acción . este tipo de precipitación debe trabajarse a tempe. Trabajar con temperaturas por arriba de 10°C provoca jsnaturalización de la proteína.4 2.9 . S0 es la solubilidad extrapolada. Por ejemplo.7) donde Ds es la constante dieléctrica de la mezcla solvente-agua. Debido a que la influencia de la constante dieléctrica es muy sensible la temperatura.0 24.

10: Representación esquemática de las interacciones electrostáticas de agregación entre las proteínas en presencia de un solvente orgánico. Reproducida con el penniso de Springer-Verlag.510 CAPÍTULO 9. Fuente: Scopes. 1994. Todos los derechos reservados. Copyright ©1994. . PRECIPITACIÓN Solvente orgánico Región hidrofóbica Figura 9.

5). ya que algunos de ellos como los alcoholes son altamente inflamables y el uso seguro de los mismos ocasiona incrementos en los costos. sin embargo existen dos modelos que permiten una buena comprensión de este fenómeno. 1989) conducen a una ecuación de solubilidad de la misma forma que la ecuación (9. El modelo propuesto por Laurent se basa en un mecanismo de exclusión geométrica de regiones hidratadas de la proteína por el polímero. Algunos factores que deben considerarse en la selección del solvente son: El solvente debe ser completamente miscible en agua. 1971) considera. y proteína-proteína de las especies presentes. Mecanismo: El mecanismo por el cual ocurre la precipitación cuando se utilizan estos polímeros no está claramente establecido. Debe ser seguro. y sugieren que los polímeros excluyen a las proteínas de parte de la solución y reducen la cantidad efectiva de agua disponible para su solvatación. FUNDAMENTOS 511 del solvente. de tal manera que es importante seleccionar adecuadamente éste. El modelo de Ogston se basa en la teoría termodinámica y concluye que los sistemas (proteína en solución acuosa-polímero) pueden ser explicados en términos de los coeficientes de interacción proteínapolímero. Precipitación con Polímeros no Iónicos La precipitación de proteínas también puede realizarse utilizando polímeros neutros como el polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. No debe reaccionar con las proteínas. El modelo de Laurent (Juckes. Los modelos desarrollados por Ogston y Laurent (Clark. Debe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente principalmente cuando se trabaja a gran escala. Dichos polímeros de elevado peso molecular son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas.9. a la proteína como una . Debe ser un buen agente precipitante.2.

8) [i].303 V rp ) donde v es el volumen parcial específico del polímero. rp: Radio del cilindro del polimero. por lo tanto. [//]. el volumen excluido por peso del polímero (W) está dado por: | = 1(1 .512 CAPÍTULO 9. PRECIPITACIÓN esfera y al polímero como un cilindro. 1: Longitud total de la molécula de polímero por unidad de volumen (9. Considerando que el volumen total (Vt) es igual al volumen disponible (Vd) más el volumen excluido (K). supone que la proteína es incapaz de distribuirse dentro del polímero y.10-KC) donde: C es la concentración del polímero y — / (9.10 -KC como la solubilidad de la proteína es proporcional a la fracción de volumen disponible: = x .9) i \ 3 2. que la solubilidad (S) de la proteína es proporcional sólo al volumen disponible (V¿) dado por: Vd = exp [-7r/(ra + r p ) 2 ] donde: rs: Radio de la molécula de proteína. la fracción de volumen excluido Ve> y la fracción de volumen disponible Vd> están dadas por las siguientes expresiones: VO = 1 . [L].

9) proporciona un resultado similar (Juckes.FUNDAMENTOS 513 donde k es una constante de proporcionalidad. Considera que el potencial químico de la proteína //t en «encía de un polímero. está dado por: pi = fí0. 1) al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en :cuación (9.9) es equivalente a la ecuación corresidiente a la precipitación por insolubilización por salado.-mj) donde: Proteína Polímero °: Es el potencial químico de la proteína en el estado estándar : Es la constante de los gases ideales ': Es la temperatura absoluta til Es la molalidad de la proteína ij\ Es la molalidad del polímero «•: Es el coeficiente de interacción proteína-proteína (9.10) que es la ecuación de una recta con pendiente K y ordenada en el El uso de la ecuación (9.7).11) . El modelo de Ogston que se deriva de una simplificación termodinica establece que la proteína permanece en solución siempre que potencial químico en solución sea menor que su potencial en la fase icipitada. La ecuación (9. + R!T(lnm¿ + c¿t-m¿ + c¿. (9. La ecuación anterior de ser escrita en forma más conveniente como: logS^logk-KC o bien como: logS^X-KC jen X.

10) puede ser escrita corn (Foster et al.12 donde S es la solubilidad de la proteína. La ecuación (9.13 donde: RT En este sistema puede suponerse que el término fS es mucho má pequeño que In5 entonces la ecuación (9. la ecuación (9. La Figura 9. En un sistema polietilenglicol y proteína en solución acuosa.12) puede ser escrita como: \nS = X-aC (9. Después de ésto el potencial permanece constan te. El grado de ajuste del modelo depende de 1 concentración de la enzima. de tal manera que cuando la concentrado de la enzima es alta es necesario considerar en la ecuación el términ de interacción proteína-proteína fS para un mejor ajuste.11 puede ser rearreglada en forma más conveniente como: (9.13) puede ser utilizada para calcular la solubilidad d la proteína a diferentes concentraciones del polímero.11 muestra el comportamiento de la solubilidad de 1 alcohol deshidrogenasa en función de la concentración de PEG. en e que solamente las interacciones polietilenglicol-proteína y proteína proteína son significativas. el potencia químico se eleva y el sistema reacciona insolubilizando proteína inician dose la precipitación. Se puede apreciar que la cor centración de PEG requerido para reducir la solubilidad depende de 1 concentración de enzima. C la concentración d polietilenglicol. a de niveles de concentración de la enzima. . PRECIPITACIÓ1 Ciji Es el coeficiente de interacción proteína-polímero Cuando la molalidad del polímero rrij se incrementa. / el coeficiente de interacción proteína-proteína y a c coeficiente de interacción proteína-polietilenglicol.14 que resulta ser análoga a la ecuación de insolubilización por saladc La ecuación (9.514 CAPÍTULO 9. 1973): (9.

0- 1. a) log (S) vs C. et al.11: Relación entre la solubilidad S de la alcohol deshidrogenasa y la concentración C de PEG a dos concentraciones de la enzima: (ü) 8 mg/ml. 1973. (o) 75 mg/ml. Copyright ©1973.2.5- 1.p.5- 0.5- 1. b) log (S) + fS vs C.5- 6 10 14 6 10 Concentración de polietilenglicol ( % w/v) 14 Figura 9. FUNDAMENTOS 515 1. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Lie. Todos los derechos reservados. .0- 0. Fuente: Foster.

los polímeros no ] iónicos generalmente pueden ser eluídos durante el paso de la proteína I por un intercambiador iónico. El polietilenglicol es un polímero disponible en varios grados de ' polimerización y presenta una viscosidad moderada. PRECIPITACIÓN Selección del Polímero: Es importante seleccionar adecuadamente el polímero que se utilice como agente precipitante. 9. a diferencia de la precipitación por . Varios tipos de polímeros pueden ser efectivos en la precipitación de las proteínas el incoveniente es que algunos pueden generar una alta viscosidad que 5 dificulta su manejo. El polietilenglicol de peso molecular 4000 o mayor es más efectivo en la precipitación de proteínas que el de bajo peso molecular. Además.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva Los métodos de precipitación por disminución de la solubilidad son efectuados a condiciones moderadas de tal manera que la proteína de interés no se desnaturalice. Se ha observado también (Bell et a/. 1983) que se requieren bajas concentraciones de polietilenglicol para precipitar proteínas de alto peso molecular. Una ventaja adicional de la precipitación con polímeros no iónicos es que éstos estabilizan la proteína y permiten realizar la precipitación a temperatura ambiente.2. . mientras que para precipitar proteínas de bajo peso molecular las concentraciones deben ser mayores. o en solventes orgánicos.516 CAPÍTULO 9. pH. salado en la cual debe eliminarse la sal antes de seguir con cualquier i operación de fraccionamiento por intercambio iónico. de tal manera que se eliminen por desnaturalización las proteínas contaminantes y se obtenga una buena recuperación de la proteína deseada. puede utilizarse esta propiedad en las primeras etapas del proceso de purificación sujetando a la solución de proteínas a estas condiciones extremas. El objetivo de la desnaturalización selectiva es crear las condiciones en las cuales la proteína de interés no se desnaturaliza o su desnaturalización es mínima. Si la proteína que se desea purificar presenta estabilidad en condiciones extremas de temperatura.

t: Tiempo. FUNDAMENTOS Desnaturalización por Temperatura 517 En general las proteínas son muy sensibles a la temperatura. R: Constante de los gases ideales. (9.g. hay proteínas que se mantienen estables a temperaturas altas. k: Velocidad específica de desnaturalización.15) La dependencia del proceso de desnaturalización con la temperatura está dada por: (9-16) de tal manera que la influencia de la concentración de proteína y la temperatura sobre el cambio en la concentración está dado por: P] donde: k0: Constante característica. (9. T: Temperatura. [M/L3]. Sin embargo. [t~l]. [t~1]. [KJ /mol —° K}. E: Energía de activación de la desnaturalización. [°K]. puede usarse la temperatura para desnaturalizar y precipitar proteínas contaminantes y aislar la proteína de interés. [t]. El proceso de desnaturalización de la proteína por efecto de la temperatura puede ser descrito como un proceso de primer orden de acuerdo a la siguiente expresión: = -k[P] donde: [P]: Concentración de proteína disuelta.2.17) . Cuando esto sucede. [KJ /mol}.

Esto significa qu es posible seleccionar una temperatura. lo importante es determina. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Todos los derechos reservados Las proteínas tienen energías de activación relativamente altas de ta manera que presentan una variación muy significativa de la velocidac de desnaturalización con la temperatura.13 muestra un esquema teórico de las posibles curva de desnaturalización para diferentes enzimas. se desnaturalizan completamente las enzima Pl y P1. con E — 400 kj rao/"1. PRECIPITACIÓN 1-s 45 50 55 Temperatura (°C ) Figura 9.518 CAPÍTULO 9. Cuando la enzima d> interés es la P5. cuando la energía d< activación es de E — 400 kj mol~l. si L solución se calienta a 57°.y en grado substancial la P3 y la P4. La Figura 9.12: Diagrama teórico de proteína que permanece estable después de 10 min de incubación. cual es la energía de activación del paso más lento o controlante. Copyright ©1994. Po. regla general el primer paso es el más lento e involucra el rompirnient< de los enlaces que le dan la conformación a la proteína. siendo ésta estable a temperaturas de hasta 58°. El mecanismo de desnatu ralización puede involucrar varios pasos. que produzca por un lado 1 . Fuente: Scopes.1^ muestra un diagrama teórico del porcentaje de proteína que permanecí estable después de 10 minutos de incubación. La Figura 9. 1994.

sobre todo en tanques agitados. La precipitación con temperatura puede ser riesgosa debido a que os daños que se ocasionen a la enzima de interés son irreversibles. 1994. Todos los derechos reservados.2. para lograr bajar adecuadanente la temperatura y evitar así que ésta pueda dañar a la proteína de nterés. La elución se calienta hasta una temperatura dada. . se mantiene por un )eríodo de tiempo a dicha temperatura y enseguida se enfria rápidanente. debido a que éste estabiliza las proteínas e nhibe la actividad de las proteasas. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. lesnaturalización completa de una enzima y por otro permita que otra >ermanezca estable. FUNDAMENTOS 519 100- 1-s 50- 25- 40 45 50 55 60 Temperatura (°C ) 'igura 9. Copyright ©1994. Es conveniente realizar el calentamiento en presencia de sulfato le amonio en la solución. Fuente: scopes. que como es sabido se incrementa :on la temperatura. se requiere contar con sistemas de enfriamiento idecuados.13: Esquema teórico de las posibles curvas de desnaturalizaión por temperatura de diferentes proteínas. Por lo tanto.

Cinética de desnaturalización .De acuerdo a la forma integrada de la ecuación (9. x — = exp(-kt) •In cuando la desnaturalización es del 50 % la constante k está dada por: k = -ln(0.14). PRECIPITACIÓN Ejemplo 9.000 J/mol.58 kr combinando el resultado anterior con la ecuación (9. a).5) lOmin k = 0.520 CAPÍTULO 9.58 - 400000 -^-7 1/323 .Calcular la constante de la velocidad específica de desnaturalización. O í mol-°¡\ • J „r- 1 \ x O¿<JJ ^^1T x/ j/ .T\\ mol oqi O... ^323 °K kT ^323 °K ln(0. Solución: a).La forma integrada de la ecuación (9.. Cuando esta proteína se mantiene a 50° C por u n lapso de lOmin se desnaturaliza en un 50 %.5) ln(0.0693 min~l k = 1.9) = 6. La desnaturalización de una protema tiene una energía de activación de 400. b).14) es: P / ...2.Calcular la temperaratura a la cual la proteína sólo se desnaturaliza el 10 % en lOmin.15) se obtiene: ^323 °K kT 'E /323 -T\l R V 323T )\ 6.155 x 10~3 s~l b).

14). la temperatura es: T = 46°C' snaturalización por pH 3Ído a que ciertas proteínas de interés son estables a pH's extremos. 1994.0 ura 9. La velocidad de desnaturalización a pH's extremos ya sea ácidos o icos depende del tiempo que tarde la proteína en abrirse y perder conformación. . Copyright ©1994. La desnaturalización por pH ocurre tanto por la formación en la lécula de proteína de regiones con cargas iguales que tienden a resrse. la utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitai por desnaturalización selectiva de sus proteínas contaminantes.FUNDAMENTOS 521 H. Fuente: Scopes.14: Esquema de la desnaturalización de una proteína por :to del pH. Las fuerzas internas obligan a la molécula a abrirse provodo su desnaturalización. Todos los derechos reservados. como por el rompimiento de las fuerzas de atracción que le dan :onformación a la proteína (Figura 9. •oducida con el permiso de Springer-Verlag. Este proceso es esencialmente similar al que ocurre la desnaturalización por temperatura.

Este tratamiento permite desnaturalizar las proteínas contaminantes y obtener la deshidrogenasa. Después de un tiempo de incubación a esta temperatura la solución se enfría. El pH y la temperatura de la solución deben definirse y manejarse cuidadosamente (pues también actúan sobre la proteína de interés) con el fin de maximizar el rendimiento y la pureza de la proteína de interés. La simple adición de ligandos a una solución proteica generalmente no es suficiente para que ocurra la precipitación. y de lograr la máxima precipitación de las proteínas contaminantes. En el caso de la afinidad bioespecífica el ligando puede ser un sustrato. PRECIPITACIÓN Desnaturalización por Solventes Orgánicos La estabilidad que presentan algunas proteínas en una solución con solventes orgánicos es una propiedad que ha sido utilizada en procesos de purificación.2. 1994). o un anticuerpo.522 CAPÍTULO 9. Una proteína estable en solventes orgánicos es la alcohol deshidrogenasa de levadura.a 25°C. El aumento de temperatura permite que la cantidad de solvente utilizada sea menor que la empleada en la precipitación convencional de proteínas.15 se muestra la desnaturalización de la enzima gliceraldehido fosfato deshidrogenasa con varios alcoholes a una temperatura de 30°(7 y un tiempo de incubación de 30 minutos (Scopes. 9. En el caso de pseudoafinidad los ligandos utilizados son colorantes o metales. un inhibidor. Esta enzima puede ser purificada mediante un tratamiento con 33% vol/vol de etanol. acetona o cloroformo para desnaturalizar proteínas. Cuando se utilizan solventes orgánicos como etanol. la temperatura de la solución se mantiene entre 20 y 30°C con el fin de acelerar el proceso. mediante la precipitación de proteínas contaminantes con estos solventes.3 Precipitación por Afinidad La precipitación de proteínas por afinidad es un método de precipitación selectivo que se basa en la capacidad que tienen las proteínas para unirse con ligandos por medio de sus sitios activos. Es necesario que el ligando propicie un estado de agregación de los complejos ligando- . En la Figura 9.

9. 1-butanol. (•). FUNDAMENTOS 523 10 Figura 9. etanol.2. Scopes. 1-propanol. metanol. Copyright ©1994. (+). 2-propanol. (<). Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.15: Desnaturalización de gliceraldehido fosfato deshidrogenasa: (o). 1-pentanol. . (ü). (O). 1994. Todos los derechos reservados.

b) Agregado en forma de red producido por un anticuerpo policlonal y una proteína tetramérica o por ligandos bis-NAD y una proteína tetramérica.16: Representación esquemática de la formación de agregados por inmunoafinidad y por afinidad. llamado inmunoprecipitado. Reproducida con el permiso de Spriiiger-Verlag. proteína. Todos los derechos reservados. La Figura 9. El tipo de agregados que se forman depende del tipo de ligando y de la proteína. 1994. PRECIPITACIÓN1 a) b) Figura 9. En la Figura 9.524 CAPÍTULO 9. La precipitación por afinidad bioespecífica ocurre sólo cuando se agrega un ligando específico a la solución de proteínas.18b. En el caso de que las proteínas sean oligoméricas se originan redes como la que se muestra en la Figura 9. Agregado en forma de cadena constituido por un anticuerpo policlonal y una proteína monomérica. El principio de precipitación por inmunoafinidad se ha generalizado . a). Este tipo de agregados se producen en forma natural en el caso de los sistemas antígeno-anticuerpo. Este ligando se une con las proteínas o enzimas y forma agregados.16 se presentan dos sistemas de precipitación por afinidad. Copyright ©1994.16a presenta un agregado producido por la unión de un anticuerpo policlonal y una protema monomérica. Fuente: Scopes.

17 se muestra un esquema de otro enfoque de la ?cipitación por afinidad. y es necesario llevar a cabo rias pruebas experimentales para determinar cuál es la concentración tima de bis-ligando a la que ocurre la precipitación de la totalidad la proteína. El conocimiento este comportamiento permite hacer la selección adecuada de la geo>tría en que se realizará el proceso. insiste en sujetar el ligando a un polímero obteniéndose así agentes iltifuncionales (macroligandos) que se unen con la proteína de interés forman agregados. tubues y continuos tipo tanque agitado (Figura 9. Se ha reportado un rendimiento del 85% la recuperación de la enzima lactato deshidrogenasa (Luong et a/.18).í. tos ligandos se enlazan covalentemente a los sitios activos de las )teínas oligoméricas y forman redes semejantes a la que se muestra la Figura 9. Esta técnica de precipitación por afinidad ha tenido m éxito en la precipitación de deshidrogenasas utilizando como pretitante el ligando Bis-NAD . 4 Diseño de Precipitadores el diseño de un proceso de precipitación debe tomarse como base el nportamiento cinético de las partículas en solución. En la Figura 9. 37). 1984). EQUIPO DE PRECIPITACIÓN 525 ra el uso de otro tipo de ligandos que no son anticuerpos y que se >ducen de manera artificial.16b. dando origen a un nuevo enfoque en la jcipitación por afinidad al utilizar ligandos bifuncionales bis-NAD. La limitación de este enfoque de la precipitación radica en que se lica únicamente a proteínas oligoméricas. esta sección enfoca a dos aspectos: . En base a lo anterior. 3 Equipo de Precipitación operación de precipitación puede realizarse en diferentes tipos de ictores entre los que se encuentran los reactores intermitentes. Posteriormente se produce la precipitación del nplejo ligando-proteína al agregar sal a la solución o al cambiar el [ de la misma (Janson. el cual ya ha sido aplicado a escala industrial.

c).17: Representación esquemática.526 CAPÍTULO 9. d). precipitación del complejo. .-. ición del macroligando a la solución proteica. formación del |o ligando-proteína. b). de la precipitación del comgando-proteína al agregar una sal o cambiar el pH de Ja solución.producía Cambia tn «I pH d* U solución Precipitado maerotiga'ido • producto S*pv«ción ¿«Ipredudo o 0 ¿b o o o O 9. disode la protema del macroligando. o 0 0 ° o a Formaoibod» agregado* maoofigafldo . PRECIPITACIÓN A// Extracto crudo p.

a) Intermitente b) Tubular c) Continuo tipo tanque agitado. Diseño del Precipitador.•?•.18: Tipos de reactores utilizados en la precipitación de ínas. como las que originan sus cargas eléctricas.cos relacionados con la precipitación sin que ocurra desnaturalin de la proteína.DISEÑO DE PRECIPITADORES 527 Alimentación ^ C2 Alimentación to (b) (a) P /->--v£:-. que las moléculas de proteína queden asociadas al chocar se ree eliminar tanto las barreras producidas por las moléculas de agua is rodean. . 1 Cinética de la Precipitación ecipitación de proteínas puede efectuarse ya sea desnaturalizando desnaturalizar éstas. ira facilitar su estudio la cinética de la precipitación se divide en fruientes fases: Mezclado inicial: La solución proteica se mezcla con el agente precipitante para eliminar las barreras. Cinética de la Precipitación. a una solución proteica las moléculas presentan por efecto de su ía cinética un movimiento al azar que produce choques entre sí. Nucleación: Al disminuir la solubilidad de la proteína se inicia la precipitación al formarse en el seno de la solución pequeñas partículas (núcleos).: (c) í^S VÜ£^^ V Producto a 9. En este apartado se revisan los aspectos .

Se forman las partículas primarias de tamaño entre 0. En la descripción anterior las fases de crecimiento 3 y 4 son llamadas también crecimiento pericinético y agregación ortocinética. solvente o polímero no iónico) a la solución de proteínas. respectivamente. Mezclado Inicial Una vez que se agrega el agente precipitante (sal. La frecuncia de las colisiones está limitada por la velocidad de difusión de las moléculas y no por el mezclado. [cm2/s]. [cmj. El f tiempo requerido para obtener una mezcla homogénea esta dado por: donde: D: Coeficiente de difusión. se requiere que : éste se difunda rápidamente para obtener una mezcla homogénea. 1: Diámetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitación. Crecimiento limitado por difusión: En esta fase los núcleos van creciendo conforme la proteína difunde del seno de la solución hasta los núcleos. Floculación: Los agregados se juntan formando los grandes flóculos. Crecimiento influenciado por el flujo: El mezclado favorece el crecimiento del agregado formándose partículas en el rango de 1 a 100 5.1 y 10 4. PRECIPITACIÓN 3.528 CAPÍTULO 9. De acuerdo a la teoría de difusión de remolinos el diámetro de éstos está dado por: donde: .

Considerando un tiempo de nucleación instantáneo la integración e la ecuación (9. En algunos casos como en los sistemas oloidales esta etapa es instantánea. por lo que el tiempo en que esto curre puede despreciarse. 529 P/V: Razón de potencia por unidad de volumen del sistema de agitación. Combinando las ecuaciones (9. [g/cm3]. [I/mol — s].4. i/: Viscosidad cinemática. [s] k: Constante del proceso. puede ser escrita de acuerdo a la teoría de Smoluchowski por un proceso de egundo orden: . [mol/I].19) conduce a: -.í =ks/-2 donde: t: Tiempo. [cm2/s].17) y (9.18) se pueden estimar tiernas de mezclado mediante parámetros del sistema.— = k* y^ yio (9. En esta fase la velocidad con que disminuye la concentración e partículas de soluto suspendidas en el seno del líquido.-. Este tiempo es una ledida del tiempo necesario para tener una mezcla homogénea.21) . íucleación. Crecimiento Limitado por Difusión o Crecimiento Pericinéico. En esta fase del proceso se inicia la formación de las equeñas partículas de precipitado (núcleos) que aparecen después de gregar el agente precipitante. (9 20) - yi\ Concentración de partículas de soluto ¿ en el tiempo t. En esta etapa las partículas de precipitado e encuentran dispersas en el líquido. [HP/cm3]. DISEÑO DE PRECIPITAD ORES p: Densidad de la solución.

19. (9. es el diámetro de la partícula.23) La ecuación (9. es el coeficiente de difusión. de . de tal forma que a medida que la partícula crece el valor del coeficiente de difusión disminuye. D. la ecuación (9. el valor de la constante no se altera pues la disminución en D tiene como causa un incremento en la misma proporción del diámetro de la partícula d. Debido a que es difícil medir la concentración y. De acuerdo a esta teoría k está dada por: k = SnDdN (9.20) y (9.530 CAPÍTULO 9.24) donde: á.-0k. de acuerdo con la teoría de Smoluchowski. es el número de Avogadro. De acuerdo a la ecuación (9. El valor del coeficiente de difusión de la ecuación anterior es un valor promedio de todas las partículas en el sistema. PRECIPITACIÓN donde y to es la concentración inicial del soluto i. Esto es: y¿M = yloM0 (9. M: Peso molecular promedio de las partículas de precipitado.23) aún cuando esto suceda.20) puede escribirse en términos del peso molecular promedio del precipitado utilizando un balance de masa. Si se conocen 7/to y M0 puede estimarse k. se puede obtener la siguiente expresión: M = M0 + M 0 y io kí donde: M0: Peso molecular del soluto. y TV. De aquí que esta etapa esté limitada por la velocidad de difusión. La ecuación (9.22) combinando las ecuaciones (9. La constante k del crecimiento pericinético.20) describe una recta con ordenada al origen \/yi y pendiente k. sólo depende de la difusividad y el diámetro de la partícula de soluto. La ordenada al origen es M0 y el valor de la pendiente está dada por M0í/.21).22) se representa gráficamente en la Figura 9.

En el proceso de precipitación cuando se agita una suspensión de partículas cuyo diámetro es mayor que una fj.19: Representación esquemática de M vs t para determinar experimentalmente el valor de la constante k.9. Crecimiento Limitado por el Flujo o Agregación Ortocinética. la velocidad con que disminuye la concentración inicial de esas partículas debido a los choques que forman agregados. El crecimiento de las partículas estará limitado tanto por el movimiento del fluido como por la concentración de partículas. La difusión puede limitar el crecimiento de partículas pequeñas. tal manera que el producto Dd permanece constante. Generalmente el tiempo de formación de las partículas primarias es mucho menor que el tiempo global del proceso de precipitación. el movimiento del fluido provocará que las partículas choquen y formen agregados. está dada por: . En una suspensión agitada de partículas esféricas de tamaño uniforme de diámetro e?. DISEÑO DE PRECIPITAD O RES 531 m = pendiente Figura 9. Estos choques también pueden ocasionar rompimiento de los agregados. pero es menos importante en el crecimiento de partículas grandes.m aproximadamente.4. Es decir. y en consecuencia k permanece constante. la determinación experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas.

532 CAPÍTULO 9. Si se sustituye la expresión de k en la ecuación (9. La constante k de la ecuación (9. Se ha encontrado que en ausencia de fuerzas repulsivas entre las partículas. —— = -aNd3 dt 3 P" (9. indica la frecuencia con que un choque da lugar a un agregado.26) en esta ecuación a representa un coeficiente que indica la eficiencia del choque.26) se obtiene una ecuación en la cual no esta involucrado el diámetro de las partículas y es dt fP/V\ ~ 1/2 (9.28) si ce esta ecuación se despeja d3 y se sustituye en la ecuación (9.24) está dada por: 1/2 [ pv (9.29) . la eficiencia de la colisión es proporcional a la (velocidad de corte)~°'18 y aproximadamente proporcional a d~°-73.26) el diámetro d de las partículas depende del tiempo.27) En la ecuación (9. Sin embargo.24) se obtiene: v. Este coeficiente puede ser estimado estudiando la velocidad con que decrece el número de partículas durante el crecimiento pericinético. Esta fracción esta dada por: 7TC?2 (9. dicho término se hace menos importante conforme aumenta el tamaño de las partículas. por lo que para su integración se considera una fracción constante f de volumen de partículas del soluto a volumen de la solución. PRECIPITACIÓN Ii = k V? Í>1 (9 2^ \&-¿\J) idealmente la ecuación anterior debería incluir un término para tomar en cuenta el crecimiento pericinético.

: .spera antes de que la floculación comience.28) se tiene: 533 (~¿~J *} /p/vY'2] } (9 30) - londe j/io es la concentración inicial de soluto en la solución bajo consideraciones del modelo. este mismo mezclado puede causar el pimiento de los flocules formados. Lo anterior se debe a que partículas que aparentemente pueden ir directo a una colisión. Debido a lo anterior la fase loculación generalmente se realiza a bajas velocidades de agitación L ocasiones sin agitación. de la 'Cidad de difusión y de la unión del agente floculante a la superficie a molécula de proteína. en este caso la velocidad de floculación enderá del mezclado del agente con la solución de proteínas. Estos aspectos deben arse en consideración en el diseño del precipitador. integrando la ecuación (9. La aglomeración o floculación de las partículas de pretado es la última fase del proceso de precipitación. Todas estas etapas determinan el tiempo . proceso conocido como envejecimiento del ipitado.2 Diseño de Precipitadores )roceso de crecimiento de las partículas en la precipitación puede T limitado por varios mecanismos. el cambio en la concentración de s tiene un decaimiento exponencial. La floculación espontanea de la suspensión puede ser estimulada por lición de agentes floculantes. D ara determinar el coeficiente de eficiencia de colisión a. Aún cuando hay pocos datos . tiena seguir las líneas de corriente del fluido con lo que disminuye la >abilidad de la colisión. culación. Durante la agregación ortocinética el crecimiento es función directa mezclado. debe conrarse que éste depende no sólo del tamaño de las partículas sino bien de la velocidad de corte del fluido. l)n un proceso de precipitación en el cual el crecimiento de las ículas está limitado por el flujo. Sin embargo.DISEÑO DE PRECIPITADORES malmente.

29) establecen que la cinética de precipitadóra a nivel laboratorio y a gran escala será la misma siempre que la razón P/V permanezca constante entre ambas escalas. la velocidad de mezclado de los reactantes afectará el tamaño inicial de la partícula y las características de su crecimiento posterior. y cuando éstas son controladas. En el escalamiento de un proceso de precipitación lo que interesa es que la cinética que se observa a nivel laboratorio sea la misma que la que se presente a gran escala. Precipitador Intermitente En un precipitador intermitente la proteína está expuesta a un rango de condiciones creadas por el agente precipitante durante el tiempo en que éste se agrega a la solución. . puede suponerse que para proteínas que precipitan rápidamente. Para disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente y bien dispersado. como generalmente es el caso de la precipitación de proteínas. Cuando la velocidad de crecimiento pericinético es alta con respecto a la velocidad del proceso global de precipitación. En un precipitador intermitente todas las partículas son sometidas a fuerzas de corte similares. A nivel laboratorio es muy usado el precipitador intermitente que consiste en un tubo de ensayo que se agita en vortex por un corto tiempo inmediatamente después de agregar el agente precipitante. se producen partículas primarias más grandes que las obtenidas en los precipitadores tubulares.Precipitador intermitente.534 CAPÍTULO 9.18) y (9. las ecuaciones (9. PRECIPITACIÓN para definir la relación que existe entre las condiciones de mezclado inicial y el tamaño de partícula. De tal manera que en el diseño del precipitador deben tenerse muy en cuenta las condiciones de mezclado en las que se realizará la precipitación. entonces las condiciones inicíales de precipitación del material son diferentes a las condiciones finales. existiendo dos arreglos básicos: . Posteriormente se deja en reposo toda la noche. dado que . 1986). Otro arreglo básico es el vaso de precipitados agitado magnéticamente (Chan et a/.Precipitador Continuo.

000 . El tiempo para alcanzar un tamaño de partícula de 50 //m. Precipitación de Caseína.01 era 2 /s. El tiempo en que el crecimiento está limitado por la difusión y oncentración de partículas al final de este tiempo. Ejemplo 9. Se va a precipitar caseína artir de una solución que presenta una densidad ps de 1.032 g/cm3 y i viscosidad cinemática v de 0.032 g/cm3 = 1.3.08 ue el tiempo en que se realiza la nucleación es instantáneo.008 M. a y t/> no ibian con la escala. La caseína a de bovino es una proteína que precipita en presencia de -uro de calcio a concentraciones 0. A partir ia información anterior estimar: a). la viscosidad cinemática í/. Solución: Se tienen los siguientes datos: = 1.0 HP y un volumen V 1000 /. DISEÑO DE PRECIPITADORES 535 densidad de la solución /o. El peso molecular M de la caseina-a es de 27.1 g/l = 27. d es de 0. Se estima que el coeficiente de aglomeración a tiene un valor de 0.002 x 10~4 cm y el coeficiente de difusión.01 cm2/s = 1 HP = 746 x 107 g .0 es de g/l.cm2/s3 = 1000 / -0.. b).367 g/cm3.367 g/cm3 = 0. la densidad precipitado pp medida a nivel laboratorio es de 1. D es de x 10~7 cm2/s. La concentración de la caseína en la solución alimentada ?/. el metro. El proceso se va a realizar un tanque agitado con una potencia P de 1.000.

08 a).5 x 10 0.002 x 10~4 cm D = 8. i = 1. PRECIPITACIÓN d = 0..12 x 10 -13 mol .17).5 x 10~7 cm2/s a = 0.02 x 10¿J 1 3.^ mol 9 8. w ~7 cm 8(7r)(8.El tiempo requerido para un mezclado homogéneo está dadc por la ecuación (9.536 CAPÍTULO 9. combinando las ecuaciones (9.032 -^ (o.3 cm" mol 1 entonces.5 x lQ-7 cffil) 10 cm t = 3.23) para obtener: .1/2 t = 1 1.18) y sustituyendo valores s< tiene: 3 \ 1/2 t = 4D \P/VJ -.9 x 101 -(3.17) y (9.20) y (9.7 x 10.Ol sai) 746xlo r£^2Í 6 3 4(8.= — + (SxDdN)t de tal manera que: 27000 7 . El tiempo t corresponde al tiempo en el cual e crecimiento está limitado por la difusión.002 x 10~4cm) x 6. combinando las ecuaciones (9.46 s) mol .1 103 cm3 (0.46 s La concentración de partículas T/¿ al final de este tiempo se determin.

10 g i¡) = 7. DISEÑO DE PRECIPITADORES 537 la concentración final es mucho menor que la inicial.367 o ^r cm3 0.21).0.31 x 1CT5 sustituyendo estos valores se tiene: . b).29): In J de acuerdo al balance expresado en la ecuación (9. y el peso molecular promedio M de las partículas de 50 fim es: M = M = M = 5.39 x 1016 13 WMI — = 5 x 10~ yio la fracción de volumen de soluto en la solución es: w ^ / = —: 103 1.000 yio 5.4.39 x 10 l6 9 1Q23 rnolec 4 TT (50 x 10 4 ) o mol entonces. 27.El tiempo necesario para obtener partículas de 50 //m de diámetro está dado por la ecuación (9..

1990) . Las condicione de corte son muy parecidas a las de un precipitador intermitente. aún cuando la velocidad media de corte puede excede a la de un tanque agitado. El mismo corrimiento se observa cuand hay variación en el grado de mezclado en un tanque agitado.032 t - 4474 5 el paso controlante en esta precipitación es el crecimiento ortocinético.538 CAPÍTULO 9. Para'visualizar el diseño de precipitadores continuos. En un reactor continuo tipo tanque agitado la proteína es puesta ei contacto instantáneamente con el agente precipitante.20 muestra la influencia del tipo de reactor sobre 1 curva de insolubilización por salado de la fumarasa (Bell et a/. PRECIPITACIÓN ln(5 x 1Q-13) 1/2 _ /4xO. Las fuerzas d( corte a las que están sujetas las partículas pueden ser las que produc< el flujo laminar. Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a cor siderar en el diseño del reactor. es la agitación que se proporciona a 1 solución en la que se encuentra la proteína de interés.31xlQ-5\ / ^ * /4bxiu ' I 106 cm 3 x 1.Q8x7. que pued ser debido a diferencias locales en el pH. La Figura 9. y la partículas estarán sujetas a las fuerzas de corte durante el tiempo d residencia en el reactor (Glatz. la proteína se ubica rápidament< a las condiciones finales en que ocurre la precipitación. Esto es part cularmente importante cuando se desea escalar el proceso debido a 1 relación que hay entre potencia y agitación. provocadas por la forma com se agrega el sulfato de amonio. Precipitadores Continuos En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punte donde se agrega el agente precipitante. alcanzándose a mismo tiempo las condiciones finales de precipitación. se puede part de un sistema sencillo donde se cuenta con una suspensión diluida ( . 1983] Puede observarse que existe un desplazamiento en la curvas.

Bell et a/. .. Copyright ©1983. V=0. ü Contacto continuo r = 96 s . 1983.0 1.0 10. V Contacto intermitente con sulfato amonio sólido.87 solución saturada de sulfato de amonio. < Contacto continuo r = 918 s V=1. o Contacto intermitente con solución saturada de fato de amonio. Todos los derechos reservados.38 1 y solución rUrada de sulfato de amonio.0 Fuerza iónica ( mol" 1 ) 7 SO 8 70 9 80 60 % de saturación $ura 9.20: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubiición por salado de fumarasa. DISEÑO DE PRECIPITADORES 539 15. •reducida con el permiso de Springer-Verlag.

c. [Unidades consistentes. a. h. f. r: Tiempo de residencia promedio. [número de núcleos// — h]. /: Fuerza iónica. EB.31 (9. G: Velocidad de crecimiento pericinético.540 CAPÍTULO 9. Las correlaciones empí ricas que se obtienen son de la siguiente forma: til = kG exp veIu9T (9. p. .Energías de activación. s: Constantes empíricas. d. r.]. Iagg.índice de agregación. [mol/I]. [fj. [adim. b. crecimienti y agregación a partir de datos experimentales. PRECIPITACIÓN 20 g/l) y velocidades de agitación moderadas.m/h]. u: Velocidad de agitación. EG y E A.33 donde: B°: Velocidad de nucleación.]. e. g. [rpra]. cr: Sobresaturación aparente. de tal manera que e rompimiento de los agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen 1993). [h].32 V J^ / (9. ko y k¿: Constantes cinéticas. ks. Bajo estas condiciones es posible utilizar balances poblacionale para derivar expresiones de las velocidades de nucleación. [KJ/mol]. q. Medida del crecimiento ortocinético.

^: Número de partículas formadas por nucleación en un tiempo de residencia. Cuando la agregación es total el índice toma el valor de uno..34) donde: 0: Número de partículas por unidad de volumen en el precipitado. G = 0.. [núm/¿3]. [núm/L3]. se obtuvieron correlaciones empíricas siguientes: B° = 4.de definirse como: /n o c \ (9'35) donde Ce y Ca son las concentraciones proteicas a la entrada y salida precipitador. cuando existe agregación el índice toma el valor de cero. En el estudio cinético de la precipitación de proteína a partir de una tción obtenida de una pasta de una semilla oleaginosa. En el caso de una precipitación continua la sobresaturación .Precipitación isoeléctrica de proteínas de una aginosa. Ejemplo 9.4. La definición de sobresaturación en un proceso de precipitación es ipleja.DISEÑO DE PRECIPITADORES A su vez el índice de agregación está dado por: TT 541 (9.2exp RT J . lagg = 1.

6246.99 b). ...Estimar el número de partículas por unidad de volumen en el precipitado.027)-°-091(270)0-625(0.542 CAPÍTULO 9.048 /¿.Estimar la velocidad de nucleación.027)-°.2 exp 8.0.048)-°-215) ?° = 1.007 (0.008 ) /a55 .6246)°-67(0.004 (0.De acuerdo a la ecuación que define al índice de agregación..7 exp' ° 8. 7=0.003 (270) 0 .0 —— h Iagg = 1.314 — F x 295°K mol—°h -2860 ^ m l ((0.027 rnol/¡ y T=295°K.027)-°-1 (270)°-905(0. r = 0. PRECIPITACIÓN a). 8 x 1 0 " exp 1654 ° 8. u= 270 rpm..6246)5'723(0.048) 0 .67 x 1015 ^^ / —h G = 0. b). la velocidad de crecimiento y el índice de agregación cundo la precipitación se efectúa a las condiciones siguientes: a =0.048)-0-833) X-Y G = no o ^m 93. Solución: a).314 mcp/-°/\ x 295°/T *•* ((0.Aplicando las correlaciones correspondientes se tiene: B" = 4 .314 -470 mo 7_ 0 ^ x 295 A ° ' ((0.6746) 0 .

.0. SUMARIO 543 Np Np Np = B°r(l-Iag3) = fl. por desnaturalización selectiva y por afinidad.048 h) (1 . dependiendo del tipo de agente precipitante que se utilice y el principio que se emplee. De tal manera que la precipitación puede realizarse por disminución de la solubilidad.5 Sumario La precipitación es una operación empleada tanto para la concentración como para la purificación de soluciones proteicas.oi6 xlO 1 1 ^ 9. Existen varias formas de realizar una operación de precipitación.99) = 8.9. El diseño de estos equipos se realiza mediante una combinación de experimentos y modelos cinéticos de cierto grado de complejidad. Los equipos empleados en la precipitación pueden ser intermitentes o continuos en diseños convencionales.67 x 1015 ^^\ (0.5.

Resp.6 Problemas 9..87 8.7 y m=-0.000 650.244 9.000 430.87 Obtener los parámetros A y m de la curva de precipitación para la actividad de la enzima en U/ml. Estimar el tiempo de calentamiento para que la desnaturalización sea sólo del 10 %.2.51 min .544 CAPÍTULO 9. PRECIPITACIÓN 9.En la precipitación de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 mi.65 23. 1.28 17.000 440.80 21. Resp A=5. en determinaciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes: % de Saturación (NH4)2S04 50 45 40 35 25 Actividad Específica 180.000 200.1..Una proteína se desnaturaliza el 50 % cuando se calienta a 50°C por lOmin.000 Proteína total (mg) 29.

Nguyen. 1987.). 41-71. B. 1971. Clark.Y. En: Downstream Processing. 31-38. 1994. A. Rohani. D. Marcel Dekker. 147-179. 2. 1986. 281-286.R. Trends in Biotechnology. . C.7. New York. M. Eng. Shuler. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. The Canadian Journal of Chem. y Chen. y Dunnill. Hoare. M. Springer-Verlag. 505-516. 71. Foster. SpringerVerlag. W. M. L. The Formation of Protein Precipítales and their Centrifugal Recovery. Fractionation of proteins and viruses with polyethylene glycol. Large-scale affinity purification. (Ed. Asenjo. J. M. 26. Hoare. and Dunnill.7 Bibliografía Bell. R. I. 329-356. 3. New York. J. State of the art and future prospects.. 1-72. Protein Purification: Principies and Practice. New York. y Lilly. Juckes. 1984. M.E. Luong. 5. En: Separation Processes in Biotechnology. 27. R. The precipitation of enzimes from cell extracts of Saccharomyces cerevisiae by polyethylene glycol. Advances in Biochemical Engineering.). Biotechnology and Bioenginnering. H. BIBLIOGRAFÍA 545 9. 689-698. T. AIChE. M. 1983. P. J. S. K.9.. Chan. (Ed. The kinetics of protein precipitation by different reagents. Scopes. Precipitation. Biochemica et Biophysica Acta. New York. Biochemica et Biophysica Acta. Glatz. 1990. Aggregation and precipitation kinetics of cañóla protein by isoelectric precipitation. J. Dunnill. Recent developments in downstream processing based on affinity interactions. 229. 317. 1989. P. M.A. Janson.D. 1993. Tibtech. L y Male. 535546. Thermodynamics of protein partitioning in aqueous two phase system. 387-393.. M. P. 1973.Y. P.

el mecanismo mi>scópico de flujo (y rechazo) no es explicado en este enfoque. Para describir un proceso de membrana es necesario poder estable• el movimiento relativo de los componentes de la mezcla a través de membrana. bido a ésto los volúmenes a tratar son menores que los correspondites a las primeras etapas del proceso. La ultrafiltración es utilizada en la etapa de purificación de caldos )lógicos. es decir.ión. Este ¿amiento es característico del enfoque de los fenómenos de transrte. En esta etapa los caldos sujetos a purificación contienen al uto de interés en forma más concentrada y pura que el caldo original. Es importante hacer notar que los principios básicos de estas oraciones son comunes. La ultrafiltración forma parte de un conjunto de "operaciones de ¡mbrana" empleadas en diferentes etapas de los procesos de biosepa.Jltrafiltración D. neralmente se realiza una descripción fenomenológica donde la memina se considera como una caja negra.l Introducción . por medio de un gradiente presión. debido a la fuerza originada por el gradiente de presión. 547 . ultrafiltración (UF) es una operación que emplea membranas espejes en diferentes tipos de arreglos para separar macromoléculas en ución de contaminantes más pequeños.

En este sentido.2 Fundamentos Para el tratamiento de la operación de UF es conveniente establecer primero el marco donde se desarrolla. ULTRAFILTRACIÓN En la sección 10.2 de este capítulo se efectúa una descripción general de los diferentes procesos de membrana existentes con el propósito de establecer las principales similitudes y diferencias de éstos con respecto a la ultrafiltración. esta sección hace énfasis en tres aspectos: « Los procesos de membrana. es conveniente revisar los fundamentos teóricos de la operación que facilitan su uso y correcta aplicación. Asimismo. En la sección 10.El tipo de membrana que emplean. Se presenta también en esta sección la teoría de la ultrafiltración que permite analizar el efecto de los diversos parámetros sobre el comportamiento de esta operación.3 se se describen las características más importantes de los principales equipos utilizados en los procesos de membrana. Se resalta la importancia que tiene la operación en flujo tangencial para este tipo de sistemas.4 presenta los fundamentos del diseño de equipos de UF haciendo énfasis en el cálculo de áreas y tiempo de UF de dichos sistemas.548 CAPÍTULO 10. Se presenta una discusión sobre las condiciones óptimas de operación de un sistema en el marco de la mecánica de fluidos y los esquemas de operación más frecuentes en los sistemas de UF. La sección 10. 10. 1986). • Flujo cruzado o tangencial • La teoría de UF. . 10.2.La fuerza impulsora del proceso. . Estos procesos s< pueden caracterizar en forma general en base a: .1 Procesos de Membrana Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana parí lograr una separación dada (Me Gregor.

Orgánico 100. De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos de embrana (Tabla 10. Osmosis Inversa (01).2 .100 AP UF AP 100-500 Microporosa Asimétrica 10-200 oí AP 700-20.1. FUNDAMENTOS 549 Cabla 10. . Ultrafiltración (UF).10-5 30 .104 300.10* 10J .6.4 .10* 300.1: Principales características de los procesos de membrana.0. El rango de tamaño de partícula que retienen sus membranas.12. 1990.1 0. Todos los derechos reserdos. Copyright ©1990.10J Azúcar 200 .2 0. ¡producida con el permiso de Marcel Dekker Inc.0. Gradiente de concentración Diálisis (D).8 0.300 2-10 2-10 2-5 X X X X X X X X X X X X X X X X X X 0.500 [on inorgánico 10 .106 Enzimas 10* .10b Polisacárido 10* .8.1) se pueden clasificar de la siguiente forma: Gradiente de presión. MF Fuerza impulsora Presión de operación (KPa) fipo de membrana Flux Ifm2 — h flango de retención Especie Peso molecular D Hongos Levaduras Bacterias Coloides Virus Proteínas 10* .400 Ac. Microfiltración (MF).106 Antibióticos 300 .4 Adaptada de: Fane y Radovich.000 Semipermeable Asimétrica 1-20 D ACDiálisis Simétrica - 100-500 Microporosa Simétrica 50-1000 Tamaño mn 10J .

^ A n • o ^ o o ^ o w o w 00 o w o o p A ° <^^ ^^ ^^ ™ A ™ ^ > Permeado \ 4 Membrana Figura 10. \ j \ • Ultrafiltración La ultrafiltración utiliza membranas microporosas generalmente asimétricas o anisotrópicas para separar macromoléculas y partículas. que facilitan el paso del solvente y los solutos que logran pasar la película (Figura 10. Las membranas utilizadas en UF se caracterizan por su Peso Molecular de Corte (PMC). de . .2).1 . el cual es el peso molecular del soluto globular . Las membranas anisotrópicas tiene dos capas características: una película delgada y densa de 0.1).1 mm que presenta aberturas progresivamente mayores.Gradiente de Voltaje Electrodiálisis (ED).1 a 1.1: Esquema de ultrafiltración.5 fj.m de espesor y bajo la película una subestructura microporosa de 0. ULTRAFILTRAC1ÓN O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos AP Alimentación_jo u-o Ao 0^o ^ u —• 0 ao<ÉoA° ^[_Retenido 0 0 ° A O^.550 CAPÍTULO 10. Las membranas anisotrópicas son las más utilizadas en UF debido a que las membranas microporosas convencionales poseen una estructura tortuosa que provoca retención irreversible de partículas dentro de la matriz lo que dificulta su limpieza y reuso. moléculas pequeñas y solventes (Figura 10.

convencionales con 'ducida con el permiso de Kluwer Academic Publishers. eservados.FUNDAMENTOS 551 Membrana Anisotrópica Filtro Microporoso ira 10. 1991. Fuente: Santos. Copyright ©1991. Todos los dere- .2: Comparación de membranas Dtrópicas. et el.

La mi filtración (Figura 10.000 para la mayoría de las membranas de UF.3) se emplea generalmente para separar de ca biológicos partículas mayores de 1 /zm como coloides y células. ya sean de tipo convencional o asimétricas. El rango de pre de operación también es restringido debido a las características d< equipos que se emplean.3: Esquema de microfiltración. presiones características de la ultrafiltración son moderadas en el re de 100 a 500 KPa. Las capacidades características son del ordei 10 — 200 //m 2 — h (al flujo volumétrico por unidad de área de membí se le conoce como flux y se utiliza para especificar equipos de UF) Microfiltración La microfiltración emplea membranas con poros más grandes qu( utilizados en UF. y es del orden de 160 .h.1000 l/m2 .500 KPa. ULTRAFILTRAd <O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos Alimentación_ro-o—omo omo ^u ^o—0 A 0 — ^ [_Retenid Permea< Membrana Figura 10. .000.000 nanometros de tamaño.552 CAPÍTULO 10. El PMC varía entre 5i 1. tualmente tiende a desplazar a la filtración convencional y a la trifugación como técnica de recuperación celular. Un r característico de la MF es que puede manejar flujos mucho mayores la UF del orden de 50 . que es retenido en un 90 % por la membrana. lo cual repres< la retención de partículas de 1 a 10.

La fuerza impulsora es un gradiente de presión que debe vencer la presión osmótica normal de las soluciones. FUNDAMENTOS 553 Partículas Macromoléculas Microsolutos Alimentación ro-o—5— ° 0 0 0 u 0 00 0 ° 0 0 o °—ó O 0 0 0 0 0 0 0 0 o o ^Permeado Membrana Figura 10. invertir el flujo espontáneo. Esta operación se utiliza para separar solutos de sus soluciones.10. Diáli SIS I La diálisis (Figura 10.4) utiliza membranas semipermeables que permiten el paso sólo del solvente (generalmente agua).5) emplea membranas de poro muy pequeño (menor que las membranas de UF). Osmosis Inversa La osmosis inversa (Figura 10. Las membranas utilizadas en Oí son películas no porosas que permiten el paso del solvente a través de espacios entre los polímeros que conforman la membrana. en base a su peso molecular y posiblemente a su conformación y carga. El o los solutos a separar de la solución de . Los iones no pueden estar solvatados en estos pequeños espacios y por lo tanto no son transportados.2. Los flujos característicos en la Oí son del orden de 1 — 20 l/m2 — h. para separar éste de solutos de bajo peso molecular. Las presiones •utilizadas en esta operación son relativamente altas del orden de 700 a 20.4: Esquema de osmosis inversa. es decir.000 KPa.

En los'procesos de MF.En los procesos de diálisis disminuye el gradiente de concentració efectivo.554 CAPÍTULO 10. disminuyendo por lo tanto el flux de impurezas. El papel fundamental de la membrana es impedir el paso de macromoléculas o partículas de la alimentación al dializado permitiendo e! paso del solvente y de solutos más pequeños.2 Flujo Cruzado o Tangencial En los procesos de separación por membrana se producen gradientes d< concentración de los solutos en la proximidad de la membrana.2.5: Esquema de diálisis. 10. sólo por la acción de un gradiente de concentración. produce un Incremento de la concei tración de solutos en la proximidad de la membrana (Figura 10. ULTRAFILTRACIÓN Partículas Macromoléculas Microsolutos AC Al i mentado n_jó-ü CZ>° Corriente Purificada o 0 O 0 0 0° o o 0° o o o o0 o o 0°°0 o o 0 ° O 0 0 oo 0 ' r Dializado Membrana Figura 10. UF y 01. alimentación fluyen hacia la solución de lavado o dializado a través de la membrana. Est efecto es conocido como "Polarización de la Concentración" . causado por las diferentes velocidades de transporte de cada uno de ellos. .6 . Esta polarización actúa de dos formas: . En los procesos de electrodiálisis la operación de diálisis se efectúe bajo la acción de un campo eléctrico.

>roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Fuente: Tutunjian.3 Teoría de la Ultrafiltración teoría de la ultrafiltración está orientada a tratar de predecir el flux un sistema dado en ^función de los parámetros de operación como i: presión. Fenómeno de larización. 1985b. puede ocasionar una resistencia adicional debido a que puede estimular la interacción del soluto con la membrana ocasionando que esta se incruste con soluto.nificativamente utilizando flujo cruzado o tangencial en lugar del jo de extremo-cerrado convencional (Figura 10. K2. Es importante señalar que la teoría de la ultrafiltración es . ya que el uerzo cortante del fluido estimula el desplazamiento de las partículas la superficie de la membrana. concentración de la solución y velocidad igencial. Copyright ©1985. y por otro disminuir el flux del solvente debido a un aumento de la resistencia al flujo producida por esta barrera de concentración. Todos los derechos reser- lo cual por un lado puede incrementar el flux de soluto. Asimismo.2.7). El flux de solvente a través de la membrana puede ser incrementado .. En los sistemas flujo cruzado la alimentación fluye en forma paralela a la membrana nimizando el efecto de la polarización de la concentración.6: Gradiente de concentración durante la UF. FUNDAMENTOS 555 Rux de Agua Ce Membrana 10. temperatura.

La predicción del flux o la interpretación y extrapolación correcta de las mediciones experimentales de éste.P .8 como: P 4. el cual puede ser definido en referencia a la Figura 10. se enfocan a resolver este problema de diseño. APTM = P0 . ULTRAFILTRACIÓNI Filtración Convencional Filtración de Flujo Cruzado Figura 10. pero es útil en la interpretación y extrapolación de los datos experimentales.556 CAPÍTULO 10. Predicción del Flux La fuerza impulsora de un proceso de UF es el gradiente de presión transmembrana (APTM).1) o bien.7: UF convencional y de flujo cruzado. de aplicación limitada. así como de guía para la operación de los equipos. El principal parámetro de diseño de un sistema de UF para concentrar una solución es el área necesaria para lograr una concentración determinada en un tiempo dado. bajo limitaciones de rangos de presión y temperatura tolerados por los equipos.P (10.

•: Presión de salida del permeado o filtrado. el hecho de que las presiones de . Todos los derechos reser- donde: PTM: Gradiente de presión transmembrana. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985. . Figura 10. En este arreglo la bomba debe ser dimensionada para proveer la )cidad de flujo cruzado necesaria a. Le. Esta última ontrolada restringiendo la válvula . FUNDAMENTOS Pi •** ^r1 v 557 Po ~~TK Permeado Retenido Válvula de Contrapresión Retenido Módulo deUF Pí Alimentación Bomba Filtrado gura 10.2. P = PÍ — P0'.sí como la APTM.: Presión de salida del retenido. roducida con el permiso de Elsevier Science Inc.8 muestre. 1985b.8: Relación de presiones en UF.e contrapresión a la salida de la dad de UF. : Presión de entrada de la alimentación.Gradiente de presión del flujo tangencial..

Solución: Se puede utilizar la ecuación (10. Q Gasto volumétrico J =v = —= : A área .PÍ .68 Kg/cm2 y la presión del permeado despreciable.68) Kg/cm2 = 1. la cual muestra la variación de flux del permeado J (L3/L2 — ¿) con el gradiente de presión transmembrana (APTM) para soluciones de concentración en el rango de O a 65 % en celdas de ultrafiltración agitadas (sin flujo cruzado). Sin embargo.10).70 . es decir.0. mientras que en la filtración convencional se utiliza la variable v para el mismo efecto.P0 entonces P0 = (1. Estimar APTM.1 02 APTM = ' ' Kg/cm2 = 1.. En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado c velocidad del permeado a través del lecho filtrante. pueden ser moni toreadas con el empleo de manómetros. al aumentar la velocidad de flujo cruzado U se produce un incremento en el flux J.9.70 Kg/crri2 La válvula de salida de la unidad se ajusta de tal manera que la caída de presión del flujo tangencial es de 0. Ejemplo 10.02 Kg/cm2 1 7 4. Se obtienen resultados análogos a los anteriores cuando se utilizan equipos operando con flujo cruzado constante (Figura 10.Cálculo de APTM La presión de alimentación a una unidad de UF es de 1. Conociendo que AP .36 Kg/cm2 £t Un comportamiento típico de un proceso de ultrafiltración de una macromolécula se muestra en la Figura 10.1.558 CAPÍTULO 10. Primero es necesario calcular P0. ULTRAFILTRACIÓN entrada y salida a la unidad.1) para calcular APTM.

9: UF de albúmina en una celda. Copyright ©1987. 1987. Todos los derechos reser- .0 0 1 2 APTM (Kg/crn) 3 ura 10. FUNDAMENTOS 559 '0.5 0.10: Efecto de la presión.66 % Proteica (1830 RPM ) 3. Fuente: Le y Howell. •oducida con el permiso de John Wiley and Sons. de la velocidad de recirculación y a concentración sobre el flux.5 % Protelna (1830 RPM ) 6 5 % Protelna ( 880 RPM ) APTM (Atm ) 'igura 10.0 % Protelna (1830 RPM ) 6.5 1. oducida con el permiso de Elsevier Science Inc. T = 60 Linea A 1.0 J cm/h 0.8 % Solución Salina r 0. Copyright ©1985. Fuente: Belfort.2. Todos los derechos •vados. 1985.

cr: Coeficiente de rechazo del soluto por la membrana. donde J es función de APTM y U. cuando se utiliza la ecuación de D'arcy como se hiz< en el caso de la filtración convencional (Capítulo 3) se obtiene la si guíente expresión: (10. ATT: Contrapresión osmótica. J: Flux de permeado.560 CAPÍTULO 10.. Modelo General del Flux La descripción fenomenológica del flux en un proceso de ultrafiltración. se ha efectuado por varios caminos con resultados análogos..10) para una solución de una concentración dada.Localizada a la derecha de APTM ++ .Región I. es conveniente dividirlos en dos regiones separadas por un gradiente de referencia APTM ++ : .crATr) donde: Lp: Coeficiente de permeabilidad.Región II. Por otro lado.Localizada a la izquierda de APTM ++ .2) donde: . ULTRA FILTRACIÓN La predicción del flux a que hace referencia el título de esta sección consiste en encontrar relaciones que permitan describir y predecir el comportamiento experimental al que se hace referencia. donde J sólo es función de U (independiente de APTM). la ecuación del flux de solvente que se obtiene es: J = L P (APTM . Por medio de la termodinámica de los procesos irreversibles. . Para analizar los resultados experimentales (Figura 10.

3).5: Resistencia de la capa de soluto de polarización. Si además se considera Rm constante. Dado que la presión osmótica para macromoléculas en solución y ra dispersiones coloidales es muy baja. Concentración de soluto en el seno de la solución. entonces J varía linealmente con APTM (línea A). De acuerdo a las ecuaciones (10. 561 El coeficiente de rechazo en un instante dado durante el proceso de í está dado por: 1 (10. : Coeficiente de retención del soluto por la membrana. en dicho caso el modelo ge:al de flux en la forma de la ecuación (10.10) que se lizan en un proceso de UF: En soluciones diluidas la resistencia Rs puede considerarse nula.2. FUNDAMENTOS ^: Resistencia de la membrana. = 0: Retención nula del soluto por la membrana.6) para efectuar una descripción ilitativa de las observaciones experimentales (Figura 10. .2) y (10.4) B donde: 'p: Concentración de soluto en el permeado.3) se transforma en: Se puede utilizar la ecuación (10.. . 'B. = 1: Retención completa del soluto por la membrana.

Otro enfoque para obtener el modelo del flux propone que el fenómeno de polarización de la concentración sólo se presenta en una película delgada del fluido en la proximidades de la membrana (Teoría de la capa límite). Considerando como única variable la APTA/. En esta película el perfil de concentración es función de APTM. ULTRAFILTRACIÓN . se puede considerar que Rs > Rm. los perfiles de concentración en estado estacionario se irán incrementando conforme se incremente APTM (Figura 10. los incrementos en APTM producen un aumento en Rs. se puede considerar que Rm > Rs. en el capítulo de filtración convencional.. que no se produce un incremento en J. Un balance de soluto en estado estacionario (UF continua) en una película diferencial en la interfase fluido-membrana puede ser expresado como: Movimiento Movimiento convectivo de difusivo del soluto hacia la = soluto de la interfase interfase al seno del fluido -f Movimiento convectivo de soluto fuera de la interfase .Para la región I donde APTM < APTM ++ . Los incrementos en APTM producen incrementos en Rs tales. .562 CAPÍTULO 10. de tal manera que J es independiente de APTA/.En la región II donde APTM > APTM ++ . de tal manera que J tiende a un valor máximo conforme aumenta APTM. es decir la resistencia de la membrana es controlante Es una zona donde J depende de APTM. Modelo de polarización con película (Región I). Los intentos que se han efectuado en este sentido son de uso limitado para el caso de UF de proteínas y coloides. Esta región es más sensible a la velocidad del flujo cruzado por actuar ésta directamente sobre RsEl uso del modelo general para la predicción del flux requiere poder expresar Rs en términos de parámetros medibles como se hizo en el caso de la resistencia de la torta RT.11). Los sólidos retenidos representan la resistencia controlante.

\0.2. CB ' Concentración de soluto alimentación. ): Espesor de la capa límite de concentración.11: Variación del perfil de concentración en estado estacionario con el gradiente de presión transmembrana. . FUNDAMENTOS 563 Flujo de Permeado Flujo Alimentación x=o APTMi Cw Incremento de APTM y del x=6 Flux APTM APTM3 Figura 10. Cp : Concentración de soluto en el permeado. Cw • Concentración de soluto en la 3ared de la membrana.

8) Si la membrana presenta un coeficiente de rechazo total Cp = O.\n^(10. C = CB C — C^r O — l-'M' La ecuación (10. entonces la ecuación (10. el coeficiente DAB/& se sustituye por un coeficiente de transferencia de masa ks.7) se transforma en: J* = AD •» In —yy p —— /1 n o \ (10. a (1()_9) dado que el espesor de la película 8 generalmente es desconocido. ULTRAFILTRACIÓN (10. Separando variables e integrando a lo largo de la capa límite con: x = O.8) se simplifica a: J> = ^B. de tal manera que: J* = k. APTM: Constante. r — A •L — V .Difusividad del soluto en la solución.10) .564 CAPÍTULO 10.7) donde: * : Constantes en estado estacionario. DAB'. x: Coordenada espacial.

donde los parámetros que afectan el Desor de la capa límite de la transferencia de masa. : Viscosidad. .: Diámetro del tubo.023#e°-83Sc°-33 (10. : Velocidad promedio del fluido en el tubo. [L]. [L]. . Densidad. Para flujo en tubos circulares las siguientes ecuaciones son aplica. [M/L — t]. FUNDAMENTOS 565 El modelo de película permite analizar la dependencia del flux J* a los parámetros físicos y geométricos que afectan 8. c: Número de Schmidt. : Longitud del tubo.12) UB: Difusividad del soluto.11) Sh = 0.. [L/t]. [M/L3]. El coeficiente de insferencia de masa ks puede ser estimado por medio de correlaciones perimentáles de la literatura. se agrupan en ipos adimensionales como el Reynolds.2.e: Número de Reynolds. [L/t2]. i \ ^/^ ^-ReSc] 2L/ J ( Flujo turbulento: donde: . (10. el Schmidt y el Sherwood.s: Flujo laminar: Y * ~V/3 o bien en términos de números adimensionales.

. es proporcional a In l/Cs.12) permiten interpretar los resultados experimentales de los procesos de UF: En la región I: .14) L.El flux J* considerando U constante.13) (10. En la región II: .11) y (10. J'ocfy) (10.El flux J* varía con í/3 en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento. ULTRA FILTRACIÓN Es importante hacer notar que de acuerdo a las ecuaciones (10. . entonces.16) El modelo de polarización de película conjuntamente con las ecuaciones (10. Para Flujo Turbulento: r oc U0'83 (10.11) y (10. CAPÍTULO 10.15) \ljj donde 7 es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.El flux J* aumenta al aumentar U .12): Para flujo laminar: t/V /3 o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como: (10.El flux J* aumenta al aumentar C^ la cual a su vez aumenta con APTM.566 Sh: Número de Sherwood.

12)). se serva que en la región II (Figura 10.10) el flux J puede ser incrementado aumentando la concentración soluto en la membrana C\v (aumentando APTM). FUNDAMENTOS 567 J* es proporcional a Inl/C^ cuando la velocidad de recirculación constante.De acuerdo con el modelo de polarización en película (ecuación . existe un límite para este >o de correlación.ntos en APTM se contrarrestan con incrementos en la resistencia de capa de gel. Los datos de flux en //m 2 — h de la UF de una solución proteica se íestran en la Tabla 10. Uno de los modelos más empleados para la región II propone que en i soluciones macromoleculares.2: Cálculo de CG y ks.14. te gel actúa en serie con las otras resistencias. J* aumenta al aumentar U. donde la solución forma una "capa de gel" (Figura 10. Sin embargo. la ecuación (10.2. Varía con U* en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento. ks es el coeficiente de transferencia de masa dado por las relaciones ya presentadas (ecuaciones (10.15 se presentan los datos graneados en la forma de ecuación 10.12.10).17. de tal manera que J se mantiene constante.2.10) se transforma en: donde CG es la concentración límite que es una constante para un tema dado. De acuerdo o anterior. Este modelo llamado lodelo de capa de gel". Modelo de polarización en película y capa de gel (Región ). Estos resultados se muestran en forma gráfica en la Figura 10. el aumento de Cw con APTM tiene límite CG.. Se puede observar que conforme se incrementa la .11) y (10. Estos datos se presentan en forma gráfica en la Figura 10. Ejemplo 10. implica que en la región II de la UF los incre.13). Estiir ks y CG para esta operación.. Solución: En la Figura 10.

Fuente: Belfort.568 CAPÍTULO 10. Todos los derecho reservados. 1987.83 In J Laminar Turbulento l n ( R e o U o Y) Figura 10. Copyright ©1987. concentración y velocidad de recir culación sobre el flux. ULTRAFILTRACIÓN (b) U2 J lnC t (c) A 0. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. .12: Efecto de la presión.

00 2 Concentración % peso 1 10 20 5 00.00 0.00 36.00 00.2: Datos de UF para Ejemplo 10. Fuente: Tutunjian.80 7.13: Gradiente de concentración durante la polarización con 1.20 7. producida con el permiso de Nature Publishing Co.66 1.60 8. Membrana Capa Límite de Fluido Película deGel gura 10.00 21..33 47.2.00 23.00 30.00 18.00 36.33 0. FUNDAMENTOS 569 Flujo de agua J. Todos los derechos er vados.00 52.00 1.50 22. APTM Kg/cm 0.66 50.33 1.00 0.2. Tabla 10.00 8.33 54.40 8.00 17.00 37.00 7.66 2.50 23.00 33. Copyright ©1985.50 17. 1985a.66 .00 00.00 22.00 37.

Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1985. Fuente: Tutunjia 1985b. 1%PROTEINA 5% PROTEINA 10%PROTEINA A PTM (Kg/cm2) Figura 10. Todos los derechos res vados. .570 CAPÍTULO 10. ULTRAFILTRACIÓ. Datos Ejemplo 10.2.14: Variación del flux con el gradiente de presión transmer brana y con la concentración.

CG = 30 % Cálculo de ks. entración C# y la APTM.15 con el eje de las abscisas de tal manera que. o ¿j ) L _ ft <.2.15: Flux vs \nCB. Datos Ejemplo 10. ) Cálculo de CG>'G puede ser obtenido gráficamente de la intersección de las curvas Figura 10. 28-8 3-2 m2-h . en la cual x J varía sólo con CB y es independiente de APTM.2. FUNDAMENTOS 571 10 o O Figura 10. se llega a una región donde la variación ux se comporta de acuerdo al modelo de película de gel. .es igual a la pendiente de las curvas en la zona de formación del puede ser estimada con dos puntos sobre la recta.

. que en la ultrafiltración el flux J se puede controlar por medio de la. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1990. Copyright ©1990.J6: Variación del flux con el tiempo. y finalmente cuando ocurre la polarización J se hace independiente de APTM y permanece constante . Todos los derechos reservados.16). ULTRAFILTRACIÓN 60 50 Flux i m'-h 40 30 20 10 O 1 2 3 Tiempo (h) Figura 10. Fuente: Brocklebank. El análisis anterior también permite describir el comportamiento típico de los procesos de UF intermitentes (Figura 10. La expresión del flux en la región II es por lo tanto: 30 = 201n Se puede resumir en base a la discusión de los dos modelos anteriores. APTM y la velocidad de flujo cruzado.CAPÍTULO 10. lo cual implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie do la membrana. El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado. El flux aumenta linealmente con APTM en su fase inicial. posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento.

.17. Existen Amiento físicos (retrolavado) y químicos para desincrustar memas. general la membrana debe reunir algunas características impor- na alta permeabilidad hidráulica. Este fenómeno llamado rustación de la Membrana" debe distinguirse del fenómeno de posición de la membrana.EQUIPOS ustación de la Membrana 573 de los problemas que se observa durante la operación de un sisL de UF es la reducción progresiva en el flux manejable conforme snta el tiempo de uso de las membranas. con la membrana que afectan la porosidad de la misma. es decir. 3 Equipos equipos utilizados en los procesos de membrana generalmente on con flujo cruzado o tangencial y presentan dos características ntivas: Utilizan una membrana apropiada para el tipo de proceso. Presentan diferentes geometrías en arreglos tipo modular. Parte importante del equipo periférico bomba de alimentación y el tanque de almacenamiento. permitir altos flujos de permeado bajo gradientes de presión razonables. 11 fenómeno de incrustación se refiere a la interacción de algunos so.1 Membranas arte central de los procesos de membrana es la membrana misma. Un arreglo o de un sistema de UF se muestra en la Figura 10. ]\ equipo modular conjuntamente con el equipo periférico constila unidad de ultrafiltración. 3. sin embargo estos incrementan los costos de operación y dislyen la vida útil de los equipos.

química y térmica. retener especies d determinado peso molecular.3. . Todos los derech< reservados. 1988.Larga vida activa.Facilidad de limpieza.2 Módulos Los módulos utilizados en los equipos de separación con membrana p sentan diferentes geometrías que se pueden dividir en dos tipos básio .574 CAPÍTULO 10. _ Buena resistencia mecánica. Los materiales que se utilizan en la fabricación de membranas g neralmcrite son derivados de polímeros naturales como la celulosa o < polímeros sintéticos. R educida <. Copyright ©1988. Recientemente se han desarrollado membranas < materiales cerámicos y metálicos. ULTRAFILTRAClÓfi Retenido Recirculación •OO Permeado AJ¡ mentación £=* Figura 10. . . Fuente: Belter e al. 10.3 se presenta una lista de algunos materiales y cara terísticas <!<• las membranas. Un peso molecular de corte preciso.Baja tendencia a incrustamiento.17: Sistema de UF típico (intermitente).Capacidad de esterilización. pero permitir el paso de las de menc peso molecular.<>ii <:l permiso de John Wiley and Sons. es decir. El la Tabla 10. .

1. Módulos de hojas. 130 140 130 140 150 X Asimétrica Asimétrica - - Simétrica 1-10 1-20 nm 10-20 0. .1 nm 3-10 2-12 1-14 1-14 1-14 1-13 75 . Tubos normales. Los módulos de tubos y carcaza pueden presentar dos tipos de tubos: Tubos de fibras huecas. Copyriglit ©1990. MF Rateriales: Acetato de celulosa Poli amida Polisulfona Politetrafluro Etileno Polipropileno Cerámica Poliester Sstructura: $ de Porosidad ¡uperficial: Tamaño de poro: 575 UF X X X oí X X X D X X X X X X X X Asimétrica Simétrica 30-70 0. Hoja enrollada en espiral. Módulos de tubos y carcaza.3 . 1990.3: Características típicas de las membranas. Los arreglos de hojas pueden ser de: Hoja plana.3 nm Adaptada de: Brocklebank.1 . Droducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. EQUIPOS Tabla 10.3. Hoja plegada. Todos los derechos reserlos.

Una desventaja es que su área por unidad de volumen es menor en relación a los otros tipos de módulos y producen un flux moderado. A y Membrana Macrosolutos Retenidos • * Malla Separadora Solvente y Microsolutos Figura 10. 1985b. por lo que son empleados para manejar soluciones viscosas. Módulos de Hoja Enrollada en Espiral Los módulos de hojas enrolladas en espiral (Figura 10. Módulos de Hoja Plana Los filtros de hoja plana (Figura 10. Su principal ventaja es su versatilidad.19) utilizan un diseño de membranas con espaciadores tipo malla separando la membrana. ULTRAFILTRACIÓN . . Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos reservados. Este tipo de arreglos producen un flux mayor que los de hoja plana debido a que presentan una mayor área por unidad de volumen. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985. Los filtros de hoja plana pueden ser desmontados para su limpieza y permiten restituir hojas defectuosas. Este tipo de módulos pueden trabajar a presiones mayores que los otros tipos.576 CAPÍTULO 10. Los módulos de hoja plana pueden ser utilizados tanto en MF como en UF. . son muy similares a los filtros convencionales de marcos y placas.18: Módulo de UF de hoja plana. Son más difíciles de limpiar y frecuentemente debe descartarse toda la unidad aún cuando sólo parte del módulo esté dañado. Como consecuencia este tipo de módulo se recomienda para caldos relativamente limpios o en combinación con un prefiltro.18).

EQUIPOS *• *. Fuente: Hanisch. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. .10. Copyright ©1986. Todos los deredios reservados.3. 1986.19: Módulo de UF de hoja enrollada en espiral. • Macrosolutos Retenidos 577 Membrana Solvente y Microsolutos Malla Separadora Cubierta Externa Espaciadores Flujo de permeado Flechas que indican el flujo de permeado Figura 10.

Copyright ©1990. y presentan propiedades similares a los de hoja enrollada en espiral.20) permiten un arreglo tubular con área ampliada.6 y 2.5 cm. lo que les confiere una alta resistencia mecánica y térmica. Reproducida con el permiso del Instituía of Food Teclmologiests. . El diámetro de los tubos varía entre 0. Módulos de Hoja Plegada Los módulos con membranas en forma de hoja plegada (Figura 10. Fuente: Dziezak.20: Módulo de UF de hoja plegada. de tal manera que el permeado se colecta en la parte externa de los tubos a través de la carcaza y el retenido sale por el extremo opuesto de los tubos a través del cabezal de salida. Todos los derechos reservados.578 CAPÍTULO 10. Han sido recomendados para procesar materiales «viscosos y para la obtención de concentraciones celulares elevadas. con varios tubos unidos en sus extremos a un cabezal común (Figura 10.21). Módulos de Tubos y Carcaza Este tipo de módulos presenta una geometría similar a los intercambiadores de calor de tubos. Flujo de Permeado Alimentación ULTRAFILTRACIÓN Material de Soporte Membrana Figura 10. 1990. Los tubos son fabricados utilizando polímeros o cerámica. Normalmente la alimentación fluye a presión a través del cabezal de entrada por el interior de los tubos .

10. En la Tabla 10.4. sin embargo los diámetros de los tubos son muy pequeños: de 0.22) son muy parecidos a los de tubos y carcaza convencionales. menor es su capacidad de manejo de sólidos. • El diseño de la unidad de UF. Las fibras grandes (0.21: Módulo de UF de tubo y carcaza. . así como en su facilidad a la esterilización. sin embargo presentan algunas limitaciones en cuanto a su rango de operación (presión y temperatura).4 se presenta un resumen de las principales características de los módulos empleados en las operaciones de membrana.11 cm de diámetro) son especialmente útiles para separar células así como para el manejo de materiales viscosos. Módulos de Tubos de Fibra Hueca Los módulos de tubos de fibra hueca (Figura 10.4 Diseño de Procesos de UF Para el diseño de un proceso de UF se deben considerar cuatro aspectos principales: • El objetivo de la UF.02 a 0. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 579 Alimentación Salida de Retenido Salida de Permeado Figura 10.11 cm. Este tipo de módulos es probablemente el más empleado tanto en MF como en UF. Entre más pequeño sea el diámetro interno. • El método de operación apropiado. 10. • La mecánica de fluidos del sistema.

22: a) Módulo de UF de fibra hueca. b) Fibra individu. Todos 1 derechos reservados.580 CAPÍTULO 10. ULTRAFILTRACIÓK Alimentación Cilindro Cabezal Permeado m Figura 10. Reproducida con el permiso del Institute of Food Technologiests. . 1990. Copyright ©1990. Fuente: Dziezak.

10. el permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o bufer. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.Purificación de una solución que contiene solutos indeseables grandes. la solución retenida es el producto deseado (Figura 10. Copyright ©1990. .23). Esta operación es conocida como diafiltración (Figura 10.4: Características de los módulos de UF.000 Baja Retrolavado Módulo 581 Característica Densidad de empaque Área (m^/m 3 ) Tolerancia a solidos suspendidos Facilidad de limpieza Remplazo Adaptada de: Fane y Radovich. Todos los derechos reservados.4.Concentración de una solución diluida. Diafiltración Cuando se desea separar macromoléculas de moléculas pequeñas como sales. . .24). azucares o alcoholes por medio de la UF de una solución.Diafiltración de una solución con solutos indeseables pequeños.1 Objetivo de la UF Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propósitos entre los cuales se pueden mencionar los siguientes: . 1990. Hoja plana Moderada 200-400 Moderada Regular Hojas o módulo Tipo de módulo Hoja Tubo y carcaza enrollada Moderada Baja 150-300 300-900 Baja Regular Módulo Buena Buena Tubos Fibra hueca Alta 9000-30. DISEÑO DE PROCESOS DE UF Tabla 10.10A. Concentración En la UF donde el objetivo es la concentración de una solución.

. ULTRAFILTRACíÓf • • • «— 1 UF » * * r_r • • • • • Figura 10. vados. Todos los derechos res< vados.582 CAPÍTULO 10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.23: Concentracón por UF. Todos los derechos re. Adaptada de: Tutunjian.24: Diafiltración por UF. Copyright ©1985. Figura 10. 1985b. 19851 Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985.

Sin embargo.25: Purificación por UF. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. 10. La mayoría de los equipos de UF deben operar abajo de 7 Kg/cm2 de presión.4. Todos los derechos reservados.10. De acuerdo a la ecuación (10. 1985b.1). DISEÑO DE PROCESOS DE UF 583 Figura 10. Algunos procesos combinan las operaciones descritas anteriormente. como es el caso de la operación de concentración con diafiltración. APTM = i + -Pt Si se supone que la presión de salida del permeado es O. existen limitantes en cuanto a la operación de los equipos. Fuente: Tutunjian.2 Mecánica de Fluidos En un sistema de UF el flux es función de APTM y de la velocidad del flujo cruzado. Teóricamente el flux puede incrementarse tanto como sean incrementados estos parámetros. Copyright ©1985.7 Kg/cm2.25). mientras que los equipos de fibras huecas sólo toleran presiones de hasta 2. Purificación La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente de interés o una solución con solutos de bajo peso molecular se conoce como purificación (Figura 10. entonces la ecuación anterior puede rearreglarse de la siguiente forma: .4.

b) Flux máximo. para una combinación de P.3.7 Kg/cm2.7 Kg/cm tanto la AP como la APTM se restringen a un rango posible de valore: en función de la presión de salida P0 la cual puede ser regulada median! la válvula de salida. cuando la P. Bajo esta condición. . Solución: a) Región de operación factible. b) La combinación APTM y AP que permita el máximo flux. AP disminuye y p0 lo tanto la velocidad del flujo cruzado del fluido. Se desea optimizar el flux de un sistema de UF a partir de los dato de la Figura 10.27 muestra la región de operación factible en base a este datos. . La presión de entrada al sistema es fija e igual 1. se fija como la presión máxima de operación de equipo. Al fijar la presión de entrada Pt a un valor máximo de 1. al aumentar APTM. Por el contrario. donde: AP = Pt .y P0 Esto ocurre generalmente donde se inicia la formación de la película d< gel. El flux será óptimo para una cierta combinación d< AP y APTM ..18) permite optimizar la relación de APTM coi AP.**• donde AP tiene unidade§^de~J^/^em'^y Q de l/min (área fija). L figura 10.26. AP aumenta y por lo tanto aumenta U la velocida< del flujo cruzado. visto de otra manera.P0 La ecuación (10. El flujo cruzado se correlaciona con la caída presión d acuerdo a la siguiente expresión.-Mecánica de fluidos en UF. ULTRAFILTRACIÓ* i AP APTAf = />•.i 8 .584 U' CAPÍTULO 10.5 se presentan algunos valores de este rango. -_ Q = 29.— (io.41 AP . Se pide: a) Encontrar la región de operación factible. a disminuir APTM. En la Tabla 10. Ejemplo 10.

Adaptada de: Tutunjian. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos reservados.27: Región de operación factible. Presión de entrada fija y la velocidad de recirculación variable. Datos Ejemplo 10. 1985b. 1985b.68Kg/cm 2 JA l/min 3 2 AP =0. Todos los derechos reservados. n .26: Variación del flux con APTM. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc . DISEÑO DE PROCESOS DE UF 585 4j AP =1.37 Kg/cm2 AP = 1.3. Copyright ©1985.02 Kg/cm2 AP = 0.70Kg/cm2 AP = 1.3. Ejemplo 10. Copyright ©1985.4.37 Kg/cm2 AP = 1.34Kg/cm 2 1-1 APTM (Kg/cm2) Figura 10.68 Kg/cm2 JA l/rnín 3 2 1-1 A P = 0.34 Kg/cm2 APTM (Kg/cm2) Figura 10.10.02 Kg/cm2 AP=0. Adaptada de: Tutunjian. 4j AP = 170 Kg/cm2 AP = 1.

40 0.00 00 0. 10.9 l/min En un sistema de UF tanto la región factible de operación como la combinación P.28).27 se puede observar que para cada combinación de PÍ con P0 o AP con APTM.02 30 2.02 1.70 1.19 Kg/m2 JA = 2.30 1. existe un flux factible alcanzándose un máximo cuando: AP = 1. la solución que inicialmente está contenida en un tanque de proceso.02 Kg/cm2 APTM = 1. Kg/cm2 Pi 1.5: Cálculo de la región de operación factible. En una operación intermitente sin recirculación (Figura 10.70 Po 0.00 0.70 1. y P0 que optimiza el flux.586 CAPÍTULO 10.34 10 1.36 1.85 40 2. Operación Intermitente Las operaciones intermitentes se pueden efectuar con y sin recirculación interna.70 En la Figura 10.70 1. es bombeada a la unidad de UF y regresada al tanque hasta alcanzar la concentración final deseada.70 1/min AP APTM Q JA 50 2.36 0.00 1.70 1.70 1.34 0. De esta manera la concentración del . son funciones de la concentración de la solución de alimentación.37 1.19 20 2.4.3 Métodos de Operación Los sistemas de UF pueden ser diseñados para operar en forma intermitente o en forma continua.70 0. Datos del Ejemplo 10.3.02 1.68 1.53 0.68 1.70 1.80 1.901. ULTRAFILTRACIÓN Tabla 10.

producto en el tanque aumenta gradualmente durante el proceso. Esto generalmente se logra manteniendo una relación de 20 veces la velocidad de alimentación a la de permeación. Todos los derechos reservados. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 587 UF Tanque de' Proceso Permeado Bomba I Figura 10. de tal manera que la concentracón en el circuito de recirculación sea cercana a la concentración del tanque alimentador. Copyright ©1985. La velocidad de alimentación debe mantenerse alta.4.29) emplea dos bombas. La operación intermitente con recirculación interna (Figura 10. Cuando al tanque de proceso se le alimenta solvente para lavar la solución la operación intermitente respectiva. Una de recirculación para proveer la velocidad de flujo cruzado óptima y la bomba de alimentación. En estado estacionario el flux es cons- . La desventaja principal de los sistemas intermitente es que generalmente requieren más tiempo de residencia (lo cual puede afectar al producto) y tanques de proceso más grandes.28: UF intermitente sin recirculación. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Operación Continua La diferencia entre una operación intermitente y una continua es que en esta última.J0. a la vez que el flux decrece proporcionalmente a ésta. Fuente: Tutunjian. el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentración final deseada. se convierte en una operación intermitente de diafiltración. 1985b.

Copyright ©1986. Todos los derechos reser vados. Fuente: Gravatt y Molnar. .29: UF intermitente con recirculación. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. ULTRAFILTRACIÓN Agua de Diafiltracion Permeado Bomba de Alimentacio'n Bomba de Recirculacion Figura 10. 1986.588 CAPÍTULO 10.

4 Diseño de la Unidad de UF El problema del diseño de la unidad de UF consiste en determinar el área de UF necesaria para procesar una cantidad de una solución de concentración conocida en un tiempo dado.30: UF continua de una y varias etapas. Todos los derechos reservados. por lo que el diseño requiere de datos experimentales específicos del sistema. tante y mínimo.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 589 • 0 1 0 » UF Retenido Alimentación —a-* Bomba Etapa 1 Bomba de Permeado Recirculación 0^1 Etapa 2 Etapa 3 Retenido Bomba Permeado Permeado Permeado Figura 10. Generalmente para situaciones de interés práctico. 1985b.4. Para contrarrestar esta limitación de la operación continua generalmente los sistemas utilizados son de etapas múltiples (Figura 10. la predicción de coeficientes de transferencia de masa y del flux es limitada. Copyright ©1985.30). . hasta una concentración final determinada. 10. Adaptada de: Tutunjian.10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.

se procesa hasta alcanzar un volumen final Vj con una concentración final CBJ. ULTRA FILTRACIÓN En el caso de los sistemas de diafiltración otro parámetro importante es la cantidad de solvente de lavado que es necesario agregar. Concentración Intermitente En un sistema de concentración intermitente el volumen inicial de solución V0 con una concentración inicial CBO.Jc B c -c J dCB ¡C s r . considerando la concentración de soluto en el permeado Cp constante. obteniéndose un volumen de permeado Vp. Un balance de soluto en el sistema.20) de la siguiente forma: CBJ exp . A continuación se presentan las ecuaciones de diseño de algunos arreglos típicos de los sistemas de UF. se puede expresar como: (10. y expresada con ayuda de la ecuación (10. puede ser integrada entre O y ¿.20) La ecuación (10._ Bo B P '--1% J(CB-CP) ( .19) La ecuación anterior integrada entre los límites y v y vQ r* \-j B /~i ^*Bo V =V conduce a: CB V = V0 exp 'CB dC B (10.19) combinada con la expresión del flux dada por: donde A es el área de UF.590 CAPÍTULO 10.

Se realizan pruebas de laboratorio utilizando una unidad tubular de 0. etc.22) simplifica a: (10.4. por considerarse más conveniente este tipo de arreglo para el flux proyectado. el tiempo de operación es de 20 h. Se desea concentrar de 2 a 10 % en peso 10 m3/dia de una solución de un polisacárido.23) La ecuación (10. entonces la equación (10.UF intermitente.23). DISEÑO DE PROCESOS DE UF 591 Cuando el rechazo es total Cp^^O. Como el tiempo muerto (descarga.í 10. conjuntamente con la ecuación 10.2 ra. Ejemplo 10. Los datos de laboratorio muestran que para una AP =1. limpieza. Este cálculo requiere la evaluación de la parte derecha de la ecuación (10. y por las ventajas que ofrece para su limpieza por retrelavado. b) Calcular el número de tubos necesarios (diseño modular). lo cual puede realizarse calculando el área bajo la curva de los datos experimentales graneados como: ~JVS J 1 1 j Para realizar estudios de escalamiento también puede utilizarse la | expresión experimental de la variación delfluxcon CB obtenida en equipos de laboratorio.012 x 1.23) puede ser utilizada para calcular el área necesaria para realizar una concentración de CBO a CBJ en un tiempo / o para calcular dicho tiempo dada el área de UF disponible. .) de la unidad es de 4 h.4.5 Kg/cm2 el gasto volumétrico en la recirculación es de 8 l/min y el flux en //m 2 — h está dado por la expresión: = 81n 'B a) Calcular el área de UF necesaria.. c) El flux promedio.23.

592 0.4 Solución: a) Cálculo de área: Con los datos y la ecuación (10.05 0.25 0.35 0.10 0.20 CAPÍTULO 10. ULTRAFILTRAC) 0.La integral de la expresión anterior es igual al áre< esa curva.00 0.31 se muestra la curva que se obtiene al gr 1/J vs \¡CB. Datos de Ejemplo 10.30 1/J 0. de tal manera que: A = 1000 x 0.31: Curva de 1/J vs l/CB.1/2 A = 1000 >i ^ n > l n15 \\CB/I En la Figura 10.20 0.10 0.30 I/Ce 0.40 Figura 10.15 0.40 0.23) se obtiene la expresión: .04 m 2 A = 40 m2 .

2 m = 884 tubos = 593 N N N c) Cálculo del flux promedio: Mediante un balance de soluto se obtiene primero el volumen final de la solución: V0C0 = VjCf de tal manera que. el área de UF necesaria es mucho mayor que si se opera en varias etapas en cascada.012 m x 1. 10.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF b) Cálculo del número de tubos N: Área total Área por tubo 40 m2 = TT x 0.000x2/ —lo— vf = 2000 / con estos datos se puede calcular el flux promedio: (10. Debido a esto los sistemas de multietapas continuas son los más utilizados. . Debido a que un sistema continuo opera todo el tiempo a la concentración de salida deseada.000-2000) I 40m2x20/i 1U Ví = prom ~ — Jprom m* — Concentración Continua Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volúmenes considerables o cuando se tiene una alimentación continua. si el sistema consta de una sola etapa.0.

r) * * f. El flujo Fn puede calcularse efectuando un balance de masa de soluto en toda la cascada. Sin embargo.594 CAPÍTULO 10. 1985b).32: UF continua de etapas múltiples. Si un sistema de UF presenta varias etapas de igual área. i ir /i\ fc 1r " e. el área de cada etapa puede calcularse utilizando balances de masa solamente. de tal manera que. tendiendo a alcanzar el flux promedio de un sistema intermitente. cada etapa está constituida por una o varias unidades de UF en serie o paralelo. Fn = ^ (10. El problema de diseño consiste en determinar el área de UF de cada etapa.\ i r _ . para un flujo de entrada F0. Entre más etapas presenta la cascada mayor es el flux promedio de ésta. conforme la concentración de soluto aumenta en cada etapa el flux de permeado disminuye.n n c.32. ULTRAFILTRACIÓN F r ° ir ^ C0 Av . V r r . Generalmente es más económico utilizar de tres a cinco etapas (Tutunjian. este efecto disminuye conforme aumenta el número de etapas. con una concentración de la solución de entrada C0 y una concentración de salida deseada Cn. \r C2 i Figura 10.24) El flux en la etapa n está dado por una expresión de la forma: . ^ t. es decir el volumen de solución disminuye. Algunos cascadas de UF operan con áreas diferentes en arreglos tipo pirámide. En el sistema de UF continua que se muestra en la Figura 10. donde el área por etapa disminuye conforme la concentración de soluto aumenta. Si se supone un coeficiente de rechazo a = 1 para todas las etapas.

10. (10. Las pruebas experimentales muestran que el flux puede estimarse con la expresión Calcular: a) El área necesaria para un procesamiento intermitente y el flux promedio. en forma iterativa descendente se calcula el número de etapas necesarias hasta alcanzar el valor de la concentración de soluto de la solución de entrada.Comparación de UF intermitente y continua. o bien el área necesaria para un número de etapas prefijado. í Pn = AJn (10. cuando se conoce el área de cada etapa.25) n • El flujo de permeado Pn en la etapa n se puede calcular para un Í área A de diseño con. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 595 (10..27) Por medio de un balance de soluto en la etapa n se calcula la conI centración de soluto en la etapa previa.28).28) Con el sistema de ecuaciones (10.4. .24)-(10. Se desea procesar 5000 l/h de una solución proteica para concentrarla de 2 a 20% en peso. Fn_1 = JPn + Fn (10. Ejemplo 10. b) El área necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux promedio.26) Efectuando un balance global en la etapa n se puede calcular el flujo de la etapa previa.5.

0134 m 134 772.23) se puede llegar a la siguiente expresión: *1/2 Aintermitente — 10.24)-(10.375 m2 Acont El flux promedio es: r _ 4500 l/h _ "" ~ 164.875) m2 = 164. El área total es : = (5)(32. La Figura 10.33 muestra estos resultados en forma gráfica.28). Utilizando la ecuación (10. donde la relación Área/etapa = 32. .üO m2 — h b) En la Tabla 10.7. .375 m 2 n I m -h 2 c) Utilizando el procedimiento del inciso b) se realizan los cálculo para obtejier la Tabla 10.875 m2 satisface la condición de diseño.596 CAPÍTULO 10. o 20 h '==- OO. ULTRAFILTRACIÓN c) La variación del área total de la UF con el número de etapas.6 se presentan los cálculos utilizando las ecuaciones (10. El flux promedio está dado por: c nnn DU Jprom ~ 5000x2 1 7 _ n 134 m 2 .000 x 0.000 X i A>ntermitente •^intermitente = — 10. Solución: a) Área UF intermitente.

22 3 63.77 Área total (m 2 ) 555.55 1538.00 2 119.00 13.37 147.00 766.45 .94 164.4.38 30.500.00 238.79 4. Datos ejemplo 10.44 27.81 Total Jn (l/h) Pn 266.59 547.89 2.69 5000.66 27.51 2.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 597 ¡Tabla 10.89 46.87 23.61 4.14 3461.00 Tabla 10. Datos del Ejemplo 10.00 Cn (% en peso) 20.h) 8.98 5 32.17 2216.74 Flux promedio (//m 2 .6: Área para procesamiento continuo en 5 etapas.5 Fn n 5 4 3 2 1 0 (1/h) 500.88 10 14.97 1245.flO.04 7.59 1314.5 Número de Área por etapas totales etapa (ra 2 ) 1 555.h) 8.11 18.11 16.00 (//m 2 .44 37.57 901.44 191.7: Cálculos para diferentes número de etapas.

ULTRAFILTRACIÓN O 4 6 N (Etapas) 8 10 Figura 10.5.33: Variación del área de UF con el número de etapas. Datos del Ejemplo 10.598 CAPÍTULO 10. .

10A.29) donde: VR: Volumen retenido en el tanque. está dado por: al = -PC¡ (10. obteniéndose la siguiente expresión: (10. C = C0 C.30 puede integrarse con los límites. = Ci VD — O VD = VD obteniéndose la siguiente expresión: (10. P: Flujo de permeado. [L3/t]. de tal manera que el flujo de alimentación es igual al flujo de permeado. [L3]. [M/L3]. Considerando que el soluto de interés es totalmente rechazado por la membrana y la impureza totalmente permeable. La ecuación 10. Ci\ Concentración de impureza en el tanque.30) donde VD es el volumen de solvente de diafiltración. el balance en el sistema del soluto que se desea eliminar.31) La ecuación* anterior puede ser rearreglada expresando el flux de permeado como: .24) se alimenta continuamente solvente de lavado al tanque de alimentación y se mantiene el volumen del retenido constante. DISEÑO DE PROCESOS DE UF Diafiltración Intermitente: Volumen Constante 599 En la diafiltración intermitente a volumen constante (Figura 10. dado que VR es constante el flujo de permeado puede igualarse al flujo de solvente.

33) y (10.Diafiltración intermitente a volumen constante.6. Solución: .h a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solución de la razón del volumen de diafiltración a volumen de retenido o índice de lavado.35) V J La ecuación (10.32) para obtener: „ „ í-JAt\ C/ = C/0exp -TT— (10.34) (10.34) se obtiene: Ci = C /0 exp -£*— VR (10.35) puede ser utilizada para calcular el área de diafiltración necesaria para lograr un determinado grado de eliminación de impurezas.32) y combinando las ecuaciones (10. Se desea purificar por diafiltración intermitente a volumen constante 5000 / de una solución que contiene 15% en peso de proteínas y 3% de sal (O'Sullivan et a/.33) V VR ) dado que el flux de permeado también puede expresarse de la siguiente forma: J = ks\n-~ al combinar las ecuaciones (10. b) Calcular el área de diafiltración necesaria para lograr una pureza del 99% en un tiempo de 10 h.600 CAPÍTULO 10.. El flux del sistema está dado por: CB [™? . I c) El volumen de solvente de diafiltración para el inciso b). ULTRAFILTRACIÓN J = -T7 (10. Ejemplo 10.31) y (10. 1984).

32) puede ser usada para calcular V¿>.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.4.05 CB CÍ + CB 15 15 15 15 15 Pureza 18.833 0.15 15.973 0.10 0. Datos del Ejemplo 10. de tal manera que: VD VD VD = JAt = (201n^)(108m 2 )(10/i) 15 = 15.10.996 a) Utilizando la ecuación (10.15 0.05 = exp de donde se obtiene: 5000 / A = 108 m2 c) La ecuación (10.932 0.00 1. 3. .6 VD/VR 0 1 2 3 4 c.41 15.41 0.00 16.05 = c7+fe 0.8. Esta operación se repite hasta alcanzar la pureza deseada.35) y los datos se tiene: 0.8: Efecto del volumen de diafiltración sobre la concentración de impurezas. y lavar hasta alcanzar nuevamente el volumen VR. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 601 Tabla 10. b) Utilizando la ecuación (10.990 0.10 15.000 / QH Diafiltración Intermitente Repetida Una forma alternativa de diafiltración intermitente consiste en adicionar un volumen de líquido de lavado al tanque de proceso que contiene un volumen VR de solución.

existe un flux constante en cada etapa (flujo de líquido de lavado igual al flujo de permeado). Este tipo de arreglo es útil para procesar volúmenes considerables o cuando por inestabilidad del producto se requieren tiempos de operación cortos. VDT'.= l.Volumen total de líquido de lavado empleado. ULTRA FILTRACIÓN El balance de masa para esta operación puede ser expresado cornol C ^ 7T.37) La concentración de soluto a la salida de la etapa n puede ser expresada como: donde: C¡n: Concentración de impureza en la etapa n. . si la membrana no retiene la impureza.602 CAPÍTULO 10.34). (7/0: Concentración inicial de impurezas. Cuando la concentración de la especie retenida es constante. la concentración de ésta a la salida de cada etapa y en el permeado es la misma.36) } donde: Cin\ Concentración de impurezas después de n lavados. de tal manera que el balance de masa para la primera etapa puede ser expresado (con Q = P) como: (10. VR: Volumen de retenido. Diafiltración Continua en Cascada En la diafiltración continua en cascada el líquido de lavado se adiciona continuamente en cada etapa (Figura 10. n: número de lavados. VDT C '° + rf% (10. Además. .

F Cu —\\- FC'n Figura 10. P: Flujo de permeado. Q: Flujo de líquido de lavado. F: Flujo de alimentación (retenido).38) también puede expresarse como: ^ Cío (10.39) se puede rearreglar de la siguiente forma: At = J .•0. Como el flux de permeado en cada etapa está dado por: J J~VD ~Tt (10.34: Diafiltración continua en cascada.4.40) la ecuación (10.39) donde VD es el volumen de lavado alimentado a una etapa y VR el volumen de retenido alimentado al sistema en un tiempo dado. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 603 Q Q FCk. La ecuación (10.

604 CAPÍTULO 10. De acuerdo a la ecuación (10.4( el área necesaria para efectuar una determinada purificación disminu^ al incrementar el número de etapas.. El producto At es mínimo cuando el lado derecho de la ecuació (10.39) al aumentar el índice de lavad VD/VR se incrementa la purificación. definiendo las siguientes expresiones del grado de eliminad de impurezas: Para la operación intermitente: CIo-CIn Para la operación continua: Cío — C¡n Cío De acuerdo a lo anterior si VDT/VR — 2 el % de eliminación impurezas es: Operación intermitente: (1 .7.5 % . Se desea efectuar un análisis comparativo entre la diafiltración i termitente y la continua para determinar que operación requiere men volumen de lavado (menor área) para alcanzar un mismo porcentaje ( eliminación de impurezas. o bien el incremento del númei de etapas reduce la cantidad de líquido de lavado y el área necesar por etapa. Solución: Se pueden utilizar las ecuaciones (10. ULTRAFILTRAClÓi donde A es el área de UF por etapa.31) y (10.40) es mínimo.e'2) x 100 = 86. Ejemplo 10.39) para efectuar es análisis.Comparación entre la diafiltración interm tente y la continua. De acuerdo a la ecuación (10.

1:Intermitente 2: continua 1 etapa 3: continua 2 etapas 4: continua 3 etapas.35: Comparación de diafiltración intermitente y continua. .10.9 se presentan los cálculos para otras relaciones de l°s cuales se muestran en forma gráfica en la Figura 10. x 100 = 78. Datos Ejemplo 10. por lo que en el caso de la operación continua dicho volumen se reparte equitativamente entre las etapas.7.35.4% En la Tabla 10.4. Es necesario hacer notar que VDT es gl volumen total de líquido de lavado. Operación continua 1 etapa: 1- 1 x 100 = 66. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 605 100 8 Figura 10.7% Operación continua 2 etapas: 1x 100 = 75.0% Operación continua 3 etapas: 1f) 3 .

4 98. la cantidad de líquido de lavac disminuye.8 96. sin embargo la cant dad de líquido de lavado también es la máxima bajo estas condición (ecuaciones 10. % de eliminación de impurezas Continua intermitente 1 2 3 0. Estos hechos conducen a un problema de optimización. Operaciones Combinadas: Concentración-Diafiltración / Algunos caldos requieren tanto ser concentrados como lavados.1 99. esto d pende de la concentración alcanzable de la especie no permeable (Fai y Radovich. en e tos casos se requiere decidir cuando efectuar la diafiltración. si el caldo se concentra valor deseado y posteriormente se lava.0 78. Diafiltración a Contracorriente En la diafiltración a contracorriente (Figura 10.5 66.9: Comparación de diafiltración intermitente y continu Datos Ejemplo 10.7.36) es posible lograr ur mayor purificación con menos líquido de lavado.39).9 96.0 90.0 0.0 0. el flux se maximiza. 1990).0 98.606 CAPÍTULO 10.9 97.8 85.31 o 10.7 75.0 88.9 92. ULTRAFILTRACIÓ Tabla 10.2 98.8 VDT/VR 0 2 4 6 8 10 La operación intermitente es la que requiere menor volumen c lavado (área).0 88.7 93. don< . Por otro lado.3 100.0 100.0 86. entonces cuando ésto sea el objetivo de la operacic debe seleccionarse este tipo de operación.34). sin embargo. Si es ise inicia con el caldo inicial. sin embargo el flux también disminuirá dado que éste var inversamente a la concentración del soluto impermeable CB (ecuacic 10.0 0.2 80.

El flux para el sistema está dado por la relación experimental. . Ejemplo 10. la diafiltración deberá efectuarse en un punto intermedio entre la concentración inicial y final de retenido. 1990.Operaciones combinadas de UF. Se desea también reducir la concentración de sales al 0. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.8.05%. [l/h] Encontrar el tiempo de diafiltración óptimo.31) se puede calcular la relación del volumen de líquido de diafiltración a volumen del caldo. Solución: Empleándola ecuación (10. de tal manera que se obtenga una concentración final de 20% en peso de proteína. Fuente: Fane y Radovich.QA. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 607 Agua de Lavado 20 1 Alimentación 100 t i 1 50 ni •mi w ti 1 50 7 J + Retenido Libre de Producto 10 f Perneado (Producto) 110 Recuperación de Producto 97% Dilución del Producto 868 Figura 10. Copyright ©1990. Se desea concentrar 10 veces 1000 / de un caldo que contiene 2% en peso de proteína y 5% en peso de sales..36: Diafiltración a contracorriente.

05 VD .85 h. Diafiltrar hasta 0.37 muestra la variación del tiempo de filtración en el factor de concentración.05% de sales.10 se muestra el efecto del factor de concentración sobre los diferentes parámetros.608 CAPÍTULO 10. Concentrar 5 veces hasta 10% de proteína y 5% de sales. 2. t = 4. Por otro lado. 3. observándose un mínimo en X = 5 con t = 1. Concentrar 2 veces hasta 20% de proteína.Diafiltración: 1.6- En la Tabla 10. y la Figura 10. Utilizando la expresión de flux se puede calcular el tiempo de diafiltración de acuerdo a la siguiente expresión: JA o bien. / Los resultados anteriores conducen a proponer el siguiente esquema de Concentración . . ULTRA FILTRACIÓN — VR VR = In = Ci 0. Se supone que el tiempo total de concentración no se afecta por el esquema de diafiltración que se adopte. 5 In Esta relación debe ser utilizada independientemente del volumen de caldo VR. VR depende del grado de concentración previa a la diafiltración. t = 500 l n ^ La ecuación anterior puede expresarse en términos de "X" o veces que se concentra la solución original de 1000 / y 2% de proteína.

08 11 90.00 2.07 10 100.52 202.00 4 250. Datos del Ejemplo 10.00 16.04 752.20 8.14 14.33 6.85 5 200.62 2.53 2.00 920. Tabla 10.18 22.00 3. X % VR(') M/) CB ( ) JA (l/h) t(h) 1 1000.40 418.00 2.11 18.86 657.00 10.00 954.41 2 500.8.34 3.73 9 111.11 511.00 1301.91 102.05 20.89 405.33 1533.67 12.8.77 4.00 496.00 150.89 608.63 1.00 2.67 766. Datos del Ejemplo 10.00 575.00 328.00 1.00 460.47 6 166.10: Operaciones combinadas.00 4600.00 2.37: Operación de UF combinada.20 8 125.00 .00 1150.39 7 142.04 3 333.00 261.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 609 Figura 10.00 4.00 2300.00 1.

610 CAPÍTULO 10. para estimar áreas de 1< equipos. . mediante el uso de membranas especializadas para lograr la separado deseada.5 Sumario La ultrafiltración se utiliza para concentrar y purificar caldos biológico. purificar diafiltrar una solución. Los equipos de ultrafiltración presentan características distintiva en arreglos modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad c flujo cruzado de la alimentación. ULTRAFILTRACIÓI 10. El diseño de los equipos de ultrafiltración está basado en una con binación de la teoría y la experimentación. Las operaciones pueden ser efectuado en forma intermitente o continua ya sea para concentrar. las etapas necesarias o el tiempo requerido de un proceso.

10. a) Resp.1 10 12.l.5 40 7..Se desea concentrar 75. El tiempo de proceso es de 12 horas y la expresión experimental del flux es: 40^ J = 12 In ~C~B I m — ¿ a) Calcular el área mínima para una operación intermitente a volumen constante.0 50 6.2..Demostrar que la concentración de un soluto impermeable a la cual el tiempo de diafiltración es mínimo en un proceso combinado. 321 m 2 b) Resp..5 J Estimar ks y CG10. 410 m 2 .En la concentración de una solución de factor VIII antihemofílico itilizando módulos de fibra hueca (Mitra y Ng.J.0 30 8. está dada por: C= -sG e donde e es la base de los logaritmos naturales.0 20 11.6 ik- Problemas fo. b) Calcular el área total para una operación continua en cascada con 3 etapas de igual área.3.s) x 105 5 15. PROBLEMAS 611 0.000 / de una solución proteica del 2 al 15% en peso y reducir su contenido de sales 5 veces. 1986) se obtuvieron los siguientes datos: Cs(m<7/m/) J(ml/cm2 .

0316 m2 de área. el flux está dado por: J = 5 x 10~ 4 In 100 cm 3 cm¿ — s .. a) Calcular la concentración final del caldo.El flujo de permeado por unidad en la di afilt ración. c) El tiempo necesario para el primer paso del proceso. la solución se concentra 5. a) Resp.612 CAPÍTULO 10. El coeficiente de retención de la Cefamicina C en la unidad puede considerarse igual a cero. 125 min d) Resp..24 l/min 10. f).6.. JA = 74.3 veces en 14mm. 47. 66% e) Resp.547 / b) Resp.En una unidad tubular de UF donde se concentra a razón de 2 l/min una solución que contiene 30 mg/l de una proteína de peso molecular de 300. 0. d) El porcentaje de recuperación de Cefamicina C en el primer paso. b) Calcular el flux promedio de la operación. VD = 53. ii) Posteriormente se diafiltra a la velocidad final de permeación del primer paso.77 g/l de B. 319 //m 2 .Una planta produce Cefamicina C mediante una fermentación a un ritmo de 28 lotes de 57. e) El volumen de diafiltración..4.5.Al procesar en forma intermitente 2. ULTRAFILTRACIÓN 10. a) Resp. b) El flujo que es procesado por unidad. El flujo de permeado promedio que produce cada unidad es de 76 l/min. Determinar: a) El tiempo requerido para procesar cada lote considerando un tiempo muerto de cuatro horas por dia.h 10.455 / f) Resp. Para obtener una recuperación del 98 % de Cefamicina la operación se efectúa en dos pasos: i) Primero se reduce el volumen del caldo a la tercera parte.00 / cada semana. megatherium en una unidad de fibra hueca de 0. El caldo que contiene sólidos en suspensión se procesa en un sistema que consta de cuatro unidades de UF de 268 m2 cada una. 5 h/lote b) Resp.9 / de un caldo que contiene 23.5 l/min c) Resp.000 Da.

10.1 Kg/m3 de proteasas y 4 x 102 mol/m3 de NaCO?. 1.00 0. Los coeficientes de retención de las membranas son los siguientes: Membrana Soluto Proteasas PM-10 Sales Proteasa PM-30 Sales Coeficiente 0.7.6. PROBLEMAS 613 La presión de entrada a la unidad es de 2 atm.h c) Resp. d: Diámetro del tubo en cm Determinar: a) La presión a la salida del tubo. c) El flux de permeado. Q: Flujo cruzado en cm3/s.99 0.. b) La caída de presión transmembrana.80 0.. . 1990).ooiLcy donde: AP: Caída de presión en atmósferas.Se desea comparar dos tipos de membranas para desalar y concentrar una solución de proteasas (Ghose. Determinar para cada tipo de membrana: a) El volumen necesario de agua destilada para eliminar el 99 % de sales por diafiltración a volumen constante..132 atm 146 //m 2 .00 El volumen a procesar es de 10 2 m3 con una concentración de 0. a) Resp. L: Longitud del tubo en cm. La caída de presión ía lo largo del tubo está dada por: o. El tubo presenta un fcliámetro interno de 2 cm y una longitud de 50 cm. 0.264 atm b) Resp.

c) La concentración de proteasas al final de la diafiltración. 4. a) Resp.614 CAPÍTULO 10.5 x 10~5 m3 c) Resp. d) Las pérdidas de proteasas al concentrar 10 veces la solución diafiltrada.69 % . 3 0.0955 Kg/m e) Resp.6 x 1(T2 m3 b) Resp. e) El porcentaje de pérdidas totales de proteasas. Respuestas para la membrana PM-10. 4. ULTRAFILTRACIÓN b) Las pérdidas de proteasas durante la diafiltración. 6.

W. BIBLIOGRAFÍA 615 10. Marcel Dekker.). (Ed. J. Marcel Dekker. (Ed. Brocklebank. y Belfort. 108-113. Marcel Dekker.). 1. J. Selection and use of ultrafiltration membranes.K. 617-740.C.10. Cussler.C. Ultrafiltration. Downstream processing plant and equipment. 9. Advanced Biochemical Enginnering. W.P. Me Gregor.Y. 1985 . Permagon Press. 1987. New York. Fane.John Wiley and Sons. 19. (Ed. J. En: Membrane Separations in Biotechnology. En: Comprehensive Biotechnology.). 1986. M.7. Sep.L. D. P. 239-297.P. W. 4. 8. Me Gregor. New York. Membrane Systems. 1. 1990. Bungay. Marcel Dekker.S.R. G. 25. Hanisch. 209-262 Ghose.). y Howell.A. G. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. W. Food Technology.7 Bibliografía Belfort.). 10. New York. 229-264. 237-270. 1990.C. New York. 1986.G y Radovich. John Wiley and Sons. 1988. New York. Cell harvesting. Vol.A.) New York. 1986. 61-88. En: Separation Processes in Biotechnology. H. J. y Hu. Gravatt. New York. (Ed.). y Molnar. En: Membrane Separations in Biotechnology. 383-409. Le M. Murray M.A.D. Asenjo. T..A. 1-35. Belter.C. E. 9.E. Me Gregor. 1990. Membrane separation technology offers processors unlimited potential. A. Me Gregor. . Asenjo. Marcel Dekker. W. J. (Eds. Membrane separations technology: An overview. Dziezak. New York. (Ed. En: Separation Processes in Biotechnology. Recovery of an extracellular antibiotic by ultrafiltración. W.M. Ellis Horwood. Bioprocess Computations in Biotechnology. En: Membrane Separations in Biotechnology. T. 3. (Ed. 89-97. 1990.

).. 1991. A. Epstein. 6. (Ed. G. Scale-up considerations for membrane processes. O'Sullivan T.K. . 177-205.. Marcel Dekker.S. Netherlands.S. W.S. Practice of ultrafiltration-diafiltration in the plasma frationation industry. Kluwer Academic Publishers. Enero. Korchin S. New York. y Cabral. Murray M. y Ng. 115-134. Ch. C. En: Comprehensive Biotechnology. (Eds). J. Santos.S. New York. R. 615-626. 1986. y Beatón.A. N.C. Ultrafiltration processes in biotechnology. 1985b.437. Mateus. 26.J. R. Prog.L.. 411 . Me Gregor. (Ed. Permagon Press.A. Tutunjian. R. Costa.M. J.M. M. ULTRAFILTRACIÓN Mitra. 3.). 68-75.Y. J.616 CAPÍTULO 10. Applications of ultrafiltration in biotechnology. Bio/Technology.C. En: Chromatographic and Membrane Processes in Biotechnology. Pressure driven membrane processes. 1984. En: Membrane Separations in Biotechnology. y Cabral. 1985a. Tutunjian. Eng.C.R.

1 Introducción Electroforesis es el movimiento de las partículas cargadas contenidas en un medio debido a la influencia de un campo eléctrico. existen otros factores tanto microscópicos como macroscópicos que afectan el movimiento de una partícula en un campo eléctrico.4 presenta una discusión sobre los principios básicos 617 .2 de este capítulo. células o partículas coloidales. En la sección 11. La electroforesis constituye una de las técnicas más poderosas para la purificación de moléculas biológicas. que han conducido al desarrollo de diferentes formas y técnicas para el desarrollo de las separaciones electroforéticas. Estos aspectos fundamentales de la electroforesis se revisan en la sección 11. la carga y la naturaleza anfotérica de éstas juega un papel fundamental. sin embargo pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de proteínas. Sin embargo. Gran parte de la teoría y de los equipos de electroforesis han sido desarrollados para la separación de proteínas globulares.3 se presenta una descripción general de este tipo de equipos. así como a ácidos nucleicos. La sección 11.Capítulo 11 Electroforesis 11. La electroforesis no está limitada a la escala analítica. Actualmente existen varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso de esta técnica a escala preparativa. En la separación de proteínas por medio de un campo eléctrico.

ELECTROFORES1S y Inicio 15 minutos (i] | 30 minutos gQ Soluto Aniónico Soluto Catiónico Figura 11. las matrice son teñidas para observar los componentes de la muestra. del diseño de equipos de electroforesis. Dichas matrices tienen la propiedac de constituir medios porosos altamente hidratados que proporcionar resistencia mecánica. despué de un tiempo apropiado para desarrollar la electroforesis. Copyright ©1990. sobre una matriz generalmente rectangular. Cuando esta técnica se utiliza con fines cualitativos. 11. separándose los componentes de la mezcla sobn la matriz.1: Electroforesis de zona en una gel anticonvectiva. Todos los derechos reservados. de celulosa. En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se muev< a diferente velocidad.618 CAPÍTULO 11.2 Fundamentos La forma mas sencilla de realizar una operación de electroforesis es el método de electroforesis de zona (Figura 11. En la discusión de la operación de electroforesis es importante con siderar cuatro aspectos fundamentales: . la cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como bufer. y disminuyen los efectos del calor generado por e paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda. 1990. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Fuente: Ivory. almidón. agar o poliacrilamida.1). En este método se coloca una pequeña banda de muestra de la solución que contiene el soluto de interés.

Existe un pH particular para cada proteína donde la carga neta de ésta es cero. Los grupos amino —7V//2 sn medio ambientes ácidos son protonados produciendo grupos amoaio —TV. a este pH se le conoce como punto isoeléctrico.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas 3n las proteínas su carga se origina principalmente de la ionización de ms numerosos grupos amino y carboxilo. La carga que adquiere una proteína en determinado pH. • El cuarto aspecto se refiere a las técnicas y diversas formas en que es posible realizar una operación electroforética.1. En esta sección se hace uso del caso de las cargas que se presentan en las proteínas globulares. a un pH relativamente alto la proteína tiene más grupos —NH<¿ y —COO~ y se encuentra cargada negativamente. L 1. son dos propiedades que se utilizan para la correcta separación electroforética de proteínas. la carga neta de una protema depende entre otros factores del pH al que ésta se encuentre.///. despreciando efectos gravitacionales y difusivos.2. FUNDAMENTOS 619 • La naturaleza de la carga de la partícula que se mueve en el campo eléctrico. • Los fenómenos de dispersión de la muestra que se observan en las operaciones electroforéticas. A un pH relativamente bajo existen más grupos —NH^ y —COOH y la proteína tiene una carga neta positiva.2.2. así como el punto isoeléctrico de ésta.2. constituyen el tercer aspecto. está influenciada por algunos fenómenos físicos mi- . 11. que es el campo de estudio de la teoría electrocinética. Los grupos carboxílicos —COOH en medios ambientales básicos son ionizados para formar grupos carboxilatos —COO~.2 Teoría Electrocinética La velocidad de migración de un soluto a través de un líquido conductor por la acción de un campo eléctrico. • El segundo aspecto lo constituye el estudio de los parámetros más importantes para describir la velocidad de migración de la partícula. Tal como se muestra en la Figura 11.

Modelo de una Esfera Cargada Sumergida en un Medio Continuo Un modelo sencillo para el tratamiento de la electroforesis consiste en considerar a la partícula de soluto.El modelo de la doble capa.El modelo de una esfera cargada sumergida en un medio continuo. como si se tratara de una esfera sumergida en un medio continuo de solvente. croscópicos como: la carga de la partícula. ELECTROFORESIS + 10 8. . y las fuerzas de relajación y de retardamiento que se producen en el ambiente iónico que rodea al soluto. 1 -10 4 PH e Figura 11. establece que la fuerza que actúa . Un balance de las fuerzas que actúan sobre la partícula cuando ésta se mueve a una velocidad constante (en equilibrio). Dos modelos básicos de gran utilidad son: I . la fuerza de arrastre que se opone al movimiento de la partícula.2: Cambio de la carga neta de un proteína con el pH. los cuales varían en su grado de complejidad.620 CAPÍTULO 11. La teoría electrocinética que ha sido desarrollada para el tratamiento de estos aspectos ha conducido a la elaboración de varios modelos. despreciando los efectos difusivos y gravitacionales.

0 ° iMoí— equiv* E: Campo eléctrico. es decir: FK = -FE (11. F\ Constante de Faraday. 1964): (11.2. Si la partícula está en equilibrio es posible combinar las ecuaciones (11.2) donde: v : Velocidad de la partícula. (11.]. [Voltio /cm]. de tal manera que: (11. d: Diámetro de la esfera. ~Ñ"\ Número de Avogadro. es igual a la fuerza de arrastre de la partícula.1).3) •/' o donde: z\\ Valencia de la partícula o carga puntual.500 Coulombio/Mol-equiv]./V'oneJ.1) La fuerza de arrastre FK en el caso de un flujo viscoso lento alrededor de una esfera (flujo reptante) está dada por (Bird et a/. [M/L — t]. FUNDAMENTOS 621 sobre la partícula debida al campo eléctrico.11.3) para obtener: En la expresión anterior N0 puede ser expresada en función de la constante de Boltzman ks y la constante de los gases ideales R para obtener: . [L/t]. ¡i: Viscosidad líquido. La fuerza eléctrica FE es proporcional tanto al campo que actúa sobre la partícula así como a su carga. [96.2) y (11. [L]. [.

5) y (11 . Estos grupos cargad' atraen especies de la solución que presenten cargas contrarias (coione . Modelo de la Doble Capa El modelo de la capa doble desarrollado en base a la teoría de los ele trolitos fuertes de Debye y Hückel.622 CAPÍTULO 11. permite visualizar las interacción de una partícula sólida cargada. I modelo de la doble capa para interfases sólido-líquido electrolito.6) se tiene: La movilidad m de una partícula en un campo eléctrico se definí como la velocidad de la partícula por unidad de campo eléctrico. la movilidad está dad. con su microambiente iónico. 1 ELECTROFORESIS De acuerdo a la ecuación de Stokes-Eistein para un flujo reptante alrededor de una esfera. h sido empleado para explicar estos efectos. la difusividad DAB está dada por: Combinando las ecuaciones (11. como predice modelo d esfera en la forma de la ecuación (1 1. por: Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una part cula no depende sólo de su carga intrínseca. Las partículas como las proteínas cuando se encuentran present en soluciones de electrolitos desarrollan cargas.9).8 En este caso particular del modelo de esfera. El ambiente iónico que s^ form alrededor de la partícula en solución tiene una influencia importan! sobre la movilidad y las propiedades electrostáticas de la partícula. m=~ (11.

El modelo de la doble capa permite interpretar el hecho que la velocidad de migración de una partícula cargada en un campo eléctrico.2. moléculas polares o moléculas con dipolos inducidos. El potencial Z es el potencial eléctrico medido en la superficie de corte de la partícula. A esta segunda capa se le conoce como capa difusa o capa de Gody-Chapman. relativamente fija. constituida por moléculas del solvente ligeramente ligadas y iones totalmente hidratados. formando una capa altamente hidratada. 1971).10) \/7 donde la fuerza iónica es una medida de la concentración y valencia de los iones que rodean la partícula. Utilizando la teoría de Debye-Hückel ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de Debye A. de un espesor aproximado de 10° A Esta capa que envuelve a la partícula misma constituye la superficie de corte del complejo formado. En la primera región (capa de Sterm) la atracción que ejerce la partícula sobre las especies es más fuerte.3). Dependiendo de la carga neta que se genere dentro de la superficie de corte por acción del rearreglo de cargas. y está dada por: = * E c--? . El radio de la capa difusa también tiene una influencia importante sobre la movilidad de la partícula. es proporcional al potencial Z de la partícula y no a su carga intrínseca. FUNDAMENTOS 623 contraiones. El modelo de la doble capa propone que este conjunto de cargas genera dos regiones o capas con diferente grado de movilidad (Figura 11. Esta longitud varía inversamente con la raíz cuadrada de la fuerza iónica / (Castellan. A o c 4= (11. coiones solvatados o contraiones solvatados). es decir. Actualmente no existen suficientes bases teóricas que permitan calcular el potencial Z en función de la carga de la partícula y su determinación es de carácter empírico. Se considera a esta capa la responsable de la disminución del campo eléctrico intrínseco de la partícula.11. en las proximidades de la superficie de corte se genera una segunda capa de carga contraria (cuya naturaleza no es rígida).

Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1990. Todos los derechos reservados. Copyright ©1990.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada. .624 CAPÍTULO 11. Adaptada de: Ivory. ELECTROFORESIS Superficie cargada \ >> Cap* interna de Helmholtz c*p* externa de Helmholtz Superficie de corte Agua de Hidratación Capa difusa de Gouy-Chapman Capa de Stern Distancia Figura 11.

. Modelo de la doble capa: Movilidad en soluciones diluidas. como los característicos de los líquidos fisiológicos (0. tal como el desarrollado para obtener la ecuación (11.2. Concentración de la especie i. el espesor de la capa difusa es muy bajo (~ 2 °A) y su presencia también puede ser ignorada. es decir a concentraciones salinas bajas.9). y al potencial Z que es una medida de la carga aparente de la misma.15M).12) siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partícula esférica formada por la superficie de corte. . es conveniente considerar tres casos particulares: .Entre los dos extremos anteriores.Para soluciones diluidas la movilidad en función del potencial Z puede calcularse por medio de un balance de fuerzas sencillo. de tal manera que: FK = 3TTfídcv (11. Z{\ Valencia de la especie i.11. De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas está dada por: . la capa difusa es grande pero muy diluida en contra iones. FUNDAMENTOS donde: d'. 625 En la mayoría de los casos prácticos A es menor a 1000°A.En ambientes de fuerzas iónicas altas. de tal manera que en equilibrio FK = -FE (11.13) La fuerza eléctrica FE que actúa sobre la partícula es proporcional al campo que actúa sobre ésta. se puede considerar la situación en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio. de tal manera que su presencia puede ser ignorada.Para fuerzas iónicas bajas. Para analizar los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de la partícula.

(11. y es aplicable cuando la relación de radio de corte a longitud Debye es muy pequeña (rc/X « 1).12).17) conducen a: — 6?r/¿t. [m].16) se obtiene: FE = etrcE y las ecuaciones (11. [coulombio]. m = _£í. 67T/Í (11. r: Distancia entre las cargas. qi: Carga correspondiente al campo. ELECTROFORESIS £ rA (11.14) en este caso: q\: Carga aparente de la partícula. e: Constante dieléctrica del medio. [coulombio]. = 6^E (11. El campo aplicado a la partícula puede ser expresado como: (11.16) -— e r2 combinando las ecuaciones (11.17) de tal manera que la movilidad m = v/E está dada por la ecuación conocida como de Hückel.18) (11.15) y (11. .626 CAPÍTULO 11. (11.14). [Coulombio2/new — m 2 ]. El potencial Z está dado por: (11.13) y (11.19) Esta movilidad es menor a la esperada si sólo se considera la carga real de la partícula.15) donde rc es el radio de corte de la partícula y q\ es la carga neta de la partícula en la superficie de corte.

5 x 10* V_ m e V_ 1.1. Estimar el campo sobre la superficie de un protón utilizando los siguientes datos: 1.5 x 10 cm El campo que produce el protón debido a la relación de la carga con la distancia es muy grande.Cálculo del campo que genera un protón.01 < -f < 1000 Á .2..6 x 10 I9 coulombio r = 31 x 1(T 1 6 10 m new — m coul2 = 9 x 10 Solución: El campo está dado por la ecuación siguiente: E= sustituyendo los datos se tiene: ' ' E = 9 x 10 . Modelo de doble capa: Movilidad en soluciones de concentración intermedia y alta.. 0.Cuando la capa difusa presenta una longitud intermedia en el rango.m' coul2 1. Una batería de 100 V produce un campo de sólo 10 V/cm.1. FUNDAMENTOS 627 Ejemplo 11.6 x 10~19 (31 x 10-10)2 m 2 £7 = = 1.

se observa experimentalmente una variación en la movilidad predi cha por la ecuación (11. m= (11.2Í 67T/I Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hückel c hasta 60% en el rango aproximado de 0.628 CAPÍTULO 11.5 Fuerza Iónica 0. tal y como se representa en la Figura IIA Esta variación ha sido correlacionada utilizando modelos basados e la ecuación de Henry. ELECTROFORESIS 1.6 < Y < 6 A Para relaciones de rc/X » 1.01 10 100 1000 Figura 11. E decir. la cual establece que la movilidad de la partícul además de ser función del potencial Z y de la fuerza de arrastre. tambié es función de la relación del radio de corte a la longitud de Debye.19). los modelos predicen una soluci< asintótica donde: (i) = 3/2 de tal manera que: .4: Variación de la movilidad con el radio de la capa difusa.5 .

Cuando la partícula emigra en dirección opuesta a su carga neta. Sin embargo.5). 11. han servido de base para generar diversos modelos empíricos de amplio uso.3 Fenómenos de Dispersión Cuando se realiza una operación de electroforesis se requiere que los solutos presentes en la solución de interés se separen formando bandas bien definidas. se conoce como fuerza de relajación. existen varios fenómenos que provocan la dispersión de la .2. generándose un esfuerzo viscoso adicional sobre la superficie de corte de la partícula. Sin embargo.Fuerza de relajación. Los modelos electrocinéticos en general han presentado dificultades para predecir con exactitud los resultados de las separaciones electroforéticas. Los contraiones de la capa difusa tienden a emigrar en dirección opuesta creando un campo que se opone al movimiento de la partícula.21) que es una movilidad 50% mayor que la predicha por la ecuación de Hückel.Fuerza de retardamiento. . A nivel microscópico esta variación de la movilidad ha sido explicada utilizando el modelo de doble capa para proponer otros efectos conocidos como: . es decir se obtenga una resolución apropiada. La fuerza de retardamiento se origina por el movimiento de solvente provocado por el movimiento de contraiones de la capa difusa.11. se presenta una distorsión de la capa difusa (Figura 11. FUNDAMENTOS 629 m= ef D7T// * 2 m = -^47T/X (11. La fuerza opuesta al movimiento de la partícula que se genera.2.

. ELECTROFORESIS Carga neta + O Cátodo (-) t Ánodo (+) R E Campo Fuerza de Relajación Figura 11. Todos los derechos reservados. 1986. Adaptada de: Rudge y Ladisch. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright ©1986.5: Representación esquemática del efecto de relajación.630 CAPÍTULO 11.

como los efectos microscópicos de mezclado que se agrupan en la llamada difusividad de remolino.Dispersión de proteínas.000).. se desea estimar: a). Para la electroforesis a 25°C de ovalbiímina (PM= 45.22) En el caso de proteínas la difusión puede ser estimada empleando la ecuación de Polson (Horstmann y Chase. Difusión En una electroforesis generalmente existe algo de dispersión de la mezcla debida a la difusión molecular.001 Kg/m — s. 1986).. sin embargo este fenómeno normalmente no es la causa principal de la dispersión. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge y Ladisch. b). FUNDAMENTOS 631 muestra. en un medio cuya viscosidad es de 0. ImG (PM=150.000). Algunos de estos efectos se describen a continuación.08 era. Ejemplo 11.La variación de la dispersión por difusión con el tiempo. Solución: .000) y colágeno (PM= 345. 1989). [°K].11. [Kg/m — s].El tiempo de doblado del ancho original de la banda de muestra que es de 0.2. D =9Axl " °~nm&r> (1L23) donde: T: Temperatura. la desviación estándar de una muestra dispersada sólo por difusión está dada por: a = T/WABt (11.. MA> Peso molecular del soluto.2. //: Viscosidad de la solución. término que engloba tanto los efectos de difusión molecular.

123 0.75 1.000 0. b).076 0.50 0.23) se puede calcul dispersión.2.062 0. Estos resultados se muestran en f< gráfica en la Figura 11.2.2: Cálculos de dispersión.093 0. Se puede puntualizar que conforme aurr el tamaño de la proteína.99 x 1Q-7 Tabla 11.138 0.053 0.168 a).27 x 10~7 3.065 0. ésta tardará alrededor de 1.000 0. i(h) 0.031 0.88 x 10-7 5.25 0. Ejemplo 11.151 0.027 0.2 se presentan los resultados de los cálculos < dispersión en función del tiempo.Mediante las ecuaciones (11.046 0.1: Cálculo de difusividades de proteínas.130 0.De acuerdo a los resultados anteriores.22) y (11.044 0. si la muestra con ImG. Ejemplo 11.00 3.000 Difusividad (cm 2 /s) 7. Proteína Ovalbúmina ImG Colágeno PM 45.054 0.00 2..106 0.107 0.120 0.000 0.038 0. el coeficiente de dispersión disminuye dispersión es menor.087 0.6.00 5.23). En la Tabla 11. En la Tabla 11.000 345. ELECTROFOREí Tabla 11.00 4.00 0.038 0..000 150.632 CAPÍTULO 11.8 h para doblar el ancho inicial.107 0.075 0.053 0. muestra contiene ovalblímina el doblado de la longitud de la ban .1 se presentan los resultados de los cál< de difusividades de acuerdo a la ecuación (11.00 Dispersión (cm) Ovalblímina ImG Colágeno 0.

100.11.02- 0 0.5 3 3.5 2 2.5 5 Tiempo (h) Figura 11.2.080.060.6: Dispersión de proteínas por difusión en electroforesis.160.5 1 1. .040. FUNDAMENTOS 633 0.5 4 4.12- 1 0.140. 1) Ovalbúmina 2) ImG 3) Colágeno.

lo que se traduce en el desplazamiento neto de solvente hacia uno de los polos (en dirección opuesta al movimiento electroforético). corriente eléctrica se hace pasar a través de un medio con una determinada resistencia parte de la energía se convierte en calor. Para atenuar este efecto en la interfase delantera la muestra debe presentar una menor movilidad que el bufer. . El bufer puede presentar una menor conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene. puede generar dispersión durante la electroforesis. ELECTROFORESlS efectúa en una hora aproximadamente. puede provocarse una distorsión en "forma de puntas" de la interfase. Este efecto microscópico puede alterar el patrón de flujo macroscópico dependiendo de la configuración de la celda electroforética. Gradientes de Conductividad Si la conductividad de la muestra es mayor que la del bufer.634 CAPÍTULO 11. cuando el campo se incrementa arriba de un valor crítico. Esta es el resultado del movimiento de la capa difusa de iones en la proximidad de la superficie cargada fija de la celda por acción del campo eléctrico. Efectos Iónicos Regulatorios La diferencia de movilidad entre el soluto de interés y los iones del bufer donde se efectúa la electroforesis. alterando el desplazamiento de la muestra. Electroósmosis Otra causa de dispersión en una operación electroforetica es la electroósmosis. Una forma de disminuir el grado de dispersión en una operación intermitente consiste en disminuir el tiempo de operación. mientras que en la posterior es conveniente que la movilidad de la muestra sea mayor. Sobrecalentamiento: Efectos Térmicos Cuando una.

FUNDAMENTOS 635 fenómeno conocido como efecto de Joule. [M/L — t]. La más empleada a nivel laboratorio es el incremento de la viscosidad mediante el uso de geles de soporte. Esta es la principal causa de mezclado en electroforesis. De acuerdo con la ecuación (11. Esto tiende a disminuir la convección al disminuir la longitud característica /. El grado de convección se caracteriza por el número adimensional de Rayleigh Ra el cual está dado por: fía \¿±z donde: /: Longitud característica de la geometría del aparato de electroforesis (en una celda es el espesor del gel).: Viscosidad del medio. [L2/t].24) ésto se puede lograr de varias formas. ¡j. Sobrecalentamiento: Efecto de Convección Libre Si la electroforesis se desarrolla en un medio líquido en ausencia del gel de soporte. dañar el gel o estimular la evaporación de solvente. Entre menor sea el valor Ra menor es el efecto de la convección natural. [L].2. [M/L4]. los gradientes de temperatura pueden originar movimientos convectivos libres debido a la acción de la gravedad sobre los gradientes de densidad que se originan. de tal manera que la cantidad de muestra está limitada por este espesor. g: Aceleración de la gravedad.11. La existencia de gradientes térmicos puede desnaturalizar solutos lábiles. : Gradiente de densidad en la dirección z. En una operación electroforética el calor generado es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al cuadrado del espesor del gel. . [L/t2]. En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. a: Difusividad térmica del medio.

técnica conocida como PAGE (de las siglas en inglés de electroforesis en gel de poliacrilamida). ELECTROFORESIS 11.636 CAPÍTULO 11.2. Inicialmente éstas se realizaban en medio líquido en celdas especiales (Lehninger. En 1939 fueron introducidos los primeros materiales anticonvectivos como: papel filtro. Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidratada con poca carga que asemeja un medio líquido. 1989). fibra de vidrio y almidón granulado. Este tipo de gel es muy utilizado en análisis de ácidos nucleicos. 1990). A partir de 1959 fueron introducidos los geles de poliacrilamida (PAG de sus siglas en inglés) y de agarosa. Actualmente existen diferentes medios y formas para efectuar una separación electroforética (Ivory.Bm donde A y B son constantes y m es la movilidad. Las cadenas desnaturalizadas migran a una velocidad proporcional al logaritmo de su peso molecular PM. log(PM) = A.4 Medios y Modos de la Electroforesis La electroforesis ha evolucionado en forma considerable a partir de los trabajos pioneros de Ame Tiselius en 1937 y el desarrollo de la teoría de los electrolitos fuertes de Debye y Hückel en 1923. Este gel es muy empleado en el análisis electroforético de proteínas. Los geles de poliacrilamida están formados de polímeros más entrecruzados que producen poros más pequeños. Medios Anticonvectivos Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electroforéticas. . En ésta se agrega sulfato de dodecil sodio a la solución amortiguadora que provoca la desnaturalización de las proteínas. Una variante de la técnica PAGE es la PAGE-SDS. A mediados de los cuarenta fue introducido el uso de geles cuyo comportamiento es superior a los materiales anteriores por su menor tamaño de poro y menor carga superficial.

[1.La electroforesis de interfase móvil o electroforesis libre fue desarrollada por Ame Tiselius en 1937. . La separación completa de los componentes de la mezcla no puede ser alcanzada mediante este tipo de electroforesis. formando una interfase.Enfoque isoeléctrico (IEF). Electroforesis de interfase móvil. Esta técnica utiliza una celda en forma de tubo en U (Figura 11.. sólo el soluto más rápido puede obtenerse en forma pura.2. posteriormente se añade una columna de solución con bufer. . La proteína más rápida se coloca al inicio del patrón de migración en el brazo ascendente y la más lenta al final del brazo descendente de la celda. de la muestra a la zona de bufer.Electroforesis de zona (ZE).7). utilizando el índice de refracción. Al aplicarse el campo eléctrico cada proteína migra. cuya clasificación es difícil. pero que en términos generales se pueden dividir en (Bier et al. 1983): . Este tipo de modificaciones ha dado origen a una amplia gama de técnicas electroforéticas analíticas y preparativas. Cada banda se detecta en función de la velocidad de migración de la proteína particular. La resolución que se puede lograr considerando sólo estos parámetros ha sido mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como el uso de geles porosos que incrementan la separación por filtración o la utilización de gradientes de pH que orientan a las especies de acuerdo a su punto isoeléctrico.Isotacoforesis (ITP). ¡3 y 7. depende de su carga. logrando por primera vez resolver las globulinas sanguíneas en los tipos a. tamaño y forma. Inicialmente se coloca dentro de la celda la solución que contiene la mezcla proteica en el bufer adecuado. . . y de las propiedades del medio. FUNDAMENTOS Modos de la Electroforesis 637 En un proceso electroforético la velocidad de migración de las especies.Electroforesis de interfase móvil (MBE).

7: Representación esquemática de la celda de Tieselius. ELECTROFORESIS Buffer \ Frontera Ascendente Frontera Inicial Frontera Descendente Figura 11. . Electroforesis de interfase móvil.638 CAPÍTULO 11.

Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.8).En la electroforesis de zona descrita al inicio de la sección 11.X del Ánodo 639 Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No. Isotacoforesis. Todos los derechos reservados. Electrolito de Alta Movilidad 1-5 1-4 1-3 1-2\ / 1 No. En los desarrollos recientes la electroforesis de interfase móvil actúa como una celda donde la banda de muestra aplicada es semi-infinita. Este tipo de electroforesis puede ser empleada para resolver mezclas de cargas diferentes.11.. formando una banda finita. En estado estacionario todos los constituyentes se mueven a la misma velocidad.. Tomada de: Ivory. de Componentes Fase No. Para solutos con carga positiva deberá colocarse en el ánodo.9). 1990. Copyright ©1990. en un orden impuesto por sus moví- .2. El resto de la celda se carga con electrolito rápido que permanezca siempre al frente de la migración y permita disminuir la dispersión de la muestra (Figura 11. La colocación de la muestra depende del polo hacia al que va migrar. la muestra es pequeña y diluida.En una separación por isotacoforesis la muestra se inserta entre un electrolito rápido y uno lento (Figura 11. FUNDAMENTOS Compartimiento . entonces es posible lograr la su resolución completa.8: Electroforesis de interfase móvil de cinco componentes iónicos. (antes y después).2. Electroforesis de zona. de tal manera que sólo pueden separarse solutos de igual carga. Figura 11.

10). en la Tabla 11.3 se presentan las principales . Tomada de: Ivory. Todos los derechos reservados. 5 5 Í4l '—' 4 4 HFl '—' 3 3 2 Un '—' 2 \ / m — 1 1 Electrolito de Alta Movilidad Fase No. 1990.3 Equipos Actualmente existe un buen número de equipos para realizar electroforesis a escala preparativa. Figura 11. ELECTROFORESIS Electrolito de Baja Movilidad Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. con la ventaja de que cada banda contiene sólo un tipo de electrolito (el ancho de la banda es una medida de la concentración de la especie en la muestra original). En el medio continuo de pH las moléculas como las proteínas se ordenan conforme a su punto isoeléctrico. Enfoque isoeléctrico.. 11.Cuando la separación electroforética es por medio de enfoque isoeléctrico (IEF) se requiere un gradiente de priven el medio donde se realiza la electroforesis (Figura 11.640 CAPÍTULO 11. lidades. Electrolito de Baja |II 5 Movilidad ¡ Componente No. Copyright ©1990.9: Isotacoforesis de cinco especies iónicas(antes y después). mientras que las otras operaciones son controladas por la velocidad de transporte. El enfoque isoeléctrico es una operación gobernada por el equilibrio. es decir al migrar llegan a un punto donde su carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es nula.

Para evitar el uso de geles se han diseñado equipos donde la electroforesis se realiza en medios líquidos. • Equipos electrocronialográíicos. y donde la longitud característica / del número de Rayleigh se reduce empleando películas delgadas o mediante el uso de membranas. EQUIPOS 641 Ánodo /"p\ ^ ^ f\ \-S Cátodo Ánodo pl: Punto Isoeléctrico Cátodo Figura 11.11. . características de algunos de ellos. Tomada de: Ivory. Otro tipo de equipos combina la electroforesis con la cromatografía para eficientar las separaciones. De manera general los diversos equipos de electroforesis existentes se pueden dividir en tres tipos: • Equipos de flujo libre. Todos los derechos reservados.3. Copyright ©1990. A nivel laboratorio y en algunos equipos a escala preparativa. 1990. Estas técnicas han sido caracterizadas como tediosas y costosas. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. ha sido el uso de geles como medios de soporte.10: Enfoque isoeléctrico de solutos polianfolíticos (antes y después). debido que al finalizar la operación se requiere recortar las regiones de gel donde se localizan las bandas y extraer por electroelución o algún otro método los solutos de interés. la forma que se ha empleado para minimizar el problema de la dispersión de la muestra por convección. • Equipos de flujo libre con recirculación.

5. Introducción 4. P r o t e i n Techs RF3 1990 30.5 cm 50-100 V/cm 3-5 h 100 pg . Colector de fracciones Número de fracciones Proceso de colección Adaptada de: Eby. Copyright ©1991. Precio dU. Estabilización del flujo Rotación Membranas Película Gel 8. 1991. Enfriamiento 14. Si No SI 10 cm 100-300 V/cm 12.642 CAPÍTULO 11. Campo Típico 10. Película con flujo libre Bender y Hobein Elphor VaP 22 1987 80.000 Si No No No No Si Si Si Continua No No Si No Película con flujo libre Hirschmann AGE 710 1986 140. Si 35 Rápido Si 20 Rápido 30 Rápido Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Detector 15. ELECTROFORESIS Tabla 11. Técnicas Electroenfoque SDS-PAGE PAGE A garosa Celes Isotacoforesis Zona Escalón de campo 6. Todos los derecho: reservados.000 Si No No No No Si No No Intermitente Si Si No No Película con recirc. Compañía 2. Variable Si 90 Lento U V / V i s Var. Nombre 3.000 Si No No No No Si No No Intermitente No Si Si No Rectangular 250 mm 2 Rectangular 60 mm 4 cm 100-150 V/cm Anular 627 mm 2 Rectangular 150 mm 2 4 cm 250-375 V/cm 2h \ \ mg-g proteína 5-500 mg/corr. Tipo 1. . Producción típica 13.000 No No No No No No Si No Continua No No Si No Tipo tambor Bio-Rad Rotofor Prep IEF 1987 7. Operación 7.3: Características de algunos equipos de electroforesis. Tamaño típico de la muestra 12.1 g 0. Tiempo de operación típico 11. Dimensión de U celda Geometría Sección transversal Longitud de separación 9.2-500 mg/día Continuo 25 X 10 ceí/mí 500 X 106 ce///» Si 6 Continuo 5 X 10 ceí/mí 100 x 106 ce///i Si 6 Si No U V / V i s .

Película Delgada Los equipos de electroforesis de película delgada han sido estudiados desde los años cincuenta (Hamel y Hunter. En las partes laterales de este arreglo se sitúan los electrodos en forma de placas. el medio no se recircula.3. La estabilización de los flujos se logra empleando distancias pequeñas de migración o estabilización rotacional.11. Electroforesis Anular La electroforesis de flujo libre también se ha conducido en arreglos anulares basados en el diseño de Philpot-Harwell (Figura 11. y son eluídos continuamente por el fondo de la cámara y colectados por medio de una bomba de canal múltiple. Este movimiento permite neutralizar los efectos convectivos radiales.Tipo anular.12). La muestra emigra horizontalmente conforme pasa por la cámara. . La muestra y el bufer son inyectados en la base del anillo y se mueven axialmente hacia el colector múltiple situado en la parte superior. partículas sub-celulares y componentes de membrana. Existen dos arreglos básicos de este tipo de equipo: .Tipo película delgada. . El calor generado es removido por medio de refrigerantes que enfrían las paredes laterales. Los solutos forman bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforáticas. En tales sistemas se inyecta una corriente continua y puntual de muestra sobre una película de bufer que se mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Figura 11. mientras que el exterior gira a velocidades hasta de 150 rpm. EQUIPOS 643 11. Uno de los usos principales de este tipo de equipos es en la separación de células y virus. En estos sistemas el cilindro interno es fijo y funciona como cátodo.11).1 Equipos de Flujo Libre En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan recirculación.3. 1990).

Todos los derechos reservados. Tomada de: Gobie y Ivory.11: Esquema de un equipo de electroforesis de flujo continuo en una celda de electroforesis. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright ©1986. 1986.644 CAPÍTULO 11. . ELECTROFORESIS z (lateral) ' y (transversal) x (axial) Alimentación Buffer Electrodos Figura 11.

1990. .11. Tomada de: Hamel y Hunter. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society.3.12: Esquema de un equipo de flujo libre en un arreglo anular. EQUIPOS 645 Fracciones Recuperadas Anillos colectores de fracciones Campo eléctrico transverso Anillo de carga de muestras Entrada del Buffer Figura 11. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

.Los equipos de película delgada con recirculación. Este tipo de equipo es operado con gradientes de pH. Cada cámar posee un'a posición para alimentar la muestra y una para descargar!. . A) Entrada y salida de refrigerante B) Ánodo C) Cámara de electroenfoque D) Cátodo E) Brazo de enfriamiento F) Venteo G) Cubierta. . de tal maner que la operación es conocida como enfoque isoeléctrico con recircí lación (RIEF de sus siglas en inglés). lo cual se efectúa por medio de vacío.13) consta de una cámara cilíndric dividida en 20 compartimientos por medio de 19 discos de membrana de poliéster. Existen diferentes tipos de arreglos para estos equipos como: .3.La celda tipo tambor. y gira a 1 j-pni. ELECTROFORESIS Figura 11. La rotación de la cámara y la membranas permiten enfocar apropiadamente las zonas. BioRad 11. con poros de 10 /i.Los equipos de película delgada con recirculación desplazada.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación En los equipos de flujo libre con recirculación el medio líquido donde se efectúa la electroforesis se recircula continuamente.13: Celda de electroforesis tipo tambor rotatorio.646 CAPÍTULO 11. Celda Tipo Tambor La celda tipo tambor (Figura 11.

11. y en dirección contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la recirculación. cuando este desplazamiento sea lo suficientemente grande. Típicamente una separación se realiza después de cientos de ciclos en aproximadamente dos horas. En este arreglo la solución que va a fraccionarse es recirculada continuamente entre la celda de canales múltiples donde se realiza la electroforesis y un intercambiador de calor de canales múltiples. La operación se efectúa utilizando un gradiente de pH sobre la cámara y sólo el 6% de la muestra permanece en la cámara en un tiempo dado. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de cerámica por el cual fluye el líquido de enfriamiento por el interior del tambor. 11. En este sistema la muestra es inyectada continuamente en un canal de la celda y reinyectada en forma desplazada.3 Equipos Electrocromatográficos Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la electroforesis son los sistemas que utilizan medios con partículas como las . de tal manera que su migración neta es alterada. Película Delgada con Recirculación Una variante de los equipos de enfoque isoeléctrico con recirculación separa físicamente las funciones de enfriamiento y estabilización del fluido (Figura 11. Los solutos más lentos tenderán a migrar en el sentido del desplazamiento de la alimentación. EQUIPOS 647 El campo eléctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los extremos de la cámara.15).3.14). El flujo en la celda es laminar ya que está dividida por membranas formando canales de flujo muy delgados.3. es la electroforesis en película delgada con recirculación desplazada. Película Delgada con Recirculación Desplazada Una variante del arreglo físico anterior empleado en electroforesis de zona (Figura 11.

1) Bomba 2) Celda de enfoque 3) Intercambiado! 1 4) Monitor de pH 5) Monitor UV 6) Control de la bomba 7) Interfase de datos 8) Centro de carga 9) Control UV Adaptado de: Bier. . 1986.648 CAPÍTULO U.14: Esquema de un equipo electroforético con recirculación. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Copyright ©1986. ELECTROFORESIS Figura 11. Todos los derechos reservados.

y se desarrolla en una columna empacada de cromatografía por pxclusión. que presenta dos secciones de diferente resolución (Figura 11. La parte superior de la columna se empaca .11. El campo es aplicado axialmente.15: Esquema de un equipo electroforético de película delgada con recirculación desplazada. y se eluye mientras el lecho rota. Todos los derechos reservados. Su desarrollo actual es a nivel de prototipos y se pueden mencionar dos tipos: . Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.16). EQUIPOS 649 Alimentación uuuuuu Purga Componente de Baja Movilidad Sección de cambio Componente de Alta Movilidad Figura 11. la muestra se alimenta en forma continua en un punto de un lecho anular. Electrocromatografía Anular Rotativa Continua En los equipos de electrocromatografía anular rotativa continua (CRAE de sus siglas en inglés) (Figura 11. . Electrocromatografía de Efectos Opuestos En la electroforesis cromatográfica de efectos opuestos (CACE de sus siglas en inglés).Los equipos de electrocromatografía de efectos opuestos.17).Los equipos de Electrocromatografía anular rotativa continua. usadas en cromatografía.3. Copyright ©1990. 1990. Tomada de: Ivory. el campo eléctrico es antiparalelo al movimiento convectivo forzado.

. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society.650 CA PíTVLO 11. Tomada de: Hamel y Hunter.16: Esquema de un equipo de electrocromatografía anular rotativa continua. ELECTROFORESIS Alimentación Multicomponente V= reo Figura 11. Copyright ©1990. 1990.

. pero su productividad está limitada por el calentamiento y la caída de presión. Tomada de: Hamel y Hunter. EQUIPOS 651 Compartimiento del Buffer Anión ico Tapón de Poliacrilamida Entrada del Bufler acarreador Lecho de Gel de Exclusión Zona de Acumulación del producto • Flujo del Buffer Migración Electroforética Movimiento í i Lecho de Gel de Inclusión Tapón de Poliacrilamida WW - ^ Salida del Buffer acarreador Compartimiento del Buffer Catiónico Figura 11. mientras que los contaminantes salen por alguno de los extremos. Este arreglo produce separaciones de alta pureza y concentración. Copyright ©1990.17: Electrocromatografía de efectos opuestos. el soluto de interés puede tener un movimiento neto siempre hacia el centro de la columna y acumularse en esa región. con gel excluyente del soluto de interés y la parte inferior con gel incluyente. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1990. Con un manejo adecuado de la intensidad del campo. de tal manera que éste se mueva más rápidamente en la parte superior. Todos los derechos reservados.1L3.

652

CAPÍTULO U.

ELECTROFORESiS

11.4

Diseño

El tratamiento de la electroforesis al igual que las columnas cromatográficas puede ser abordado empleando: • La teoría de platos. • La teoría cinética.

11.4.1

Teoría de Platos

La teoría de platos es útil para comparar el comportamiento de un mismo equipo para diferentes aplicaciones, y entre la misma aplicación en equipos diferentes. Como se estableció anteriormente la desviación estándar en equipos electroforéticos cuya principal causa de dispersión es la difusión molecular está dada por: (11.25) donde: D: Dispersión axial. [L2/t]. t: Tiempo. [i\. a: Desviación estándar. [L]. La ecuación (11.25) se puede expresar en términos de parámetros electroforéticos introduciendo la expresión: u = rnE = m — donde: v: Velocidad del soluto. [L/t]. m: movilidad. [L2/ Voltio — t}. E: Campo. [Voltio/ L}. (11.26)

11.4. DISEÑO V: Voltaje. [Voltio]. L: Longitud de la celda. [L] dimensionalmente: t=-

653

v

(11.27)

entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para obtener:

De acuerdo a la teoría de platos, la eficiencia de la separación puede definirse como la dispersión por unidad de longitud,
2

~ LJ Las ecuaciones (11.28) y (11.29) conducen a:

(11.29)

1DL HETP=—— mV
como:

(11.30)

L = (HETP)(N)
entonces

(11.31)

(11-32) De estos resultados es importante notar que TV es independiente de L. Asimismo, /V puede incrementarse aumentando V. Por otro lado, HETP aumenta al aumentar L. Esto implica que las distancias cortas de migración son las más eficientes para la separación. La resolución de dos componentes del sistema cuando su coeficiente de dispersión es el mismo está dado por (Rudge y Ladisch, 1986):

R=4 V 2D

654

CAPÍTULO 11. ELECTROFORESIS
donde mi y m<¿ son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente

y:'
771 =

mi + m 2 2

De acuerdo a la expresión (11.33) el voltaje incrementa la resolución. Ejemplo 11.3.- Resolución de una mezcla de proteínas. Se desea separar dos enzimas mediante una electroforesis en gel a 4°C. El coeficiente de dispersión axial es de 2 x 10~7 cm2/s. La movilidad es de 3.38 x 1(T5 cm?/V - s y 1.33 x 10~5 crn2/V - s, respectivamente. Para realizar la separación se utiliza una celda de 2 cm donde se aplica un campo de 1.8 V/cm por un lapso de 7.5 h. Se pide estimar: a) La distancia que viaja cada soluto. b) La eficiencia de la separación de cada soluto. c) La resolución de la separación. Solución: a).- La distancia puede ser calculada mediante la expresión

L = vt — mEt
de tal manera que:

= 3.38 x 10~5 -f^— x 1.8 — x 7.5 h x V —s cm
=
1.64 cm

cm

V

.

3600 s

y,
¿2 =

1.33 x 10-* .,cm' x 1.8 -ü x 7.5 h x V — cm cm

L2

= 0.64 cm

11.4. DISEÑO La separación entre los solutos es:
LI — Z/2 = 1 era

655

b).- De acuerdo a la ecuación (11.30),

HETP = (HETPh
(HETP)i

mE
2 (2 x 10~7 22!)

=

3.38 x 10-5 gal x U

= 6.57 x 1(T3 era
2 (2 x 10-7 ss¿\ 2 i/ 1.33 x io-5 ^ x 1.8 £

(HETP)2 (HETP)2

= =

1.67 x 10~2 era

c) Utilizando la ecuación (11.33) se puede calcular la resolución. Primero es necesario calcular la movilidad promedio,
I | I j
ífe,

ra

_ _
m

4 ¥

i

=

mi + = 2 (3.38 + 1.33) x 10-5 &£.
¿J

2

-

2

ra = 2.334 x 1(T5 ^~V —s de tal manera que, 1 /2.334 x 10~5 ^ x 1.8 ^7 x 2cra
4 \ 2 x 2 x 10-7 '

(3.38- 1.33) x 10-5 f^-2

2.334 x 10-5

R = 3.18

656

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESIS

11.4.2

Teoría Cinética

En un proceso electroforético la velocidad de migración depende de la carga, tamaño y forma de la partícula de interés, así como de las propiedades del medio. La resolución puede ser incrementada mediante gradientes de pH, filtración molecular, o modificaciones del flujo. Esto a dado origen a una diversidad de procedimientos para optimizar las separaciones electroforéticas. Actualmente se cuenta con un teoría unificada para tratar los diversos modos electroforéticos (ZE, MB, ITF e IEF) (Bier ti a/, 1983), lo cual demuestra que las ecuaciones que rigen estos procesos son idénticas. Las diferencias aparentes surgen de las diferentes condiciones iniciales y de frontera de cada caso. A continuación se presentan algunos modelos particulares.
Película Delgada con Alimentación Continua

En el caso de la electroforesis en película delgada con alimentación continua, el soluto está sujeto a fuerzas difusivas, convectivas y electroosmóticas, que determinan su patrón de elución. En estado estacionario y para E constante, el balance de masa de soluto en este tipo de arreglos es:
de de de
d^c

donde vx es la velocidad parabólica axial y vz es la velocidad osmótica lateral. S0(x) es un término que describe la distribución del flujo de soluto inyectado. La ecuación (11.34) es una ecuación difusiva, convectiva tridimensional, cuya forma más sencilla es su solución asintótica (Gobie y Ivory, 1986).
Electrocromatografía

En el caso de electrocromatografía en columna si se supone que mE es independiente de la concentración, en ausencia de electroósmosis el modelo empleado es:

11.5. SUMARIO

657

rearreglando,

01.36)
donde R es la acumulación de soluto en la fase sólida y vx es la velocidad del flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones a la ecuación de diseño de las columnas cromatográficas, pueden ser aplicadas a la electrocromatografía, sustituyendo vx por vx -f mE.

11.5

Sumario

La electroforesis es una operación que permite la purificación de solutos por la acción de un campo eléctrico. Uno de los problemas que se presenta normalmente en las operaciones electrofcréticas es la dispersión que sufre la muestra conforme la operación se desarrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrollado diversas formas y medios para efectuar la operación, lo cual se ha traducido en una variedad de equipos disponibles a escala preparativa. El diseño de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfoques similares a los utilizados en cromatografía de columna, y actualmente su desarrollo es incipiente y basado fuertemente en las pruebas de laboratorio.

658

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORES1S

11.6

Problemas

11.1.- La movilidad relativa de /2-galactosidasa respecto a la de citocromo c en un gel de PAGE-SDS es de 0.2, mientras que la de actina es de 0.6. Los pesos moleculares de estas proteínas son de 130,000 para la /3-galactosidasa y de 45,000 para la actina (Condeelis, 1977). Estimar la movilidad relativa de ASB (albúmina de suero de bovino) en el mismo gel si su peso molecular es de 68,000. Resp. 0.42 11.2 La electroforesis capilar de alta resolución (HPCE) es una poderosa técnica analítica que maneja muestras menores de 1 ¡j,g (Frenz y Hancok, 1991). Estimar el número de platos de una columna de HPCE donde la movilidad del soluto es de 10~8 m 2 /V — s, el voltaje aplicado es de 30 KV y el coeficiente de dispersión de 10~10 m2/s. Resp. 1.5 x 106 platos. 11.3.- Se desea separar dos proteínas en una celda electroforética aplicando un gradiente de potencial de 1.2 V/cm. Bajo las condiciones de la electroforesis la movilidad de las proteínas es de —1.2 x 10~4 y 2.1 x 10~4 cm2/V — 5, respectivamente. Estimar el tiempo de separación de estas proteínas si inicialmente se colocan formando una banda de 0.4 cm de espesor. Resp. 0.51 h 11.4.- La movilidad electroforética de las células de glóbulos rojos humanos es independiente de las razas, edad, sexo y varios otros factores. Esta propiedad permite tomar a este tipo de células como un patrón electroforético (Brinton y Lauffer, 1959). Estimar la movilidad de glóbulos rojos en un medio M/15 de fosfatos a pH=7.4, si la viscosidad del medio puede tomarse como la del agua, el potencial Z es de 0.0168 Voltios y la constante dieléctrica es de 9.8 x 10~9 coulombio'2/N - m2. Resp. 1.31 (¿m — cm/V — s

11.7. BIBLIOGRAFÍA

659

11.7

Bibliografía

Bier, M. 1986. Scale-Up isoelectric focusing. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds). ACS Symposium Series 314. ACS. Washington, D.C. 13, 185-192. Bier, M., Palusinski, O.A., Mosher, R.A. y Saville, D.A. 1983. Electrophoresis: Mathematical modeling and computer simulation. Science. 219, 4590, 1281-1286. Bird, R.B., Stewart, W.E. y E.N. Lightfoot. 1964. Fenómenos de Transporte. Reverte. Barcelona. 2, 25-28. Brinton, C.C. y Lauffer, M.A. 1959. The electrophoresis of virues, bacteria, and cells, and the microscope methods of electrophoresis. En: Electrophoresis: Theory, Methods, and Applications. Bier, M. (Ed.). Academic Press. New York. 10, 427-492. Castellan, G.W. 1971. Fisicoquímica. Fondo Educativo Interamericano. México. 18,430-431. Condeelis, J.S. 1977. A sodium dodecil sulfate microgel-electrophoresis technique suitable for routine laboratory analysis. Analytical Biochemistry. 77, 195-207. Eby, M.J. 1991. Prep-phoresis: A wealth of novel possibilities. Bio/Tech 9, 528-530. Frenz, J. y Hancok.,, W.S. 1991. High performance capillary electrophoresis. Tibtech. 9, 243-250. Gobie, W.A. y Ivory, C.F. 1986. High-resolution, high-yield continuous-flow electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds). ACS Symposium Series 314. ACS. Washington, D.C. 12, 169-184. Hamel, J.P. y Hunter, J.B. 1990. Modeling and applications of downstream processing. En: Downstream Processing and Bioseparations. Hamel, J.P., Hunter, J.B. y Skidar, S.K. (Eds.). ACS Symposium Series 419. ACS. Washington, D.C. 1, 1-35.

660

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESlS

Horstmann, B.J. y Chase, H.A. 1989. Modelling the affinity adsorption of inmunoglobulin G to protein A inmobilised to agarose matrices. Chem. Eng. Res. Des. 67, 243-254. Ivory, C.F. 1990. Electrically driven separation processes: Analytical and preparative methods. En: Separation Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker. New York. 16, 517-567. Lehninger, A.L. 1989. Bioquímica. 2 ed. Omega. Barcelona, España. 7, 131-132. Rudge, S.R. y Ladisch, M.R. 1986. Process considerations for scaleup of liquid chromatography and electrophoresis. En: Separation, Recovery and Purification in Biotechnology. Asenjo J.A. y Hong, J. (Eds.). ACS Symposium Series 314. ACS Washington, D.C. 10, 122-152.

Parte V Operaciones de Acabado

663

Las operaciones finales en un proceso de bioseparación son las operaciones de acabado del producto. Estas operaciones permiten incrementar la pureza del producto, facilitar su manejo y mejorar su apariencia. En esta parte, se revisan dos de las operaciones de acabado más utilizadas en los procesos biotecnológicos. En el capítulo 12, se trata la operación de cristalización que es muy empleada tanto en la obtención de productos biotecnológicos tradicionales como los antibióticos, como en la obtención de productos provenientes de la tecnología del r-DNA como las proteínas terapéuticas. En el capítulo 13 se presenta la operación de secado la cual se utiliza como fase terminal de los procesos de cristalización, o bien para el secado de caldos en la producción masiva de algunos productos.

Capítulo 12 Cristalización
12.1 Introducción

La operación de cristalización consiste en separar un soluto de una solución mediante la formación de cristales de éste en el seno de la solución. Una vez formados los cristales se separan de la solución obteniéndose el soluto con un alto grado de pureza. Durante el proceso de cristalización los cristales deben formarse primero y luego crecer. Al fenómeno de formación de pequeños cristales se le llama nucleación y a la formación capa por capa del cristal se le llama crecimiento. La sobresaturación es la fuerza impulsora tanto de la nucleación como del crecimiento de los cristales. Si la solución sólo está saturada los cristales no se transforman ni crecen, mientras que si está subsaturada éstos tienden a disolverse. La cristalización es ampliamente utilizada a nivel industrial para recuperar sales como cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de soluciones acuosas. Algunas sustancias orgánicas como la sacarosa y la glucosa también son obtenidas mediante procesos que involucran una operación de cristalización. Varios productos biotecnológicos de uso masivo como algunos antibióticos y ácidos orgánicos, así como algunos productos terapéuticos, son comercializados en forma de cristales. Esta diversidad de procesos se traduce en una gran variabilidad en la capacidad de los cristalizadores
665

666

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

industriales que oscila de gramos a cientos de toneladas por día. La cristalización es una operación ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicos debido a que ofrece las siguientes ventajas: - Se puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de hasta un 99 %. - Se puede controlar la cristalización de tal manera que se produzcan cristales uniformes que faciliten su manejo, empaque y almacenamiento. - La cristalización mejora la apariencia del producto para su comercialización. - Es una operación que puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas. Frecuentemente la operación de cristalización va acompañada de un lavado de los cristales en un equipo de separación sólido-líquido y de un secado final, en un arreglo como el mostrado en la Figura 12.1. El diseño apropiado del cristalizador es esencial en el funcionamiento de todo el arreglo anterior debido a que el tamaño de los cristales y la concentración de estos en la solución de salida, son determinados en gran medida en la operación de cristalización; a su vez estos parámetros determinan el diseño del separador sólido-líquido y del secador. La cristalización es en gran medida un arte mas que una ciencia; sin embargo, el conocimiento actual de los mecanismos de formación y crecimiento de los cristales, y de la fuerza impulsora de éstos, la sobresaturación, permite abordar el crecimiento de cristales de una manera más científica. La estrategia para el diseño de cristalizadores comprende el establecimiento de las relaciones de equilibrio, la forma de operar del cristalizador (el método para generar la sobresaturación) y el estilo de cristalizador que se va emplear. Una vez obtenido el diseño conceptual del cristalizador, el problema de diseño restante consiste en determinar el diseño funcional que permita satisfacer los requerimientos de tamaño de cristal mediante el estudio cinético del sistema (Figura 12.2).

12.1.

INTRODUCCIÓN

667

Alimentación -

Solvente de lavado

Fase

-soiwnt*

., .. H-Soluto disiMlto liquida 1-impur.as

Solvente

Producto seco

Figura 12.1: Esquema de un sistema de cristalización. Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados.

668

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

Equilibrio - Selección del solventa - Sobresaturación

Modos de Operación - Generación de sobresaturación -Presión - Temperatura - Composición

Tipo de Cristalizador - Flujo de vapor - Presión de operación -Tratamiento déla suspensión -Tamaño del producto

Cinética Diseño Funcional -Diámetro •Tiempo de residencia -Velocidad de circulación -Materiales -Equipo auxiliar

Figura 12.2: Estrategia de diseño de un cristalizador. Adaptada de Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derecho reservados.

2.2. FUNDAMENTOS

669

Para abordar los aspectos relacionados con la cristalización en la ección 12.2 de este capítulo se revisan los fundamentos de la cristaliación: el equilibrio, los modos como se puede efectuar una operación le cristalización y la cinética de la cristalización. En la sección 12.3 e describen los equipos de cristalización más empleados. El diseño de :ristalizadores se presenta en la sección 12.4.

12.2

Fundamentos

Para evaluar el uso de la cristalización como alternativa para la purificación de un producto es necesario contar con determinada información básica relacionada con el producto y sus soluciones como: • Tipo de cristales que forma el producto. • Pureza de los cristales que forma el producto. • Equilibrio: Solubilidad y sobresaturación de soluciones del soluto en agua u otro solvente. • Modos de operación posibles para generar la sobresaturación de la solución del soluto. • Cinética: Velocidad con que se originan (nucleación) y crecen los cristales en la solución. • Distribución de tamaños en poblaciones de los cristales.

12.2.1

Tipos de Cristales

Un cristal es un sólido compuesto por átomos, iones o moléculas dispuestos en un arreglo tridimensional ordenado y periódico, o retícula espacial. La distancia entre los átomos del cristal de cualquier material es constante y característica de dicho material. Los ángulos entre las caras de los cristales también son característicos y dan origen a cinco tipos básicos de cristales y a siete sistemas cristalográficos. En el

los cristales en forma de disco son difíciles de lavar durante su centrifugación y difíciles de filtrar. el sistema cristalográfico cúbico. de acuerdo a la siguiente ecuación: ^=fi donde: ( 12J ) masa de soluto A en el producto masa de soluto A en la f a s e liquida de manera similar para la impureza B.2 Pureza de los Cristales La mayoría de las soluciones cuando forman cristales a velocidades de crecimiento moderadas y a condiciones constantes. Las impurezas de los cristales generalmente son debidas al atrapamiento de líquido en el cristal en pequeñas bolsas u oclusiones. 12. . ancho y alto) como los tres ángulos característicos son iguales. CRISTALIZACIÓN sistema más sencillo. normalmente después de la separación de los cristales de la solución.8 %. triclínico y trigonal.670 CAPÍTULO 12. Desde el punto de vista industrial el término "habitat del cristal" se refiere a los tamaños relativos de las caras del cristal. ortorrómbico. lo que hace necesario lavar los cristales. los cristales formados sólo contienen un componente alcanzado purezas hasta de 99. tanto las distancias características (largo. El habitat de un cristal es de gran importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fácilmente durante su centrifugación y secado. > masa de impureza B en el producto masa de impureza B en la fase liquida no (12. Los cristales esféricos son los más fáciles de manejar. La separación alcanzada en una cristalización puede ser caracterizada mediante la distribucción del soluto y las impurezas entre las fases. Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento originando los sistemas tetragonal. parte de la solución queda adherida a la superficie del cristal.2. hexagonal monoclínico. Además de este tipo de impureza.

Determinar la recuperación máxima posible de la operación.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación Solubilidad Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalización se presentan en forma de curvas de solubilidad (Figura 12. Las curvas de solubilidad representan la solubilidad de soluciones saturadas a diferentes temperaturas. El factor de cristalización E (análogo al factor de extracción) depende de la naturaleza del sistema solvente-solutoimpurezas. 12. .Seleccionar el solvente.2.12.Determinar si el sólido que se cristaliza sólo contiene el soluto de interés. . .Establecer el rango de temperatura y presión de operación. La saturación es resultado del equilibrio entre la fase sólida y la fase líquida.3 se pueden describir algunos comportamientos generales de la solubilidad de las sustancias en función de la temperatura.Conocer la concentración del líquido de salida del cristalizador.2. Los datos experimentales de equilibrio sirven de base para la evaluación de las diversas opciones que existen para llevar a cabo un proceso de cristalización ya que permiten entre otras cosas: . . . y consecuencia de la igualación de sus potenciales químicos. Con ayuda de la Figura 12. de las condiciones de temperatura y presión a las que se realice la cristalización. y del grado de saturación (sobresaturación) con que se realice la operación. Esta solubilidad es la máxima que puede alcanzar la solución en forma termodinámicamente estable. FUNDAMENTOS 671 El grado de separación o selectividad del proceso es más efectivo conforme (3 aumenta.3). En estas curvas la solubilidad se expresa comúnmente en porciento de peso de soluto a peso de solvente.

Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. CRISTALIZACIÓN 150 h Glutamato Monosódico % peso Acido Adípico 90 Temperatura °C Figura 12.3: Curva de solubilidad. 1988.672 CAPÍTULO 12. Todos los derech reservados. Copyright ©1988. Tomada de: Belter ti al. .

1991) en agua en el rango de 35 .. FUNDAMENTOS 673 . A//^: Entalpia de fusión en el punto de fusión.1. La solubilidad de 1-serina también fue obtenida a partir de la teoría de las soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe similitud química entre el soluto y el solvente.Solubilidad de 1-serina. Se determinó la solubilidad de 1-serina (Charmolue y Rousseau. . . Tm: Temperatura de fusión en grados Kelvin.12. Ejemplo 12. Los datos experimentales se ajustaron a la recta dada por: S= 146.50°(7.Otras sustancias como el ácido fumárico muestran un incremento moderado en solubilidad con respecto a la temperatura.834 T donde T es la temperatura en grados centígrados y S es la solubilidad de la 1-serina en g/lOOO g de agua. pero no es factible obtener cristales de hexametilentetramina por este mismo método.13 + 80.Existen sustancias como la hexametilentetramina cuya solubilidad no varía apreciablemente con la temperatura. Fracción mol de soluto en la saturación. El conocimiento del comportamiento de la solubilidad de una sustancia es básico en la selección del modo para realizar su cristalización: Es factible obtener cristales de ácido adípico por enfriamiento de una solución de éste.Algunas sustancias como el ácido adípico y el glutamato monosódico muestran una gran dependencia de su solubilidad con la temperatura. . y se expresa como: donde: X>2'.2.

987 g—mol—°J\ ¡ OK n ~X~2 ~ x 501°/\ \N f ~ ' ) I/sol ""-1 7 .674 CAPÍTULO 12.1)] . . Solución: Sustituyendo valores en la ecuación de las soluciones ideales se tiene: i A 1 4.25 (^ . CRISTALIZACIÓN T: Temperatura en grados Kelvin. X2 donde MI= 18 y M2=105.1..82 cal/g-mol.89 combinando ambas expresiones. la solubilidad teórica de la 1-serina es: O — 5. Para 1-serina la temperatura de fusión Tm es de 501° K y la entalpia de fusión A//^ se ha estimado en 4. son los pesos moleculares del agua y la 1-serina . respectivamente.230.230.838. con estos valores la expresión anterior puede ser escrita como: 5-5.4 se muestra una comparación de los datos experimentales de solubilidad de 1-serina con los que predice la teoría de las soluciones ideales.89 exp [4.82-^-7 ' g—mol ca 1.1 En la Figura 12. \ \ de tal manera que: A 2 = exp La solubilidad S en g/1000 g de agua puede obtenerse mediante la expresión: S = (M /1000A / >\-ñ. A partir de la informacin anterior comparar los resultados experimentales con los derivados de la teoría de las soluciones ideales para 1-serina.838.

. actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solución puede contener más soluto que el correspondiente a la saturación. donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales ya existentes (sembrados o formados por nucleación) pero no forma cristales nuevos o núcleos. Todos los derechos reservados.La región metaestable. Rousseau.5) separa dos regiones: la región de subsaturación donde una solución es capaz de disolver más soluto a las condiciones dadas.12. FUNDAMENTOS 675 Temperatura *C Figura 12.2. Estos estudios han conducido a dividir la región de sobresaturación en tres zonas cuya delimitación no es muy precisa. El comportamiento de las soluciones en la región de sobresaturación fue descrito por H. Miers a fines de los años veinte. La curva de solubilidad (Figura 12. Tomada de: Charmolue y Reproducida con el permiso del American Institute of Chemical Engineers. Copyright ©AIChE Sobresaturación Pudiera pensarse que una solución con una concentración de soluto mayor a la de saturación forma inmediatamente cristales pequeños o núcleos. .A. formando lo que se conoce como solución sobresaturada. Sin embargo. El estudio del fenómeno de sobresaturación es fundamental en el diseño de cristalizadores. y la región de sobresaturación. 1991.4: Solubilidad de 1-serina. 1991.

donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales existentes y forma nuevos cristales o núcleos .La región intermedia.5: Zonas de sobresaturación. En el caso de una operación intermitente. . el grado de sobresaturación se mantiene en la región metaestable. CRISTALIZACIÓN Región sobresaturada Región subsaturada Peso de soluto Solubilidad Región de operación intermitente Región de operación continua Temperatura Figura 12. donde la formación de cristales nuevos o núcleo ocurre en forma espontanea a partir de una solución que no contiene cristales o semillas. los limites de estas tres zonas se controlan no sólo por el equilibrio. de tal manera que la sobresaturación generada sirva para el crecimiento de los cristales ya existentes (sembrados) y no exista formación de cristales nuevos.La región lábil. sino también por los parámetros del proceso como el grado de agitación. A diferencia de la solubilidad de equilibrio. . con el propósito de lograr un tamaño de cristal lo más uniforme posible. .676 CAPÍTULO 12. El conocimiento de la región de sobresaturación permite determinar regiones de operación. a) Metaestable b) Intermedia c) Lábil.

2. .6) son los siguientes: . Los principales modos para generar la sobresaturación (Figura 12. el enfriamiento de la solución a tratar permite la formación de cristales con altos rendimientos y bajo consumo energético. Esto se logra utilizando un lecho fluidizado de cristales. 12. . FUNDAMENTOS 677 En una cristalización continua la sobresaturación debe ser mantenida en el limite inferior de la región intermedia. La selección del modo de operación está fuertemente influenciada por las características de la solubilidad en equilibrio del sistema. de tal manera que el número de cristales que se retiran en la corriente de salida sea igual al número de cristales generados por nucleación.12. Una vez que se ha seleccionado el modo de operación del cristalizador es posible desarrollar los balances de masa y energía del sistema.Sobresaturación por enfriamiento evaporativo.4 Selección del Modo de Operación El modo de operación en una cristalización es la técnica empleada para generar la sobresaturación de la solución. o directamente utilizando un líquido refrigerante inmiscible con la solución y con propiedades termodinámicas que minimicen el trabajo de compresión necesario. Este enfriamiento puede realizarse en forma externa mediante un intercambiador.Sobresaturación por enfiamiento.2. . En este tipo de operación la evaporación de solvente es mínima.Sobresaturación por evaporación térmica al vacío. Además es necesario proveer un mecanismo de clasificación de cristales. el cual proporciona una área adecuada para remover la sobresaturación mediante el crecimiento de los cristales.Sobresaturación por evaporación térmica. Sobresaturación por Enfriamiento Cuando la solubilidad del soluto varía sensiblemente con la temperatura. . de tal manera que sólo se retiren cristales de un mismo tamaño.

Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.6: Modos para generar sobresaturación. I Refrigerante r j V — ^ .678 CAPÍTULO 12. Copyright ©1987. 1987. CRISTALIZACIÓN i k » V t ( f~ — 1 n— 1 —-V. A) Enfriamiento B) Enfriamiento evaporativo C) Evaporacin térmica D) Evaporación térmica al vacío. Adaptada de: Moyers y Rousseau. Todos los derechos reservados.Vacio Alimentación -»• V Y Refrigerante Producto y < / * \ Alimentación / ( i Cond«nsado 1 «_ V/ / \ f k. • Alimentación Vapor Producto Figura 12. .

2. FUNDAMENTOS Sobresaturación por Enfriamiento Evaporativo 679 En este modo el enfriamiento se produce con auxilio de un sistema de vacío. Nucleación La velocidad de nucleación afecta el tamaño que los cristales pueden alcanzar en un cristalizador intermitente. y el crecimiento de éstos. Sobresaturación por Evaporación Térmica al Vacío En este modo la alimentación tiene una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador y al entrar se enfría adiabáticamente. Este modo se emplea sólo cuando la solubilidad del soluto es insensible a la temperatura. Paralelamente se transfiere calor al sistema para evaporar solvente con auxilio de un sistema de vacío.2. Sobresaturación por Evaporación Térmica En este modo se transfiere calor al sistema para evaporar solvente y generar la formación de cristales por "salting out". Este modo también es aplicable cuando la solubilidad del soluto es muy sensible a la temperatura. La alimentación entra a una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador enfriándose adiabáticamente dentro de éste.12. Conforme mayor sea la velocidad de nucleación menor es el tamaño de los cristales obtenidos.5 Cinética de la Cristalización Los fenómenos cinéticos asociados a la cristalización son la nucleación o formación de cristales nuevos. En el caso de una cristalización continua el aumento de la velocidad de nucleación se traduce en un mayor tiempo de residencia de los cristales. Existen dos mecanismos de formación de cristales: . La fuerza impulsora de ambos fenómenos es la sobresaturación. Este modo es empleado para la cristalización de solutos cuya solubilidad tiene una dependencia intermedia respecto a la temperatura. A niveles elevados de sobresaturación ambos fenómenos compiten por el soluto disponible. 12.

la velocidad . La mayoría de los cristalizadores operan en la región de baja sobresaturación para que el crecimiento del cristal sea regular y el producto puro. y puede originarse por medio de varios mecanismos: . La velocidad de nucleación es función de la sobresaturación y del mecanismo que la origina. Esto se muestra en la Figura 12. Es la formación de cristales nuevos como resultado de la presencia de cristales ya crecidos de soluto. Por otro lado. En general se observa que la dependencia de la velocidad de nucleación primaria con la sobresaturación es de mayor orden que la de la velocidad de nucleación secundaria. bombas y agitadores. se piensa que el cristal libera pequeños cristales que se formaron durante el proceso de secado y que dan origen a nuevos cristales.680 CAPÍTULO 12. Ante la carencia de una descripción matemática detallada que englobe los diferentes mecanismos de nucleación posibles. En la nucleación primaria el cristal nuevo se origina espontáneamente a partir de la solución sobresaturada (nucleación homogénea) o bien se origina a partir de un material insoluble. los mecanismos para controlar la nucleación secundaria pueden establecerse con relativa facilidad a ese nivel. .7 en forma cualitativa. Cuando la solución sobresaturada fluye sobre la superficie de los cristales se considera que puede despegar segmentos de cristal.Contacto.Esfuerzo cortante.Nucleación primaria. CRISTALIZACIÓN . ya sean impurezas o cristales del mismo material previamente sembrados.Nucleación secundaria. .Sembrado. Consiste en la producción de cristales nuevos mediante el rompimiento de los cristales por choques entre sí o con las diferentes partes del equipo: tanque. que pueden a su vez originar nuevos cristales. . Por tal motivo la nucleación secundaria es la más empleada a nivel industrial. Al colocarse cristales del material en una solución sobresaturada.

.7: Influencia de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación. FUNDAMENTOS 681 Velocidad de nudeación primaria Número Tiempo Velocidad de nudeación secundaria Sobresaturación Figura 12.2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Adaptada de: Moyers y Rousseau.12. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados. 1987.

Crecimiento El crecimiento de cristales es un fenómeno cuya fuerza impulsora también es la sobresaturación. El crecimiento sólo puede ocurrir en la superficie del cristal y las resistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusión del soluto hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integración del soluto a la superficie del cristal. kn: Parámetro empírico. [Núcleos/í. c — c*: Sobresaturación. c: Concentración de soluto en la solución.4) donde: B: Velocidad de nucleación. c*: Concentración de saturación del soluto. CRISTALIZACIÓN de nucleación generalmente se expresa por medio de una correlación empírica de la siguiente forma: dN B= — = kn(c-c*)1 (12.volumen de solvente].682 CAPÍTULO 12. [M/L3]. [M/L3]. [M/L3].5) . [M/L3]. El crecimiento de un cristal es un proceso de adición capa por capa. i: Parámetro empírico. la velocidad de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma empírica como: = KcA(c-c') en la ecuación anterior Kc está dada por: (12.8 se muestra el proceso donde un cristal cúbico ideal crece por adición de pequeños cubos sobre su superficie. En la Figura 12. dado que estas resistencias actúan en serie. N: Número de núcleos por unidad de volumen de solvente.

Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. ks: Velocidad específica de integración del soluto a la superficie del cristal. 1973. t: Tiempo. c — c*: Sobresaturación.8: Crecimiento de un cristal.: Coeficiente transferencia de masa en la película. a diferencia de la expresión de la velocidad de nucleación cuyo orden es variable.2. [t].t]. . JL kL J_ ks (12. [L/t]. Copyright ©1973. Tomada de: Bennett. [L/. [M]. Es importante hacer notar que la expresión de la cinética del crecimiento es de primer orden. [M/L3].12. FUNDAMENTOS 683 Figura 12. [L/t]. Kc: Coeficiente global de transferencia de masa. A: Área del cristal. ki. Todos los derechos reservados. [L2].6) donde: Mc: Masa de un cristal.

En base a lo anterior la ecuación (12. El coeficiente &/. una longitud característica del cristal que sea seleccionada mantendrá un proporción constante con las otras dimensiones. Cuando la velocidad de agitación es alta el término I/&L es el que puede ser despreciado. y puede cambiar dramáticamente durante un proceso de enfriamiento.684 CAPÍTULO 12. es función de algunos parámetros como la agitación y la viscosidad del medio. Uno de los objetivos de la cristalización es producir cristales de tamaño uniforme. Si se supone que el cristal mantiene una similitud geométrica durante su crecimiento. Se puede asociar la velocidad de crecimiento de un cristal expresada en unidades de masa por unidad de tiempo. por tal motivo la velocidad de crecimiento de un cristal generalmente se asocia a una longitud característica medible. Esta longitud puede ser determinada por varios métodos. siendo el más utilizado el del tamizado de los cristales bajo estudio. con su volumen. ki varía ligeramente con la temperatura. De igual manera el área del cristal puede relacionarse con la longitud característica mediante: A = <]>Al2 donde ^ es un factor geométrico de área. (12.9) . partiendo de la siguiente relación conocida: Mc = PcVc (12.8) donde (f>y es un factor geométrico que relaciona la longitud característica / del cristal. respectivamente. con una velocidad expresada en longitud por unidad de tiempo. Por otro lado.6). mientras que k$ generalmente es un función exponencial de ésta.7) donde pc y Vc son la densidad y el volumen de un cristal. mientras que ks no lo es.7) puede ser expresada en función de esta longitud característica de la siguiente manera: Mc = pc(<f>vl3) (12. CRISTALIZACIÓN En sistemas no agitados la velocidad de crecimiento está controlada por la difusión y el término l/ks se cancela de la ecuación (12.

Determinar la longitud característica y los fatores geométricos de volumen y área para: a) Una esfera.Longitud característica y factores geométricos. A = 6L* V = L3 de tal manera que: <Í>A . FUNDAMENTOS 685 Ejemplo 12.2.2.6 tv = 1 /= ¿ .. b) Un cubo.12. Solución: a) El área de la esfera de diámetro d es: A = xd2 el volumen. de tal manera que: V = ~ o b) En el caso de un cubo de lado L.

686 CAPÍTULO 12.13). CRISTALIZACIÓN Se puede combinar la ecuación (12.9) para obtener una expresión de la velocidad del crecimiento de un cristal en función de una longitud característica.11) PcJ \¿$Vj\ ' La ecuación (12.10) o bien. respectivamente. Es decir este tipo de cristales cumplen con la ecuación (12. cuando crecen en una misma solución crecen a una velocidad constante e igual para todos los tamaños de cristal.5) con las ecuaciones (12. (12. Ley Delta L: AL Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un material que son geométricamente similares. Ambos fenómenos dependen de la sobresaturación pero son independiente del tamaño de los cristales ya formados. .13) describen la velocidad de formación y crecimiento de cristales.4) y (12.11) puede escribirse en forma simplificada de la siguiente manera: donde kg es la constante cinética de crecimiento de un cristal. r)(c-c*) UrC/ (12.13) Las ecuaciones (12. cuando la velocidad es medida en función de una longitud característica. La velocidad de crecimiento expresada en función de una longitud característica se simboliza como (7.8) y (12. de tal manera que: G = kg(c-cf) (12.

6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales Para caracterizar una operación de cristalización también es necesario describir la distribución del tamaño de los cristales en una suspensión o "magma". Este tipo de distribución es necesaria para realizar los balances de masa y energía en los cristalizadores. generalmente se describe por medio de una curva de densidad poblacional como la que se muestra en la Figura 12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988.9: Curva de densidad poblacional. . La distribución de tamaños de una población de cristales.2. reservados. Un punto sobre la curva relaciona a ¡i con yVt-.12. La p e n d i e n t e de la curva p e r m i t e obtener la densidad poblacional // q u e es u n a m e d i d a d e l n ú m e r o d e c r i s t a l e s p u r u n i d < t d de v o l u m e n e n un i n t e r v a l o diferencial de l o n g i t u d : es decir. donde lt es una longitud dada de cristal y Nr es el número cíe cristales por unidad de volumen de solvente con una longitud entre O y I i.2. FUNDAMENTOS Número Volumen N¡ Tamaño de cristal. 1988. Adaptada de: Belter et al.9. Todos los derechos 12. I Figura 12.

De acuerdo a la definición de momentos de una distribución.»„ (12. </>AJo . Los casos particulares de interés son: Para k = O. f ck * l n(l)dl (12-15) donde n(l] es la densidad poblacional para el tamaño /. de la longitud total de los cristales de una población. . *> = r~ \yu/ J0 n l dl fln(l)dl () Para k = 1. el momento fraccionario //o representa la fracción del número de cristales de una población que tiene un tamaño entre O y/. el momento fraccionario ^ 2 es 1a fracción que representa la suma del área de los cristales de tamaño entre O y /. mediante los momentos fraccionarios de esta distribución. f oo / 2 2 I n(l)dl . el momento fraccionario ¡JL\ es la fracción que representa la suma de las longitudes de los cristales de tamaño entre O y /.688 CAPÍTULO 12. el momento fraccionario k de la distribución de tamaós de cristales está dado por: n= fllkn(l)dl Jo o . lim A TV dN CRISTALIZACIÓN (12 14 A/^OA/ di ' ' El uso apropiado de la variable densidad de población n permite estimar importantes características de una población de cristales. Para k = 2.18J . del área total de una población de cristales.

12. el momento fraccionario .3.'n ./ 3 — ' c I v Jo f.2 Cristalizadores Continuos Existen tres tipos básicos de cristalizadores continuos: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido (también llamado cristalizador con clasificarión de la suspensión o tipo Oslo).1 Cristalizadores Intermitentes Los cristalizadores intermitentes son tanques agitados con sistemas de vacío y enfriamiento (Figura 12.~ roo n 3 . 12./3 es la fracción que representa la masa de los cristales de tamaño entre O y /. el material cristalizado se retira del cristalizador para lavarse y secarse. de la. pc(l)v J0 I n(l)dl (19 . EQUIPO DE CRISTALIZACIÓN 689 Para k = 3.3 Equipo de Cristalización La selección del tipo de cristalizador está influenciada tanto por el volumen de producción como por el modo de operación seleccionado. masa total de una población de cristales .3. . Al final del ciclo.1Q^j (JZ iy 12..12. El ciclo de la cristalización dura entre 2 y 8 horas.3. p <t> fll3n(l)dl v . La mayoría de los productos biotecnológicos que involucran una cristalización se obtienen en forma intermitente.10). En general los equipos de cristalización pueden operar en dos formas: • Intermitente • Continua.

1988.10: Cristalizador intermitente.690 CAPÍTULO 12. Adaptada de: Bennett. . Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Todos los derechos reservados. CRISTALIZACIÓN Condensador barométrico" Vapor Agua Vapor Eyector de dos etapas Alimentación Agitador de propela Válvula de descarga Figura 12. Copyright ©1988.

El líquido sobresalurado fluye hacia la parte inferior del cristalizador a través de un tubo de bajada y después hacia arriba a través de un lecho fluidizado de cristales que permite una liberación efectiva de la sobresaturación.n í a e n . .3. i i / a d o r al vacío v c i r c u l a c i ó n (orzada de. a i i / a d o r c o n R e m o c i ó n < ! ' • P r o d ^ c í n M e «"íado v S n s p c n s i i > : ! M c / e j ^ . EQ UlPO DE CRISTA LIZA ClON 691 Alimentación Figura 12. ¡¡i--''O < ' < Í ! • • .11: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido. . Copyright ©1988. Cristalizador al Vacío y Circulación Forzada de Magma Í'J c n s t a . Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. m ¡ • > . 1988. M . Adaptada de: Bennett. c u * •: . Los cristales más grandes sedimentan y son retirados por el fondo del cristalizador.12.a i l ' i í i ' u r a í l ' .¡ ¡ h'l ' M S \! ' a. Los cristales más finos pueden ser retirados por la parte superior para incrementar el tamaño de los cristales. La alimentación concentrada y caliente se mezcla con la corriente de recirculación y se bombea a la cámara de evaporación donde el solvente se evapora adiabáticamente con ayuda de un sistema de vacío. Todos los derechos reservados.11) la sobresaturación se produce por evaporación. Cristalizador-Evaporador con Circulación de Líquido En el cristalizador-evaporador con circulación de líquido (Figura 12. i l : f a i ü b i ' 1 ! ! conocido r ( M i ) u c n . i. . .

del solvente produciéndose la sobresaturación. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. a partir de la cual los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el tamaño del cristal. 1988.12: Cristalizador al vacío y circulación forzada de magma . los cristales de mayor tamaño que sedimentan en el fondo del cristalizador son impulsados hacia la región superior donde se efectúa la evaporación y se origina la sobresaturación. La alimentación se mezcla con la corriente de salida del cuerpo principal y se hace pasar por un intercambiador donde se eleva su temperatura entre 2 y 6° C.692 CAPÍTULO 12. apropiado para retener los cristales en crecimiento. mediante un impulsor grande que se mueve a bajas velocidades.13). Cristalizador con Tubo de Tiro y Mampara En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Figura 12. Una mampara externa al tubo de tiro permite formar una zona de sedimentación externa. La suspensión en la superficie del cristalizador libera parte . . Adaptada de: Bennett. No condontabtos CRISTALIZACIÓN Enfrxted* V*p<K I Intercambiado? Figura 12. La alimentación mezclada con la corriente de finos se hace pasar por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del cristalizador. Copyright ©1988.

Sin embargo. existen aún varias limitaciones debido a lo complejo que resulta describir de manera racional la forma como se relacionan los fenómenos de nucleación y crecimiento de cristales. 12. Copyright ©1988. Adaptada de: Bennett.4.12. Todos los derechos reservados. sección se describe como se c o m b i n a n los balances poblacionales de cristales. diseño y optimización. en aplicaciones a situaciones de importancia i n d u s t r i a l . con las variables de operación y la configuración de los cristalizadores. DISEÑO DE CIUSTALIZAUÜItM Figura 12. en el diseño de tres sistemas de interés en c r i s t a l i z a c i ó n : * (Yista. En esta.bzadur c . los balances de masa y los balances de energía.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara.4 Diseño de Cristalizadores Actualmente se han logrado avances importantes en la modelación de cristalizadores para su análisis. 1988. Reproducida con el permiso de Me Gravv Hill Inc.

CRISTALIZACIÓN Q •*• Figura 12.14: Esquema de un cristalizador continuo.4. El cristalizador contiene un volumen V de solvente. El cristalizador es alimentado continuamente con un flujo volumétrico de solvente F¿ que presenta una concentración y A de soluto disuelto por volumen de solvente. En estos balances se supone que los cristales son lo suficientemente numerosos y pequeños. Se supone además en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeración .1 Cristalizador Continuo La Figura 12. 12. Balance Poblacional Los balances poblacionales de cristales consideran que el número de cristales es una cantidad balanceable. La distribución del tamaño de los cristales a la entrada está dada por n^.694 CAPÍTULO 12. Como el cristalizador está perfectamente agitado el flujo volumétrico de solvente a la salida F también está caracterizado por y y n. de tal manera que su distribución de tamaño puede considerarse una función continua de la longitud característica o tamaño del cristal.14 muestra un esquema de un cristalizador continuo perfectamente agitado operando en modo "cristalización por enfriamiento". con una concentración de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribución de tamaño de cristales caracterizada como n.

por lo que: . que está sujeto a las siguientes restricciones: .12. del número de cristales de tamaño en el rango di.] menos [La.Suspensión Mezclada (RPMSM).} lo cual se expresa matemáticamente como: j-t(Vn) = FAnA -Fu. (RPMSM).4.V^^- (12.La ecuación (12.20) ha sido resuelta para un caso p a r t i c u l a r de cristalizador continuo bien agitado llamado: Remoción de Producto Mezclado . Cristalizador Continuo con Remoción de Producto Mezclado .20) La ecuación anterior ha sido resuelta para algunos casos de interés particular como el que se describe a continuación.} es igual a [La velocidad de e n t r a d a de cristales de t a m a ñ o en el rango di en la a l i m e n t ación.} menos [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador salen del rango de tamaño di. DISEÑO DE CRISTALIZADORES (>95 de cristales. velocidad de salida de cristales de tamaño en el rango di del cristalizador.] más [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador entran al rango de tamaño di. El balance poblacional de cristales en el cristalizador continuo considerando sólo los cristales en un rango de tamaño di — l¿ — / i . puede expresarse en palabras como: [La variación con el tiempo..Suspensión Mezclada. al interior del cristalizador.El cristalizador opera en estado estacionario.

entonces.20) con las ecuaciones (12.22) . el último término de la ecuación (12.25) como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador está dado por: r = ¥r entonces la ecuación (12.20) puede expresarse de la siguiente manera: d(nG) dG ^dn fin -~~ = n-¿T + G— = G— oí oí oí oí (12.24) ' .24) se transforma en : 0 (1.23) en base a lo anterior.(12.21) .= O (12. es decir dG aT = ° (12.El volumen es constante.No existe variación del número de cristales por aglomeración o rompimiento. CRISTALIZACIÓN nA=0 (12.26) al r Cuando / es muy pequeña (tiende a cero) la densidad poblacional n(0) se deriva preferentemente de la nucleación de nuevos cristales. Si estas restricciones se aplican la ecuación (12.27) .696 CAPÍTULO 12.25) puede ser expresada como: (12.El crecimiento de cristales al interior del cristalizador sigue la ley de A/.El cristalizador está perfectamente agitado y no existen pérdidas de solvente. G^ + U. . .

„ — /"» "xp i/ ^j _ ~vri ii (12.30) puede ser utilizada para obtener velocidades de nucleación y crecimiento de cristales.La ecuación (12.4.29) n 9 Ifh ^i^.12.oui Como todo modelo la ecuación (12. Los procedimientos para determinar n a partir de los datos que se generan con las técnicas.Diseño de cristalizadores RPMSM. la ecuación (12.30) puede ser utilizada para: .27). varía con cada una de ellas. Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM. presentarán una pendiente m = (—l/Gr) y una ordenada en el origen igual a \n(B°/G).28) puede utilizarse como condición de frontera para la integración de la.28) 71 La ecuación (12. obteniéndose la ecuación: n = n°exp( ~.. Existen varias técnicas para obtener la distribución de tamaño de partículas de una población. El tiempo de residencia en el cristalizador y la pendiente permiten determinar G.= — (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 697 áE fío n(0) = n° = -j|. mediante datos de densidad poblacional obtenidos en un cristalizador RPMSM. ecuación (12. . Dos técnicas son de particular interés: .31) De acuerdo con la ecuación anterior los datos experimentales de Inra vs / ajustados a una linea recta. La ordenada en el origen conjuntamente con el valor de G permiten determinar B°.) \GT ) o bien. Para tal efecto.Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM.30) puede rearreglarse para ser expresarse como: (12.

CRISTALIZACIÓN . el sistema se somete a movimiento mecánico. Una vez que se coloca la muestra en el cilindro superior. Una vez que se ha cribado la muestra es necesario determinar n a partir de los datos de la masa de cristales acumulada en cada malla.698 CAPÍTULO 12. para determinar el tamaño de las mismas mide el cambio de alguna propiedad como difracción de la luz.Los analizadores de mallas consisten en un conjunto de cilindros cortos sin tapa superior y con una malla en el fondo. Analizador de mallas. .6¿) donde: T'. de tal manera que se genere un fenómeno de cribado. Mediante estas determinaciones es posible obtener densidades poblacionales en forma directa o indirecta.El analizador electrónico de partículas.El analizador de malla. bloqueo de luz o conductividad eléctrica. . arreglados verticalmente de mayor a menor tamaño de malla.14) mediante la siguiente expresión: n= A//9C<M3 (\¿. secados y durante su manejo debe evitarse su rompimiento.. dispersión de la luz. Funcionan en seco o en húmedo y proporcionan una distribución acumulativa de peso. lo cual puede realizarse de acuerdo a la ecuación (12. conforme la población de partículas fluye por el sensor. Los cristales del magma bajo estudio requieren cierto tratamiento previo: deben ser filtrados. de tal manera que éste es el parámetro que se correlaciona con las mediciones del instrumento. La dimensión característica que se le asigna a cada partícula es la correspondiente al diámetro de una esfera equivalente al volumen medido. Analizador electrónico de partículas. lavados. dependiendo del equipo. : Fracción de la masa total de cristales retenida en una malla.Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión).. El cambio de tales propiedades es función del volumen de la partícula.El analizador electrónico de partículas.

016 mm de tal manera que mediante la ecuación (12. Entre la malla 14 y la malla 20 los cálculos a realizar son: A/ = 1.335 g/cm3 y el tiempo de residencia de 3. El factor geométrico de volumen <j>v puede considerarse igual a la unidad. Se desea calcular la velocidad de nucleación y crecimiento en una cristalización a partir de una muestra de cristales de urea obtenida en un cristalizador RPMSM.. El denominador contempla la masa de un cristal de tamaño promedio / y el intervalo A/. en la columna (3) la fracción masa acumulada entre mallas y en la columna (4) la abertura de la malla en mm.19 mm-0.32).841 mm 2 / = 1. El numerador de la ecuación (12.1 se presentan los datos del análisis de mallas practicado a la muestra: en la columna (1) el tamaño nominal de la malla. la densidad de la urea es de 1.38 h.3. para lo cual es necesario utilizar la ecuación (12._ 1. donde la masa de cristales en la suspensión es de 450 g/dm3.19 mm +0.31) es necesario generar una gráfica de Inn vs /. <f)v'.841 mm A/ = 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES /: Longitud de la abertura de la malla.Análisis de la cristalización de urea.32) representa la masa de cristales de tamaño promedio /. 699 A/: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales. En la Tabla 12.32) se obtiene: .12.Factor geométrico de volumen.349 mm . pc\ Densidad de los cristales.4. en la columna (2) el porcentaje de masa acumulada en la malla respectiva. Solución: De acuerdo con la ecuación (12. Ejemplo 12.

155 15.19 15.15.246 40.349 0.5 0.061 Fondo 2.074 7.190 Longitud promedio 7 (mm) Incremento A/ (mm) (?) (8) " n Inn 0.718 0.123 0. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.3.5 Fuente: Bennett. Los datos de In n vs / se presentan en la forma gráfica en la Figura 12.42 18.05 mm: ordenanda en el origen = 19.566.6 0.1 en las columnas (5).4 0.242 0.144 14.297 0.044) (0.865.000 10. (6).316 31.180 0.087 24.595 0.4 0.025 0.700 CAPÍTULO 12.016 0. (450 ¿:r)(0. Todos los derechos reservados. CRISTALIZACIÓN Tabla 12. Los parámetros de la recta ajustada son: Pendiente = —9. Copyright ©1973.841 0.581 mm — dm3 ) = 10.2 0.000 36. masa AW Tamaño abertura malla (mm) 1.07 0.765 .175 0.4 1.349 mm)(1.508 0.210 0.75 17.016 mm)' Vloo0mm3 número de cristales = 40.335 ^)(1)(1. 1973.581 533.703.070 3. (7) y (8).61 Los cálculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.420 0. Malla (1) 14 (2) (3) (4) (5) (6) %de masa acumulada Frac.359 0.1: Datos y cálculos del Ejemplo 12.61 13.254 0.795.200 18.149 0.000 70.09 16.044 20 28 35 48 65 100 4.

o Figura 12.12.4 I (mm) 0. .15: Cristalización de urea. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 701 222018 ln(n) 16 14 12 10 0.2 0.0 0.8 i.6 0.4.

838 x 108 númer° dí C"*3 'eS mm — dm y la velocidad de nucleación es: .. De acuerdo a la ecuación (12.4.Orden de nucleación. \ o.3 ¿ —k . B° = n°G como: lnn° = 19. se obtuvieron valores de \& velocidad de crecimiento y nucleación mediante análisis con mallas a diferentes tiempos de residencia.255xlOTnii"ter° J Ejemplo 12. ta „• = 3.838x10» mm — c/77?. _ _ 1 m. B° = (3. manteniendo la masa total .28). De acuerdo a la ecuación (12.702 CAPÍTULO 12.38 h) \ ' b) Velocidad de nucleación. a) Velocidad de crecimiento.0327 k / = l. CRISTALIZACIÓN Con estos datos es posible calcular la velocidad de crecimiento y nucleación de los cristales. Combinando estudios de laboratorio y estudios piloto.765 entonces.31).-de tal manera que: G = --_ ' (3.

4.13).042 0.33) donde: k /ir N La expresión obtenida en forma logarítmica se expresa como: . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.4) y (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES Tabla 12. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 12. derivar una expresión de la variación de la velocidad de nucleación con la velocidad de crecimiento.2: Datos del Ejemplo 12.729 Fuente: Moyers y Rousseau.092 0. de cristales por unidad de volumen constante e igual a 0.2. B° = kn(c-c*y combinando estas expresiones se obtiene B° = kN (G)' G = kg(c-c*) (12. Todos los derechos reservados. Considerando los datos anteriores. Corrida T (min) 1 2 3 0 703 r< ( M™ \ ImtJ DO / num. Copyright ©1987.960 6.019 13. La densidad de los cristales es de 1.84 g/cm3.260 0. 1987.23 g/cm3 y el factor geométrico de volumen <f>y = 1. \ ^ ^ cm3 — min i 315 630 1.993 9.12:4. Solución: De acuerdo con las ecuaciones (12.

4 -3.4. .69.0 -2.4In(B') Q3_ 9.19.704 CAPÍTULO 12.2.46 10.16: Orden de nucleación del Ejemplo 12.59.08.6 -2. de la cual se obtiene: 0.2 ln(G) -3.98.8 -2. CRISTALIZACIÓN 9.8-4 -3.29.16 se presenta la gráfica correspondiente a los datos de la Tabla 12. ln B° — ln kjy -f i ln G de tal manera que los datos de ln B° vs ln G se pueden ajustar a una recta de pendiente i y ordenada en el origen ln &/vEn la Figura 12.4 Figura 12.6 -3.66 = de tal manera que.8 -3.

33).29) el número total de cristales por unidad de volumen está dado por la expresión: NT = I n° exp ( — ) di Li T . 2 y 3 de la población de cristales.29) y de los parámetros G y B° que se obtienen mediante experimentación.En un RPMSM el tiempo de residencia r es constante y la relación B°¡G también es constante. Esto es característico de moléculas grandes e indica que el mecanismo de nucleación no es muy sensible a la sobresaturación y que la nucleación secundaria es la dominante. Dado que i es específico del sistema se supone que este valor no cambia con la escala y puede determinarse mediante experimentos de laboratorio (cristalizador de 4 a 8 dm3). de tal manera que la densidad poblacional dada por la ecuación (12. ya que es dependiente de la escala. Momento Cero: Fracción del número total de cristales de tamaño entre O y /. Contando con la expresión de la densidad poblacional y en conjunción con las expresiones de momentos.29) está completamente determinada a las condiciones de operación dadas. Con estos valores y la i determinada en el laboratorio se obtiene UN mediante la ecuación (12. El parámetro &/v es necesario determinarlo en una corrida a nivel piloto o a escala real.16) y la ecuación (12.4.. A continuación se ejemplifica lo anterior mediante el cálculo del momento 0.12. De acuerdo a la ecuación (12. Esto se realiza efectuando un análisis de mallas a la escala de interés para obtener G y B°. Varias características de diseño de un cristalizador se derivan del uso de la distribución poblacional dada por la ecuación (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 705 El valor de 0. A continuación se presentan algunas de ellas: 1) Momentos. se pueden determinan los momentos O. Diseño de cristalizadores RPMSM. 1.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de nucleación respecto a G (o a la sobresaturación).

36) — 1 — exp(—X) donde X es una longitud adimensional dada por: X = ¿ Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los otros momentos. NT=n°Gr CRISTALIZACIÓN (12.706 CAPÍTULO 12. La longitud de cristal a la cual la densidad de la masa de cristales es máxima se llama tamaño de cristal dominante //> La masa de cristales por unidad de volumen de solvente en un rango de tamaño de los cristales está dada por: .3 se presentan las expresiones de los momentos restantes. En la Tabla 12.35) fracción J fracción = n°Gr (12./ Ni = Ni = n°G> de tal manera que la fracción del total de la población es: (12. 2) Tamaño de cristal dominante. la cual puede resolverse para obtener.34) El número de cristales por unidad de volumen de tamaño entre O y / es: .

39) donde W es la fracción masa de cristales.40) e igualando a O se obtiene: ID (12.( l + X)e.O + X + ^ + p^Je-* cristales dM = pc<j>vl3ndl (12.3: Momentos de un cristalizador RPMSM (X = l/Gr).4.29) y la (12.38) dW di n 6(<7r) n< 4 (12. Momento I Significado I Total I Fracción \-e~A número de n°Gr 0 cristales l .40) derivando con respecto a / la ecuación (12.37) de la Tabla 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 707 Tabla 12. Las ecuaciones (12.12.41) .3 la masa total de cristal por unidad de volumen es: MT — 6(j>vpcn°(GT^ combinando las dos expresiones anteriores se tiene: (12.39) conducen a: dW di / (12.A 1 longitud de n°(Gr}¿ los cristales l-(l + X+¿X')e-A 2 área de los 2^n°(Gr) 3 cristales masa de los ^vpcn°(GrY 3 l .

La densidad de los cristales es de 1. Los resultados de los análisis de mallas generan los valores de G = 0.Evaluación de G y B°.5. Ejemplo 12. Comparar la densidad experimental del magma con la estimada a partir del análisis de mallas. En un cristalizador experimental la densidad medida de cristales en el magma es de 450 g/dm3.38 h.335 g/cm3 y el tiempo de residencia es de 3.3). 3) Coeficiente de variación. Este procedimiento se muestra en el Ejemplo 12.5.255 x 107 número/dm? — h. CRISTALIZACIÓN Este tamaño característico de los cristales frecuentemente es utilizado como base para el diseño de cristalizadores.. MT = 6 . El coeficiente de variación es una medida de la dispersión de la densidad de masa alrededor del valor ID y está dado por: En el caso de la distribución para el RPMSM este valor es aproximadamente del 50%. Debido a lo anterior MT puede ser utilizada para corroborar velocidades de nucleación y crecimiento estimadas mediante análisis de mallas.3).3.708 CAPÍTULO 12. Solución: De acuerdo a la Tabla 12. y además puede ser medida independientemente de la distribución de tamaño de cristales. Tal dispersión es muy amplia para ser aceptable para algunos productos cristalinos como el azúcar común.0327 mm/h y B° = 1. La masa de cristales por unidad de volumen de solvente MT es función de los parámetros cinéticos n° y G (Tabla 12. 4) Densidad del magma. (Datos del Ejemplo 12.

38 h\ = 458 9 MT dm3 El valor experimental de MT = 450 g/dm3 y el calculado de 458 g/dm3 sugieren consistencia de los datos. El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parámetros cinéticos. c) La fracción del número de cristales totales con un tamaño igual o menor que el tamaño dominante.88 x 107 número/'dm3 — h y la velocidad de crecimiento G es 0.. b) El número de cristales con un tamaño menor o igual al tamaño dominante.x cm3 103 mm3 0. . Estimar : a) El tamaño de cristal dominante. Los cristales presentan una densidad pc de 1.0327 ^p x3. éstos pueden ser utilizados para caracterizar una cristalización.255 x 107 = 6 x 1 x 1.056 mm/h. Los estudios cinéticos indican que la velocidad de nucleación es de de 1. 709 sustituyendo valores. Un cristalizador RPMSM de 100 dm3 es alimentado a 50 dm3/h con una solución sobresaturada de sulfato de amonio.4.Cristalización de sulfato de amonio.769 g/cm3 y de acuerdo a su forma <f>y = 1.12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES o bien. MT a cm3 1. La suspensión de cristales es retirada a un flujo de 50 dm3/h.0327 ^ n 4 mm \ (0.6.335 — x ——. Ejemplo 12.

336 mm x ' 10 ° dm3 50 ^r b) El número de cristales TV de tamaño igual o menor a ID es: o 6¿en.88 x 10 -— 3 7 dm . . TV = (n0GT)(l-e~x) y X = -^ = 3 con n° = B°/G A^ = sustituyendo valores. -f. / \ (B0T)(\-e~x) N N = nurn 1. .57 x 107 ""'" .e~ 3 50 ^ I = 3.056 (o.h 100 dm3 \ . CRISTALIZACIÓN d) La densidad de la suspensión .41) el tamaño de cristal dominante es: ID = 3Gr /„ = (3)10. e) Predecir la fracción masa de cristales por tamaño (utilizar tamaños de mallas estándares). ID = 0.710 CAPÍTULO 12. N = TV = ndl (total de cristales)(fracción en el rango) de acuerdo a la Tabla 12.3. x -51 . Solución: a) De acuerdo a la ecuación (12..

Las velocidades de crecimiento y nucleación. .769 mm / <7 \ / ero- \ / 1-88 x 107 3^ 1000 mm 3 .3 la densidad de la suspensión está dada por: MT = 6</>vpcn°(GT)4 sustituyendo valores con n° — B°/G.95 d) De acuerdo a la Tabla 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 711 c) De acuerdo a la Tabla 12.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva En un cristalizador RPMSM el control de la distribución de tamaño de los cristales es muy limitada.3.4. masa retenida = ( 1 -f X -\ 1 1 e~ \ 2 6/ En la Tabla 12.4 se presentan los resultados obtenidos al utilizar la expresión anterior. w x fr = (6)(1) (1.4.e~3) = 0. .056 = h 50 4s£ MT = 560 -pam-3 e) De acuerdo a la Tabla 12. 12.12.3 la fracción de cristales de tamaño en el rango O < / < /D es: (1 . \ X 0. están determinadas por las variables de operación y la geometría del cristalizador.(1 -f X + -X2 + -X3)e~x 2 6 de tal manera que la fracción de masa retenida en la malla de tamaño / es / v-2 Y3\ Frac. la fracción masa de cristales con tamaño menor o igual a / es: Fracción masa = 1 .

75 2. La remoción de gruesos consiste en remover los cristales cuyo tamaño sea mayor al especificado.420 0.595 0.4: Resultados Ejemplo 12.Modelo de remoción de gruesos.31 3.6 95. % 5.6 inciso e).Modelo de remoción de finos.Modelo de extracción de líquido.149 5.33 22.3 48.51 28 35 48 100 0.4 Los cristalizadores continuos pueden hacerse más flexibles mediante el uso de dispositivos para la remoción selectiva de cristales. La función de estos dispositivos puede visualizarse más fácilmente en términos de los modelos idealizados: . Esto provoca un aumento de la densidad de cristales al interior del cristalizador y un aumento en el tiempo de residencia de éstos. .4 7. los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau. Después de ser retirados los cristales se redisuelven y alimentan nuevamente al cristalizador. La extracción de líquido consiste en la remoción de líquido libre de cristales del cristalizador.841 Masa retenida.712 CAPÍTULO 12. Los efectos de cada dispositivo de remoción pueden ser descritos en términos de la función de densidad poblacional n. Esto permite obtener cristales de mayor tamaño.65 1. .297 0. lo cual altera el tiempo de residencia de los materiales que salen del cristalizador. El objetivo principal en la remoción de finos es la remoción continua de cristales cuyo tamaño sea menor al especificado. CRISTALIZACIÓN Tabla 12. En el caso de un modelo combinado de remoción ideal de finos y gruesos llamado modelo R-Z .3 72. 1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes: . Malla Tamaño 20 A Y — l ~ Gr ( mm) 0.

Para // < / < l 3.17 en un proceso de cristalización el rendimiento estará dado por: . Z: índice de remoción de gruesos. cuando Z = 1 no existe remoción de gruesos.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos En la optimización de un proceso de separación es necesario calcular la eficiencia en la recuperación de producto como función de las variables de diseño.1 Gr 713 (12..4. 12..12. produce una distribución de cristales con tamaño de cristal dominante alto y bajo coeficiente de variación. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 1.43) 2. De acuerdo con la Figura 12. R: índice de remoción de finos. 4..Para/ < //: —.Para / > lc —•.donde: //: Tamaño mínimo aceptable de los cristales. Cuando R = 1 no existe remoción de finos. Un cristalizador con remoción tanto de finos como de gruesos. lc: Tamaño máximo aceptable de los cristales.

46) Fs: Flujo másico de solvente en la alimentación. [M/M]. = donde: a ~ S Rc F fí * s1 *-a (12. [M/Mj.714 CAPÍTULO 12. [M/t]. mediante los diferentes modos de operación de los cristalizadores: . CRISTALIZACIÓN Vapor » R» ntación Q <— -? 1 í Suspensión: Solución S Rc Cristales C Figura 12. Rc: Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solución de salida. Ra: Masa de soluto por masa de solvente en la alimentación. C: Flujo másico de cristales en la suspensión de salida. generalmente se fijan por las operaciones previas a la cristalización. La fracción masa libre de soluto del soluto disuelto fíc. Por lo tanto. [M/i\. Rse: Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada.17: cristalizador continuo general. Rend. es la solubilidad del soluto en el solvente a la temperatura de operación. 5: Flujo másico de solvente en la suspensión de salida. El flujo de solvente Fs y la fracción masa libre de soluto /?a. Otra variable que puede ser controlada en una cristalización es el flujo másico de solvente a la salida 5*. [M/i\. el rendimiento puede ser controlado en cierto grado. mediante un control de la temperatura o cambiando el tipo de solvente. [M/M].

49) Combinando las ecuaciones (12. De acuerdo a la Figura 12. el diseñador puede controlar la presión para fijar la temperatura y por lo tanto /?c.48) y el balance de solvente por: Fs = FsRse + S (12.Cuando la cristalización es sólo por enfriamiento. .47) (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 715 .12. de tal manera que ambos efectos contribuyen a incrementar el rendimiento de la operación.4. .En el modo de enfriamiento adiabático la cantidad de vapor liberada está fijada por los balances de energía.17 el balance de masa total está dado por: Fs + FsRa = FsRse + 5 + C/+ SRc El balance de soluto está dado por: (12. y una relación de solubilidad dada. . el modo de la cristalización determina la recuperación máxima de soluto alcanzable.En los sistemas con evaporación S disminuye debido a la corriente de vapor producido y el rendimiento se incrementa. el único control sobre el rendimiento es la temperatura. así como administrar calor externo para controlar 5. A continuación se presenta este procedimiento. la cantidad de solvente evaporado y las condiciones dentro del cristalizador.48) se puede obtener la ecuación para el flujo de solvente. La conclusión de la discusión anterior es que para una Fs y Ra dados.47) y (12.En los sistemas con evaporación o en los sistemas combinados de enfriamiento adiabático con evaporación. Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el rendimiento y las composiciones de las corrientes en función de: las condiciones de entrada. .

= -—— rafia (12.53) permite calcular el rendimiento mediante los datos de diseño Ra..51) en la (12. 1.ric Combinando las ecuaciones (12.716 CAPÍTULO 12.)*.54) se obtiene: i + fi.48) y (12.53) y (12. CRISTALIZACIÓN S= 1 -\. -(l-ft.51) y (12.Cristalización por Enfriamiento Indirecto En este caso no existe evaporación de solvente por lo que: fl« = 0 y las ecuaciones (12.55) se simplifican para los modos de operación particulares que se describen a continuación. . C = Fs[Ra . La fracción masa de cristales en la suspensión de salida ST es: combinando (12.53) y (12. de equilibrio Rc y de operación Rae. ñend.52) sustituyendo la ecuación (12.Rae)Rc] (12. = ft. Ra (12 53) La ecuación (12.49) se puede obtener una ecuación para el flujo másico de cristales.46) puede también ser expresado como: C Rend.51) El rendimiento dado por la ecuación (12.R~ Las ecuaciones (12.56) .55) se expresan como: (12.52).(1 .

Cristalización por Evaporación Adiabática sin Reflujo En este caso a diferencia de los dos casos anteriores.62) . Este balance puede ser expresado en palabras como: [La velocidad de salida de calor por evaporación del solvente. = RaD Rc Ra (12.57) (1258) 2.12A.Cristalización Sólo por Evaporación En este caso la fracción masa de soluto en la alimentación es igual a la fracción masa en la solución de salida. además de los balances de masa se requiere efectuar un balance de energía para determinar la cantidad de solvente evaporado en el cristalizador.. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 717 Rend.] más [Calor liberado por cristalización por "salting out"] • y mediante la ecuación: FsRse\v = Fs(Ra+FsRcRseX} (12.] más [Entrada convectiva de calor. Ra = Rc y las ecuaciones (12.53) y (12.61) 3.60) (12.55) se expresan como: Rend.] es igual a \ [El calor liberado por la cristalización de enfriamiento. = Rse (12.59) ST = -R"Rse p 1 + Ra — Rse (12..

. La solución alimentada al cristalizador contiene 0.Rsf)Rc •tta (12 63) ' ST = "~ 1 + Hc — tiae " í ° c (12. El calor de .718 donde: CAPÍTULO 12. (2) y (3) de la Tabla 12. [cal/M]. [cal/M — grado]. en oposición a los sistemas tipo I donde la concentración de salida Rc es mayor que la de saturación debido al lento crecimiento en estos sistemas. CRISTALIZACIÓN AT: Temperatura de alimentación menos temperatura del cristalizador. de tal manera que las ecuaciones de enfriamiento adiabático son: _ \¡(Ra . Se desea analizar la variación con la presión de operación del rendimiento y la concentración de sólidos en la corriente de salida de un cristalizador. Los sistemas en los cuales ésto ocurre se llaman sistema tipo II o de rápido crecimiento.Re) + CPAT(l + Ra) "~ A.65) Las ecuaciones anteriores pueden ser resueltas si se conoce la concentración de soluto disuelto en la suspensión de salida Rc. [grados].379 g de soluto por g de solvente y se alimenta a una temperatura de \00UC.5 se muestran los datos de equilibrio para el sistema a cuatro presiones absolutas diferentes.A/ + Rc Ra . A/: Calor de cristalización del soluto. Cp: Capacidad calorífica de la alimentación.7. [cal/M]. Generalmente es aceptable suponer que esta concentración corresponde a la de saturación. En las columnas (1).Balances de masa y energía en un cristalizador adiabático. \v: Calor de evaporación del solvente..(1 . Ejemplo 12.

5.7.64) y (12. (5) Rend.043 0. vaporización del solvente es de 100 cal/g. respectivamente. El uso de la cinética de la cristalización para el análisis y diseño provee una nueva dimensión a las técnicas de diseño disponible.944 0.502 0.582 0. g cristales g soluto alim. Balances y Cinética En el diseño de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de la cinética de la cristalización con los balances de masa y energía.3 cal/g y la capacidad calorífica de la solución de 0.969 0. Solución: Considerando un sistema de cristalización tipo II. Tanto la fracción masa de cristales como el rendimiento aumentan al disminuir la presión de operación. Copyright ©1987.028 0. El rendimiento y la fracción masa se calculan utilizando las ecuaciones (12.072 0.100 0. alim.4. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 719 Tabla 12. Presión mm de Hg (1) 160 135 90 60 (2) T °C 65 60 50 40 (3) RC g soluto g solvente (4) Rse g solv.453 Fuente: Moyers y Rousseau.419 0.5: Datos y solución del Ejemplo 12. g solv. Calcular la fracción masa de cristales a la salida del cristalizador y el rendimiento bajo cada una de las presiones de operación. Contando con la cinética de la cristalización es posible evaluar la sensibilidad de .65). 1987.890 0. evap. el calor de fusión del cristal es de 33.5.374 0.63) y aparece en la columna (4) de la Tabla 12.347 0. Todos los derechos reservados. (6) ST g cristales g totales 0.316 0.835 0. Estos valores aparecen en las columnas (5) y (6) de la Tabla 12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.556 cal/g—°C.12. el flujo másico de evaporación adiabática de solvente puede calcularse utilizando la ecuación (12.400 0.

Temperatura.El rendimiento debe ser mayor a 0.720 CAPÍTULO 12.6 y los datos de equilibrio se presentan en la Tabla 12.75% de la masa de los cristales debe tener un tamaño mayor a 100 . .Densidad de la suspensión.La fracción de masa de cristales ST a la salida debe ser de 0.Remoción de gruesos. . .Operación en serie. . CRISTALIZACIÓN la distribución de tamaño de cristales a las diferentes parámetros de operación: .7.84 g/cm3 generaron la expresión cinética siguiente: = 42. . Se desea diseñar un cristalizador para producir 455 kg/h de un compuesto.Sembrado.699(6') Ü46 num cm — min 3 donde G está en unidades de ¡mi¡rain y k^ en .Tiempo de residencia. manteniendo constante MT en 0. Los datos y condiciones de operación se presentan en la Tabla 12.. . .95.Diseño de un cristalizador continuo.Remoción de finos.8. Los estudios realizados a nivel laboratorio y a nivel piloto en un cristalizador RPMSM. Los criterios de diseño son los siguientes: . Ejemplo 12.5.

.3 cal/g.84.556 cal/g — o. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.6: Datos y condiciones de operación del Ejemplo 12. Copyright ©1987. 0. 1. Fuente: Moyers y Rousseau. Todos los derechos reservados. Copyright ©1987. 1987. Tabla 12. 1987.043 0.8.8. 100 cal/g.4. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 721 Tabla 12. Composición alimentación Temperatura alimentación Calor específico de la suspensión y solución Calor de evaporación del solvente Calor de cristalización Gravedad específica de los cristales Gravedad específica del líquido Factor volumétrico del cristal n O7Q g solvente ' 100°C. 33. Todos los derechos reservados. Presión mmHg 160 135 90 60 40 T Cristalizador °C 65 60 50 40 30 masa soluto masa solvente Rc 0.7: Datos de equilibrio del Ejemplo 12.23.2. 0.072 0.100 0. 1.028 0.018 Fuente: Moyers y Rousseau. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons .

pero ni aún a 40°C (60 mm de Hg) satisface 1? condición de ST — 0. Los datos de equilibrio de la Tabla 12.64) y (12. El modo de operación de enfriamiento adiabático también alcanza el rendimiento deseado. se pueden realizar mediante las ecuaciones (12.58) para enfriamiento indirecto.8.65) para enfriamiento adiabático. a) Balances de masa y energía.5.722 CAPÍTULO 12. De acuerdo a los balances de la Tabla 12. b) Estudio cinético: Efecto del tiempo de residencia.46 Solución: El diseño del cristalizador se efectúa mediante los siguientes pasos: a) Elaboración de los balances de masa y energía. punto de corte de finos // y proporción de remoción de finos. de tal manera que es factible la cristalización por enfriamiento. (12. los cálculos de rendimiento y fracción masa de los cristales a la salida del cristalizador.7 sugieren una alta sensibilidad de la solubilidad del soluto a la temperatura. CRISTALIZACIÓN cm 0 — mtn . no permite cumplir con la especificación de diseño que establece una fracción masa de cristales a la salida ST = 0.63). y mediante las ecuaciones (12. En base a lo anterior se selecciona el modo de operación adiabáticc con adición de calor externo para producir una solución más concentrada. Considerando un sistema de cristalización tipo II y dos modos de cristalización: enfriamiento indirecto y enfriamiento adiabático. sobre la distribución de tamaño de cristales.5. aún cuando se alcanza el rendimiento deseado.8 el modo de cristalización por enfriamiento indirecto. c) Dimensionamiento y especificación de equipo. Los resultados correspondientes se presentan en la Tabla 12.57) y (12.0. .

Una vez tomada la decisión anterior se puede calcular Rse mediante la ecuación general (12.24 0.7).18 puede desarrollarse de la siguiente manera: En la corriente de salida. 0.45 0.32 0.8: Balances de masa y energía para Ejemplo 12.Rse se obtiene: R.95 0.26 0.Rse) x 0. en un cristalizador con calentamiento externo.8.93 0.55).043 1 + 0.83 0.35 0.5 = masa de cristales masa total .89 0.97 0. 0.f = 0.74 0.(1 .5 = 0. T°C 65 60 50 40 30 Enfriamiento Indirecto Enfriamiento Adiabático Rend.12.22 0. se sugiere emplear una temperatura de operación de 50°C.98 Considerando la conveniencia de una temperatura de operación intermedia que permita operar el condesador sin el uso de un agente condensante refrigerado. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 723 Tabla 12.5.25 0.65 Este resultado indica que es necesario remover el 65% del solvente que entra para cumplir con ST = 0. El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.40 0. ST = Ra — (1 — Rse)Rc 1 + Ra — Rse sustituyendo valores.94 0. La presión de operación será entonces de 90 mm de Hg (Tabla 12.4. ST ST 0.89 0.20 0. Rend.81 0.379 .51 0.379 .

7.379 g/g -£bRc=0.65 g/g \/ Alimentación 100*C * F.76 li p s _ _ ~ 0. 455 O5 — — (5 + Sfíe) + 455 f como fíc = 0.379 ^ kg Fs = 1250 ^ // = 473. R« =0.724 CAPÍTULO 12. kg de solvente _ = 436.76 kg de soluto disuelto h El balance global de soluto es: FsRa = de tal manera que: 455 ^ + 18. Q V1 Soí Suspensión • =0.8.76 FsRa El flujo de solvente evaporado es: .043 g/g k * C =455 Kg/h Figura 12.18: Diagrama de flujo Ejemplo 12. CRISTALIZACIÓN SO'C .24 SRr = 18.043 (Tabla 12. T= 500C) entonces .

0.12.043) l + 0.3 — x ——kg kg g kg Q = 1.043 7^ x 0. y está dado por: Salida de calor por evaporación del solvente = -f+ + Calor liberado durante la cristalización Entrada de calor por convección Calor liberado por Salíing — Out Calor suministrado y en forma de ecuación como: FsRse\v = FsRcRse\f de tal manera que: Q = 1250^ hr n«* 0.4.(1 .818 x 10 cal .x 100 Cal kg g x 100 °9 -— kg (0.556 ka x (100 - 0.53) es: Rend.379 Rend.65 -r.379 .x 33. = Rg — (1 ~ RSe)Rc RO. 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 725 FsR*r = 812.96 El balance de energía permite calcular el calor adicional necesario.043 Rend. = 0.65 .nn -~. — 0.5 h El rendimiento de acuerdo a la ecuación general (12.3 g x x cal kg kg 1000 q k 9j x 0.0.65) x 0.379 .379 kq 7 % x 33.

95 2) ST = 0. se pueden combinar las expresiones siguientes: B° = kN(G? MT = *-£ / MT \$< para obtener la siguiente ecuación que permite relacionar r con G. que de acuerdo al criterio de diseño al menos el 75% de la masa de cristales debe tener un tamaño mayor a 100 /¿m.G5)] 0. El tamaño de cristal varía con tiempo de residencia y con el sistema de remoción de gruesos y finos. b) Estudio Cinético.84 -^r MT = 0. CRISTALIZACIÓN Los balances de masa y energía permiten determinar los requerimientos para cumplir con dos criterios de diseño: 1) Rend.87 -^- .5 El problema de diseño restante consiste en determinar como cumplir con la distribución de tamaño de cristales.726 CAPÍTULO 12. la masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión está dada por: MT = -nr-rr455 [1250-(1250xO. Para explorar la influencia del tiempo de residencia en el tamaño de cristal deseado. De acuerdo a los balances de masa. > 0.

85 + ^-^. Se selecciona el tiempo de residencia de 315 min para continuar el diseño. masa = 1 Frac.23 x 42. _. el parámetro X y la fracción masa de cristales de longitud menor a 100 /im De acuerdo a estos resultados el tamaño de los cristales disminuye al aumentar el tiempo de residencia. Esto se debe al mayor impacto de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación que sobre la velocidad de crecimiento.+ ^^. (2. masa = 0.3) está dada por: / 1 o 1 -A Y Frac.2. ) (za«a) ' Vcrn.1 .32 V En la Tabla 12. masa .328 -«?.I e ¿ o / Frac.328 '"" la longitud adimensional es: A v x (107 min) • ' v = 100 (0.699 ( y".85): ." —min/ V ¿íw / G = 0.9 se muestran los resultados del resto de los cálculos del efecto de la variación del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento.12.4.46 3 6x1. Una disminución mayor del tiempo de residencia podría evitar .46 X~r __ (»• 87 mzn x """ / \ 0.85)2 .x 107 m¿n) V mtn / ^ = 2.85 La fracción de masa menor a 100 f¿m es: (2.í 1 + X -f -X2 + -X3 } e~x \ ¿ Para r = 107 mzn. i 3. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 727 La fracción masa de cristales menores a / = 100 /¿m (Tabla 12.85 1 + 2.

019 0.728 CAPÍTULO 12.094 0.32 0.8 4. Una vez analizado el impacto del tiempo de residencia sobre el tamaño de los cristales.328 0.4 3. la fracción de cristales menor a 100 //ra también disminuye.52 0. Una R = 1.8 3. CRISTALIZACIÓN Tabla 12.042 0. Asimismo conforme R aumenta a // constante.68 el consumo de la sobresaturación. T G um/min 0.19.009 X Adim 2.7 min 107 315 630 1260 2520 Frac. La figura también muestra tres combinaciones de // y R que permiten cumplir con la tercer condición de diseño que establece que el 75 % de la fracción masa de cristales tenga una longitud mayor a 100 fim. Este comportamiento se muestra en la Figura 12. provocando que este sistema de tipo II se conviertiera en un tipo I.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fracción masa de cristales menor a 100 um.8 y una // = 60 /¿m son seleccionadas para el diseño final.2 4. c) Dimensionamiento. masa < 100 nm 0.60 0. de tal manera que: ka 455 -± n Masa de cristales = (315 mm) mi . La masa de cristales en el interior del cristalizador se puede obtener a partir del flujo y el tiempo de residencia en el cristalizador. la fracción de cristales menor a 100 /¿m disminuye. Es obvio que conforme // aumenta a R constante. Existen varias opciones para remoción de finos que se derivan de las posibles combinaciones entre el tamaño de corte lj y el índice de remoción R.44 0. se debe analizar el impacto del sistema de remoción de finos sobre ese parámetro de diseño.

eproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechos ¡servados. . 1987. Tomada de: Moyers y Rousseau.19: Sensibilidad del tamaño del producto al tamaño de corte e finos. masa de cristales l< 100 Jim igura 12. Copyright ©1987.. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 729 Tamaño de corte de la trampa de finos _______ 20 Hm 40 ¿im 60 Hm Frac.

20 muestra el diseño conceptual del cristalizador.730 CAPÍTULO 12.095 Productividad — Productividad El área de la sección transversal del cristalizador deberá considerar el tamaño de corte de finos que se desea separar.x l^fni 5 cm.75 kg La masa de la suspensión en el interior del cristalizador es: .4. 12. cuyos volúmenes de producción son bajos (menores a 50 tons/dia) y la alimentación disponible es intermitente. — 1 ZO _9_ v 1000 cm3 ' cm3 X dm3 v kg * 1000 g + 2388. ácido cítrico y varios otros productos de peso molecular intermedio.75 kg 0. la operación intermitente tiene una mayor . la forma de generar la sobresaturación o modo de operación determina en gran medida el rendimiento y la distribución del tamaño de cristales en la operación intermitente.84 -*.5 4a kg 4. 'j f i 2388. Sin embargo. CRISTALIZACIÓN Masa de cristales — 2. 777.75 kg) * s.388.5 kg susp. Al igual que en la cristalizcición continua.75 kg r 0..4 Cristalizadores Intermitentes La cristalización intermitente es muy utilizada en la fase de acabado de la producción de antibióticos. .3 arn- x ^_ 1000 g = 4786 dm3 455 4786 dm3 kg — 0. Masa de suspensión = Masa de suspensión = El volumen de la suspensión es: (2388. La Figura 12.

4. reservados. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. 1987. Tomada de: Moyers y Rousseau.'2. Copyright ©1987.8. Todos los derechos .20: Diseño conceptual que satisface las condiciones de diseño del Ejemplo 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 731 Vapor Flecha Cuerpo del cristalizador Tubo de tiro Mampara Tubo de circulación Alimentación Condensado Producto Condensado Figura 12.

. existe un creciente interés en los experimentos intermitentes dado que se puede obtener más información en un solo experimento y de 1 cierta forma son más fáciles que los RPMSM. el diseño de operaciones de cristalización intermitente requiere la generación de información experimental para determinar aspectos como: . Los experimentos con cristalizadores intermitentes sembrados permiten generar expresiones cinéticas de crecimiento cuando se suprime la nucleación.Permeabilidad del lecho de cristales. Para obtener la información relativa a la nucleación. Esto se evita mediante el sembrado de cristales. . Cuando ésta se genera por enfriamiento existen varias formas de realizarlo: .Enfriamiento a velocidad controlada para optimizar el tamaño de cristal y la pureza. y mediante el control de las condiciones de mezclado y enfriamiento. El desarrollo de modelos y el análisis de los cristalizadores intermitentes está limitado por la disponibilidad de datos cinéticos de velocidad de crecimiento de cristales y de de nucleación.Pureza de los cristales. se requiere efectuar mediciones de distribución de tamaño.Enfriamiento a sobresaturación constante.Curva de solubilidacl-temperatura.732 CAPÍTULO 12. En términos generales los métodos de diseño y análisis de cristalizadores intermitentes están menos desarrollados que los de los cristalizadores continuos. . . . CRISTALIZACIÓN dependencia de la forma como se genera la sobresaturación.Rendimiento potencial de la operación. . Por otro lado. .Enfriamiento con una fuente externa de temperatura constante. \ > Uno de los principales problemas de los cristalizadores intermitentes es mantener la distribución de tamaño de cristales entre una corrida y otra. Debido a lo anterior.Enfriamiento a velocidad de transferencia de calor constante.

Cristalización Intermitente: Enfriamiento Controlado y Nucleación Suprimida Los balances poblacionales para cristalizadores intermitentes son más complejos debido a que tanto la velocidad de crecimiento de los cristales 6?. Esto se debe a que las velocidades de enfriamiento son más altas al inicio del proceso. En enfoque emírico se supone que al inicio de la cristalización tocios los cristales tienen el mismo tamaño y se busca determinar leí dinámica . Esto puede ser minimizado mediante un control de temperatura que permita una velocidad de enfriamiento variable. disminuyendo continuamente desde su valor inicial hasta su valor al final del proceso. así como efectos de incrustamiento sobre las paredes de enfriamiento que reducen la transferencia de calor.12. inicialmente la generación de sobresaturación por enfriamiento es lenta debido a que los cristales son aún pequeños.4. En la cristalización intermitente con enfriamiento controlado. la temperatura final o el tiempo de operación. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 733 . Una de las desventajas de la cristalización intermitente sin control de la velocidad de enfriamiento. consiste en que este modo de operación produce generalmente un producto de baja pureza y baja uniformidad.Distribución de tamaño de cristales. son función de la sobresaturación que es variable en el proceso intermitente. Esta curva es empleada para diseñar el sistema de control. Por esta razón el enfoque de diseño utilizado en los cristalizadores continuos es poco útil para los cristalizadores intermitentes. En los cristalizadores con control de temperatura se ha utilizado un enfoque empírico para determinar la curva de enfriamiento del sistema (la variación de la temperatura con el tiempo dentro del cristalizador) debido a que es difícil establecer la cinética del sistema. generando un exceso de nucleación con la consecuente disminución de tamaño de cristal dominante. mediante experimentos donde se varía: la concentración inicial de soluto. Conforme aumenta el área de los cristales la velocidad de generación de sobresaturación por enfriamiento también se aumenta. como la velocidad de nucleación #°.

734 CAPÍTULO 12. CRISTALIZACIÓN que debe seguir la temperatura para mantener una velocidad de crecimiento constante. simplificándose el balance anterior a los dos primeros términos del lado derecho. Con este propósito es necesario realizar un balance de la cantidad de soluto de sobresaturación dentro del cristalizador el cual puede ser descrito en palabras como: [La variación de la masa de soluto de sobresaturación] es igual a [La variación de la masa de soluto de sobresaturación por efecto de la temperatura] más [La velocidad de consumo de soluto por crecimiento del cristal] más [La velocidad de consumo de soluto por nucleación] Las cristalizaciones intermitentes generalmente se desarrollan en la región metaestable para controlar el tamaño del cristal minimizando la nucleación.6) de la siguiente forma: ^ donde ÁT es el área de todos los cristales.Mas<?i total de los cristales sembrados. Esto requiere que los cristales sean sembrados para iniciar el crecimiento. * ( ÁT fjf f> fi \ ———: I cristal/ (12. ls: Longitud de los cristales sembrados. Este balance puede ser expresado con ayuda de las ecuaciones (12.67) (12. variable que depende de • la velocidad de crecimiento.5) y (12.68) = ÍJ-Mls + Gtf donde: MS. . En este caso la variación de la masa de soluto de sobresaturación y el consumo de masa por nucleación pueden ser despreciados. por lo tanto.

en este caso la ecuación (12. (12.66 ) se obtiene : de' dado que c* es función de la temperatura. de* _ de* dT ~dt ~ ~dT~dt combinando (12. lf = l. /~i _ 1 — ~dt (c-c*) (12.71) dt (12.70) y (12.11).68) y (12.74) donde tf e§ el tiempo necesario para alcanzar l¡.68) G es la velocidad lineal de crecimiento del cristal dada por la ecuación (12. es decir. Esta expresión puede simplificarse si se considera un intervalo corto de temperatura donde la variación de la solubilidad sea constante. La ecuación anterior puede expresarse adimensionalmente utilizando la expresión de la longitud final del cristal.12.72) dT La ecuación anterior permite obtener la variación de temperatura para mantener una velocidad de crecimiento de cristales constante. + Gtj (12. A partir de la ecuación (12.70) (12.71).73) donde T0 es la temperatura a la cual los cristales inician su crecimiento. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 735 en la ecuación (12.74) se define un tiempo adimensional T dado por: .69) sustituyendo las ecuaciones (12.69) en la ecuación (12.4.72) puede ser integrada para obtener: M¿ V de* dT Gt Gt (12.

77) y (12.73) se obtiene: Mí.77) de acuerdo a la ecuación (12.76) como: 1 Mf T/3 (12.78) se obtiene la expresión adimensional: T —-lo T J- 1 + r / r +-(7?r) 2 (12.736 CAPÍTULO 12.79) se puede aproximar a: .75) y (12. M. de acuerdo a la ecuacio (12.76) sustituyendo (12.76) en (12. (12.81 y la ecuación (12. T = Tn- V de* dT (12.78) combinando las expresiones (12.75) y se define una longitud adimensional 77 que caracteriza las veces que se incrementa la longitud del cristal respecto a su tamaño inicial dada por: I If-ls 1.77) la masa final de los cristales menos la masa sembrada de los cristales está dada por: (12.79) suponiendo que la densidad de cristales pc permanece constante se puede derivar la siguiente expresión: M. (12. Gt CRISTALIZACIÓN T = (12.80 la cual puede ser simplificada para ls bajos.

Obtener la curva de enfriamiento para ácido succínico en el intervalo de enfriamiento de 30 a 20°(7 y un tiempo de operación de 120 min. Dado que generalmente el mecanismo de nucleación controlante a escala industrial es la nucleación secundaria. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 737 fc^r T —T r3 (12 82) - que es la expresión de la curva de enfriamiento que permite mantener un crecimiento constante y evitar la nucleación inicial excesiva.La velocidad mínima del agitador que permita mantener la suspensión. . Solución: Utilizando la ecuación (12. .La potencia por unidad de volumen. varios criterios de escalamiento se fundamentan en los aspectos de mezclado. . de la agitación y de la geometría del cristalizador. Escalamiento de Cristalizadores Intermitentes Para realizar el escalamiento de cristalizadores intermitentes se requiere desarrollar una expresión de la velocidad de nucleación como función de la velocidad de enfriamiento.9. Estos criterios plantean mantener constante entre las escalas algunos parámetros como: . .82).12.. Ejemplo 12.Cristalización intermitente de ácido succínico.La velocidad de punta del agitador.La agitación.4.

que permite purificar un soluto mediante la formación de cristales.21: Curva de enfriamiento del Ejemplo 12.738 CAPÍTULO 12. Este comportamiento es característico de de la cristalización intermitente con control de temperatura (Qiu y Rasmuson. 30 -T 30-20 T En la Figura 12. CRISTALIZACIÓN T-C 26- 20 40 60 80 Figura 12.5 Sumario La cristalización es una operación de acabado ampliamente utilizada a nivel industrial. 12. Existen varias formas para generar la sobre- .9. 1991). Inicialmente la temperatura permanece constante luego baja abruptamente.21 se presenta la curva de enfriamiento que genera la expresión anterior . La fuerza impulsora de la cristalización es la sobresaturación de la solución.

La sobresaturación que se logra en el cristalizador es la fuerza impulsora tanto de la nucleación (origen de los cristales) como de su crecimiento. las cuales se basan ya sea en el enfriamiento de la solución o en su calentamiento al vacío.12. Ambos fenómenos se asocian con la cinética de la cristalización. El diseño de los cristalizadores continuos está apoyado por los balances de masa.5. energía y poblacionales que se realizan en este tipo de equipos. El diseño de los cristalizadores intermitentes se ha desarrollado en forma más empírica que el de los continuos. Existen varios tipos de cristalizadores que pueden ser operados ya sea en forma continua o intermitente. SUMARIO 739 saturación en la solución de interés. .

1.300 0.En el estudio cinético de la cristalización por enfriamiento de NaiSO¿H<2O (Graber y Taboada. c) La velocidad de crecimiento de cristales.02 7. con las siguientes características: Tamaño de abertura de Malla No. 16 18 20 30 40 50 70 100 140 Fondo malla (rara) 1.600 0. d) La velocidad de nucleación de cristales.42 89. 491 g c) Resp.14 54..045 x 7 10 num/l -h e) Resp.8 g/l 12.Se realiza una cristalización intermitente enfriando una solución de ácido cítrico de 60 a 40°C.464 g/crn3 y un factor geométrico de volumen de 0.622 h.000 0. se obtuvo una muestra de cristales contenidos en 2. CRISTALIZACIÓN 12. 240.212 0.82 235.12 39.850 0.425 0. f) La densidad estimada de cristales.42 22.12 32.106 Masa en la malla (9) 9.553.50 Los cristales tienen una densidad de 1.180 1. e) La densidad experimental de cristales. El tiempo de residencia fue de 0. En esta región la variación de la . 1991) en un cristalizador RPMSM de forma cilindrica de 15.6 Problemas 12. cuando el cristalizador operaba en estado estacionario.1.04 / de solvente. Calcular: a) La masa total de cristales en la muestra. 0.2.322 mm/h d) Resp.68 g / l f) Resp.2 era de diámetro y 39 era de altura. b) La variación del número de cristales con el tamaó de cristal. a) Resp.150 0. 253.22 0..740 CAPÍTULO 12.22 1.

042 cm/h c) Resp.1 y 0. respectivamente.6. La sal cristaliza como decahidrato y presenta una solubilidad a la temperatura final de 21. a) Resp. e) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12. PROBLEMAS 741 solubilidad de equilbrio del ácido cítrico es de 0. 2.4.4°C hasta 26.546 Kg de una solución acuosa que contiene 47 Kg de FeSO* por cada 100 Kg de agua. La capacidad calorífica promedio de la alimentación es de 0. con factores geométricos de área y volumen de 3. La densidad de los cristales es de 1.. La concentración de cristales sembrados es de 7.5 x 10~5 cm/s Calcular: a) El incremento adimensional del tamaño de cristal 77.. enfriándose de 54. 0.5 Kg de Na^COs anhidro por 100 Kg de agua.2 g/cm3. La sobresaturación esperada durante la cristalización es de 0. El calor .11 b) Resp.006 g/cm3 —°C (Bohlin y Rasmuson. 81.54 g/cm3.3.En una cristalización intermitente se procesan 4. El crecimiento de los cristales está controlado por la difusión con un coeficiente de transferencia de masa de 4. 78. 10. Los cristales al sembrarse tienen una longitud característica inicial de 90 //m.000 Kg con 30% en peso de Na^COs se cristaliza en forma intermitente por enfriamiento hasta una temperatura de 20°C.82) a) Resp. a) Estimar el rendimiento de la operación cuando no existe evaporación de agua. 1992). b) Estimar el rendimiento de la operación cuando se evapora el 3 % del peso total de la solución.18 h 12. La solubilidad del sulfato a la temperatura final es de 30.77).Una solución salina que pesa 10. d) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12.6°c para obtener cristales de FeSÜ4 • 77/20. b) La velocidad de crecimiento de los cristales.7 cal/g°C.9 % 12. El tamaño final del cristal es de 1.52.12. c) El tiempo necesario del proceso.5 Kg de FeSO^ anhidro por cada 100 Kg de agua.5 % b) Resp.000 /¿m.7 x 10~5 g/cm3.

258 Kcal 12. A esta temperatura la solubilidad del ácido es de 0.. 48. a una temperatura de 20°C.5.4. Estimar la cantidad de agua que es necesario evaporar para obtener una recuperación del 90% en esta operación. CRISTALIZACIÓN de cristalización de los cristales hidratados puede considerarse igual a —4.2 Kg b) Resp. 683. cuando se desea incrementar la longitud característica del cristal de 100 a 1000 /¿?n. Resp. 12. Resp. 0.742 CAPÍTULO 12. suponiendo que no existe nucleación y que la densidad del cristal permanece constante. 33. 65. 115. c) El calor removido cuando no hay evaporación de agua. para las mallas 20.25 g/l 12.89 % . 35.42 % de masa retenida en la malla 65. Calcular: a) La masa anhidra de cristales. se somete a un proceso de cristalización intermitente al vacío. a) Resp. b) El rendimiento de la operación. Resp. 28..Una solución que contiene 200 g de ácido cítrico por cada 100 g de agua.. 150 y 200. 100.59 g/g de agua.4 Kcal/gmol.Obtener la distribución teórica de cristales de la corrida 2 del Ejemplo 12.7.6.Estimar la masa de cristales que se requiere sembrar en un cristalizador intermitente para alcanzar una densidad de cristales de 250 g/l. 4. -108. 47 % c) Resp.

Perry. L. 1987. Chem. BIBLIOGRAFÍA 743 12. laboratory. The Canadian J.W. AIChE Journal 37. Me Graw-Hill. En: Chemical Enginner's Handbook. En: Handbook of Separation Process Technology.W.C.H. 578-643 Qiu.E. (Eds. 12931304. 1121-1128. Bohlin. New York. A. 1988. T. R.H. 11. Crystallization: An interesting experience in the Ch. Nucleation and growth of succinic acid in batch cooling crystallizer. 1992. 1-58 Bennett. Cussler.12. R.Serine obtained by methanol addition in batch crystallization.C. Charmolue.L. Eng. 1991. of Chem. Eng. 10. Graber.A. Rousseau. C. 17.A. Eng.. y Hu.7. y Tabeada. 5th Ed. John Wiley and Sons. New York. AIChE Journal 37.E. 102-105. y Rasmuson. 120-126. Matching crystallizer to material. Spring. 9.C. 1991.G. Moyers. 118-127. y Rousseau.7 Bibliografía Belter. E. M. Miscellaneous Separation Processes. M. .C. A. Education. R. 70. R. W. Mayo 23. C. Chem. y Rousseau. 1991. P.) John Wiley and Sons. 1973. H. (Ed. 273-305 Bennett. 8. R. y Chilton. 1988. Quinta edición. New York. Y. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. R. Crystallization operations.W. y Rasmuson.). Application of controlled cooling and seeding in batch crystallization.

preservar su actividad. Siendo el secado una operación limitada por el equilibrio en la sección 13. Existen varias formas de secar un material. En el caso de productos biológicos una limitante en la selección del método de secado. el análisis del secado se basa fundamentalmente en los sistemas aire-agua. es la temperatura que puede soportar el material de interés sin perder actividad. se revisan los conceptos básicos del equilibrio (de los sistemas agua-aire.1 Introducción El secado es el último paso en la recuperación de ciertos productos biotecnológicos.2 sobre fundamentos. Consiste básicamente en la reducción del contenido de solvente del producto por medio de una evaporación o una sublimación.3 sobre equipo. se presentan los principales tipos de secadores utilizados en los procesos 745 . de tal manera que las alternativas para estos materiales son más limitadas. Tiene como propósito estabilizar el producto. reducir su volumen o recuperar el solvente. se revisan las formas de efectuar una operación de secado y. sin embargo los resultados que se logran pueden ser generalizados a otros sistemas. En la sección 13.Capítulo 13 Secado 13. En la práctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia donde ésta se elimina es aire. las expresiones básicas para el cálculo de la velocidad de secado y la velocidad de desactivación de compuestos térmicamente lábiles. Por esta razón. Asimismo.

13. entonces el sólido pierde humedad.4. se requiere el conocimiento de la cinética de secado que depende de la velocidad de transferencia de calor y de la velocidad de evaporación. De acuerdo a lo anterior en esta sección se revisan los siguientes aspectos de la operación de secado: • Las relaciones de equilibrio que limitan la operación. .746 CAPÍTULO 13. es la velocidad de desactivación del material de interés por efectos térmicos.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas Si un sólido húmedo se expone a una corriente continua de aire.2. es necesario conocer las diferentes formas en que puede ser conducida una operación de secado. • Los métodos diponibles para realizar la operación. Una cinética necesaria de considerar en esta operación que no tiene paralelo en otras. Asimismo. • Los efectos colaterales del secado. SECADO biotecnológicos. y de la presión de vapor de la corriente del air< Si la presión de vapor del agua del sólido es mayor que la presión d vapor del aire. 13. Además. en el caso centran su humedad aumenta. Cuando la presión de vapor del agua del solio iguale la presión de vapor de la corriente de aire. pued ganar o perder humedad dependiendo de la presión de vapor que ejerz el agua del sólido. • La velocidad de secado que determina el tiempo para llevar a cabo la operación.2 Fundamentos El análisis de la operación de secado requiere conocer las relaciones de equilibrio que implica la distribución de agua entre dos fases: la sólida del material a secar y la gaseosa del aire seco que sirve como medio para tal efecto. entonces el sisterr estará en equilibrio. Los principios de diseño de algunos tipos de secadores se presentan en la sección 13.

Kg humedad / Kg sólido seco Figura 13.1 se presenta una curva de equilibrio típica de un material biológico a una temperatura dada.1 y en el eje de las abscisas la humedad del sólido definida como: . En el eje de las ordenadas se gráfica la humedad relativa del aire definida como: Hr = presión parcial del agua en el aire.2. La presión de vapor que ejerce la humedad contenida en un sólido depende de la forma de la humedad. En la mayoría de los materiales biológicos se pueden distinguir dos formas del agua contenida en el sólido: agua libre y agua ligada.13. Este tipo de agua se localiza en los espacios entre las células de los materiales o en los capilares de precipitados porosos. presión de vapor del agua pura. En la Figura 13. / el equilibrio / w w Contenido de humedad. Se distinguen dos zonas características: la zona de humedad no ligada y la zona de humedad ligada. El agua libre se caracteriza por ejercer una presión de vapor igual a la del agua pura.1: Curva de equilibrio para secado de un sólido. Este comportamiento lo presenta el agua cuando está contenida en el interior de células. El agua ligada se caracteriza por ejercer una presión de vapor menor a la del agua pura. en algunos caldos los solutos alteran sus propiedades o forma enlaces con sustancias orgánicas. FUNDAMENTOS 747 Curva de humedad en et equilibrio ligada / ligada / Humedad . el tipo de sólido y la temperatura. (13.

cuya humedad relativa sea igual a la unidad. Asimismo. Un sólido con tal humedad estará en equilibrio con aire cuya presión parcial de vapor sea igual a la del agua pura.1 comprende desde cero humedad hasta una humedad tal que la presión de vapor del sólido es igual a la del agua pura. La zona de humedad no ligada que se muestra en la Figura 13. a diferentes temperaturas y presiones. De tal manera que la Hr permanece constante e igual a la unidad. Para utilizar adecuadamente la carta psicométrica es necesario manejar varios términos. SECADO masa agua masa seca de sólido esta definición es útil cuando la masa de sólido es constante. ya que en un proceso de secado esta cantidad puede considerarse constante. En la operación de secado se requiere conocer. las relaciones de equilibrio de los sistemas aire-agua pueden ser utilizados para tal efecto.2. es decir. Debido a que el agua no ligada se comporta como agua pura. En la zona de humedad no ligada. A continuación se describen diez de estos términos.748 CAPÍTULO 13. la cual ha sido desarrollada a la presión de una atmósfera. La humedad H de una mezcla aire-agua se define como la masa de vapor de agua por unidad de masa de aire seco.3) como: _ a= P-r-P \M . 1. masa agua (13 3V masa añ'e seco Utilizando la ecuación general de los gases ideales se puede expresar la ecuación (13. dado que éste generalmente es calentado antes de usarse. la humedad del sólido puede ser mayor pero su presión de vapor es constante e igual a la del agua pura. estas relaciones de equilibrio agua-aire son requeridas para describir el comportamiento del aire que se utiliza en la operación de secado. las propiedades térmicas y las relaciones de equilibrio del solvente en el sólido y del aire que se utilice para secar. Las relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de cartas psicométricas como la de la Figura 13. -Humedad. algunos de ellos referidos a la masa de aire seco.

2. FUNDAMENTOS 749 0.02 O 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Figura 13.04 0.12 0. Presión de una atmósfera. .13.10 0.2: Carta psicométrica agua-aire.

Peso molecular del aire (29 g/mol). El porcentaje de humedad se define como la relación porcentual de la humedad con respecto a la humedad de saturación. 3. MB'.-Relación entre % H y Hr.4).750 donde: PA' Presión parcial del agua en el aire.x 100 (13.6). CAPÍTULO 13.agua. -Humedad de saturación. cuando la presión parcial del agua en la mezcla es igual a la presión de vapor del agua pura .. es decir %H = -^.-Porcentaje de humedad. 2. PT\ Fresón total de la mezcla aire.6) Hs 4. Una mezcla aire-agua está saturada a cierta temperatura y presión. (13.1). MA'. Esto puede ser demostrado combinando las ecuaciones (13. SECADO Se puede deducir de la ecuación anterior que la humedad sólo depende de la presión parcial del agua y de la presión total del sistema. Es necesario advertir que el porcentaje de humedad no es igual al porcentaje de humedad relativa. « •» y comparar este resultado con la ecuación (13. .5) y (13.Peso molecular del agua (18 g/mol). de tal manera que: donde P¿§ es la presión de vapor del agua pura a la temperatura y presión dadas y HS es la humedad de saturación.

Solución: (a) La humedad H puede calcularse. . HS.2. El aire de una habitación tiene una temperatura de 20°(7 y la presión es de una atmósfera.5 mm de Hg. FUNDAMENTOS 751 Ejemplo 13.12) mm de Hg 18 29 Kc Kmol Kg Kmol H = 0.13. H.4)..1). La presión parcial del agua en el aire es de 12 mm de Hg.4% (d) Aplicando la ecuación (13.0146 Kg de agua Kg de aire seco (c) Mediante la ecuación (13.01 Kg de agua Kg de aire seco (b) En tablas de vapor puede encontrarse que a 20°C la presión de vapor de agua es de 17.5) mmde Hg 18 Kc Kmol 29 Kmol Hs = 0. % H. (c) El porcentaje de humedad.5 mm de Hg (760.Cálculo de humedad a partir de datos de presión de vapor. H = 12 mm de Hg (760 . %H = 68. Calcular: (a) La humedad. (d) El porcentaje de humedad relativa.6) y los resultados anteriores. % Hr.17.1.aplicando la ecuación (13.5). Aplicando la ecuación (13. 17. (b) La humedad de saturación.

„ x 100 Ejemplo 13. considerando una presión total de una atmósfera y la presión parcial del agua en la mezcla como la correspondiente a la presión del agua pura a cada temperatura. Solución: En las columnas (1) y (2) de la Tabla 13.57% = ^ .0129 0.0640 18 5.2) representa la solución gráfica de este ejemplo.752 CAPÍTULO 13.1 se presenta la presión de vapor para el agua pura a varias temperaturas en el rango considerado.0047 0.1275 %Hr e 17. Construir una gráfica de la humedad de una mezcla aire-agua en el rango de O a 100 °C.5 mm de tig %Hr = 68.0324 0. En la columna (3) de la Tabla 13.5800 75 70. Estos valores son obtenidos de tablas de vapor.Curva de 100 % de humedad.9400 60 38.1521 0.5) a una presión total de una atmósfera (101.5500 95 rr "d ( Kg de agua \ \Kg aire seco J 0.33 KPa). T(°C) PAS (KPa) 0.3816 1.2.1: Datos y solución del Ejemplo 13..3958 3. La curva de 100 % de humedad cíe la carta psicométrica (Figura 13.1400 90 84. SECADO Tabla 13.1 se encuentran los datos de HS calculados mediante la ecuación (13. El valor de Hs tiende a infinito conforme la presión de vapor se aproxima a la temperatura de ebullición del agua.2. La curva de 50 .7577 3 2.0340 33 19.

-Punto de rocío. FUNDAMENTOS 753 % de humedad de la carta psicométrica puede trazarse tomando la mitad de la distancia vertical entre la curva de saturación y el eje de la temperatura.. El calor húmedo es la capacidad calorífica de la mezcla aire-vapor de agua. de tal manera que se puede calcular el punto de rocío de una mezcla utilizando la carta psicométrica. Estimar el punto de rocío de una mezcla aire-agua con 20 % de humedad que se encuentra a 55°C y a una atmósfera de presión.3.13. Solución: Sobre la carta psicométrica (Figura 13. el vapor de agua condensa formando una neblina o rocío. 1.5°C en el eje T. 1.-Calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua. unidad de energía. El punto de rocío de una mezcla aire-agua es la tempertura a la cual dicha mezcla (sin estar en contacto con agua) se satura al ser enfriada a presión total constante.Calor húmedo de la mezcla en KJ/Kg aire seco —° K.Capacidad calorífica del aire seco.88KJ/ Kg vapor —° K.023 tendrán el mismo punto de rocío. Ejemplo 13.005 KJ/Kg aire seco —° K. En este proceso la humedad de la mezcla no cambia.2) se localiza el punto 55°C y 20 % humedad. C A'. a cada temperatura. por Kg de aire seco de la mezcla. o Cs = CB + HCA donde: (13. . KJ: Kilojoules. horizontalmente se avanza hacia la curva de 100 % humedad y se lee la temperatura de rocío de 26.Cálculo del punto de rocío de una mezcla aire-agua. 6. CB'. Cuando una mezcla en su punto de rocío se enfría más alia de este punto. 5. Todas las mezclas con humedad de 0.Capacidad calorífica del vapor de agua.7) Cs'. y es el calor necesario para incrementar un grado centígrado la temperatura de una mezcla aire-vapor de agua.2.

Cálculo del calor húmedo de una mezcla aire-agua. la ecuación (13.884)(0.8).7) puede expresarse como: Cs = 1. SECADO Dado que las capacidades caloríficas pueden considerarse constantes en el intervalo normal de temperaturas. Calcular el calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua que se encuentra a 55°C y presenta una humedad //=0.884// KJ Kg aire seco —° K (13.8) Cuando no existe cambio de estado (evaporación o condesación) el calor necesario para incrementar la temperatura AT grados de una masa mjg de aire y su vapor acompañante.08) Kg aire seco —° K CS = 1.9) Ejemplo 13.4. Solución: a) El calor húmedo puede calcularse utilizando la ecuación (13.08 Kg de agua /Kg de aire seco..005 + 1.005+ (1.156 — — x 15 °K : Kg aire seco —° K Q = 86.156 A g aire seco —° A . Cs = 1. Q = 5 Kg de aire seco x 1. Utilizar el valor calculado para estimar el calor necesario para incrementar 15 grados la temperatura de 5 Kg de aire seco y su vapor acompañante. KJ — b) El calor necesario puede calcularse utilizando la ecuación (13.7 KJ Q = 363 Kcal .754 CAPÍTULO 13.9). puede ser calculada con la siguiente expresión: Q = mBCs&T (13.

Volumen húmedo. está dada por el calor sensible de la mezcla aire-vapor de agua más el calor latente del vapor de agua a la temperatura T0.884#)T + 2502# en la ecuación anterior T está en °C. FUNDAMENTOS 755 7. Considérese un proceso como el que se muestra en la Figura 13.. = CS(T . (13.00283 + 0.10) 8..11) se expresa como: f kJ 1 : [Kg aire seco] Ent.005 + 1.T0) + H\0 (13. si se toma como temperatura de referencia TS este balance se expresa como: . se pone en contacto con agua a una temperatura TS (menor que T).3.-Curvas de saturación adiabática. una mezcla airevapor de agua a una temperatura T y una humedad //. El volumen húmedo es el volumen total de una mezcla aire-vapor de agua por Kg de aire seco a la presión de una atmósfera. La entalpia total de un Kg de aire seco y su vapor acompañante referida a una temperatura T0.11) Cuando T0 — Q°C el calor latente \0 =2. esto puede expresarse como: Ent.13. Efectuando un balance de energía en la mezcla aire-vapor se obtiene.502 KJ/Kg y la ecuación (13.Entalpia total.2. No fluye calor hacia dentro o hacia fuera del sistema y al fenómeno se le denomina proceso adiabático. = (1. De acuerdo a la ley de los gases ideales el volumen húmedo puede calcularse mediante: m3 mezcla Kg aire seco VH = (0.0045677) (T + 273) (13. En éste. entalpia a la entrada = entalpia a la salida.12) 9. de tal manera que la mezcla aire-vapor al alcanzar el estado estable sale con una humedad saturada HS a una temperatura TS (el aire cede calor sensible para evaporar el líquido).

14) Las curvas de saturación adiabática de la carta psicométrica (Figura 13.Ts) + H\s = CS(TS . Entonces esta mezcla se humidifica .5. Solución: a) Sobre la carta psicométrica se localiza la temperatura y humedad que representa a la mezcla original.14).3: Proceso adiabático.13) T . Si este aire se enfria y humidifica adiabáticamente..Ts ~ ~ Xs ~ ~ \s (13. Se tiene una mezcla aire-vapor a 80°C con una humedad de 0.2) han sido construidas utilizando la ecuación (13.032 Kg de agua / Kg aire seco.884#) (13. En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar H$ y TS a la salida. Ejemplo 13. SECADO Entrada del gas „ _ H.756 CAPÍTULO 13.005+ 1.13) se tiene: H-Hs _ _Cs_ _ (1.Ts) + Hs\s combinado las ecuaciones (13. estimar: a) La temperatura y humedad final si la mezcla alcanza un 90 % de humedad. T \ Jr x '' / A .8) y (13. m ¡ ) i ¡~n i ) \ ^ Ts Figura 13. localizadas sobre la misma linea de saturación adiabática. ' I Salida del gas frió \**N X HS-TS Agua de reposición H 2 0 • . CS(T . la mezcla presentará una temperatura y una humedad menor.Saturación adiabática. b) La temperatura y humedad final si la mezcla sale saturada.

es que mediante mediciones de temperaturas de bulbo húmedo y bulbo seco.13.049 Kg de agua Kg de aire seco b) Continuando sobre la misma linea de saturación adiabática hasta la intersección con la curva del 100 %. La lectura final de estado estacionario es la temperatura de bulbo húmedo (en contraposición. FUNDAMENTOS 757 y enfría adiabáticamente. Para determinar temperaturas de bulbo húmedo se puede utilizar un termómetro cuyo bulbo se recubre con una tela impregnada de agua. Para sistemas aire-agua (únicamente) la descripción del proceso adiabático del bulbo húmedo puede realizarse en forma satisfactoria mediante la ecuación de saturación adiabática. y con auxilio de la carta psicométrica. La importancia práctica del análisis anterior.Temperatura de bulbo húmedo. siguiendo una curva de saturación adiabática. Si el aire no está saturado se produce un descenso en la lectura del termómetro debido a la evaporación de agua de la tela.2. a la lectura normal del termómetro se le llama temperatura de bulbo seco).. hasta el cruce con la curva de 90 % de humedad donde se lee: T = 43°C H = 0.05 10. . La temperatura de bulbo húmedo es la temperatura de estado estable que alcanza una pequeña masa de agua cuando se pone en contacto con una corriente de aire en condiciones adiabáticas. es posible determinar con relativa facilidad la humedad de mezclas aire-vapor de agua. se puede leer: Ts = 4Q°C Kg de agua Kg de aire seco Hs = 0. El termómetro se sujeta mediante una cuerda y se hace girar en el aire.

Los métodos de secado se pueden clasificar de acuerdo a la forma de transferir calor y eliminar el solvente en dos tipos: . Recorriendo la curva de saturación adiabática de 30°C hasta la temperatura de bulbo seco de 70°C. Calcular la humedad de la mezcla. 13. Son utilizados para secar partículas que no toleran altas temperaturas como proteínas unicelulares y enzimas. Solución: Se puede suponer que la temperatura de bulbo húmedo es igual a la temperatura de saturación adiabática.758 CAPÍTULO 13.2 Métodos de Secado El método de secado que debe ser utilizado en un bioproceso depende del tipo de producto.6. su tolerancia a la temperatura y los requerimientos de proceso en cuanto a la forma de operación ya sea intermintente o continua. se puede leer la humedad de 0. sus propiedades físicas. Método Adiabático Este método consiste en adicionar calor por medio de aire caliente. Métodos no Adiabáticos o por Conducción En el secado no adiabático el calor se proporciona en forma indirecta por conducción a través de una pared metálica.Determinación de humedad. SECADO Ejemplo 13.Método no adiabático. Generalmente los secadores no adiabáticos operan a presión reducida y se emplean para el secado .. La temperatura de bulbo húmedo de esta mezcla es de 30°C.2.Método adiabático. . Los secadores por aspersión y los secadores de tipo instantáneo operan de acuerdo a este método. Una mezcla de aire-vapor de agua tiene una temperatura de 70°C.01 Kg agua/Kg aire seco.

Se emplea para secar proteínas terapéuticas que no toleran temperaturas arriba de las ambientales.13. mientras que la forma de transferir calor depende del método de secado (adiabático o no adiabático). Los factores que controlan la velocidad de estos procesos determinan la velocidad del secado. donde las temperaturas de secado deben ser menores a 60° C. .2. y como vapor del sólido al aire. Debido a que el conocimiento de los mecanismos básicos del secado no es completo. El secado por congelamiento. En el caso de productos biotecnológicos los daños típicos que se presentan en el secado son: endurecimiento. El fenómeno de endurecimiento se presenta cuando la velocidad de secado es muy alta y el sólido forma una capa interior húmeda y una. un caso de secado no adiabático. se efectúa por sublimación de agua congelada empleando bajas presiones y temperaturas. frecuentemente es necesario efectuar mediciones experimentales de la velocidad de secado. capa exterior'seca e impermeable.2.3 Velocidad de Secado En el diseño de secadores.2. que impide la evaporación y el secado . se presentan daños que afectan la calidad del producto. deshidratación química y desnaturalización. FUNDAMENTOS 759 de cristales y precipitados. Los mecanismos de transferencia de masa están intimamente relacionados con el tipo de sólido a secar (homogéneo. 13.4 Efectos Colaterales del Secado Cuando el secado de un material no se realiza apropiadamente.Se transfiere masa: como líquido o vapor al interior de sólido.Se transfiere calor para evaporar un líquido. granular. Cuando se seca un sólido ocurren dos procesos fundamentales y en forma simultánea: . además de las relaciones de equilibrio. etc). es necesario establecer relaciones que permitan determinar la velocidad del secado o el tiempo de secado. 13.

de acuerdo a la siguiente expresión: ai donde: Pr: Medida de la concentración de la proteína no desnaturalizada. El tercer tipo de daño es la desnaturalización que sufren las proteínas en el secado. para evitar una desnaturalización excesiva. SECADO apropiado. Este fenómeno puede evitarse desminuyendo la velocidad de secado. [cal /mol]. [°K]. E: Energía de activación del material. k0: constante característica del material.15) t =t produce la expresión: Pr = Pr (13. la temperatura y el tiempo. La integración de la ecuación (13. [t~1]. T: Temperatura absoluta. R: constante de los gases ideales.15) entre los límites: t = t0 Pr = Pr0 •"»-"•.760 CAPÍTULO 13. [cal ¡mol —° K].16) que indica que entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado menor es el grado de desnaturalización. .^ ---) Pr RTJ (13. Generalmente es más conveniente utilizar una combinación de una temperatura baja con un tiempo alto de secado. Este proceso generalmente sigue una cinética de primer orden que depende de la concentración de agua. La deshidratación química consiste en la eliminación de agua de la estructura molecular del producto y también se origina por una velocidad de secado alta.

13.99 —E 1 30 min ™n"T' ' resolviendo las expresiones anteriores se obtiene: E = 23. .28 Pr0 \ 1. Solución: Utilizando la ecuación (13. .91 se desnaturaliza sólo el 9 % de la enzima.0.22 x 1015 min~l Con estos parámetros se puede estimar el grado de desnaturalización. 761 Cuando se seca a 37°C por 10 min una pasta concentrada de la enzima catalasa. .22 x 10 min~ exp . Pr I —23453 caí \ 15 l In —2. con T = 4°(7 y t=90 min. Pr i o In — . I mi. i «o exp I .2. se desnaturaliza en un 28 %. mol k0 = 3. FUNDAMENTOS Ejemplo 13.99 mo°^oK x 277° K I Pr0 -ET Pr Pr 1 = 1-10 Pr o i = 0.= 3.16) se pueden obtener dos ecuaciones que permiten determinar los parámetros k0 y E. se desnaturaliza 63 % de la enzima.63 Pr.Desnaturalización de catalasa. ^ 90 min Pr \ 1.453 —. « .7. Cuando se seca a 20°(7 por 30 min. ™ FI -E . « « „ \ 10 min ¡ ™l moí-°A' ' In — ° — = &0 exp | v Pr0 . .. Estimar el grado de desnaturalización si el material se seca por 90 min a 4°C.0. = ^ — Pr0 . utilizando la misma ecuación.

762

CAPÍTULO 13. SECADO

13.3

Equipo de Secado

El equipo de secado es muy variado. Los empleados en los procesos biotecnológicos se pueden clasificar de acuerdo al método de secado empleado en: • Secadores adiabáticos. • Secadores no adiabáticos.

13.3.1

Secadores Adiabáticos

Los principales tipos de secadores adiabáticos (Quinn, 1983) son: - El secador por aspersión. - El secador instantáneo. - El secador de lecho fluidizado.

Secador por Aspersión
En los equipos de secado por aspersión (Figura 13.4) es posible secar soluciones o suspensiones de sólidos, rociando éstas en un recipiente a través del cual se hace pasar una corriente de aire caliente. Los secadores por aspersión son utilizados para la producción de grandes volúmenes de productos termolábiles como enzimas, levaduras y proteínas. Uno de los componentes claves del secador por aspersión es el atomizador que permite formar pequeñas gotitas de la mezcla, incrementando notablemente el área de secado, de tal manera que el tiempo del secado sea menor que el tiempo que dura la gota en alcázar la pared del recipiente. Existen dos tipos básicos de atomizadores: Los tipos disco giratorio (15,000 a 24,000 rpm) y los tipos de eyector a presión. El primero es más empleado en los procesos biotecnológicos debido a que presentan menos problemas de taponamiento y ofrece la posibilidad de controlar el tamaño de la gota controlando la velocidad del disco.

13.3. EQUIPO DE SECADO

763

Alimentación

X*Xx'

~NvO»

V\

Calentador de aire

Figura 13.4: Secado por aspersión. Tomada de: Brocklebank, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

764

CAPÍTULO 13. SECADO
Salida de aire

Calentador de aire

Figura 13.5: Secador instantáneo. Las capacidades de los secadores por aspersión son muy variadas. Las capacidades de evaporación varían de 1 Kg/h hasta 2 Ton/h de agua, con dimensiones típicas de 2 x2 x3.5 m para los modelos pequeños y de 10 x 5 x 12 ra para los modelos intermedios. Secador Instantáneo Los secadores instantáneos o flash (Figura 13.5) son utilizados para secar sólidos de baja humedad o sólidos difíciles de manejar por formar partículas muy pequeñas o ser muy pegajosos en forma seca (proteínas y almidón). En un secador instantáneo el material sólido que se va a secar se alimenta conjuntamente con aire caliente a un ducto, a través del cual el sólido viaja y se seca por acción del aire. Al final del ducto la corriente

13.3. EQUIPO DE SECADO

765

de aire-sólido se separa por acción de un ciclón. Parte de la corriente es recirculada para secar las partículas grandes que son más difíciles de secar. Si debido a su tamaño las partículas de la alimentación no pueden ser transportadas por el secador, el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de secado. Secador de Lecho Fluidizado El secador de lecho fluidizado (Figura 13.6) puede ser utilizado para secar rápidamente materiales sólidos que permitan su fluidización por medio de una corriente de aire caliente (Treybal, 1980). El material se alimenta a un lecho soportado por una malla inferior y se le hace pasar una corriente de aire caliente, de tal manera que las partículas del sólido se separan y forman una suspensión fluida, que permite su transporte hasta el punto de descarga. Los secadores de lecho fluidizado continuos pueden ser circulares, cuadrados o rectangulares en su sección de flujo. Pueden alcanzar capacidades de hasta 10 Ton/h de producto seco, mientras que los intermitentes son utilizados en escalas más pequeñas del orden de 500 Kg/carga.

13.3.2

Secadores no Adiabáticos

Los secadores no adiabáticos requieren un sistema de calentamiento y generalmente trabajan con sistemas de vacío. Los principales secadores no adiabáticos utilizados en biotecnología son: el tipo charola, el de doble cono, el tambor rotatorio y el liofilizador (De Vivo, 1983). Secador de Charola Los secadores de charola (Figura 13.7), son utilizados a escala piloto o para producciones bajas de productos de alto valor económico, suceptibles a temperaturas elevadas o a daño por manejo mecánico excesivo. En el secador de charola la muestra se coloca en las charolas y éstas dentro de una cámara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de vapor y la cámara cuenta con un sistema de vacío, lo cual permite el secado de la muestra a condiciones moderadas.

766

CAPÍTULO 13. SECADO
Alimentación de los sólidos

Salida de los sólidos secos

Figura 13.6: Secador de lecho fluidizado.

Conexión de vado

Puerta

Charolas

—(Conexiones para _T~ calentamiento

JJ,

¿J,

Figura 13.7: Secador de charola.

13.3. EQUIPO DE SECADO

767

Secador de Doble Cono
El secador de doble cono es un secador giratorio al vacío (Figura 13.8), que tiene dos conos unidos por sus bases por medio de un cilindro corto. Este recipiente gira sobre un eje para inducir el movimiento del material y evitar zonas de sobrecalentamiento. El secador cuenta con un sistema de vacío para facilitar el secado. Este tipo de secador es ampliamente utilizado en la obtención de productos biotecnológicos a escala industrial.

Secador Tipo Tambor Rotatorio
El secador tipo tambor rotatorio (Figura 13.8b) es un recipiente cilindrico horizontal que no gira y el movimiento del material se realiza por acción de agitadores internos que remueven el material de las paredes calientes del tambor.

Liofilizadores

Los liofilizadores son utilizados para obtener sólidos secos de alto valor comercial. Se emplean cuando los sólidos muy lábiles o frágiles para ser tratados por un método convencional de secado o una filtración, o bien son muy solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por precipitación o cristalización. La liofilización ha sido empleada para la obtención de enzimas, hormonas y otro tipo de proteínas de uso farmacéutico. En un proceso de liofilización (Figura 13.9) la solución a secar con una concentración entre 5-25 % peso/volumen se alimenta a un sistema de filtrado (0.2 (¿m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estéril. En el proceso de secado la solución primero se congela, y posteriormente se deshidrata mendiante un sistema de calentamiento y un sistema de vacío, acoplados de tal manera que el agua de la muestra siempre esté en forma sólida y su pérdida sea sólo por sublimación.

768

CAPÍTULO 13.

SECADO

conexiones para calentamiento conexión de vacío

motor

(a)

válvula de descarga

agitador

alimentación

conexión
de vacjo

\

motor válvula de descarga

(b)

Figura 13.8: a) Secador de doble cono b) Secador de tambor rotatorio.

13.4. DISEÑO DE SECADORES
placa de P--" calentamiento

769

muestra congelada chaqueta refrigerada cubierta seca núdeo congelado

producto seco

Figura 13.9: Proceso de liofilización.

13.4

Diseño de Secadores

Los métodos para el diseño de equipos de secado están íntimamente relacionados con la forma en que se transfiere el calor en el equipo y con el grado de complejidad de la descripción del mismo. Dos tipos de diseño de secadores son de particular importancia: • Diseño de secadores adiabáticos. • Diseño de secadores no adiabáticos.

13.4.1

Diseño de Secadores Adiabáticos

El diseño de un secador requiere de la determinación de valores experimentales. Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material sólido, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal menera que sólo se exponga la superficie del sólido a la corriente de aire que se utilice para secar. La variación de la humedad del sólido puede medirse por medio de una balanza. Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a las que se utilizarán a gran escala. La Figura 13.10 muestra una curva típica de un secado experimental. La Figura 13.10a muestra la variación del contenido de humedad de

770

CAPÍTULO 13.

SECADO

Tiempo

Contenido de agua

Figura 13.10: Curva de secado experimental. Tomada de: Porter ti a/, 1973.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill inc. Copyright ©1973. Todos los derechos reservados.

sólido (W) con el tiempo. Diferenciando estos datos se puede obtener la velocidad de secado y granearla contra el contenido de humedad como aparece en la Figura 13.10b, o contra el tiempo. Revisando la forma de las curvas de la Figura 13.10 se observan dos regiones: La región A-B de las curvas, donde la humedad del sólido desciende linealmente y la velocidad de secado se mantiene constante, llamada región de velocidad de secado constante; y la región B-C de las curvas donde la humedad decrece en forma más lenta y la velocidad de secado desminuye con el tiempo, llamada región de velocidad de secado decreciente. Las regiones características del secado pueden ser racionalizadas en

13.4. DISEÑO DE SECADORES función de los conceptos: - Agua libre en el sólido. - Agua ligada en el sólido.

771

En la región de velocidad de secado constante, se presenta la evaporación del agua libre, de tal manera que su movimiento a través del sólido por capilaridad o difusión es más rápido que su velocidad de evaporación. El secado se efectúa por evaporación de agua de la superficie saturada del sólido a través de la película estancada de aire localizada sobre éste. Cuando esta superficie empieza a perder el 100 % de saturación la velocidad de secado desminuye. El agua ligada empieza a evaporarse dentro del sólido, y el vapor a difundirse a través del sólido hasta el aire. Este proceso es más lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado. Debido a la situación descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso debe ser calculado sumando los tiempos de los períodos de secado constante y de secado decreciente. Velocidad de Secado constante Cuando el calor de evaporación en el período de velocidad de secado constante es proporcionado por aire caliente, se establece un equilibrio dinámico entre la velocidad de transferencia de calor del aire al sólido y la velocidad de evaporación. Bajo estas condiciones la superficie del sólido alcanza la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo. De acuerdo a la Figura 13.11 la velocidad de transferencia convectiva de calor q (energía / tiempo) está dada por: q = \\A(T-Ti) donde: h: Coeficiente de transferencia de calor entre la superficie del sólido y la película estancada de aire sobre ésta (análogo a los coeficientes de transferencia de masa), [cal/L2 —° —t}. A: Área expuesta al secado. [Z/ 2 ]. (13.17)

772

CAPÍTULO 13. SECADO

gas

T. H, C

Cj.Tj.Hj

Humedad hada la superficie

Figura 13.11: Transferencia convectiva de calor. T: Temperatura en el seno del aire. [°]. TÍ: Temperatura en la superficie del sólido. El flux másico de agua puede ser expresado como:

J = k(d - C)

(13.18) (13.19)

J = kp(Hi-H) donde:
J: Flux de agua. [M/L2 - t]. C{\ Concentración de agua en la superficie del sólido. [M/L3]. C: Concentración de agua en el seno del aire. [M/L3].

k: Coeficiente de transferencia de masa en la película estancada de aire sobre el sólido. [L/t]. p : Densidad de aire seco. [M aire seco/L3 de mezcla].
p: l/VH

El balance de agua en el sistema puede expresarse como:
m

dW = -JA dt

(13.20

13.4. DISEÑO DE SECADORES

773

donde m es la masa de sólido seco utilizado y W la humedad del sólido. Combinando las ecuaciones (13.19) y (13.20) se obtiene: (13.21)

dt

m

este resultado es difícil de utilizar debido a que generalmente las humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de la ecuación (13.21) se expresan en función de temperaturas combinando esa ecuación con el balance de energía. En un proceso adiabático la transferencia de calor del aire al sólido es igual al total del calor latente de evaporación, de tal manera que: Calor transferido = (Calor latente de evaporación) (Masa evaporada) o bien, q = XJA (13.22)

Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y (13.22) se puede obtener la siguiente expresión:

esta ecuación es equivalente a la ecuación (13.21), pero está expresada en función de dos temperaturas fácilmente medibles: la temperatura de bulbo seco del aire T y la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo Tt. Se puede calcular el tiempo de secado en el período de velocidad de secado constante integrando la ecuación (13.23) entre los limites siguientes: t=O W = W0 t = tc W=WC obteniéndose:

,, \\A(T -

(13.24)

774

CAPÍTULO 13. SECADO

donde tc es el tiempo para alcanzar la humedad crítica del sólido que es la humedad a la cual termina el período de velocidad de secado constante. Para el cálculo de tc es necesario calcular h. Este coeficiente depende de la geometría del secador: En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un sólido y una temperatura entre 45 — 150°C, el coeficiente de transferencia de calor puede ser evaluado con la ecuación, h = 0.0204 G°-8 donde: G: Flux másico de aire. [Kg/h — m 2 )]. h: Coeficiente de transferencia calor. [Watts¡m2 —° A']. En el caso de gases en flujo turbulento y sistemas aire-agua, también puede ser utilizada la analogía de Reynolds la cual establece una relación directa entre el coeficiente de transferencia de masa y el coeficiente de transferencia calor de la siguiente forma:
k = -^ pCp (13.26)

(13.25)

donde: k: Coeficiente de transferencia de masa dado por la ecuación (13.18). p: Densidad másica total del gas. Cp: Capacidad calorífica. [cal/M—0]. La ecuación (13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la ecuación (13.25) o con la (13.26).

13.4. DISEÑO DE SECADORES Velocidad de Secado Decreciente

775

En el período de secado de velocidad constante generalmente se evapora la mayor parte del agua contenida en el sólido, pero puede implicar sólo una pequeña fracción del tiempo total de secado. Por otro lado, el período de velocidad de secado decreciente puede involucrar una evaporación menor de agua pero una mayor fracción del tiempo total de secado. En el período de velocidad de secado decreciente la evaporación del agua (ligada) es más difícil, la velocidad de evaporación depende de su movimiento por difusión o capilaridad al interior del sólido en forma de vapor o en forma de líquido. El análisis detallado del período de velocidad de secado decreciente es complejo y su descripción se realiza en forma aproximada. Uno de los modelos más sencillos para describir este período establece una relación lineal de la velocidad de secado con la humedad, de la siguiente forma:
dt

= -aW

(13.27) v ;

donde a es una constante. La ecuación (13.27) puede integrarse entre los límites:
t = te t =t W =WC W =W
1

obteniéndose la ecuación siguiente: *-*« = -ln^
W

(13.28)

El tiempo total de una operación de secado puede calcularse sumando las ecuaciones (13.24) y (13.28):

En el diseño de secadores el cálculo del tiempo de secado permite su dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersión, el tiempo de secado debe ser menor al tiempo que dura la partícula en alcanzar la pared del secador, de tal manera que cuando esto ocurra la partícula ya este seca y deslice suavemente por la pared del secador. Es decir, el tiempo de secado determina el diámetro del secador.

776

CAPÍTULO 13. SECADO
Ejemplo 13.8 .- Secado en la región de velocidad constante.

Un material granular insoluble se va a secar en una charola de 45.7 x 45.7 x 2.54 cm. El material ocupa completamente la charola y se puede considerar que los lados y el fondo de la bandeja están aislados, de tal manera que el calor sólo se transmite por convección desde una corriente de aire que fluye paralela a la superficie a una velocidad de 6.1 m/s. El aire está a una temperatura de 65.6 °C y tiene una humedad de 0.010 Kg de agua/Kg de aire seco. Estimar la velocidad de secado del sólido. Solución: Para el cálculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuación (13.23):

m dW

h

El empleo de esta ecuación requiere calcular T t , h y A. a) Cálculo de T¿. Para una humedad de H = 0.010 y una temperatura de bulbo seco de 65.60C, mediante la carta psicométrica y utilizando la linea de saturación adiabática se puede encontrar, TÍ = 28.9°C b) Cálculo de h. Se puede utilizar la ecuación (13.25) con G = vp. Para el cálculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumer húmedo del aire. Utilizando la ecuación (13.10), , m3 de mezcla = (0.00283 + 0.00456//)(T + 273) Kg de aire seco m3 de mezcla = v(0.00283 + 0.00456 x0.01)(65.6 +273) ——; : M [Kg de aire seco

VH

VH VH

= 0.974

m3 de mezcla Kg de aire seco

La densidad de 1.0 Kg de aire seco y 0.01 Kg de agua acompañant
es:

13.4. DISEÑO DE SECADORES

777

_ 1_+0.01 El flujo másico es:

G =

s/ \
h — m2

m

G = 22,770

El coeficiente de transferencia de calor es:

h = 0.0204(22,770)°'8 Watts
h = 62.45

m2 -° K

c) Cálculo de A El calor de evaporación se obtiene de tablas de vapor a T, = 28.90C, este valor es: A = 2,433^ Kg y de acuerdo a la ecuación (13.23),
m dW dt
m c?VF A dt
es:

62.45

x x ^ x (65.6 - 28.9)°A' 2 , 4 3 3 x 1000 J

'

/^ de agua h — m2

el área de transferencia de acuerdo a las dimensiones de la charola

A = 0.457 m x 0.457 m /I = 0.209 m 2

. de tal manera que la velocidad de secado es: dW Kg de agua m—¡— = 0. y es calentado hasta 150°C en un intercambiador de calor utilizando vapor en forma indirecta.12.4 Kcal/Kg — ° C y la temperatura de referencia es de 0°C.50 % G Calentador de aire 316 JSSL de antibiótico h T = 60°C. Se requiere utilizar un secador por aspersión.12: Secador por aspersión.9. en un arreglo como el que se muestra en la Figura 13. H= 5% Figura 13. . el cual sale con 5 % de humedad y a 60°C. El aire que entra al secador es tomado de la atmósfera a 15° (7 y con 50 % de humedad. SECADO F-(Kg/h) 25% (Kg/Kg) 758C Aire T=15 8 C H . para secar una solución de antibiótico que contiene 25 % (Kg/Kg) de sólidos y se encuentra a una temperatura de 20°C. El aire de salida tiene una temperatura de 750C. Si se desea producir 316 Kg/h de antibiótico.709 dt h Ejemplo 13. estimar: a) El flujo de alimentación.778 CAPÍTULO 13.Secado de un antibiótico. La capacidad calorífica de los sólidos es de 0.

0.- "^ \ f r> r\r ^^ SO ^aOS \ Kg totales J hJ \ F = 1200 I<9 h \ Kg totales J b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de agua en los sólidos.005 — Kg de aire seco El balance de energía está dado por: [Entalpia de la alimentación] + [Entalpia del aire a la entrada]: . #1 .05 — h J\ Kg ) Agua evaporada = 884 -r— h c) La humedad del aire a la salida y el flujo de aire. Solución: a) El flujo de alimentación puede ser calculado mediante un balance de sólidos. Kg _ —r. Entrada de sólidos = Salida de sólidos ( F} í f) 9*» "^ ~~ ~ ——' i / 01.4. DISEÑO DE SECADORES 779 b) La cantidad de agua evaporada en el proceso.2.0. Agua evaporada Agua evaporada = Agua a la entrada — Agua en el producto = 1200 —. pueden calcularse mediante un balance de masa y un balance de energía. 67(# 2 -#i) = 884 n HI puede encontrarse con los datos del aire de entrada y la carta pisicométrica de la Figura 13.75 h ) V Kg Kg\ f n. c) El flujo de aire necesario y la humedad de aire a la salida.13.

C J (6o -ore — Kg 316 .8^ h La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuación (13.005 + (1.05 (60 .4—solido.75 „ — h ) \ Kg ) Kcal \ Kg de agua —°C = 15.187 KJ ..300 I<Cal l5-0)'g h La entalpia del producto es: desóhdo 316 . {[1.005)} KJ Kg de aire seco J \4.0)'C Kg de agua —°L = 8.005)] (150) (2502)(0. o. o.12).780 CAPÍTULO 13.4 K9 Kg sólido -° KQ\ ( Ka de aqua\ 1200 -± 0.884)(0.95 0 ] I o.152. [Entalpia del producto] -f [Entalpia del aire a la salida] La entalpia de la alimentación está dada por: {a de sólido SECADO 0.

Secadores no adiabáticos giratorios.13.005 + (1.4.884)(//2)] (75)+ Kg de aire secoJ y4.3 GH-2 = h El balance de energía puede ser expresado como: (15. Dos tipos de secadores no adiabáticos son de particular importancia: .33 G) = (8152. a través de una pared.300) + (39.4. hacia el sólido que se desea secar.0341 Kg de aire seco 13. Este tipo de secado se efectúa al vacío para remover rápidamente el vapor formado.320 2 = 0.Secadores no adiabáticos de torta estacionaria. DISEÑO DE SECADORES = 39. .2 Diseño de Secadores no Adiabáticos En los secadores no adiabáticos la velocidad de secado depende de la velocidad de transferencia de calor. . La velocidad de secado debe ser tal que evite la formación de zonas de sobrecalentamiento que dañen el material.8) + (18 G + 631.3 GH2) resolviendo simultáneamente las ecuaciones de balance de masa y energía se obtiene: G = 30.187 KJ Kcal 18 G + 631.33 G Kcal h 781 de igual manera la entalpia de aire a la salida es: {[1.

de tal manera que el calor transferido de la pared hacia el sólido es igual al valor de estado estacionario (constante) dado por: q = \iA(T0-Tz) que para el caso de sólidos puede ser expresada como: (13. Este calor permite que el agua se evapore a partir de una superficie móvil localizada a una distancia Z.13. se transfiere por la pared del recipiente y a través del sólido. aumentando la zona seca. el calor para producir la evaporación (o la sublimación) del agua. De acuerdo con la Figura 13. Secado de Tortas Estacionarias Para calcular el tiempo de secado de sólidos en charolas o en liofilizadores se puede utilizar un modelo aproximado. no se transportan en el interior del sólido. Conforme el sólido se seca el frente desciende.30) donde: .782 CAPÍTULO 13.13: Secado de tortas estacionarias. De acuerdo con el modelo el secado del sólido se logra cuando la distancia Z es igual a cero. Arriba de esta superficie el sólido está seco y abajo de ella húmedo. El tiempo para lograr lo anterior se puede obtener realizando balances de energía. SECADO límite del sólido sólido húmedo M Calor Figura 13. Suponiendo que la velocidad de secado es lenta. Este modelo implica que tanto el agua líquida ligada como la no ligada.

[cal/t]. [cal/M]. T0: Temperatura en la base de la charola.32) donde: A: Área de la sección transversal de la charola. t =t se obtiene: Z= Z (13.31) y (13. Combinando las ecuaciones (13. TZ' Temperatura en el frente de secado. [L2]. A: Calor de evaporación.13A.33) al final de la operación cuando t = t j . [M/L3]. todo el sólido está seco y Z — O. la ecuación (13. [°j. DISEÑO DE SECADORES h: Coeficiente de transferencia de masa. [°]. 783 El calor transferido puede ser relacionado con el movimiento del frente de secado por medio del balance de calor en estado estacionario: [Calor transferido] = (Agua e vaporada) (Calor de evaporación) o en forma de ecuación: (13. K: Conductividad térmica. p0: Concentración de agua ligada y no ligada por volumen de sólido mojado.33) se puede expresar como: . [cal/ L2 — t—°].32) e integrando entre los limites. q: Flujo de calor. [cal/L — t—°].

es decir: Í A Piloto V / Industrial 3 Esta ecuación supone que las condiciones a nivel piloto son iguak a las de nivel industrial: Las temperaturas. se mantiene constante al cambiar de escala.33) también puede utilizarse para calcular la evolución del secado con el tiempo. los niveles de vacío. SECADO [K(T0-TZ)\ (13. Si el espesor se dobla el tiempo de secado se incrementa cuatro veces. es más compleja. y ' porcentaje del volumen total que es ocupado por el sólido.784 CAPÍTULO 13. expresándola de la siguiente manera: Z [ (2K(T. como porcentaje o fracción de la zona seca 0.-TZ)\Y 0 -T i -I = 1 p. de tal manera que las partículas contactan h superficie caliente en forma intermitente y en repetidas veces.34) Este resultado indica que el espesor de la torta es un factor importante en el tiempo de secado. La carga de materia se mueve constantemente. durantí su residencia en el equipo de secado. Secado Giratorio La descripción del secado en equipos giratorios como los secadores de tipo tambor o los de doble cono.w )'] (13 35) ' El análisis anterior es sencillo y útil como punto de partida en el diseño de secadores no adiabáticos. . El diseño de este tipo de secadores se basa en determinaciones ex perimentales a nivel piloto y un escalamiento considerando que el pro ducto del tiempo de secado. por el área de secado por unidad de volu men. La ecuación (13.

El secado no adiabático se realiza mediante un calentamiento indirecto del material de interés. Los secadores adiabáticos más utilizados son el de aspersión. reducir su volumen y preservar su actividad. Existen diversos equipos de secado. Consiste en una reducción del contenido de humedad de los sólidos con el propósito de mejorar su estabilidad. Las formas de realizar una operación de secado se clasifican en adiabáticos y no adiabáticos. . los cuales se pueden clasificar mediante la forma en que se realiza el secado. tambor rotatorio y los liofilizadores. El diseño de los secadores está basado en una combinación de la teoría de secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de interés.5. el secador instantáneo y el de lecho fluidizado. SUMARIO 785 13. En el secado adiabático se agrega aire caliente directamente sobre el material que se desea secar.13.5 Sumario El secado es una operación empleada en la preparación final de los productos. de doble cono. Entre los no adiabáticos se pueden citar los secadores tipo charola.

2 °C.Una mezcla ai re-vapor de agua tiene una temperatura de bulbo seco de 65.9 % 13.765 Kg de un alimento mediante..Una torta de filtrado se coloca en una charola de 30.El aire de una habitación tiene una humedad H de 0.5 x 2. Resp. El aire fluye en forma paralela a la superficie con una velocidad de 45.2 Kg de agua/Kg de sólido seco. Estimar el tiempo para pasar el sólido de una humedad inicial de 0.786 CAPÍTULO 13. se encuentra a 32.0175 Kg de agua/Kg de aire seco 13.%H = 60% 13. Se seca por la parte superior con aire cuya temperatura de bulbo húmedo es de 26.Se desea secar aire con temperatura de bulbo seco de 37. (a) Calcular la humedad y porcentaje de humedad iniciales..2 °C y a una atmósfera de presión.3 h 13.7 °C. t = 13.0115 Kg de agua/Kg de aire seco.3.un flujo de aire sobre la superficie superior de una charola d< 0.54 cm.8 °C y temperatura de bulbo húmedo de 26. hasta su humedad crítica de 0. H = 0.5. SECADO 13. (b) H = 0. se obtuvieron los siguientes datos: . Calcular la humedad de la mezcla..9 °C..9 °C.6°C y una temperatura de bulbo húmedo de 32.6 °C para condensar vapor de agua y después calentándolo a 23.75 m/min.6 Problemas 13. Resp.186 m 2 de área. (b) Calcular la humedad y el porcentaje de humedad finales.5 % (b) 68.5 x 30.. enfriando primero a 15. (a) 67. b) El porcentaje de humedad relativa.2. Resp.1.6 °C y su temperatura de bulbo seco es 48.En el secado de una muestra de 3. Calcular: a) El porcentaje de humedad del aire de la habitación. Resp.021 Kg de agua Kg aire seco.09 Kg de agua/Kg sólido seco.4.

8 1. d) Resp.13. 0.4 0.4 2.978 3.0 12.0 4. 0.944 4.150 4. d) Estimar la humedad crítica.885 4.0 7. f) Estimar el tiempo para disminuir la humedad del sólido de 0. c) Estimar la velocidad de secado en el período de velocidad constante.2 3.09 Kg/Kg.m2. b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y granearla contra la humedad del sólido.0 9. 0. e) Estimar la humedad de equilibrio.241 4.699 4.17 Kg/Kg] e) Resp.554 4.808 4. PROBLEMAS Tiempo (h) 0. c) Resp.05 Kg/Kg] f) Resp.404 4.0 0. 4.6.1 h .019 3.0 Peso (Kg) 4.2 5.25 a 0.996 Kg/h .955 787 a) Granear los datos de humedad del sólido W contra el tiempo.

SECADO 13. Downstream processing plant and equipment. y Hu. 1983. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook. Me Graw Hill. H. 1973. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. Principies. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook. Operaciones de Transferencia de Masa. (Ed. México. Lucas. J. D. Cussler. and Equipment. Asenjo. Gassolid systems.). (Eds.C. y Chilton C.. New York. H. 2 ed. P. H. Perry. J.H. y Wells.L.P. Principies. New York. Adiabatic drying. 617-740. 5th Ed. 1-121.C. Nonadiabatic drying. Vogel.Y. En: Separation Processes in Biotechnology. Noyes Publications. R. (Ed. McCormick.J.F.E.A. R. . Process Design. (Ed. 317-330. 331-362. 1988. En: Chemical Engineer's Handbook. Process Design.H. Brocklebank..A. Marcel Dekker. 11. and Equipment. 12. 19. Quinn. E. John Wiley and Sons.7 Bibliografía Belter. 1983.). 1980. Vogel. 723-791. Me Graw Hill. 11.E.L. Porter. New Jersey. 307-333. M.). Treybal.). 1990. New York. New Jersey. 12. De Vivo. W. P. J. 20.788 CAPÍTULO 13. Noyes Publications.. R.

Con el propósito de resaltar algunas características básicas de los productos biotecnológicos. sólo para citar algunos ejemplos. selección y manejo de las operaciones de bioséparación. El conocimiento de las características básicas de estos productos es fundamental para el diseño.Apéndice A Material Biológico A. En la sección A.2 Células y Virus En 1938 Matthias Schleiden y en 1939 Theodor Schwann establecieron que las plantas y los animales están compuestos de células. en la adsorción.4 se establece la forma como puede describirse el crecimiento celular. Finalmente en la sección A. azúcares y ácidos nucleicos. las cuales 789 . precipitación. en este apéndice se presenta una descripción general de la estructura y función de las células y sus principales compuestos. A.2 de este apéndice se abordan algunos conceptos básicos sobre la estructura celular. En las operaciones de liberación de producto es muy importante la naturaleza de la membrana y pared celular. lípidos.3 se presentan las principales moléculas biológicas: proteínas. compuestos extracelulares o compuestos intracelulares.l Introducción En los procesos de bioseparación los productos finales pueden ser células enteras. en la sección A. electroforésis es necesario conocer las cargas externas de los productos.

Los virus constituyen también una entidad biológica de gran importancia biotecnológica. El conocimiento actual de los organismos vivos. autorregulables y autoreplicables. el cual promueve múltiples reacciones secuenciales para la transferencia de energía y para la síntesis de sus componentes. MATERIAL BIOLÓGICO son la unidad básica de los seres vivos (Brachet. por medio de catalizadores orgánicos que ellos mismos producen (Lehininger. Los organismos vivos pueden clasificarse dependiendo de la estructura y complejidad de sus células en procariotes y eucariotes. Dentro de estas categorías se han agrupado desde los más simples hasta los más complejos. operando bajo el principio de máxima economía en cuanto a partes y procesos. de moléculas orgánicas autoensamblables. En esta sección se revisan las características básicas de cuatro tipc de organizaciones biológicas que participan en las bioseparaciones: • Células procarióticas • Células eucarióticas • Células recombinantes • Virus . 2. 1961). 1989). Todos los seres vivos están compuestos de células y productos celulares. isotérmico. Recientemente el hombre ha sido capaz de modificar el contenido genético de las células mediante la transferencia controlada de genes. Sólo se forman células nuevas a partir de células preexistentes.790 APÉNDICE A. a pesar de no constituir propiamente organizaciones celulares. En la actualidad la teoría celular comprende dos ideas básicas: 1. permite afirmar que un organismo vivo es un sistema abierto. creando las células recombinantes. desde los unicelulares hasta los vegetales y mamíferos.

Esta membrana es una característica común a todas las células y tiene funciones únicas. y su función es darle protección a la célula La membrana plasmática de las células procarióticas delimita a la célula y está compuesta por un 45% de lípidos y un 55% de proteínas. coli) que es una procariote típica. Es en las moléculas de DNA donde se almacena la información genética que le permite a la célula reproducirse y vivir. Los ribosomas son estructuras supramoleculares conformadas por dos subunidades. entre las que destaca su papel como barrera altamente selectiva en la regulación del transporte de moléculas hacia adentro y hacia afuera de la célula. en ellas se lleva a cabo la traducción del mensaje genético para realizar la síntesis de proteínas.l muestra la estructura de una célula de Escherichia coli (E. Las dimensiones típicas de estas células van de 0. La pared celular o membrana externa.5 a 3 finí.2. La región nuclear está desprovista de membrana. CÉLULAS Y VIRUS 791 A. Aún cuando existen miles de especies diferentes de . razón por la cual en ocasiones el material nuclear (ácido desoxirribonucleico o DNA) puede agruparse en más de una región. zona nuclear. El citosol es todo el material celular contenido por la membrana.2.A.1 Células procarióticas Las células procarióticas son las primeras células que surgieron de la evolución biológica. Dentro de los organismos procariotes se encuentran las bacterias y las algas cianófitas. Los granulos están compuestos de polisacáridos y funcionan como almacenes de combustible. péptidos y lipoproteínas. son tan sencillas que poseen únicamente una membrana celular y no contienen núcleo. Está compuesta de polisacáridos. así como sus principales componentes: pared celular. La Figura A. ribosomas y granulos. es una estructura que encierra a toda la célula incluyendo la membrana plamática y aparece en algunas células procarióticas. membrana. Bacterias Las bacterias son los organismos procarióticos de gran importancia biotecnológíca.

792 APÉNDICE A. coli). . a) pared celular b) membrana plasmática c) zona nuclear d) ribosomas e) granulos f) citosol.l: Estructura típica de una célula procariote (E. MATERIAL BIOLÓGICO Figura A.

Metabolitos secundarios como antibióticos. sin embargo presentan una gran diversidad fisiológica que les ha permitido desarrollarse en una gran variedad de habitats. se pueden presentar dos casos: que la bacteria excrete el producto como parte de su metabolismo. Las diferencias morfológicas entre las bacterias no son muchas. 1989).2 se presenta una comparación de las principales características de estas bacterias(Tortora et a/. soportando pH's en el rango de 1 a 11. En el segundo caso cobra especial importancia el conocimiento que se tenga sobre las estructura de la pared y de la membrana celular. siendo capaces de desarrollarse tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas (Millis. a las que presentan forma esférica se les llama cocos y presentan un diámetro del orden de 1 fim. En particular.A. pigmentos y polisacáridos. Metabolitos primarios como aminoácidos.2. CÉLULAS Y VIRUS 793 bacterias.5 a 1. Al utilizarse una bacteria para obtener un producto biotecnológico.l se presentan algunas de las células procarióticas que se utilizan para producir productos finales y metabolitos.0 firn de ancho por 2 a 3 //ra de largo. proteínas y nucleótidos. En el estudio de la pared celular de bacterias se ha empleado la técnica de tinción de Gram que ha permitido clasificar a las bacterias en bacterias Gram positivas (Gram-(-) y bacterias Gram negativas (Gram). y temperaturas entre O y 92°C'. o que el producto permanezca dentro de la bacteria. Productos finales como solventes y ácidos. las células de estos organismos se caracterizan por presentarse solamente en una de tres formas diferentes: esférica o elipsoidal. Los productos que se obtienen mediante la fermentación con células procariotes pueden ser: Biomasa o protema unicelular. A las que tienen forma de bastón se les llama bacilos y tienen dimensiones del orden de 0. . ya que el proceso de bioseparación que se diseñe debe contemplar la ruptura de la célula. cilindrica o de bastón y helicoidal o de espiral. En la Tabla A. 1985). así como el de la ubicación del producto. En la Tabla A.

coagulants E. canamyceticus S. ammoniagenes B. eriytkreus 5. . circularía A. brevis B. coli. polymyxa B. acetobutylicum Z. subtilis B. mesenteroides X. subtilis E.l: Productos obtenidos de organismos procarioticos Producto Organismo Producto Enzimas Amilasa Asparagiiiasa Catalasa Fumarasa (3. subtillis ammoniagenes subtillis ammoniagenes L. gluiamicum " " " " Lactasa Penicilin acilasa Peuiciliiiase B.Glucanasa Glucosa isomerasa C. lysodeikticus B. Copyright ©1985.794 APÉNDICE A. mussouriensis B. B. subtilis Organismo Ácidos (orgánicos) Acético Glucónico Láctico 2-Oxoglucónico Ácidos (amino) Glutámico Isoleucina Leucina Lisina Valina A.eniform. 1985. coli E. lincolnensis 5. griseus S. mobilis Fuente: Millis. aceti P. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. B. fluorescens Antibióticos de Bacilos Colistina Gramicidina S.is Nucleótidos Acido guanílico Acido Xantílico Polisacáridos Dextran Xantana B. aureojaciens B. delbrueckii P. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos resé vados. campestris Solventes/combustibles Acetona Etanol C. megaterium B. carotovora M. ovalis L. lich. B. venezuelae 5. B. Bacitracin Antibióticos de Estreptomices Cloranfenicol Eritromicina Kanamicina Lincomicina Estreptomicina Tetraciclina 5. coli E.

CÉLULAS Y VIRUS 795 Tabla A.2: Características comparativas de las Bacterias Gram-f y Gram-.2. Característica Reacción Gram Gram-Positiva Gram-Negativa Puede ser decolorada Retiene el cristal violeta y permanece y permanece roja de color púrpura Gruesa (multicapa) Delgada (simple) Virtualmente no tiene Bajo Abundantes Ausente Ausente Exotoxinas primarias Alta Alta Marcada Alta Alto Alto Ausentes Presente Presente Endotoxinas primarias Baja Baja (requiere pretratamiento) Mucho menos marcada Baja Capa de peptidoglucano Contenido de lipopolisacáridos Contenido de lípidos y lipoproteínas Ácidos teicoicos Espacio periplásmico Membrana exterior Producción de toxinas Resistencia a rompimiento físico Rompimiento de la pared celular por lisozima Suceptibilidad a detergentes amónicos Resistencia a secado .A.

2 Células Eucarióticas La célula eucariótica tiene un alto nivel de organización y presenta une estructura muy compleja. animales. MATERIAL BIOLÓGICO Las paredes celulares de las bacterias Gram-f y Gram.796 APÉNDICE A.3 se presentan esquemas de células eucarióticé típicas: . A.2. protozoarios y hongos. Dglutamina).(Figura A. En la Figura A. cada uno de los cuale realiza una función específica y está limitado por una membrana propia Son células que tienen un núcleo verdadero. algunas de las más relevantes son las siguientes: . Los microorganismos constituidos de célula eucariotes son: algas. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la de disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido Nacetilmurámico. Este rígido armazón.célula animal y célula vegetal.2) poseen una característica molecular común. La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos. recibe el nombre de peptidoglucano o mureína. Son células de mayor tamaño que las proca riotes alcanzando diámetros hasta de 20 jum. El espacio periplásmico esta constituido por una sustancia semejante a un gel. ya que éste esta confinadpor la membrana nuclear. En estas últimas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. puede verse en la figura qi existen algunas diferencias esenciales entre las células vegetales y 1. los organismos superiores como los vegetak y los animales. De este tipo de célula están constituidos además. En las paredes de las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (D-alanina. en ambas existe un rígido esqueleto que está constituido por cadenas polisacáridas paralelas. entrecruzadas covalentemente por medio de cadenas peptídicas. En las células eucariotica: las funciones se llevan a cabo en organelos. que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte.

A. .b) bacterias Gram-.2.2: Estructura de la pared celular bacteriana. a) bacterias Grarn-). CÉLULAS Y VIRUS 797 pared celular capas de peptidoglucano (a) fosfolípido proteina capa de peptidoglucano lipoproteína lipopolisacarido fosfolfpido pared celular S membrana plasmática (b) fosfolípido Figura A.

Recientemente también las células eucarióticas animales han sid( utilizadas en los procesos biotecnológicos. interesan particularmente los hongos. Las células animales no presentan pared celular. Los mohos son hongos superiores con estructuras vegetativas llamadas miscelios. por ejemplo en \¿ producción de bebidas y pan. Los cloroplastos están ausentes de las células animales. En el caso de las células eucariotes además de las células de organismos superiores. Las levaduras son ampliamente usadas. Las células animales presen tan varias formas dependiendo del tipo de tejido al cual pertenecen ^ su diámetro aproximado es de 20 //m. A diferencia de las células mi crobianas. Las células vegetales presentan cloroplastos. El cultivo de células animales presenta problemas que aú: no se solucionan del todo y se encuentra en una etapa de desarrolle . En la Tabla A.4 se presen tan algunos productos obtenidos a partir de algunas célula eucariote: (levaduras y mohos). En la sección anterior se prestó atención especial a las bacterias pues este tipo de microorganismos es de particular interés en la biotecnología.3 se presenta una descripción de las estructuras celulares comunes a todas las células eucarióticas. constituida por celulosa. la velocidad de crecimiento en las células animales es baja Su crecimiento presenta inhibición por contacto. y sus funciones.798 APÉNDICE A. En la Tabla A. cuya función es similar a la de las células procarióticas: brindar protección a la célula.m. que son los organelos en los cuales se lleva a cabo la captura de la energía solar y la conversión de la misma en energía química durante el proceso fotosintético. mientras que los mohos se utilizan en le producción de ácido cítrico y antibióticos. presentan un diámetro entre 5 — 1 5 fim y una longitud entre 50 — 5000 /ira. Con frecuencia la células animales se cultivan o crecen formando tumores y actualment se están desarrollando nuevas técnicas tanto para su cultivo como par su cosecha. MATERIAL BIOLÓGICO En las células vegetales existe una rígida pared celular. Las levaduras tienen forma elipsoidal y miden de 1 a 5 fj. Los hongos son microorganismos de dos tipos: mohos y levaduras.

b) célula vegetal. .3: Células eucariotes típicas: a). célula animal.2.A. CÉLULAS Y VIRUS 799 Cuerpo de inclusión Citoplasma Vacuola Membrana celular Tilacoides Cloroplasto Figura A.

regula el paso de materiales hacía dentro y fuera de la célula. empaca (para secreción) y distribuye proteínas a vacuolas y a otros organelos. contiene nucléolo y cromosomas Cuerpo granular dentro del núcleo. comunica a la célula con otras. ayuda a mantener la forma celular. Contiene al citoplasma. Contiene enzimas que degradan material ingerido. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. Cromosomas Sistema de Membranas de la Célula Membrana Celular Membrana limitante de la Célula viva Retículo endoplasmático (RE) Red de membranas internas que se extienden a través del citoplasma Ribosomas Aparato de Golgi Granulos compuestos de RNA y proteínas. Sitio de síntesis de lípidos y de proteínas de membrana. Síntesis de polipéptidos (proteínas) Modifica. las secreciones y desperdicios celulares. desperdicios y agua.3: Estructuras comunes de las células eucarióticas y sus funciones. Compuestos de un complejo de DNA y proteínas llamado cromatina. origen de vesículas intracelulares de transporte. Transporta y almacena material ingerido. consta de RNA y proteínas. otros libres en el citoplasma Compuesto de saculacioiies membranosas planas Sacos membranosos (en animales) Sacos membranosos (en plantas. hongos y algas) Lisosomas Vacuolas . Control de la célula Lugar de síntesis ribosómica. algunos unidos al RE. que acarrean proteínas en proceso de secreción. ensamble de subunidades del ribosoma Contienen genes (unidades de información hereditaria que gobiernan la estructura y actividad celular).800 APÉNDICE A. Estructura Descripción Función Núcleo Celular Núcleo Nucléolo Gran estructura rodeada por una doble membrana.

ieh. 1985.Alcalina . oryzae A. javanicum 6. A.ei A. oryzae. CÉLULAS Y VIRUS 801 Tabla A. 11 y 15 C. ochraceus. R. niger. A. niger M. nigricus A. niger A. rn. Todos los derechos reservados. chrosogenum A.9. cereviseae A. lunata. niger Vitaminas Riboflavina Adaptada de: Millis. oryzae. A. radicóla Hidroxilación en F. gossypii . cereviseae Conversión de esteroides Deshidrogenación en 1 y 2 C. oryzae. nigricans. niger A. niger R.Acida . niger C.2. A. niger A. niger S. A. A. oryzae. A.4: Productos obtenidos de organismos eucariotes Organismos Ácidos Cítrico Furnárico Glucónico Antibióticos Cefalosporina (C y P) Zeranol Penicilinas Enzimas a— Amilasa Catalasa Glucosa oxidasa Invertasa Lipasa Proteasa . oryzeae. 7. graminearum P.Neutra Solvente/combustible Etanol A. oryzae S. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. A. Copyright ©1985.A. A. acremonium F.

1985.5: Productos obtenidos de células animales Producto Interferón Urokinasa Vacunas virales: Influenza Enfermedad de Newcastle Rubéola Fiebre amarilla Adaptada de: Millis. por medio del cultivo de células recombinantes ha sido posibl la obtención de productos tales como hormona de crecimiento. . coli. activador del plasminógeno tisular.2.3 Células Recombinantes La manipulación de la molécula de DNA utilizando técnicas de inge niería genética ha permitido transformar células silvestres en célula recombinantes. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. insulin humana. interferones. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. sólo que a las células recombinantes se le ha transferido o adicionado uno o más genes. A. La organización celular de la recombinante es la mism que la de la célula natural. Copyright ©1985. anticuerpos monoclonales. Debido a la simp cidad de las células procarióticas y a su alta velocidad de crecimient ha sido posible aplicar exitosamente en estas células las técnicas de ingeniería genética. entre otros. vacunas. Linea celular Leucocitos humanos Riñon humano Fluido Fluido Fluido Fluido de de de de embrión embrión embrión embrión de de de de pollo pollo pato pollo En la Tabla A.5 se presentan algunos productos obtenidos a partir de este tipo de células. Todos los derechos reservados. Los microorganismos más utilizados para producir células recomb nantes son las bacterias y en particular la E.802 APÉNDICE A. con el propósito que 1 célula exprese la información que está codificada en tales genes. De est manera.

. El genoma se encuentra encerrado dentro de una cápsula constituida de proteína. En esta sección se estudia la estructura y principales propiedades de cuatro tipos de moléculas constituyentes de las células: • Proteínas • Carbohidratos • Lípidos • Ácidos nucleicos A.000 y 40.2. lo cual ocurre únicamente cuando parasitan a una célula. El peso molecular de éstas oscila entre 5. A.000. Su tamaño varía entre 0. El virus carece de membrana y no tiene citoplasma.3. Cada protema tiene en su forma nativa una forma tridimensional característica llamada conformación. Los virus constituyen un material biológico cuya única función es la autoreplicación. Son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula.000 daltons.03 — 0.1 Proteínas Las proteínas son polímeros de alto peso molecular formadas por subunidades llamadas aminoácidos. constituyen el 50% o más de su peso seco.1 //m y su importancia radica en que son ampliamente utilizados en la producción de vacunas. En general los virus se clasifican por sus características morfológicas. De acuerdo a su conformación las proteínas pueden clasificarse en fibrosas y globulares. En la Tabla A.6 se listan algunas proteínas de estos tipos y se especifican sus funciones.4 Virus. BIOMOLECULAS. 3 Biomoléculas. Existen muchas clases diferentes de proteínas y cada una de ellas se especializa en una función biológica diferente.3. Su genoma puede estar constituido por DNA o RNA pero nunca por ambos y constar de una o dos cadenas.A. 803 A.

fluido sinovia! . carflago) Tejido conectivo elástico (ligamentos) Secreciones mucosas. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A.804 APÉNDICE A.6: Clasificación de las proteínas por su función biológica Tipos y ejemplos Enzimas: Hexoquinasa Citocromo c DNA-polimerasa Proteínas de reserva: Ovoalbúmina Caseína Ferritina Proteínas de transporte: Hemoglobina Mioglobina Seroalbúmina /?i-Lipoproteína Localización o función Fosforila glucosa Transfiere electrones Replica y repara DNA Proteíiia de la clara de huevo Proteína de la leche Reserva de hierro en el bazo Transporta O-¿ en la sangre de los vertebrados Transporta O-¿ en el músculo Transporta ácidos grasos en la sangre Transporta I/pidos en la sangre Proteínas contráctiles: Miosina Dineína Proteínas protectoras en la sangre de los vertebrados: Anticuerpos Fibrinógeno Trombina Toxinas: Toxina diftérica Venenos de serpiente Gosipina Hormonas: Insulina Hormona adrenocorticotrópica Hormona del crecimiento Proteínas estructurales: Proteínas de recubrimiento viral Glucoproteíiias a-Queratina Colágeno Elastina Mucoproteíiias Filamentos estacionarios en las miofibrillas Cilios y Bájelos Forman complejos con proteínas extrañas Precursor de la fibrina en la coagulación sanguínea Componente del mecanismo de coagulación Toxina bacteriana Enzimas que hidrolizan los fosfoglicéridos Proteína tóxica de la semilla de algodón Regula el metabolismo de la glucosa Regula la síntesis de corticoesteroides Estimula el crecimiento de los huesos Cubierta alrededor del cromosoma Recubrimientos celulares y paredes Piel plumas uñas pezuñas Tejido conectivo fibroso (tendones.

las proteínas se dividen en simples y conjugadas. De acuerdo a la naturaleza química de este grupo las proteínas conjugadas se clasifican en los seis grupos que se muestran en la Tabla A. 7% de hidrógeno. Las proteínas globulares por regla general son solubles en agua y tienen una función activa dentro de la célula.3. Las conjugadas son aquellas que por hidrólisis producen no solamente aminoácidos. algunas hormonas y muchas proteínas de transporte como la hemoglobina. BIOMOLECULAS. sino también algunos componente orgánicos o inorgánicos. . 1991). Dependiendo de su composición. Todas las proteínas que se conocen tienen funciones diferentes dentro de la célula y están constituidas por únicamente 20 tipos de aminoácidos. 16% de nitrógeno y de O a 3% de azufre. En consecuencia es importante conocer la estructura de los aminoácidos que las constituyen.7: Clasificación de las proteínas conjugadas Proteína Conjugada Nucleoproteína Lipoproteína Glicoprote/na Hemoproteína Flavoproteína Metaloproteína Grupo Prostético Acido nucleico Lípido Oligosacárido Hierro Nucleótido de flavina Metal 805 Las proteínas fibrosas son insolubles en agua y en soluciones salinas diluidas.7 (Palmer. también los anticuerpos. lo que sugiere que la función de cada una de ellas puede estar determinada por la secuencia de aminoácidos de su cadena polipéptidica. Tabla A. Todas las enzimas son proteínas globulares. físicamente son muy resistentes y constituyen los elementos estructurales básicos del tejido conjuntivo de los animales superiores. 23% de oxígeno. Las simples son aquellas que por hidrólisis producen solamente aminoácidos y contienen generalmente 50% de carbono. la a—queratina y la elastina.A. Ejemplos de esta clase de proteínas son el colágeno. La porción no aminoácida de la proteína conjugada se denomina grupo prostético.

Aminoácidos con grupos R no polares: Un grupo no polar e. es relativamente in soluble en soluciones acuosas y soluble en solventes orgánicos com< el hexáno. es decir.806 APÉNDICE A. De acuerdo a esta clasificación existen dos clases principales de aminoácidos: con grupos R no polares y con grupos R polares. tabilizada por puentes de hidrógeno. Los aminoácidos se caracterizan además por una cadena lateral o grupo R sustituido en su carbono a. excepto la prolina. MATERIAL BIOLÓGICO H I R-C-COOH I NHa Figura A. el grup> R del último contiene azufre y los dos restantes contienen un anill aromático dentro del grupo R. Todos los aminoácidos encontrados en las proteínas son a— aminoácidos. fenilalanina. enteramente covalente y es hidrofobia). isoleucina. es más soluble en agua que un n polar debido a que en soluciones acuosas su estructura puede ser e.4: Fórmula de la estructura general de los a— aminoácidos encontrados en las proteínas Aminoácidos La Figura A.4 muestra la estructura general de los 20 aminoácidos que se encuentran en las proteínas. Los grupos polares pueden s< . Todos ellos tienen un grupo carboxilo libre y un grupo amino libre. valina. prolina. puesto que el grupo amino está sobre el átomo de carbono a. Los aminoácidos no polares o hidrofóbicos son: alanina leucina. Aminoácidos con grupos R polares: Un grupo R polar tieri carácter iónico y es hidrofílico. Los a— aminoácidos se han clasificado en base a la polaridad de sus grupos R. triptofano y metionina Los grupos R de los primeros cinco son hidrocarburos alifáticos.

A. treonina y tirosina que deben su polaridad a sus grupos hidroxilo. Polares con carga negativa (ácidos): Los aminoácidos que presentan carga neta negativa a pH 7 son los ácidos aspártico y glutámico. presentan una estructura ionizada que genera considerables momentos dipolares. Polares sin carga : En este grupo se encuentran los aminoácidos: serina.3. Todos ellos tienen seis átomos de carbono y son: lisina. neutros. En la Figura A. Dentro de estos aminoácidos. 3. En gran medida la comprensión del comportamiento de las proteínas está basada en el conocimiento de las propiedades ácido-base de los aminoácidos que la constituyen. A pH 6 más del 50% de las moléculas de histidina poseen un grupo R cargado positivamente. arginina e histidina. la asparagina y la glutamina cuya polaridad proviene de sus grupos amídicos. por lo tanto. Los aminoácidos tanto en forma cristalina como en solución. Presentan carga negativa debido a que cada uno de ellos posee en el grupo R un segundo grupo carboxilo que se encuentra completamente ionizado y. 2. cuando un aminoácido en forma de ion híbrido cristalizado se disuelve . De acuerdo con esta teoría. Propiedades ácido-básicas de los aminoácidos. la cisteína cuya polaridad proviene de la presencia de un grupo sulfhidrilo y finalmente la glicocola. Esto se traduce en altas constantes dieléctricas y altos puntos de fusión. cargado negativamente. básicos o ácidos. BIOMOLECULAS. El comportamiento ácido-base de los aminoácidos se formula en términos de la teoría de Brónsted-Lowry. la cisteína y la tirosina son los que presentan una polaridad más marcada. Polares con carga positiva (básicos): En este grupo se encuentran los aminoácidos que poseen carga neta positiva a pH 7. La histidina presenta un grupo funcional imidazol y posee propiedades límites. 807 1. que en muchos casos se considera como no polar.5 se muestran las formas: no ionizada y de ion híbrido de los aminoácidos. pero a pH 7 menos del 10% de ellas poseen carga positiva.

si se disuelve alanina en agua ésta puede actuar en alguna de las siguientes formas (Lehninger. Los aminoácidos que forman las proteínas. puede actuar como un ácido (donador de protones) o como una base (aceptor de electrones). es la s€ cuencia de aminoácidos que forma el esqueleto covalente de dichas ca denas. s< encuentran unidos entre sí formando las llamadas cadenas peptídicas La estructura primaria como se muestra en la Figura A. MATERIAL H | BIOLÓGICO R— C— COOH NH2 R —c— COO Figura A. estructura terciaria y estructura cuaternaria. Por ejemplo. 1989): como ácido: H3N+CH(CH3)COO~ <-* H+ + H2NCH(CH)3COQcomo base: H+ + H3N+CH(CH3)COQ. con el grupo a— animo de el siguiente aminoácido de la cadena. estructura secundaria. en agua. Un enlace peptídico une el grupo a— carboxilo de un aminoácid. Est . 6 a). Estructura Primaria.«-> H3N+CH(CH3)COOH las sustancias que poseen esta propiedad son anfóteras y se denominar anfólitos. niveles estructurales de la proteína: estructura primaria.808 H I APÉNDICE A. Niveles Estructurales de la Proteína Comúnmente se emplean cuatro términos para designar los diferente. 5: Formas de un aminoácido: a) no disociada b) de ion híbrido.

Figura A. 809 a) Estructura primaría: s«cu«ncfa d* aminoácidos R« R* R« R H H O H H O H H O H H O b) Estructura secundaria: hélice y laminar aminoácido c) Estructura terciaria. .A. BIOMOLECULAS.3.6: Niveles estructurales de la proteína: a) Estructura primaria b) Estructura secundaria c) Estructura terciaria d) Estructura cuaternaria. d) Estructura cuaternaria.

6 b) se refiere al ordenamiento regular y periódico que presenta al menos parte de una cadena polipeptídica a lo largo de una dirección. MATERIAL BIOLÓGICO es un enlace covalente altamente estable en el cual el grupo imino (NH-) del enlace no posee tendencia significativa a ionizarse o a captar protones en el intervalo de pH entre O y 14 y el enlace C-N (que posee 40% de carácter de enlace covalente doble) del enlace peptídico es relativamente rígido y no puede girar libremente. Estructura Secundaria: La estructura secundaria de una proteína (Figura A. dos aminoácidos que . Estructura Terciaria: El hecho de que existen aminoácidos que pueden ocasionar el cambio de dirección de la cadena. En esta estructura los grupos R quedan fuera de la cadena y cada cadena presenta en un extremo un grupo a—amino libre y en el otro extremo un grupo carboxilo libre.810 APÉNDICE A. se ha encontrado que cada cadena polipeptídica tiene solamente una forma característica de doblamiento en esos puntos. Existe una amplia evidencia experimental que indica que el enlace peptídico es el único enlace covalente que existe entre los aminoácidos que forman la cadena. Cuando dos aminoácidos se unen por medio de este enlace se pierde una molécula de agua. conduce a que exista un gran número de diferentes posibles estructuras de la cadena originadas por la libre rotación alrededor de los enlaces en ese punto de doblamiento. por lo que se comunmente se dice que sólo se unen los residuos. Debe notarse que debido al giro de la cadena peptídica. a este arreglo específico se le llama estructura terciaria. La direccionalidad del ordenamiento se pierde con la presencia de ciertos aminoácidos en este arreglo regular y se pasa a otro nivel estructural. puede presentarse otro tipo de enlace covalente que es el enlace disulfuro de la cisteina. Sin embargo. Sin embargo. Este tipo de estructura es estabilizada por los enlaces que se presentan entre los residuos aminoácidos de diferentes partes de la cadena. La estructura secundaria es característica en las proteínas fibrosas. el cual es estabilizado por puentes de hidrógeno entre los grupos R de la misma cadena. Este actúa en algunas proteínas como enlace transversal entre dos cadenas polipeptídicas separadas o entre curvaturas de una misma cadena.

efectos dipolares (puentes de hidrógeno). éstas presentan características anfotéricas. Las proteínas mantienen su actividad biológica sólo en un estrecho rango de temperatura y pH. BIOMOLECULAS. 811 estén muy separados entre sí en la estructura primaria.3. y que es posible que la proteína recupere su conformación nativa mediante un proceso llamado renaturalización. Estructura Cuaternaria: La estructura cuaternaria se refiere a la estructura tridimensional completa de una proteína. La mayoría de las proteínas grandes. regiones neutras y regiones no polares. Ese hecho sugiere que la secuencia de aminoácidos de la cadena polipeptídica contiene la información necesaria para especificar su conformación nativa. entre éstas se encuentran: enlaces covalentes (simples y dobles). Se ha encontrado que la desnaturalización no afecta los enlaces covalentes de la secuencia peptídica (estructura primaria). interacciones de . Enlaces que Mantienen la Estructura de la Proteína Debido a los aminoácidos que conforman las proteínas. Conformación: A la estructura combinada secundaria. Las cadenas polipeptídicas de una protema poseen solamente una conformación en condiciones normales de temperatura y pH. Esto es.A. terciana y cuaternaria de una proteína se le llama conformación. de tal manera que en su superficie existen regiones cargadas positivamente. ya sean globulares o fibrosas poseen dos o más cadenas polipeptídicas. Se denomina conformación nativa y es la que le confiere actividad biológica y estabilidad a la proteína. En estas condiciones se dice que la proteína está desnaturalizada. interacciones electrostáticas. siendo el efecto más visible de esto un descenso en su solubilidad. pueden quedar espacialmente juntos en la estructura terciaria. negativamente. Por lo tanto las interacciones que mantienen la conformación de la proteína son diversas y complejas. la forma en que se disponen en el espacio las cadenas polipeptídicas individuales de una proteína que posee más de una cadena. Cuando las proteínas globulares se exponen a pH extremos o a altas temperaturas pierden su conformación y consecuentemente su actividad.

En este caso. la fuerza electrostática es mucho mayor. lo que ocasiona que las moléculas no puedan rotar alrededor del enlace. e es la carga eléctrica del electrón. el enlace covalente permite que los átomos unidos por él puedan girar libremente en torno al enlace. sea bastante estable. La fuerza (F1) entre dos grupos (A y B) en una solución diluida está dada por la Ley de Coulomb: ZAZBe2 Dr* donde Z¿ y Zg son los números de unidades de carga acarreados por el grupo A y B respectivamente. Si dos átomos comparten dos pares de electrones entre ellos entonces se forma un enlace covalente doble. MATERIAL BIOLÓGICO van der Waals e interacciones hidrofóbicas. Otro mecanismo que contribuye a la estabilidad de las moléculas de proteína. Las características más importantes de estas interacciones son las siguientes: Enlaces Covalentes. Interacciones Electrostáticas. La interacción electrostática ocurre entre pares de grupos en el mismo medio. éstos están involucrados en el mantenimiento de la estructura terciaria de la proteína. son las interacciones electrostáticas que se presentan entre los grupos cargados de éstas. Otros enlaces covalentes que se presentan son los enlaces disulfuro (S-S-) de la cistina. Por lo antes mencionado puede esperarse que la estructura primaria de la proteína. r es la distancia entre los grupos y D es la constante dieléctrica del medio . Por otra parte. la distancia es menor y el enlace es mucho más rígido. Las estructuras terciaria y cuaternaria de la proteína pueden involucrar interacciones electrostáticas entre aminoácidos con grupos R que . La distancia entre los átomos que están involucrados en este enlace es de 2 a 4 A (Angstroms). la cual está constituida de residuos de aminoácidos unidos entre si por enlaces covalentes peptídicos. en este enlace cada átomo aporta un electrón. La distribución de los electrones entre los átomos produce una fuerza neta de atracción electrostática que mantiene unidos a los átomos y les proporciona una gran estabilidad.812 APÉNDICE A. Cuando un par de electrones es compartido por dos átomos se forma un enlace covalente.

5 Kcal/mol. produciéndose así una distribución asimétrica de carga entre los átomos llamada efecto dipolar. lo cual contribuye a incrementar la estabilidad de las estructuras secundaria. BIOMOLECULAS. El enlace más importante de este tipo es el enlace de hidrógeno o puente de hidrógeno. mientras que los enlaces covalentes H-O de la misma poseen una energía de enlace de 110 Kcal/mol. 813 tengan cargas opuestas. así como también entre los diferentes residuos aminoácidos de una misma cadena. sino que los electrones pueden asociarse más con uno de ellos que con el otro.5 y 5 A°. Debido a este efecto las moléculas de agua presentan una alta estabilidad ya que todas ellas se unen por puentes de hidrógeno. y átomos de hidrógeno (carga parcial positiva) en el otro. Los enlaces de hidrógeno en agua líquida poseen una energía de enlace de aproximadamente 4. Este efecto origina que el átomo con mayor densidad electrónica tenga una carga parcial negativa y pueda formar enlaces electrostáticos débiles con otro átomo que tenga una carga parcial positiva. el cual se forma entre átomos de oxígeno (carga parcial negativa) de un grupo. Los enlaces de hidrógeno son relativamente débiles comparados con los covalentes. por ejemplo entre lisina y ácido glutámico. Sin embargo. terciaria y cuaternaria de la proteína. El . como ya se dijo antes. Enlaces de van der Waals. la molécula de agua.3. ocasionando que se intensifique la fuerza de atracción entre las moléculas de agua. Cuando la proteína se encuentra en solución acuosa se pueden establecer enlaces de hidrógeno entre los diferentes péptidos de ésta y el medio. en particular. el puente de hidrógeno presenta un efecto coligativo. La distancia a la cual ocurren este tipo de enlaces está entre 1. Efectos Dipolares En la formación de enlaces covalentes ocurre con frecuencia que el par de electrones no está igualmente compartido entre los dos átomos.A. En contraparte a su baja energía de enlace. Hay muchas moléculas que tienen un momento dipolar eléctrico permanente. Una molécula polar es capaz de atraer a otras moléculas que normalmente no presentan momento dipolar. cabe mencionar que en un medio acuoso un grupo cargado establece enlaces con el agua más fácilmente que con cualquier otro grupo cargado de la proteína.

Los carbohidratos se dividen en: monosacáridos. la~ estructura más estable para una proteína en solución acuosa será aquella que posibilite la formación del mayor número de enlaces de hidrógeno entre ésta y el medio acuoso que la rodea. Estos enlaces juegan un importante papel en el tipo de estructura tridimensional que adopta la proteína. disacáridos. oligosacácridos y polisacáridos. Las moléculas de agua se unen entre sí por medio de enlaces de hidrógeno y son muy estables. Son mucho más débiles que los enlaces covalentes y de ellos depende además. Funcionan como elementos estructurales y en particular los polisacáridos funcionan como almacenes de combustible. Ahora bien. Su radio de acción va de 10 a 1000 °A.814 APÉNDICE A. Los enlaces que resultan de estos efectos dipolares son llamados enlaces de van der Waals. Esto hace que este tipo de enlaces sea muy importante en la estabilidad de la estructura terciaria de la proteína. La fórmula general de los carbohidratos es ((7//20) n .2 Carbohidratos Los carbohidratos o sacáridos son compuestos que se encuentran en todos los seres vivos. los cambios de fase. MATERIAL BIOLÓGICO campo eléctrico de la molécula polar produce una distribución asimétrica de densidad de cargas en la otra molécula.3. con n > 3. la cohesión y la viscosidad. Enlaces no polares o Hidrofóbicos Los enlaces hidrofóbicos se realizan estre especies no polares y se explican mejor en el marco de los sistemas proteína-solvente. El resultado es una fuerza de atracción entre ellas. la adherencia. los aminoácidos que presentan grupos R no polares (hidrofóbicos) no pueden establecer puentes de hidrógeno con el agua y con frecuencia forman regiones hidrofóbicas constituidas por varios aminoácidos no polares. de tal manera que se crea un dipolo inducido en el mismo sentido al de aquella. A. . la tensión superficial. Consecuentemente. las cuales normalmente se encuentran en el interior de la estructura proteica.

A.8). Uno de los monosacáridos más importantes es la D. BIOMOLECULAS. La D-glucosa puede existir en dos formas isoméricas diferentes: a— Dglucosa y la (3— D. Los monosacáridos de tres carbonos son llamados triosas.7. Otro monosacárido de interés es el azúcar de cinco carbonos llamado D.glucosa.Ribosa (Figura A.8: Estructura química de: a) Ribosa b) Desoxirribosa Monosacáridos: D.glucosa. Un derivado importante de los monosacáridos es el ácido N .acetil- . En solución la D.glucosa Los monosacáridos o azúcares simples son los carbohidratos más pequeños y contienen de tres a nueve carbonos. los de cinco pentosas y los de seis carbonos se denominan hexosas.glucosa se presenta comunmente con una estructura en forma de anillo como la que se muestra en la Figura A.8 se presentan los monosacáridos más comunmente encontrados en la naturaleza. 815 Figura A. En la Tabla A.3.7: Estructura química de la D.glucosa 5 CHjOH CH2OH OH )H Figura A. debido a que es el principal componente de los ácidos nucleicos tanto en su forma natural como oxidada (desoxiribosa).

MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A.8: Monosacáridos presentes en los sistemas biológicos Aldosas derivadas de aldehido CHO Clase Triosa (tres carbonos) Cetosas derivadas de ke tonas CHiOH HCOH CH2OH D-Gliceraldehido Pentosa (cinco carbonos) CHO C =O \ \ CH-zOH Dihiroxiacetona CH-¿OH C =0 HCOH HCOH HCOH CH^OH D-Ribosa Hexosa (seis carbonos) í7//0 HC 1OH HCOH HCOH CH2OH D-Flibulosa CHO \ HCOH HOí 7W HOí 7// HC1OH CH2OH D-Galactosa CH2OH \ C =O i 1 HOCH i 1 HCOH i 1 HCOH 1 CH?OH D-Fructuosa HOí 7// HC 1OH HC 1OH CH?OH D-Glucosa CHO \ HOCH i 1 HOCH \ \ HCOH i 1 HCOH i 1 CH2OH D-Manosa .816 APÉNDICE A.

A. 817 murámico que es la unidad estructural más importante del esqueleto polisacárido de las paredes celulares bacterianas. BIOMOLECULAS. el ¡3(1 —> 4) y el a(l -> 6) Polisacáridos En la síntesis de la mayoría de los polisacáridos como el almidón.3. excepto en los puntos de ramificación donde el enlace que se presenta es a(l —> 6) glucosídico.glucosa que posee enlaces /?(! —* 4) glucosídicos.(l —> 4).glucosa unidas entre si por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. . La a— amilasa son cadenas largas no ramificadas del monosacárido D. se encuentra en dos formas: la a— amilasa y la amilopectina. El glucógeno. La celulosa es componente estructural de las paredes celulares y es el polisacárido más abundante en el reino vegetal. Se presenta en forma de cadenas mucho más ramificadas que las de la amilopectina. trisacáridos y. en forma general a polisacáridos. interviene el monosacárido D-glucosa. Es el principal componente de la madera y el algodón. La amilopectina forma cadenas ramificadas constituidas por unidades de D.glucosa. es el principal polisacárido de reserva de las células animales. Los enlaces glucosídicos más comunes son: el o. La celulosa es un polímero lineal de la D. Los monosacáridos pueden unirse entre sí mediante enlaces llamados glucosídicos. parecido al almidón en estructura. Está constituido por el aminoazúcar N . unidas entre sí por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. la celulosa y el glucógeno. El almidón es la forma principal de almacenamiento de energía en muchas plantas. También es un polisacárido de la D. En las células hepáticas el glucógeno aparece en forma de granulos. Se encuentra en cantidades importantes en el hígado (10% de su peso húmedo).acetil-D-glucosamina unido mediante enlace éster al ácido D-láctico. Mediante este tipo de enlaces los monosacáridos dan origen a los disacáridos.glucosa con enlaces a(\ —* 4) glucosídicos y» en los puntos de ramificación los enlaces son a (I —> 6) glucosídicos.

Prostraglandinas A.818 APÉNDICE A.Terpenos . las cuales sirven como almacenes de combustible Los lípidos además se presentan formando parte de moléculas más com plejas como las lipoproteínas y los glucolípidos.9: Clasificación de los lípidos Tipo de L'pido Esqueleto BIOLÓGICO Complejos (saponifícables) . Desempeñan importantes funciones biológicas como: a) Componentes estructurales de las membranas. Los lípidos se clasifican. así come también las grasas. la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos.Fosfoglicéridos . Debido a esta característica los lípidos se encuentran presentes en fases biológicas no acuosas.3. MATERIAL Tabla A. Los primeros se caracteriza] .Ceras - Glicerina 3 fosfato de glicerilo Esfingosina Alcoholes no polares de elevado peso molecular Simples (insapouificables) .Esteroides . el cloroformo y el éter. Dentro de las lípidos se encuentran las hormonas y las vitaminaí que son sustancias que presentan una alta actividad biológica. en lípidos com piejos y lípidos simples (Tabla A.Acilglicéridos .9). b) Formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico c) Componentes de la superficie celular relacionados con el reconocimiento de las células.Esfingolípidos . de acuerdo a su estructura.3 Lípidos Los lípidos son moléculas biológicas prácticamente insolubles en el agua y pueden extraerse de sus fuentes mediante solventes no polares como el benceno.

Dependiendo de su cadena hidocarbonada.A. Los segundos no contienen ácidos grasos en su estructura y por lo tanto son no saponificables. En este tipo de ácidos.9: Fórmula general de los ácidos grasos saturados porque contienen ácidos grasos como componentes y también reciben el nombre de lípidos saponificables porque pueden producir jabones al reaccionar con álcalis.3. los sitios donde se unen los átomos de carbono por medio de un enlace doble presentan un doblamiento rígido en la cadena. Entre los ácidos grasos saturados más comunes se encuentran el ácido palmítico (C\o) y el ácido esteárico (Cis). Los ácidos grasos saturados presentan cadenas hidrocarbonadas que pueden existir en un número infinito de conformaciones debido a que los enlaces simples que unen los átomos de carbono pueden girar libremente. lo que provoca que la cadena hidrocarbonada sólo presente dos tipos de configuraciones en sus enlaces dobles: . Un ácido graso insaturado se forma cuando se reemplaza un enlace saturado (-C — C—} por un enlace doble (—C = C—). La Figura A. las cadenas hidrocarbonadas tienen entre 14 y 22 átomos de carbono. La forma de cadena extendida que adopta este tipo de ácidos grasos es la de mínima energía. 819 CH3 — ( CH2 )„ — C Figura A. Ácidos Grasos Los ácidos grasos se encuentran en grandes cantidades en los sistemas biológicos como componentes de los lípidos complejos. Los ácidos grasos más abundantes encontrados en las plantas y en los animales poseen un número par de átomos de carbono. Este no es el caso de los ácidos grasos insaturados. los ácidos grasos pueden ser saturados o insaturados. BIOMOLECULAS. y entre los insaturados está el ácido oleico (Cis)Los ácidos grasos saturados e insaturados difieren en sus configuraciones estructurales.9 muestra la fórmula general de los ácidos grasos saturados.

aparecen en las células y en los tejidos en cantidades menores que los lípidos complejos y algunos de ellos tienen una intensa actividad biológicas. Monocapas. Este tipo de sistemas de bicapas tienen algunas propiedades físicas similares a las de las membranas protoplasmáticas y son objeto de estudio como modelos de membranas naturales. que se forman por exposición de suspensiones de fosfoglicéridos en agua con oscilación sónica. mientras que las cabezas polares (hidrofílicas) están expuestas en la superficie. Todos los esteroides se originan del escualeno (Figura A . l l b ) .agua. Los fosfoglicéridos forman también bicapas para separar dos compartimentos acuosos. o en agua. Los esteroides son lípidos que presentan una estructura básica general que se muestra en la Figura A. 10a se observa como se forman en agua los agregados llamados micelas.lOb. MATERIAL BIOLÓGICO la configuración cis y la configuración trans.lOc) se forma una monocapa con el grupo polar hidratado y la cola orientada hacia el aire. Tanto las vitaminas como las hormonas son muy importantes en el funcionamiento normal de la célula y son requeridas por ésta en cantidades muy pequeñas. 11 a. Dentro de los primeros se encuentran algunas vitaminas y dentro de los segundos algunas hormonas. Dentro de éstos se encuentran las hor- .820 APÉNDICE A. Debido a lo anterior. Los liposomas (Figura A. En la interfase aire . Hay dos clases de lípidos sencillos: los terpenos y los esteroides. como se muestra en la Figura A.agua (Figura A. Lípidos Simples Los lípidos sencillos no contienen ácidos grasos como componentes estructurales. bicapas y micelas lipídicas: Los lípidos son biomoléculas prácticamente insolubles en el agua.lOd) son estructuras vesiculares formadas por bicapas completamente cerradas. ésto se debe a que su larga cadena hidrocarbonada no es soluble en soluciones acuosas. En este tipo de estructuras las colas hidrocarbonadas se orientan en forma opuesta al medio acuoso y forman una fase hidrofóbica interna. cuando un lípido polar (por ejemplo un fosfoglicérido) es colocado en una interfase aire . las cabezas polares y las colas hidrofóficas dan lugar a diversos arreglos (Figura A. 10). En la Figura A. sin embargo el grupo carboxilo que presentan es hidrofílico.

b) Bicapa de fosfoglicérido que separa dos compartimentos acuosos. a) Micelas formadas en el agua. 821 Pared Agua Aire WLULLILÜUM Agua Agua Figura A.3. c) Monocapa en la interfase aire-agua d) Sección transversal de un liposoma. 10: Sistemas estables fosfoglicérido-agua. BIOMOLECULAS. .A.

I HC—(CH2)3-CH-(CH. MATERIAL BIOLÓGICO <?H. b CH. CH.11: Estructura de algunos esteroides: a) Estructura básic general b) Estructura del escualeno c) Estructura del colesterol . CH.' Figura A. Cf C Cl C-CH—CH2-CH1-¿-CH-CH2-CH2-C-CH-CH2-CH2-CH= C-CH2-CH-CH-C-CH2— CH.822 APÉNDICE A.)2 CH. CH. CH.

L. en forma de partículas muy pequeñas cuyo diámetro y peso permanece constante. en los cuales se fusionan las propiedades físicas de las dos biomoléculas. Nicolson. Singer y G.3. Este tipo de lipoproteínas transportan lípidos insolubles en agua entre los diferentes órganos por medio de la sangre. Las hormonas pueden ser efectivas a niveles de 10~18 M en tejidos humanos. En estos sistemas los lípidos y las proteínas se mantienen unidos mediante enlaces hidrofóbicos que se establecen entre las componentes no polares de estas biomoléculas. Los sistemas de membranas pueden llegar a constituir hasta el 80% de la masa celular seca total en algunas células eucarióticas.3. El colesterol (Figura A. en particular su alta resistencia eléctrica y su relativa impermeabilidad respecto de moléculas muy polares. es el precursor de muchos otros esteroides dentro de los cuales se incluyen: los andrógenos ( hormonas sexuales masculinas). Los principales tipos de lipoproteínas son: lipoproteínas de transporte y sistemas de membranas. Este modelo explica satisfactoriamente muchas de las propiedades y características de las membranas. Las lipoproteínas de transporte son complejos característicos del plasma sanguíneo. A.J. Este modelo establece que los fosfolípidos de las membranas se hallan ordenados en bicapas formando una matriz fluida de cristales líquidos y postula que las proteínas de la membrana son globulares.lie) es un esteroide muy importante. BIOMOLECULAS. la progesterona y las hormonas adrenocorticales. 823 monas. El modelo mas usado de la estructura de membrana es el modelo del mozaico fluido de S.4 Ácidos Nucleicos Los ácidos nucleicos son macromoléctilas en forma de cadena cuya función esencial es el almacenamiento y la transferencia de la infor- . los estrógenos (hormonas sexuales femeninas). Sistemas de Lipoproteínas Los sistemas de lipoproteínas son sistemas que se forman de la asociación de lípidos y proteínas específicas.A. las cuales son controladores extremadamente potentes de las velocidades de reacción en los sistemas biológicos.

Hay cinco bases nitrogenadas (Figura A.12. ti mi na. Como puede observarse en la Figura A. Nucleótidos Las unidades estructurales del DNA se denominan desoxirribonucleótidos y las del RNA se llaman ribonucleótidos. guanina. una molécula de ácido fosfórico. citosina y uracilo. una pentosa y. MATERIAL BIOLÓGICO Base HO HO—P-0—CH. El nombre de desoxirribonucleótidos deriva de que la base esta unida a la pentosa 2-desoxi-D-ribosa (Figura A. . la diferencia entre los ribonucleótidos estriba en la base que los conforma. El grupo fosfato que constituye los nucleótidos (Figura A. 12). 12: Estructura general de los nucleótidos: a) Ribonucleótido b) Desoxirribonucleótido mación genética. En los ribonucleótidos la base esta unida a la pentosa D-ribosa. 12) se une . los nucleótidos son los componentes estructurales de los ácidos nucleicos.0 OH OH H H Figura A. Al igual que los aminoácidos son los componentes estructurales de las proteínas. De igual manera. Las diferencias químicas y físicas entre desoxirribonucleótidos radican en las diferentes bases que los constituyen. Existen dos tipos de ácidos nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA). Son componentes fundamentales de la célula y constituyen entre el 5 y el 15% de su peso seco. Las primeras dos son purinas y las tres restantes son pirimidinas. cada nucléotido está constituido por tres componentes: una base nitrogenada heterocíclica que es un derivado de purina o de pirimidina.824 APÉNDICE A. 13) que pueden formar parte de un nucléotido: adenina.

/ NH2 'C^i^CH rfV H 5 Figura A. BIOMOLECULAS.A. 825 Purinas NH.>¿.3. Nf^C^\ Pirimidinas O HNlT«>CH N H 1 ^N' H O U o 1 HNf^cA I I «. (1) Adenina (2) Guanina (3) Uracilo (4) Timina (5) Citosina .CH -C. 13: Estructura de las bases de los nucleótidos.

Watson y F. para la adenosina se tiene el 5'-monofosfato de adenosina (AMP). por medio de enlaces 3'-5' (Figura A.14b y Figura A. C. 14). es uno de los hechos más sobresalientes en el campo de la ciencia hasta nuestros días. sino también en forma de difosfatos o trifosfatos. el 5'-difosfato de adenosina (ADP) y el 5'-trifosfato de adenosina (ATP).14c). MATERIAL BIOLÓGICO mediante un enlace áster al átomo de carbono 5 de la pentosa. El desarrollo cíe los postulados anteriores ha conducido a lo que se ha . D. Propusieron además que las cadenas se mantienen unidas entre si por medio de puentes de hidrógeno entre las bases purinas y pirimidinas en sus formas tautómericas (Figura A. Crick postularon una estructura para el ácido desoxirribonucleico. Se ha considerado que la estructura del DNA propuesta por Watson y Crick. El sistema ATPADP es el sistema principal para la transferencia de energía química en la célula. Cuando el grupo fosfato de un nucleótido se separa por hidrólisis. Todos los ribonucleósidos y desoxirribonucleósidos aparecen en las células no solamente en forma de monofosfatos. En particular. El diámetro de la doble hélice es de 20 °A y una vuelta se completa cada 34 A. Cada cadena consiste de grupos fosfato di-ester unidos a residuos de ¡3—D-desoxirribofuranosa (Ddesoxirribosa). Cada vuelta de la cadena consta de aproximadamente 10 nucleótidos. cada una de ellas enrrollada alrededor del mismo eje. De la complementaridad de la unión de las bases. Propusieron que dicha estructura está constituida por dos cadenas helicoidales antiparalelas.826 APÉNDICE A. mediante los pares de bases: adenina (purina) con timina (pirimidina) y guanina (purina) con citosina (pirimidina). H. entonces la secuencia de la otra cadena se determina automáticamente. El ADP y el ATP son ácidos relativamente fuertes que en su disociación producen tres o cuatro protones respectivamente. producto de sus grupos fosfóricos. Consecuentemente estaba planteado un mecanismo de copiado para la transferencia del material genético. Watson y Crick concluyeron que si la secuencia de bases de una cadena está dada. la estructura residual recibe el nombre de nucleósido. DNA En 1953 J.

A. 14: Esquema del Acido Desoxirribonuleico: a) Estructura de una sola cadena. 827 Pares de bases complementarías BaM (b) Esqueleto de azúcar-fosfáto Timina \ x°~—/ H x „ ¿~c^ ^-N n-^fS \ t \ M "--.3.</ Puente de hidrógeno / 8 Adenina (a) Desoxirribosa (c) Figura A. b) Estructura de la doble hélice c) Bases purinas y pirimidinas unidas por puentes de hidrógeno. BIOMOLECULAS. .

• Transcripción: Es el proceso mediante el cual se realiza el copiado del mensaje genético contenido en el DNA al RNA mensajero. A este tipo de replicación se le llama replicación semiconservativa. MATERIAL BIOLÓGICO denominado dogma central de la genética molecular. La replicación completa del DNA sólo ocurre durante la división celular. La replicación del DNA produce dos dobles hélices. El dogma central establece tres procesos: • Replicación: Es el primer proceso y es el proceso mediante el cual el DNA produce moléculas hijas idénticas a la progenitura. . La síntesis de las cadenas nuevas ocurre por la adición de nucleótidos complementarios a las cadenas que sirven de molde. 15). Esta traducción se lleva a cabo en los ribosomas. El proceso de replicación del DNA es esencialmente el mismo en todos los organismos vivos.828 APÉNDICE A. Esto sucede cuando se transcribe por ejemplo. El inicio de la replicación del DNA es un proceso que antecede al fenómeno de la división celular y consiste en la separación de las dos cadenas de DNA. La adición de cada nucleótido se realiza en la dirección 5' —> 3'. cada una de las cuales tiene una cadena de la doble hélice original y una cadena nueva. mismas que actúan como moldes de dos cadenas nuevas (Figura A. Replicación del DNA: El proceso de replicación del DNA permite que la información genética sea perpetuada mediante su paso de una generación a otra. siendo más complejo en los organismos superiores. pero existen con mucha frecuencia otros momentos de la actividad celular en los cuales se copia sólo una parte de la información genética. que establece que la información genética fluye del DNA al RNA y de éste a la proteína. • Traducción: Es el proceso que permite traducir las unidades de información genética o codones a secuencias de aminoácidos en una cadena peptídica. La traducción del mensaje genético da origen a la síntesis de proteínas. el gene que tiene codificada la información para sintetizar una determinada proteína.

A.3. BIOMOLECULAS. 829 Figura A. Freeman and Co. 1983 Reproducida con el permiso de W. . 15: Replicación semiconservativa de la molécula de DNA: Cada cadena de la doble hélice progenitora sirve como molde para generar dos cadenas hijas idénticas a ella. Todos los derechos reservados. Copyright ©1983.H. Fuente: Watson et a/.

por una parte existen solamente 4 diferentes nucléotidos y por otra. se copiarán de acuerdo a la demanda de proteínas que tenga el organismo. En la figura se puede observar además que la pentosa que forma parte del esqueleto de la cadena es una ribosa. el DNA no es el molde directo que se usa en la síntesis de proteínas sino que la información codificada en el DNA se trascribe al RNA y es éste el que actúa como molde para la síntesis proteica. El orden en el cual aparecen los nuclétidos en la cadena de mRNA sintetizada. está constituido por una sola cadena de nucléotidos. Este mecanismo ha permitido explicar cómo la síntesis de proteínas que se efectúa en el protoplasma puede ser controlada por el DNA localizado en el núcleo. 16 muestra la estructura de un segmento de ácido ribonucleico (RNA). Por lo tanto existen 64 codones (permutaciones) de tres bases cada uno para los 20 . La información para la síntesis de un aminoácido está codificada en tres nucléotidos. A este grupo de tres nucléotidos se le llama codón o triplete. La información genética codificada en el DNA en su secuencia de nucléotidos. cuando en la cadena de DNA aparece una adenina en la cadena de RNA se agrega un uracilo. el cual es químicamente muy similar a la timina y en el apareamiento de bases para la síntesis del RNA ocupa el lugar de ésta. MATERIAL BIOLÓGICO La Transcripción del Mensaje Genético: El RNA Los genes estructurales que almacenan la información para la síntesis de proteínas. indica el orden o secuencia de los aminoácidos en la cadena peptídica. se tiene que las proteínas están constituidas por 20 tipos de aminoácidos diferentes. se trascribe a una molécula intermediaria que puede moverse en el citoplasma: el mRNA o mensajero. Este a diferencia del DNA.830 APÉNDICE A. Sin embargo. Es importante hacer notar que existe una base en el RNA que no aparece en la cadena de DNA. La Figura A. El proceso de transcripción se realiza observando las siguientes dos reglas: siempre ocurre. El proceso por el cual se lleva a cabo esta transcripción se muestra en la Figura A. Las bases que constituyen la cadena de mRNA son dos purinas: adenina y guanina y dos pirimidinas: citosina y uracilo. Esto es. al igual que la replicación del DNA. Esta base es el uracilo (U). Ahora bien. en la dirección 5' —> 3' y solamente una de las cadenas del DNA es copiada en una molécula de RNA mensajero en un tiempo dado. 17.

16: Estructura de un segmento de ácido ribonucleico RNA Cadenas Cadena de RNA Figura A.A.3. BIOMOLECULAS. 831 Base Base RNA Figura A. 17: Transcripción del mensaje genético por medio de la síntesis de una cadena de mRNA .

En este proceso intervienen además otros tipos de RNA: el rRNA y el tRNA. En la Tabla A. 18 muestra . 11 se muestran los significados de las abreviaturas para los aminoácidos y para las bases nitrogenadas.832 APÉNDICE A. El proceso de traducción del mensaje del mRNA se realiza en los ribosomas. También existen codones que actúan como señales de terminación del mensaje genético. de tal manera que existen aminoácidos que son codificados por más de un codón. 10: Código genético Codón Aminoácido Fen Leu " Leu Codón Aminoácido Ser Codón Aminoácido Tir Codón Aminoácido Gis TTT TTC TTA TTG CTT CTC CTA CTG ATT ATO ATA ATG GTT GTA GTA GTG TCT TCC TCA TCG CCT CCC CCA CCG ACT ACC ACÁ ACG GCT GCC GCA GCG TAT TAC TAA TAG CAT CAC CAÁ CAG Term* His Gln TGT TGC TGA TGG CGT CGC CGA CGG AGT AGC AGA AGG GGT GGC GGA GGG Term Trp Arg Pro He Met Val Tre AAT AAC AAA AAG GAT GAC GAA GAG Asii Lis Asp Glu Ser Arg Gli Ala Term. La Figura A. Traducción del Mensaje Genético: Síntesis de Proteínas Cada molécula de mRNA da origen a una o varias cadenas peptídicas. 10. El primero es un ácido ribonucleico que se encuentra localizado en los ribosomas y el segundo es un RNA de trasferencia (tRNA) que actúa como adaptador en el ordenamiento lineal de los aminoácidos específicos conforme a la secuencia del ni RNA. es un codón de terminación del mensaje aminoácidos. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. El conjunto de codones constituye el código genético universal y se muestra en la Tabla A.

En la parte inferior del segundo lazo se localiza un triplete denominado anticodón. Los mRNA pueden ser traducidos simultáneamente por muchos ribosomas.18a la estructura del tRNA presenta tres lazos. La síntesis de la cadena polipeptídica ocurre en la dirección: extremo amino (—NH^) a extremo carboxilo (COOH}. A este triplete se le llama codón de iniciación y con frecuencia es eliminado después de la síntesis. Una vez que se inicia la síntesis ocurre la elongación. 1989). Por esta razón. Como puede verse en la Figura A. En este momento termina la síntesis y la cadena peptíclica es liberada.3.A. Este anticodón esta formado por las tres bases complementarias al codón específico que aparece en la cadena de mRNA. 833 Tabla A. La traducción del mensaje consta de tres fases: iniciación. elongación y terminación. una sola molécula de mRNA sirve para generar varias copias de la misma cadena peptídica (Balbás y Bolívar. En este proceso se van agregando sucesiva y ordenadamente (vía los tRNA) los aminoácidos correspondientes a cada codón presente en la cadena de mRNA.ll: Especificación de las bases y los aminoácidos Nucleótidos G= A = T= C— Aminoácidos Ala Asn Asp Arg Gis Fen Gli Gln Glu His = = = = = = = = = = Guanina Alanina Timina Citosina Alanina Asparagina Acido aspártico Arginina Cisteína Fenilalanina Glicina Glutamina Acido glutámico Histidina Ile Leu Lis Met Pro = = = = = Ser ^ Tir = Tre = Trp = Val = Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Tirosiiía Treonina Triptofano Valí na como se realiza este proceso y la forma estructural del tRNA. . Prácticamente todas las proteínas inician con el codón AUG que codifica para metionina. BIOMOLECULAS. La traducción concluye cuando aparece un codón de terminación en el mRNA.

.18: a). Estructura del tRNA y síntesis de una cadena peptídica.834 APÉNDICE A. a) Estructura del tRNA. d) Terminación del proceso de síntesis. b) Iniciación del proceso de síntesis. c) Elongación de la cadena peptídica. MATERIAL BIOLÓGICO Aminoácido (a) <D Ribosoma Aminoácido (b) Subunidades ribosomales de inicio segundo codon (C) trr (d) Figura A.

Para que el vector de clonación sea fácil de manejar (Balbás y Bolívar. Esto es. la ingeniería genética requiere de los siguientes elementos: 1.A. A este tipo de moléculas se les llama vehículos moleculares de clonación o vectores. Síntesis química a partir de desoxirribonucleótidos. no debe ser degradado. BIOMOLECULAS. Esto es. DNA Recombinante: Recombinación in vitro 835 Las moléculas de DNA recombinante (rDNA) son construidas en el laboratorio por medio de la ingeniería genética. Caracterización estructural completa.3. Una molécula de DNA capaz de autoreplicarse. La mayoría de estas enzimas reconocen secuencias de bases simétricas o palindrómicas en el DNA. 2. Ruptura mecánica del DNA en condiciones controladas. . 1989) debe poseer las siguientes características : Adecuada caracterización funcional. Para llevar a cabo la recombinación in vitro de una molécula de DNA. A partir de moléculas de RNA. Dentro de los vectores más usados se encuentran los plásmidos y algunos DNAs virales. y capaz de replicar también el DNA que se le haya unido. En ingeniería genética el método más común para fragmentar el DNA es la digestión por enzimas de restricción. Un método que permitas romper y unir enlaces fosfodiéster de moléculas de DNA. Existen cuatro métodos para generar fragmentos de DNA: La digestión de la molécula de DNA con enzimas de restricción. debe conocerse la ubicación de sus genes y su secuencia nucleotídica. El tamaño del vector debe ser pequeño con el fin de aumentar la eficiencia de entrada a la célula huésped Presentar estabilidad dentro del huésped.

Por una parte se extrae ui .836 APÉNDICE A. Los plásmidos son pequeños DNAs circulares que se encuentran en forma natural fuera del genoma de algunas células y que se replican autónomamente. Un proceso mediante el cual se pueda introducir la molécula de rDNA a la célula receptora. La transfección. En la Figura A. Los vectores más usados por su simplicidad y facilidad de manejo son los plásmidos. Presentar múltiple sitios únicos de restricción dentro de los genes que se utilizan como marcadores. Un proceso muy usado en la ingeniería genética es la transformación. 4.19 se observan dos caminos paralelos que se unei para formar la molécula recombinante. Debe ser capaz de incrementar (amplificar) su número de copias. Este proceso conlleva la entrada del vector a la célula a través de la pared y membrana celulares. MATERIAL BIOLÓGICO Es muy conveniente que el vector contenga genes que puedan usarse como marcadores para seleccionar las células recombinantes de las silvestres. con el fin de obtener grandes cantidades del vehículo por célula. En la "Figura A. Una vez dentro la molécula de rDNA puede replicarse autónomamente o recombinarse con el genoma de la célula receptora. mismo que a su vez da lugai a una célula recombinante. La transformación. 3. Un método que permita seleccionar de un gran número de células a aquellas que han adquirido la molécula de rDNA. Existen tres mecanismos mediante los cuales una molécula de rDNA puede ser introducido a la célula receptora: La conjugación. 19 se presenta un esquema de el proceso mediante el cual se produce un DNA recombinante.

1983 Reproducida con el permiso de W. BIOMOLECULAS. Copyright ©1983.3. . 837 plasmido fragmentado con enzimas d« restriocio'n \ DNA ^ /fragmentado X / con enzimas /~~~?~^ de restricción DNA pasajero marcador '(resistencia a antibióticos) Figura A. 19: Representación esquemática de la clonación molecular del DNA utilizando un plásmido como vector.H. Freeman and Co. Todos los derechos reservados.A. Fuente: Watson et a/.

Independientemente de que el producto de interés sea intracelular (poi ejemplo una proteína).0. A.) dx (A.. todas la células están sujetas a las mismas condiciones de temperatura (T). Enseguida tanto el plásmido como el DNA fragmentados se ponen en contacto y ocurre la recombinación.. La célula así obtenida es una célula recombinante. En esta figura se observa varias fases en la curva de crecimiento. MATERIAL BIOLÓGICO plásmido de la célula seleccionada y se fracciona específicamente utilizando endonucleasas de restricción. lo anterior puede expresare como: — = f(T.S. etc. tiempo que dura esta fase se interpreta como el tiempo que tardan ] .20 se muestra un esquema del comportamiento típi< que sigue el crecimiento celular en un cultivo intermitente sujeto a L condiciones dadas por la ecuación (A.: En la Figura A. En un cultivo de células microbianas de tipo intermitente. E crecimiento celular en este tipo de cultivo depende de las condicione mencionadas y puede ser expresado en términos del cambio con respect al tiempo de la concentración de células. La molécula de rDNA se introduce dentro de la célula huésped y ocurre la transformación. A este DNA se le llama DNA pasajero o exógeno. misma que se replicará y contendrá la información clonada. se toma el DNA que se desea insertar o clonar. concentración de oxígeno (O). es necesario cultivar las células con el fin de obtener e producto deseado. pH concentración de sustrato ( S ] . En este punto se obtiene una molécula de DNA recombinante o (rDNA). Las fases se originan por 1 cambios que experimenta la población celular debido a cambios en medio. este DNA se rompe de la misma manera que el plásmido.PH.4 Crecimiento Celular. Por otra parte.838 APÉNDICE A.l). En la fase lag se observa un crecimiento casi nulo de las células.. del DNA fraccionado de la célula de interés. extracelular (metabolitos secundarios) o la ce lula misma.

En este momento se considera que las células mueren debido a que no pueden mantener su metabolismo o por autolisis. En la fase estacionaria el crecimiento celular cesa y la biomasa permanece constante. Después de esta fase se tiene la fase exponencial en la cual se observa un crecimiento muy rápido de la biomasa hasta un determinado tiempo. la curva de crecimiento puede expresarse con auxilio de la ecuación de Monocl que describe la relación entre la velocidad especia fica de crecimiento y la concentración . La fase exponencial es la de máximo crecimiento y la biomasa alcanza su valor más alto. En la fase estacionaria la célula excreta al medio productos llamados metabolitos secundarios. este tipo de compuestos no esta asociado al crecimiento celular y muchos de ellos tienen importancia comercial. a) Fase lag b) Fase exponencial c) Fase estacionaria d) Fase de declinación o muerte células en adaptarse al medio de cultivo.A A. Cuando el crecimiento celular en un cultivo intermitente está limitado sólo por la cantidad de sustrato inicial. Cabe mencionar que en la segunda fase (exponencial) la células sintetizan compuestos que les permiten crecer (duplicarse) y mantenerse vivas en el medio de cultivo. CRECIMIENTO CELULAR. 839 (c) Figura A.20: Representación esquemática del crecimiento celular en cultivo intermitente. Se considera que en esta fase las células ya adaptadas crecen rápidamente debido a que en el medio encuentran todos los requerimientos nutricionales y ambientales para reproducirse. Finalmente en la fase de declinación o muerte las células empiezan a morir y la biomasa disminuye. la terminación de la misma se considera que sucede por la carencia de algún nutriente o porque alguno de los productos que la célula secreta al medio inhibe el crecimiento poblacional. A este tipo de compuestos se le llaman metabolitos primarios.

[t] fj.5 fJ>max En la Figura A. MATERIAL BIOLÓGICO de sustrato. La expresión para /u se obtiene integrando la ecuacic (A. estableciéndose la siguiente expresión para el crecimiento celular: donde: x: Concentración de biomasa.: Velocidad específica de crecimiento.3) para un caso particular. [t~l] S: Concentración de sustrato limitante. y Ks es el valor de S cuando /z = fimax/2Con frecuencia la velocidad del crecimiento celular se describe e términos del tiempo de doblado esto es. [M/L3] Ka: Concentración de sustrato para /í = 0. J\ § " | ~ J (A. Puede observarse en la figura que la J velocidad máxima de crecimiento /ímar es el valor asintótico de la curv. [M/L3] t: Tiempo. del tiempo en el cual la ma¡ celular se duplica.3 donde: l¿max' Velocidad máxima de crecimiento.2) de la siguiente forma: dx 'Xl td = fr' JO / donde: .^"1] y la ecuación de Monod: .21 muestra la representación gráfica de la ecuació (A.840 APÉNDICE A.

Una vez qi se ha realizado el cultivo de la célula y se tiene el producto de Ínter dentro de la célula misma o en el caldo de cultivo. CRECIMIENTO CELULAR.22 1 Figura A. el paso siguiente es realización del mejor proceso para obtener el producto con la actividí y pureza deseada. . con el menor costo posible. 84 0.4. Xi =: Masa celular al tiempo t = O t¿: Tiempo de doblado para obtener: In2 por lo tanto el tiempo requerido para que la masa celular se dupliqi esta dado por: A. VEl cultivo de las células se lleva a cabo en dispositivos llamad» biorreactores los cuales deben diseñarse con el fin de proporcionar éstas las mejores condiciones físicas para su desarrollo. El establecimiento ( dicho proceso es el objetivo del estudio de las Bioseparaciones.A.0 Ks»0.21: Representación esquemática de la variación de la veloc dad específica de crecimiento (/u) con el sustrato (S).

G. (Ed. Inglaterra. Watson. D. D. The Benjamin/Cummings Publishing Co. y Crick. Millis. y Case. Selecciones de Scientific American.-Understanding Enzymes. New York.Y. 1983.. New York. B.R. 1989.J. J. 3ra Edición. La célula viva. The organisms of biotechnology. En: Comprenhensive Biotechnology. Scientific American.L.842 APÉNDICE A. L. Microbiology: An Introduction. New York. 1. J. 1991. Murray. N. 11-30. 1985. 1953. 7-18. D. Ellis Horwood Ltd. México.-J. C. C. 737. Funke. Watson. Tooze. y Kurtz.Books. Ediciones Omega. 1989. Editorial Blume. J.). España. Molecular Structure of Nucleic Acids: A structure for deoxyribose nucleic acid. Recombinant DNA a short course. H. M. En: La Célula Viva. Bioquímica.. Nature. A. Lehninger. F. T. 1961. 5 Bibliografía Brachet. Permagon Press. Palmer. . 31-35 Tortora. 2. MATERIAL BIOLÓGICO A.

Guzmán .USUARIO: ESTE EJEMPLAR ES NUEVO. B. Tejeda O R. R I. M. L BIBLIOTECA O A. NO LO MALTRATES POR FAVOR U. Montesinos O R.

Sonora. Montesinos C. Editorial Unisón Hermosillo. <» c •"- University of Arizona Tucson. de Matemáticas Universidad de Sonora Hermosillo. México. México. Department of Chemical Eng. México. Roberto Guzmán Z. Arizona. Sonora.Bioseparaciones Armando Tejeda M. USA. Sonora. . Depto. Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas Universidad de Sonora Hermosillo. Rosa Ma.

2 Fundamentos 2.3 Equipo 2.4 1.7 Bibliografía . .6 Problemas 2.5 Sumario 2.4 Diseño 2.2 Síntesis de Proceso 2.4. Características de los Bioprocesos .2. .1 Desarrollo de un Caso Base 2.2.2 1. .5 Evolución de los Bioprocesos .3 1. Sumario Problemas Bibliografía 1 Introducción 2 Selección del Proceso 2.1 Mercado y Especificación del Producto 2.Contenido I El Proceso de Bioseparación 1.4.2 El Proceso 2.1 Introducción 2.1 1.

2.2.2.2 Fundamentos de la Centrifugación 4.1 Diseño de Centrífugas Tubulares 4.2 Filtros Continuos al Vacío 81 3.7 Bibligrafía 110 4 Centrifugación 4.4 Diseño de Equipo de Centrifugación 4.3.vi CONTENIDO II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular.106 3.3.2 Sedimentación por Acción de la Gravedad 4.4 Diseño de Equipo de Filtración 84 3. .4.3 Teoría de la Filtración 77 3.6 Problemas 111 111 112 112 .4.2.4.2.1 La Filtración como parte de los Sistemas de BSL 72 3.5 Sumario 105 3.4.1 Introducción 4.3.115 116 119 120 120 121 132 132 141 148 153 157 158 .2 Equipos de Sedimentación Centrífuga 4. .2 Centrífuga de Discos 4.1 Equipos de Filtración-Centrífuga 4.4.1 Filtración Intermitente 85 3. .2 Pretratamiento de Caldos para BSL 74 3.4.3.5 Sumario 4.2 Fundamentos 71 3.2.1 Ley de Stokes 4.3 Sedimentación Centrífuga 4.3 Equipo de Filtración 80 3. 65 3 Filtración 69 3.4 Filtración Centrífuga 4.3 Escalamiento 4.4 Factor G 4.6 Problemas .3 Equipo de Centrifugación 4.1 Introducción 69 3.1 Filtros Intermitentes a Presión 80 3.2 Filtración Continua 98 3.2.

2.3 Métodos de Rompimiento Celular 5.4.4 Diseño de Equipo de Rompimiento 5.1 Extracción Intermitente 264 6.6 Problemas 5.4.4 Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles .1 Estructura de la Pared Celular 5.3 Equipo de Rompimiento Celular 5.3 Equipo de Extracción 256 6.2.3 Microfluidizador 5.3.2 Fundamentos de la Extracción 228 6. . 243 6.2.CONTENIDO 4.2 homogeneizador de Alta Presión 5.3. .2.2 Fundamentos 5.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5.2.3.1 Equipo de Extracción Intermitente 257 6.2 Equipo de Extracción Continua 258 6.1 Tipos de Sistemas de Extracción Líquido-Líquido 229 6.2.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5.3.2 Extracción Continua 273 .2 Homogeneizador de Alta Presión 5.2.1 Introducción 5.2 Sistemas Celulares de Secreción 5.2.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido .4 Diseño de Equipo de Extracción 263 6.4 Métodos de Permeabilización 5.7 Bibliografía 1 vii 162 165 165 166 167 168 169 174 178 178 190 196 199 200 212 215 218 221 5 Rompimiento de Células 5.3. .4.5 Sumario 5. 229 6. .3 Selección del solvente 242 6.1 Introducción 227 6.4.7 Bibliografía III Concentración del Producto 223 6 Extracción 227 6. .

2 Matrices 8.3 .2 Tipos de Adsorbentes 310 7.2 Fundamentos 309 7.3 Extracción Fraccionaria Sumario Problemas Bibliografía 292 298 299 304 7 Adsorción.5 Sumario 407 7.4.4 Relaciones de Equilibrio 8.2.3 Adsorción en Lecho Fijo 363 7.3 Equipos de Adsorción 338 7.2.5 Cinética de la Adsorción Equipo Cromatográfico 415 419 419 420 .4.2.1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente 310 7.1 8.4.3 Relaciones de Equilibrio 319 7.2.6 Problemas 408 7.5 6.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación . 422 424 431 431 432 432 8 Cromatografía por Elución. 307 7.7 Bibliografía 413 IV 8.2.2.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación 8.4 Cinética de la Adsorción 324 7.4 Diseño de Adsorbedores 342 7. .2.2.2.4.vni CONTENIDO 6. 8.7 6.2 Purificación del Producto Introducción Fundamentos 8. 358 7.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes 342 7.6 6.1 Introducción 307 7.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . 1C 8.

5 Sumario 9.2.4.1 Introducción 10.3 Equipo de Precipitación 9.CONTENIDO 8.2.4.7 Bibliografía 9 Precipitación 9. Pureza y Rendimiento 8.3 Escalamiento y Optimización 8.6 Problemas 9.1 Membranas 10.2.4 Diseño de Columnas Cromatográficas 8.1 Modelos Cromatográficos 8.1 Objetivo de la UF ix 434 434 463 471 482 483 490 493 493 494 .2.4 Diseño de Procesos de UF 10.4.2.6 Problemas 8.3.4 Diseño de Precipitadores 9.2 Diseño de Precipitadores 9.3. 495 516 522 525 525 527 533 543 544 545 547 547 548 548 554 555 573 573 574 579 581 .7 Bibliografía 10 Ultrafiltración 10.3 Equipos 10.2.4.4.4.1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad 9.1 Introducción 9.2 Fundamentos 9.1 Procesos de Membrana 10.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva 9.2 Módulos 10.1 Cinética de la Precipitación 9.2 Fundamentos 10.2 Flujo Cruzado o Tangencial 10.3 Precipitación por Afinidad 9.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución.5 Sumario 8.3 Teoría de la Ultrafiltración 10.

1 Teoría de Platos 652 11.2 Fundamentos 12. .2. 619 11.3 Métodos de Operación 10.2.4.7 Bibliografía CONTENIDO 583 586 .4.2 Teoría Cinética 656 11.1 Introducción 12.5 Cinética de la Cristalización .3 Equipos Electrocromatográficos 647 11.2.1 Introducción 617 11. 665 669 669 670 671 677 679 12 Cristalización 12. .3.4 Diseño de la Unidad de UF 10.3 Equipos 640 11.3.2.6 Problemas 10.4.5 Sumario 657 11.2.2A Selección del Modo de Operación 12.7 Bibliografía 659 V Operaciones de Acabado 661 665 .4 Diseño 652 11.1 Tipos de Cristales 12.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación 646 11.2 Pureza de los Cristales 12.2 Mecánica de Fluidos 10.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación 12.2.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas .6 Problemas 658 11.2.x 10. .4 Medios y Modos de la Electroforesis 636 11.2 Fundamentos 618 11.1 Equipos de Flujo Libre 643 11.2 Teoría Electrocinética 619 11.3 Fenómenos de Dispersión 629 11.5 Sumario 10.589 610 611 615 11 Electroforesis 617 11.4.2.4.3.

13.5 Sumario i .1 Cristalizadores Intermitentes 689 12. 13.1 Diseño de Secadores Adiabáticos 13.2.2 Cristalizadores Continuos .2 Diseño de Secadores no Adiabáticos 13.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos 713 12.3.4.4.4 Efectos Colaterales del Secado .4.4 Diseño de Cristalizadores 693 12.2.6 Problemas 740 12.2 Células y Virus A.1 Secadores Adiabáticos 13.7 Bibliografía 743 13 Secado 13.3.7 Bibliografía A Material Biológico A.3 Equipo de Secado 13.4. .5 Sumario 738 12.4.l Introducción A.2 Métodos de Secado 13. 689 12.1 Introducción .2 Células Eucarióticas 745 745 746 746 758 759 759 762 762 765 769 769 781 785 786 788 789 789 789 791 796 .4 Diseño de Secadores 13.3.3.2.2.6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales687 12.4.1 Cristalizador Continuo 694 12. 13.1 Células procarióticas A.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva 711 12.3 Equipo de Cristalización 689 12.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas 13.4 Cristalizadores Intermitentes 730 12. .3 Velocidad de Secado 13.6 Problemas 13.2.2.2 Fundamentos 13.2 Secadores no Adiabáticos 13.CONTENIDO xi 12.2.

3 Células Recombinantes A.4 Virus A.3.5 Bibliografía CONTENIDO 802 803 803 803 814 818 823 838 842 .2 Carbohidratos A.4 Ácidos Nucleicos A.3.3.3.4 Crecimiento Celular A.3 Lípidos A.2.3 Biomoléculas A.2.1 Proteínas A.xii A.