Parte I

Capítulo 1 Introducción
El cultivo de células con el objeto de obtener productos útiles, es una actividad que ha realizado el hombre prácticamente durante toda su historia. Recientemente a esta actividad se le ha denominado Biotecnología. Esta ha evolucionado a partir de los conocimientos generados en diversas disciplinas, tanto del área de las ciencias básicas como de las ingenierías. Hoy la Biotecnología puede ser definida como la colección de procesos industriales que involucran el uso de sistemas biológicos (Wang, 1988). Las operaciones que comprenden los procesos biotecnológicos a escala comercial, se han dividido tradicionalmente en operaciones previas (procesos "upstream") y operaciones posteriores o bioseparaciones (procesos "downstream"). Dentro de las primeras se considera la preparación del medio, la esterilización y el funcionamiento del biorreactor (Cooney, 1990). Los procesos de bioseparación como se muestra en la Figura 1.1, involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para la obtención del producto en las condiciones de pureza y actividad deseadas. En un proceso dado, la parte correspondiente a las bioseparaciones puede representar hasta un 60% del costo total de producción sin considerar las materias primas (Kalk, 1986). Debido a lo anterior, exite una relación inversa entre el precio de venta de un producto biotecnológico y la concentración de éste en el caldo del biorreactor (Figura 1.2). Puede decirse entonces que el éxito comercial de un proceso biotecnológico

6

CAPÍTULO!. INTRODUCCIÓN

depende en gran medida de la adecuada selección del proceso de bioseparación.

1.1

Evolución de los Bioprocesos

Actualmente se pueden distinguir de manera general tres generaciones de procesos biotecnológicos, en relación al tipo de bioseparaciones que éstos involucran. La primera generación comprende el conjunto de procesos desarrollados mediante cultivos de organismos no recombinantes, cuyos productos se obtienen en forma activa tanto si son intracelulares o si son secretados al medio de cultivo. En esta generación se encuentran los procesos de la Biotecnología tradicional como los de la producción de etanol, enzimas, ácido cítrico, y antibióticos. Los productos de estos procesos se presentan en concentraciones altas al inicio de la etapa de separación y no requieren de una extremada pureza para su venta. Los descubrimientos asociados con la Biología Molecular y la Ingeniería Genética logrados particularmente en las últimas dos décadas, han ampliado las capacidades biotecnologías del hombre. En esta etapa podemos situar una segunda generación de productos de la Biotecnología como la insulina humana, la hormona de crecimiento, y alfa interferón, entre otros. Estos son producidos intracelularmente utilizando células recombinantes de Escheríchia coli. Se caracterizan por encontrarse en bajas concentraciones dentro de la célula, son de elevado peso molecular, tienen propiedades similares a los contaminantes y requieren un alto grado de pureza. Ademas, generalmente al producirse en la célula no poseen actividad biológica por tratarse de cadenas peptídicas sin la conformación o estructura apropiada; lo que se traduce en la necesidad de aplicarles tratamientos fisicoquímicos adicionales para lograr el producto en su estado activo. La tercera generación de la Biotecnología, la podemos caracterizar por procesos mediante los cuales se obtienen productos extracelulares en células recombinantes, la mayoría de las cuales son eucarióticas. En estos sistemas se ha observado la capacidad no sólo de producir exógenamente el producto deseado, sino que éste se obtiene en forma activa. El factor VIII de la sangre y el agente trombolítico Activador

1.1. EVOL UCIÓN DE LOS BIOPROCESOS

Inoculo

Esterilización y preparación del medio

Producto intracelular

Esterilización del caldo si es recombinante

Producto extracelular

Rompimiento celular

' Remoción de desechos celulares

Separación celular

Recuperación y concentración del producto

Purificación del producto

Figura 1.1: Operaciones de un proceso biotecnológico: a). Operaciones previas b). Operaciones posteriores o bioseparaciones. Adaptada de: Bujurstrom, 1985.
Reproducida reservados. con el permiso de Me Graw Hill. Copyright © 1985. Todos los derechos

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

(g/i)
.Etanol .Acidocítrico MSG , Penicilina ,Treonina > Cefalosporína k—Gentamioina . Acido Giberflico . Enzimas a granel . Glucosa oxidas» Anticuerpos Enzimas d« investigación y diagnóstica Glio»roHosíatodeshidrogenas* LucHerasa Factor VIII Urakinasa Enzimasterapéuticas^"^

«O

1

»"* 10*

wr«

IOZ »' K)° I01 K)2 I03 K>4 K)5 «O6 KJ7 K)" «O9

Precio

de

venta

$/Kg

Figura 1.2: Relación entre la concentración inicial del producto en el caldo y el precio final de venta del producto. Fuente: Dwyer, 1984.
Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Copyright © 1984. Todos los derechos reservados.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS
Tabla 1.1: Características de los Procesos Biotecnológicos.
Característica Período Tipo de células Fortaleza de las células Conocimiento de propiedades básicas Conocimiento Tecnológico Primera
- 1975 No recombinantes Alta

Generación Segunda

Tercera

1975Recombinantes Alta
Bajo Bajo

1985Recombinantes Baja
Bajo Bajo

Alto Alto

Tabla 1.2: Características de los Productos Biotecnológicos
Característica Producto tipo Idealización Tamaño Actividad al secretarse Pureza deseada Similitud con contaminantes Valor Primera Antibióticos Aminoácidos Extracelular e intracelular Intermedio
Si

Generación Segunda Insulina humana
HC

Tercera Factor VIII
tPA

Intracelular Macromoléculas
No

Extracelular Macromoléculas
Si

Alta Baja Bajo

Muy alta Alta Alto

Muy alta Alta Alto

del Plasminógeno tisular (t-PA de sus siglas en inglés) son productos característicos de esta generación. Debido a su empleo con fines terapéuticos, estos productos deben ser obtenidos con un alto grado de pureza (Datar et a/, 1993) .

1.2

Características de los Bioprocesos

En la Tabla 1.1 y en la Tabla 1.2 se presentan algunas características asociadas a los procesos y a los productos de las tres generaciones de la Biotecnología, aquí descritas.

10

CAPÍTULO 1. INTRODUCCIÓN

Los procesos biotecnológicos tanto de la segunda como de la tercera generación, se encuentran en una etapa de desarrollo que requiere ampliar el conocimiento de las propiedades fisicoquímicas de los productos y sus contaminantes, con el objeto de seleccionar las operaciones de separación adecuadas debido al alto grado de pureza requerido por los productos. Los aspectos de rendimiento y pureza del producto son básicos para determinar la viabilidad de un bioproceso, debido a que para lograr el grado de purificación requerido por este tipo de productos, generalmente la purificación debe realizarse en varios pasos. Un ejemplo de lo anterior se muestra en la Figura 1.3 con un diagrama de flujo del proceso para la obtención de insulina humana a partir células de E. coli recombinante. Las operaciones de bioseparación para un proceso deben seleccionarse cuidadosamente con el fin de que el costo sea mínimo. Es decir, si el rendimiento por paso de purificación es bajo y se requieren varias pasos, puede tenerse un proceso no viable económicamente debido a su aún más bajo rendimiento global. La Figura 1.4 muestra como decrece el rendimiento global en función del número de pasos de purificación, considerando rendimientos por paso de 95 %, 90 %, 80 % y 60 %. Por ejemplo, si el rendimiento promedio por paso en un proceso de purificación de 10 pasos es de 60 %, el rendimiento global del proceso de purificación es de 0.6 %. Si debido a la desnaturalización del producto el rendimiento desciende a 30 % por etapa, el rendimiento global del proceso es 0.0006%. Esto significa que se require 1000 veces más cantidad de materia prima para lograr la misma masa de proteína purificada. Por otra parte si el rendimiento promedio por paso fuese de 95 %, el rendimiento total alcanzado sería del 60 % (Hearn y Anspach, 1990). Ejemplo 1.1: Estimación de la pureza y el rendimiento de una enzima en un proceso de purificación. En el desarrollo de un proceso para la obtención de una enzima a partir de E. coli, se sabe que ésta tiene un 80 % de humedad y que el 60 % de su peso seco es protema. El proceso de purificación de la enzima consta de 4 pasos (Figura 1.5). En la tabla siguiente se presenta

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

11

Salida delire este'ril

Esterilizador continua (A)

i

uu
. i[ J

Tanques de m

l±LJJ

Sedimentador 1 Sedimentador2 o*1 (B) » ' filtra de aire esteVH

TSrfii r tííH i hi
I •** t Fermentadorde producción (O) Centrifugas

Tanque de almacenamiento

intercambiador de calor

e
(E)

'—.

Compresor Tratamiento de i* desechos Tanque de
* 4•sterilizaáon

^ t t
1 1 1

otras corrientes de desecho CNBr formato

nn i_r
.f , 1

Reactor para eliminación de CNBr (H)

Reactor de solubilización

Figura 1.3: Representación esquemática del proceso para la obtención de Insulina Humana. Fuente: Datar y Rosen, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

12

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

Del tratamiento d«CNBr

bufer tris

enzimas

Reactor de cuMonaáón (K) bufer bufer Iris tris*NaCt _,;•?

ü?
T
d**«eho i HiPLC (O) enzimatico (NJ

^
desecho (M) acetato de amonio

Reactor de renaturalización (L)

3r
1

IjU
Uhrafihraeión vapor PRODUCTO Reactor de cristalización (Q) Centrifugación Evaporador instantáneo

Figura 1.3: Continuación.

1.2. CARACTERÍSTICAS

DE LOS BIOPROCESOS

13

Rendimiento ( % )
100 _

95%

90%

4 6 8 Número de pasos

Figura 1.4: Representación gráfica del rendimiento global de un proceso de purificación de un producto biotecnológico en función del número de pasos. Fuente: Hearn y Anspach, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright © 1985. Todos los derechos reservados.

14

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

la cantidad de enzima y de proteína total al final de cada paso. Proteína Enzima Fracción total (g) total (g) enzima xlO~ 3

Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Crom atografía gel

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

Se desea obtener el factor de purificación de la enzima en cada paso, el rendimiento por paso y el rendimiento global.
/-'

Solución:
El factor de purificación, el rendimiento por paso y el rendimiento global del proceso se presentan junto con los datos del problema en la tabla siguiente:
Paso Rompimiento celular Precipitación Intercambio iónico Cromatografía
gel

Prot. tot. (g)

Enzima tot. (g)

Fracción enz. XlO~ 3

Factor de purific.

% Recup* ración Por etapa Global

12.000 1.800 0.240 0.036

0.080 0.060 0.048 0.036

6.667 33.333 200.000 1000.000

1 5 30 150

100 75 80 75

100 75 60 45

a). El factor de purificación se obtiene mediante el cociente de la fracción de enzima en cada paso, entre la fracción de enzima inicial. b). El rendimiento en cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en cada paso, entre la cantidad total de enzima al inicio del paso. c). El rendimiento global al final de cada paso está dado por el cociente de la cantidad de enzima total obtenida en ese paso entre la cantidad total de enzima inicial.

1.2. CARACTERÍSTICAS DE LOS BIOPROCESOS

15

Rompimiento celular con sulfato de amonio

i Precipitación

Fracción colectada

35

40

45

50

55

60

70

100

% de saturación Cromatografía de intercambio iónico

Carga

Elución Número de fracción

Cromatrografia de filtración por gel

Producto

Número de fracción

Figura 1.5: Proceso hipotético de cuatro pasos para la purificación de una enzima.

16

CAPÍTULO 1.

INTRODUCCIÓN

El conocimiento tecnológico de los procesos biotecnológicos de segunda y tercera generación es limitado. Actualmente es necesario profundizar en los métodos de escalamiento de algunas operaciones, ya que generalmente se han adaptado a escala comercial a partir del laboratorio. En el proceso de escalamiento es necesario considerar los volúmenes y normas del mercado para el producto (Nuil, 1987). La Biotecnología ha adoptado con éxito operaciones de la Ingeniería Química, en la purificación de productos biotecnológicos tradicionales. Sin embargo, existen limitantes para lograr ésto cuando se trata de obtener productos característicos de la segunda y tercera generación. Existe una necesidad real de desarrollar procesos de bioseparaciones apropiados, con la participación de bioquímicos y biólogos con el propósito de lograr, tanto la pureza deseada del producto, como la eficiencia y rentabilidad del mismo (Wang, 1988).

1.3

Sumario

Los procesos de bioseparación involucran la recuperación y purificación de productos provenientes del biorreactor. Las bioseparaciones comprenden todos los tratamientos que requiere el caldo de cultivo para obtener un producto biotecnológico en las condiciones de pureza y actividad requeridas. La economía de los procesos biotecnológicos depende en gran medida de las operaciones de bioseparación que involucran, de tal manera que la correcta selección de estas operaciones tiene un fuerte impacto en el éxito del proceso.

1.4.

PROBLEMAS

17

1.4

Problemas

1.1 .-Efectuar un análisis comparativo en relación a las operaciones de separación que utilizan, de los procesos para la producción de ácido cítrico, penicilina e insulina. 1.2.- Un proceso para la recuperación de hidroxibutirato deshidrogenasa consta de tres pasos: Un rompimiento de las células para liberar la enzima intracelular, seguido de dos pasos de adsorción/ desorción por afinidad. En la siguiente Tabla se presentan los datos obtenidos de actividad de enzima y proteína total al final de cada paso. Calcular la actividad específica, el índice de purificación y el % de recuperación. Paso Rompimiento Ads/Des (1) Ads/Des (2) Actividad Total Proteína Total (Unidades) (mg) 6,860 6,800 5,380 76,200 2,200 267

1.3.- Completar la siguiente tabla relacionada con la purificación de una enzima:
Vol.
Material Extracto ler. piso
mi
500
50

Conc. prot. mg/ml
14 10

Prot. total "IR
7 60

Act. enzim. U/ml

Act. total U

Act. esp. U/mg

Rend. Total Etapa

Fac. purif.

1.4.- En un proceso biotecnológico para producir una enzima que se encuentra en desarrollo, se obtiene una concentración de 0.1 mg/ml de la enzima en el caldo inicial. Si a los proyectos se les exige un margen sobre ventas del 50 %, estime el costo de producción máximo del producto utilizando la Figura 1.2

18

CAPÍTULO!.

INTRODUCCIÓN

1.5

Bibliografía

Bujurstrom, E. 1985. Biotechnology. Chem. Eng. Feb. 18. Me Graw Hill. New York. 126-158. Cooney, C. L. 1990. Separations for biotechnology. Trends in Biotechnology. 8, 338-340. Datar, R.V., Cartwright, T. y Rosen, C.G. 1993. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. Bio/Technology. 11, 349-357. Datar, R. y Rosen C. G. 1990. Downstream process economics. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 741-793. Dwyer, J. 1984. Scaling up bioproduct separatíon with high performance liquid chromatography. Biotechnology. 2, 957-964. Hearn, M. T., y Anspach, B. 1990. Chemical, physical and biochemical concepts in isolation and purification of proteins. En: Separations Processes in Biotechnology. Asenjo, J.A. (Ed.). Marcel Dekker Inc. New York. 17-63. Kalk, J. P. y Langlykee, A. F. 1986. Cost estimation for biotechnology projects. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. Demain, A.L. y Solomon, N. (Eds.). American Society for Microbiology. New York. 363-384. Nuil, H. R. 1987. Selection of a separation process. En: Handbook of Separation Process Technology. Rousseau, R.W*, (Ed.). John Wiley & Sons. New York. 982-995. Wang, D. I. C. 1988. Biotechnology: Status and perspectives. AIChE, 84-18, 1-21.

(Kelly. particularmente en su secuencia de operaciones de bioseparación. En el diseño de un proceso es necesario un trabajo completo y cuidadoso que permita desarrollar y evaluar varios esquemas de operación con el propósito de aproximarse al diseño óptimo. el valor esperado del producto pudiera no justificarlo (Knight. En este capítulo en la sección 2. 1987). Un aspecto central en el diseño de un bioproceso. 1990). Por ejemplo. fundamentalmente los económicos relacionados con el mercado y los técnicos que involucran el diseño del proceso . El estudio de mercado permite evaluar el potencial económico del proceso y es requisito indispensable para la formulación del proyecto a desarrollar. debido al alto costo que éstas representan.Capítulo 2 Selección del Proceso 2. es la especificación de la secuencia de operaciones de separación que se requieren.2 se presenta los principales aspectos económicos y técnicos a considerar para la selección de un proceso biotecnológico. aún cuando la factibilidad técnica de un proceso dado pueda ser atractiva. Las metodologís utilizadas para 19 .1 Introducción El desarrollo de un proceso biotecnológico para la obtención de un producto de interés comprende varios aspectos. bajo las restricciones presupuéstales establecidas. Los equipos más comunes para realizar dichas operaciones se describen en la sección 2.3.

Operaciones y secuencia -Escala • Etapas o tiempo por operación -Costo PRODUCTO Figura 2. la selección apropiada de la secuencia de bioseparaciones para un proceso se establecen en la sección 2. 2.1): • Económicos: Relacionados principalmente con el mercado y las especificaciones del producto. . SELECCIÓN DEL PROCESO ESPECIFICACIÓN DEL PRODUCTO PROCESO .2 Fundamentos Los factores que intervienen en la selección de un proceso biotecnológico son de dos tipos (Figura 2. • Técnicos: Relacionados directamente con el el proceso.5.20 MERCADO CAPÍTULO 2.1: Elementos para la selección de un bioproceso.

El primer paso en la selección de un proceso es la definición del objetivo del mismo. la economía del proceso cobra especial importancia (Spalding.1): 1. Con frecuencia las especificaciones sobre pureza . No. Caso tipo Compañía Producto Precio por dosis Demanda Anual (USA). especificando claramente la pureza y recuperación que se desea obtener.2. pero existe una tendencia hacia un incremento en la competitividad del mercado. ya que determina el precio del producto. FUNDAMENTOS Tabla 2. * Somatotropina de Bovino 2.1: Influencia del mercado en el precio del producto. es posible que se seleccione el primer proceso exitoso que se logre en el laboratorio.000 5 X 10* 10 Kg 100 Tons. Es en esta transición donde el diseño adecuado de los bioprocesos presenta especial relevancia. Productos de alto valor.1 Mercado y Especificación del Producto El mercado es un factor muy impoortante para el establecimiento de un bioproceso. 2. 1991. Sin embargo. Productos de alto volumen de producción.2. en mercados muy competitivos. como la BST. si el mercado del producto aumenta y aparecen nuevos competidores. 0. de Dosis Masa 21 1 2 GENENTECH Diversas t-PA BST* $ 2000.00 $ 100. En los productos libres de competencia. Actualmente varios productos biotecnológicos modernos están libres de competencia. como el t-PA.2. El mercado de los productos biotecnológicos puede enmarcarse entre dos casos extremos (Tabla 2.50 Datos de: Spalding. 1991). bajo volumen de producción y libres de competencia.

1986). Tal y como se observa en la .2 En un análisis realizado con datos de 100 artículos publicados sobre purificación de proteínas. en la búsqueda de la optimización del mismo. se muestran en la Tabla 2. El costo del proceso.2 El Proceso El diseño de un proceso comprende todo el trabajo conceptual que es necesario realizar antes de construir una planta productiva. se observa que hay una secuencia preferencial aunque no estricta. y tiene como objetivo definir las principales características del proceso como: La secuencia de operaciones de proceso.2. Las especificaciones de recuperación son fijadas para asegurar la economía del proceso. así como su pureza y la recuperación deseada. El objetivo del diseño de un proceso de separación es explotar esta diferencia en las propiedades en la forma mas económica. SELECCIÓN DEL PROCESO del producto son establecidas por regulaciones legales o por el mercado. debido a limitaciones de tiempo esta fase no siempre se concluye (Nuil. Las operaciones de separación se basan en las diferencias que existen entre las propiedades físico-químicas de los componentes presentes en el caldo de cultivo. con la cual se desarrollan las operaciones de separación (Bonnerjea y Hoare. En este trabajo sólo se abordan estas últimas. Generalmente existe una propiedad diferente que es la base primaria para la separación. En la práctica. el siguiente paso es determinar que operaciones son capaces de realizar la producción y la separación del producto. así como la propiedad en que se basan. Operaciones de Separación y su Secuencia Una vez definido el producto (o productos) que se desea obtener. Idealmente la recuperación debe ser una variable dependiente del diseño de proceso.22 CAPÍTULO 2. Los métodos de separación usados con más frecuencia. La escala del proceso. 2. 1987). Número de etapas por operación.

Método (Operación) Propiedad Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Ultrafiltración Intercambio Iónico Diálisis Electrodiálisis Membranas Líquidas Electroforesis Cromatografía Filtración por Gel Presión de vapor Distribución entre fases b'quidas inmiscibles Punto de fusión o solubilidad Sorción superficial Difusividad y solubilidad Tamaño molecular Equilibrio Difusividad Carga eléctrica y movilidad iónica Difusividad y equilibrio Carga eléctrica y movilidad iónica Depende del tipo de fase estacionaria Tamaño y forma molecular .2. FUNDAMENTOS 23 Tabla 2.2: Operaciones de separación y su propiedad básica.2.

Esto es importante porque varios procesos desarrollados en el laboratorio no tienen su contraparte . la separación por afinidad y finalmente la filtración por gel. la realidad es que cada producto presenta una secuencia de separación óptima diferente. deberá ser compatible con la escala industrial a la cual se va a diseñar. Todos los derechos reservados. Fuente: Bonnerjea et al. Escala de Operación Frecuentemente la escala de operación es el factor económico determinante en la selección entre procesos de separación alternativos. Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Cualquier proceso de separación que se escoja.24 CAPÍTULO 2. SELECCIÓN DEL PROCESO i 2 a 4 s Afinidad e __ Homogmizactón Intercambio iónico Filtración «n G«l PrecipiUción Figura 2. Esta secuencia es valida generalmente en el caso en que el producto sea una proteína.2 frecuentemente la homogeneización va seguida de una precipitación. Figura 2. Copyright ©1986. después la cromatografía de intercambio iónico. 1986.2: Secuencia de operaciones utilizadas en un proceso de purificación de proteínas.

es una operación que se realiza a pequeña escala. Debido a consideraciones de confiabilidad del diseño. todas las operaciones deben ser incluidas en la planta piloto aún cuando no se requieran pruebas individuales de confiabilidad de cada una de ellas. Así por ejemplo. En algunos casos. mientras que en otros casos el límite superior se debe simplemente a las limitaciones que ofrece la fabricación de equipo comercial. Las operaciones de separación que aparecen en la Tabla 2. Cada operación de separación tiene en sí misma una determinada confiabilidad que es producto de la experiencia y conocimiento de la misma. este límite superior se debe a una restricción impuesta por un fenómeno físico inherente a la operación de separación.1).2. entonces la única forma de tener confiabilidad a gran escala es usando múltiples unidades en arreglo paralelo. La extracción requiere de al menos dos etapas de contacto para separar un flujo de alimentación en dos corrientes y obtener el producto en condiciones aceptables. FUNDAMENTOS 25 industrial. Muchas operaciones de separación tienen un límite respecto de la capacidad máxima que pueden manejar y esto limita la escala de producción para la cual esa operación puede ser considerada. puede ser necesaria una planta piloto para probar la operación integrada del proceso. Así se tiene que la destilación es la operación más confiable de los procesos de separación por el conocimiento que de ella se tiene. siempre y cuando no haya formación de mezclas azeotrópicas entre los componentes que serán separados.1 tienen diferente habilidad para realizar una separación en una sola etapa. es el número de etapas de contacto que se realizan por operación.2. En tal caso. En la mayoría de los casos una operación de una sola etapa es más económica que una operación de etapas múltiples. Número de Etapas por Operación Otra variable importante en la selección de un proceso de separación (Figura 2. la destilación es una operación capaz de separar una mezcla binaria en una sola etapa.3 se pueden observar las capacidades máximas en una sola etapa de algunas operaciones de separación. La electroforesis en cambio. En la Tabla 2. La adsorción es una operación que consiste de .

45xl06 kg/año de flujo de agua por módulo. Copyright ©1987.45xl06 kg/año flujo de agua por módulo. 1987. con varios módulos por unidad 450xl06 kg/año de ' flujo de agua 0.3: Capacidades máximas por operación.OQxlO6 kg/año de líquido 100 kg/año de producto Ultrafiltración Intercambio Iónico Electrodiálisis Electroforesis Separaciones Cromatográficas Filtración por Gel Fuente: Nuil. Operación de Separación Destilación Extracción Cristalización Adsorción Osmosis Inversa Límite Comercial por Operación Simple Sin límite Sin límite 10-70xl06 kg/año Sin límite 0.26 CAPÍTULO 2. . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.45x106 kg/año de flujo de agua 1000 kg/año de producto O. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2. Todos los derechos reservados. con varios módulos por unidad 0.

Costos Una vez que ha sido definido el objetivo de la separación. Los costos de las materias primas son más relevantes en sistemas de producción basados en procesos biológicos que en plantas químicas convencionales. Ambos parámetros. que se ha identificado el producto que se desea obtener y se ha establecido el proceso. y la regeneración del adsorbente. los costos fijos y la parte proporcional de los gastos generales de la planta. En el caso de las operaciones de electroforésis. En los procesos de producción biotecnológicos. se requieren etapas de procesamiento adicionales para obtener el producto con la pureza deseada. dado que separan el producto por dilución. en caso de que esto no sea así. sino que .2. la adsorción en si misma. FUNDAMENTOS 27 dos etapas.2. esto es.Como se muestra en la Tabla 2. la separación requiere varias etapas. En los costos de fabricación se ubican los costos de operación. En los primeros las materias primas pueden representar del 30 al 80 % del costo de producción. Esto comprende la estimación del costo total del producto y del capital necesario para la inversión. Costo Total del Producto. el costo total del producto se divide comunmente en dos partes: costos de fabricación y gastos generales. En cualquier caso de los señalados anteriormente. requieren etapas de concentración posteriores. conjuntamente con los ingresos esperados. 1986). no solamente las materias primas principales (aquellas que se convierten directamente a producto) tienen un impacto significativo sobre la economía del proceso.4. Teóricamente la ultrafiltración puede separar dos solutos de alto peso molecular si la diferencia en tamaño molecular es del orden de 10. determinan la rentabilidad del proceso. mientras que en los convencionales sólo representan del 10 al 50 % de ese costo (Kalk y Langlykke.. debido a que éstas constituyen la'mayor parte de estos costos. cromatografía. y la filtración en gel. Dentro de los costos de operación directos se puede resaltar los costos de las materias primas que son consumidas directamente en el proceso de producción del producto o que son usadas en la recuperación del mismo. se debe estimar el costo del mismo.

Materias primas y suministros a. fletes d. I. VI. Impuestos C. operación e. materia prima secundaria c. Proporción de Gastos Generales de la Planta Administración Mercadotecnia Investigación y Desarrollo Para estimación de costos: Costo de Fabricación (CF) = I+II+IH Gastos Generales (GG) = IV+V+VI Costo Total del Producto =CF-f GG - . V. materia prima primaria b. Depreciación B. laboratorio g. SELECCIÓN DEL PROCESO Tabla 2. d.28 CAPÍTULO 2. salarios y estímulos b. IV. vapor electricidad agua tratamiento de desechos II. c. b. mantenimiento f. Costos Fijos A.4: Factores que intervienen en el costo total del producto. Servicios a. Mano de obra y supervisión a. horas extras C. otros B. Costos de Operación Directos A. Seguros D. Renta III.

Estimación del Capital de Inversión. influyen considerablemente en los costos de producción. Los sueldos y salarios representan una fracción importante del total de los costos de fabricación. Proporción de Gastos Generales de la Planta ( 1 0 % ) IV.2. enzimas inductores y materiales de recuperación. El capital fijo se refiere a todos los fondos necesarios para el diseño. esto es.El capital de inversión total se conforma del capital fijo y del capital de trabajo. Costos de Operación Directos (59 % ) II. construcción y . FUNDAMENTOS 29 I.2. En la Figura 2. Los costos fijos comprenden la depreciación de maquinaria y equipo impuestos y seguros principalmente. ' La parte proporcional de los gastos generales de la planta que se le asignan al producto. del 10 al 40 %.3 se presenta una estructura de costos típica para un producto biotecnología). Gastos Generales (20 % ) de °0stos ?ara un Producto biotec- también las materias primas secundarias como cofactores.. son aquellos que se requieren para la operación eficiente de la planta pero no son asignables directamente al producto y se estiman entre el 10 y 50 % de los sueldos y salarios (Kalk y Langlykke. Costos Fijos ( 1 1 % ) III.

Es en este punto donde se hacen las estimaciones de escala del proceso y la estimación del costo de los equipos necesarios para las operaciones previas y las bioseparaciones. Para producir SP mediante un cultivo de células recombinantes. se cuenta con los siguientes datos: 1.00 dlls. hasta más del 50 % del capital fijo para nuevas tecnologías donde no se tiene experiencia. Los costos de arranque son difíciles de estimar y pueden ir desde menos del 5 % del capital de inversión fijo para una planta basada en una tecnología ya establecida. se escoge el que requiere mayor capital solamente si la rentabilidad generada es tan grande que justifica la diferencia de requerimientos de capital entre ambas alternativas.000 Kg/año Precio por dosis de 200 mg = $6. Ejemplo 2. como son los proyectos biotecnológicos. Cada cerdo requiere de una sola dosis de 200 mg. El capital de trabajo es la inversión necesaria para la operación normal de la planta una vez contruída. Cuando se administra a cerdos la hormona somatotropina porcina (SP) se incrementa la velocidad de su crecimiento hasta en un 30 % y disminuye su contenido de grasa.Producción de somatotropina porcina. Técnicos: Concentración celular al final de la fermentación en peso seco 35 g/i Peso proteína/peso celular: 57 % Proteína SP/proteína total : 20 % Recuperación total esperada: 25 % Duración del ciclo de fermentación: 30 h Días de operación anual: 330 días . Cuando se comparan dos procesos de separación alternativos. y comprende los requerimientos de sueldos e inventarios. (base: 1988) 2.1.30 CAPÍTULO 2. Mercado: Producción estimada = 6. SELECCIÓN DEL PROCESO arranque de la planta.

784 I/ciclo puede ser manejado por un solo fermentador. „ x ___ ? x * 0.2 Kg 0.784 I ¡ciclo Este volumen de 22. Estimados: (a) Producción de peso seco celular: 31 ™™ = 6000 — año 0.2.015. Si se considera el volumen de fermentación como el 70 % del volumen total del fermentador.2.000 Kg * 35 f = 6.500 / Considerando este fermentador se realizan las siguientes estimaciones de costos.25 Kg = 210.015. entonces el volumen de fermentación V/ es: Vj = 32.037 / ~ (c) Volumen por ciclo de fermentación Vc = Vc 6. . FUNDAMENTOS Impuesto sobre la renta (ISR): 45 % 3. = 22.500 Kg/año 1 Kg 1 Kg 1 Kg x ..57 (b) Volumen de fermentación total (Vt): 210. .037 / dias x ciclo x "24 h ^ ~ ~ .

585. Administración: V.00 5.939.141. El retorno sobre la inversión.050.949.00 Subtotal: 5.746.00 1. SELECCIÓN DEL PROCESO 4.00 $ 31.00 7.756.680.600.00 293. construcción y contratos: Capital de trabajo.975. vapor.00 Estimar para este proceso: 1.864.00 2.618.00 $ 17.976. (A) Equipo de proceso.00 Subtotal: 2.581.469.054. El costo promedio del producto. Capital de inversión: Inversiones fijas.420. electricidad y tratamiento de desechos): II.00 13.848.191.000.500. base 1988) I.756. Investigación y Desarrollo: Total: 6. (A) Ingeniería. (A) Materias primas y suministros: (B) Mano de obra y supervisión: (C) Servicios (agua.141.00 580.780.236. servicios e investigación y desarrollo: 10.00 2.592. 2 meses de materias primas.00 15.00 000.00 Subtotal: 1.00 587.679. Costos (dlls. Mercadotecnia: VI.420.00 1.579.579.100.315.00 2.00 85. Costos fijos.951.00 000 000. .873.00 1.165.00 Subtotal: Total: 1. 2.880.763.32 CAPÍTULO 2.153.518.720.00 Subtotal: 13.950. (A) Depreciación: (B) Impuestos: (C) Seguros: (D) Renta: (E) Mantenimiento: III. Gastos generales de planta: IV. instalación e instrumentación: (B) Instalaciones eléctricas: (C) Edificios: (D) Instalaciones: Inversiones diferidas. Costos de operación directos.00 487.

FUNDAMENTOS 3. 2. Cálculo del retorno sobre la inversión: Ingreso anual: 6. Costo porcentual del producto por concepto.083.2.264016 3.270 2.746 Flujo de efectivo neto $ 92.016 El retorno sobre la inversión RSI expresado en porcentaje.764 73.236 162. por lo tanto: RSI $3115300 RSI = 296% Esto significa que el proyecto es muy atractivo bajo las condiciones establecidas. 932 $/Kg = $92.000 £j£ x ^92 Menos costo anual Utilidad bruta Menos 45 % ISR Utilidad neta Mas depreciación 180.264.592. . 33 Solución: 1.494 89. está dado por el cociente del flujo efectivo neto y el capital de inversión por 100.324.592. 000 Kg/año Costo promedio = 2.000.236/ano G ost o F promedio = --6.407. Costo promedio del producto: El costo promedio del producto se obtiene mediante el cociente del costo anual y la producción estimada del producto.939.000 17.2. esto es: $17. El costo porcentual de cada concepto del producto.

236 1.592.746 17.581 17. .34 CAPÍTULO 2.939. La Tabla 2. Remoción de insolubles: Con frecuencia se usan sistemas de filtración al vacio.00 % 2.236 1.592. así como centrífugas tubulares.592.054.000 .8% 100 16 7% x iuu .236 X 2.236 X 1.1 D .592.763./0 ~ ' Total: 100.315.3 Equipo Parte importante en la selección de un proceso biotecnológico consiste en determinar el equipo necesario para realizar una determinada operación. SELECCIÓN DEL PROCESO Este costo está dado por el cociente del costo de cada concepto entre el costo de operación: Concepto Materias primas y suministros Servicios Depreciación Mantenimiento Gastos generales Inversión y desarrollo Otros Costo porcentual 6.592. sistemas de filtración intermitentes. Algunos de los equipos más usados en cada una de esas etapas son los siguientes: 1.873 y 1 00 . de discos con descarga intermitente o de canasta.236 X 1UU ~ O.8 4% 17.5 muestra las operaciones más comunes por etapa en función de las características de los procesos y productos biotecnológicos. 17.500.848 17.592. Varios tipos de equipos pueden ser empleados para una misma operación y la selección depende en gran medida del tipo de producto que va a obtenerse.469. 17.864 .1VO 2..236 X 8. .

Homogeneización .Permeabilización Concentración .Electroforesis .2.Destilación Extracción en dos fases acuosas Adsorción Precipitación Ultrafütración Purificación .Cromatografía .Adsorción .Extracción por solventes .Adsorción .Cromatografía .Abrasión . EQUIPO 35 Tabla 2.5: Operaciones de bioseparación empleadas de acuerdo a las características del proceso Generaciones Etapa Primera Segunda Tercera Remoción de Insolubles Filtración Centrifugación - Filtración Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Microfiltración Ultrafiltración Centrifugación Rompimiento .Ultrafiltración .3.

.36 CAPÍTULO 2. la teoría y el apoyo computacional disponible. 4. se derivan del diagrama de flujo seleccionado. hasta equipos muy sofisticados como los utilizados en cromatografía liquida de alta resolución. 3. El éxito de un diseño depende fuertemente de la síntesis del proceso ya que las tres actividades restantes: análisis. Entre estas actividades podemos destacar las siguientes: Síntesis: Establecimiento de las operaciones del proceso o diagrama de flujo.4 Diseño El diseño de un proceso biotecnología) comprende diversas actividades basadas en la experiencia. evaluación y optimización. También son utilizados en esta etapa sistemas de electroforésis. 2. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. seguridad y confiabilidad del proceso. Acabado: En la etapa de acabado. Análisis: Modelación y establecimiento de los valores de las variables del proceso. 5. Optimización: Determinación de las condiciones para lograr el valor óptimo de una función objetivo. Rompimiento celular: En esta etapa los equipos que más se manejan son los homogeneizadores y los molinos de perlas. dependiendo de la presentación con que se va a lanzar el producto al mercado. pueden utilizarse liofilizadores secadores y cristalizadores. Concentración: En la concentración del producto se emplean extractores que pueden funcionar en forma continua o intermitente. así como también tanques agitados y lechos empacados con diversos tipos de adsorbentes. Purificación: En esta etapa se emplean diversos sistemas cromatográficos que se traducen en la utilización desde equipos muy sencillos como puede ser una simple columna. Evaluación: Economía.

4. Sin embargo.2. DISEÑO 37 Actualmente existe un gran interés por el desarrollo de métodos computacionales para el diseño de procesos que incluyan la síntesis de los mismos y que permitan el análisis y la evaluación de diversas alternativas. ni las descripciones cuantitativas de los métodos de separación están suficientemente desarrollados. Cuando el caso base ha sido evaluado. el diseñador de proceso determinará los costos de operación y capital con el mayor detalle posible. • Síntesis de procesos. El proceso alternativo se evalúa con las mismas restricciones que el caso base.1 Desarrollo de un Caso Base En la práctica normal el caso base representa el juicio cualitativo del ingeniero de diseño y presupone ser el proceso de separación más económico que pueda ser desarrollado dentro de las restricciones que en tiempo y dinero tiene el proyecto (Nuil. Una vez que el caso base ha sido seleccionado. dado que ni los algoritmos computacionales. se hace un juicio sobre el más próximo proceso económicamente competitivo. entonces éste nos lleva a un nuevo caso base de diseño. Este nuevo caso base vuelve a probarse hasta encontrar un caso base óptimo. En esta sección se describen los dos enfoques complementarios utilizados para la selección de un proceso: • Desarrollo de un Caso Base. lí)87). estos métodos cada vez son más utilizados como apoyo en algunas fases de la selección del proceso. para encontrar en forma rápida el diseño óptimo. — Método heurístico — Método algorítmico — Sistemas expertos 2. En la práctica los procesos rara vez se seleccionan de esta manera.4. . Si el proceso modificado tiene costos de operación y capital más bajos.

se llama síntesis de proceso. Aún así. la aproximación heurística no garantiza la solución óptima. Si el producto es intracelular. 4. Seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes.2 Síntesis de Proceso La investigación que se realiza para seleccionar un proceso. Primero remover el componente más abundante. Hacer las separaciones mas caras y difíciles al final. Si la célula cultivada es de mamífero. 2. se requiere romper la célula. Algunas de estas reglas heurísticas son generales y aplicables para la síntesis de procesos de bioseparación. El método heurístico. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. Cuatro de tales reglas heurísticas son (Petrides et a/.38 CAPÍTULO 2. el método algorítmico y los sistemas expertos. 1989): 1. el sentido común y la intuición del ingeniero. estos métodos han probado ser una herramienta valiosa en la optimización de la estructura del proceso. Existen reglas heurísticas más específicas que las mencionadas anteriormente. como las usadas en el diseño de procesos de purificación de proteínas a gran escala: 1. Si el rompimiento de la célula se lleva a cabo por métodos mecánicos. 2. . 3. es decir la secuencia de operaciones para transformar una serie de materias primas en productos.4. Al basarse en la experiencia. Método Heurístico El método heurístico trata de limitar las alternativas posibles para un proceso usando reglas desarrolladas a través de diseños previos y la experiencia. se requiere precipitar los ácidos nucleicos. 3. Primero remover lo que sea mas fácil. el producto es extracelular. son producto de este tipo de trabajos.

La recuperación y purificación de los productos extracelulares es comparativamente más fácil de realizar que la de los productos intracelulares. se seleccionan para cada etapa las operaciones alternativas posibles. es menor que 60 g/l. 8. 7. las operaciones que se utilizan son las siguientes: . Posteriormente.. 1990). El primer paso en la síntesis de un proceso. es necesario distinguir entre productos extracelulares e intracelulares. se requiere concentrar el producto. El desarrollo del diagrama de bloques está basado en la estructura general que se prqsenta en la Figura 2. Si la concentración de la proteína total al final de la recuperación y antes de la purificación. debe escogerse el intercambio iónico. se requiere un pretratamiento. En el desarrollo de un diagrama de bloques para un nuevo proceso.4 1. en el desarrollo de bases de conocimientos para sistemas expertos (Prokopakis y Asenjo.Se presenta en esta sección una aproximación heurística de la síntesis de un proceso de bioseparación de materiales biológicos típico (Petrides et a/. DISEÑO 39 4. 1989). La filtración en gel se puede utilizar como una etapa de separación intermedia sólo para la eliminación de sales. En el caso de los productos intracelulares. Aproximación Heurística para la Selección de un Proceso de Bioseparación. 5.2. La filtración por gel se puede utilizar como un paso de acabado sólo para separar fracciones proteicas. 6. consiste en desarrollar un diagrama de bloques de sus principales etapas. Etapas de Recuperación Primarias: Productos Intracelulares. Si la alimentación para la purificación por cromatografía no es un caldo claro. Este tipo de reglas son utilizadas conjuntamente con otras aún más específicas.4. Si uno o dos pasos de intercambio iónico producen una pureza similar a la de cromatografía de afinidad.

40 CAPÍTULO 2. . Todos los derechos reservados.4: Diagrama de flujo de un proceso de bioseparación. Copyright ©1989 AIChE. SELECCIÓN DEL PROCESO BtORREACTOR Producto intracelular COSECHA DE CÉLULAS Centrifugación Microfirtración UKrafütración Producto extraoelular REMCOON DE BIOMASA Filtración al vacío Centrifugación Microfiltración Ultrafiltradón Filtración en prensa Filtración en cámara Rotación ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Homogenización Molino d« perlas Choque osmótico EXTRACCIÓN DELPROOUCTO Solventes orgánicos REMOCIÓN DE DESECHOS Centrifugación Micfufilb ación Filtración al vacío Filtración por presión Polímero -s Ruidos supx Adsorción Micelas inv« Destilación RENATURAUZACION Solubilización Reoxidación CONCENTRACIÓN Ultrafiltradón Evaporación Osmosis inversa Precipitación Cristalización Extracción Adsorción Destilación Especificaciones de afta pureza Especificaciones de baja pureza PURIFICACIÓN FINAL Adsorción Filtración gei Eledrodialisis Diafiltración Electroforesis DESHIDRATAOON Secado por aspersión Secado por Ikrfilizaoón Secado en lecho fluidizado Figura 2. Fuente: Petrides et al. Reproducida con el permiso de American Institute of Chemical Engiixeers. 1989.

Con la centrifugación siempre se pierden de 1 a 5 % de las células. microfiltración o filtración por presión. . Cuando el flujo es mayor que 20 //m 2 — h. (c) Remoción de Desechos Celulares: Una vez que la célula se rompe y el producto es liberado. Como se establece en la Figura 2. La filtración por membrana tiene ventajas para cosechar células pequeñas como la de E.2. también se utilizan métodos químicos. así como el choque osmótico que puede utilizarse para liberar proteínas del espacio periplásmico. Con filtración por membrana se recuperan todas las células. El rompimiento de bacterias y levaduras es realizado por homogeneizadores a alta presión o con molinos de perlas. Remover primero el líquido extracelular. Otra ventaja de la filtración por membrana es la recuperación del producto. la filtración por membrana es la que produce mejores resultados. la centrifugación y la filtración por membrana son las únicas técnicas usadas para cosecha de células a gran escala. está en completa concordancia con la primera regla heurística: primero remover el componente más abundante. la disolución lipídica para el caso de bacterias gram-negativas.4. (b) Rompimiento de Células: Con frecuencia el segundo paso en la obtención de productos intracelulares es el rompimiento de la célula. DISEÑO 41 (a) Cosecha de Células: El primer paso en un proceso para la recuperación de productos intracelulares es la cosecha de células. Para el rompimiento celular. La centrifugación tiene ventajas para microorganismos grandes (diámetro mayor que 2 mieras y densidad mayor que 1030 kg/m3). coli. Para altas capacidades (varios m3/h) solamente se puede disponer de homogeneizadores. los desechos son eliminados por medio de una o varias operaciones como: centrifugación. Para microorganismos más pequeños pueden usarse técnicas de coagulación para aumentar el tamaño de la partícula que sedimentará. Dentro de éstos se puede destacar el uso de la digestión enzimática para liberar proteína intracelular de bacterias gram-positivas.4. siempre que no se presente rompimiento o lisis.

Cuando se usan microfiltros para remover los desechos. principalmente en las de cromatografía. Este es un problema común de muchas proteínas eucarióticas producidas por microorganismos procariotes. Posteriormente sigue un paso de lavado en el cual muchos de los desechos y contaminantes son eliminados. Posteriormente se pueden usar detergentes para remover otros contaminantes. Las centrífugas son eficientes para la separación de partículas grandes como los restos celulares. . debe ser separado primero de otras partículas y posteriormente tratado para que adquiera su forma activa. las células rotas y el producto son mezclados en un tanque agitado con un adsorbente. por ejemplo la hormona de crecimiento producida por E. de tal manera que cuando se usen para este efecto. Los sistemas de dos fases acuosas han sido aplicados para la recuperación de proteínas. Cuando el producto es insoluble (por ejemplo los cuerpos de inclusión). La separación del producto de los desechos puede ser llevada a cabo también por extracción con solventes orgánicos o con algunas soluciones de polímeros.42 CAPÍTULO 2. deben ser acompañadas de una operación de filtrado para eliminar las partículas más pequeñas. se requiere posteriormente realizar una diafiltración. La separación del producto de los desechos y su concentración simultánea puede ser alcanzada utilizando técnicas de extracción-adsorción utilizando ya sea adsorbentes de afinidad o de intercambio iónico. debido a que éstas pueden ocasionar problemas en etapas de bioseparación posteriores. Estos pueden ser separados de los restos celulares con una centrífuga de discos. SELECCIÓN DEL PROCESO Cuando el producto es soluble. La purificación es realizada por resuspensión y recentrifugación de la fase pesada en 2 o 3 pasos. Las proteínas recombinantes forman cuerpos de inclusión dentro de la célula huésped. coli. éste es recuperado en la fase ligera de una centrífuga o en el filtrado de un filtro. En este proceso.

DISEÑO Etapas de Recuperación Primaria: Productos Extracelulares. En esta operación los equipos más empleados son: la centrífuga decantadora.5 MPa y el flujo promedio entre 20 y 50 l/m2 . Después de una primera clarificación del caldo obtenido del biorreactor o una vez rota la célula. 43 (a) Eliminación de Biomasa: La eliminación de biomasa es el primer paso que se realiza en un proceso de separación cuando el producto es extracelular. La presión de operación típica varía entre 0. entonces primero se renaturaliza y después se purifica. . particularmente en la obtención de antibióticos. la purificación es llevada a cabo mediante operaciones de alta resolución. primero es necesario concentrarlo. Osmosis inversa. (a) Concentración. i.2. Precipitación y Destilación. No hay una alternativa única para todos los productos. los filtros prensa y los filtros con membranas. 2. Extracción: La extracción con solventes es una operación ampliamente usada en la concentración de productos biotecnológicos. Si el producto es soluble. Operaciones de Alta Resolución. Si el producto es insoluble y se encuentra desnaturalizado. Este paso se ajusta a la segunda regla heurística. el producto se encuentra diluido.2 y 0. para su concentración las operaciones alternativas son: Ultrafiltración. Se requiere que el coeficiente de partición del sistema sea alto para poder llevar a cabo la concentración del producto en el menor número de etapas de contacto. Evaporación.4. Extracción.h. ii. Cada uno de ellos tiene ventajas y desventajas según el tipo de producto y tipo de célula. haciendo de la selección un problema difícil. Una vez realizada la separación primaria del producto ya sea éste intracelular o extracelular. Ultrafiltración: Es una operación usada ampliamente para la concentración de proteínas.

Precipitación: Es una operación usada para concentración y purificación. vi. Purificación. Estas unidades compiten en el mercado con la ultrafiltración y la osmosis inversa para la concentración de compuestos tanto de alto como de bajo peso molecular. la operación de purificación final consiste sólo en la eliminación del solvente. Estos cuerpos de inclusión pueden ser solubilizados mediante el uso de sales y agentes reductores. solventes y polímeros para la precipitación selectiva de compuestos de interés. iv. (b) Renaturalización. v. 3. Destilación: En los procesos de bioseparación esta operación se utiliza generalmente para la recuperación de solventes orgánicos.44 CAPÍTULO 2. Las operaciones para la purificación final dependen fuertemente de la pureza requerida del producto. Osmosis Inversa: Se usan unidades con membranas de tamaño de poro pequeño para la concentración de soluciones de productos con bajo peso molecular. SELECCIÓN DEL PROCESO iii. Las proteínas eucarióticas producidas por organismos procarióticos. Para productos de alta pureza. La precipitación es usada para remover contaminantes. . Comúnmente se usan sales. Evaporación: Se utilizan evaporadores de películas delgadas los cuales operan a bajas temperaturas (40—50°(7) al vacío. frecuentemente forman cuerpos de inclusión en la célula recombinante. las operaciones de purificación finales son normalmente la cromatografía y la ultrafiltración. Operan a altas presiones (4 a 6 MPa) y a bajas temperaturas. Para productos de pureza relativamente baja como las enzimas para detergentes. Después que la proteína desnaturalizada es solubilizada. se eliminan los solubilizantes utilizando cromatografía o diafiltración. Al final se obtiene una solución de proteína diluida. distinguiéndose los productos farmacéuticos por su alta pureza en comparación a la de los productos industriales.

Cromatografía de Intercambio Iónico: Esta separación se basa en la diferencia de la carga molecular de las biomoléculas. la de filtración por gel y la de afinidad. Cromatografía de Afinidad: Las separaciones por afinidad o reconocimiento molecular. .2.4. ii. DISEÑO 45 (a) Cromatografía: Es una operación que se realiza al final de un proceso. en concordancia con la regla heurística "hacer las separaciones más difíciles y caras al final". tiene dos aplicaciones principales: remoción de pequeñas moléculas de las proteínas y remoción de proteínas contaminantes de la proteína producto. En la selección de la secuencia de estas operaciones debe observarse la cuarta regla heurística: "seleccionar el proceso que permita aprovechar al máximo las diferencias entre las propiedades del producto y los contaminantes. Puesto que el la carga depende del pH y la fuerza iónica. Su limitante es el alto costo de los materiales (ligandos) involucrados. iii. entre otras. Cromatografía de Filtración en Gel: Este tipo de cromatografía separa moléculas en base a su tamaño molecular. la selección normalmente está determinada por el pH al cual es estable el producto que se desea purificar. la filtración por gel es lenta comparada con otras técnicas cromatográficas. cualquier anión o catión en un soporte puede ser usado para realizar la separación. i. Es una operación apropiada en cualquier etapa de la purificación del producto y particularmente lo es para el manejo de grandes volúmenes de material con baja concentración de producto y gran cantidad de contaminantes. están basadas en las interacciones específicas entre biomoléculas. En la práctica sin embargo. Es una operación altamente eficiente ( más del 90 % ). Existen diferentes tipos de cromatografía como la de intercambio iónico. Normalmente se requiere de una secuencia de varias operaciones cromatográficas para alcanzar la pureza deseada del producto. En el fraccionamiento de proteínas.

A cada operación unitaria de la superestructura se le asocia una variable binaria (una variable que sólo puede tomar los valores O ó 1) y se construye una formulación óptima. Para minimizar el riesgo de contaminación el agua utilizada deberá estar libre de pirógenos. Actualmente la línea principal de investigación en técnicas de programación matemática. Acabado. removiendo cualquier contaminación bacteriana. El desarrollo de estos algoritmos se lleva a cabo mediante técnicas de programación matemática. cloruro de calcio o cloruro de sodio. (7. Esto se basa en el hecho de que todas las secuencias posibles para el procesos pueden considerarse rigurosamente. Método Algorítmico El uso de algoritmos matemáticos para desarrollar la síntesis de un proceso.46 4. aplicadas a la optimización estructural de un proceso. CAPÍTULO 2. Algunos productos son más estables como sólidos. Generalmente el problema consiste en separar una mezcla que tiene TV componentes: /4. . y esta separación puede ser realizada mediante M métodos de separación. . SELECCIÓN DEL PROCESO Las operaciones de acabado comprenden aquellas que se realizan para la esterilización y estabilización del producto. A continuación se presenta una descripción de estas técnicas para una situación particular. Las técnicas más comunes de deshidratación para productos inestables son la liofilización y la cristalización. se basa en el uso de la programación lineal (o no lineal) entera mixta (MILP o MINLP de sus siglas en inglés). B. Una limitante de estas membranas es la incapacidad para la remoción de pirógenos y virus. Para incrementar la vida del producto se utilizan como agentes estabilizadores algunas sales como sulfato de amonio. La síntesis consiste en obtener la . Los microfiltros de membrana son utilizados para esterilizar soluciones biofarmacéuticas. es en teoría el único camino válido para desarrollar un proceso óptimo. La idea principal de estas técnicas es la formulación de una superestructura que consiste en un diagrama de flujo que contiene todas las posibles alternativas de diseño..

3. En el caso de la extracción el orden en el cual se encuentran los componentes de la mezcla es (BAC). Para desarrollar este problema se hacen las siguientes consideraciones: 1. Se denominan fase ligera y fase pesada a los componentes adyacentes entre los cuales tiene lugar la separación. En el extractor las separaciones que tienen lugar son: (B/AC) o (BA/C). La destilación o la extracción pueden ser usadas en cualquier nivel de la separación.5. lo que significa que el componente B tiene mayor solubilidad que el componente C. 5.4. (AC). extracción 3. destilación y 2. (A). Se parte de una mezcla ternaria (ABC) y como resultado de una separación o varias separaciones de la mezcla se obtienen los subgrupos: 1. se muestra a superestructura que origina el problema de separación de la mezcla ternaria considerando sólo los métodos de separación alternativos: destilación y extracción. DISEÑO 47 secuencia óptima de separación utilizando el costo total como función objetivo. . Los componentes en cualquier mezcla están colocados en orden descendente con respecto a la propiedad característica en la que se basa el método de separación. En la parte superior de dicha figura se muestra el proceso utilizando como operación de separación la destilación y en la parte inferior se muestra la separación por extracción. 7. La función primaria de una etapa de separación es separar los dos componentes adyacentes. (AB). 6. (ABC).2. Los métodos de separación son: 1. 2. (£). De esta manera pueden tener lugar dos separaciones en la columna de destilación: (A/BC) o (ABIC). En el caso de la destilación el orden de los compuestos de la mezcla es (ABC). En la Figura 2. lo que significa que el compuesto A tiene mayor volatilidad que el compuesto C. (BC\ 4. 4. (C) 2.

48 CAPÍTULO 2. SELECCIÓN DEL PROCESO (ABC)] ->(AB/C) DESTILAaON EXTRACCIÓN -H (B/A) -H (A/B) -4(BAq -J (A/C) Figura 2. 1990. Copyright ©1990 . Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.5: Superestructura de todas las secuencias de separación alternativas para una mezcla ternaria. Fuente: Prokopakis y Asenjo. Todos los derechos reservados. .

jk para cada operación. Esta función puede puede formularse como: i 3 k de tal manera que el costo total CT sea mínimo.be existir en la secuencia.1 (2.1.¿. por medio de la destilación y cuya fase ligera es A. Se introduce una variable binaria 3/í. Por ejemplo la variable binaria 3/1. 4. .¿. Para cualquier subgrupo. Se define la variable costo C¿. M N-l £ £ y^k = l j=l k=\ Para « = 1. Se establece la función objetivo que permite la optimización del proceso. Se definen los siguientes índices: i: subgrupo j: método de separación empleado k: fase ligera obtenida en la separación 2.2.jt. para cada operación. • . para la obtención de la secuencia de separación de costo mínimo. DISEÑO 49 Para sistematizar el análisis se emplean las convenciones siguientes: 1. • 2" .2) 2. Esta variable es función de parámetros operacionales como : temperatura (T).4. Cualquier subgrupo que haya sido procesado no puede aparecer nuevamente en otra separación. presión (P) y flujo (F).1 se asocia a la separación que se realiza en el grupo ABC '. Una y solamente una separación que involucre al subgrupo con N componentes (mezcla original) de. La función objetivo está sujeta a las siguientes restricciones: 1. cuando mucho una separación que involucre a ese subgrupo puede existir en la secuencia. 3.

garantizan la viabilidad de la solución (Prokopakis y Asenjo. entonces: M p=l Nm-l E *«*. SELECCIÓN DEL PROCESO M Ni-1 Z/ZX¿fc = 1 P<*™¿ = 3. J V . . entonces existe una y solamente una separación para para cada uno de los dos subgrupos.1) no es fácil.. Cualquier separación (i.es el número de componentes en el subgrupo. g=l g=l M Nn-l p=l Resolver el sistema de ecuaciones a que da lugar la ecuación (2.50 CAPÍTULO 2. Si la separación (i.j. los tres conjuntos de ecuaciones de restricción dados en la formulación anterior conjuntamente con las restricciones de los parámetros operacionales.k) produce dos subgrupos. . Sistemas Expertos Un sistema experto es un programa de computadora diseñado para tomar decisiones fundamentadas en una base de conocimientos y en un sistema de inferencia. 1990). dando indicaciones al programa que le permitan la eliminación de algunas operaciones de separación. .k) existe. Sean m y n dos subgrupos.3) 3. En algunos casos la formulación matemática de un problema de secuenciación de operaciones de separación puede simplificarse.j. Por ejemplo: nunca usar la cromatografía de afinidad en presencia de partículas celulares o no usar la centrifugación después de la filtración.. y su complejidad aumenta conforme aumenta el número de métodos de separación considerados y el número de componentes de la mezcla respectiva. (2.1 j=i k=i donde TV. Una vez que el diseñador ha alimentado al sistema experto (SE) con datos relativos al producto y a la fuente de . En particular.

el diseño de la secuencia de las operaciones de recuperación y purificación utilizando un sistema experto. localización dentro de la célula y concentración. Una vez que se ha alimentado la información básica al sistema. En la Figura 2. se inicia con la respuesta del usuario a preguntas básicas sobre el producto y sobre la célula de la cual se va a obtener.6: Diagrama de operación de un sistema experto.4.Base de conocimientos • Sistema de inferencia Secuencia de Proceso Figura 2. hidrofobicidad superficial. Una pregunta típica es la siguiente: ¿Qué tipo de célula está siendo crecida para generar la proteína en cuestión? ó ¿cual es la concentración?. como son: punto isoeléctrico. peso molecular. Este diagrama contiene una descripción de aquellas operaciones en la secuencia de separación que deben ser llevadas a cabo para para obtener el producto con el rendimiento y pureza deseada por el usuario. Posteriormente el sistema decide sobre la operación unitaria particular que . el sistema debe ser capaz de generar un proceso de recuperación. donde se va a obtener. Se preguntará también sobre algunas propiedades de la proteína de interés que puedan afectar el proceso de separación.2. En los procesos biotecnológicos para obtención de proteínas. éste genera el diagrama de bloques de todas las etapas del proceso. DISEÑO Parámetros generales Parámetros específicos Base de datos 51 Sistema Experto .6 se muestra un diagrama de operación de un SE.

1990.ENTONCES". SELECCIÓN DEL PROCESO debe emplearse en cada etapa. coli recombinante que produce TrpE-Met-proinsulina intracelularmente (Prokopakis y Asenjo. coli recombinante Producto de interés: proteína Localización celular: intracelular Nombre: insulina Presentación en el mercado: cristales de insulina Parámetros Específicos Peso molecular Hidrofobicidad Punto isoeléctrico Curva de titulación Base de datos sobre liberación diferencial del producto Base de datos de equilibrio en dos fases .2.Funcionamiento de los sistemas expertos. para la obtención de insulina pura a partir de un caldo de E. Solución: 1. En este tipo de sistemas la información cualitativa se proporciona mediante conjuntos de reglas inferenciales «SI . 1990). Deben alimentarse al SE los parámetros que caracterizan al proceso que en este caso son: Parámetros Generales Tipo de célula: E. Datar y Rosen. Ejemplo 2.52 CAPÍTULO 2.. Se desea seleccionar un proceso mediante un sistema experto.

4. usando las siguientes reglas: . El SE consulta al usuario sobre estos parámetros ya sea que hayan sido medidos o estimados estimados.5 En este caso debido a las características de la E. como son: concentración. éste elige la opción "centrífuga de discos" para la operación de cosecha de células. Cuando existen equipos alternativos para realizar la misma operación.4 SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Bacteria Centrífuga de Discos Microfiltración 0. El sistema experto revisa las reglas de la base de conocimientos para seleccionar el equipo de cosecha (EC). 3. SI ENTONCES Microorganismo = EC = EC = Levadura Centrífuga de Discos Microfiltración 0. Una vez que se ha definido el equipo de cosecha deberán establecerse los parámetros de la corriente de salida de la unidad.6 0. el sistema cuenta con ponderaciones heurísticas que auxilian la selección. coli y al conocimiento experimental que se proporciona al SE.4. El SE decide sobre las operaciones siguientes en base a la información que le proporcione el usuario sobre la localización del producto.5 0. DISEÑO 53 2. viscosidad. densidad y otro¡s.2.

1. Posteriormente el SE selecciona el equipo requerido para cada una de las operaciones. En el caso de la operación de rompimiento celular. . SELECCIÓN DEL PROCESO Microorganismo = El Producto es Extracelular Mamífero SI ENTONCES El Producto es Intracelular Se Requiere Rompimiento Se Requiere Separación de Desechos Se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos El Producto es Extracelular No se Requiere Rompimiento No se Requiere Separación de Desechos No se Requiere Precipitación de Ácidos Nucleicos 5. En este caso como la proteína de interés es intracelular. utiliza las siguientes reglas para seleccionar el equipo de rompimiento celular (ER).54 SI ENTONCES CAPÍTULO 2. el SE establece la necesidad de realizar operaciones de rompimiento celular y separación de desechos.

. DISEÑO 55 SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Bacteria Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = y las proteasas son altas Agregue un inhibidor de proteasas al medio Bacteria SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Levadura Homogeneizador Pequeño SI ENTONCES Se Requiere Rompimiento y Microorganismo = ER = Tamaño de los Desechos = Hongo Molino de Perlas Medio 2. El sistema decide la separapación de los cuerpos de inclusión del homogeneizado utilizando el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha celular.2.4.

7 las tres primeras operaciones generadas con el SE. Hasta este punto del proceso la TrpEMet-proinsulina obtenida se encuentra formando cuerpos de inclusión. Se establece la necesidad de solubilizar los cuerpos de inclusión con una solución de ácido clorhídrico-guanidina (GuHCl) y ¡3— mercaptoetanol en un reactor químico. el equipo más adecuado será aquel que se haya utilizado experimentalmente Alta Alta SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = EC = Alta Mediana o Baja Separación en Dos fases .56 CAPÍTULO 2. 7. SELECCIÓN DEL PROCESO Con las letras a. 6. Se establece la necesidad de concentrar la solución de TrpE-Metproinsulina. Para decidir sobre el método de concentración y el equipo (EC) el SE utiliza las siguientes reglas: SI ENTONCES Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = IMPRIME: Debido a que ambas operaciones tienen una eficiencia alta. c se muestran en la Figura 2. para obtener una solución de TrpEMet-proinsulina. 6.

8.2. El SE cuenta con reglas para la selección del equipo de alta resolución (EAR) como las siguientes: SI ENTONCES Bioespecificidad es posible EAR = EAR = EAR = Cromatografía Cromatografía Iónico de Alta Cromatografía Hidrofóbica de Afinidad de Intercambio Resolución de Interacción 0. 9. El concentrado se somete a un tratamiento en un reactor químico para liberar la proinsulina. DISEÑO SI Se Requiere Concentración y la Eficiencia de la Separación en Dos Fases = y la Eficiencia de Adsorción = y la Eficiencia de la Interacción Hidrofóbica = ENTONCES EC = 57 Baja Baja Baja Precipitación (sulfato de amonio) En los procesos establecidos para la obtención de insulina. Se decide utilizar el mismo equipo de centrifugación empleado en la cosecha de células para separar el precipitado de la solución anterior. 10. fragmentos de TrpE y residuos de metionina. que podrán separarse por un proceso de ultrafiltración para obtener un concentrado de proinsulina cruda (operación h de la Figura 2.6 0. La concentración de proinsulina se incrementa mediante una evaporación. La solución obtenida en g está compuesta de proinsulina. El concentrado de proinsulina cruda se renaturaliza en un reactor químico. 11. la concentración se realiza mediante una precipitación.3 0.1 .4.7). Una vez renaturalizada la proinsulina debe ser purificada en una operación de alta resolución.

seleccionando para ello las operaciones o. Finalmente se puede mencionar que para la selección de las operaciones de acabado el sistema toma en cuenta la presentación del producto en el mercado.2 0. </. Al llegar a ciertos puntos de la secuencia el SE puede hacer preguntas adicionales al usuario. lista para su comercialización. . el sistema responderá: "Si el producto va a tener uso médico la proteína debe tener una pureza de 99. SELECCIÓN DEL PROCESO SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = IgG Monoclonal Cromatografía de Afinidad Bioespecífica Cromatografía de Intercambio Iónico (1 o 2 etapas) 0. para poder determinar la operación más apropiada. operaciones /. Cuando el usuario responde "sí" a la pregunta del SE. m de la Figura 2.4 SI ENTONCES Producto = EAR = EAR = No está Definido Cromatografía de Afinidad Cromatografía de Intercambio Iónico 0. purificada al 99.58 CAPÍTULO 2.7 y que producen la insulina humana recombinante.7. entonces éste decide que la operación de purificación de insulina proveniente del reactor enzimático (en el cual la proinsulina se transformó en insulina) debe ser una cromatografía líquida de alta resolución (HPLC). 13. p. Una pregunta puede ser: "¿Tendrá el producto usos terapéuticos?"..9%. Si el usuario a su vez pregunta "¿por qué?".8 12.6 0. De lo antes expuesto se desprende que los sistemas expertos pueden ser una herramienta muy útil en la síntesis de procesos de bioseparación. de la Figura 2.98% y debe estar libre de pirógenos".

. DISEÑO 59 Fermentador (a) Cosecha de Células con centrifuga de discos Células de E.4.7: Diagrama de bloques para el proceso de obtención de insulina humana. cotí (b) Rompimiento de Células con homogeneizador Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina + desechos (c) Separación por Centrifugación con centrífuga de discos Cuerpos de inclusión de TrpE-Met-Proinsulina (d) Solubilización en reactor químico con GuHCI Solución de TrpE-Met-Proinsulina (e) Precipitación en reactor Precipitado de TrpE-Met-Proinsulina Figura 2.2.

60 CAPÍTULO 2.. ..7: Continuación. SELECCIÓN DEL PROCESO (f) Concentración por Centrifugación con Centrífuga de Discos i Concentrado de Trp E -Met-Proinsulina (g) Separación Química de Trp-Met-Proinsulina en Reactor Químico Proinsulina + TrpE + Metionina \r (h) Separación por UHrafittración Concentrado de Proinsulina cruda 1r Secado con Evaporador Centrífugo ir Concentrado de Proinsulina cruda (i) Renaturalización en Reactor Químico Proinsulina activa en solución \r Purificación en Columna de Intercambio iónico Proinsulina activa 1'2 Figura 2.

..9 % de pureza Figura 2..2.4. DISEÑO 61 (i) Transformación en Reactor Enzimático ir Purificación > 99 % con HPLC Insulina Insulina Pura \r (n) Concentración por UKrafiltraáón Concentrado de Insulina ir (o) Cristalización en Reactor Químico Cristales de Insulina6-Zn2 ir (P) Concentración con Centrífuga de Discos Pasta cristalina de Insulina6-Zn2 \r (q) Secado con Evaporador instantáneo Insulina Humana Recombinate 99.7: Continuación.

. Existen varios métodos que contribuyen a seleccionar el proceso de bioseparación óptimo.5 Sumario La selección de un proceso de separación para la obtención de un producto biotecnológico se basa fundamentalmente en el mercado del producto y en sus especificaciones. sin embargo el proceso final generalmente es obtenido mediante una combinación de la teoría y la experiencia de que se dispone. SELECCIÓN DEL PROCESO 2.62 CAPÍTULO 2.

Desarrollar un diagrama de flujo de un proceso para la obtención de un producto biotecnológico..El proceso de obtención de una enzima consta de cuatro operaciones de separación. Resp.6 Problemas 2..00 (C) (D) (E) (F) Depreciación: Inversión fija y diferida: Capital de Trabajo: ISR: 45% Estimar el precio de venta para obtener un Retorno Sobre la Inversión (RSI) de 40%.3..525.1.877. cada una de ellas presenta una eficiencia de recuperación del 80 %.664.2. 2. 2.766.00 $2.00 $2.468.00 $31.742.Se cuenta con los siguientes datos para producir insulina recombinante: (A) Mercado: Producción (B) Costos anuales: año 1: año 2-10: 1.2.00/Kg .000 kg/año $34. PROBLEMAS 63 2. Estime la recuperación global del proceso.6.00 $30. $53.

1986. Cost estimation for biotechnology projects.7 Bibliografía Bonnerjea.). Marcel Dekker Inc. SELECCIÓN DEL PROCESO 2. (Ed. Demain. R.). Synthesis of downstream processes. Bio/Technology. R. 1986. Kalk. 1990. Marcel Dekker Inc. 1987. Knight. N. New York.). . J. H. Biotechnology.. C. New York. Selection of a separation process. y Evans.). 9. y Solomon. Datar. 22. 1990. Downstream process economics. 8. (Ed. 741-793. J. AIChE.). Spalding. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology. Nuil. W. C. Shuler. B. 351-391. 1989. P.). 1991. (Ed. En: Handbook of Separation Process Technology. Bioseparations: Media and modes. Protein purification: The right step at the right time. J. A.64 CAPÍTULO 2. En: Industrial Microbiology and Biotechnology. W. A. L. F. John Wiley & Sons. R. y Rosen. Asenjo. En: Separation Processes in Biotechnology. 954-958. R. Oh. 1990. A. Downstream processing: Key to slashing production cost 100 fold. 982-995. (Ed. Cooney. Petrides. y Langlykee. L. 363-384. y Hoare. An introduction to biochemical process design. (Ed. John Wiley & Sons. New York. En: Separation Processes in Biotechnology. New York. S. Prokopakis. R. B. J. J. y Asenjo. M. P. Rousseau. P. 229-240. A. G. 197-225. R. Bio/Technology. En: Handbook of Separation Process Technology.. American Society for Microbiology. Rousseau. Asenjo. M. New York. (Eds. 4. 1987. 4. J. General processing considerations. Kelly. M. L. New York. A. D.200-201. 571-601.

Parte II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular. .

En las operaciones de remoción los principales insoluoles que se consideran son células enteras. Las operaciones típicas de remoción de insolubles son la filtración tradicional. bacterias y células de mamíferos. muy utilizada para la separación de hongos filamentosos. empleada en la separación de levaduras. Estas operaciones se tratan en los capítulos 3 y 4. eficiencias y costos. En el capítulo 5 se presentan los principales equipos que se emplean en esta operación a nivel industrial y los principales factores para su diseño. en esta parte se revisan las relacionadas con la remoción de insoluoles y la ruptura celular. restos celulares y cuerpos de inclusión. respectivamente. que son utilizadas en las primeras etapas de recuperación del producto de acuerdo a las tres primeras reglas heurísticas de la selección del proceso de separación. Cuando el producto de interés es intracelular después que las células han sido separadas del caldo es necesario romperlas. y la centrifugación.67 Del conjunto de operaciones que integran normalmente un proceso de bioseparación. . la disponibilidad de equipos. la selección depende de varios factores como el tipo de célula. Para la remoción de insoluoles de un caldo pueden ser utilizados diversos tipos de equipos.

La filtraciói por membrana se realiza utilizando membranas especiales de tamaru de poro muy pequeño. En la filtración con formación de torta los sólido. De los tres mecanismos de filtración descritos. .Filtración con formación de torta o filtración convencional. de tal manera que no hay un depósito de sólido sobre la membrana sino una concentración del caldo. que generalmente operan con flujo paralelo a 1. . dos son de partícula interés en las bioseparaciones sólido-líquido: La filtración convencionc y la filtración con membranas.1 Introducción La filtración consiste en la separación de un sólido de un fluido por acción de un medio filtrante y un gradiente de presión.1): .Capítulo 3 Filtración 3. Normalmente en los procesos biotecnológicos se utilizan tres tipos de mecanismos de filtración (Figura 3. membrana (cruzado).Filtración de lecho profundo. En la filtración de lecho profundo los sólidos se depositan dentrc del medio filtrante. se depositan sobre el medio filtrante formando una pasta. .Filtración por membranas (Microfiltración y Ultrafiltración).

Filtración con formación de torta f\ > Retenido Membrana Filtrado c). FILTRACIÓN Suspensión a). Filtración de lecho profundo ll ii Suspensión Suspensión Medio filtrante b).70 CAPÍTULOS.1: Mecanismos de filtración. Filtración con membrana Figura 3. .

En base a lo anterior. • El pretratamiento de caldos biológicos. . la cual contribuye al diseño.3. selección y operación racional de los diferentes equipos de filtración. De particular interés es observar como esta teoría puede ser utilizada en la filtración de caldos biológicos. esta sección se ¿entra en tres aspectos fundamentales: • La filtración como parte de los sistemas de BSL. Debido a la naturaleza de los caldos que se manejan en bioseparaciones. FUNDAMENTOS 71 El objetivo este capítulo es presentar los aspectos fundamentales de la filtración convencional y su aplicación a la filtración de caldos biológicos. y frecuentemente la decisión es instrumentar una combinación de estos dos tipos de operaciones. • La teoría de la filtración convencional.4 se dedica a presentar los aspectos más relevantes del diseño de filtros convencionales. Un aspecto fundamental en el tratamiento de la operación de filtración es la teoría básica existente. La filtración por membranas se revisa en el capítulo 10.2 de este capítulo se centra la atención en los fundamentos de la filtración convencional. En la sección 3.3. es común que éstos sean pretratados mediante agentes físicos o químicos para mejorar su comportamiento en las operaciones de separación sólido-líquido a que van a ser sometidos.2. La sección 3.2 Fundamentos La filtración convencional forma parte de un conjunto de operaciones llamadas Bioseparaciones Sólido-Líquido (BSL). 3. Para llevar a cabo un proceso de BSL generalmente es necesario seleccionar entre una operación de filtración y una operación de sedimentación (como la centrifugación). Los principales equipos que se utilizan en este tipo de filtración se presentan en la sección 3.

Copyright ©1974. . Adaptada de Tiller.Concentración. . entre las que destacan las siguientes: . Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.Pretratamiento.Separación de sólidos. 1974 ). reservados.2. 1974.2) consta generalmente de una o más etapas (Tiller. . FILTRACIÓN líquido liquido Figura 3.1 La Filtración corno parte de los Sistemas de BSL Un proceso de separación sólido-líquido (Figura 3. El pretratamiento mejora las propiedades del caldo para facilitar la separación.72 Caldo CAPÍTULOS. Todos los derechos 3. .2: Etapas y métodos de las BSL.Postratamiento. y puede disminuir los . La concentración de sólidos permite una separación gruesa de sólidos que disminuye el volumen a manejar.

1 se presentan algunos de estos factores agrupados de acuerdo a los requerimientos del proceso. FUNDAMENTOS 73 Tabla 3. Los principales equipos utilizados en BSL que se basan en el principio de sedimentación. son los sedimentadores por gravedad y las centrífugas. Entre mayor sea esta diferencia la separación es más fácil.3. la diferencia puede ser aumentada aparentemente aplicando una fuerza centrífuga o incrementando la densidad de la partícula por medio de una coagulación o una floculación. En el proceso de sedimentación la separación se basa en una diferencia de densidad entre la fase sólida y la fase líquida. Cuando esto no ocurre. máxima Capacidad de lavado Esterilidad Claridad descarga costos del proceso global de separación sólido. las propiedades del caldo y los equipos disponibles. En general todos los sistemas mecánicos de BSL están basados en dos principios (Svarovsky.2.líquido. 1979) que dan origen a las operaciones de: . Los sólidos recuperados pueden requerir un postratamiento de lavado o secado de acuerdo con los requerimientos del proceso.Sedimentación. En la Tabla 3. Requerimientos del Proceso Flujo Intermitente o continuo % Separación Postratamientos Esterilidad Propiedades del Caldo Tamaño de partícula densidades Viscosidad Tiempo sedimentación % Sólidos Tipo de torta Espumeo Toxicidad Labilidad Características del Equipo Capacidad Intermitente o continuo Tamaño de partícula Conc.1: Factores para el diseño y selección de procesos de BSL. En el diseño y selección del proceso de BSL es necesario considerar varios factores de orden técnico que deben conjuntarse para una adecuada decisión. . La mayor parte de los sólidos es obtenida en la etapa de separación . .Filtración.

así como el conocimiento de las propiedades básicas de los medios (porosidad. Sin embargo. tratándose de materiales biológicos el número de posibilidades se reduce considerablemente.Varias combinaciones de equipos pueden ser técnicamente factibles para lograr una determinada separación . juegan un papel muy importante. tiempo de sedimentación.2. FILTRACIÓN En la filtración la separación se logra utilizando un medio físico que no permite el paso de sólidos a través del cual el fluido se hace pasar por medio de un gradiente de presión. pero no recuperan el 100% de los sólidos.2 Pretratamiento de Caldos para BSL Las propiedades de los caldos sujetos a BSL pueden ser mejoradas por medio de pretratamientos físicos. químicos o biológicos con el objeto de .El análisis teórico que se dispone de las BSL es limitado. 3. la experiencia y los equipos para pruebas experimentales. . dentro de los cuales se puede destacar los siguientes: . permeabilidad.).La escala de experimentación varía con el tipo de operación.Parte considerable de la información. aún cuando el sedimentador no alcance la separación deseada. En general los sistemas de sedimentación son más baratos y pueden operar continuamente. está en manos de las compañías fabricantes y/o distribuidoras del equipo. En el diseño y selección de sistemas para BSL es necesario considerar algunos factores de orden práctico que permiten complementar los análisis que se efectúan en cada uno de los capítulos de esta parte del libro. y la experiencia. etc. Sin embargo. En el diseño de filtros puede ser suficiente los datos obtenidos en el laboratorio. En el caso de centrífugas es generalmente necesario realizar pruebas a nivel piloto o a escala industrial. es posible utilizarlo conjuntamente con un filtro como una operación de concentración previa a la de acabado que realiza la filtración.74 CAPÍTULOS. . . de tal manera que en el diseño y selección del equipo las pruebas experimentales directamente con el material.

FUNDAMENTOS 75 facilitar estas operaciones. aluminio y calcio. Pretratamiento Térmico El calentamiento de los caldos permite reducir su viscosidad. su volumen y romper estructuras gelatinosas que dificultan las operaciones posteriores. A continuación se describen tres tipos de pretratamientos comúnmente empleados para caldos biológicos.5 a 100 /¿m). Las partículas coloidales (tamaño en el rango de una miera) no sedimentan fácilmente debido a que por acción de sus cargas superficiales forman suspensiones muy estables llamadas soles. Coagulación y Floculación Debido a que los caldos biológicos sujetos a BSL presentan partículas muy pequeñas (0. Por otro lado. catiónicos o neutros. que permiten formar partículas más grandes y densas. lo cual genera fuerzas de atracción del tipo de London. Los polielectrolítos pueden ser aniónicos.3. a diferencia de las suspensiones formadas por partículas de mayor tamaño que sedimentan con relativa facilidad. Los .3) ya que actúan neutralizando las cargas superficiales de las partículas y provocan su atrapamiento por medio de las redes que forman. esta operación es de uso limitado cuando se manejan productos termolábiles. Estos producen un efecto combinado (Figura 3. los pretratamientos para incrementar el tamaño de partícula facilitan su manejo. En el proceso de floculación se utilizan sustancias químicas sintéticas de alto peso molecular llamadas polielectrolítos. En el caso de caldos de células recombinantes esta operación es obligada por cuestiones de seguridad ambiental. Las soles pueden ser alteradas por medio de agentes químicos. La coagulación también puede ser efectuada empleando sustancias que varíen el pH del caldo y por lo tanto la carga superficial de las partículas. Los electrolitos más empleados son derivados de iones polivalentes positivos como fierro.2. En el proceso de coagulación se emplean electrolitos simples que neutralizan las cargas repulsivas superficiales de las células o partículas.Van Der Waals entre ellas.

Las tierras diatónicas son restos de esqueletos de pequeñas plantas acuáticas prehistóricas que se obtienen de depósitos naturales. Los AF actúan como adsorbentes de las partículas coloidales mejorando el tamaño de partícula. de tal manera que se facilite su filtración. FILTRACIÓN Figura 3. polietilenimina y la poliamina. que permite romperlos por acción térmica o de presión. materiales disponibles comercialmente son derivados de la poliacrilamida. Es importante señalar que los pretratamientos químicos son de uso limitado dado que implican la adición de sustancias al caldo que pueden agregar toxicidad o impurezas a éste.76 CAPÍTULOS. formando un polvo con características apropiadas como AF. Estas sustancias se adicionan al caldo antes de la filtración y/o se utilizan como precubierta del filtro. y mejorando la incompresibilidad y permeabilidad de los sólidos. . Los AF mas utilizados son las tierras diatónicas (Rees.3: Mecanismo de floculación. 1990) y las perlitas. Las perlitas se obtienen de vidrios volcánicos que contienen de 2 a 5% de agua. Uso de Ayudas-Filtro En las operaciones de filtración convencional se emplean sustancias sólidas llamadas Ayudas-Filtro (AF).

La filtración convencional (Figura 3. ya que para aumentar la velocidad de filtración se requiere un mayor gradiente de presión. fue formulada en 1856 por el geólogo Francés D'Arcy.Al final del ciclo la precubierta de AF debe ser removida. lo que hace necesario aumentar la incompresibilidad y porosidad del material sólido. FUNDAMENTOS 77 Con el uso de los AF la filtración se convierte en una operación de tres pasos: . La dosis de AF que es necesario agregar continuamente es función directa de la concentración y compresibilidad de los sólidos del caldo. Existen diversas marcas comerciales de AF que difieren básicamente en el tamaño de partícula. disminuye la caída de presión y produce un filtrado de calidad uniforme. facilita su limpieza. la dosis necesaria es mayor. Esto permite que las características de la superficie de filtración se mantengan uniformes. La aplicación de . La teoría de la filtración convencional se deriva de los estudios de la mecánica de fluidos en medios porosos.Primero se forma una precubierta de AF sobre el medio filtrante haciendo reciclar sobre éste una lechada de AF. La precubierta de AF permite retardar el taponamiento del filtro.2. al cual se le agrega continuamente una dosis de AF.4) puede ser definida como la separación de los sólidos de un líquido. entre más rápido se desee efectuar la filtración. Asimismo.2. La selección implica un compromiso entre el flujo deseado y la claridad aceptable. . Esta se efectúa haciendo pasar una suspensión a través de un medio permeable que retiene los sólidos utilizando un gradiente de presión. 3.3. La adición continua de AF al caldo es uno de los métodos más efectivos para minimizar los costos de filtración. La ecuación que describe el movimiento de fluidos newtonianos a través de medios porosos.Una vez formada la precubierta se inicia la alimentación del caldo a filtrar. Los de partículas más grandes facilitan la filtración pero producen filtrados más turbios.3 Teoría de la Filtración. .

L: Longitud. esta ecuación al caso particular donde se desprecian los efectos gravitacionales (lechos cortos). 0 * 0 0 o°o0¿o°o0o0c?o0o0cP Medio filtrante •i lll lflll • r Filtrado EQUIPO DE FILTRADO Figura 3. 1 . M: Masa. FILTRACIÓN • «/ i O Fuerza impulsora Presionó Vacío N 4> Suspensión • o« .78 CAPÍTULOS. Las unidades básicas empleadas en la mayor parte del texto corresponden a las del Sistema Internacional de medidas (SI). °: Temperatura.1) Las unidades de los miembros de las ecuaciones se presentan en términos de dimensiones fundamentales y entre paréntesis cuadrados. Las dimensiones fundamentales se representan como: F: Fuerza.4: Concepto de filtración. í: Tiempo. puede ser escrita como: v= donde 1 : kAP V* (3.

Combinando la ecuaciones (3.3) R es la resistencia total a la filtración. La velocidad de filtración puede ser descrita en términos del volumen de filtrado y el área de filtración (dos parámetros más fácilmente medibles) como: Combinando las ecuaciones (3.2) y expresando la relación i/k como una resistencia /?.: Viscosidad del fluido. [L].2. ó: . FUNDAMENTOS 79 v: Velocidad superficial de líquido (flujo volumétrico por área de filtración).4) se obtiene: } A dt ^ ' Las ecuaciones (3. [M/L — t]. se puede obtener la ecuación diferencial básica de la filtración convencional: »íí A dt En la ecuación (3. AP: Caída de presión a través del lecho.1) y (3.3) y (3. i\ Profundidad del lecho filtrante.4) donde Rt es la resistencia de la torta y Rm es la resistencia del medio filtrante.3) y (3. [F/L2]. fj. [L/t].5) sólo pueden ser aplicadas a soluciones diluidas en régimen laminar. cuando el número de Reynolds modificado es menor a 5.3. [Z/2]. k: Permeabilidad del lecho. Esta resistencia puede expresarse como la suma de dos resistencias en serie: R = Rt + Rm (3.

<5 (3.3 Equipo de Filtración Existe una gran variedad de filtros (Figura 3.1 Filtros Intermitentes a Presión En los filtros intermitentes a presión la solución que contiene el sólido a separar. Una vez que se acu- . En general las biofiltraciones cumplen con esta condición.3.5: Clasificación de filtros. Estos tipos de filtros se pueden dividir en dos grandes grupos: Filtros intermitentes a presión. 3. es alimentada continuamente al filtro.6) donde dp es el diámetro de partícula o diámetro del poro en la torta. FILTRACIÓN Lecho Marcos y Placas Batch a presión < Elementos Filtros Torta Charolas Hojas 1 Continuos al vacio Uttrafiltradón Membrana Microfiftractón Figura 3. Filtros continuos al vacío. p es la densidad del fluido y e es la fracción de espacio vacío del lecho.5) cuyo mecanismo de filtración es la formación de torta (Moir. 1982). 3.80 CAPÍTULOS.

Los filtros de cámara con elementos filtrantes toman su nombre del tipo y orientación de los elementos filtrantes. limpiar el filtro e iniciar un nuevo ciclo. Los filtros constan de varias de estas unidades que operan en paralelo produciendo un sólido bastante seco. EQUIPO DE FILTRACIÓN 81 muía una determinada cantidad de sólido sobre el medio filtrante.3. charolas o tubos). Los filtros de marcos y placas normalmente operan en contacto con el ambiente y no son recomendables para cuando se trabaja con sustancias tóxicas. principalmente en la producción de antibióticos. Operan en ambientes cerrados.Filtros de cámara con elementos filtrantes (hojas. 1989). .3. recomendables sólo para bajas escalas de producción. son los tipo tambor rotatorio al vacío (Figura 3. Los filtros intermitentes de uso más amplio son los filtros de marcos y placas.Filtros prensa de marcos y placas. Este tipo de filtros se distinguen de los intermitentes por el hecho de que al girar permiten una descarga continua de la torta. La unidad de filtración está formada por un marco que contiene dos placas formando una cámara de filtración. tienen una relación de área/volumen relativamente alta y son utilizados cuando los volúmenes de filtración son bajos. la operación es interumpida para descargar la torta. .2 Filtros Continuos al Vacío Los filtros continuos más utilizados en las bioseparaciones. En los filtros intermitentes al finalizar cada ciclo de filtración la torta debe ser descargada manualmente.3. Normalmente utilizan ayudas-filtro en dosis equivalentes a la concentración de sólidos del caldo que origina un problema de deseche de sólidos.6): . 3. por lo que este tipo de equipos puede tipificarse como de mano de obra intensiva. de tal manera que pueden operar continuamente por períodos largos de tiempo con flujos entre 200-1000 //m 2 — h (Petrides et a/. Este tipo de filtros pueden ser agrupados en dos categorías (Figura 3.7).

Tomada de: Svarouvsky.82 CAPÍTULOS. . FILTRACIÓN Placas Marcos + Filtrado Suspensión Filtro de placa y marcos Tela Placas Suspensión Marcos Mecanismo de filtrado Espacio torta Figura 3.6: Filtros intermitentes. 1979. Copyright ©1979. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.

EQUIPO DE FILTRACIÓN 83 Mecanismo de descarga de torta Suspensión nitro horizontal con hojas verticales Venteo nitrado Tubos Formado de torta e lápade extema del tubo Suspensión Filtrado Suspensión Filtro tubular Filtro de hojas Figura 3..6: Continuación. .3.3..

• Filtros Continuos. FILTRACIÓN Rotación Sistema de ' aspersión Descarga torta Caldo Figura 3.7: Vista lateral de filtro continuo tipo tambor. . 3.84 CAPÍTULOS.4 Diseño de Equipo de Filtración En esta sección se centra la atención en el uso de la teoría fundamental de la filtración en el diseño de dos tipos de filtros: • Filtros Intermitentes. que es el tipo de filtración más comúnmente empleada en bioseparaciones a escala moderada. En primer término se revisa el caso de la filtración intermitente donde la torta es incompresible y la filtración se realiza con un gradiente de presión constante. En segundo término se revisa este mismo desarrollo pero para el caso donde la torta es compresible. se aborda el diseño de los filtros continuos con tortas compresibles que es el caso más común para las filtraciones de caldos biológicos a gran escala. Finalmente.

el tamaño del poro de la torta. Posteriormente este tratamiento se aplica al caso particular de tortas compresibles.La filtración intermitente con caída de presión constante. Desde el punto de vista de los parámetros de operación dos tipos particulares de filtración intermitente son industrialmente importantes (Brown. Este desarrollo sólo será referido al caso en el cual la caída de presión es constante. Sin embargo.La filtración intermitente a flujo constante. las cuales son características de materiales biológicos. Tanto en el caso de la filtración intermitente a caída de presión constante. el tamaño de la partícula del sólido y la compresibilidad de la torta. 1982): . la resistencia de la torta varía conforme avanza el tiempo de filtración al irse acumulando sólidos.3A. ya que el seguimiento del volumen del filtrado con el tiempo es relativamente fácil de medir.4. El análisis general de la filtración intermitente que se desarrolla en este capítulo. se produce una disminución gradual del flujo conforme aumenta el espesor de la torta. inicia con el tratamiento de tortas incompresibles cuya resistencia específica es constante. Este tipo de filtración es especialmente útil en la adquisición experimental de datos para diseño. Esto puede expresarse como: . DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 85 3.1 Filtración Intermitente En la filtración intermitente con formación de torta la separación depende de varios factores dentro de los que destacan la permeabilidad de la torta que forme el sólido que se desea separar. La filtración intermitente a flujo constante se produce debido a que algunos tipos de bombas producen el mismo flujo a diferentes cabezales. . En la filtración intermitente con caída de presión constante. Esta variación depende de la naturaleza de la torta. la resistencia específica de la torta puede ser variable o no. como en la de flujo constante . Filtración Intermitente: Tortas incompresibles y AP constante En el caso de tortas incompresibles la resistencia de la torta puede suponerse directamente proporcional a la cantidad de sólidos (peso seco) depositados por unidad de área.

entonces la ordenada en el origen toma el valor de cero y la ecuacióa se reduce a: V (3J1) .5) y (3. Guando se gráfica At/V vs V/A se produce una línea recta con: pendiente = ordenada en el origen = 2AP AP Un caso particular de la ecuación (3. Combinando las ecuaciones (3. La ecuación (3.86 Rt = aw CAPÍTULOS.» l • ' La ecuación (3. e integrarla con las siguientes condiciones iniciales: para t =Q V=0 y obtener la siguiente ecuación: M V ta V V2AP/ A + . = <*P.7) donde w es la cantidad de sólidos secos depositados por unidad de área y a es la resistencia específica de la torta.8) se tiene: di ~ p [ap0 (£ La ecuación (3.10) se presenta cuando la resistencia del medio es despreciable.7) puede ser expresada en términos de parámetros más fácilmente medibles: R.9) puede escribirse en su forma recíproca. -r (3-8) donde p0 es la cantidad de masa sólida seca por unidad de volumen libre de sólidos o volumen de filtrado del caldo a separar.10) puede ser utilizada para la obtención de parámetros de filtración en equipos intermitentes a presión constante. FILTRACIÓN (3.

) i ^rim _ ' V = Vs (V-VS) 2AP A AP v (312) ' la que nos permite calcular parámetros experimentales al graficar: (t-t. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 87 Cido de Operación Rujo constante Caída de Descarga AP Figura 3. que inducen la penetración de sólidos sobre el medio filtrante.8: Caída de presión contra tiempo en una filtración intermitente. Otro caso particular de la filtración intermitente con caída de presión constante se produce cuando se desea asegurar una formación uniforme de la torta evitando flujos altos al inicio de una corrida.8). Bajo estas condiciones la integración de la ecuación (3.9) se efectúa en el rango de caída de presión constante. con las condiciones iniciales para t = ts obteniéndose la ecuación: (t-ts)A _ anp0(V + V.4.)A (v-vs) vs A .3. En este caso la caída de presión se incrementa gradualmente hasta alcanzar una caída de presión constante (Figura 3.

Filtración de actinomicetos.000 N/m 2 . Combinando las ecuaciones (3. En una filtración intermitente a presión constante con un filtro de laboratorio de 110 era2 de área y una caída de presión de 70. Entre mayor sea el valor de s el efecto de la presión sobre la resistencia de la torta es más severo.10) y (3. 1972).8 para una torta altamente compresible (la correlación es aceptable para s < 0. en estos casos es recomendable utilizar ayudas-filtro. Este varía de cero para una torta incompresible a 0. En estos casos la resistencia específica puede ser correlacionada con el gradiente de presión mediante la siguiente ecuación empírica (Silverblatt et al. La mayoría de las tortas de material biológico son compresibles. La determinación experimental de 5 y a1 requiere la realización de varias corridas de filtración con caída de presión constante a varios niveles.88 CAPÍTULOS.13) se puede obtener la ecuación para describir la filtración intermitente de tortas compresibles con caída de presión constante: Ai = pa>p0 V ^ V 2AP -* A 1 AP V ' ' Ejemplo 3. FILTRACIÓN Filtración Intermitente: Tortas compresibles y AP constante La compresibilidad de una torta se caracteriza por un aumento de su resistencia específica al aumentar el gradiente de presión que actúa sobre la torta. y s es el índice de compresibilidad. Es bien conocido que los cultivos de actinomicetos como el Streptomyces griseus presentan una gran resistencia a la filtración (Aiba et a/.13) donde a1 es una constante relacionada principalmente con el tamaño y forma de las parículas de la torta. Los datos pueden ser correlacionados en una gráfica log(a) vs log(AP).. 1974): a = a'(AP)5 (3.2 atmósferas).6 y AP > 0.1. .

73 77. obteniéndose los datos que aparecen en las primeras dos columnas de la Tabla 3.Cálculo de la resistencia específica de la torta.2: Datos y cálculos de filtración del ejemplo 3.4.2 y se presentan en forma gráfica la Figura 3.91 20.7 y una temperatura de 10°C). De acuerdo al resultado del inciso a) se utiliza la ecuación (3.00 2.10) para calcular la resistencia específica de la torta.50 4.00 5.64 104.82 44.0011 N — s/ra2 (el caldo se adicionó con 1% de tierras diatomeas.015 Kg/1 peso seco de células y una viscosidad de 0.10) y los datos que se presentan.. . a).45 179.90 1.91 205..1. Estos cálculos se muestran en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3.61 89 19 80 210 380 700 978 1215 100 200 300 400 500 600 650 se procesa un caldo de una concentración de 0. se calculan primeramente los grupos At/V y V/A. Datos t ( s ) V(cm 3 ) Cálculos V/A (cm) At/V (s/cm) 0. .2: Estimar la resistencia específica de la torta a y la resistencia del medio Solución: En base a la ecuación (3.00 3. De acuerdo a la Figura 3.30 5. a un pH de 3.3.9 . DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Tabla 3.9 la ordenada en el origen es cero y por lo tanto la resistencia del medio no tiene un valor significativo: b).55 154.Cálculo de la resistencia del medio.

.9: Datos de filtración ejemplo 3. FILTRACIÓN zoo Figura 3.90 CAPÍTULOS.1.

3. el tiempo total de descarga y limpieza del filtro se incrementa../ cm " 2x70.. en un filtro de laboratorio de 110 cm2 de área a una presión de 19.6 x 104 N/rn?.015 cm° a = 2. Solución: ..45 x 1011 cm Optimización de la Filtración Intermitente.En la filtración intermitente se presenta un problema de optimización relacionado con el tiempo de duración de cada ciclo o tiempo de procesamiento de un lote de caldo: Si el tiempo de duración de cada ciclo se acorta.2. i La viscosidad del caldo fue de 2 x 10~3 N-s/m2 y la masa de sólidos secos por unidad de volumen de filtrado de 40 Kg/m3 Estimar: a).. la velocidad de filtración promedio disminuye. Ejemplo 3. se obtuvieron los datos que aparecen en las columnas 1 y 2 de la Tabla 3.La resistencia específica del caldo a.4.5 h y el filtro opera 24 h al día.3. conforme se incrementa el tiempo del ciclo.000 $• 28. Por otro lado. En el siguiente ejemplo se aborda este tipo de problema.0011 x .88-^ x 140. b).000 a= . En el procesamiento de un caldo micelial para la recuperación de un antibiótico.El número de ciclos del filtro por día. si cada operación de descarga y limpieza del filtro tiene una duración de 0.23.Cálculo del número de ciclos óptimo para una filtración intermitente. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 91 pendiente = ——¿ F 2AP /120 -40 _ 2 V4-1.

.0 126 3.064 13514.0 0.0 46 2.7 -V a = ( 2 x II a = 1.0 8910.0 0.92 CAPÍTULOS.10).0 0.2..0 4 3 FILTRACIÓN Cálculos Ai IV (s/m) VI A (m) 990.027 4620.3 a). Datos t(s) V x 10 m 9 1. El volumen total de filtrado Vt se relaciona con el volumen de filtrado por ciclo Vc mediante la siguiente expresión: 24 h 0.14 x 1012 m b). a partir de los datos es necesario calcular los grupos At/V y V/A.0 860 7.055 11183.045 0.036 6600.0 610 6. Estos cálculos se presentan en las columnas 3 y 4 de la Tabla 3.009 0.3 0.0 405 5..3: Datos y cálculos de ejemplo 3.El número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = donde tc es el tiempo de filtración por ciclo.5 + 1 V. Tabla 3.0 240 4.0 0.De acuerdo a la ecuación (3.3. Mediante una regresión lineal es posible obtener la pendiente de los datos ajustados a dicha ecuación.018 2530. (pendiente)(2)(AP) x 104 -^ a = (232451.

El siguiente ejemplo se refiere a este procedimiento.05 de donde se obtiene que el tiempo óptimo t* : f* = 0.4. Debido a lo anterior los datos de diseño de este tipo de filtros pueden ser generados en un filtro intermitente de laboratorio. cada marco consta de dos caras de filtración. entonces puede ser utilizada la ecuación (3. La alimentación a cada marco se hace de man'era independiente de tal manera que cada superficie de filtración actúa en paralelo respecto al flujo de alimentación..5 /*+ 0. se obtiene el tiempo de duración del ciclo para el cual el volumen total de filtrado es máximo.En el caso de los filtros de marcos y placas. es decir: dVL_d_ I ti dt ~ dt \tc + 0. . Ejemplo 3.5fc Filtración Intermitente en Paralelo.5 h el número de ciclos por día está dado por: Número de ciclos = 24 h .3.. Con datos de una filtración de laboratorio de una suspensión de un esteroide se desea diseñar un filtro intermitente de marcos y placas.11) para obtener: v de tal manera que: -v derivando la expresión anterior con respecto al tiempo del ciclo e igualando el resultado a cero.Filtración de cristales de un esteroide. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 93 la resistencia del medio filtrante puede ser despreciada. = 24 ciclos 0.3.

063 Kg.11) arreglada de la siguiente forma: lia _ t&PA2 2p0 ~ W2 donde W = p0V es el peso seco de la torta. De acuerdo con los datos de laboratorio es necesario utilizar la ecuación (3. FILTRACIÓN Las pruebas de laboratorio se realizan en un tubo de vidrio con una malla en el extremo inferior de resistencia despreciable. Suponer que la bomba de alimentación produce una presión a la entrada del filtro de 0.01 Kg/cm2 si Estimar el número de marcos de 430 x 430 x 30 mm y el tiempo de filtrado. sustituyendo valores en la expresión anterior se obtiene: Ha (9780 5)(1.01 x 109 s — cm' b).68 Kg/cm2 y que descarga a la atmósfera.. para procesar 40 Kg/lote de peso seco de producto. de tal manera que : . 253 era3 12. Solución: a). El cálculo se basa en el hecho t[ue el volumen de todos los marcos del filtro debe ser suficiente para alojar el volumen de la torta húmeda.063 Kg)< = 1. Los datos de los resultados del laboratorio son los siguientes: Peso seco de los cristales Volumen de la torta Profundidad de la torta Tiempo de filtración Gradiente de presión Torta incompresible 0.94 CAPÍTULOS.Cálculo del número de marcos necesarios para la filtración de 40 Kg peso seco del esteroide.5 cm 9780 s 1..Estimación de parámetros a partir de datos de laboratorio.0: (0.

para lo cual se realizan pruebas de filtración bajo las siguientes condiciones: Área de filtración Viscosidad Masa de sólido seco por volumen de filtrado 9.11). Área de filtración Área de filtración Área de filtración — Arta por marco x 2 x Número de marcos = (43 x 43) cm2 x 2 x 29 = 107.Q63 (43 x 43 x 3) cm3 Número de marcos = 29 c). ..Cálculo del índice eje compresibilidad. El tiempo de filtración puede ser calculado mediante la modificación de la ecuación (3.242 era2 d).4.3.68 ^ ) x (107. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 95 Número de marcos = Número de marcos = volumen torta húmeda volumen de un marco Ka\( 253 cm3 ^ A Q.4.01 x 109 t = 206 s Kg x (40 Kg)< (0. El área de filtración para filtros prensa de marcos se calcula tomando en cuenta que por cada marco existen dos placas o superficies de filtración. t = APA* s — cm t = (1.242 cm2)2 Ejemplo 3.3 era2 0.Cálculo del área de filtración del filtro prensa.001 N-s/m 2 10g/l . Se desea correlacionar la resistencia específica de la torta que forma una levadura con la caída de presión..Cálculo del tiempo de filtración en el filtro prensa..

36 12 2.68 26 3.68 Atm x '•»'*"< f Atm cm ai =4. Solución: El empleo de la ecuación (3.40 5 1. FILTRACIÓN Las pruebas se realizan a cuatro gradientes de presión diferentes.00 2. Atm. para lo cual es necesario el cálculo de a para cada corrida mediante la ecuación (3. pendiente = 2AP Para la primera corrida se tiene: 0.001 *? x a.Estos valores son los siguientes: .04 3 8 1.60 4 3.96 CAPÍTULOS.10).13) permite calcular el índice de compresibilidad. Los datos de cada corrida fueron correlacionados mediante la ecuación (3.10 Estimar el índice de compresibilidad s para este material. x 10 *f x Ofit x 2 x 0. s/cm2 1 0.10) obteniéndose los siguientes resultados: Corrida AP Pendiente Ordenada Num.13 x 10 10 De igual manera pueden obtenerse a 2 > «3 y #4. Origen s/cm.00 2 1.

10: Resistencia específica contra caída de presión. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 97 10.58 xlO 10 xlO10 xlO 10 xlO 10 Los datos de a y AP para cada una de las corridas pueden ser correlacionados de acuerdo con la ecuación (3.68 1.04 3.40 a cm/g 4.4 Figura 3.3.13) en una gráfica log(AP) vs log(a).2 Log AP 0. tal como aparecen en la Figura 3.7- 10.51 6.6 -0.61 7.2 0.13 5.42 . Corrida Número 1 2 3 4 AP Atmósferas 0.8- 10.36 2.4.9Log a 10. Se puede estimar con la pendiente de la curva el valor: s = 0.10.

Esta ecuación es útil para diseño de filtros continuos a partir de datos de filtración intermitente. . Formación de la torta En los procesos de filtración intermitente el área de filtración es constante y el espesor de la torta varía con el tiempo de filtrado.2 Filtración Continua CAPÍTULOS. Los primeros dos pasos se relacionan con el proceso de filtración en sí y el tercero es un aspecto de diseño mecánico.98 3.15) puede ser expresada en términos de los parámetros de diseño siguientes: Q: Flujo de filtrado. A es el área expuesta de filtración por ciclo o por revolución. FILTRACIÓN En un filtro continuo (Figura 3. La ecuación (3.14) puede ser adaptada a la filtración continua.7) el ciclo de filtración consta de tres pasos principales: . La ecuación (3.Descarga de la torta. En la filtración continua se puede suponer que el espesor de la torta es constante y el área de filtración varía con el tiempo. .4.Lavado de la torta. Esta sección enfatiza lo referente a los dos primeros pasos.A donde tj es el tiempo que dura un paso de la formación de la torta y Vf es el volumen de filtrado colectado en ese período. [Radianes]. * (j>: Ángulo de formación de la torta. Esta ecuación cuando la resistencia del medio es despreciable puede ser expresada como: Vf 2AP1. [L3/t]. .Formación de la torta.

4.15).19) pueden ser utilizadas para predecii cambios de la velocidad de filtración con respecto a cambios de las variables de diseño y operación en filtros continuos al vacío. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN TV: Velocidad angular del tambor. El tiempo que dura cada etapa de filtración se puede relacionar con el ángulo de filtración y la velocidad de giro del tambor.3.18) y (3. . donde 27rRL = Área lateral del filtro.17) se obtiene el flujo defiltración: V P<*Po i ) o en términos de la velocidad de formación de la torta W = p0Q : 2 ¡JLOí' (3.9) Las ecuaciones (3. L: Longitud del tambor. mediante la ecuación siguiente: Combinando las ecuaciones (3. [ t~1]. R: Radio del tambor. 99 Entonces es posible relacionar el volumen de filtrado de un ciclo por unidad de área. con el gasto Q : T= Vj Q . [L].16) y (3. [L]. (3.

00 „_ Caso ideal: desplazamiento hidráulico ~ 0. Si el lavado continúa parte del soluto contenido en el interior de la biomasa puede pasar al líquido de lavado mediante mecanismos de transferencia de masa (Figura 3. Existen diferentes técnicas de lavado. siendo la más utilizada la de lavado por desplazamiento. .10 - Control de la transferencia de masa 0. En la etapa de lavado la cantidad de solutos que puede ser recuperada depende del volumen del líquido de lavado que se emplee.11: Mecanismos de lavado. mediante un lavado se remueve del soluto retenido en el líquido y en la masa celular de la torta.11). FILTRACIÓN 1.. Un factor de diseño es el tiempo requerido para aplicar el líquido de lavado o tiempo de lavado. el cual depende de la naturaleza de la torta. Debido a lo anterior el análisis de la etapa de lavado se efectúa en dos pasos: 1.01 volum«n d* liquido d« layado volumen d« liquido retenido Figura 3. Inicialmente el líquido de lavado produce un desplazamiento hidráulico del filtrado retenido por la torta. Lavado de la torta Una vez que se ha formado la torta sobre la superficie del filtro.Cálculo del volumen de lavado en función de la recuperación de soluto que se especifique.100 CAPÍTULOS. En esta técnica el líquido de lavado se aplica directamente sobre la superficie de la torta.

En base a lo anterior. para lograr una determinada extracción del soluto.20) La ecuación (3.Si el desplazamiento por lavado del líquido retenido en la torta extrajera todo el soluto. el volumen necesario de líquido de lavado sería equivalente al volumen del líquido retenido por la torta (fracción vacía del lecho). la razón del volumen del líquido de lavado al volumen de líquido retenido se incrementa. se puede suponer que el gasto durante la fase de lavado es constante dado que el líquido de lavado no tiene sólidos. Volumen de liquido de lavado n = Volumen del liquido retenido por la torta (3.9) con Rm = O y a = a'APs se escribe: . Una correlación empírica que ha sido utilizada para materiales biológicos está dada por la siguiente ecuación: r = (l-e)n donde: Soluto retenido en torta Soluto inicial en la torta e = Eficiencia de lavado.. Conforme la eficiencia de lavado disminuye debido a los mecanismos de difusión y mezclado. debido a los fenómenos de difusión y mezclado en el lecho. Existen varios análisis teóricos para correlacionar los parámetros de lavado.Cálculo del tiempo de lavado en función del tipo de torta. 101 Cálculo del volumen del líquido de lavado. Este gasto puede igualarse al gasto final de la fase de filtrado.Para el cálculo del tiempo de lavado.3. Cálculo del tiempo de lavado..20) puede ser utilizada en gráficas semilogarítmicas para correlacionar datos de lavado (Figura 3. esto no ocurre en la práctica.. pero debido a lo complejo del fenómeno frecuentemente se utilizan correlaciones empíricas que ofrecen buenos resultados. Con estas correlaciones es posible calcular el líquido de lavado necesario para lograr un determinado porciento de extracción. La operación de lavado sería 100 % eficiente.12).4. la ecuación (3. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN 2. Sin embargo.

12: Curvas de lavado. dV_ dt El gasto cuando V = V/ es constante e igual a: (3. FILTRACIÓN Predomina el desplazamiento hidráulico 3.102 LOO CAPÍTULOS. se obtiene la siguiente ecuación: VL = (3.23) .22) con los límites: (3.0 ! _ Volumen líquido de lavado ~~ Volumen liquido retenido Figura 3.22) donde V¿ es el volumen del líquido de lavado y ti es el tiempo de lavado requerido.21) dV_ dt ~ Integrando la ecuación (3.

. DISEÑO DE EQUIPO DE FILTRACIÓN Combinando las ecuaciones (3.15) y (3.Estimar el tiempo de filtrado... El caldo pretratado se puede suponer incompresible. como la relación de volumen de lavado a volumen retenido n.4.3. el cual puede ser operado a 1.El tiempo de lavado.24) obteniéndose: .Filtración continua al vacío. de filtrado y lavado. Con este filtro se desea separar un caldo de eritromicina. Debido a las características de la torta se espera un 80% de eficiencia en el lavado y que la torta retenga 1% del volumen de filtrado. se relacionan directamente mediante las ecuaciones (3. La resistencia del medio filtrante es muy pequeña comparada con la resistencia de la torta.3 m de largo. y la relación de la fracción del líquido retenido con respecto al volumen del filtrado /. c).25) Es conveniente expresar la ecuación (3.15) y (3.25) en términos de parámetros de diseño. de tal manera que r = 2-^ = 2n/ tf VR Vf Ejemplo 3.5. Bajo estas condiciones: 2AP era2 Se desea extraer el 99% de los solutos retenidos en la torta. El filtro opera a 51 cm de mercurio de vacío. b). Solución: . a)..2 rpm con un ángulo de filtración efectiva dej65°. I/D (3-26) Se dispone de un filtro tipo tambor rotatorio continuo de 3 m de diámetro y 4. ir V.23) se obtiene: 103 VL A = i-3 ii/2 — *L (3-24) Los volúmenes y tiempos.= 2^ (3.El gasto que puede manejar el filtro.

La ecuación (3.104 CAPÍTULOS...17) permite estimar el tiempo de filtrado en base a los parámetros del filtro. de tal manera que..Cálculo del tiempo de filtrado.e)" 3 cm2 mtn / .20) se calcula n. = RL( V>0i'pc por las características de la torta s = O y a' = a. De acuerdo a los datos del ejemplo : * r = (1 . entonces la ecuación anterior se puede expresar como: sustituyendo valores: /2?r x ^ x 2?r x 1. 2?r x 1.2 min"l\l/2 Q = 150 C mx430 C T n( -g» _^-J x Q = 4520 cm /5 O = 16.Cálculo del tiempo de lavado.El gasto que puede manejar el filtro puede ser estimado por medio de la ecuación (3.272 L/h c).2 (El ciclo del filtro es de 50 segundos) b). Mediante la ecuación (3.18). FILTRACIÓN a).

5 s 3.8)* .01 volumen del filtrado.01)(2.5.26) conociendo que el volumen retenido e 0. n = 2. entonces. La teoría básica conjuntamente co algunos experimentos de laboratorio permiten el diseño y operació racional de los procesos de filtración.86 Volumen de lavado Volumen retenido Aplicando la ecuación (3.86) tL = 0. y en men< proporción el filtro intermitente de marcos de placas. Los procedimientos de diseño de filtros que se presentan.o '- o.01 = (1 . considere la compresibilidad característica de las tortas que forman los material biológicos. 3.5 Sumario La filtración es ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicc para remover sólidos de líquidos.. SUMARIO^ r O •" J 105 Q O c 0. El filtro más empleado en bioseparaciom es el filtro continuo tipo tambor operado mediante vacío. iL = (9 s)(2)(0. -. tanto para la operación intermitente como para la continua . i Los equipos de filtración empleados en bioseparaciones operan m< diante la formación de una torta sobre una superficie filtrante por accic de un gradiente de presión.

12 h 3. si el proceso se realiza con un gradiente de presión igual al empleado en el laboratorio.70) y (6..180)..s/m2 Marcos = 430 x 430 x 30 mm Los datos obtenidos durante el experimento aparecen en las primeras tres columnas de la Tabla siguiente: .6 Problemas 3.Se efectuaron pruebas de filtración con un filtro prensa de marcos y placas bajo las siguientes condiciones: Po = 10.5 m2 de área.3.8 y a 2 atm de presión.2 cp y un contenido de sólidos de 5 g/1.037 Kg/m3 l¿ = 0.106 CAPÍTULOS. El área de filtración empleada fue de 100 crn2 y el gradiente de presión de 1. Los datos de filtración son los siguientes: Estimar el tiempo de filtrado para procesar 5000 1 de este caldo en un filtro de 1. donde V/A está en cm y At/V en s/cm. Resp.En la filtración a nivel laboratorio de un caldo para la recuperación de gentamicina.8 m de agua. Resp. At/V) siguientes: (3.. la solución presentó una viscosidad de 1.2. Calcular el área de filtración necesaria para procesar 1000 1 de este caldo en un tiempo de 15 min bajo las mismas condiciones.001 N . se ajustan a una recta que pasa por los puntos (V/A.Los datos de filtración de S.1. griseu a un pH de 3. 18 m2 3. FILTRACIÓN 3.

8 5642.40 0.5 6604.)/A (t-f.5 1. PROBLEMAS Datos t s 447 1262 1886 2552 3381 3686 4043 4793 5652 6610 8680 9256 Cálculos 107 P N/m 2 0.0 8587. obteniéndose los datos siguientes: t(s) V x 106 20 40 60 120 180 300 420 (m3) '9.9 2.0 35.0 74.5 1.) s/m3 m 0.22 0.3.61 x 1010 m"1 3.3 4484.2 2.0 2.8 1.6 1.a V m3 (V + V.54 a).4.9 1.0 61. Rm = 6.2 1.990 7V/m2. 1.5 1.28 0.36 0..1 5244.1 0:04 0.5 1.Resp.52 0.069 x 1011 m/Kg b).16 0..Resp..3 1.4 0.2 7727.6.1 1.5 1.5 22.32 0.4.30 0.10 0.5 .5 7274.4 4757.7 8399.3 4609.5 6826.1 1.5 16.)/(V-V.0 45.Un caldo de actinomicetos adicionado con 5 % de ayudas-filtro se procesa en un filtro prototipo de 35 cm2 de área y a una presión de 99.5 1.44 0. a = 1.7 1.5 Estimar: a).7 1..5 1.

5367...6 m de Hg o = 0..Resp.3 m2 de área y la solución tiene una p0 de 0. 3. Resp: 23 horas. 674. 3.6.. 3.Cuántos marcos se requieren si la dimensión de éstos es de 75 x 75 x 3 crn b).7.28 g/cm3.356.Se desea filtrar un caldo que contiene cristales de un antibiótico..3.108 Estimar : a). Las pruebas de filtración en el laboratorio presentan los siguientes datos: Área = 89 crn2 AP = 2.500 0.4.25 x 10n(AP) .34 t(s) 10 20 30 100 era3 V (litros) 0. a).5 s/m2 b).Resp. a).5..71 s/m CAPÍTULOS.Calcular el tiempo de filtrado si la descarga del filtro se localiza a 3 m de altura.Estimar Rm y a' para la filtración del ejemplo 3.866 Estimar el tiempo de filtración si el volumen que se desea filtrar es de 7300 litros en un filtro de 1..8..Las levaduras forman tortas compresibles (Gerstenberg y Sitting.Considerando los datos del ejemplo 3.. FILTRACIÓN 3. 1980) cuya resistencia específica ha sido correlacionada con la expresión empírica .707 0. La presión a esta escala es la misma. a= 1.//a/>0/2AP.

3.9.6.5 rpm. 29 % b).Resp..10.Se incrementa la velocidad del filtro de 0.. chrysogenum (de 86 h de cultivo) en un filtro utilizado para medición de biomasa en linea.. Resp.El procesamiento de 30 cm3 de un caldo de P. 15 % . PROBLEMAS donde a tiene unidades de cm/g y AP de atmósferas. produjo los siguientes datos: AP (cm de Hg) tiempo de filtración 10 271 20 191 30 163 40 138 Estimar el índice de compresibilidad de la torta considerando despreciable la resistencia del medio.. en un filtro piloto de 5 m2 de área con una caída de presión de 4 atmósferas.. Resp. 0.Resp.2 cp..Se incrementa de 30 a 40 % el porcentaje de área sumergida (área sumergida/ área total de filtración).6 h 3. a).3 rpm a 0.Calcular el incremento en flujo de un filtro continuo tipo tambor giratorio al vacío cuando: a). 109 Estimar el tiempo necesario para procesar 3000 1 de un caldo que contiene 30 g/1 de la levadura y presenta una viscosidad de 1. 19. manteniéndose el resto de los parámetros constantes. b).52 3.

Ch.N. Julio 2. 63-76 Rees. Cooney. 58-63. Shuler. 1990. 1982.L. 76-79. 1980. A. L. Chem. Eng. 117-119. y Evans. Chem. 1974. D. Eng.P. C. R. 355-356.M.L. 19-31. H. Agosto 30.. S. Julio 26. 1. Petrides. Gerstenberg. Chem. y Sitting. Moir. Biochemical Engineering. Technol. Julio 26. New York. 52. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.. Academic Press.).F. Chem. 1972.110 CAPÍTULOS. 1979. (Ed. Tiller. Brown. D. Selecting batch pressure filters.R.7 Bibliografía Aiba. 1989. M. Eng. FILTRACIÓN 3. Bench-Scale design of SLS systems.E.B. Abril 29. New York. 351-391 Svarouvsky. L. An intoducction to biochemical process design. W. N. Recovery of fermentation products. . F. y Mills. T. 47-57. Eng. 1982. Eng. Filtration and allied operations.H. Ch. Designing batch pressure filters. Eng. AIChE. Let diatomite enhance your filtration. Humphrey.

2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la centrifugación que se derivan de la Ley de Stokes la cual describe 111 . especialmente cuando los caldos no son fácilmente filtrables. se incrementa por la acción de las fuerzas centrífugas que se generan por las altas velocidades de rotación de los equipos que se emplean (Bjurstrom. Cuando se utiliza la centrifugación la diferencia entre la densidad de los sólidos (células o partículas) y el caldo. En la sección 4. Estos últimos debido a su tamaño (de 0.1 Introducción La separación de substancias de diferente densidad mediante movimiento giratorio se conoce como centrifugación. 1982). La centrifugación es una de las principales operaciones utilizada para la separación de células de caldos biológicos (Wiesmann y Eider. o la adición de ayudas-filtro no es recomendable por razones de costos o de producción excesiva de desechos contaminantes.3 a 1 /zm) y alta densidad (1.5 g/cm3) pueden ser separados de los restos celulares por centrifugación en dos o tres pasos. 1985). separación de precipitados proteicos (Bell et a/.Capítulo 4 Centrifugación 4. La centrifugación también es empleada en la remoción de desechos celulares de caldos de células que han sido sujetas a rompimiento. utilizando agua de lavado y detergentes para facilitar la separación.3-1. 1983) y para recuperación de productos insolubles como los cuerpos de inclusión.

CENTRIFUGACIÓN los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad. Se puede suponer que para las suspensiones diluidas características de los caldos biológicos esta ley es aplicable. • La sedimentación por acción de la gravedad.1 Ley de Stokes La velocidad de sedimentación de una partícula esférica en un medio continuo para Reynolds menores a 1 (región de resistencia viscosa).3 se hace una descripción general de estos equipos. La Ley de Stokes establece que cuando se aplica una fuerza a una partícula en un medio continuo ésta se acelera (F = ma).1.112 CAPÍTULO 4. Este movimiento puede ser causado por la fuerza gravitacional o por una fuerza centrífuga. • La sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. Esta permite desarrollar algunas predicciones del comportamiento de los equipos centrífugos.2 Fundamentos de la Centrifugación El estudio de las separaciones sólido-líquido por centrifugación está basado en la teoría de la sedimentación. 4. • El factor G 4. esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales: • La Ley de Stokes. está descrita por la Ley de Stokes (Figura 4. En base a lo anterior. La teoría de la sedimentación está basada en la Ley de Stokes que establece los aspectos básicos del movimiento de un sólido en un líquido cuando existe un gradiente de densidad.2. hasta que .1). no sólo para poder especificarlos y dimensionarlos.4 se centra en los aspectos básicos del diseño de centrífugas. Existen diferentes tipos de centrífugas que se utilizan tanto a nivel laboratorio como a escala industrial y su aplicación depende de varios factores análogos a los mencionados para la filtración en la Tabla 3. La sección 4. En la sección 4. sino que también ofrece un apoyo adecuado para su correcta operación.

4.. 9^22 -> •^1 := •«_> — • ^^ m^m •5: 1 = 0. Fuente: Bird et a/. 1964. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 11 1O 9 \ \ ir Ie ' a 10 2 S \ l'°: 1 ii "i* 2 9 2 1 2 s \ L \ S k 1 \ ^^* \ Asíntota *=-|¿- SV í •X ís -^ ñ > s v. Reproducida con el permiso de Reverte S. /><lí Figura 4.1: Factor de fricción para esferas. Todos los derechos reservados.2.A. . Copyright ©1964.4A i 9^2 3 |Q4 2 5^ O.1 1( 32 3 6^22 9l(J2 9 t 2 9 ^2 Número d« Reynolds Re = Ou.

[L/t2]. el balance de fuerzas para una partícula en equilibrio en un medio continuo se expresa de la siguiente manera: Fuerza de aceleración = Fuerza de flotación -f Fuerza de arrastre Para el caso de partículas esféricas el balance anterior puede expresarse como: . (4. De acuerdo a lo anterior.: Densidad del fluido. />£. \í\ Viscosidad del fluido. . [L]. Velocidad terminal de la esfera. En una sedimentación libre la fuerza que actúa sobre la partícula es la de la gravedad. [M/L — t].114 CAPÍTULO 4. pp: Densidad de la partícula. Al alcanzar el equilibrio de fuerzas la partícula se mueve a la velocidad constante VQQ (velocidad terminal). [M/L3].1) donde: dp: Diámetro de la partícula. a: Aceleración. [L/t]. y la fuerza de arrastre (resistencia de forma y de fricción) descrita por la Ley de Stokes. CENTRIFUGACIÓN alcanza una velocidad a la cual la resistencia a su movimiento iguala a la fuerza aplicada. y en una sedimentación centrífuga la fuerza es la del campo centrífugo. [M/L3]. . VQO'. Es importante hacer notar que si la partícula parte del reposo en el proceso de sedimentación. conforme la velocidad de la partícula se incrementa la fuerza de arrastre se incrementa. Las fuerzas que se oponen al movimiento de las partículas pueden agruparse en la fuerza de empuje descrita por el principio de Arquímides.

[L/t]. . La velocidad de sedimentación por gravedad de una sustancia.2 Sedimentación por Acción de la Gravedad En varios procesos de separación sólido-líquido la fuerza impulsora de la sedimentación es sólo la de la gravedad. .3) es: ( (A 4) (4 A\ - donde: a = g: Aceleración de la gravedad.2) es la siguiente: «" = donde: A/> = pp — pL Se puede expresar la velocidad de sedimentación de la partícula en dos casos límites de interés: . proporciona información básica necesaria para el diseño de cualquiera de los procesos de sedimentación.Sedimentación por acción de una fuerza centrífuga. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 115 La ecuación (4.Sedimentación por acción de la gravedad. De acuerdo a la Ley de Stokes si la aceleración de la sedimentación es la de la gravedad. de la siguiente manera: (pp .2) O La velocidad de sedimentación de una partícula de acuerdo a la ecuación (4.1) puede ser modificada para presentarse como una expresión de la Ley de Stokes.2. la velocidad de sedimentación que se obtiene por medio de la ecuación (4.4. 4.PL) (4.2. [L/t2]. vg: Velocidad terminal en un campo gravitacional.

por lo tanto el parámetro A/9 puede ser muy bajo. ya que ésta es proporcional al cuadrado del diámetro de la partícula. 1988). Las células contienen más del 70 % de agua por lo que su densidad es muy semejante a la de los caldos. r: Distancia radial del eje de rotación a la partícula. Varias aplicaciones importantes pueden obtenerse de los principios inherentes a las ecuaciones (4. por lo que su velocidad de sedimentación es cien veces menor.116 CAPÍTULO 4.2. [í"1]. .3) es: 2 r donde: a =w2r: Aceleración centrífuga. debido a que los equipos al girar producen una mayor aceleración de las partículas (Brunner y Hemfort. Algunos caldos biológicos son muy viscosos propiedad que dificulta la sedimentación. CENTRIFUGACIÓN 4. La velocidad de sedimentación puede ser incrementada en un equipo centrífugo aumentando la velocidad de rotación o la distancia de sedimentación (diámetro de la centrífuga).5). [L]. Bajo estas condiciones la velocidad de sedimentación derivada de la ecuación (4. a continuación se presentan algunas de ellas: El diámetro aparente de las bacterias es del orden de diez veces menor que el de las levaduras.3 Sedimentación Centrífuga En las separaciones centrífugas sólido-líquido la velocidad de sedimentación es mayor que la sedimentación libre o gravitacional. u>: Velocidad de rotación en radianes.4) y (4. [L/t2].

1..2.5) y a la geometría del sistema.1 también se presentan correlaciones de factores de fricción para casos diferentes a la Ley de Stokes.4.Separación centrífuga diferencial. Solución: De acuerdo a la ecuación (4. suponiendo que ambas tienen la misma densidad y están sujetas al mismo campo centrífugo1 en una centrífuga de tubos (Figura 4. [L2]. [Adimensional. [M/Lt2]. f : Factor de fricción. El principio de separación por centrifugación diferencial se basa en las diferentes velocidades de sedimentación de las partículas. Estimar el tiempo de sedimentación relativo de una partícula celular de diámetro 5 /zm (núcleo) con respecto al de una de diámetro de 1 fim (mitocondria)..En el caso de hornogeneizados biológicos las diferentes partículas celulares suelen ser separadas por centrifugación diferencial. la velocidad de sedimentación está dada por: dr v. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 117 Para obtener una expresión para flujo no laminar la ecuación (4.. Ejemplo 4.2) puede ser expresada como: 24 o donde: = AKf A: Área característica. = — = dt 18/i . K: Energía por unidad de volumen.2) los cuales giran perpendicularmente al eje .] En la Figura 4.

Fuente: Bailey y Ollis.118 CAPÍTULO 4. La expresión anterior puede ser utilizada para el cálculo del tiempo de sedimentación integrando entre los límites: una vez realizada la integración se obtiene la expresión siguiente: t= In Ri Aplicando la expresión anterior a cada partícula. Todos los derechos reservados. 1986 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Copyright ©1986.2: Centrifugación diferencial. CENTRIFUGACIÓN s Fuerza Centrífuga Figura 4. (al núcleo N y a la mitocondía M) se pueden obtener las siguientes proporciones: ÍN M ÍN = 25 .

Tiempo de sedimentación..4 Factor G En la caracterización y escalamiento de centrífugas frecuentemente se emplea el factor G.5) se obtiene: . Aplicando la expresión desarrollada para el tiempo de sedimentación en el ejemplo anterior se tiene: _ ~ >< 0-01 l±r.1) ^3 x = 2471 s 4 2 18 4.2. que es una medida relativa de la velocidad de sedimentación de una partícula en un campo centrífugo con respecto a su velocidad de sedimentación en el campo gravitacional.4. ÍM es el tiempo que tarda la partícula M en avanzar de R\ a /22Ejemplo 4.4) y (4. Estimar el tiempo para lograr una sedimentación completa de las levaduras de la suspensión. >< h f (10 x 10. La centrífuga gira a 400 rpm . Solución: Se debe estimar el tiempo que tardan en sedimentar las levaduras que estén más apartadas del fondo del tubo. La centrífuga del ejemplo anterior va a ser utilizada para separar levaduras con diámetro de Stokes de 10 //m y 1. De acuerdo a lo anterior mediante las ecuaciones (4.2.05 g/cm3 de densidad. FUNDAMENTOS DE LA CENTRIFUGACIÓN 119 donde tjy es el tiempo que tarda la partícula N en avanzar de R\ a R<¿. Las propiedades del caldo se pueden suponer iguales a las del agua. es decir en la superficie del líquido del tubo. La distancia del eje de giro a la superficie del líquido en los tubos es RI = 3 cm y la longitud del tubo es de 10 cm .) cm' x (1. Análogamente.2.05 .

de tazón sólido. 4. decantadoras y de discos. Esto permite desarrollar expresiones prácticas para estimar la G como la siguiente: G = 5.6 x W~7N2D donde N está en rpm. en dos grupos: • Equipos de Centrifugación-Filtración. La principal clasificación de los equipos de centrifugación se basa en el diseño de su tazón o tina. Estos equipos funcionan como un filtro. CENTRIFUGACIÓN (4. • Equipos de Sedimentación Centífuga: Centrífugas tubulares. de cámara múltiple. 4. La suspensión de sólidos es alimentada a la tina que al girar a altas velocidades provoca el depósito de sólidos sobre el medio filtrante y la salida de líquido claro.6) G puede ser referida a un radio característico el cual generalmente es el radio exterior del campo centrífugo.3 Equipo de Centrifugación La filtración y la sedimentación centrífuga constituyen los principios básicos de los principales equipos de centrifugación que se emplean para separar líquidos. el diámetro del tazón de la centrífuga (o punto de interés) D en mm y G es adimensional.4).120 CAPÍTULO 4. . 1979).3.3). o líquidos de sólidos (Svarousky. y en la forma como se descargan de los sólidos sedimentados (Figura 4.1 Equipos de Filtración-Centrífuga Los equipos de filtración centrífuga constan de una tina o canasta perforada la cual está recubierta con un medio filtrante (una tela o membrana). En esta sección se presentan los principales equipos de centrifugación existentes de acuerdo a su clasificación. sólo que la fuerza impulsora del filtrado es la centrífuga y no una diferencia de presión (Figura 4.

y el objetivo es producir un líquido claro de tal manera que en las operaciones de separación posteriores la interferencia por sólidos sea mínima.2 Equipos de Sedimentación Centrífuga En los equipos de sedimentación centrífuga también llamados de tazón sólido o canasta no-perforada (para distinguirlos de los de canasta perforada).3.3: Clasificación de centrífugas. i Las centrífugas sedimentadoras se pueden utilizar en operaciones de separación sólido-líquido tanto para remoción de biomasa (clarificación) como para recuperar sólidos durante la cosecha celular. En relación a la forma de descargar los sólidos las centrífugas sedimentadoras pueden operar en forma intermitente. semintermitente o continua. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 121 Tubular Cámara múltiple Sedimentadoras « Tazón sólido Decantadoras Discos Centrífugas < Filtrantes Figura 4.4. En las operaciones de clarificación el caldo a procesar generalmente contiene una baja cantidad de sólidos.3. del orden del 1 %. 4. En las operaciones de recuperación de sólidos las corrientes de salida pueden . la suspensión se alimenta a un tazón que se hace girar provocando que los sólidos se colecten sobre una pared y el sobrenante se recupere por rebosamiento o por acción de un colector de líquido.

Reproducida con el permiso de Jolm Wiloy and Suns. Copyright ©1987.4: Centrífuga de canasta perforada. Todos los derechos reservados. .122 CAPÍTULO 4. 1987. CENTRIFUGACIÓN Alimentación -#• nitrado Figura 4. Fuente: Jacobs y Penney.

Este tipo de centrífuga es uno de los mas eficientes y sencillos.5. contener hasta un 40 % de sólidos en volumen.5: Centrífuga tubular. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 123 Sobrenadante Alimentación Figura 4. Las CT pueden contar con un sistema de enfriamiento por lo que son empleadas en el manejo de caldos con enzimas o proteínas. El líquido claro se colecta por rebosamiento en la parte superior. Conforme se forma la torta el área de flujo se reduce y el tiempo de residencia del líquido disminuye. Centrífuga Tubular Las Centrífugas Tubulares (CT) consisten básicamente de un tubo vertical esbelto que gira a altas velocidades por la acción de un motor eléctrico.3. La torta tiene que .1 //m.4. Como se observa en la Figura 4.5). durante la operación de la CT la suspensión es alimentada por la parte inferior y los sólidos sedimentan en la pared del tubo. Esto se traduce en un aumento gradual del contenido de sólidos en el sobrenadante que puede ser determinado por mediciones de turbidez. capaz de separar partículas hasta de 0. o una turbina de aire o vapor (Figura 4. A continuación se efectúa una breve descripción de los principales tipos de centrífugas sedimentadoras utilizadas en las bioseparaciones.

Los tipos más comunes constan de 2 a 6 cámaras. Este arreglo genera un mayor tiempo de residencia del líquido. ya que la centrífuga tiene que ser desmantelada para sacar los sólidos. El diámetro de los equipos de cámara múltiple varía de 335 a 615 mm. La capacidad de sólidos es de 2 a 4 Kg por lote. Los modelos industriales típicos cuentan con un tubo de 11.500 1/h.5 y 60 litros dependiendo del material y el número de cámaras. desarrollando campos hasta de 62.000 y 8. La capacidad de manejo de sólidos varía entre 2.400 rpm. lo cual puede ocasionar fugas del sistema y debe ser evitado cuando se trabaja con sustancias tóxicas o células recombinantes. Un modelo típico de laboratorio consta de un tubo de 4. con una capacidad de hasta 100 1/h. con velocidades de rotación entre 5. CENTRIFUGACIÓN ser descargada manualmente. .000 G. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en la última cámara. Estas centrífugas consisten de una serie de tazones concéntricos con deflectores que provocan un flujo en serie de la suspensión. Este tipo de equipo no permite el lavado de la torta.5 cm de diámetro por 25 cm de longitud. con capacidad entre 500 y 3.000 y 9.5 cm de diámetro por 76 cm de longitud. respectivamente.000 G.124 CAPÍTULO 4. Su operación permite la clasificación de las partículas conforme pasan de una cámara a otra.6) fueron creadas para incrementar la capacidad de manejo de sólidos de las centrífugas tubulares. en relación al de la centrífuga tubular.000 rpm. así como mayor capacidad de manejo de sólidos. produciendo campos entre 5.000 rpm desarrollando campos de hasta de 12. por lo que su operación es intermitente. el cual puede girar a una velocidad de hasta 50.000 G. Centrífugas de Cámara Múltiple Las centrífugas de cámara múltiple (Figura 4. Este tipo de centrífugas presentan algunos modelos completamente sellados para minimizar problemas de formación de espuma y aerosoles. el cual puede girar hasta con 15. La descarga de sólidos y mantenimiento de estos equipos es más difícil que el de las centrífugas tubulares.

4. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 125 Alimentación Sobrenadante Figura 4. 1985. Reproducida con el permiso de Ekevier Science Inc. Todos los derechos reservados.3. Fuente: Axelsson.6: Centrífuga de cámara múltiple. . Copyright ©1985.

el cual al girar permite que los sólidos se depositen sobre la superficie de la pared del tazón y el sobrenadante se obtenga por rebosamiento en la parte superior en forma continua. La alimentación de la suspensión se efectúa en el fondo de el tazón.126 Alimentación —»• CAPÍTULO 4. su relación de longitud a diámetro es de alrededor de 0. En algunos modelos el ciclo se controla por medio de un detector del espesor de la torta.7: Centrífuga de tazón sólido.6 mientras que el de las tubulares es de 4-8. Las centrífugas de tazón sólido normalmente son operadas con su eje en posición vertical. Centrífugas de Tazón Sólido Las centrífugas de tazón sólido (Figura 4.7) o centrífugas intermitentes son muy similares a las centrífugas tubulares pero menos esbeltas. El líquido residual sobre la torta puede ser removido utilizando un tubo rasador móvil. La forma de descarga de los sólidos depende de su naturaleza. Los sólidos muy fluidos pueden descargarse sin parar la centrífuga y los sólidos muy compactos pueden descargarse) utilizando una cuchilla interior de la centrífuga que permite raspar la pared del tazón para des- . CENTRIFUGACIÓN Rasador Torta Sobrenadante Figura 4.

EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 127 j Sobrenadante Alimentación Figura 4. 1979.8). En las centrífugas decantadoras la suspensión es introducida a través de perforaciones por un tubo axial concéntrico a la flecha del tornillo. Todos los derechos reservados. con capacidades volumétricas de 2.4. Un tipo especial de centrífuga intermitentes es la de tazón triple (Figura 4.1 0 0 rpm de diferencia). Ambos tipos de descarga se realizan a través de la parte inferior de la centrífuga.000 rpm por lo que los campos centrífugos son menores que los de los otros equipos. Fuente: Svarousky. Las centrífugas intermitentes en su versión de laboratorio presentan tazones de 15 cm de diámetro y las de planta piloto entre 23-53 cm.3. prender la torta.7 a 27 litros.9) 'se caracterizan por un tazón horizontal con una sección cilindrica y una sección cónica. Las industriales tienen tazones entre 95-125 cm con capacidades volumétricas de 100 a 300 litros. Centrífugas Decantadoras o de Tornillo Las centrífugas decantadoras (Figura 4.600 a 6.8: Centrífugas de tazón triple. Copyright ©1979. El tazón contiene un tornillo transportador que gira en la misma dirección. al . Las velocidades de rotación son de 1. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.5-3. con una relación de longitud a diámetro entre 1. pero a una velocidad ligeramente superior o inferior que el tazón (entre 5 .5.

Por otro lado. el aumento de longitud en la sección cónica permite la obtención de tortas con menor contenido de agua.9: Centrífuga decantadora. La disminución de la velocidad de rotación del tornillo transportador aumenta la capacidad de desagüe de la torta . donde escurren antes de salir. 1985.128 CAPÍTULO 4. respectivamente. Todos los derechos reservados. Copyrigllt ©1985. El líquido claro se obtiene por rebosamiento en el extremo opuesto a través de orificios de descarga que fijan el nivel del líquido en la centrífuga. Entre mayor sea el nivel de líquido dentro de la centrífuga se obtendrá una mejor clarificación. pero un menor escurrimiento de la torta en la sección cónica. Los diámetros de los tazones varían de 15 a 140 cm para los modelos piloto e industriales. con alimentaciones entre 3. La descarga de sólidos varía de 30 Kg/h hasta 60 Ton/h. CENTRIFUGACIÓN Alimentación Sobrenadante Sólidos Figura 4. final de la sección cónica o de compresión de sólidos. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Entre más larga sea la sección cilindrica mayor es la clarificación alcanzada. Fuente: Axelsson. Existen diversos diseños de centrífugas decantadoras. La longitud de la sección cilindrica y la sección cónica pueden variar de acuerdo a las aplicaciones.8 y 1890 1/min. Los sólidos que se depositan en la pared son transportados y descargados continuamente por el extremo cónico de la centrífuga.

1987. La centrífuga de tornillo es una de las más utilizadas en bioseparaciones principalmente para manejo de grandes cantidades de sólidos como es el caso del tratamiento de aguas residuales.10: Centrífugas de discos.0 mm. Todos los derechos reservados. del orden de 0. Fuente: Jacobs y Penney.4. El ángulo que forman los conos con la vertical varía entre 35 y 50° dependiendo de la apli- .5 a 2.3.10). pero disminuye la capacidad de manejo de sólidos. Los discos constan de bordos internos que permiten mantener pequeñas separaciones entre ellos. Las centrífugas de discos son las más utilizadas en BSL. El rotor de la centrífuga provoca el giro tanto de los discos como del tazón de la centrífuga (Figura 4. Copyright ©1987. Centrífuga de Discos La centrífuga de discos consta de un eje vertical sobre el cual se montan un conjunto de discos en forma de conos truncados. b) Tazón abierto. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Alimentación 129 I Sobrenadante t Figura 4. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. a) Retención de sólidos. uno sobre otro.

las principales son las siguientes: Las de operación intermitente con respecto a la descarga de sólidos. Las de tazón abierto de descarga intermitente de sólidos. Entre la pila de discos y el tazón existe un espacio que permite la acumulación de los sólidos.130 CAPÍTULO 4. o. también llamadas de retención de sólidos. Alimentación CENTRIFUGACIÓN _«. Debido a la fuerza centrífuga los sólidos se depositan en la cara interna de los discos. . Existen diferentes centrífugas de discos en relación a la forma de descarga de sólidos. cación particular. Las de válvula tipo boquilla de descarga intermitente de sólidos. Durante la operación de la centrífuga de discos la suspensión es alimentada continuamente en el fondo del tazón a través de la parte central de la flecha. y fluye hacia arriba entre las placas hacia la salida en la parte central superior del equipo.10: Continuación .. resbalando hacia la cámara colectora debido al ángulo de los discos. Las de boquilla para la descarga continua de sólidos. Descarga de sólidos Figura 4..

La ventaja de este tipo de centrífugas. Los valores típicos son de 0. Este tipo de centrífugas permite manejar caldos con contenido de sólidos hasta del 10 % . El diámetro de los tazones de las centrífugas de retención de sólidos varía de 24 a 44 cm y las fuerzas centrífugas de 5. Las centrífugas de discos en general poseen una gran capacidad de .000 G. Tal precisión no puede ser lograda por las centrífugas de tazón abierto.000 G y los gastos de 3. Sus ciclos varían de 0. Las centrífugas de disco de tazón abierto (Figura 4. este tipo de centrífuga es recomendable sólo para suspensiones diluidas conteniendo alrededor de 1% en volumen de sólidos. debido a que generan campos de hasta 15.500 1/min.000 a 7.10a) éstos se acumulan hasta que la cámara se llena. sin que éstos se acumulen.4 a 1.13 a 0. La descarga de sólidos se realiza por medio de un sistema hidráulico que permite abrir y cerrar los orificios de descarga entre las piezas.10 segundos de apertura por minuto de operación. La capacidad de sólidos varía de 5-20 litros y los flujos de 0. Las suspensiones que pueclen ser manejadas.10b) constan de dos piezas cónicas unidas horizontalmente por sus caras más grandes.500 1/min. Esta frecuencia es controlada con relojes acoplados a medidores de lodo o medidores de turbidez en el líquido de salida.3. Las fuerzas centrífugas varían de 5.4.000 G.3 segundos de apertura por minuto de operación. El espaciamiento de las boquillas debe prevenir zonas muertas de depósitos de sólidos. La centrífuga tiene que ser detenida y descargada manualmente o con auxilio de un forro que se coloca previamente sobre la pared del tazón. EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 131 En las centrífugas de retención de sólidos (Figura 4.8 a 1. La principal ventaja de este tipo de unidades es que pueden manejar suspensiones más concentradas. En las centrífugas de boquillas con descarga continua éstas se sitúan en la periferia del tazón.07 a 0. La duración y frecuencia de la apertura de la descarga depende de la cantidad y fluidez de los sólidos.000 a 8. es que son especialmente útiles para caldos biológicos donde el diferencial de densidad suele ser bajo y la viscosidad alta. Debido a la forma de su descarga de sólidos. El número y el tamaño de las boquillas se ajusta de tal manera que exista un flujo continuo de sólidos. En las centrífugas con válvulas tipo boquilla la descarga de sólidos se controla con este tipo de válvulas situadas en la periferia del tazón. alcanzan hasta un 10 % en volumen de sólidos.

requieren de medidas de higiene y seguridad especiales como: Manejo mecánico seguro. . Por otro lado. Protección contra ruido y daños corporales. 4. Por otro lado.1 Diseño de Centrífugas Tubulares En el diseño de los equipos de centrifugación se debe considerar los siguientes hechos: De acuerdo con la teoría de sedimentación desarrollada en la sección 4. • Escalamiento de Centrífugas. diferencia de densidad entre el sólido y el líquido. • Diseño de Equipo de Filtración Centrífuga. 4. Este análisis puede ser extendido al caso de las centrífugas de discos. a sus cortas distancias de sedimentación y a los altos campos centrífugos que generan.4 Diseño de Equipo de Centrifugación El diseño de los equipos de centrifugación está basado en la teoría de sedimentación.4. explosiones o diseminación de sustancias tóxicas o contaminantes. las propiedades del caldo (tamaño de partícula. Protección contra incendios.132 CAPÍTULO 4. lo cual puede visualizarse .2.más fácilmente en el caso de las centrífugas tubulares debido a la sencillez de su geometría. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos : • Diseño de Centrífugas Tubulares. y la viscosidad del líquido). • Diseño de Centrífugas de Discos. CENTRIFUGACIÓN sedimentación debido principalmente a su gran área. los equipos que operan por filtración centrífuga presentan variantes de diseño respecto a los dos anteriores.

El gasto determina el tiempo de residencia de las partículas en un equipo dado. La posición de las .11 muestra una centrífuga tubular que al girar forma una capa anular de líquido sobre la pared del tazón. determinan el tiempo de sedimentación. La Figura 4. determinan la velocidad de sedimentación que se puede lograr en un equipo de sedimentación centrífugo. z ** Interfase liquida Alimentación t i Figura 4. El gasto manejable en una sedimentación centrífuga depende de la geometría específica del equipo. Para producir un líquido libre de sólidos.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 133 Torta í Ro m Sobrenadante OOU Trayectoria de^x las partículas u. la velocidad de rotación y el radio del giro de la centrífuga. Esto constituye una condición de diseño para este tipo de centrífugas. el tiempo de sedimentación en el equipo debe ser igual o menor al tiempo de residencia de las partículas impuesto por el flujo o gasto volumétrico.11: Esquema de una centrífuga tubular. de su velocidad de giro y de las propiedades del caldo. La velocidad de sedimentación cojuntamente con la distancia de sedimentación.

. A: Área de flujo.La distancia entre la superficie del líquido y la pared de la centrífuga es constante. [L3/i\.La alimentación es una solución diluida. Tiempo de Residencia La velocidad del fluido en el sentido axial está dada por: dz donde: Q: Gasto volumétrico. vz: Velocidad de la partícula en el sentido axial.Las partículas se distribuyen uniformemente en la capa anular. En el análisis primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga. posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geomertría de la centrífuga.Las partículas sedimentan de acuerdo a la Ley de Stokes. . [L/t].134 CAPÍTULO 4. . . El área de flujo es igual a la sección transversal de la capa anular de fluido y está dada por: = 7r(R20 . [L2]. Se puede desarrollar un análisis sencillo e ilustrativo de la centrífuga tubular mediante las siguientes suposiciones: .8) . CENTRIFUGACIÓN partículas en esta capa varía tanto por el flujo convectivo axial como por la sedimentación radial.R\) donde: (4.No existe retroflujo (flujo tapón).

puede ser obtenido a partir de la Ley de Stokes considerando el movimiento de la partícula en el sentido radial. [t]. . (4 9) ' La integración de la ecuación anterior permite obtener la expresión para el tiempo de residencia de la partícula siguiente: (4. se consideran dos casos de interés: .8).4.. R0: Distancia del eje de giro a la pared del tazón.Tiempo para el 100 % de sedimentación. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Ri'. Distancia radial del eje de giro a la superficie del líquido. [L].10) Tiempo de Sedimentación y Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícula. 135 Con los límites de integración apropiados se puede obtener una ecuación para el tiempo de residencia de las partículas dentro de la centífuga empleando las ecuaciones (4. que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular. Tiempo para el 100% de Sedimentación y Gasto Volumétrico . .4. [Lj. [L]. esto es: * donde: L: Longitud de la centrífuga.7) y (4. o más difícil de sedimentar).El tiempo de sedimentación ts de una partícula localizada en la superficie de la capa anular del fluido en R\ (que es la más alejada de la pared.Tiempo para el 50 % sedimentación. tr: Tiempo de residencia de la partícula.

136 CAPÍTULO 4.12) V ' y la expresión para el tiempo de sedimentación de la partícula en este caso es: Es más conveniente expresar la ecuación (4. para obtener: La condición de diseño donde el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual al tiempo de residencia.15) En el resultado anterior es importante hacer notar que el flujo es función de las propiedades del caldo contenidas en vg. . CENTRIFUGACIÓN dr vr = — = —- dt V (4. el que los equipos se especifiquen para la remoción del 50 % de las partículas de una suspensión de un tamaño dado o tamaño de corte.14). Esta expresión es la siguiente: Q = [«. Este resultado permite obtener una expresión para el gasto manejable en una centrífuga tubular para producir un líquido claro o lograr un 100 % de sedimentación.11) ' en este caso inicialmente la partícula se localiza en RI y en el momento ta de alcanzar la pared en R01 de tal manera que: ' dr d¿Apu> fts — = * / dt r 18/í J0 (4. Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico..Es una práctica común en las bioseparaciones sólido-líquido.10) y (4.4).]• <J (4. y de las características de la centrífuga contenidas en el paréntesis cuadrado de la derecha. puede alcanzarse mediante la igualación de las ecuaciones (4.13) en términos de vg dada por la ecuación (4.

19) v ' R50 donde ts es el tiempo para lograr un 50 % de sedimentación. (4.R250)L = 7r(RlQ .4.11) debe ser integrada para este caso con límites nuevos para expresarla en la forma siguiente: * dr c??0A/9a.17) y (4. es la de especificar el tamaño de partícula para el cual todas las partículas mayores sedimentan en mayor proporción y todas las menores de ese tamaño sedimentan en menor proporción. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 137 Otra interpretación del tamaño de corte.2 f t s — = —— / dt r 18/í JQ (4-18) El resultado de la integración anterior expresado en términos de vg es: (4. El radio R50 que divide la capa anular en dos subcapas de igual volumen puede obtenerse de la igualdad siguiente: *(Rl . Si se considera que en la capa anular del líquido de una centrífuga tubular las partículas del sólido se distribuyen uniformemente.10) y (4.19) se obtiene la expresión para el tiempo de sedimentación en términos de parámetros medibles.20) La igualación de las ecuaciones (4. éstas se encontrarán en cantidades iguales en subcapas anulares de caldo de igual área transversal.20) permite obtener una expresión para el flujo para este caso: .17) La ecuación (4.4.16) (4. Combinando las ecuaciones (4.R\)L de tal manera que: (4.

.22) de la siguiente manera: Q' = donde: E= (4. .R\ CENTRIFUGACIÓN 9 ln (4. Sigma es un área característica de cada tipo de centrífuga y se utiliza para efectuar comparaciones y escalamiento de equipo.V*) .24) es la expresión básica del concepto sigma. 1957). En el caso de la centrífuga tubular el valor de sigma puede ser definido a partir de la ecuación (4.138 CAPÍTULO 4. el cual es una constante que contiene sólo parámetros relacionados a la geometría de la centrífuga y su velocidad angular (es independiente del tipo de caldo). 7TU>2¿ tf2 _ (4.23) (4..1 ln »~2 RO .22) Definición de Sigma.24) La ecuación (4.El concepto sigma ha sido muy utilizado en el campo de la sedimentación centrífuga desde que éste fue desarrollado (Ambler.21) puede ser expresada de otra forma considerando la siguiente igualdad: T 2 ln 2 '"/* para obtener: 2 R0 r*¥•) . Por otro laclo vg se relaciona sólo con las propiedades del caldo y es independiente del tipo de centrífuga. La ecuación (4.21) donde Q' es el flujo para sedimentar el 50 % de las partículas de diámetro c/so en una centrífuga tubular. .

3. c) Calcular el flujo para separación completa de los restos celulares. Al separar células de E.022 m Ri 0.004 N—s/m2 al salir del equipo de rompimiento celular. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 139 En la subsección (4.001 N . para lo cual es necesario calcular primero Vg- Sustituyendo datos en la ecuación (4.2 m 0 dp 10-6 m Se desea utilizar la misma centrífuga para separar restos celulares de diámetro promedio 0.4.4. b) Calcular la relación de flujos para claridad completa de sobrenadante con respecto al flujo para 50 % de corte.15).s/m2 J* 3 A. Solución: a) Para el cálculo del flujo manejado eri la separación de células se supone que todas las partículas de la suspensión sedimentan.001 vn = x9. 50 Kg/m Carac.000 rpm R 0.5 x 10~6 m.2) se presenta para las centrífugas de discos un desarrollo análogo al efectuado para la centrífuga tubular. Ejemplo 4. obteniéndose también una expresión para sigma. Se estima que la viscosidad del caldo se incrementa a 0. se obtiene un líquido claro bajo las siguientes condiciones: Propiedades del caldo 0. Se pide : a) Calcular el flujo manejado en la separación de células. La aplicación de este concepto a problemas de escalamiento se revisa en la siguiente sección.011 m L 0.Separación Centrífuga.4. coli de un caldo diluido en una centrífuga tubular.8^ N —S m-s .4) se tiene: (10-6m)2(50) 18 x 0. Centrífuga N 20. en la separación de células. entonces se utilizará la ecuación (4..

7 X 10~ 6 22.94 .2) -(l.31 a b) Para el cálculo del flujo para un corte del 50 % se utiliza la ecuación (4.X 7T X (2*X™'°0°Y V 60 / S~2 X 20 C77? Q = — 980 ^ cm x .19 ¿ <9 ~~ 14.2) 2 Q' = 42.7 x 1Q-6 aa x TT x (27rx620°'000)%-2 x 20 cm 980 3? 2 2 2 (2.97 <3 = 14.140 CAPÍTULO 4.. \2 2 .l) cm x\ In 5 2(2. vg = 2.15): 2. sustituyendo valores se tiene: _ 2 x 2.-T5ln rr g = 3.= 2.7 x 1(T8 s 6 vg = 2.— s CENTRIFUGACIÓN Mediante ecuación (4.19 l- por lo tanto: Q' _ 42.22).31 { §.7 x 10.

R\ tiende a R0 entonces: c) Para facilitar los cálculos se puede calcular el cociente de los flujos de cada tipo de caldo empleando la ecuación (4.2 Centrífuga de Discos En esta sección se desarrolla un análisis para la centrífuga de discos análogo al efectuado para la centrífuga tubular.97 2¿ x (0.15) y (4.22) que: Q' 2/ "gf En la expresión anterior es importante hacer notar que cuando la película de fluido al interior de la centrífuga es muy delgada.4. .15) y obtener: Qc & MC Donde el subíndice R se refiere a los restos celulares y el C a las células enteras de tal manera que: acUR 3.4.12).4. La geometría del sistema es diferente (Figura 4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 141 También puede ser demostrado utilizando las ecuaciones (4.01 QR = (1 x 10-4)2 cm2 x 0.5 x 10-4)2 cm2 x 0. entonces se puede intuir que la expresión para el cálculo del flujo en este caso también es diferente.97 cm QR = -77 5 16 QR = QR = 0.89 [ a La reducción del tamaño de partícula y el aumento de viscosidad reduce dramáticamente la capacidad de la centrífuga. 4.04 -Jv ' cm—s 3 3.

12: Esquema de una centrífuga de discos. En el sentido angular se supone que el líquido gira a la misma velocidad que los discos. Tiempo de Residencia en una Centrífuga de Discos En una centrífuga de discos la partícula que se desea sedimentar se mueve por convección y por sedimentación.12. En el análisis se supone que el flujo global Q se divide equitativamente entre los espacios formados por todos los discos. CENTRIFUGACIÓN Figura 4.142 CAPÍTULO 4. y finalmente se combinan ambas expresiones para relacionar el gasto volumétrico manejable con las propiedades del caldo y la geometría de la centrífuga. de tal manera que el flujo en cada espacio es Qn = Q/n. Si los ejes de referencia se fijan como aparece en la Figura 4. donde n es el numero de espacios formados entre los discos . Primero se desarrolla una expresión para el tiempo de residencia en la centrífuga. posteriormente una expresión para el tiempo de sedimentación. El movimiento convectivo es paralelo a los discos y el movimiento por sedimentación es en sentido horizontal. El flujo se presenta tanto en la dirección angular como en dirección paralela a los discos. el .

Para obtener una expresión del tiempo de residencia de una partícula en una centrifuga de discos es necesario primero desarrollar una expresión para la velocidad de la partícula en el sentido £. En el desarrollo de la expresión para vx se supone un arreglo geométrico sencillo como se muestra en la Figura 4.4. En el siguiente desarrollo se parte de este supuesto cuando se analiza la velocidad de la partícula en el sentido x. de tal manera que la velocidad neta de la partícula en la dirección x. La velocidad vx varía con la distancia x dado que el gasto es constante en toda la sección de cada película y dado que la sección transversal de flujo disminuye conforme x aumenta (se supone que el líquido es incompresible).13: Perfil de velocidades en una centrífuga de discos. Una condición necesaria para alcanzar una separación efectiva. La velocidad vx también varía en el sentido y formando . Expresión para vx. es que la velocidad convectiva de la partícula sea mucho mayor que el componente de la velocidad de sedimentación que actúa en sentido opuesto. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 143 Figura 4.4. vx. es la resultante de la velocidad convectiva del fluido (aquí se supone que la partícula se mueve a la misma velocidad que el fluido) y la componente en x de la velocidad de sedimentación que se opone a este movimiento.13. movimiento producido por sedimentación tiene componentes tanto en x como en y..

27) conduce a: Qn= I Q [*** rf APa 2 [ . cuando se desprecian los efectos inerciales.28) (4.144 CAPÍTULO 4. vx = O Para y = — . la ecuación de movimiento para este sistema puede ser escrita de la siguiente forma: (4.26) —a áp_ donde a es el espesor de la película y P la presión. Considerando que la área de flujo puede ser aproximada por un rectángulo de ancho a y largo 2?rr entonces: dydz (4. Si se considera una sección de película de longitud L. donde la velocidad vx sólo depende de y pero no de x.27) Jo 7^¿ 8/^L L \a J.25) dx dy2 Esta expresión puede ser integrada dos veces entre los límites: a Para y = . vx = O y obtener la expresión: APa2 (4. La ecuación (4.26) se puede expresar en términos de Qn si se integra a lo largo del área de flujo con los límites apropiados. donde Qn es el flujo volumétrico entre dos discos de la centrífuga. CENTRIFUGACIÓN un perfil de velocidades con vx = O en las superficies de los discos. La integración de la ecuación (4..26) y (4.28) se tiene que: (4. /2y\] 1-1 7rAP« 3 r Qn = 6/¿L Combinando las ecuaciones (4.29) 47T7Y¿ . se considera que el sistema se encuentra en el estado estacionario y el flujo es laminar.

que a su vez permita desarrollar una expresión para el gasto manejable en una centrífuga de discos. y la parte mas lejana en la que puede sedimentar es en la parte superior izquierda de la película en [x =(R0 — Ri)/senO .En este caso la partícula más difícil de capturar se localiza en la parte inferior derecha de la película eni (x = O . DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN o bien en términos del flujo volumétrico total: u = 145 * ( 3Q \ x 4ri7rra (4. al igual que en en las centrífugas tubulares se consideran dos casos de interés: . .32) . y = ^r). De la ecuación (4.4. Tiempo para el 100 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico. (4. La velocidad de sedimentación en el sentido radial está dada por la Ley de Stokes: dr u2r — = vg— dts g por lo tanto: ..Tiempo para el 100 % de sedimentación . y = |]. (4.30) describe el perfil de la velocidad de la película así como su comportamiento en diferentes planos en función de la velocidad promedio.30) se puede obtener una expresión para un diferencial de tiempo de residencia de la siguiente forma: dtr = -p--=) i _ f^) 2 1 ñara / [ dx V .Tiempo para el 50 % sedimentación.31) V a/ J Cálculo del Tiempo de Sedimentación y el Gasto Volumétrico Para desarrollar la expresión del tiempo de sedimentación de una partícu la.4.30) La ecuación (4.

y= — senO 2 obteniéndose: ^ Rocoto (4. CENTRIFUGACIÓN dt.\(R0 .34) de acuerdo a la geometría del sistema se puede efectuar el siguiente cambio de variables: dy — cosOdr r = R0 — xsenO con estas nuevas variables la ecuación (4.33) para obtener la expresión: 9dr 4nirra dX I -(**)' V a / (4.31) y (4.35) la ecuación (4. = -gL (4.35) puede ser integrada utilizando el cambio de variable u = (R0 — xsenO) y los límites siguientes: —ü x = O.33) La condición de diseño que establece que el tiempo de sedimentación debe ser menor o igual que el tiempo de residencia puede lograrse igualando las ecuaciones (4.IT) Para rara n Qg .34) se transforma en: /o \ (2y\ 2 2a l .36) La ecuación anterior también puede ser expresada en función del parámetro E de la siguiente manera: . y — — L¿ x = R0 — RI a .146 CAPÍTULO 4.xsenO)2 x cosOdx (4.

4. De acuerdo a la ecuación (4.02 x x x .02 xlO'3 8.Para calcular el gasto que puede manejar la centrífuga para un corte del 50 %.3 inciso b)..4). Ejemplo 4.8 fim 8. Tiempo para el 50 % de Sedimentación y Gasto Volumétrico.36).8 x 10~4 cm)' (1.(ver ejemplo 4.36). Para aplicar esta ecuación es necesario calcula: primero vg. coli mediante una centrífuga de discos.4.37) donde E para este caso está definida por la expresión dentro del paréntesis cuadrado de la ecuación (4.6 cm densidad celular 1.36).38) donde E está dada por la misma expresión que la de la ecuación (4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 147 Q = vgX (4.= 2vgZ (4.400 rpm viscosidad ángulo 38° Solución: El gasto de la centrífuga de discos puede ser calculado mediante la ecuación (4.. Estimar el gasto volumétrico para producir un líquido claro de E. coli en una centrífuga de discos (Brunner. 1983) bajo las siguientes condiciones: Datos Centrífuga Datos caldo radio externo diámetro celular 0.02 g/1 velocidad 1.1.1 cm radio interno 3.05 .Separación de E. vn = (0.02) ¿ x 980 ^ 18 x 1.05 g/1 número de discos 72 densidad del medio 1.4. debido a la separación tan pequeña de los discos una buena aproximación está dada por: Q.

Por otro lado.02 x 10~6 — x 7. .. . las velocidades de sedimentación que se predicen con la Ley de Stokes pueden ser adecuadas para el caso de las centrífugas tubulares.3 Escalamiento En el análisis de la operación de la sedimentación centrífuga se han desarrollado expresiones para el cálculo del gasto manejable por una centrífuga de una geometría particular. L = / x 72 \ /2?r x8400\ 2 . Este enfoque es debido a que los equipos disponibles se construyen en tamaños específicos. Existen dos enfoques para el escalamiento de datos. En la selección de equipo de centrifugación una combinación adecuada de los principios teóricos con pruebas experimentales directamente con el material.36). es lo más recomendable._ — s' 3 x 980 2? j V 6 0 ) ¿í/l /"v I £¿ \ I ¿iH XN <J-±W \ 2 x(S. pero pueden resultar hasta dos veces mayores de las realmente obtenidas en las centrífugas de discos..02 x 1(T6 — s en seguida se calcula S de la ecuación (4. uno basado en el tiempo equivalente de centrifugación y otro en el área de centrifugación.39 x 107 cm2 5 <3 = 75. CENTRIFUGACIÓN v9 = 1.4.35^ S Q = 271 | 4.l3 -3.7.63) cm3 x co¿ 38 E .148 CAPÍTULO 4. de tal manera que gran parte del problema de separación centrífuga se reduce a una selección del equipo más que a un diseño específico para un trabajo particular.39 x 107 cm2 El gasto volumétrico que puede manejar la centrífuga es: Q = 1.

1: Valores de Gt. Las muestras se hacen girar a velocidades específicas a diferentes tiempos hasta producir un sobrenadante claro.2 se presentan los rangos de los factores E para diferentes tipos de centrífugas.000 60 6. donde G está dado por la ecuación (4.6) y t es el tiempo necesario para producir una centrifugación aceptable. Partícula Núcleo Mitocondria Ribosomas G t (min) 149 600 15. Los subíndices 1 y 2 se refieren a las escalas estudiadas. En Ja Tabla 4. En la Tabla 4.000 100.000 Tiempo Equivalente Este enfoque consiste en determinar el producto Gt. Factor Sigrna La expresión para calcular el parámetro Sigma de cada tipo de centrífuga es característica de cada geometría particular (Axelsson.DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN Tabla 4. 1985).000 5 75. Esta área característica o factor S ha sido empleada para escalar equipos con similitud geométrica.39) puede ser utilizada como un criterio de escalamiento. El escalamiento utilizando el factor sigma supone que para una . La consistencia de los sólidos puede ser estudiada preliminarmente utilizando una varilla de laboratorio sobre la torta después de decantar el sobrenadante.000 Gt (min) 5 3.1 se presentan valores de Gt característicos de algunas partículas biológicas. El valor de Gt obtenido se usa para la selección de equipos a escala industrial.000. Las pruebas de sedimentación sobre las muestras se pueden realizar en el laboratorio en una centrífuga de tubos o en una centrífuga de tazón. de tal manera que la igualdad: G& = G2t2 (4.

23) se obtiene: Oí (4. m2 20 . Para calcular el diámetro equivalente de las partículas de cuarzo.3 está basado en la sedimentación en agua de esferas de cuarzo de densidad relativa 2.000 400 .40) Se debe recordar en este punto que la selección del equipo de centrifugación debe combinar la teoría.3 se presenta una guía general para la selección de centrífugas sedimentadoras.000 . Tabla 4.2: Factores Sigma. Este supuesto es más utilizado cuando se escalan centrífugas del mismo tipo. Centrífuga Intermitente Decantadora Tubular Discos E . al de las partículas de interés en una suspensión dada. 1988 Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. Copyright ©1988.500 2.2. la experimentación directa con el material (incluyendo pruebas a nivel piloto) y la experencia (Moir. de tal manera que: y utilizando la ecuación (4. 1988).PA 1/2 (4. Todos los derechos reservados.150 CAPÍTULO 4. se establece que las velocidades de sedimentación son iguales en ambos medios. En la Tabla 4.65. obteniendo la siguiente expresión: PP ~ PL pe .120.000 CENTRIFUGACIÓN Fuente: Moir. El tamaño de partícula a que se refiere la Tabla 4. misma suspensión la velocidad de sedimentación de las partículas es independiente de la escala.3.200 150 .41) .

1.500 1.570 0.200 2 .000 .5.5 .800 2.8 .000 14.335 38 .1 .000 .5.10 1 . Todos los derechos reservados.20 2 .200 Caractrísticas de Procesamiento Adaptada de: Moir.5. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 151 Tabla 4.200 0.torta Fuerza g Máxima 12.8.200 0.5 .5 .5 .1.3 Flujo de la Alimntación 1/min 8.5 .120 1.890 Prueba de Consistencia de los sólidos torta firme torta firme lodo lodo lodo torta firme torta firme lodo . 1988 Reproducida con elpermisode Me Graw Hill Inc.9.25 .10 1 .15.000 .4.3.000 G (min) 2 .16.20 1 .4. Copyright ©1988.000 Método de descarga de sólidos Intermitente Intermitente Continuo Intermitente Intermitente Intermitente Intermitente Continuo Contenido Sólidos % < 0.000.000 .500 5.250 3.1.5 1 -5 2-20 < 10 < 10 <1 1-5 2 .200 0.8.500 3.60 Capacidad lavado de torta Ninguna Ninguna Moderada Ninguna Ninguna Ninguna Ninguna Moderada Prueba de Sedimentación a 1.000 5.3: Guía para la selección de centrífugas.8.780 3.200 0.8.10 1 .3.000 .7.000 500 .5.000 5.10 0.3 0.38.000 0. Características manejables de la Alimentación Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tipo de Centrífuga Tubular Cámara Múltiple Discos y boquillas Discos Tazón abierto Discos y boquillas Discos Intermitente Tazón Sólido Decantadora Tamaño de Partícula mieras 0. .000 5.000 2 .000.

Área de centrifugación.1 ///O . 2 nivel industrial. Una centrífuga de discos de laboratorio produce un sobrenadante claro con una alimentación de 2.1 1/h de una solución diluida de células..65). Estimar el área necesaria para manejar un flujo de 1. HA'.000 1/h en una centrífuga similar. 1 nivel laboratorio. [M/L — t]. sustituyendo valores. Solución: Se puede utilizar la ecuación (4. [M/L3]. [L]. [M/L3]. PL: Densidad del líquido . CENTRIFUGACIÓN pe'.40) para el caso de manejo de un flujo claro a la salida de la centrífuga: [M/L3]. Ejemplo 4. HL'.152 donde: CAPÍTULO 4.Viscosidad del agua. [M/L3]. pp: Densidad de la partícula en suspensión. El área característica de la centrífuga es de 233 ra2. dc: Diámetro equivalente de una esfera de cuarzo. [M/L — t]. dp: Diámetro partícula.Viscosidad del líquido.Densidad del cuarzo (2. p¿: Densidad del agua.5. <2 2 £i (1000 ///i)(233 m 2 ) Qi = 111.000 m 2 (2. [L].

4.4. La canasta perforada tiene un radio R0 y está recubierta de un medio filtrante de resistencia despreciable. En un instante t durante la operación. la superficie del líquido está localizada en RI y la interfase líquido. En esta sección el tratamiento se limita al de geometría cilindrica.4. .14) donde se alimenta la suspensión a tratar.4 Filtración Centrífuga La filtración centrífuga combina los dos principios de separación mecánica: filtración y centrifugación. La aplicación de este método ha conducido al desarrollo de diferentes tipos de equipos de diferentes geometrías y formas de descarga de la torta.14: Filtración centrífuga. Considérese una tina o canasta de una operación de filtración centrífuga (Figura 4. DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 153 Figura 4. y por acción de la fuerza centrífuga se forma una torta homogénea sobre la pared de la tina.sólido se localiza en RTGeneralmente el interés de diseño es contar con expresiones para el cálculo del gasto volumétrico manejable por la centrífuga y del tiempo de filtrado para realizar una determinada operación en un equipo dado.4.

Esta expresión es: .46) entre R0 y R\ se puede encontrar una expresión para el gradiente de presión generado por la fuerza centrífuga.154 Gasto Volumétrico Q CAPÍTULO 4.46) donde pi es la densidad del líquido. Debido a que la torta no es plana el área de filtrado varía con r.44) puede ser integrada entre R0 y RT para encontrar la caída de presión en la torta: El gradiente de presión generado por el movimiento circular del líquido puede ser calculado utilizando la expresión: (4. En el instante t el flujo volumétrico Q en la dirección radial es constante a lo largo del espesor de la torta. entonces la ecuación de D'arcy debe expresarse en forma diferencial como: -dP (4. Integrando la ecuación (4. Combinando las ecuaciones (4.43) v ' (4 44) - la ecuación (4. y se relaciona con la velocidad de filtración (variable a lo largo del espesor de la torta) mediante la siguiente expresión: v = -Q— donde t es la altura de la canasta de la centrífuga.42) y (4. está relacionado con la ecuación de D'arcy para medios porosos.42) ar donde v es la velocidad superficial de filtrado.43) se obtiene: (4. CENTRIFUGACIÓN El gasto volumétrico a través de la torta en una operación de filtración centrífuga.

48) puede ser utilizada para desarrollar una expresión para calcular el tiempo necesario para procesar un volumen de caldo dado (o una torta de un espesor físicamente alcanzable).51. . DISEÑO DE EQUIPO DE CENTRIFUGACIÓN 155 (4. Es necesario efectuar primero algunos cambios de variables.50 ) se puede definir el diferencia de volumen de filtrado siguiente: dV = Po (4.4. - T/ _ _ I" / 02 D2 \ fí\ ÍA CQ\ donde px es la densidad de la torta en peso seco por unidad de volumen. obteniéndose: (4. A partir de la ecuación (4. disminuyendo también Q.47) La ecuación (4. El gasto volumétrico Q puede ser relacionado con el volumen de filtrado por la ecuación: (4.49) dt Por medio de un balance de masa en la película cilindrica que forma la torta se obtiene que: . R? disminuye conforme transcurre el tiempo de filtración (al aumentar el espesor de la torta).47) puede ser sustituida en la ecuación (4.45) para obtener una expresión del gasto volumétrico en cualquier instante ¿.48) La ecuación anterior concuerda con el hecho que durante una operación de filtración centrífuga.4. Tiempo de Filtración-Centrífuga La ecuación (4.

Solución: ción (4. tiene un radio de 51 cm y una altura de 45 cm.49) y (4.48).52) el tiempo de filtrado es función de la resistencia específica de la torta entre otros parámetros.156 CAPÍTULO 4.O RT = O t =• t — RT se obtiene: . (4.02 (//cm3 de una hormona.52). Debido a que la torta puede sufrir compactación cuando se expone a un campo centrífugo. Ejemplo 4.R\] (4. Entonces es preferible realizar estas mediciones en equipo de laboratorio apropiado para la filtración centrífuga.. La centrífuga que se va a utilizar gira a 650 rpin. CENTRIFUGACIÓN Combinando las ecuaciones (4. Las propiedades del líquido pueden ser consideradas iguales a las del agua.67 x 1010 cm/g y una densidad de 1.Tiempo de Filtración. Se desea estimar el tiempo de filtración centrífuga de 1.6.51) e integrando la expresión resultante entre los límites: i .1 g/cm3 de sólidos secos de torta húmeda. Para tal efecto es necesario calcular primero la Idealización .52) donde t es el tiempo necesario para obtener una torta de espesor (R0 — RT) • De acuerdo a la ecuación (4. las mediciones de resistencia específica hechas en equipos de laboratorio de filtración intermitente pueden conducir a resultados incorrectos. Una vez llena la centrífuga y girando puede formar una película de 5.5 cm de líquido y torta.600 litros de una suspensión que contiene 0. Las pruebas de laboratorio indican que la torta que forma esta suspensión tiene una resistencia específica de 2.

La teoría de la sedimentación combinada con la experimentación en equipos pilotos. precipitados y cuerpos de inclusión) de caldos biológicos.52) el tiempo de filtrado es: t = -l-21n4? 0.02 x 1600 x 103 cm311/2 1.1 -^j x TT x 45 era crn1* = 48..67 x 1010p x 1.6 min La centrifugación se emplea para separar diversos tipos de sólidos (células. permite operar y diseñar racionalmente los equipos de centrifugación. Existen varios tipos de equipos para efectuar la operación de centrifugación los cuales pueden operar tanto en forma intermitente como en forma continua. de la velocidad de giro y de las propiedades del caldo que se desea procesar.92 cm2 (512 -45.50) de tal manera que: 0. desechos.1-Ay ^ cm—o cm 2x X x 48. el gasto manejable en una centrífuga depende de la geometría específica del equipo. De acuerdo con la teoría de la sedimentación.9 é v -l-21n 51 48^9 t = 8. SUMARIO 157 de la superficie de la torta RT mediante la ecuación (4.01-^ x 2. .9 era entonces de acuerdo a la ecuación (4.52) cm2 '_5T 48.

Una centrífuga tubular de 12. La diferencia de densidad entre las partículas y la solución es de 0. a). 8.6 Problemas 4. La película que forma el líquido al girar tiene un espesor de 5 cm.01 x 10~3 N-s/ra2 y una densidad de 1.Una centrífuga tubular que gira a 4. logra recuperar el 60 % de sólidos.000 Kg/m3.670 m2 4.15 ra y gira a 3.. Sabiendo que la recuperación es inversamente proporcional al flujo. b). b)..158 CAPÍTULO 4. 2.3.Sedimenta libremente.682 x 10~3 N . 4.. CENTRIFUGACIÓN 4. a). Estimar el gasto volumétrico que puede manejar este equipo en la separación de restos celulares de E.18 l/min . Resp.4 x 72.100 Kg/m3 de densidad.Resp.Estimar el área característica de centrifugación para procesar 3.Estimar la velocidad de sedimentación de una partícula de 5 de diámetro y 1.La velocidad a la que debe girar la centrífuga para obtener un 95 % de recuperación.. Las células del caldo presentan un diámetro promedio de 1 ¡¿m y una densidad de 1096. estimar: a).18 l/h 4. 82.. Resp.El flujo que puede ser alimentado a la centrífuga cuando gira a 4.Resp.1.000 rpm y se desea una recuperación del 95 %.. 1. coli que presentan un diámetro promedio de 0.000 rpm cuando se alimenta con un caldo de levaduras a razón de 12 1/min.25 firn y se encuentran en una solución con 4 cp de viscosidad.04 x 10"3 m/s 4.600 G. 1.35 x lO"6 m/s b).4.Resp.2.5 cm gira a una velocidad tal que genera un campo de 15.Se localiza en un punto r = 0.845 rpm b).03 g/cm3.34 x 10~3 m3/s de un caldo de cultivo bacteriano.. La viscosidad del caldo es de 2.. en agua a 20° C con una viscosidad de 1.7 Kg/m3...s/ra2 y su densidad de 997 Kg/m3.000 rpm. cuando: a)..Resp..

Una vez realizada la extracción las fases se separan mediante una centrífuga tubular.. ii). 11. Las propiedades de las fases son las siguientes: Fase Ligera (B) Nombre PEG 4000 9 % Densidad 1046 Kg/m3 Viscosidad 0... PROBLEMAS 159 4.008 Kg/m-s Temperatura 20°C Fase Pesada (A) Nombre ( Dextrano T 5000 2 % Densidad 1144 Kg/m3 Viscosidad 0. b). Los restos celulares obtenidos en este paso tienen la mitad del diámetro de las células originales y el caldo es cuatro veces más viscoso.Estimar el número de centrífugas con capacidad de 400 1/h de homogeneizado para realizar el paso iv).Rompimiento de las células mediante un homogeneizador.8 ///.5 ///.6.Resp.000 / de un caldo celular que contiene 0.2. tiene un radio externo R0 = 0..34 h 4... La salida de la fase ligera se localiza en RA — 0.02 ra. iv). d).15 /// de células (base húmeda de sólidos) es necesario realizarlo de acuerdo a las siguientes tres etapas: i). iii)..9 m.25 h c).022 ra mediante un arreglo que la coloca por encima de la fase ligera. 2 b).Concentración del caldo hasta 0. Este paso debe ser realizado en menos de 15 horas para evitar degradación del producto.Resp.4..05 ra y una longitud L = 0..Resuspensión del caldo en una solución amortiguadora apropiada hasta 0. a). La salida de la fase pesada en la centrífuga se localiza a una distancia radial RB — 0.Establecer de que otra forma se puede realizar este proceso.En una operación para la obtención de una enzima se utiliza un sistema de extracción de dos fases acuosas inmiscibles.6...El procesamiento inicial de 30. a).008 Kg/m-s Temperatura 20°C La centrífuga gira a 12.000 rpm.Estimar el tiempo necesario para realizar el paso i) con el mismo equipo.Estimar el tiempo necesario para el paso iv).. c)..Separación de los restos celulares del homogeneizado. .5.

CENTRIFUGACIÓN de tal manera que la interfase líquido-líquido se forma a una distancia RÍ mayor que R¿.160 CAPÍTULO 4. a). L = 1..7.Calcular la posición de la interfase. d).78 x 10~5 m3/s c). Partiendo de que cuando se maneja el flujo de 1 x 10~4 rn3/s en la centrífuga más chica se tiene una separación adecuada de las fases.. 730 m2 .000 rpm. c)... a).Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase pesada al girar..Calcular (Qs)2 e).76 x 10~2 m 4. RA = 0.Calcular el día metro mínimo de las gotas de fase pesada para obtener un 100 % de separación de las fases.. 4 //m 4. d).La extracción líquido-líquido del ejemplo anterior se desea escalar utilizando una centrífuga más grande donde: RB = 0..15) calcular la velocidad de sedimentación mínima para la fase pesada en la fase ligera.Calcular (E3)2 d).Utilizando la ecuación (4.. 7.. b). b).5 m y N = 8.Resp.Desarrollar una expresión para obtener el gradiente de presión generado por la fase ligera al girar.06 m.066 m..La centrífuga del problema anterior se alimenta con un flujo de 1 x 10~4 m3/s de una mezcla de las fases que se encuentra en una proporción de 3. c). a). realizar los siguientes cálculos: Sea: 1: Operación en el equipo menor.Calcular el gasto total que puede manejar la nueva centrífuga...Calcular (£5)1 b)..Resp.. a).Calcular el flujo de la fase ligera que se alimenta a la centrífuga...Resp... a).5:1 de fase pesada a fase ligera. 3. 2: Operación en el equipo mayor.Calcular (Ri)2 c).8.Resp.Desarollar una expresión para el cálculo de la posición de la interfase suponiendo que los gradientes anteriores son iguales.

782 m 2 161 d). En pruebas de laboratorio la suspensión puede clarificarse en 6 min a 1. Los tubos se llenan con la suspensión hasta una altura de 5 cm.Resp.9.11.56 x 10~4 m3/s 4.10. Estimar el tiempo para sedimentar la mitad de las partículas si se supone que éstas se distribuyen en forma uniforme en la suspensión. 4.. .4..Resp.01 g/cm3. La torta que forman los sólidos es bastante fluida.000 rpm. Cuando la centrífuga está operando los tubos giran perpendicularmente al eje y el fondo de los tubos se localiza a 9 era del eje.6.000 G. PROBLEMAS c). con una centrífuga de tubos que opera a 8.Se desea procesar una suspensión diluida de levaduras de 10 /zra de diámetro y densidad de 1.Una centrífuga de discos recupera el 50 % de células a un gasto de 10 l/min.Se desea procesar 1. 6. Se desea descargar los sólidos continuamente.. ¿Qué gasto se puede manejar para lograr 80 % de recuperación en la misma centrífuga?. 4. En base a los datos anteriores y utilizando la Tabla 4r3 efectúe la selección de una centrífuga.000 l/rnin de una suspensión que contiene 20 % de levaduras.. 4.. Las propiedades del líquido pueden ser tomadas como las del agua.

Hemfort. Me Graw Hill. Liss. 3. D. M.). 1961. Segunda Edición. 3. (Ed. Biothechnology. Belter. P.A. Alan R. Centrifugation. En: Downstream Process: Equipment and Techniques. 1983. J. A. New York. K. Eng. 18. CENTRIFUGACIÓN 4. 47-75. Axelsson. Rousseau. Vol 8. New York. 129-196. Oelde.M. The formation of protein precipitates and their centrifugal recovery. Jacobs. (Ed. Biochemical Engineering Fundamentáis. W.H y H. 325-330. 1985. Hoare.7 Bibliografía Ambler. 1-50. Eng. y Dunnill. 1988. 1983. 6. 1988.J. y Ollis. Brunner. M. P. Mizrahi.F. Pergamon Press. John Wiley and Sons. 1964. Brunner.W. 6-14. New York. K. R. Downstream Processing. L. Feb. New York. Advances in Biotechnological Processes.A. y Hu. Vol. D.R.L. Bailey.B. E. Centrifugation equipment: Theory. Stewart. Moo Young. Centrifugal Separation in Biotechnological Process.. En: Handbook of Separation Process Technology. W.162 CAPÍTULO 4. México. 21. Oxford. C. 1..J.E. Bird. Springer-Verlag. 10. Separators in biotechnology: A new challenge to the centrifuge manufacturer?. E. W. Bell. 1-72.H.A. 126-158. 1987. y Penney. Bjurstrom. y Lightfoot. Phase segregation.. Chem. . 26. Ed. New York. 1985.).N. En: Comprehensive Biotechnology. Reverte. Chem. En: Advances in Biochemical Enginnering /Biotechnology. Fenómenos de transporte. S. Westfalia Separators AG. John Wiley and Sons. 1986. R. Cap. Cussler. (Ed. 429-433. 53. Ind. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. Sección 2. H. Alemania.).E.

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Cuando el producto de interés es intracelular (Tabla 5. una vez realizada la cosecha de células una operación necesaria para la liberación del producto es el rompimiento de la célula misma (Petrides et al. técnica es función del tipo de microorganismo que contiene al producto de interés. Las proteínas intracelulares desnaturalizadas con frecuencia forman cuerpos de inclusión insolubles. Algunos de los productos biotecnológicos producidos a escala industrial son extracelulares y no requieren ser extraídos de la célula. 1989). Esto hace necesario contar con técnicas de rompimiento celular eficientes y selectivas en la producción de proteína intracelular. La técnica de rompimiento celular seleccionada determina el tamaño de los desechos resultantes y la influencia que estos tendrán en las operaciones que se utilicen para su separación.1). la. Sólo algunas células presentan mecanismos de secreción celular del producto de interés. Algunas proteínas eucarióticas recombinantes producidas por microorganismos procariotes no son secretadas por la célula recombinante y constituyen productos intracelulares.Capítulo 5 Rompimiento de Células 5.1 Introducción El rompimiento celular es una operación unitaria de gran importancia industrial. los cuales pueden estar en forma activa o en forma desnaturalizada. 165 . Asimismo. Otras proteínas de interés permanecen en el espacio periplásmico entre la membrana y la pared celular.

particularmente en relación a su estructura externa (Asenjo. evitando con ésto la necesidad de romper la célula para recuperar el producto.1: Productos que requieren de una ruptura celular. . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. Esporas. Tétanos. Mitocondrias. Los métodos de recuperación menos severos involucran una alteración química de las cubiertas celulares o permeabilización que facilita la salida del producto. Invertasa. 1990). Meningitis. Todos los derechos reservados.3 se centra en los equipos de rompimiento que se utilizan a nivel industrial. los más drásticos involucran el rompimiento completo de la célula. 5. Protema A.2 se presentan los fundamentos de la operación de rompimiento.4.2 Fundamentos La recuperación óptima de productos intracelulares requiere del conocimiento de la estructura de las capas externas que protegen a las células: la membrana y la pared celular. Ejemplos Insulina. Proteína G. En este capítulo en la sección 5. HC. Tipo de Producto Proteínas Recombinantes Enzimas Vacunas Otros Adaptada de: Foster. Glucocinasa. La sección 5. DNA. El diseño de estos equipos se discute en la sección 5. 1-Asparaginasa. Copyright ©1992. 1992 Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co. Esta sección se centra en cuatro aspectos fundamentales para el análisis de la operación de rompimiento: • Estructura de la pared celular.166 CAPÍTULOS. Requiere además del conocimiento de los sistemas que permiten a ciertas células secretar los productos de interés en forma activa. Toxinas. Existen varios métodos para la recuperación de productos intracelulares.

167 5. • Métodos de permeabilización celular. En éstas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. particularmente la estructura de las paredes bacterianas. debido a que las bacterias poseen una elevada presión osmótica interna y a que frecuentemente pueden hallarse expuestas a diferentes condiciones ambientales externas. que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte.5.2. En las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. coli como organismos huésped de varios productos biotecnológicos recombinantes (Wang. Las paredes celulares de las bacterias son rígidas y porosas.1 Estructura de la Pared Celular En esta sección se describe brevemente la estructura de las paredes microbianas. El espacio periplásmico está constituido por una sustancia semejante a un gel. FUNDAMENTOS • Sistemas celulares de secreción. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la del disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido N-acetilmurámico.2. En las células Gram positivas la enzima lisozirna se u t i l i z a para el rompimiento celular ya que su mecanismo de acción es el rompimiento . La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos. las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (como D-alanina y Dglutamina). Las paredes celulares de las bacterias Gram-positivas y Gram-negativas poseen una característica molecular común: en ambas existe un rígido esqueleto peptidoglucano o mureína. debido al relevante papel que tienen las bacterias como la E. • Métodos de rompimiento celular. 1988).

ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de los enlaces glucosídicos del esqueleto polisacárido del peptidoglucano. La diferencia en el grosor de la capa de peptidoglucano y su ubicación. . pueden romperse en molinos de perlas de vidrio. La pared celular de las levaduras consta de dos capas: una capa externa formada de un complejo manano-proteína y una capa interne de glucano. permaneciendo er . como en el caso de algunas proteínas. permite que las células Gram-positivas sean más sensibles a la acción de la lizosima que las Gram-negativas.Las proteínas no son secretadas por las células. éstas queda atrapadas en el espacio periplásmico o entre la membrana y la pare celular. la célula se expande con la consecuente ruptura de la membrana y liberación del contenido celular (Lehninger. 5.o de células se localizan en la parte externa. coli para la producción de proteínas recomí nantes se obtienen rendimientos muy altos. deben considerarse las caracterís ticas estructurales de la célula para la selección adecuada de la técnic de rompimiento. son de gran importancia en desarrollo de los procesos correspondientes. En la producción de proteínas de interés comercial los mecanism de secreción y la modificación post-traduccional que sufren algunas < estas proteínas en su ruta de secreción.168 CAPÍTULO 5.Las proteínas no se producen en forma activa. También se considera corr secreción cuando. 1989). Una vez roto el esqueleto de esta manera. Cuando se utiliza E.2.2 Sistemas Celulares de Secreción Se llama secreción al movimiento de un soluto a través de la men brana celular hacia el exterior de la célula. Las paredes celulares de las bacterias Gram-negativas que presentan dificultad al rompimiento por la lizosima. que en este tip. Cuando es necesario romper completamente la célula recombinant* para liberar el material intracelular. sin embargo este tipo célula presenta dos problemas característicos : .

La pureza y seguridad de los productos de ambos tipos de procesos es de gran importancia. Los métodos de rompimiento celular (Tabla 5.2) pueden ser divididos en métodos químicos y métodos mecánicos.El. Los productos de E. pero presentan riesgos potenciales de generación de respuestas inmunológicas. rompimiento de células por medio de choque osmótico se fundamenta en el conocimiento del fenómeno de osmosis. Cuando se presentan los problemas mencionados anteriormente. pero sólo algunas de ellas a escala industrial. Dentro dé los primeros se encuentra: el choque osmótico. reacciones equivalentes a las de modificación post-traduccional "in vivo". ha conducido al empleo de otro tipo de células recombinantes diferentes a la E.3 Métodos de Rompimiento Celular Una gran variedad de técnicas de rompimiento celular son usadas en el laboratorio. conjuntamente con la eliminación de la operación de ruptura que ésto implica. El hecho de que varias de las modificaciones post-traduccionales sean realizadas en las rutas de secreción de las células que tienen esta capacidad. . El primer proceso industrial que utiliza células recombinantes de mamífero (células de ovario de hámster). coli disminuyen el riesgo de transmisión de proteínas carcinogénicas.5. se emplea para la obtención del agente trombolítico llamado "Activador del Plasminógeno Tisular" (t-PA de sus siglas en inglés) (Datar et a/. 5. la digestión enzimática y el tratamiento alcalino.2. FUNDAMENTOS 169 protoplasma en forma insoluble formando precipitados llamados cuerpos de inclusión.2. 1993). la disolución lipídica. y complejas operaciones de recuperación y purificación. coli. particularmente en el caso de las proteínas de uso clínico. Dentro de los segundos se encuentran la agitación con abrasivos y la homogeneización. el proceso para la obtención de la proteína de interés debe incluir operaciones de rompimiento celular. Métodos Químicos Choque Osmótico..

. Digestión de la pared celular Solubilización de membranas por saponificación de b'pidos pequeño Las células son prensadas entre perlas de vidrio Las células se rompen por fuerzas de corte al pasar por un orificio pequeño Ejemplos Ruptura de glóbulos rojos Rompimiento de levaduras por tolueno M. Método Químico Técnica Choque osmótico Disolución lipídica Digestión enzimática Tratamiento alcalino Principio Ruptura osmótica de membrana Desestabilización de la pared celular por solventes org. lysodeikticus tratados con lisozima Mecánicos Molido en Molinos de Perlas Homogeneización Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Tratamiento de suspensiones celulares a gran escala Adaptada de Scopes. Copyrigllt ©1994.2: Métodos de rompimiento celular. Todos los derechos reservados.170 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. 1994 Reproducida con el pernüso de Spriiiger-Verlag.

FUNDAMENTOS 171 a) 1 = 0 C. < C2 [conc. La célula se expande debido a que contiene solutos que ocasionan un flujo osmótico del agua hacísu interior. = C.2. de tal manera que: . Cuando una membrana semipermeable separa dos soluciones de diferente concentración de soluto (Figura 5. La presión osmótica es la fuerza que debe aplicarse para contrarrestar la fuerza del flujo osmótico producido.1).1: Osmosis y presión osmótica. se produce un movimiento neto de agua a través de la membrana hacia el compartimento que contiene el soluto más concentrado. depende del número de partículas de soluto por unidad de volumen pero es independiente de la naturaleza molecular del soluto y de la forma de sus partículas. Esta expansión puede conducir a su lisis o rompimiento. La factibilidad del uso de este método depende de la resistencia mecánica de las células de interés. En el equilibrio el potencial químico de las soluciones acuosas es igual en ambos lados de la membrana celular. H2OJ b) t = t C.5. La presión osmótica es una de las propiedades coligativas de las soluciones. Se puede desarrollar una expresión para el cálculo de la presión osmótica necesaria para romper una célula a partir de la definición de equilibrio químico. Figura 5. El rompimiento celular por choque osmótico consiste en la carga de un volumen dado de células dentro de agua pura (con frecuencia se utiliza el doble del volumen de las células por volumen de agua).

. El tolueno es absorbido dentro de los lípidos de . [/ /mol]. Disolución Lipídica. Un gran número de solventes orgánicos han sido investigados en el laboratorio para ser utilizados con este fin. De esta manera se tiene: VH*O y finalmente: — P — —RTr íP e — i j — —/t-í Cj (^ ^} ^ü.) donde: /4o: P°tencial de referencia.x. Tomando el contenido celular como una solución diluida.oPe = ¿4o + VHí0Pi + RTln(l . La técnica de disolución lipídica es relativamente simple.La extracción por solventes ha sido usada para la disolución selectiva de ciertos componentes celulares.2) Esta relación es llamada ley de van't HofF y en ella c\ es la concentración del soluto 1.1) se expresa como: ¿4o + VH.172 CAPÍTULO 5. sin embargo su uso es limitado debido a que pueden inhibir severamente las actividades biológicas. El potencial químico interno involucra un valor de referencia. la corrección en la presión y una corrección para la concentración de la solución. y Xi es pequeña. x\ : es la fracción molar de soluto dentro de la célula. [/ — atm/mol]. VH^O' Volumen parcial molar del agua. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS /¿//2o (externo) = ^H2o(interno) (5-1) El potencial químico externo del agua pura debe incluir un valor de referencia y una corrección en la presión. la ecuación (5.Oy (5. de tal manera que para una solución ideal incompresible. el volumen parcial del agua VH^O es aproximadamente igual al volumen molar del agua V//2o. se añade a la suspensión celular un volumen de tolueno aproximadamente igual al 10% de la biomasa.

A pH's menores de 5 las células no se rompen aún cuando la pared celular haya sido destruida por digestión. 1969). Otros tipos de solventes además del tolueno también son efectivos para este propósito. FUNDAMENTOS 173 la pared celular. Esto se debe a la baja solubilidad del protoplasma a estos pH's y enfatiza la necesidad tanto de rompimiento de la pared celular como de condiciones favorables de solubilidad.. Para la aplicación de la técnica de disolución lipídica se requiere hacer con anticipación un buen número de experimentos de laboratorio. para una liberación eficiente de los materiales intracelulares (Edebo.1a célula. Digestión Enzimática.5. El tolueno también es carcinogénico pero es menos volátil. Esta enzima rompe el enlace (3 1-4 entre el ácido N-acetilmurámico y la N-acetil glucosamina de la capa de peptidoglucano de la pared celular. . Una de las enzimas más utilizada en la digestión enzimática de bacterias es la lisozima. lo que produce la expansión de la pared y la ruptura de ésta. El alto costo de las enzimas no permite que esta técnica sea usada ampliamente en el rompimiento celular a nivel industrial a pesar de ser altamente selectiva (Andrews ti a/. Esto casi nunca se conoce entonces es necesario realizar experimentos. para verificar los parámetros de solubilidad que reflejen las interacciones lípido-solvente. Idealmente se deben seleccionar solventes cuyos parámetros de solubilidad sean apropiados para los lípidos de la pared celular pero inadecuados para disolver al producto de interés localizado dentro de la célula. En la práctica los solventes con similares parámetros de solubilidad atacarán a las células en forma similar. provocando el rompimiento de la pared y consecuentementemente la ruptura de . El benceno es efectivo pero es carcinogénico y altamente volátil.2. 1990).La digestión enzimática consiste en el empleo de enzimas que atacan la pared y provocan el rompimiento celular. El contenido celular es liberado y entonces puede ser separado el producto de interés.

1987). extendiéndose hasta por abajo de las 3 fim. obtener un grado de desintegración celular mayor que 90%. En esta operación es importante controlar el tamaño de los desechos celulares debido a que la separación sólido-líquido posterior depende del tamaño de las partículas.4 Métodos de Permeabilización Los métodos de permeabilización (Figura 5. Debido a los problemas asociados con la purificación de productos obtenidos por rompimiento celular. El uso del homogeneizador se originó en la industria alimenticia. Las técnicas empleadas son: la molienda húmeda en molinos de perlas agitados a alta velocidad y la homogeneización a alta presión (Bjustrom. Kula y Schütte.174 CAPÍTULOS. La desintegración celular no es una tarea fácil si se considera la alta resistencia mecánica de las paredes celulares y el tamaño tan pequeño de los microorganismos (1-10 /¿m). particularmente en la homogeneización de leche y productos lácteos (obviamente la ruptura celular no es una homogeneización). El paso repetido de la suspensión celular a través de los equipos de rompimiento produce una distribución amplia del tamaño de los residuos de la pared celular. esto es. El uso del molino de perlas se originó en la industria de la pintura por la necesidad de obtener mezclas homogéneas de los pigmentos constituyentes de la pintura. con frecuencia se requieren dos o tres pasos tanto en el homogeneizador como en el molino. varios de los cuales son iguales a los empleados en el rompimiento celular . Para poder alcanzar rendimientos altos. Existen diversos métodos para realizar la permeabilización celular. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Métodos Mecánicos En el rompimiento dé células a gran escala se han preferido los métodos mecánicos. 5. existe un gran interés en el empleo de estos métodos alternativos a la ruptura mecánica empleada a nivel industrial.2) consisten en alterar la estructura de la pared y la membrana celular para facilitar la difusión del producto hacia el exterior de la célula. El equipo que se utiliza en estas técnicas originalmente fue diseñado para otros usos.2. 1985. Estos equipos han sido adaptados para utilizarse en la desintegración celular.

detergentes aniónicos y no iónicos como el dodecil sulfato de sodio (SDS) y Tritón X-100. usando solventes como tolueno al 5%. principalmente E. Como resultado de k anterior. pero se realizan a condiciones más leves. Copyright ©1990. La base de una solubilización efectiva radica en la estructura quími ca del detergente o agente solubilizante (Figura 5. Reproducida con el permiso de Marcel Deker Inc.2. Todos los derechos reservados. capaces de interacciona: tanto con el agua como con un lípido. coli. 1990. agentes caotrópicos come guanidina y urea. Estas estructura? tienen una porción hidrofílica (generalmente iónica) y una parte hi drofóbica (generalmente un radical orgánico). Varios de los trabajos sobre permeabilización han sido desarrollados en bacterias gram-negativas. mediante presión osmótica controlada es posible liberar proteínas localizadas en el espacio periplásmico de células Gram negativas.2: Comparación conceptual de permeabilización (lado derecho) y rompimiento mecánico (lado izquierdo) Fuente: Naglak et a/. esto permite que sean empleado: para solubilizar la pared de las bacterias Gram negativas. Por ejemplo. La naturaleza anfipática se mantiene si los detergentes son anió . FUNDAMENTOS 175 Figura 5.5.3). todos los detergentes son anfipáticos. y agentes quelantes como el EDTA (Naglak et al 1990).

ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Dodedl Sulfato de Sodio (SDS) (aniónico) CH3(CH2)nS03Na Sultanato de Sodio (aniónico) CH3(CH2)9- SCf. Copyright ©1988.3: Estructuras químicas de agentes solubilizadores.100 (no iónico. poli disperso) CH3(CH2). 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.5N*(CH3)3Br OH Taurocolato de Sodio (aniónico) OH NCH2CH2SO3 Na OH OH Figura 5.176 CAPÍTULO 5. Na Bromuro de Cetiltrimetil Amonio (CTAB) (catiónico) Tritón X . Fuente: Belter et a/. Todos los derechos reservados. .

5. puede ser evitada reemplazando el grupo carboxílico con un grupo sulfato.lactamasa ha sido recuperada con toda su actividad (de E. casi no hay disolución de lípidos. La parte hidrofílica no es un sulfato sino un alcohol.1 M de guanidina y 0. se libera cerca del 50% de la proteína intracelular (Naglak ti a/. las proteínas pueden desnaturalizarse aún cuando este proceso sea irreversible. donde los iones de calcio pueden reaccionar con ellos para formar precipitados insolubles). arriba de esta concentración la solubilidad de los lípidos varía linealmente con la concentración de detergente como se muestra en la Figura 5. este método de permeabilización celular puede ser muy apropiado para algunos productos recombinantes . algunas proteínas como las que se encuentran en cuerpos de inclusión. Las moléculas de este detergente tienen también una porción hidrofóbica y una hidrofílica. sus costos de operación y de inversión . Existe una concentración a la cual los lípidos repentinamente comienzan a solubilizarse. Los detergentes no iónicos comerciales como el Tritón X-100 están menos definidos químicamente. FUNDAMENTOS 177 nicos. La proteína recombinante /3 . Dentro de los materiales amónicos se encuentran los jabones los cuales son sales de los ácidos grasos.2 M de guanidina.2. por esta misma razón los sulfonatos no son fácilmente degradados microbiológicamente. Permeabilizando la célula de E. catiónicos o no iónicos. Debido a que la permeabilización química puede ser llevada a cabo en un simple recipiente agitado.4. A concentraciones de guanidina cercanas a 2 M. El sulfato puede estar ligado a un anillo bencénico formando un sulfonato semejante al que se muestra en la Figura 5. Debido a que los jabones presentan un grupo carboxilico sólo son detergentes efectivos a pH altos. 1990).5% de Tritón. donde este grupo permanece ionizado (los jabones no son efectivos en aguas duras. El aspecto importante de estos detergentes es su habilidad para solubilizar lípidos de la pared celular y de esta manera modificar la estructura de la célula. En soluciones muy diluidas de detergentes. en concentraciones de 0. coli) utilizando una solución 0. Este sulfonato es más efectivo que los sulfates alcalinos en la ruptura de células.3. Se ha encontrado que con la permeabilización con guanidina a concentraciones de 6 M. coli con guanidina y Tritón X-100. La desventaja de los jabones convencionales como permeabilizantes. Por esta razón. conservan toda o parte de su actividad biológica.

Copyright ©1988. • Homogeneizadores de Alta Presión.3. Todos los derechos reservados.5) constan fundamentalmente de un cilindro en posición horizontal (o vertical) llamado . 5. • Microfluidizadores.3 Equipo de Rompimiento Celular La operación de rompimiento celular a nivel industrial actualmente se realiza en tres tipos de equipos de rompimiento mecánico: • Molinos de Perlas de Alta Velocidad. 1988 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5.4: Efecto de la concentración de detergentes sobre la disolución de lípidos.178 CAPÍTULO 5. es que libera menos proteína por unidad de tiempo. 5. son más bajos que los de los métodos de rompimiento celular mecánicos. Fuente: Belter et a/.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad (Figura 5. La principal desventaja de la permeabilización con respecto a los métodos mecánicos y a la lisis enzimática.

Los volúmenes varían entre 50 mi y 250 litros para equipos de laboratorio. Las fuerzas de corte generadas. El material celular se introduce por uno de los extremos de la cámara de molienda . y con las propiedades de la superficie y del impulsor. Los perfiles de velocidad diferencial generan considerables fuerzas de corte dependiendo de la velocidad y el tamaño de las perlas de vidrio.5 y 1:3. Los discos o impulsores pueden montarse sobre la flecha ya sea en forma concéntrica o excéntrica. barras o anillos que provoca el movimiento del contenido del molino. lo que dificulta el escalamiento de datos.000 l/h. El tipo de flechas e impulsores que se utilicen depende de la aplicación concreta que se le dará al molino. La relación óptima se encuentra entre 1:2. y una gran cantidad de pequeñas perlas de vidrio que son los elementos activos de molienda. Mecanismo de Desintegración Celular El transporte de energía cinética desde el agitador a las perlas de vidrio se efectúa por fuerzas de adherencia en combinación con fuerzas de desplazamiento.5. Estos últimos permiten manejar flujos de hasta. son la causa de la desintegración de . El agitador produce el movimiento necesario de la masa celular y las perlas de vidrio. Ambas relacionadas con el diseño geométrico. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 179 cámara de molienda. conjuntamente con la frecuencia y la fuerza de las colisiones entre las perlas. Una variante del molino de perlas es el molino de cámara múltiple.6) que consiste de una flecha giratoria sobre la que se monta un sistema de discos. Los discos presentan perforaciones cubiertas con membranas que permiten el paso del material celular pero no así el de las perlas. El tipo de agitador está directamente relacionado con el transporte de energía óptimo de las partes en rotación a las perlas de vidrio.5. Los molinos de perlas agitados a alta velocidad que se encuentran disponibles en el mercado. El volumen de la cámara de molienda se activa a través de la aceleración de las perlas en dirección radial formando capas de corriente de diferente velocidad. un agitador (Figura 5.3. 2. planta piloto y producción a escala industrial. difieren en la relación de longitud a diámetro de la cámara de molienda. Desafortunadamente los modelos de laboratorio no son geométricamente similares a los usados a nivel industrial.

180 CAPÍTULO 5. 1990 Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Fuente: Schütte y Kula. b) corte transversal.5: Esquema del Molino de Perlas: a) vista lateral. Copyright ©1990. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Medio (b) Figura 5. Todos los derechos reservados. .

Fuente: Kula y Schütte. Copyright ©1987 . a) concéntrico b) Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. 1987 AIChE. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 181 Impulsor Concéntrico Impulsor Excéntrico Figura 5.3.6: Diferentes arreglos de impulsores. excéntrico.5. Todos los derechos reservados.

Parámetros Operacionales El molino de perlas está caracterizado por un gran número de parámetros (Kula y Schütte.3: Molino de perlas agitado. 1987). Parámetros Operacionales.182 CAPÍTULO 5. Todos los derechos reservados. El agitador es responsable de la transferencia de energía y de la activación de las perlas en la cámara de molienda. las células. Copyright ©1987 AIChE. Para impulsores montados excéntricamente. Velocidad del Agitador.3 y algunos de ellos son discutidos a continuación. se toma un promedio de velocidades periféricas U el cual es calculado cíe acuerdo a la ecuación: —_ Dmirn 60 x 1000 (5.4) . La velocidad periférica normalizada de los anillos se utiliza para comparar molinos diferentes. Los más importantes para la desintegración celular se muestran en la Tabla 5. Velocidad del agitador Velocidad de alimentación de la suspensión celular Diseño del agitador Tamaño de las perlas de vidrio Carga de las perlas de vidrio Concentración celular Temperatura Adaptada de: Kula y Schütte. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. debido a que proporciona mayor información técnica al agrupar varios parámetros relacionados con la velocidad de agitación.

En microorganismos pequeños como las bacterias. la velocidad periférica óptima para este tipo de molino se encuentra alrededor de 10 m/s (1900 rpm). la energía necesaria para manejar el agitador. El flujo permisible en un molino de perlas es función del volumen del molino. [rpm].d2/4 ¿J\/ ^ 1^ ** / donde: Dm: Diámetro promedio de los anillos excéntricos.7 muestra el efecto de la velocidad del agitador sobre la desintegración de Sacharomises cerevisiae en un molino de perlas agitado de 4 litros. d: Diámetro de los anillos del agitador. La erosión de las perlas también se incrementará y con esto. [mm]. Normalmente la velocidad periférica fluctúa entre 5 y 15 ra/s. e: Diámetro de la flecha del agitador. de la carga de perlas y de la velocidad del agitador. Se puede observar que a una velocidad periférica de 8 m/s (1500 rpm) se obtiene la velocidad óptima para la desintegración celular (velocidades mayores producen sólo más calentamiento). [mm].3. Paralelamente la temperatura se incrementará dependiendo de la carga de perlas la cámara de molienda. . En el caso de impulsores concénticos en la ecuación (5. Velocidad de Alimentación de la suspensión celular. La Figura 5. [mm]. y con ésta la frecuencia de colisión. lo cual puede ser atribuido a los cambios en la distribución del tiempo de residencia con la variación de la velocidad de agitación. no existe una relación lineal entre el grado de desintegración celular y la velocidad periférica. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR con: •*-^ Yft 183 n ~~~ —(2\/e2 4. n: Velocidad angular del agitador.5. Al incrementar la velocidad periférica la fuerza de corte generada se incrementa.4) se utiliza directamente el diámetro del impulsor. Para un flujo de alimentación constante.

184 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 20 ^ 20H í . Copyright ©1987 AIChE.7: Efecto de la velocidad del agitador sobre la liberación de enzima y proteína intracelular en S. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. cerevisiae. Molino de perlas: Netzsch LME4. .10 -o 5 ~ 1000 1500 2000 Velocidad del agitador (rpm ) 2500 Figura 5. Todos los derechos reservados. Fuente: Kula y Schütte.

1972).3. Para levaduras sin embargo. El patrón se sitúa entre los patrones de mezclado ideal conocidos: el tipo tapón (sin mezclado) y el tipo tanque continuo completamente agitado (100 % agitado).G) cuyo volumen es de 4 litros.R.5. Sin embargo. El rompimiento celular es función de la velocidad del agitador y del flujo de alimentación de la suspensión. etc) que permiten establecer la distribución de tiempos de residencia de los elementos del fluido en el molino (Levenspiel. Selb. El consumo de potencia del molino depende en primer lugar de la velocidad del agitador y sólo ligeramente del flujo de alimentación. lo que significa idénticas velocidades de transporte axiales a través de la cámara de molienda. El comportamiento de un molino de perlas depende en gran medida del patrón de flujo y mezclado que produce el agitador. El comportamiento de mezclado en un molino de perlas puede ser determinado mediante técnicas con trazadores (tintas. F. La Figura 5. los flujos de alimentación altos pueden ser más económicos. en los agitadores de . Considerando los tiempos de residencia y la demanda de energía. es aconsejable operar los molinos de perlas a altos flujos de alimentación y utilizar varios pasos para alcanzar el rendimiento requerido.8 muestra la poca influencia del flujo de alimentación sobre el grado de desintegración de Sacharomyces cerevisiae. Diseño del Agitador y Efectos del Mezclado. Por otra parte. sales. puede ser operado con flujos de alimentación mayores de 100 l/h. Un incremento de un orden de magnitud en la velocidad de alimentación. En teoría el grado de desintegración celular alcanzado por paso. es inversamente proporcional al flujo de alimentación. esto no se cumple. desde 10 a 100 l/h produce un decremento en el grado de desintegración del microorganismo de solamente 18%. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 185 El molino Netzsch LME4 (Netzsch-Feinmahltechnik GmbH. Por lo tanto. la liberación de enzima intracelular a partir de Brevibacterium ammoniagenes disminuye en forma más marcada con el incremento en la razón de alimentación (esto se debe principalmente a la diferencia de tamaño y a la mayor resistencia de la pared de las bacterias Gram positivas). Esta funcionalidad es lineal sólo si los microorganismos son transportados como flujo tapón (sin mezclado axial).

cerevisiae y B. Todos los derechos reservados. Fuente: Kula y Schütte.8: Efecto del flujo de la alimentación sobre la liberación de fumarasa en S. . ammoniagenes Figura 5. Copyright ©1987 AIChE. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. cerevisiae: (•) de B. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS too60 - 60- 40 - 20 - 20 40 60 80 100 Velocidad de Alimentación (l/h) Fumarasa: (o) de S. ammoniagenes.186 CAPÍTULO 5.

3. tendrá la misma probabilidad de dejar la cámara de molienda que un microorganismo que haya entrado en ella previamente.8- E 0. Copyright ©1987 AIChE.9: Efecto de la geometría del agitador sobre el tiempo de residencia.0 e =-T *R Figura 5.0- 0. Fuente: Kula y Schütte. En general se requieren cuatro o cinco tiempos de residencia ideales para cambiar completamente el contenido de la cámara de molienda.6- A\ **t- 0. Ocasionalmente. Todos los derechos reservados. La Figura 5. La distribución de la concentración de tinta en la corriente de salida puede ser correlacionada directamente con la distribución normalizada de tiempos de residencia. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 187 1.9 muestra la distribución dé tiempos de residencia en un molino Netzsche LME 20 en respuesta a un pulso de colorante. Puesto que la célula está presente en la cámara de molienda con una . los molinos comerciales se presentan efectos que provocan el mezclado de todas las partículas introducidas en la cámara. usando tres tipos diferentes agitadores con la misma cámara. un microorganismo a la entrada de la cámara que tiene un tiempo de residencia igual a cero.5.4- 0.20. a un flujo de alimentación de 180 l/h. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers.

5 mm. Por otro lado. se requieren diámetros mayores a 0. mientras que una carga alta genera mayor consumo de potencia y libera más calor.2 mm. Esto aumenta la frecuencia de las colisiones entre las perlas y por lo tanto la eficiencia de la ruptura. Las enzimas localizadas en el espacio periplásmico son más fácilmente liberadas utilizando perlas de vidrio mayores en relación a las utilizadas para liberar enzimas protoplasmáticas (Keshavarz et a/. Sin embargo a escala industrial el tamaño de las perlas debe ser mayor 0. En la desintegración celular se utilizan perlas de vidrio libres de plomo con un diámetro entre 0.9 se ha observado que un incremento en la velocidad de rotación produce una distribución más amplia de tiempos de residencia.5 mm se recomienda una carga del 85 % y de 80 % cuando las perlas son de 1 mm. Empíricamente se ha determinado que la carga óptima de un molino fluctúa entre el 80 y 90 %. Con los tres tipos de agitadores a que se refiere la Figura 5.5 mm. al disminuir el diámetro de las perlas aumenta su tendencia a flotar produciendo el efecto contrario. el tiempo de residencia promedio ¿.2 y 1.5 mm y para bacterias menores que 0. la eficiencia de los molinos y explica por que la velocidad de alimentación aparentemente no afecta considerablemente el grado de desintegración alcanzado en un solo paso. el número de perlas aumenta al disminuir el diámetro de éstas. Una carga baja de perlas produce una eficiencia baja. Existe un diámetro óptimo para las perlas. Con perlas de 0.188 CAPÍTULOS. Se ha observado también que un incremento en la velocidad de alimentación produce una distribución más estrecha de tiempos de residencia con los tres tipos de agitadores. En molinos de laboratorio pueden utilizarse perlas hasta de 0. La carga de . 1987). no es idéntico al tiempo de residencia ideal IR. Tamaño de las Perlas de Vidrio. La cantidad de perlas que debe ser cargada al molino depende del tipo de células y del tamaño de las perlas.4 mm para facilitar su separación continua. Carga de Perlas. Dada una relación de volumen del molino a volumen de perlas. Algunas observaciones experimentales indican que el tamaño óptimo de las perlas depende del tipo de célula: para levaduras. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS probabilidad y períodos de tiempo diferentes. Esto permite incrementar.

Estimar la fracción de volumen vacío de la cámara del molino cuando la carga es del 80%..5. Solución: De acuerdo con la ecuación (5.Va. — r raccion = Fracción = 0. Vc = Vt. (VJ)(0. [L3]. El lecho formado por las perlas de un molino tiene una porosidad de 0. 189 (5.2V.5) Vt: Volumen de la cámara de molienda.. Va'.375.375)+0.5).375) + 0. Ejemplo 5. [L3]. Volumen del agitador (discos o barras y flecha).5 Cuando la carga de perlas es del 80% el volumen de las perlas es igual al volumen libre total VM- . [L3]. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR perlas se define como: Carga = ^ donde: Vp: Volumen del lecho de perlas.1.8V C )(0.3.2VC r racción = — — 'C combinando las expresiones anteriores. (0. „-* la fracción vacía está dada por: _ .Carga de un molino de perlas.

La generación de calor disminuye con el decremento de la concentración celular mientras que el consumo de energía por unidad de peso se incrementa. se utiliza una bomba de alimentación para transportar la suspensión celular con una presión entre 0. En general el rompimiento celular se realiza a una temperatura de entre 5 y 15 °C. Es difícil llevar un control preciso de la temperatura puesto que una gran parte de la energía introducida por el agitador dentro de la mezcla es transformada en calor. donde la suspensión es comprimida hasta 60 MPa. Efecto de la Temperatura La temperatura de molienda facilita el rompimiento celular pero puede afectar al producto. Por ejemplo. en un molino Dyno KD5. 5. Se ha reportado un grado de desintegración idéntico para células de levadura en concentraciones de 4 a 20% de peso seco de células. se abre cuando la presión excede un valor . La concentración de células en la suspensión no afecta considerablemente la efectividad de la desintegración celular. en un molino Netzsch LME20 que consume una potencia de 7. mientras que las de los equipos industriales tienen de tres a cinco. La válvula acoplada a la bomba (Figura. El número de pistones de la bomba depende del tamaño del homogeneizador. El peso húmedo de células óptimo para la desintegración celular en un molino de perlas agitado se encuentra entre el 40 y 50% . El homogeneizador de más amplio uso es el Mantón-Gaulin. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Concentración de la Suspensión Celular. 1987). sin embargo existen otros tipos de homogeneizadores como el Microfluidizador.1 y 0.190 CAPÍTULO 5.5 MPa (millones de Ráscales) a la bomba de alta presión. Un homogeneizador de alta presión del tipo Manton-Gaulin consta de dos partes principales: una bomba de pistón de alta presión y una válvula. en los equipos de laboratorio las bombas constan de uno o dos pistones.10). Durante una operación normal. 5.2 Homogeneizador de Alta Presión Los homogeneizadores de alta presión son los equipos más ampliamente utilizados para el rompimiento celular á gran escala (Keshavarz ti a/.3.5 Kwh aproximadamente cerca de 6000 kcal/h tienen que ser removidas por el sistema de enfriamiento.

Unidad plana b). y después de cambiar dos veces de dirección choca contra un anillo de impacto.Unidad de cuchilla. La suspensión de células es liberada a través de la válvula con una velocidad muy alta. . determinado.11. parece razonable suponer que en el homogeneizador de Gaulin.3. á í suspensión celular * r. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. Fuente: Kula y Schütte. Copyright ©1987 AIChE. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 191 Válvula plana anillo de impacto suspensión celular producto homogenizado Válvula de cuchilla anillo de impacto \ / • / . cavitación y esfuerzos de corte líquido. Todos los derechos reservados.10: Configuración de las válvulas usadas en el homogeneizador: a). la fuerza del choque sobre el anillo es directamente proporcional a la presión de operación y es la causa principal del rompimiento.. Mecanismo de Desintegración Celular La desintegración celular se inicia cuando la suspensión celular pasa a alta presión por la válvula de descarga. donde las células se someten a turbulencia.5. En experimentos realizados cuyos resultados se muestran en la Figura 5. i \ í*< producto ) homogenizado Figura 5..

192 CAPÍTULO 5. Copyright ©1987 AIChE. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers. . Enzima glucosa -6-fosfato hidrogenasa. Todos los derechos reservados. Fuente: Kula y Schütte. ( o ) plana Figura 5.11: Rompimiento de Sacharomyses cerevisiae con homogeneizador a alta presión usando diferentes válvulas. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 50- 20 30 40 50 Presión (MPa) Válvula: ( + ) de cuchilla.

4: homogeneizador de alta presión. 1990). Como puede observarse el número de parámetros es menor que los correspondientes al molino de perlas lo que facilita la optimización de este tipo de procesos. Presión de operación Diseño de la válvula Concentración celular Temperatura 193 — — — Adaptada de: Kula y Schütte. Sin embargo. La homogeneización no es efectiva para la desintegración de algunas bacterias Gram-positivas que presentan una pared celular muy gruesa y aparentemente no pueden ser desintegradas en el homogeneizador de alta presión. por lo que no es recomendable como rompimiento selectivo. Para lograr un rompimiento eficiente de células la presión de operación del homogeneizador debe ser superior a 35 MPa (la industria alimenticia opera sus homogeneizadores a una presión de 35 MPa). En la Figura 5.3. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR Tabla 5.11 se muestra como varía con la presión . se ha realizado con éxito el rompimiento de levaduras y de bacterias Gram-negativas como la Alcaligenes eutrophus (Harrison et a/. 1987). Presión de Operación. Copyright ©1987 AIChE. Todos los derechos reservados.5. Parámetros Operacionales. al menos a presiones hasta de 55 MPa. No existe forma de diferenciar entre la liberación de proteínas del espacio periplásmico y las protoplasmáticas. Parámetros Operacionales En la Tabla 5.4 se listan los parámetros Operacionales que tienen influencia en el rompimiento celular en el homogeneizador de alta presión (Kula y Schütte. 1987 Reproducida con el permiso de el American Instituía of Chemical Engineers. El método de rompimiento por homogeneización no es selectivo.

la liberación de la enzima D-glucosa-6fosfato-deshidrogenasa de S. En general las presiones de operación más usadas son de 55 MPa.194 CAPÍTULO 5. Aún así. se requieren tres pasos a . cerevisiae. Durante una operación se empieza a observar liberación de proteína soluble a presiones mayores que 10 MPa.11 se muestra el comportamiento de los dos tipos de válvulas en el rompimiento celular como una función de la presión de operación. Diseño de la Válvula.10 se muestran las configuraciones de las válvulas que se usan con más frecuencia en los homogeneizadores: la unidad plana y la unidad de cuchilla. Sin embargo. Concentración de la Suspensión Celular y Temperatura.12 se presenta el comportamiento de la liberación de una enzima en función del tiempo de recirculación a tres diferentes presiones y para dos tipos de válvula. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de operación en un solo paso. La presión de operación del homogeneizador depende del producto que se desee liberar. En la Figura 5. sin embargo para liberar ADN se requieren presiones por arriba de 25 MPa. La desintegración celular es independiente de la concentración de células de levaduras en concentraciones entre 100 y 600 gramos de peso seco por litro. se puede observar que por arriba de una presión de 20 MPa la válvula de cuchilla libera mayor cantidad de enzima que la válvula plana. y para una presión dada el incremento es mayor si se utiliza una válvula de cuchilla. Se han observado diferencias de alrededor de 40% en este parámetro en el rango de 5 a 30°C. Durante la homogeneización la temperatura de la suspensión celular es un parámetro que no se mantiene constante y por lo tanto es difícil correlacionarlo. que a 30 MPa. Se puede observar que a 55 MPa hay tres veces mas enzima en la fracción libre de células. La constante específica de la velocidad de homogeneización varía directamente con la temperatura hasta un valor de 30°C. la enzima liberada en un solo paso representa solamente cerca del 45% de la cantidad total presente en la suspensión. En la Figura 5. En la Figura 5. por abajo de esta presión la cantidad de enzima liberada es aproximadamente igual para ambos tipos de válvulas. se puede observar que la cantidad de enzima liberada aumenta con la presión.

8- / J / / <" S .r 5.2. ( ) ISMPa Figura 5. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 195 1.12: Efecto del tipo de válvula sobre la liberación de enzima Fuente: Kula y Schütte.f / s ^ 0.6- / ."' -o 50 s ss X) A .4nn 0. 10 o 20 o 30 o 40 : -«« 60 Tiempo de Recirculación ( min ) Válvula: ( o ) de cuchilla: ( * ) plana Presión: ( ) 55 MPa: ( ) 30 MPa.3. Todos los derechos reservados./"' K?*r~"£~*. Copyright ©19Í AIChE.' // // /•*' s j? I // ''•'' ''•' 0. .0- O / // I 1 0. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engineers.

Permite un mayor enfriamiento del sistema: Adicionalmente a los serpentines de enfriamiento que también presenta el Manton-Gaulin. 1989) son las siguientes: Es muy compacto. Mediante este mecanismo la energía de entrada se disipa casi instantáneamente produciéndose la ruptura celular. la cámara de rompimiento puede colocarse en un baño de hielo.13. Su mecanismo de rompimiento utiliza una bomba de alta presión manejada con aire y una cámara especial de rompimiento conectada a un dispositivo de contrapresión. Permite flujos más bajos (2 — 23 l/h con presiones de operación de 10 — 95 MPa] y maneja volúmenes menores (30 m/). lo que lo hace compatible con operaciones de flujo continuo. como se muestra en la Figura 5.196 CAPÍTULO 5. Los límites de operación del microfluidizador están dados por: la presión de aire requerida para manejar la bomba. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS una presión máxima de 55 MPa y a 30°C para alcanzar una desintegración celular mayor del 90%. Seguidamente las corrientes son impactadas a alta velocidad y mezcladas en una pared estacionaria de la cámara de rompimiento (Figura 5.3 Microfluidizador El microfluidizador es un homogeneizador de alta_4^esión_que tiene un mecanismo de rompimiento celular diferente al del homogeneizador Manton-Gaulin. .14). 5. Alguna ventajas que presenta el microfluidizador en comparación con el homogeneizador Manton-Gaulin (Sauer et a/.3. Puede alcanzarse un rompimiento celular más eficiente (en el caso de bacterias). las propiedades fisicoquímicas del líquido bombeado y la presión máxima de trabajo permitida que es de 140 MPa. La suspensión celular se divide en dos corrientes haciéndola pasar a presión a través de dos microcanales de sección transversal de 2 x 100 //ra. se puede montar sobre una charola de acero inoxidable de 30 x 35 cm.

13: Diagrama del Microfluidizador. CC: cámara de contrapresión. . SE: serpentín de enfriamiento.5. BA: bomba accionada por aire. Fuente: Sauer et a/. RP: regulador de presión. CR: cámara de rompimiento. Todos los derechos reservados. MP: medidor de presión. Copyright ©1989.3. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. V: válvula. C: contenedor. EQUIPO DE ROMPIMIENTO CELULAR 197 Figura 5.

198 CAPÍTULO 5. Generalmente cuando se trabaja con presiones altas es necesario enfriar el sistema. . Si el homogeneizador no tiene un sistema de enfriamiento eficiente de la cámara de rompimiento. Ambos efectos contribuyen a. incrementar la eficiencia de la operación. que es la parte de mayor temperatura.14: Representación esquemática de la cámara de rompimiento del microfluidizador. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Figura 5.025 a 0. Es relativamente fácil de operar. 1989 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Todos los derechos reservados. El microfluidizador permite mantener incrementos de temperatura menores a 20°(7 en la cámara de rompimiento. puede presentarse un incremento hasta de 80°C en la temperatura de la suspensión celular. del tamaño de los restos celulares y de la concentración celular en el proceso de ruptura utilizando un microfluidizador. Copyright ©1989. Por otro lado. dado que el tiempo de residencia de las células en la cámara de rompimiento es de 0.04 segundos. el tiempo durante el cual las células están expuestas a temperaturas elevadas es muy corto. Temperatura de Operación. Parámetros Operacionales A continuación se describe el efecto de la temperatura. lo cual puede ocasionar la desnaturalización de la proteína de interés. Fuente: Sauer et a/.

Ambos efectos facilitan la separación de los restos celulares durante la centrifugación.5. coli (Agerkvist y Enfors 1990). Concentración Celular. Tamaño de los restos celulares. dado que es posible pasar el caldo del fermentador directamente al microfluidizador para efectuar la ruptura celular.6 gramos de peso seco por litro tiene implicaciones en el diseño óptimo del proceso de bioseparación. El costo del proceso en forma integral puede ser menor aún cuando las etapas de concentración y purificación posteriores a la ruptura también se vean modificadas.4 Diseño de Equipo de Rompimiento En esta sección se presentan los principios de diseño de los dos tipos de equipos más empleados en el rompimiento celular a nivel industrial: . El hecho de que en el microfluidizador puedan manejarse concentraciones hasta de 5. El microfluidizador produce restos celulares de mayor tamaño que los producidos en el homogeneizador Manton-Gaulin. 1990). DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 199 En estudios sobre el rompimiento de células de E.6 a 174 gramos de peso seco por litro. de cerca de 27° C después del segundo y aproximadamente de 28°C después de tres pasos. coli (Sauer et a/. La suspensión celular se alimentó a una presión de 60 MPa y a un flujo de 18 l/h. se enfrió la cámara de rompimiento por inmersión en un baño de agua helada para proporcionar enfriamiento adicional al proporcionado por el serpentín del equipo.4. De esta manera puede eliminarse la operación de cosecha de células. La temperatura de la suspensión a la entrada varió entre 8 y 10°C. se encontró que el microfluidizador puede romper células que se encuentran en soluciones cuyas concentraciones varían de 5. En investigaciones realizadas con E. Después del primer paso la temperatura a la salida fue aproximadamente de 23°C. 5. 1989). o disminuir el grado de concentración necesario previo a la ruptura. Este efecto disminuye al aumentar el número de pasos (Agerkvist y Enfors. generándose suspensiones de menor viscosidad.

ROMPIMIENTO DE CÉLULAS • Molino de Perlas de Alta Velocidad. • homogeneizador de Alta Presión. En una operación intermitente. Durante la operación se cierra la salida de suspensión y se agita a la velocidad establecida.Indirectamente: Mediante la medición de un componente liberado durante el rompimiento. . El grado de rompimiento logrado puede ser determinado de dos formas: . En el caso de productos de tipo proteico la determinación de proteína total y/o la actividad enzimática son mediciones comúnmente utilizadas.Directamente: Contando el número de células intactas por unidad de volumen.200 CAPÍTULO 5.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad Los molinos de perlas de alta velocidad pueden ser operados en dos formas: .Operación Intermitente. El balance de masa de proteína liberada puede ser expresado mediante la ecuación siguiente: dfí (5. . inicialmente se carga el molino con las perlas y la suspensión celular. 5. Operación Intermitente Los molinos de perlas pueden ser operados en forma intermitente cuando el volumen de la suspensión celular a tratar es bajo.6) .4. o cuando se desea efectuar experimentos para generar datos de diseño.Operación Continua. El rompimiento celular intermitente en molinos de perlas agitados a altas velocidades sigue una cinética de primer orden.

4. donde: VM. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 201 La ecuación anterior establece que la velocidad de liberación de la masa de proteína (células rotas) es proporcional a la masa de proteína presente no liberada. del tipo y velocidad del agitador. [L3] Rm: Concentración máxima de proteína obtenible. En el caso de la molienda intermitente el tiempo de operación t es igual al tiempo de residencia de las células en el molino. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden que depende del tipo de célula.8) /tm ít De acuerdo a la ecuación anterior las gráficas de IníRmHRn-R)] vs t producirán rectas de pendiente k y ordenada al origen cero. El resultado muestra claramente que la desintegración celular sigue una cinética de primer orden independiente . [M/L3] t: Tiempo de operación.15 se muestra la liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae utilizando un molino Netzsch LME20 con diferentes tipos de agitadores.Volumen libre del molino. de la carga y tamaño de las perlas. [t'1} La ecuación anterior puede ser integrada arreglándola de la siguiente forma: f O JO I dt m — 0 (5 7) ' Para obtener la ecuación de la operación intermitente: (5. de la concentración celular y de la temperatura. [M/L3] R: Concentración de proteína liberada en el tiempo t.5. En la Figura 5.

4 -\ I KW E 0.6- _ D? 0. Figura 5. Fuente: Kula y Schütte. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.0 S 10 20 30 Impulsores: ( A ) de postes: ( o ) de discos. Todos los derechos reservados. 1987 Reproducida con el permiso de el American Institute of Chemical Engiiieers.20.1 0.70.15: Liberación de proteína a partir de Sacharomyses cerevisiae en experimentos con recirculación para diferentes tipos de agitadores.202 CAPÍTULO 5. ( a ) excéntrico. .30. Copyright ©1987 AIChE.50.

525 3.2421 0. la ecuación (5.150 1.3870 . b). cerevisiae. Solución: Las constantes cinéticas pueden ser obtenidas mediante el empleo de las ecuaciones (5. Rx 102 (Kg/Kg) 0.700 a).Calcular la constante cinética para la liberación de enzima.Cinética de rompimiento intermitente.5.8) puede ser expresada como: In — A = kt (5.2910 0..9). se utilizó un molino de perlas de alta velocidad de 4 litros obteniéndose los siguientes datos: tiempo (s) 00 15 30 45 60 Max.025 2.4193 0. En el rompimiento intermitente para la obtención de una enzima de S.9) Ejemplo 5.0000 0.0979 0..4.0000 0.000 Áx 102 (mol/min-Kg) 0.000 1.1883 0.675 2.000 0.425 10. En el caso que el grado de rompimiento sea seguido mediante la actividad enzimática /I.Calcular la constante cinética para la liberación de proteína.150 2. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 203 del tipo de agitador.625 1.150 6.2877 0.8) y (5.1081 0.2. Observándose también diferentes valores de k para cada tipo de agitador.. Los cálculos necesarios son los siguientes: tiempo (s) 00 15 30 45 60 1n ln rtm Rm-R in A A m—A 4 0.

k = 6. para la liberación de enzima la constante es: ib = 6. en una operación continua el tiempo de residencia varía para las diferentes células de la suspensión. [L3]. El tiempo de residencia medio t de la distribución de tiempos de residencia es diferente al tiempo de residencia ideal ÍR dado por: donde: ÍR: Tiempo de residencia ideal.Volumen libre del molino. VM'. En el diseño de los molinos de perlas es necesario considerar el grado de dispersión de los tiempos de residencia de las células en el molino.Mediante un ajuste de los datos por mínimos cuadrados se puede obtener para la liberación de proteína la constante.984 x 1(T3 s~l b).. ha sido simulado utilizando el modelo de "Reactores continuos en serie tipo tanque perfectamente agitados". [t]. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a). Mediante el uso de este modelo los experimentos con pulsos de tinta permiten determinar el número .204 CAPÍTULO 5. [L3/t]. Grado de Mezclado en un Molino de Perlas. F: Flujo alimentado al molino.. El grado de desviación del flujo tapón ideal en los molinos de perlas comerciales.De igual manera.412 x 1(T3 s~l Operación Continua Durante la operación continua del molino de perlas la suspensión celular a tratar es alimentada continuamente al molino en uno de sus extremos y retirada continuamente en el extremo opuesto. generándose una distribución de tiempos de residencia de la población celular. A diferencia de la operación intermitente.

[M/ L3].4.10) puede expresarse como: \r1f~i C* \ -TT-. Cn: Concentración de tinta en la etapa n. Al aplicar un pulso de tinta en la primera etapa de una serie de tanques perfectamente agitados. Utilizando un tiempo adimensional definido por: (5.YV(C n _i . (5. el balance de la masa de tinta para cualquier etapa n está dado por la expresión: -0. .12.G n ) n av (tí 1 1 (5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 205 de tanques perfectamente agitados en serie a que equivale el grado de mezclado que se presenta en el molino (Shütte y Kula.13.5.0) la ecuación (5.11J\ con las condiciones: e<o 0=0 d =o d = A^Co <9 > O C0 = Q Para la etapa número 1 la ecuación de balance se reduce a: ¿e y la forma integrada es: I ' ^r = -N ¡ dO JNC0 (5.) donde: N: Número de etapas de la serie. 1990).

El número de etapas de un molino de perlas obtenido mediante experimentos de pulsos. Siguiendo este procedimiento es posible demostrar que para la etapa TV se tiene que: CN _N»ffN C0 ~ ( En los estudios de mezclado al cociente CN/CQ se le denota como E y es una medida de la distribución de tiempos de residencia del fluido dentro del recipiente (Levenspiel. etapa y efectuando la integración correspondiente.16) ] ] j donde 9max es el tiempo adimensional al cual E es máxima.206 CAPÍTULO 5. es posible obtener una expresión para la concentración en la segunda etapa. puede ser empleado para calcular la eficiencia de rompimiento esperada. 1972). De tal manera que el número de etapas a que equivale el grado de mezclado de un molino.14) Co Sustituyendo la expresión anterior en la ecuación de balance para la segunda. El balance de proteína liberada en la primera etapa de la serie está dado por: .15) respecto a 6 e igualando el resultado a cero para obtener: N = —I— (5. La aplicación práctica del desarrollo anterior puede visualizarse derivando la ecuación (5.= Nexp(-N0) (5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS de tal manera que: Q. puede ser determinado a partir de los datos experimentales de concentración contra tiempo que resultan al aplicar un pulso de trazador. y que el rompimiento sigue una cinética de primer orden./V etapas tipo tanque perfectamente mezclados en serie. Eficiencia de los Molinos de Perlas. Para relacionar el número de etapas con la eficiencia de rompimiento es necesario realizar un balance de proteína liberada (células rotas) considerando que el molino consta de .

-mjt . ¿fí.4.5. jn .* . y--~7fi •»•"!/ lm-R\) (5. _. [M/L3]. IcV*. [t] k: Constante de velocidad específica de primer orden.20) " NF La ecuación anterior también puede ser expresada como: Continuando con este procedimiento puede ser demostrado que para la etapa TV se tiene: . [¿-1] La ecuación anterior puede ser expresada en función de un tiempo adimensional dado por: y obtener. t: Tiempo de operación. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 207 donde: RI: Concentración de proteína liberada en la etapa 1.19) La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: O= O RI = O ú 0=_ E> Rl D = Rl y obtener: / kV\f i \ (5.

71 2.5 32.119 0..89 3.0 47.1 0.4 3.Calcular el tiempo de residencia ideal.550 0.48 respecto al volumen de la cámara.27 1.Determinación del número de etapas equivalentes de un molino de perlas.0 107.07 (5) E 0.0 352.18 0. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Rr = 1 + NF ) — RN kV¡ (5.074 0.5 2132. .278 0.45 1.7 85. Un molino de perlas tipo piloto con cámara de 4 litros de volumen.005 a).9 1.8 21.908 0.99 2.3 101.5 27.3 65.81 1.5 2542.72 0.36 0.097 0.09 1.3 1.54 0.2 93.0 545..3.5 1305.1 8.5 (4) e 0.046 0.787 0.8 5.0 2682. Los datos de concentración a la salida del molino aparecen en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente : t(s) 25 50 75 100 125 150 175 200 225 250 275 300 325 350 375 400 425 (1) (2) C(U) 11.0 220.332.185 0.442 0.22) Ejemplo 5.90 1.009 0.5 15.0 1187.0 2325.17 2.6 Suma = (3) CAí 287.0 135.35 2. se introduce un pulso de tinta al molino cuando éste opera en forma estacionaria con un flujo de 50 l/h.861 0.0 82.016 0.028 0.53 2.208 CAPÍTULO 5. se carga de perlas de tal manera que la fracción de volumen libre es de 0.5 47.5 52.8 14.0 16.5 820.722 0.5 1625.63 1. Para determinar el número de etapas del molino de acuerdo al modelo de tanques en serie.402 0.

16 muestra la gráfica de estos datos.De la Figura 5.24 s b).5 ° ~ T38^4~ CQ = 118.5.El tiempo de residencia ideal está dado por: 209 ÍR = -y/ x 0. d). I O Utilizando la ecuación (5..16 se puede determinar que cuando E presentí un máximo...En las columnas (4) y (5) de la Tabla anterior aparecen los cálculos del tiempo adimensional 9 y la concentración adimensional E La Figura 5. Vma.El valor de CQ puede ser estimado mediante la expresión: Co= M De acuerdo a los cálculos de la columna (3) de la Tabla anterior.48 x 3600 f 4 VM ** = 50¡ ÍR = 138.4.Estimar el valor de CQ. Solución: a)..Obtener la gráfica de E vs 0.93 x 10~2 s~l f).x = U. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO b)..16) se obtiene: .Estimar el número de etapas N.15 Unidades C c)..Calcular la eficiencia por etapa si k = 1. e). _ 16332.. c)...Calcular la eficiencia global de las N etapas. d).

5 3.0 e =t/t n Figura 5.0 2.5 4.16: Distribución de tiempos de residencia del ejemplo 5.0 1.0 0.0 3.5 2.0 0.3.5 1. .210 CAPÍTULO 5. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 0.

93 x 1Q-2 _ s-l)(m.87 La eficiencia global de rompimiento en el molino es del 87% .22). N = -—íN = 4 e).°-667 de tal manera que: Eficiencia Eficiencia = 0.667 i -t- = 0.667)" = 7.24s) _ .. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO 211 N = i-o..4.5.La eficiencia de rompimiento en cada etapa de acuerdo con la ecuación (5.La eficiencia global puede ser obtenida a partir de la ecuación (5. ^ Rm — R = (1+0.716 de tal manera que: RN -0.4 f).20) es: Eficiencia = * ~^ V NF ) el valor del grupo entre paréntesis de la expresión anterior es: WM _ __ _ (1.

[M/L3].212 CAPÍTULO 5. [M/L3].23) obteniéndose la ecuación: \»~~ = k'N nm — n (5. Rm\ Concentración máxima de proteína que puede ser liberada. [1/pasos] La ecuación anterior puede ser integrada con las condiciones: N =0 N =N R =0 R= R (5. N: Número de pasos a través de la válvula del homogeneizador.24) Se ha determinado experimentalmente que la constante k tiene una dependencia con la presión dada por: k' = k"Pa donde: P: Presión de operación. de tal manera que: ~ = k'(Rm .2 homogeneizador de Alta Presión La desintegración celular en un homogeneizador de alta presión a una presión fija dada puede ser descrita mediante una cinética de primer orden respecto al número de pasos. (5.4.R) donde: R: Concentración de protema liberada (células rotas) después de N pasos. [M/t2L}. k : Constante cinética de primer orden.25) . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5.

coli.26). Un valor típico para levaduras es a = 2.24) y (5. 1989).. coli en un microfluidizador. de la temperatura. coli a = 2. Por otra parte. Rm — R donde 6 es un exponente que varía con el tipo de célula y tomí valores entre 0.6 g/l en peso seco.5. DISEÑO DE EQUIPO DE ROMPIMIENTO fe": Constante dimensional de rompimiento.Rompimiento de E.2. Microfluidizador En el caso del microfluidizador la cinética de rompimiento presenta una cierta dependencia no lineal con el número de pasos expresada mediante la ecuación: ln m =k"NbPa (5. [M~at2aL2a /pasos]. Sin embargo.00 (Sauer et al. En la recuperación de /3 galactosidasa de E. es independiente de la concentración celular. Combinando las ecuaciones (5. la fracción de enzima liberada respecto a la enzima total presente depende de la localización de la enzima particular dentro de la estructura celular (Sauer et a/. se ha reportado que la actividad de enzima liberada en relación a la proteína total liberada. 1989).9 y para E.4.28 y 1. y de la concentración inicial de células en el caso de levaduras. La presión de operación utilizada fue de 60 MPa La cantidad de proteína liberada después de cada paso se presentí en las columnas (1) y (2) de la Tabla siguiente: .27. es independiente de la presión de operación. 213 a: Parámetro constante en rangos limitados de presión.26) El proceso de rompimiento celular descrito por la ecuación (5. I Ejemplo 5.4. se hace pasar poi un microfluidizador tipo M-110 una suspensión celular que contien* 47.25) se obtiene: ln Rm D D Rm — R = k"NPa (5.

R)] 63. b).0 96.994 1. Solución: De acuerdo a la ecuación (5.214 CAPÍTULO 5..560 2.0 88.27) el grado de rompimiento para este caso puede ser expresado como: In Rr Rm — R de tal manera que de la pendiente de la gráfica de ln[Rm/(Rm — R)] contra TV es posible estimar k".El número de pasos requeridos para una liberación del 93 % de proteína es: .9 0. k" = 8..688 y para P=60 MPa.908 a). Mediante un ajuste por mínimos cuadrados de estos datos se obtiene: k P¿'¿ = 0.219 6.0 79.4 x 10~5 MPa~2'2 b).0 99. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS (1) Paso 1 2 3 5 10 (2) ' (3) % Proteína Liberada ln[Rm/(Rm .120 3.Estimar el valor de la constante cinética de rompimiento considerando que para este caso a = 2. Los cálculos necesarios se muestran en la columna (3) de la Tabla anterior.-Estimar el número de pasos para liberar el 93 % de proteína en este proceso.2 y 6 = 1.

88 pasos Se necesitan 4 pasos de molienda. SUMARIO 215 yy _ 1. Comparación de los Métodos Mecánicos de Ruptura Celular La Tabla 5. coli utilizando un molino de perlas tipo Dyno Mili. 5. el tamaño medio de los restos celulares que se producen en un paso es mayor que el encontrado en las mismas condiciones en el homogeneizador Manton-Gaulin. La Tabla 5.000084 x 602-2 N = 3.5.5 muestra datos de producción de algunas enzimas utilizando el molino de perlas y el homogeneizador Manton-Gaulin. La ruptura celular utilizando el molino de perlas permite la obtención de un mayor porcentaje de enzima activa en un número menor de pasos en comparación con el homogeneizador.00-0. un homogeneizador tipo Manton-Gaulin y un Microfluidizador. Existen varios métodos para efectuar esta operación.6 muestra los datos para la liberación de la enzima {3 galactosidasa de células de E.5 Sumario I El rompimiento celular es una operación necesaria cuando el producto de interés se localiza al interior de la célula. El diseño de los molinos está basado en ecuaciones empíricas y en en experimentos piloto. Estos datos muestran que el Microfluidizador permite manejar mayores concentraciones de biomasa y produce un rendimiento mayor de enzima activa. la producción de proteína en el molino es en general menor que la obtenida en el homogeinizador. A nivel industrial sólo se emplean los molinos de perlas agitados y los homogeneizadores de alta presión. Además.93 / 0.5. . Sin embargo.

Pasos Prod. solub. solub. .5: Comparación de métodos de rompimiento celular.fosfato deshidrogenasa D-glucosa 6-fosfato deshidrogenasa Formato Deshidrogenasa Leucina deshidrogenasa Fumarasa Penicilina acilasa D-Lactato deshidrogenasa Molino de Perlas** Act.* No.* No. 1987 Reproducida con el permiso de el American Iiistitute of Chemical Engineers. Todos los derechos reservados. Pasos Prod. Microorganismo Levaduras Saccharomyces carlsbergensis Saccharomyces cerevisiae Candida boidinii Bacterias B. kg/h 86% 1 60 homogenei zador * * * Act. cercus Brevibacterium ammoniagenes E. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Tabla 5. kg/h 91% 95% 88% 4 60 98% 95% 1 1 70 40 4 3 60 65 84% 85% 95% 92% 2 3 3 2 16 12 7 20 82% 10% 89% 84% 3 4 3 3 67 67 65 * Actividad solubilizada ** Netzsch LME 20 *** Gaulin M3 Adaptada de: Kula y Schütte. coli Laclo bacillus confuius Enzima liberada D-glucosa 6.216 CAPÍTULO 5. Copyright ©1987 AIChE.

800 468 445 51 35 28 10 6 26 15 10 7 6 *Dyno Mili KDL a diferentes tiempos promedios de residencia ** homogeneizador Adaptada de: Agerkvist y Enfors. 806 465.2 47. 457 191 113 8 8 30 6 6 101. 1990 Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.4 48.9 73.6 47.4 48.5 62 72 79 62 74 79 612 553 529 461. Copyright ©1990.6 47. 4 min.G alactosidasa tamaño a Pico(s) biomasa Proteína 10 s~l Actividad media 100 s~l (mPa s) (mPa s) (nm) (nm) (9/1) (%) (%) Molino de Perlas* 2 min.5 49. 800 486. 777 63 38 19 28 19 14 48. Peso seco liberación de Distribución de Viscosidad de /3. MantonGaulin** 1 paso 2 pasos 3 pasos Microflui dizador** 1 paso 1 paso 1 paso 2 pasos 3 pasos 5 pasos 10 pasos 49.5.6 62 65 63 79 88 96 100 62 61 61 76 87 97 100 693 693 673 480 451 493.5.5 49.6 47. 3 min.4 66 76 82 58 75 78 501 414 217 457 180. . SUMARIO 217 Método Ruptura de células de E. 833 489.6 47. 787 471. Todos los derechos reservados. coli con diferentes métodos.

R)] Agitador 2 Tiempo log[# m /(#m .90 22. Bajo estas condiciones se obtuvieron los siguientes datos: Proteína liberada rpm 1200 1500 1750 2000 2250 (mg/ml) 15.1.R)] de residencia (min) 0.425 20 0.94 23.225 0.060 3 0.. a).35 22. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS 5.225 10 0.00 a.150 5 0.En estudios de liberación de proteína intracelular en función de la velocidad del agitador empleando un molino de perlas tipo Netzsch LME 4.85 mm .090 0.525 25 0. 1500 rpm b.218 CAPÍTULO 5. Estimar la velocidad óptima para el agitador.2 .325 15 0.160 0.365 0.300 0. 5..650 30 0. con perlas de diámetro entre 0.La desintegración celular intermitente con dos tipos de agitadores utilizados en un molino de perlas producen los siguientes datos: Agitador 1 Tiempo de residencia (min) 3 5 10 15 20 25 30 log[fl m /(# m . Discutir sobre el consumo de potencia del agitador para velocidades superiores a la óptima.Resp. se utilizó una suspensión celular de concentración de 50% (peso/volumen)..037 0.437 .6 Problemas 5.88 22. un flujo de alimentación de 50 l/h y una carga de perlas del 85 %.55 y 0.

Resp.Estimar la constante cinética k para cada tipo de agitador. 5 pasos.Una suspensión celular que contiene la bacteria gram negativa Alcaligenes eutrophus. Calcular cuanto representa este valor del correspondiente al 100 % de conversión trabajocalor.6.Si la presión de operación se duplica en cuantos pasos se obtendrá el mismo rendimiento.2 MPa la constante k" del homogeneizador toma un valor 5. Resp.5. Calcule el tiempo para el cual se obtiene el 80% de rompimiento con cada tipo de agitador. b).15) y (5. a)...16) mediante el desarrollo descrito en el texto. 91 % 5.. 5.En un rompimiento celular utilizando un homogeneizador es posible lograr 80 % de rompimiento bajo las dos diferentes condiciones siguientes: Condición 1 2 Presión (MPa) 90 50 Pasos 1 3 .33 min 5.. 5.hidroxibutirato (PHB) un termoplástico potencial (Harrinson et al .Resp.Obtener las ecuaciones (5.015 min~l b)... ki = 0. se hace pasar por un homogeneizador APV Gaulin 15M 8BA con el propósito de estudiar la recuperación de poli(3.3. Cuando se opera a una presión constante de 15. t\ = 53.5.05 x 10~4 MPa~2-2. a).Estimar el número de pasos necesarios para lograr el 63 % de rompimiento..895 MPa de presión de operación.Resp.6. b.4..1990) . a). PROBLEMAS 219 a)..50(7 por cada 6.Ha sido reportado (Bjustrom. 1985) que el calor liberado por compresión adiabática durante un proceso de homogeneización puede elevar la temperatura de la corriente que entra al homogeneizador 1..

Obtener la ecuación (5.Como se explica que C pueda ser mayor que CQ. 5.Resp.. 3.Comparar la energía por unidad de masa de alimentación necesaria para cada condición. jfc" = 3. 5. respectivamente.220 CAPÍTULO 5. . 67 % de diferencia. b)..Resp. para valores de TV de 1. 2. c)... a). 10 y 20.Estimar los parámetros cinéticos del homogeneizador.8.Graficar la distribución teórica de E vs 9 de un molino de perlas al que se le ha aplicado un pulso de tinta.. ROMPIMIENTO DE CÉLULAS a).7..22) mediante el procedimiento descrito en el texto . b)..Indique la forma que adopta la distribución conforme TV crece. a)..56 x 10~4 MPa~1-87 b)..Que condición se recomienda para realizar la ruptura. 5.

En: Separations for Biotechnology.).7. New York. Datar. 1993. (Ed. 1992. D. R.V. P. Biotechnology: Fermentation and downstream processing. Cussler.). Biotechnology and Bioengineering. A. Eng. L. Cartwright. Chem. Sons. Perlman. Bjustrom. Asenjo. (Ed.. BIBLIOGRAFÍA 221 5. A. y Chase. Andrews. L. I. 11-20. 1969. Desintegration of cell. 1985. S. . Cell disruption and removal of insolubles. Elsevier Applied Science. England. Pyle. S.. Dennis. Elsevier Applied Science. 77-88. En: Separations for Biotechnology. y Rosen. D. 1539-1541. 11. C. Differential product reléase from yeast cells by selective enzymatic lysis.). Academic Press. y Hu. 349-357. T. B. 38-47. En: Fermentation Advances. J. 1083-1089. Characterization of E. . D.L. 1990. John Wiley &. Process economics of animal cell and bacterial fermentations: A case study analysis of tissue plasminogen activator. 1988. Elsevier Applied Science. L. Pyle. 36. Edebo. 1987. (Ed. 18. B. y Dunnill. Biotechnology. Pyle. D. E. Hoare. England. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. 1990. Harrison. M. y Enfors. J. Bio/Technology. En: Separations for Biotechnology. y Asenjo.. Keshavarz. 126-159. J. 249-271. coli cell desintégrales from a bead mili and high pressure homogenizers. Foster. A.L. H.S.A. P.7 Bibliografía Agerkvist. 1990. Ed. Huang. (Ed. En: Separations for Biotechnology. D. The effect of culture history on the disruption of alcaligenes eutrophus by High Pressure homogenisation. E. 2.. Cell disruption: Breaking up is hard to do. Belter.).5. 1990. London. 21-28. England. Wei-Shou. Biochemical engineering aspects of cell disruption. 10.T. R.

9. Sauer. T. Ellis Horwood Limited. R. H. M. Marcel Dekker. Hettwer. Elsevier Applied Science. y Wang. Scopes.. España. New York. M. 1988. 84. Chemical permeabilization of cells for intracellular product reléase. John Wiley and Sons. Bead mili disruption.(Ed. Asenjo. B. y Evans. En: Separations for Biotechnology. 1-21. 5. Disruption of native and recombinant E.C.B. y Hudson. T. Levenspiel. y Schütte. Asenjo. D.Y. New York. Bioquímica. 3. D.J. . ROMPIMIENTO DE CÉLULAS Verral. 3.. 1989. Naglak. Springer-Verlag. AIChE. 177-205. S.). 1989.). 107-141.222 CAPÍTULO 5. 1994. 1990.J. Wang. 31-42. D. 1987.L. Barcelona. New York. Lehninger. Robinson. New York. Chemical Reaction Engineering. En: Separations Processes in Biotechnology. England. 1989. y Wang. Pyle. Protein Purification: Principies and Practice. Kula. New York. En: Separations Processes in Biotechnology. Biotechnology: Status and Perspectivas.I. 1990. M. Protein reléase from the yeast Ichia pastoris by chemical permeabilization: Comparison to mechanical disruption and enzymatic Lysis. En: Chemical Enginnering Problems in Biotechnology. 33. Ediciones Omega. L. 7. 62-79..R.Y. y Kula. England.J. 1. 1330-1342. 242-308. Shuler. T.A. C. An introduction to biochemical process design. Naglak. 55-64.).). Cooney. Biotechnology and Bioengineering. 41-71. (Ed. Segunda Edición. H. Biotechnology Progress. y Glick.R. Schütte.18. L. Petrides.R. D. C. 351-391. H. M. J. (Ed.A.). J.. Marcel Dekker. M. (Ed. 1972. A. H. O. Purification of proteins and the disruption of microbial cells. coli in a high-pressure homogenizer. 1990. L. (Ed. J.P.

Parte III Concentración del Producto .

Sin embargo. la adsorción cuando se realiza por af una técnica de separación altamente selectiva y necesaria en la purificación de productos en los cuales se requiere de una alt< .Esta parte trata sobre las operaciones de extracción y c que son utilizadas para concentrar los producto diluidos de L biológicos que son obtenidos en la etapa de separación de solide la extracción como la adsorción son técnicas de separación selectivas.

El solvente de extracción debe ser insoluble o soluble en grado limitado en la solución que se va a extraer y el soluto a extraer debe presentar una elevada afinidad por el solvente de extracción. .Mezcla íntima del solvente de extracción con la solución a procesar. . mismo que puede incrementarse mediante el contacto sucesivo entre los dos líquidos. La extracción líquido-líquido se realiza básicamente en dos pasos: .Capítulo 6 Extracción 6. El producto de la operación rico en solvente se llama extracto y el líquido residual de donde se separó el soluto es el refinado. En las operaciones de extracción la solución de la que se va a extraer el soluto se llama alimentación y el líquido con el cual se pone en contacto la alimentación se denomina solvente.Separación de la mezcla en dos fases líquidas inmiscibles. En muchos procesos tradicionales de la Ingeniería Química la operación de separación más usada es la destilación debido a su simplicidad.1 Introducción La extracción líquido-líquido es una operación que permite la recuperación de un soluto de una solución mediante su mezcla con un solvente. Las sustancias que componen la solución original se distribuyen de diferente forma entre las dos fases líquidas y se logra un cierto grado de separación.

La extracción también puede ser usada para remover impurezas de una corriente. El establecimiento de los aspectos termodinámicos básicos de la extracción permiten visualizar algunos caminos que contribuyen a realizar esta operación en forma más racional. en muchas bioseparaciones la destilación no puede ser utilizada debido a la sensibilidad de los productos a la temperatura.4. La extracción es una técnica de separación que posee algunas ventajas que la hacen atractiva para los procesos de bioseparación. Entre ellas se encuentran la vasta experiencia y desarrollo tecnológico alcanzado en muchos años.2 se abordan los aspectos fundamentales de la extracción. En base a lo anterior esta sección se centra en cuatro aspectos: . Sin embargo. La extracción agua-solvente orgánico se emplea ampliamente en la industria de los antibióticos.228 CAPÍTULO ti. particularmente contribuyen a una selección adecuada del solvente de extracción y de las condiciones de operación. La interacción de estos componentes y/o la presencia de más solutos o solventes genera cierto grado de complejidad de la operación.3. así como también la relativa facilidad con que se pueden escalar los procesos extractivos. La operación de extracción implica el uso de tres tipos de sustancias cuando menos: el soluto de interés y los componentes puros de cada una de las dos fases. a su baja volatilidad y a las concentraciones tan bajas que se manejan. y los aspectos básicos del diseño de extractores intermitentes y continuos se revisan en la sección 6. En este capítulo en la sección 6. mientras que la extracción que utiliza dos fases acuosas inmiscibles se utiliza para concentrar proteínas y separar componentes biológicos. Los equipos más utilizados para realizar operaciones de extracción se presentan en la sección 6. Los principios básicos de la extracción convencional líquido-líquido pueden ser extendidos a los sistemas de extracción de dos fases acuosas inmiscibles que son más empleados en la recuperación de proteínas y en la separación de algunas sustancias biológicas.

Aún en ausencia de interacciones específicas.2.• Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido. En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico. Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles. es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua. le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua. . • Química de la extracción. i 6.2.1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: .2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar. . . • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles. 6. • Selección del solvente. las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos. Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicos en soluciones acuosas.Las fases pueden ser completamente o parcialmente miscibles. En este último caso. En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas.La naturaleza de las fases.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas.

1 Tipos de Sistemas de Extracción LíquidoLíquido Los sistemas de extracción existentes presentan diferente grado de complejidad debido principalmente a lo siguiente: .Las fases pueden ser completamente o parcialmente irascibles. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 229 • Tipos de sistemas de extracción líquido-líquido. En este último caso.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido La extracción de un soluto desde el agua a una fase no polar.La presencia de otros solutos diferentes al soluto de interés. involucra con frecuencia interacciones hidrofóbicas. . 6. • Química de la extracción.La naturaleza de las fases. Otros sistemas emplean dos fases acuosas inmiscibles.2. Las interacciones hidrofóbicas son responsables de un gran número de fenómenos físicoí en soluciones acuosas. Aún en ausencia de interacciones específicas. • Selección del solvente.2.6. . En este capítulo se analiza básicamente los aspectos de la extracción en sistemas de un soluto diluido en dos fases inmiscibles y la extracción en dos fases acuosas. le transferencia al solvente de un soluto no polar desde el agua. . En la extracción convencional líquidolíquido generalmente una fase es acuosa y la otra la constituye un solvente orgánico.2. las relaciones de equilibrio y los balances de masa necesarios para el diseño de los equipos son más complejos. es favore cida debido al incremento en la entropía asociada con el desorden de agua. • Sistemas de dos fases acuosas inmiscibles. 6.

2) donde AE y AR son las actividades del soluto en las fases E y R respectivamente. R es la constante . x es la concentración de soluto en la fase ligera J5. La ecuación (6.4) donde: Kp es el coeficiente de partición.3) puede escribirse como: (6. En el caso de soluciones diluidas ideales la concentración es una medida apropiada de la actividad. o fase correspondiente a la alimentación.1) El potencial químico de las fases está dado por: H°(R) + RT ln AR = fi°(E) + RT In AE (6. al alcanzarse el equilibrio los potenciales químicos del soluto en ambas fases son iguales.de los gases ideales y T es la temperatura.3) En extracción se define el coeficiente de partición como la relación de las concentraciones de soluto en el equilibrio. EXTRACCIÓN Cuando un soluto es repartido entre dos fases E y R formando soluciones diluidas.6) .230 CAPÍTULO 6. = í (6. de tal manera que la ecuación anterior se puede escribir como: /jf(R) + RT ln y = fjf(E) + RT ln x (6. La ecuación (6. o fase rica en solvente y y es la concentración de soluto en la fase pesada R. es decir: K.4) es conocida como Ley de la distribución de Nerst y establece que en el equilibrio existe una relación constante de las actividades del soluto en las dos fases para una temperatura dada. es decir: (6.5) o bien como: (6.

0 a p H 10.00 3. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 231 Tabla 6. donde AG° es cambio en energía libre en el estado estándar. Compuesto Tipo Aminoácidos Soluto Glicina Lisina Ac. Debido a la importancia del equilibrio }.1 se muestran los valores del coeficiente de partición Kp para algunos solutos de interés en sistemas específicos. Todos los derechos reservados.01 0.04 100. No se aplica a todas las concentraciones posibles de encontrar en un sistema.07 110.5 a pH 4. Glutámico Celesticetina Eritromicina Novobiocina Penicilina F Penicilina K Proteínas Glucosa isomerasa Catalasa Solvente n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua n-butanol/agua Amil acetato/agua Butil acetato/agua Amil acetato/agua Amil acetato/agua PEG 1550/fosfato de potasio PEG/dextrano crudo Kp 0.06 12. Copyright ©1988.El coeficiente se define sólo en un punto de equilibrio. .0 3. 1988.00 Adaptada de: Belter ei al.0 a pH 4.2. 25°C Antibióticos a pH 7.00 0.10 Observaciones.6. .00 0.00 120.1: Coeficientes de partición para algunos solutos de interés.00 0. En este sentido nc debe confundirse con la constante de equilibrio del sistema.ermodinámico es conveniente puntualizar las propiedades del coeficiente de partición en la extracción. El logaritmo natural del coeficiente de partición Kp es proporcional a la diferencia de los potenciales químicos en los estados estándar de las fases puras. sino únicamente en el equilibrio verdadero.00 0.0 a pH 6.20 0.01 32.0 a pH 6. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. El coeficiente de partición varía con el nivel de concentración de equilibrio. En la Tabla 6.

232

CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN

- Para sistemas diluidos el coeficiente de partición puede considerarse constante e igual a la constante de equilibrio. - La constante Kp a una temperatura dada, es independiente de la concentración o presión global del sistema. - La magnitud de la constante Kp, determina la extensión a la cual procederá una extracción particular bajo condiciones establecidas. Un valor alto de Kp indica que en el equilibrio la concentración de soluto en el extracto es mayor que en el refinado. - Los valores de Kp deben ser determinados experimentalmente. Cuando se gráfica el potencial químico \i contra la concentración de soluto en la fase ligera x (Figura 6.1), en condiciones tales que una pequeña cantidad de fase ligera E esté en equilibrio con un exceso de fase pesada R, se tiene lo siguiente: debido a que R está presente en exceso, el potencial químico f¿(R) es constante, mientras que /¿(E) varía con la concentración x. En la intersección de //(-£") y 1¿(R) se puede localizar la concentración x, en equilibrio, de soluto presente en E. Cuando la concentración x aumenta, f¿(E] aumenta y se aproxima a fí°(E). Entonces se puede establecer que los cambios en el tipo de solvente cambian la concentración x en equilibrio. Por ejemplo, para el solvente 1 la concentración de equilibrio es x\ y para el solvente 2 la concentración de equilibrio es #2, entonces se puede concluir que el solvente 2 favorece esta extracción. No sólo los cambios en el tipo de solvente pueden mejorar la extracción, sino también los cambios en el soluto que afecten su potencial químico fj,°(E). Cambios en el Solvente Lo primero que puede hacerse para mejorar un sistema de extracción es cambiar el solvente de extracción, esto es, elegir uno cuyo potencial químico en el estado estándar esté más próximo a ^°(R). Desafortunadamente esto no es fácil de lograr debido a que la teoría termodinámica

5.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

233

Fracción mol de soluto ( x ) en fase ligera

Figura 6.1: Comportamiento del potencial químico en función de la concentración x de soluto.

234

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

no puede predecir con segundad los potenciales químicos para determinar el mejor solvente. Sin embargo, es posible utilizar enfoques aproximados para estimar 1¿°(E) utilizando parámetros de solubilidad, en el cálculo de coeficientes de partición . De acuerdo con esto, el coeficiente de partición Kp dado por la ecuación (6.4) puede ser expresado como:

donde V¿ son los volúmenes molares parciales del solvente pesado /?, el solvente ligero E, y el soluto A respectivamente, y Si son los parámetros de solubilidad correspondientes. El grado de disolución de sólidos en líquidos varía considerablemente con la naturaleza del sólido y del líquido, la temperatura y en grado menor con la presión. En todos los casos el límite de solubilidad es la saturación. En un sistema de un solvente y un soluto particular, la concentración de saturación a una temperatura y presión dadas es constante y no depende de la manera en que se prepara la solución. La influencia de la temperatura sobre la solubilidad de un soluto en un solvente particular es generalmente muy pronunciada, debido a que la mayoría de las sustancias absorben calor al disolverse y son más solubles a una temperatura elevada. Para estimar el parámetro de solubilidad del soluto de interés ¿u, es necesario realizar dos extracciones con diferente solvente cada una de ellas y cuyas solubilidades Si sean conocidas. Una vez determinado 8¿ se pueden estimar los coeficientes de partición para nuevos solventes a partir de los valores Si conocidos. Estas son sólo estimaciones que pueden servir de guía para nuevos experimentos. En la Tabla 6.2 se muestran los parámetros de solubilidad para algunos solventes.

Cambios en el Soluto Cuando no es factible cambiar el solvente para mejorar una extracción ya sea por razones económicas o técnicas, entonces es necesario ver la posibilidad de realizar cambios en el soluto. Dado que el soluto es el producto que se desea obtener mediante la extracción, los posibles cambios deben ser de caráter reversible.

FUNDAMENTOS DE LA

EXTRACCIÓN

235

Tabla 6.2: Parámetros de solubilidad para algunos solventes. Solvente Amilacetato Disulfuro de carbono Tetracloruro de carbono Cloroformo Ciclohexano Tolueno Agua 8 (ca/ 1 / 2 era -3/2)
8.0

10.0 8.6 9.2 8.2 8.9 9.4

Cambios en el Soluto por Pares de Iones.- Los cambios en c soluto dependen del comportamiento iónico que éste pueda tener. Si < soluto tiene comportamiento iónico y es posible encontrar un materií que permita suprimir esta ionicidad sin alterar el soluto, entonces 1 unión del soluto a este material permitirá aumentar la solubilidad d< soluto en el solvente de extracción. Los cambios a solutos empleando contraiones se basan en el hech de que un soluto que es iónico en el agua, formará un par-ión sin carg neta en un solvente orgánico. Esta formación de par-ión se puede ejemplificar de la siguiente m, ñera: Si de una solución acuosa de cloruro de tetrabutilamonio se extr; el catión utilizando cloroformo, se tiene: _ [N(C4H9)¿ en cloroformo] g)4 en agua] _
(6.

Si se agrega acetato de sodio a la solución acuosa de cloruro < tetrabutilamonio y se realiza nuevamente la extracción, se encuentra en cloroformo] = 132 en agua]
(6.

Puede observarse que en el primer caso se extrae una solución diluí de par - ion de N(C^H^]\Cl" y que en el segundo caso, se obtiene u

236

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.3: Contraiones típicos usados en extracción por pares de iones.
Ion

Estructura Química CH3COOCH3(CH2)2COO-

Observaciones Simple, no es muy soluble en solventes orgánicos. Más soluble en solventes orgánicos que el Acetato. Sólido Puede formar núcelas. Puede permanecer iónico en solventes orgánicos. Puede formar núcelas. Puede formar cristales líquidos. Puede degradarse en varios solventes.

Acetato Butirato Tetrabutilamonio Hexadeciltributilamonio Perfluoroctanato Dodecanato Linolato Tetrafenilboruro

(C 4 #9)4W-

CH3(CH2)1&(dH9)3N+ CF3(CF2)6COO~ CH3(CH2)10COOCH3(CH2)tCH = CHCH2CH = (CH2)7COOB(C6H5)4~

Adaptada de: Belter ef al, 1988. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

solución más concentrada de par - ion de CH^COO El empleo de pares iónicos, requiere de la selección de contraiones solubles en la fase no polar. Este tipo de sustancias se conoce como sales grasas y se listan en la Tabla 6.3 Cambios en el Soluto por pH.- Algunos productos que son de interés biotecnológico como las proteínas o los constituyentes de éstas los aminoácidos, son sensibles a cambios en el pH por lo que el conocimiento y comprensión de las propiedades ácido - básicas de los aminoácidos es sumamente importante en las bioseparaciones de proteínas. Muchos de los solutos.que se desean aislar son ácidos o bases débiles, su extracción puede ser fuertemente afectada por cambios en el pH. Un ácido débil puede ionizarse parcialmente en agua y no ionizarse significativamente en un solvente orgánico.

0.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

237

El ácido débil RCOOH, en solución acuosa, se disocia de la siguiente manera: RCOOH ^ RCOO- + //+ así que su constante de disociación Ka está dada por:

[RCOO-)R[H+]R [RCOOH]R

(

'

Cuando este ácido débil se distribuye entre dos fases, una orgánica E y una acuosa R, el coeficiente de partición aparente agrupa las concentraciones de la forma ionizada y no ionizada del ácido en la fase acuosa. Este coeficiente de partición se expresa como:

"

[RCOOH}B [RCOOH}R + [RCOO-]R

(

'

Combinando las ecuaciones (6.10) y (6.11) se obtiene:

donde K{ es el coeficiente de partición intrínseco de las especies no ionizadas definido por:
Ki

_ [RCOOH}E ~ [RCOOH]R

(6J3)

se sabe que pKa — — logA^, entonces si se combinan las ecuaciones (6.12) y (6.13) se obtiene:
log 10

-¿•}-l\=pH-pKa Kr

(6.14)

En la Tabla 6.4 se muestran los valores de pKa para algunos solutos de interés biológico. El desarrollo anterior para el caso de una base débil es análogo y conduce a: (6-15)

238

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Las ecuaciones (6.14) y (6.15) muestran que el coeficiente de partición puede ser alterado cambiando el pH de la solución acuosa. Los cambios en el coeficiente de partición pueden ser usados también para seleccionar el pH al que debe extraerse preferentemente un soluto determinado. Para dos soluto A y B la selectividad de la separación está dada por /?, donde:

Kr(B)
(6.16) es un indicador del grado de pureza que se puede lograr en un sistema de extracción determinado. Ejemplo 6.1.- Disociación de ácido propiónico. El pH de una solución 0.1 M de ácido propiónico es de 2.935. Determinar: a).- La constante de disociación aparente Ka. b). El pKa del ácido. c).- El grado de disociación del ácido. Solución: a).- La constante de disociación de un ácido está dada por la ecuación (6.10), en este caso se tiene que:
í^-a —

_ [//+] (CH3 - CH;\
[CH3 - CH2 - COOH]

dado que la concentración de la solución es de 0.1 M, [C//3 - CH2 - COOH} + [//+] - 0.1 M y a un pH de 2.935, la concentración de H+ es
[//+] = L J
-—^ = 1.16 x 10~3 M

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

239

Tabla 6.4: Valores de pKa para algunos solutos biológicos. Bases y Ácidos Simples Compuesto pKa Acido Acético 4.76 2.14 H3P04 CH3NH+ 10.6 Aminoácidos Compuesto pK-2 pKi COOH aNH+ Leucina 2.36 9.6 1.82 Histidina 9.17 Lisina 2.18 8.95 Péptidos Compuesto pKi pffi COOH aNH+ 3.06 Gly-Gly 8.13 2.34 Ala 9.69 Gly-Asp 2.81 8.60 Ala-Ala-Lys-Ala 3.58 8.01 Antibióticos Compuesto pK'a* Cefalosporina C 3.9 5.3 7.6 Lincomicina (base libre) Penicilamina 1.8 , (carboxil)

+ + +

pKs Grupo R
6.0 10.53 - pK3 Grupo R

+ -f +

+ -I-f -f

4.45 10.58

+ 44-

10.5

Adaptada de Belter, P.A. et a/, 1988.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados.

240 de tal manera que:

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

[C//3 - CH2 - COOH] = 9.88 x 10~2 M sustituyendo en (6.10) estos resultados se obtiene: (1.16 x 1Q-3 M) (1.16 xlQ- 3 M) ~~ 9.88 x 10-2 M = 1.36 x 10~5 M

a

Ka

b).- De acuerdo a la definición de pKa->

pKa

= log(—-)

pKa =

pKa = 4.87
c).- El grado de disociación es igual a la concentración de ácido disociado entre la concentración inicial de ácido, de tal manera que:

Ejemplo 6.2.- Separación de dos tipos de penicilina. En el sistema agua-amilacetato la penicilina "K" y la penicilina "F" tienen valores de KÍ de 215 y 131, respectivamente. Sus pKa's son de 2.77 y 3.51. Si se desea recuperar penicilina "F", determinar como se alcanza mayor pureza del producto: Si se extrae a pH 3.0 o a pH 4.0. Solución: La selectividad de la extracción está dada por la ecuación (6.16). Para aplicar esta ecuación es necesario calcular primero Kp mediante la ecuación (6.14), para cada penicilina a cada uno de los pH's de interés. Para la penicilina "K" a un pH de 3.0 se tiene:

6.2. FUNDAMENTOS

DE LA

EXTRACCIÓN

241

log10

- 1 = pH - PKa = 3.0 - 2.77 - 0.23

por lo tanto: Kp(uKn) = 79.68 Para la penicilina "F" a un pH de 3.0 se tiene:
log 10

\

= pH - PKa = 3.0 - 3.51 = -0.51

por lo tanto: KP(«F") = 100.0 se tiene entonces que:
A

KP("F") 100.0 ^("/n 79.68 = L26

El cálculo de /fp para las dos penicilinas a pH = 4.0 se realiza de manera similar, encontrándose para este caso que:
A = 2.67

Los resultados obtenidos para las dos penicilinas con los pH's respectivos se muestran en la siguiente Tabla:

PH

3.0 4.0

KP("K») 79.68
12.00

KP(UF») 100.00 32.00

' o_ A'pC'F") P ~ KP("K")

1.3 2.7

Estos resultados indican que si la extracción se realiza a un pH = 4 se obtiene la penicilina "F" en forma más pura, aún cuando la extracción es más difícil dado que el A^C'/7"') = 32 es menor que el correspondiente al pH=3.0.

242

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.5: Criterios utilizados en la selección de solventes. Selectividad. Coeficiente de partición adecuado para el producto. Grado de solubilidad. Facilidad de recuperación. Densidad. Tensión superficial. Estabilidad para el soluto. Inocuo

6.2.3

Selección del Solvente

En la operación de extracción generalmente es posible seleccionar el tip de solvente que se va emplear para realizar la extracción ( Mattiasso y Ling, 1989). Para tomar esta decisión es conveniente considerar h siguientes características (Tabla 6.5) del solvente:

Selectividad.- En el caso de que se desee además de concentrar logn un cierto grado de purificación, el solvente debe ser selectivo pai el soluto de interés. Coeficiente de partición.- Entre mayor sea el coeficiente de partició menor es la cantidad necesaria de solvente. Grado de solubilidad.- Entre más insoluble sea el solvente en la a mentación, la extracción se realizará más fácilmente. Facilidad de recuperación.- Por cuestiones económicas es necesario qi el solvente pueda ser recuperado para su reutilización. Densidad.- La separación de las fases una vez que se efectúa la e tracción, es más rápida entre mayor sea la diferencia de densid. entre las fases.

6.2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

243

Tensión superficial.- Un solvente con una tensión superficial alta, facilita la coalescencia de las emulsiones, en la separación de las fases. Estabilidad para el soluto.- El solvente no debe alterar al producto. Otras.- El solvente debe ser inocuo, esterilizable, no-inflamable, barato y disponible en las cantidades deseadas.

6.2.4

Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles

Cuando se opera con sistemas biológicos hay un número limitado de solventes que pueden ser usados en los procesos de extracción, esto es debido a que algunas de las biomoléculas de interés como las proteínas, son desnaturalizadas por los solventes orgánicos (Mattiasson y Rajni, 1991). Una técnica de bioseparación que preserva la actividad de las biomoléculas, en este caso de las proteínas, es la extracción en sistemas de dos fases acuosas inmiscibles (SDFA). En la Tabla 6.6 se listan algunos sistemas que pueden ser usados para formar sistemas de dos fases acuosas. En general los sistemas de dos fases acuosas se pueden clasificar en dos tipos: - Los sistemas polímero-polímero. - Los sistemas polímero-sal. Los sistemas de dos fases acuosas inmiscibles polímero-polímero se forman cuando dos polímeros como el polietilen-glicol (PEG) y el dextrano (un carbohidrato) se mezclan en presencia de agua. En el caso de los sistemas polímero-sal, el sistema se forma por la mezcla en agua de un polímero y una sal como el fosfato de potasio. El hecho común de estos sistemas es que ambas fases son acuosas, el contenido de agua de cada fase varía entre 85 y 99 %. Los sistemas de dos fases se caracterizan por presentar una baja tensión interfacial en el rango de 0.0001 a 0.1 dÍ7ia/an. El tiempo de sedimentación (separación de las fases) sólo por acción de la gravedad es

244

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Tabla 6.6: Sistemas de dos fases acuosas. Componente 1 Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Polietilen-glicol Ficoll Componente 2 Dextrano Hidroxipropil de almidón Fosfato de potasio Sulfato de potasio Dextrano Referencia Albertsson (1986) Tjerneld (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986) Albertsson (1986)

Fuente: Albertsson et a/, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

de 5 min a varias horas debido a la pequeña diferencia de densidades y a la relativamente alta viscosidad entre las fases. El tiempo de separación puede reducirse utilizando centrifugación a baja velocidad (Albertsson et al, 1990). El hecho de que ambas fases sean acuosas y tengan una tensión interfacial tan pequeña, proporciona un medio ambiente tal que permite que las biomoléculas y partículas celulares puedan repartirse entre las fases conservando su actividad (Diamond y Hsu, 1990). La extracción en SDFA es un proceso sumamente atractivo para la separación de enzimas y proteínas de interés biotecnológico debido principalmente a que: - El escalamiento es sencillo y puede realizarse a partir de datos de laboratorio en forma confiable, dado que el coeficiente de partición no varía con la escala. - La transferencia de masa es alta y el equilibrio se alcanza con poca energía de mezclado. - Se puede realizar en forma continua. - Los polímeros le confieren estabilidad a las proteínas.

6.2.

FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN

245

15-

10.

O

5

10
% (w/w)

15
Dextrano

Figura 6.2: Curva binodal para un sistema de dos fases acuosas inmiscibles PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. Adaptada de: Huddleston et al, 1991
Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1991. Todos los derechos reservados.

- La separación puede ser selectiva y rápida. - La separación puede efectuarse a temperatura ambiente debido a su rapidez. - Es más económica que otros procesos. Diagramas de Fases Los sistemas de dos fases acuosas pueden ser caracterizados mediante diagramas de fases únicos donde se granean la composición de las fases en el equilibrio. La Figura 6.2 muestra un diagrama de fases para el sistema PEG 3400/Dextrano T-5000/Agua. La curva binodal característica de estos sistemas pasa por los puntos DPC.

246

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

- El punto P representa el punto crítico y es el punto donde teóricamente la composición y los volúmenes de ambas fases son iguales. - El punto A se sitúa en una región a la izquierda de la curva binodal donde el sistema consta de una sola fase. - El punto B se localiza en una región donde coexisten las dos fases y representa la fracción peso de cada uno de los componentes de una mezcla formada por fases de composición C y D. - Las lineas como la CBD se conocen como lineas de unión. Si se considera la linea de unión que pasa por los puntos Ql, Q2 y Q3, todos los puntos están formados por fases de igual composición, pero en diferente proporción de volumen. La proporción de volúmenes de las fases conjuntamente con el coeficiente de partición constituyen un factor de diseño fundamental de la extracción. La proporción de volúmenes de las fases puede obtenerse gráficamente utilizando balances de masa. Considérese la linea CBD de la Figura 6.2 y sea: M: Masa total del sistema de dos fases. [M]. ME'- Masa de la fase rica en PEG. [M]. MR: Masa de la fase rica en dextrano. [M]. qE'. Fracción masa de PEG en fase rica de PEG. [Adim.j. PE'- Fracción masa de dextrano en fase rica de PEG. [Adim.]. qpt: Fracción masa de PEG en fase rica de dextrano. [Adim.]. PR: Fracción masa de dextrano en fase rica de dextrano. [Adim.]. entonces el balance de masa total del sistema es: M = ME + MR el balance de PEG es: (6.17)

$.2. FUNDAMENTOS

DE LA EXTRACCIÓN

247

MqM = MEqE + MRqR

(6.18)

combinando las dos ecuaciones anteriores se obtiene:

R

qE - qM

La diferencia de fracciones masa de la ecuación anterior puede encontrarse gráficamente en la Figura 6.2. Asimismo por triángulos semejantes se puede demostrar que:

= BC
donde BD y BC son las longitudes de los segmentos entre los puntos respectivos. Cuando la densidad de las fases es muy próxima, la relación de volúmenes de las fases está dada por:

f = R BC

(6.21)

donde E y R son los volúmenes de la fase superior e inferior, respectivamente. Comportamiento de las Fases El comportamiento de un sistema polímero A-polímero B-agua, depende de las interacciones entre las moléculas presentes. Estas interacciones pueden ser puentes de hidrógeno, fuerzas de van der Waals o iónicas, interacciones dipolo-dipolo e interacciones hidrofóbicas. En un sistema pueden presentarse simultáneamente varios tipos de estas interacciones dependiendo del tipo de polímeros que formen el sistema. Los polímeros que se utilizan para los SDFA se caracterizan por su capacidad para formar puentes de hidrógeno con el agua, de tal manera que las interacciones polímero A- polímero B están en competencia con las interacciones polímero A-agua, polímero B-agua. Si las interacciones polímero-agua son más fuertes que las interacciones polímeropolímero, entonces estas últimas son menos frecuentes. Entonces se for-

Existen varios modelos que tratan de explicar el comportamiento teórico de la partición o distribución de las proteínas en los sistemas de dos fases acuosas a partir de considerar una serie de factores que afectan la partición de este tipo de soluto en el equilibrio. El criterio de equilibrio puede ser expresado también en términos de los potenciales químicos //.de los componentes como: ¿ = 1. pH. 1989).. Los polímeros que se repelen debido a este efecto se denominan polímeros incompatibles.. EXTRACCIÓN man regiones en cada uno de los polímeros que están estadísticamente excluidas de interaccionar. En un sistema de dos fases acuosas la separación de fases ocurre en aquellas mezclas cuya energía de Gibss es menor cuando el sistema existe como dos fases que cuando permanece como una. concentración del buffer. .2. tamaño molecular. Este efecto de regiones excluidas de los polímeros produce la separación de fases en la mayoría de los sistemas de dos fases acuosas polímero-polímero.TV (6. y N es el número total de componentes. representan la fase superior y la fase inferior respectivamente. conformación molecular. En el caso de los sistemas polímero-sal-agua la segregación de las fases se puede deber al grado de hidratación del grupo éter del PEG.248 CAPÍTULO 6. presión y composición dadas. electroquímica. temperatura y concentración de la proteína (Baskir et a/.22) donde la prima (') y la doble prima ("). Factores que Afectan al Coeficiente de Partición Los estudios empíricos realizados en sistemas de dos fases acuosas han mostrado que la partición de proteínas es una función compleja que depende de factores tales como: hidrofobicidad. fuerza iónica. bioespecificidad de la proteína.. Un estado de equilibrio se caracteriza por presentar energía de Gibss mínima a una temperatura.~ (6. En general la partición de proteínas en sistemas de dos fases está definida por el coeficiente de partición ~ K.23) .

Tamaño de las Biomoléculas.El peso molecular de los polímeros utilizados en los sistemas de dos fases. /i/. Peso Molecular de los Polímeros. hidrofóbicas. Sin embargo.Las moléculas pequeñas como los aminoácidos se distribuyen uniformemente entre las fases. bioe. tiene influencia sobre el reparto del biomaterial debido a que altera la composición de las fases y cambia el número de interacciones proteína .2. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 249 donde [P]i y [P]2 son las concentraciones de soluto en este caso proteína en las fases 1 y 2. respectivamente.. K° incluye otros factores tales como la solvatación del soluto en las fases. las partículas extremadamente grandes como las células.4). Las moléculas de peso molecular muy grande como el ADN y los virus se reparten casi por completo en una sola fase. tamaño y conformación. éste se puede expresar como el producto de varias contribuciones: Kp = K° • Kdq • Khf • Kbioe • Kíam • Kconf (6. entre el soluto y los polímeros que forman las fases. de tal manera que las proteínas grandes tienden a repartirse menos uniformemente que las proteínas pequeñas (Figura 6.3).. Es útil expresar el coeficiente de partición en la forma logarítmica de la ecuación (6. El coeficiente de partición de una proteína en un sistema dextrano/polietilen-glicol se incrementará si el peso molecular del polietilen- .6. Esta ecuación es equivalente a la ecuación (6.50) misma que se puede escribir como: In Kp = ln K° + In Kelq + In Kh¡ + In Kbioe + In Ktam + ln Kconf (6.4).polímero. Con las partículas más grandes la partición no es tan uniforme. respectivamente.25) A continuación se describe el efecto específico de algunos de estos parámetros sobre el fenómeno de partición en dos fases acuosas (Figura 6. indican las contribuciones que sobre el coeficiente de partición tienen las propiedades electroquímicas. ¿am. se distribuyen entre la interfase y una de las fases o pueden agruparse completamente en la interfase (Baskir et a/.24) donde los subíndices: elq. de bioespecificidad. Debido a la dependencia del coeficiente de partición Kp de los factores arriba mencionados. y conf. 1989).

3. Disminuir el número de cadenas laterales amino. Reducir el peso molecular del PEG. 4. 2. Disminuir el número de cadenas laterales carboxilo. Características de la Proteína de interés. 1991. Copyright ©1991. EXTRACCIÓN Características del Sistema: 1. Disminuir los residuos hidrofóbicos. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Disminuir el pH del sistema abajo del Pl 3. Incrementar el número de cadenas laterales amino. Reducir el peso molecular del Dextrano. Adaptada de: Huddleston ti a/. Se incrementa Kp Disminuye Kp 1. PEG 1. Incrementar el número de cadenas laterales carboxilo. 3. Incrementar el pH arriba del Pl 2. Incrementar el peso molecular del PEG 1. Todos los derechos reservados.3: Factores que afectan al coeficiente de partición. Figura 6. Incrementar el peso molecular del Dextrano. 3.250 CAPÍTULO 6. . Promover interacciones específicas. 2. Incrementar los residuos hidrofóbicos 2.

Todos los derechos .0- a-Amilasa (bactarial) ABS üsozima (pollo y pavo) Papaína Tripsina a-Quimiotrípsina Transferrina (humana) ft • Galactosidasa (d* EcoiiVM y WL) 0.4: Efecto del peso molecular de las biomoléculas en el coeficiente de partición de una enzima. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 251 20Ovalbumina 1. Fuente: Baskir.05 50 PMxIO" Figura 6. 1989.1 0. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.6.2. reservados. Copyright ©1989.

Estos grupos generalmente tienen diferentes valores de pK.5 : Composición del Sistema 12 % de Oxido de Polietilen Glicol ( OPE ) 1 X de Dextrano ( Dx ) T. suma de todas las . la. la partición de la proteína decrecerá si el peso molecular del polietilen-glicol se incrementa o el peso molecular del dextrano se reduce.500 EXTRACCIÓN 0.5 . la proteína incrementa su carga negativa y/o reduce su carga positiva. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.. Las proteínas con peso molecular elevado son más influenciadas por cambios en el peso molecular de los polímeros que las de peso molecular bajo.Muchas proteínas y enzimas contienen un gran número de grupos cargados o que pueden cargarse en solución variando el.pH. Copyright ©1989.5. pueden utilizarse polímeros de diferente peso molecular para optimizar la separación de proteínas de diferente tamaño (Albertsson et al.252 CAPÍTULO 6. 1990). como se muestra en la Figura 6. Consecuentemente. Fuente: Baskir et a/. Inversamente. Todos los derechos reservados. 1989.5: Efecto del peso molecular de los polímeros en el coeficiente de partición. glicol se reduce o el peso molecular del dextrano se incrementa. 1. 10000 20000 30000 40000 Peso Molecular del OPE Figura 6. Cuando el pH de la solución cambia desde valores ácidos a básicos. Carga de la Protema. Cuando la proteína está en su pH isoeléctrico.

Sin embargo. Modelos para el Coeficiente de Partición en Sistemas de Dos Fases Existen varios desarrollos para obtener modelos que permitan predecir el coeficiente de partición en un sistema dado. se crea una distribución de diferencia de potencial entre las fases. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN 253 cargas es cero. los cambios en el pH pueden inducir también cambios conformacionales en la estructura de la proteína que alteran su partición.6. En todos los demás pH's la proteína tiene una carga neta.1989) . Modelo Empírico de Bronsted. El pH de la Solución.El primer modelo sobre la partición de partículas en sistemas de dos fases acuosas fue propuesto por Bronsted (Baskir et a/.2.. ésta no afecta significativamente al coeficiente de partición. Esta diferencia de potencial resulta de las preferencias de los diferentes iones de la sal por las diferentes fases lo que puede afectar fuertemente la partición de las biomoléculas cargadas .Si la concentración de la proteína permanece baja (un orden de magnitud más baja que la concentración del polímero). a altas concentraciones de proteína es posible que la concentración afecte el coeficiente de partición ya que pueden alterarse significativamente las propiedades del sistema. de los cuales se presentan tres a continuación. Esta relación es: Kp = exp donde: (6.26) . Las proteínas pueden inclusive formar fases separadas si su concentración es suficientemente alta.Además de los efectos del pH mencionados en el párrafo anterior.. Con frecuencia se observa que cuando se agregan sales a un sistema de dos fases en concentraciones entre 100 y 200 mM.. Concentración de la Proteína. quien desarrolló una relación aproximada para describir el efecto del tamaño de la partícula sobre el coeficiente de partición.

$: Potencial eléctrico en la fase. a.254 CAPÍTULO 6.27) donde: /¿?: Potencial químico en el estado estándar. pero no considera la influencia de otros factores sobre el mismo coeficiente. (Baskir et al 1989). /z. La ecuación (6. 7: Energía superficial de la partícula en una fase dada. A: Área superficial de la partícula. N0: Número de Avogadro. A: Constante que expresa tanto las características de las fases como las de la partícula que se particiona.26) muestra que tan sensible puede ser el coeficiente de partición al tamaño de la partícula. . el área y la carga. Zii Carga total sobre la partícula.. El potencial químico se expresa como una función de factores relacionados con la partícula tales como: la concentración.: Actividad. hidrofobicidad de la partícula y composición iónica del sistema. Modelos Termo dinámicos Generales.Los modelos termodinámicos para determinar el coeficiente de partición toman en consideración la influencia de varios factores como la carga. la energía de superficie. J-: Constante de Faraday. EXTRACCIÓN M: Peso molecular de la partícula que se particiona. /c: Constante de Boltzmann T: Temperatura absoluta. [M/mol]. (6. = ^ -f KT In di -f /^7 -f 2¿. También incluye la diferencia de potencial entre las fases.

la carga de la partícula Z{ y de la diferencia de potencial entre las dos fases A^.-)i (/Oí o como: . A7 es la diferencia en la energía superficial de la partícula en las dos fases y A ^ es la diferencia en la distribución de potencial entre las dos fases. FUNDAMENTOS DE LA EXTRACCIÓN En la ecuación anterior la actividad se puede expresar como: 255 donde /. En este modelo los potenciales químicos de los: solutos 2 y 3 (polímeros) se escriben como: .29) en la ecuación anterior la diferencia en los potenciales químicos del estado estándar es una constante.KT In KÍ = A/.-f /C-Tln —— -f A(¿\~f).Otro modelo que puede ser usado para describir el comportamiento de un sistema de dos fases acuosas. . T} 2 . -\ (m. fue propuesto por Edmond y Ogston (Clark.. de tal manera que en una serie de experientos con una misma partícula los cambios en KÍ son resultado de cambios en la energía superficial de la partícula A7.. En el equilibrio los potenciales químicos de las fases son iguales y la ecuación (6.A . Modelo de Edmond y Ogston.28) puede ser escrita como: z KÍ = A/¿° + A( A 7 ) + ' ° (6. En el caso de una solución infinitamente diluida (cuando no hay interacciones partícula-partícula). de tal manera que la ecuación (6.A¿¿. Este es un modelo en el cual los potenciales químicos se expresan en términos de la molalidad de los componentes del sistema. 1989).6. es el coeficiente de fugacidad para la partícula y m t es la concentración molal de la partícula en la fase. -«T In -—— .? + «T In ^f + ¿( A7) + '" ~ (6-28) donde A/¿? es la diferencia de potenciales químicos en los estados estándar en las dos fases.27) puede expresarse como: TI '2 A O .2. la fugacidad se aproxima a la unidad.

. lo cual puede realizarse sólo por gravedad o por medio de una fuerza centrífuga. Los parámetros de interacción a^j de este modelo pueden ser determinados ajustando las ecuaciones a datos experimentales de equilibrio.3^3) RT(ln m3 + a3)3m3 + «2. EXTRACCIÓN (¿2 = (¿2 «2.3^2) (6.2^2 + «2. //° es el potencial químico para el componente i en el estado estándar.3 y «2.31) donde R es la constante de los gases ideales.32) donde MI es el peso molecular del solvente (agua).7).256 CAPÍTULO 6.30) (6.3 Equipo de Extracción Existen diferentes tipos de equipos para realizar una operación de extracción (Tabla 6.2. respectivamente. y está dado por: RTMl 1000(m 2 + m3 -f (6. Esta interacción se lleva a cabo en el solvente agua. «3. o por mediciones termodinámicas independientes en los sistemas binarios. A su vez los equipos de operación continua pueden ser de contacto por etapas o de contacto diferencial. De acuerdo a la forma en que estos equipos pueden ser operados se dividen en extractores intermitentes y extractores continuos. 6. 02. Cuando los parámetros de interacción son conocidos las ecuaciones de Edmond y Ogston pueden ser usadas para describir el comportamiento de las fases. dos moléculas del polímero 3 y una molécula del polímero 2 con una molécula del polímero 3. m¿ es la concentración molal de soluto. Otra característica de los equipos de extracción es la forma en que las fases se separan una vez realizada la extracción. El potencial químico del agua se obtiene aplicando la ecuación de GibbsDuhem.3 son los coeficientes que caracterizan la interacción de dos moléculas del polímero 2.

En la Figura 6. La fase acuosa y la fase orgánica se alimentan al mezclador y las fases mezcladas se separan en el sedimentador. EQUIPO DE EXTRACCIÓN Tabla 6. En la Figura 6. Separación de las fases por: Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Gravedad Centrifuga Tamaño de gotas Agitación Agitación Gravedad Gravedad Agitación Agitación Agitación Pulsos Deflectores Westfalia y Robatel Podbielniak y Alfa Laval Intermitente Equipo Continuo Etapas múltiples Columnas de contacto diferencial M-S 257 M-S* Aspersor Platos perforados Lecho empacado Aspersión tipo Rushton-Oldshue Discos giratorios Tipo Karr platos y empacadas * M-S Mezclador-Sedimentador En los equipos de extracción el control del tamaño de las gotas de la fase dispersa puede realizarse por medio de agitación mecánica o por pulsaciones.una combinación .6(a) se muestra un mezclador sedimentador típico donde el mezclador o agitador está completamente separado del sedimentador.3.3. En esta sección se presentan algunos equipos de extracción agrupándolos en: • Extractores intermitentes • Extractores continuos 6.7: Clasificación y ejemplos de equipos de extracción.1 Equipo de Extracción Intermitente En la extracción itermitente o de una etapa la solución que contiene el soluto de interés se mezcla con el solvente y posteriormente las fases se separan.6. En la Figura 6.6(b) se muestra .6 se muestran algunos de los equipos utilizados para este tipo de extracción.

Los mezcladores sedimentadores pueden combinarse en serie para extracción en etapas múltiples o a contracorriente. Cuando la extracción involucra reacciones químicas el tiempo de contacto puede ser muy importante. EXTRACCIÓN de mezclador-sedimentador. . Las gotas pequeñas producen áreas interfaciales grandes que provocan una extracción más rápida.2 Equipo de Extracción Continua Esencialmente existen dos tipos de equipos para realizar extracciones en forma continua: .258 CAPÍTULO 6. Para obtener una transferencia de masa eficiente con frecuencia se usa un mezclador mecánico que proporciona un contacto íntimo entre las dos fases líquidas. sin embargo. El tamaño del mezclador debe dimensionarse para proporcionar suficiente agitación y tiempo de contacto para lograr el equilibrio entre las fases. las gotas no deben ser tan pequeñas como para que el tiempo de sedimentación o coalescencia subsecuente resulte demasiado largo. En el diseño de equipo de etapas múltiples hay un compromiso: Si los dos líquidos son mezclados intensamente pueden formar gotas pequeñas las cuales permitirán una extracción rápida pero una separación lenta. si los líquidos son mezclados ligeramente se formarán gotas . Este dependerá del flujo a ser procesado y de las propiedades físicas de ambos líquidos.3.Equipos continuos de etapas múltiples. pero todas las modalidades involucran extracciones intermitentes repetidas.Equipos continuos de contacto diferencial Equipo de Extracción de Etapas Múltiples El equipo utilizado en extracción de etapas múltiples varía ampliamente.7 se muestra un sistema de este tipo donde el flujo de alimentación y solvente se suministran a contracorriente en una serie de mezcladores sedimentadores. En la Figura 6. En general una de las fases se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas y debe existir un tiempo de contacto suficiente para que se realice la extracción. 6.

.6. x a E. EQUIPO DE EXTRACCIÓN 259 . X. mezclador sedimentador separado. x O±D b) Figura 6.3. XA E0 .jfc E0 . ay a) o R. X 0 En .6: Esquema de equipos utilizados en la extracción intermitente: a). mezclador sedimentador integrado. b).

Tanto el líquido pesado como el líquido ligero se pueden introducir dentro de la columna como la fase dispersa. Algunos extractores de etapas múltiples como los Westfalia y los Robatel emplean fuerzas centrífugas para separar las fases durante la extracción. habrá menos área de contacto. EXTRACCIÓN Et.t. Las columnas de aspersión presentan por regla general bajas eficiencias debido al poco .7: Mezcladores sedimentadores conectados a contracorriente en etapas múltiples.x ^AT i JL ¿L— U>~ L] ^AJ 1 cJo _ ^AJ 1 A ^ J\ C*0 •A _ñ \ t 'j L] \ \ . El líquido ligero se coliga o junta en la parte superior y sale.apa 1 Etapa 2 Etapa 3 E.260 CAPÍTULO 6. Equipo de Extracción Diferencial Las columnas de extracción empacadas y las de aspersión. En algunos casos el líquido pesado se dispersa hacía abajo sobre la fase ligera continua que se va elevando. \ ) L* Figura 6. la extracción es lenta. proporcionan contactos diferenciales donde el mezclado y la sedimentación se suceden en forma continua y simultanea.8 se puede observar que en una columna de aspersión el líquido pesado entra por la parte superior y llena la columna formando la fase continua y sale por el fondo. El líquido ligero entra a través de un distribuidor de tovera en el fondo. ¥ . pero la separación más rápida.t. mismo que lo dispersa hacía arriba en forma de gotas muy pequeñas. En la Figura 6. grandes.

Las columnas empacadas tienen una eficiencia mayor que las de aspersión. La columna de platos perforados (Figura 6.9 se presentan esquemas de tres diferentes tipos de columnas de extracción. Estos empaques promueven la unión de las gotas y la redispersión de las mismas a intervalos frecuentes a lo largo de la columna.EQUIPO DE EXTRACCIÓN salida del líquido ligero 261 coalescenda de la ¡nterfase líquido pesado gotas elevándose líquido ligero tobera de rociado Figura 6. Las gotas dispersadas se juntan debajo de cada plato y vuelven . El contacto entre las fases puede mejorarse proporcionando una superficie mayor. En la Figura 6.10) proporciona un método seguro y eficiente en los procesos de extracción líquido-líquido. misma que puede incrementarse aplicando una pulsación oscilante a los fluidos contenidos en la columna. sin embargo esto se ve compensado por la gran mejoría que se tiene en la transferencia de masa. El esquema de la Figura 6.8: Columna de extracción por aspersión.10 muestra una torre de extracción de platos perforados donde se dispersan las gotas del líquido ligero que tienden a elevarse. Evidentemente en este tipo de columnas se pierde capacidad debido al espacio que ocupa el empaque. Esta superficie es proporcionada al rellenar la columna con un empaque como los anillos de Rasching o las sillas de Berl. mezclado y como consecuencia su uso es reducido en la industria.

x empacado ET. y Figura 6. EXTRACCIÓN E.9: Columnas de extracción: a) Lecho empacado b) Aspersión tipo Rushton-Oldshue c) Discos giratorios. x _ñ E.262 CAPÍTULOS.~D discos • E0. . R.

El líquido pesado fluye hacia abajo de los platos donde se pone en contacto con las gotas y después pasa hacia el plato inferior. a formarse por encima de éste al pasar a través de las perforaciones. 6.5. • Extracción continua • Extracción fraccionaria .10: Sección de una columna de extracción de platos perforados.4 Diseño de Equipo de Extracción Esta sección se centra en los aspectos relevantes del diseño de de tres sistemas de interés en bioseparaciones: • Extracción intermitente. la eficiencia de separación en las columnas con platos perforados puede incrementar mediante pulsaciones que promueven la coalisión y dispersión de la fase dispersa. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 263 Liquido pesado O Elevación de gotas del disolvente ligero O O O •O o _Coalescencia del disolvente Figura 6. Algunos equipos de extracción diferencial utilizan la fuerza centrífuga para el manejo de las fases como el extractor Podbielniak y el extractor Alfa Laval.4. Al igual que en las columnas empacadas.

El proceso de extracción en una sola etapa se presenta en la Figura 6.11.. Después de este contacto y una vez que se ha alcanzado el equilibrio. En este proceso es conveniente que el contacto se realice con un alto grado de turbulencia para obtener altas velocidades de transferencia de masa. . las fases deben separarse.Métodos Analíticos . 6.1 Extracción Intermitente La extracción intermitente. El separador está incluido en la etapa debido a que la extracción del soluto persite en tanto las dos fases se encuentren en contacto y hasta que se alcance el equilibrio. Existen dos métodos para el cálculo de extractores intermitentes que dependen de la información disponible y de la complejidad de ésta. también llamada extracción de una sola etapa. EXTRACCIÓN Solvente E.Métodos Gráficos . consiste en poner en contacto íntimo la solución a tratar con el solvente de extracción y formar dos fases.x Figura 6.264 CAPÍTULO 6.4.11: Esquema de un proceso de extracción en una sola etapa.

y K es la constante d equilibrio. Para encontrar una expresión para calcular la concentración al fin de la extracción o de equilibrio.33) en la ecuación (6.4. x0 es la concentración inicial de soluto en el solvente < extracción y generalmente es igual cero. esto es.6.33 donde x es la concentración del soluto en la fase ligera E] y es 1 concentración del soluto en la fase pesada /?. x es la concentración de solu en el extracto al final de la extracción .33) es la ecuación de una recta que pasa po el origen. referido a la Figura 6. La ecuación (6. El valor para y se obtiene manera similar. Esta combinación de ecuaciones conduce a: . El balance de masa para el soluto. se sustituye el valor de x dado por ecuación (6. la concentración final del soluto puede sei obtenida en algunos casos en forma analítica mediante el empleo de doí ecuaciones. La primera de ellas es una relación de equilibrio para la: soluciones que intervienen en el proceso y la segunda es un balance d< masa para el soluto. Cuando la relación de equilibrio es lineal se tiene: x = Ky (6.3< donde y¿ es la concentración de soluto en la alimentación o fa: pesada. la coi centración del soluto que permanece en la alimentación después de extracción.12 es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (6. La segunda relación es un balance de masa que indica que en ( proceso de extracción: el soluto inicial = al soluto final. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN Método Analítico: Extractores Intermitentes 265 El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. y es la concentración de soluto en el refinado. Como generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúar hasta alcanzar el equilibrio.34). En esta ecuación se supone qi E y R son constantes.

266

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

. X0

E. x

«o . XA

ay

Figura 6.12: Esquema para el balance de masa del soluto en extracción intermitente.

x=

Ky,

(6.35)

y=

1 +F

(6.36)

donde F es el factor de extracción y está dado por:
171

KE
R

(6.37)

El factor de extracción reúne dos factores de diseño importantes, la constante de equilibrio y la relación de las fases. Es posible desarrollar una expresión para calcular el rendimiento de la operación o la fración extraída p, definida por:
p=
Ex

(6.38)

misma que puede ser escrita en términos del factor de extracción para dar:
F \ +F

(6.39)

6A. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

267

Consecuentemente la fracción de producto no recuperado es igual a uno menos la fracción extraída. Las expresiones desarrolladas son diferentes en el caso que la extracción se realice de la fase pesada a la ligera. Ejemplo 6.3.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldo de fermentación. En la recuperación de productos de fermentación con frecuencia se emplean extractores agitados. En este caso se ponen en contacto 10 litros de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/1 del producto que quiere extraerse con 1 litro de un solvente orgánico. Si el coeficiente de distribución es 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcule la fracción extraída de producto. Solución: El esquema que representa el sistema de extracción es similar al de la Figura 6.12. El balance de masa para el soluto en este sistema es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex como inicialmente en el solvente de extracción la concentración del producto es cero, el balance de masa del soluto queda como: RoVA = Ry + Ex (a)

combinando la ecuación anterior con la ecuación de equilibrio x = Ky y suponiendo R0 = /?, se obtiene la concentración del soluto en el solvente de extracción en el equilibrio. Esta concentración está dada por:

X

=

KyA

con

F=

KE

sustituyendo los datos del problema se tiene:
=

R

_ 10 /

la concentración x es:

268

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

*AS

T ~™~—

KyA = 20(10 g/l) - 66.6 g/l 1 + F 1+2

y la fracción extraída p es:

Ex P = Ry A

F 1 + F

1+2

= 0.666

después de la extracción el porcentaje del producto en el extracto es de 66.6% y en el refinado es de 33.3%. Si se desea extraer casi todo el producto se deberán realizar más etapas de contacto entre las fases 0 aumentar el volumen del solvente de extracción. Ejemplo 6.4.- Sistema de dos fases acuosas para separar virus. Se emplea un sistema de extracción de dos fases acuosas para separar y concentrar virus de un caldo biológico. El volumen inicial V0 de la solución que contiene los virus es de 3 x 10~3 m3 y el volumen inicial V de la solución de polímeros es de 1 x 10~4 m3. El coeficiente de partición Kp es de 4 x 10~4. Una vez que se mezclan ambas soluciones el volumen R de la fase pesada formada es de 5 x 10~5 m3. a).- Estimar las veces que se concentró la solución o grado de concentración obtenido. b).- El rendimiento de la operación. Solución: a).- El grado de concentración GC puede ser expresado como:

GC =

y
C0

donde C0 es la concentración de partículas en la solución original. Mediante un balance de virus se puede obtener la siguiente expresión:

5.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN combinando ambas expresiones se obtiene:
V y ° xE + yR

269

GC = GC =
donde:
F=

V0

R

Para utilizar la ecuación anterior es necesario calcular primero el valor de E mediante un balance,

entonces,

E = (3 x 1(T3 + 1 x 10~4 - 5 x 10~5) m5 E = 3.05 x 10~3 m3
y el grado de concentración está dado por:
3 x 10~3 m3
ín i n *> 1\ )x(3.05xlO(5 x 10~5 m 3 ) (\ + i 1 . (4xlO- -;v;1U 5—3 - 771 ^ ' \ OXn
4 3

GC =

m

GC = 58.57 b).- El rendimiento de la operación puede expresarse como:

y R p= CV 0 0
combinando la expresión anterior con la del balance de virus se obtiene:

270

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

P = xE + yR
y en términos del grado de concentración:

yR

R
sustituyendo valores,

p = (58.57) 0.976 97.6%

5 x 1Q-5 m3 3 x 10~3 m3

Método Gráfico: Extractores Intermitentes En la solución de problemas de extracción intermitente se emplean con mucha frecuencia métodos gráficos. Estos métodos son útiles en situaciones en las que el equilibrio es complejo y no se ajusta a una relación lineal como la ecuación (6.33). Al igual que el método analítico el método gráfico también depende de dos ecuaciones básicas: una relativa al equilibrio y otra al balance de masa del soluto. La relación de equilibrio establece que la concentración x del soluto en el solvente de extracción después de que las fases se ponen en contacto, es una función que depende de la concentración y del soluto en el refinado,
=
f(y)
(6.40)

Atendiendo al esquema de la Figura 6.12 la ecuación para el balance de masa del soluto es:

R0yA = Ry + Ex
consecuentemente:

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

271

línea de equilibrio -

(*.y)

(* - " o )

Fracción mol de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.13: Extracción intermitente: En la intersección de la línea de operación con la de equilibrio se obtienen las concentraciones que se alcanzan al final de la operación.

(6.41) La ecuación anterior es la de una recta llamada línea de operación cuya pendiente es m = —R/E y cuya ordenada al origen es b — Ry¿/ E Si se grafican los datos de equilibrio (ya sea en forma de una ecuación o de datos tabulados) y la línea de operación como se muestra en la Figura 6.13, en la intersección de las curvas se obtienen los valores de equilibrio y y x.
Ejemplo 6.5.- Extracción de un aminoácido.

La relación de equilibrio entre el tolueno y el agua pura en la extracción de un aminoácido no esencial está dada por:

272

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

En = 4.7 0.006 M

E =4.7 I x =

Ro-1

yA=o

R =1 I

Figura 6.14: Esquema de la extracción de un aminoácido en un sistema intermitente tolueno- agua. Ejemplo 6.5.

*> = (0.001 Estimar la fracción de aminoácido extraída al poner en contacto 4.7 litros de solución de tolueno, con una concentración 0.006 M del aminoácido, con un litro de agua. Solución: El esquema del proceso se presenta en la Figura 6.14: El balance de masa para el aminoácido es: R0yA + E0x0 = Ry + Ex (a)

de tal manera que la expresión de linea de operación está dada por:

y = ~^(x0 - x)
sustituyendo valores se obtiene:
y

p

=4.7(0.006 - x

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

273

0.012 -

(0.006 . 0)

Figura 6.15: Curva de equilibrio y línea de operación para el sistema tolueno- agua. Ejemplo 6.5. En la Figura 6.15 se muestra la curva de equilibrio y la línea de operación para este sistema. En la intersección de estas dos líneas se puede encontrar la concentración y de soluto al final de la extracción. Esta concentración en el equilibrio es:

y = 0.012
la fracción extraída p es:

Ex0 _ (LO /) (0.012 2^ P = ~ (4.7 /) (0.006 2^ P = 0.43

P

=

Ry

6.4.2

Extracción Continua

El tratamiento del diseño de extractores continuos puede dividirse en : - Extracción en etapas múltiples - Extracción diferencial

274

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

E, xn

E. xn-i

E.x2

E.x,

En. Xo

n-1
R.y 3

2
R.y 2

1
R.y,

\

Figura 6.16: Esquema de un proceso de extracción a contracorriente en etapas múltiples.

Extracción en Etapas Múltiples
En la extracción intermitente se usa una sola etapa para transferir el soluto de la fase acuosa a la fase ligera. Para transferir más soluto puede repetirse el contacto mezclando la corriente de salida de refinado con disolvente nuevo. De esta manera se logra un mayor porcentaje de extracción del soluto, sin embargo este procedimiento emplea una mayor cantidad de solvente y da lugar a la formación de corrientes muy diluidas. Para emplear menos solvente y obtener una corriente de extracto de salida más concentrada, generalmente se usa un contacto a contracorriente en etapas múltiples como el que se muestra en la Figura 6.16. En este esquema cada etapa está identificada por un número, iniciando con el número 1 a la derecha. La solución pesada R0 (alimentación) entra a la cascada por el lado izquierdo y el solvente puro o fase ligera E0 entra por la derecha. Las concentraciones con las que sale cada uno de los líquidos de cada etapa son las correspondientes al equilibrio. Por ejemplo, el líquido ligero que deja la primera etapa tiene una concentración de equilibrio Xi. El líquido pesado que deja la segunda etapa tiene una concentración de equilibrio y 2 Dos métodos son comúnmente utilizados para analizar este tipo de operaciones: - El método Analítico

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN - El método Gráfico

275

Método Analítico: Extractores Continuos Multietapas.El rendimiento alcanzado en una operación de extracción es un factor de diseño importante y puede ser obtenido mediante el cálculo de la concentración final del soluto de interés en las fases. Debido a que generalmente la extracción se realiza de tal manera que las fases interactúan hasta alcanzar el equilibrio, la concentración final del soluto puede ser obtenida en algunos casos en forma analítica, mediante el empleo de dos ecuaciones: una relación de equilibrio y un balance de masa. Cuando el equilibrio puede ser expresado por una relación lineal para la etapa n se tiene: xn = Kyn (6.42)

El balance de masa para el soluto debe realizarse en cada etapa. De acuerdo a la Figura 6.16 dicho balance para la primera etapa es: Ry2 + E0x0 = Ryi + EXl (6.43)

Cuando las concentraciones de las corrientes de salida de cada etapa son las de equilibrio y el solvente está libre de soluto x0 = O, las ecuaciones (6.42) y (6.43) se combinan para obtener: 2/2 = (F + l)i/i (6.44)

como se mencionó anteriormente F — EK/ R es el factor de extracción. Para la segunda etapa el balance de masa es: Ry3 + Exl = Ry2 + Ex¿ (6.45)

y de acuerdo a la relación de equilibrio, x\ = Ky\ y x 2 = K y<¿ de tal manera que:

combinando la ecuación anterior con la ecuación (6.44) se obtiene:

276

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

2/3 = (1 -f F + F2)yi

(6.46)

mediante este procedimiento se puede obtener una expresión para el cálculo de la concentración de soluto en la fase pesada a la salida en función de la concentración a la entrada, el factor de extracción y el número de etapas, de la forma: j/n+i - (1 + F + F2 + ... -f F n ) yi que también puede escribirse como: (6.48) La ecuación (6.48) puede ser utilizada de varias formas: - Si se conoce la concentración de la alimentación yn+i, el factor de extracción F y el número de etapas n, entonces se puede calcular la concentración del soluto a la salida t/i, y por lo tanto la fracción extraída. - Si se conoce la concentración de soluto a la entrada en la corriente de alimentación y la concentración deseada a la salida y el factor de extracción F, entonces se puede calcular el número de etapas necesarias para el proceso de extracción. - Si se conoce la fracción que no es extraída yi/yn+i y el número de etapas, se puede conocer el factor de extracción F; esto permite seleccionar flujos adecuados para E y R. El cálculo de las concentraciones de salida permite estimar el rendimiento o la fracción extraída p, que en este caso está dado por : (6.47)

P

Exn

Ryn+i

combinando la ecuación anterior con las ecuaciones (6.42) y (6.48),

De la ecuación (6.49) se desprende que cuando F es muy grande, p se aproxima a 1. Por otro lado, cuando F tiende a cero también p

0.4. DISEÑO DE EQUIPO DE

EXTRACCIÓN

277

tiende a cero. En el caso particular cuando F es igual a la unidad, se cumple que p = n/(n + 1). Ejemplo 6.6.- Cálculo de la fracción extraída de un producto proveniente de un caldb de fermentación en una extracción por etapas. En una operación de extracción se ponen en contacto 10 l/rnin de un caldo de fermentación acuoso que contiene 10 g/l del producto que se desea extraer, con un flujo de 1 l/min de un solvente orgánico. Si la constante de equilibrio es de 20 y se establece el equilibrio en el extractor, calcular la fracción extraída de producto en un sistema de extracción de tres etapas.

Solución: De acuerdo a los datos yn+i = 10 g/l; K = 20; R = 10 l/min] E = 1 l/min y n = 3. La fracción extraída puede ser obtenida mediante la ecuación (6.49} y es necesario calcular primero el factor de extracción, entonces:

F =
P —

EK
v

(1 min' (20) -4-) v /

10-4mtn
F = 2

la fracción extraída o recuperada en el solvente de extracción es:

F(Fn - 1)
P =
Fn+l
3

_

1

2(2 - 1) 24 - 1 0.93

Otro camino para resolver el problema no tan directamente, consist en utilizar la ecuación (6.48) para calcular la concentración de soluto

278

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

la salida en el refinado y\ . Conociendo este valor se puede encontrar la fracción no extraída y la fracción extraída. Se tiene entonces:

10

n

g

7-

la concentración de salida de soluto en el refinado es:
10 9/1
15

9/1

/7

la fracción no extraída es igual a la concentracón y\ dividida entre concentración de soluto en la alimentación, de tal manera que:
0.66 g/l —-—77- = 0.066 10 g/l
., , fracción no extraída

y la fracción extraída p es: p = 1 - 0.066 = 0.93 Ejemplo 6.7.- Extracción continua de penicilina.Se extrae penicilina de un caldo de fermentación utilizando isoamilacetato como solvente orgánico en un arreglo tipo cascada a contracorriente. Los flujos de la fase orgánica y de la fase acuosa son E — 10 l/min y R = 100 l/min, respectivamente. El coeficiente de partición de la penicilina a pH=3 es K = 50. Si la concentración de penicilina en la alimentación es de 20 g/l, calcular el número de etapas necesarias para obtener una concentración de 0.1 g/l de penicilina en la corriente de salida. Solución: El número de etapas puede ser calculado mediante la ecuación (6.48) y para lo cual primero es necesario calcular el factor de extracción,

.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN

279

o

KE

(50)(10 l/m) 100 l/min F = 5
F

el número de etapas puede obtenerse mediante la expresión: /Fn+l

2/1
20 f

V F
5 n+l

_

0.1 f 5-1 n = 3.15 n = 4

Método Gráfico: Extracción continua de Etapas Múltiples.Al igual que en la extracción intermitente, los métodos gráficos son muy usados en ingeniería en la solución de problemas de extracción poi etapas. Se requieren dos tipos básicos de relaciones: una relación d( equilibrio y un balance de masa. La relación de equilibrio se expresa como:
n

= f(yn)

(6.50;

El balance de masa global para el soluto, es decir en todo el equipo es de la forma:
f H = -j¡(yn+i
R

(6.51

las ecuaciones (6.50) y (6.51) pueden granearse sobre el mismo plan< coordenado para obtener las líneas de equilibrio y operación, respecti vamente. En la Figura 6.17 se muestra una gráfica de este tipo. Cuando interesa calcular del número de etapas n requeridas en un operación de extracción, el procedimiento es el siguiente (Figura 6.17"

280

CAPÍTULO 6.

EXTRACCIÓN

Línea de operación Línea de equilibrio

8 2
0)

X)

Alimentación

i

II

o 5

<yA)

Concentración de soluto en el refinado ( y )

Figura 6.17: Análisis gráfico de una extracción a contracorriente en etapas múltiples.

. Ejemplo 6. mediante la ecuación (6.6. x\].. . x — 0). Calcular el número de etapas necesarias para lograr el 99% de cuperación del antibiótico. El flujo de la fase acuc R es de 450 l/h y el de la fase orgánica E es de 37 l/h.En la intersección de la linea horizontal con la línea de operación s localiza el punto (1/2. Solución: Solución gráfica.Se repite el procedimiento anterior hasta alcanzar el punto (y n +i.51). La constante de equilibrio K de este sistema tiene un val de 57 al pH 3. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 281 .En la intersección de la linea vertical con la curva de equilibrio se localiza el punto (yi.4.5 al que se realiza la extracción.Extracción por etapas de Actinomicina D.. xn] En este punto la concentración del soluto en el refinado iguala excede la concentración en la alimentación. se traza una línea vertical en 7/1. . Este punto representa la intersección de la línea de operación con el eje de las abscisas.En x\ se traza una linea horizontal. x\] de la línea de equilibrio. Se desea extraer Actinomicina D de un caldo de fermentación q contiene 260 mg/l de este antibiótico.8. .Se calcula la concentración de soluto en la corriente de la alimentación en la parte final de la cascada t/i. utilizando butil-acetato cor solvente. .Una vez localizado el punto (y\. .Para calcular gráficamente el número de eta es necesario obtener una expresión para la curva de operación media .Se localiza sobre la gráfica el punto (y1? x = 0). El número de etapas se determina contando el número de escalón* trazados.

6 mg/l la expresión para la curva de operación es: ¡i• \ 450 xn = —(yn+i .0.01 yn+] = (4.01 x (260 mg/l) = 2.. Solución analítica.01 y n+1 \ F . para lo cual es necesario calcular primero la concentración de soluto a la salida en el refinado.69)" +1 . Dado que se desea recuperar el 99% del soluto esta concentración es: .6.48). Se traza la línea de operación a partir del punto (2.31.69 .1 .18.51).282 CAPÍTULO 6. 0) y la pendiente de 57. EXTRACCIÓN \ la ecuación (6.l J y en este caso el factor de extracción es: _ (57)(37 l/h) _ ~ 450 l/h ~ de tal manera que: yn+i ^ 0. de tal manera que: 2/n+i = -= r. Las curvas resultantes se muestran en la Figura 6. Una vez obtenidas las curvas se puede estimar el número de etapas mediante el proceso de trazado de escalones sobre la curva. el cálculo también puede realizarse mediante el método analítico por medio de la ecuación (6.2.62 [mg/l] la relación de equilibrio para este caso está dada por: Para realizar el cálculo gráfico se traza la curva de equilibrio utilizando el punto (O.2 yn+l .y\) = 12. Se puede estimar que el proceso de extracción se completa en tres etapas. En este caso es necesario utilizar dos escalas debido al rango tan amplio de variación de las concentraciones.Dado que la relación de equilibrio es lineal.1 4. 0) y la pendiente 12. j J yi = 0.

6.4. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 283 a). linea de operación Figura 6. lm«a de equilibrio b). .18: Etapas requeridas en la extracción de actinomicina de Ejemplo 6.8.

La concentración de soluto a la entrada en la fase ligera E es x0 = O y a la salida es XL.19.284 CAPÍTULO 6. En esta figura se puede observar que la concentración de soluto a la entrada en la fase pesada R es y^.8 se requieren tres etapas para esta extracción lo que coincide con el resultado obtenido por el método gráfico.52) donde T/* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto x en la fase ligera. se dice que la extracción se realiza en forma diferencial. La segunda relación es un balance de masa tomado en la base de la columna como se muestra en la Figura 6. y a la salida es y0. pero no se llega a alcanzar el equilibrio.Ex (6. EXTRACCIÓN rearreglando y tomando logaritmos se tiene: In370 = (n + l)ln4. sin embargo se considera que en el futuro jugará un papel importante en bioseparaciones. El soluto se transfiere de una fase a otra a través de un contacto íntimo entre éstas. Este tipo de extracción no es usado comunmente para el asilamiento de moléculas biológicas importantes. el resultado de este proceso es una extracción significativa del soluto deseado. La primera de ellas es una relación de equilibrio similar a las utilizadas en extracción por etapas y está dada por: x = Ky* (6. El balance de masa que resulta para este proceso a cualquier altura de la columna es: Ry + E(x0) = Ry0 4.69 por lo tanto n = 2. Sin embargo. en una altura dada de la columna. El análisis de la extracción diferencial depende de tres relaciones básicas. Extracción Diferencial Cuando el contacto de la fase pesada y la fase ligera se efectúa en forma continua.53) .

DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 285 LT "• Xo i r Concentración x.4.6. .19: Esquema idealizado de una columna de extracción diferencial. y en el volumen A A z o "o Figura 6.

55) se puede escribir como: ^-.55) si se divide la ecuación anterior entre AAz y se toma el límite cuando Az —* O.R(y*+*z . la ecuación (6.56) En la extracción diferencial una fase se dispersa en la otra en forma de gotas pequeñas.y0) (6. El balance de masa en el diferencial de volumen se puede escribir entonces como: O .54) donde x y y son las concentraciones de soluto en la posición z. La tercera relación es un balance de masa del soluto que expresa la velocidad con que éste se transfiere de la fase pesada a la fase ligera.19 se muestra el esquema para el balance de masa en este diferencial de volumen y que se expresa en palabras como: Acumulación de soluto en fase R = Entrada de soluto —Salida de soluto -^-Producción — Transferencia Este balance puede ser simplificado considerando que la acumulación es nula.286 CAPÍTULO 6. Este balance se realiza en un diferencial de volumen AV = AAz. La velocidad de transferencia r es proporcional al área superficial de las gotas por unidad de volumen.rA&z (6. y el área de contacto es un factor muy importante para lograr una extracción rápida y eficiente. dz (6. Debido a que no hay producción de soluto el término correspondiente también es nulo. En la Figura 6. La velocidad de transferencia de soluto de la fase R a la fase E está dada por rA Az. La linea de operación del proceso está dada por la expresión ( 6.54 ). La velocidad de transferencia /• también es proporcional . EXTRACCIÓN que también puede ser escrito como: /? x = —(y .yz) . donde r es la velocidad de transferencia volumétrica. las cuales no están en equilibrio.

58) : dz L= R fyL __dl dy íyL kaA Jy0 y x ~K mediante la ecuación (6. y* es la concentración hipotética de soluto en la fase pesada en equilibrio con la concentración de soluto en la fase ligera x.58) está en función del diferencial dz. (6.54).57).52) y (6. Esto permite calcular la longitud del extractor diferencial utilizando para ello laí ecuaciones (6. La tercera relación requerida para el análisis de la extracción diferencial se obtiene combinando las ecuaciones (6.58) Una vez obtenidas estas tres relaciones se puede describir como se relacionan entre si para obtener una ecuación de diseño.4.f< . .0. Esta depende de las propiedades físicas de los fluidos en contacto tales como viscosidad. á dy (y .57) donde a es el área superficial de contacto por unidad de volumen. La longitud del extractor está dada por: rL L = I y de acuerdo a la ecuación (6. La constante k tiene dimensiones de velocidad. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 287 a que tan lejos está la concentración y del equilibrio. De acuerdo a lo anterior r se puede escribir como: r = ka(y — y*) (6.52) se obtiene la expresión. y k es una constante de velocidad llamada coeficiente de transferencia de masa. densidad y flujo.56) y (6. La ecuación (6. por lo tanto: L= R dy (y .»*) .

El término que aparece entre llaves es una cantidad adimensional llamado "número de unidades de transferencia" NTU ( de sus siglas en inglés) que permite medir el grado de dificultad de la extracción.my . Se utiliza una unidad de fibras huecas operando a contracorriente para separar 1-leucina de d-Ieucina bajo las siguientes condiciones: .y0} entonces: L= R fyL dy y . la ecuación anterior se puede escribir como: L= R F kaA(F-l) Jy0 y + JÍT (6 59) finalmente integrando se obtiene: R ka A.Separación de una mezcla racémica de leucina.288 de la ecuación (6.59) se puede escribir como: L = (HTU}{NTU] (6.60) es la base para el diseño de un proceso de extracción diferencial líquido-líquido. Los módulos de fibras huecas constituyen una alternativa atractiva respecto aj uso de equipos de extracción convencional debido su alta relación área/volumen (Ding et a/. La expresión (6.54) se obtiene. » * * ~ » - " ' Al término de la ecuación (6.(y . Ejemplo 6.60) La ecuación (6. Valores grandes de NTU significan mayor dificultad en la extracción que valores pequeños. CAPÍTULO 6. EXTRACCIÓN R ( ^ x = -j.y0 fyL dy dado que F = EK/R.9.. tiene unidades de longitud y es una medida de la eficiencia del equipo.59) que aparece dentro de los paréntesis cuadrados se le llama en ingeniería "altura de una unidad de transferencia" HTU (de sus siglas en inglés). 1992).

DISEÑO DE EQUIPO DE Fase extractóla ligera Fase acuosa Longitud de la unidad Diámetro de las fibras Número de fibras Flujo de la fase acuosa R Flujo de la fase orgánica E Coeficiente de partición K EXTRACCIÓN 289 N-n-dodecil-1-hidroxiprolina en octanol Agua (conteniendo 1-leucina y d-leucina) 64 cm 240 /¿m 96 19.97 %.6. Solución: Se requiere utilizar la ecuación (6. por la expresión: Ex¡ P = ~Ryi otra expresión necesaria es la del balance global del soluto que es: ExL = R(yL .2 cm3/h 76. Estimar el coeficiente de transferencia de masa volumétrico ka de sistema.59) para estimar el parámetro k y expresarla en términos de la recuperación p que en este caso está dad.8 cm3/h 0. si bajo las condiciones enunciadas la recuperación de d-leucin.4. en la fase ligera fue del 99.331 d-leucina Los microporos de las fibras se rellenaron con gel de polivinil-alcoho de tal manera que los solutos difunden a través de los poros sin que la¡ fases se mezclen. ExL Ryi .y0) combinando las dos ecuaciones anteriores.

-' 3 ~^ i / / i _ 0.324 \ (64 c7/?.324 . EXTRACCIÓN en base a lo anterior la ecuación (6.290 CAPÍTULO 6.34 x 10~2 cm2 también es necesario calcular el factor de extracción F.9997^ = 526 x 10 Un método simplificado para el diseño de columnas considera a la columna formada por un conjunto de platos teóricos o etapas ideales. (96) ÍTT x (240 x 10~6 m)' l A = 4 A = 4.2 2£Í _ F = 1. que es la suma del área transversal de las 96 fibras.9997 \ 1.)(4.59) puede expresarse como: L L- [kaA\{F-\ \VL(1-P) o bien como: L= ~ R ' kaA La expresión anterior permite calcular fca.1 ka \\ . R 0. .43 x 10~ C77i ) 1.0..324 el coeficiente de transferencia de masa está dado por: 10 9 cm3 /i /i 3600 5 2 2 £ _ 1 i or.8 F —_ 19.331 x 76. para lo cual es necesario obtener primero el área de flujo A.

L ~ yo) . Se cuenta con los siguientes datos de operación de un extractor tipo Podbielniak: Coeficiente de partición Conc. penicilina en el solvente Flujo de alimentación Flujo de extracto Pérdidas de penicilina O 70 moles de agua/min 3. Esto puede lograrse en un extractor diferencial centrífugo tipo Podbielniak..La fracción de soluto en el extracto de salida puede ser obtenida mediante la ecuación (6..54).Extracción diferencial de penicilina. Este extractor funciona como una columna de platos perforados enrollada sobre un eje giratorio que favorece el flujo a contracorriente de las fases. de tal manera que: L = (HETP)(N) Ejemplo 6..3 x 1(T4 moles de .La fracción mol de penicilina en el extracto de salida. XL = TT (y. Este tratamiento da origen al concepto de altura equivalente a un plato teórico HETP (de sus siglas en inglés).4. Es recomendable que esta extracción se realice en un tiempo corto debido a que la penicilina es inestable a pH ácido. 3.. La extracción de penicilina a partir de una fase acuosa mediante una fase orgánica debe realizarse a pH ácido. P moles de agua enicilina Conc.0. b).El número de etapas teóricas de la operación.61) 25 (fracción libre soluto). Solución: a). DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 291 El número de platos teóricos N de una columna de contacto diferencial se calcula mediante los métodos empleados para la extracción continua de etapas múltiples.5 moles de solvente/min 10 % Calcular: a).10. de penicilina a la entrada r (6.

4 -(0.6 6.3xlO.1 0..C.1)(3. EXTRACCIÓN [3.48) modificada es: 1.4 )] gg o c mol min xL = 5. El resultado de este proceso es la separación de los distintos solutos contenidos en el solvente E.3 Extracción Fraccionaria La extracción fraccionaria es una técnica de separación en la cual una fase ligera E que contiene varios solutos.292 70 CAPÍTULO 6. F -I se requiere calcular el factor de extracción.25 entonces el cálculo del número de etapas mediante la ecuación (6. se pone en contacto con una serie de tubos que contienen originalmente.4.25. F = KE R mol 7fl mo min F = 1.94 x 10 _3 moles de penicilina moles de solvente b). fase pesada R pura. Craig como . Este proceso de extracción también es conocido como extracción Craig (debido a que fue desarrollado inicialmente por L.3xlO.48) que en este caso se puede escribir como: Vr.El número de etapas teóricas puede ser calculado mediante la ecuación (6.1 = n = 4.

5.4. Cuando se tiene un solvente conteniendo varios solutos que poseen diferentes coeficientes de partición. .El solvente E de la capa superior del tubo 1. puesto que el coeficiente de distribución KP(Á] = 1. .Se separa la fase ligera de los tubos y se añade al siguiente de la derecha.Inicialmente el soluto A (64 unidades) se encuentra disuelto en un volumen de fase ligera E y se localiza en el tubo 1 junto con un volumen de fase pesada R. se transfiere al tubo 2.0. es decir 32 unidades en cada una. éstos pueden separarse entre si por medio de la extracción fraccionaria. . .Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. el resultado es una distribución del soluto A entre las fases E y R en cantidades iguales. El fundamento se muestra en la Figura 6.Se agitan los tubos 1 y 2 hasta alcanzar el equilibrio.Inicialmente los tubos del 2 al 7 contienen volúmenes iguales de disolvente puro R. . .20 (a). DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 293 extracción a contracorriente) o como extracción fraccionaria con una fase estacionaria. La extracción fraccionaria se fundamenta en la diferencia del coeficiente de partición de los solutos. La extracción fraccionaria consiste de repartos repetidos de una mezcla de solutos entre dos disolventes inmiscibles. .El tubo 1 se agita hasta alcanzar el equilibrio. .Se repite el proceso las veces que sea necesario. . donde un soluto A que posee un coeficiente de partición entre los disolventes E y R dado por: KP(A) = í± = 1 yA es extraído por este proceso de la siguiente forma: .Se añade al tubo 1 un volumen de solvente fresco E. donde cada fase en ambos tubos contiene 16 unidades de soluto A.

.20: Extracción de Craig: a) Esquema del principio de extracción fraccionaria con una fase móvil. b) Gráfica para cada tubo y varios solutos. EXTRACCIÓN í Disolvente E Tubo Disolvente R 1 2 3 4 5 6 DDDnn IlaaaaD DDnnHHE nnnn nnn mnnn nn 1 DD n ri no] fio n 2 5 [ M O l [10 H0Bülll3 Total y Tubo 1 6 15 20 15 6 1 1 2 3 4 5 6 7 20 - 3 4 5 Número de tubo Figura 6.294 CAPÍTULO 6.

Otra forma de repre sentar la extracción fraccionaria es mediante el esquema que se muestr en la Figura 6. La cantidad total de soluto A. Comunmente en la práctica real de laboratorio. Con el fin de comparar la forma en que se distribuyen varios solutos con diferente coeficiente de partición. KP(C) = — = 3.20 (b). se puede ver en la gráfica de la Figura 6. la mezcla de solutos A.33 y el soluto C. El soluto B. Debido a que cad< soluto se mueve independientemente del otro de acuerdo a su coeficient< de partición.4.6. lípidos y aminoáci dos. B y C se separará por complet< en tres picos después de un número determinado de transferencias. lo cual no s presenta en otro tipo de procesos de extracción. Este principio también sirve de base para las operaciones croma tográficas que se revisan posteriormente.20 muestra los resultados de siete transferencias. La extracción fraccionaria con una fase móvil es de aplicación ge neral y puede emplearse como técnica de bioseparación para diferente tipos de solutos como: proteínas. Perfil de Concentración A diferencia de los procesos de extracción vistos en las secciones an tenores.0 ye La figura indica que a mayor coeficiente de partición Kp. . también se muestra en la Figura 6. mayor es 1< cantidad de soluto desplazada en cada transferencia. se emplean 100 o más etapas de distribución para separar mezclas de aminoácidos o de proteínas. en cada uno de los siete tubos. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 295 El esquema de la Figura 6.20 (b) la distribución de los solutos B y C en concentraciones arbitrarias de 64 unidades cada uno.21. posee un coeficiente de partición. KP(B) = — = 0. ácidos nucleicos. en la extracción fraccionaria el soluto desarrolla un perfil d concentraciones distribuido a través de todos los tubos.

21: Representación esquemática de la distribución de la concentración de un soluto en la extración fraccionaria con una fase móvil.296 CAPÍTULO 6. . P -•': q w:. EXTRACCIÓN Transferencia 0 Agitación Equilibrio Transferencia 1 Agitación Equilibrio Transferencia 2 Agitación 100 Zmí • q ::. pq P2 P2 q2 pq pq pq q2 Equilibrio Transferencia 3 Agitación Equilibrio Transferencia 2pq q3 P2q q3 3pq3 pq3 P 3q 3pq3 J J J J J 4pq 3 Figura 6.

. . Cuando la extracción fraccionaria se realiza con n transferencias la fracción / de soluto original que se encuentra en el tubo r. la distribución de la concentración en los tubos sigue una forma binomial.21 se muestra la distribución de soluto en cada tubo después que se realiza la transferencia y se alcanza el equilibrio.62) se aproxima a una distribución gausiana y se tiene que: (r — np)' exp -: ' v > ' [2*np(l-p)]l»~"f\ 2np(l.62) donde: F= EK r= 1.11. determinar: a).La concentración de soluto en dicho tubo. El ácido biliar quenodeoxicolico es aislado mediante una extracció de Craig usando 400 transferencias. b).2..n+1 Cuando el número de transferencias n es muy grande la ecuaciór (6. DISEÑO DE EQUIPO DE EXTRACCIÓN 297 En la Figura 6. 1 (6..Aislamiento de ácido quenodeoxicolico. cuando la recuperación en cada etapa es p.. (en ambas fases) depués de las n transferencias está dado por: r!(n — r)! pr+l(l-P)n-r (6. Se muestra que al final de la cuarta transferencia.3. la proporción de las fases se ajusta de tal maner que el factor de extracción F sea igual a uno.63 Ejemplo 6.4.P ) Este perfil tiene un máximo cuando r = np. Una vez que se realizan las 400 transferencias...El número de tubo de máxima concentración. La fase pesada es agua y la fas ligera es n-butanol.

. Se basa en la diferencia de solubilidad de los solutos entre dos fases: el caldo biológico y el solvente de extracción. Existe una gran variedad de equipos para realizar la operación de extracción y ésta puede realizarse en forma intermitente o continua.5)] 1 /2 /(200. EXTRACCIÓN a).400)-0. En la extracción se emplean diversos solventes que pueden ser seleccionados combinando criterios establecidos y la teoría que se dispone.298 Solución: CAPÍTULO 6.5 Sumario La extracción es una operación que se emplea para concentrar solutos de interés a partir de caldos biológicos. 6.. ya que en este punto el valor de la exponencial es máximo e igual a uno.La fracción de soluto en el tubo 200 después de 400 transferencias está dada de acuerdo a la ecuación (6.400)= [27r(400)(0.5)(0.47) por: /(r.63) la fracción de soluto / tiene un máximo cuando r = np.-De acuerdo a la ecuación (6. El tubo que tiene la concentración máxima de soluto es: r = np = 400 = 200 b). En el caso de productos como las proteínas se utilizan sistemas de dos fases acuosas inmiscibles que permiten el manejo de estos productos en forma más apropiada. Los métodos dé diseño de los extractores pueden ser gráficos o analíticos y están basados en relaciones de equilibrio y balances de masa.n) = /(200.04 esto significa que solamente el 4% de la concentración de soluto original está presente en el tubo de máxima concentración después de 400 transferencias.

4... 6.465 21.En la separación de Ajmalicina de pKa = 6. se mezcla con un volumen V de una solución que contiene dos polímeros dando origen a dos fases acuosas inmiscibles (E -f R) entre las cuales se reparte el soluto.6 Problemas 6.6.. 10 y 12. PROBLEMAS 299 6. en un sistema de dos fases acuosas inmiscibles en el cual las enzimas C y D presentan coeficientes de partición de KpC = 0.Calcular la selectividad de Ajmalicina a los pH de 2.Un volumen V0 de solución con una concentración C0 del soluto de interés.01 M presenta una disociación del 4 % a 25 °C.5 y KPD = 0.Resp..011.. a). a).Estimar la proporción E/R para que la masa de C en la fase ligera E sea igual a la masa de D en la fase pesada/?.Calcular su pKa b).. expresar el grado de concentración (GC) y el rendimiento (p) en función de V0.Una solución de ácido acético al 0. b). R y Kp. En el caso que el soluto se distribuya preferentemente en la fase superior £".8..3 y Serpentina de pKa = 10.3 1.Se desea separar una mezcla que contiene igual cantidad de masa de dos enzimas.. pH 4 2 6 8 10 12 (3 31. 10 y 12. respectivamente..6. c). dos alcaloides vegetales de estructura muy semejante.77 6. 4..2.¿Qué sistema recominda a para realizar la extracción. E.065 620 7.1.1 6.Resp.Calcular el valor de Kp/Ki para ambas especies a los pH de 2. 6. b). 4.. a). . 4.. 8.Calcular su constante de disociación. se dispone de un solvente en el cual el coeficiente de partición intrínseco es igual para ambas especies.3.? b).621 31. 8. 6.

..2 g/l.¿Cuántas etapas se recomiendan para realizar esta extracción.Resp. si la relación E/R es la determinada en a). en el cual el factor de extracción empleado es igual a 3.. El flujo de la fase pesada R es de 150 l/min.4 % y 87 % 6. 1990) para la eliminación de mercurio(II) de corrientes industriales de desecho.Estimar el rendimiento y la pureza de la extracción de la enzima (7... El coeficiente de partición del Hg(IÍ) en el sistema agua-aceite de jojoba (queroseno) varía directamente con la concentración de jojoba en el queroceno e inversamente con la concentración inicial de Hg(II) en la fase acuosa. b). a). 7 l/min 6.resp.Una solución que contiene 20 g/l de estreptomicina se procesa en un sistema continuo de etapas múltiples. Resp. El coeficiente de partición de la estreptomicina en el sistema a un pH de 4 es de 40. se muestran en la Tabla siguiente: .En el desarrollo de un proceso (Wisniak et al . en un sistema de extracción a contracorriente de 5 etapas. b). EXTRACCIÓN b).7. 1 etapa: 5 g/l.Demostrar que en una extracción diferencial con yi. 2.6. 3 y 10 etapas.Se extrae estreptomicina de un caldo de cultivo utilizando un solvente orgánico.300 CAPÍTULO 6.. 96. la longitud de la columna está dada por: Ka A F .1 1 in x0. Los datos obtenidos en cinco etapas de extracción intermitente utilizando extractante fresco (20 g/l de aceite sulfurado de jojoba) en cada una de ellas.Ky0 6..? a). se emplea como fase extractiva aceite de jojoba sulfurado (acomplejante de Hg II) disuelto en queroseno. 6.Calcular la concentración de estreptomicina en el refinado a la salida en los casos que el sistema conste de 1. = O y con extracción de soluto de la fase E a la fase /?.5.. Estimar el flujo de fase ligera E para reducir la concentración de estreptomicina en la solución de 10 a 0.8..

Calcular la eficiencia de recuperación de cada etapa.005 0.60 2...40 19.00 146..400 146. La resistencia a la transferencia de masa se localiza en la fase ligen dispersa y puede ser caracterizada mediante el coeficiente de transfe rencia de masa dado por: ka = 6 x ID ' donde: 7 I .090 2.. La enzima presenta un coeficiente de partición er el sistema de 0.En una columna empacada con anillos rashing se utiliza ur sistema de dos fases inmiscibles PEG 4000 . b). Respuestas para etapa 3 a).Na^SO^ para extrae] amiloglucosidasa de la fase ligera dispersa (PEG 4000) hacia la fase continua (Na^SO^}.000 0.PROBLEMAS Fase acuosa ppm de Hg(II) Final Inicial 1091.00 0.0 100.600 19.82 % c).8 % b). 1991)...s.Calcular la cantidad de fase orgánica por litro de fase acuosa utilizada en cada etapa y la cantidad total para las cinco etapas. d).Calcular la relación de fase acuosa a fase orgánica empleada en cada etapa (R/E)..9.4 54.0345 (Patil et a/. f).En base a los resultados anteriores que proceso se recomienda si el límite tolerable de Hg(II) es de 0... La viscosidad de la fase dispersé es de 24 x 10~3 Kg/m .Estimar la cantidad de fase orgánica necesaria para procesar un litro de solución acuosa en una etapa y obtener la misma eficiencia que la alcanzada en las cinco etapas.99.Calcular la eficiencia de recuperación global al final de cada etapa.000. e).63 6.499.0 a). c).6 555.005 ppm..09 Coeficiente de partición 301 Etapa 1 2 3 4 5 KP 6.89.0 12.

cuya relación de equilibrio está dada por: x = 2...¿Que flujo R recomienda a para esta operación? a). a).33 y KPC — 3. 60 y 90. c).E/R = 0... Obtener el perfil de concentración de cada uno de los solutos a lo largo de los tubos.Obtener una gráfica de la longitud necesaria de la columna en función de R para las condiciones de extracción anteriores.. 60 y 90. [s~1].Determinar la longitud necesaria de una columna de 56 mrr de diámetro interno.10. respectivamente. Debido a que la cantidad de proteína solubilizada depende fuertemente del pH.E/R = 5 y número de transferencias de 30. [Kg/m — s].¿Cuál de los 9 sistemas recomienda? 6.Las proteínas pueden ser extraídas sin ser desnaturalizadas con soluciones de iso-octano que contengan el detergente aerosol OT. 1053 mm 6. d). 60 y 90. en los siguientes casos: a).En un sistema de extracción fraccionaria tipo Craig los componentes B y C de una mezcla presentan coeficientes de partición de KPB = 0. Se está estudiando una solución acuosa que contiene 0.E/R = 1 y número de transferencias de 30.0. c). Las proteínas se solubilizan dentro de las micelas que forma el detergente... y posteriormente desorberse a un pH diferente.9?/* donde x es la concentración de proteína en la fase orgánica y y* es la concentración de equilibrio en la fase acuosa. ^: Viscosidad de la fase dispersa. b).2% en volumen de proteína. ka: Coeficiente de transferencia de masa. La relación volumétrica . alimentada con un flujo de 985 mm3/s de fase dispersa y 68 mm3/s de fase pesada.11. b).... las proteínas pueden ser extraídas con el solvente orgánico a un pH dado cercano al punto isoeléctrico. EXTRACCIÓN v: Velocidad superficial de la fase dispersa.[m/s].302 CAPÍTULO 6. para producir una disminución del 20 % de la concentración de enzima de la fase ligera.2 y número de transferencias 30.Resp.

8 litros de solución orgánica. PROBLEMAS 303 entre las fases es de 6. y = 0.85 m. en la cual el HTU (basado en la concentración acuosa) es 0.8 litros de solución acuosa por cada 3. Resp.04 p = O.í .6.6.0 m. Calcular la concentración del refinado a la salida y la fracción extraída cuando se utiliza una columna de extracción diferencial de 2.

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En este capítulo sólo se revisa lo referente la etapa de adsorción por considerarse que los principios aquí expuesto pueden extenderse al análisis de las otras etapas. Primen el adsorbente y la solución se ponen en contacto. Al efectuarse la ad sorción el soluto se une preferentemente a la superficie del adsorbent< respecto a otros solutos. es análogo. La concentración de uno o varios solutos de un caldo por medio d( la operación de adsorción requiere cuatro pasos (Figura 7.Capítulo 7 Adsorción.1 Introducción La adsorción es una de las operaciones más utilizadas en la etapa de concentración de caldos acuosos diluidos. 7.1). Una vez concluida la adsorción es necesarií lavar la columna con una solución que no provoque la desorción de soluto de interés. Mediante la adsorción las moléculas de un soluto se concentran en una superficie sólida por la acción de fuerzas intermoleculares entre el soluto y el sólido. operación conocida com« elución. Debidc a la naturaleza de estas fuerzas el fenómeno es fácilmente reversible La adsorción es esencialmente un fenómeno de superficie y debe distinguirse de la absorción la cual implica la penetración de una sustancia en el cuerpo de otra. Es importante resaltar que el análisis de las etapas de adsorción lavado y elución. 307 . Finalmente se efectúa la recuperación del soluto uti lizando un fluido que favorezca la desorción.

.1: Etapas de la adsorción. Copyright ©1990. 1990. Todos los derechos reservados.308 CAPÍTULO 7. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Adsorción e Lavado de impurezas Elución de soluto Figura 7. ADSORCIÓN. Fuente: Clonis.

2 de este capítulo se presentan los fundamentos d la operación de adsorción.El establecimiento de la rapidez de la adsorción con respecto a lo fenómenos difusivos y cinéticos de superficie. antibióticos.7. paralelo. En la sección 7. como la química de la adsorción. serie.El establecimiento de las relaciones de equilibrio y de la capacida de adsorción de los sistemas. las curvas de equilibrio de los sistemas llamadas isotei mas de adsorción y los aspectos básicos de la cinética de la adsorciór En la sección 7. cada vez existe una maye necesidad de profundizar en los aspectos fundamentales de la operació (principalmente en el contexto del procesamiento de caldos biológicos de los cuales se pueden destacar cuatro: • Los tipos de adsorción según el tipo de interacción soluto-adsoí bente. al igual que en otra operaciones de transferencia de masa. . v taminas y proteínas. FUNDAMENTOS 30 En el análisis de la operación de adsorción. .Las condiciones iniciales y de frontera del sistema.Los balances de masa y energía del sistema de adsorción específic (intermitente.3 se describen los principales equipos' utilizados en la operaciones de adsorción y en la sección 7. continuo. o simplemente para la obtención de datos experimentaleí La formulación de algunos de estos modelos requiere: .2 Fundamentos Las operaciones de adsorción son utilizadas en la obtención de varié tipos de productos biotecnológicos como aminoácidos. . etc. columnas en paralelo) optimización. . • Los tipos de adsorbentes.4 se presentan los principie para el diseño de tales equipos.2. 7. Debido a lo anterior.). se utilizan modelos para el diseñe análisis de alternativas (columnas en serie vs. los tipo de adsorbentes.

Iónica . se pueden distinguir cuatro tipos básicos de adsorción (Figura 7. • La cinética de la adsorción. Actualmente se utilizan:diferentes tipos de adsorbentes en la operación de adsorción. ADSORCIÓN. el adsorbente . forma de la partícula y tamaño. tales como: resistencia mecánica.2 Tipos de Adsorbentes En el establecimiento de un sistema de adsorción es necesario seleccionar cuidadosamente el tipo de adsorbente que se va a utilizar. Asimismo. CAPÍTULO 7.Física . En este proceso de selección los principales parámetros a considerar son las propiedades físicas del adsorbente. 7.Hidrofóbica . la cual está fuertemente influida por su carga y su relativa hidrofobicidad. En la adsorción iónica la diferencia de cargas entre el adsorbente y el soluto genera atracciones electrostáticas más fuertes y selectivas.2): . La adsorción hidrofóbica se produce por interacciones entre regiones hidrofóbicas del soluto y el adsorbente.1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente De acuerdo al tipo de interacción del soluto con el adsorbente.Por afinidad En la adsorción física las fuerzas de atracción entre el soluto y el adsorbente son de tipo London-van Der Waals. área por unidad de volumen.2. En el caso de la adsorción física. porosidad interna y del lecho. lo que caracteriza a este tipo de adsorción como altamente selectiva. es de fundamental importancia la capacidad de adsorción del sólido.310 • Las relaciones de equilibrio. 7. La adsorción por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el adsorbente y el soluto.2.

2. a) Física b) Iónica c) Hidrofóbica d) Afinidad. .2: Tipos de adsorción. FUNDAMENTOS 311 interacciones van der Waals interacciones electrostáticas adsorbente /.7. (a) (b) hidrofcibica adsorbente Figura 7.

se efectúa una animación. Las resinas no polares derivadas del estireno-divinilbenceno son utilizadas para la adsorción de solutos no polares a partir de solventes polares. En la Tabla 7.312 CAPÍTULO 7.6). Las amónicas se producen en dos pasos: Primeramente. el soporte o matriz y el ligando. se produce una cloro-metilación del benceno. más utilizado en bioseparaciones es el carbón activado (vegetal).1 se presentan algunas características de estas matrices. También son utilizadas como adsorbentes resinas sintéticas. Las resinas de estireno-divinilbenceno catiónicas se producen en un paso por acción de un ácido sobre el grupo'benceno. El ligando se une a la matriz por medio de un brazo que evita impedimentos estéricos en un determinado arreglo (Figura 7. ADSORCIÓN. Los adsorbentes iónicos sintéticos están formados por matrices de polímeros unidos lateralmente. Las matrices de celulosa activada también son muy utilizadas para adsorción por intercambio iónico. Las resinas basadas en esteres acrílicos tienden a ser más efectivas para remover solutos polares de solventes no polares. dextrano y agarosa (Figura 7.4). . En la adsorción por afinidad el adsorbente consta de dos partes. poliacrilamida (o derivados). /?\ A /K /N Carbón activado Sílíca gel Figura 7. Las matrices utilizadas en la adsorción por afinidad son fabricadas de: celulosa.5). y en menor grado la silica gel (Figura 7. Los adsorbentes utilizados en intercambio iónico pueden ser inorgánicos o sintéticos (Figura 7.3: Adsorbentes físicos. Los inorgánicos como las zeolitas son poco utilizados. En el segundo paso. celulosa modificada.3). A la matriz se le unen grupos funcionales que le dan la capacidad de intercambio iónico.

-CH-CH.H* I Aminación N (CH3)3 N (CH3)2 Resina anión ica CH3 CH2N .CH3Cr CHN . .CHCr CH.- i H2S04 Clorometilación I Resina catiónica SO.4: Tipos de adsorbentes de intercambio iónico: a) Adsorbentes inorgánicos. FUNDAMENTOS 313 A A I Zeolitas /\ /\ Figura 7. Base débil Figura 7. b) Adsorbentes de intercambio iónico derivados del estireno-divinil benceno.7...4: Continuación.2. -CH-CH.- CH-CH.

txc«..NCÍ¡.. «. derivados de celulosa c) Adsorbentes de intercambio iónico A. CHjOH -O OH °~VOH OH OH x^ O_ CHoOH CH2OR R = -PO 3 H 2 -SO2OCH2CH2NH2 . Copyright ©1988. Todos los derechos reservados. v Nc«. . x «. >. N<í.314 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN. CH. Y NcHr^"LP Figura 7. «.5: Adsorción por afinidad. ^. Reproducida con el permiso de Academic Press.4: Continuación. 1988.. a) Soporte de sílice b) ligando fijo c) ligando móvil parte hidrofóbica d) ligando móvil parte hidrofílica e) piridina f) protema Fuente: Torres et al. v xá. ^. v N¿.CH2COOH -CH2CH2NR2 -CH 2 CH 2 NR 3 *X' -C-CH 2 -CH 2 -COOH Ó Figura 7.

7. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Copyright ©1985. Fuente: Yarmush Colton. 1985. Spherosil) — O — Si — OH — O — Si — OH I O Poliacrilamida rv(CH2 — CH — ) Ofe — CH — C — (CH2 — CH — I C= 0 I NH NH f NH C= 0 Copolímero de Hidroximetil metacrilado CH2 1 -C 1 -CHz COOOH2CH2OH CH» CH3 1 1 C CH2— C CH2 C— 1 1 1 OOOOHZCH2OH CO CO 1 1 0 o 1 CH2 OH2 1 CH2 1 O 1 CO -C 1 -CHz CCH3 COOOH2CH2OH 1 1 CH2 1 0 1 CO CH2 — C CH2 1 COOOH2CH2OH C — CH21 CH3 CH2OH Celulosa OH Figura 7.2. Todos los derechos res vados. .6: Matrices de adsorción por afinidad. FUNDAMENTOS 315 Soporte (marca) Matrices comerciales Estructura química CH2OH •O Agarosa OH Materiales silíceos (vidrio de poro controlado.

. de ligandos Costo Sílice buena alta buena baja bajo bajo Material Celulosa | Poliacrilamida buena buena alta alta buena baja baja baja bajo alto medio bajo ADSORCIÓN. Inicialmente se activa la matriz con bromuro de cianógeno. Tabla 7. . Antígenos para adsorción de anticuerpos.Pseudoespecíficos no biológicos: Colorantes y Metales. Posteriormente se puede unir un radical por medio de un grupo amino para formar un derivado de la isourea.Bioespecíficos estrictos: Sustratos para adsorción de enzimas.7 se presenta uno de los procedimientos utilizados para activar una matriz de agarosa.8): .316 CAPÍTULO 7. Proteínas acarreadoras para obtención de hormonas. aminos y carbonilos.Bioespecíficos amplios: Cofactores y lectinas. Generalmente los grupos funcionales utilizados son hidroxilos. . En la Figura 7.Pseudoespecíficos biológicos: Aminoácidos.1: Propiedades de matrices. Propiedad Estabilidad Reactividad Permeabilidad Especificidad No. Agarosa buena baja buena alta alto alto Existen varios procedimientos para inmovilizar el ligando en la matriz. Sondas para obtención de ácidos nucleicos. del ligando y de la estabilidad de éstos. . los cuales dependen del tipo de grupo funcional sobre la matriz. lo cual se efectúa mediante dos pasos químicos. Los ligandos son moléculas de alta afinidad por el soluto de interés y pueden ser de varios tipos (Figura 7.

1985.I 7.2. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. b) Reacción del éster de cianato con un derivado amino para obtener un derivado de isourea. Copyright ©1985.c> C=NH ||_(X> Amidocarbonato o ^-o— c— NH Carbamato b) '/A 3—CN + NHj—R- Figura 7.7: a) Activación de matrices con bromuro de cianógeno. . * .H _ = -° Ester de aanato ¿24. FUNDAMENTOS 317 OH BrCN. Fuente: Yarmush y Colton. Todos los derechos reservados.

ugandos Pseudobioespeáficos Figura 7. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Adaptada de: Vijayalakshmi. .318 CAPÍTULO 7.8: Tipos de ligandos en adsorbentes de afinidad. ADSORCIÓN. Copyright ©1989. 1989. Todos los derechos reservados.

y es la concentración de soluto en la solución. La isoterma de Freundlich se describe por medio de una ecuación exponencial empírica de la siguiente forma: q = Ky" (7. Las isotermas son parte esencial para modelar la adsorción y por lo tanto para el diseño. determinándose K con la ordenada en el origen y n de la pendiente de la recta que se obtiene. Las isotermas irreversibles son características de sistemas altamente específicos.7.2. ya que se puede obtener una buena adsorción aún a concentraciones bajas de . pero puede ser utilizada para aproximar las otras isotermas en la región de baja concentración de soluto. FUNDAMENTOS 319 7. Tanto K como n deben ser obtenidas experimentalmente. la adsorción por afinidad generalmente presenta isotermas tipo Langmuir. Las isotermas tipo Freundlich normalmente se presentan en sistemas-' de adsorción por intercambio iónico. la isoterma se llama favorable. y la sensibilidad del proceso respecto a la concentración del producto. En los procesos de adsorción que se presentan en las bioseparaciones existen cuatro tipos básicos de isotermas (Figura 7.1) donde q es la cantidad de soluto adsorbida (incluyendo el soluto en el líquido de los poros del adsorbente) por cantidad de adsorbente. Las constantes de la isoterma de Freundlich pueden ser obtenidas por medio de una gráfica log-log de los datos experimentales. En este tipo de experimentos generalmente se pone en contacto cantidades iguales del adsorbente con soluciones de soluto de diferentes concentraciones y se mide las concentraciones una vez alcanzado el equilibrio. Cuando las isotermas de adsorción son cóncavas hacia el eje de las abcisas o sea cuando n < 1.3 Relaciones de Equilibrio El análisis de los procesos de adsorción requiere de datos de equilibrio que se expresan normalmente como isotermas de adsorción. la de Langmuir y la irreversible (Hall et a/. n es una constante adimensional y K es una constante cuyas unidades dependen de n. cálculo de eficiencias y costos de la adsorción. La isoterma lineal es menos común. la cantidad de adsorbente requerido. Las isotermas nos permiten estimar el grado de purificación que puede ser alcanzado.2.9): la isoterma de Freundlich. 1966). la lineal.

Todos los derechí reservados. . Fuente: Belter et a 1988.320 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓh Freundlich (común ^ empírica) Figura 7. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988.9: Isotermas de adsorción más comunes.

Se propone que sobre la su perficie del adsorbente existen sitios específicos en los que las partícula de soluto se unen reversiblemente.La. En el sentido inverso la adsorció es proporcional a la concentración de sitios ocupados. se puede obtener una recta de pendiente Kd/q0 y ordenada en el origen l/q0. En este caso q = q para cualquier valor de y.3: 9 <io y q0 de tal manera que en una gráfica cartesiana de l/q vs 1/y. unidades de q0 y K¿ de esta isoterma son las mismas que las de q y y respectivamente. la adsorción puede ser expresada en forrr de una ecuación química de la siguiente forma: . Estas constantes deben ser obtenidas experimentalmente. La ac sorción en el sentido directo es proporcional a la concentración de solut y a la concentración de sitios vacios. se llaman desfavorables. Las isotermas concavas hacia el eje de las ordenadas o sea para n > 1.2) en este caso los datos experimentales se grafican en coordenadas cartesianas para determinar K.7. Las isotermas tipo Langmuir están dadas por expresiones de la siguiente forma: q= V°y i-? Q^ (7 3) - donde q0 es la capacidad máxima del adsorbente y K¿ es la constante de equilibrio de desorción.2. De acuerdo a lo anterior. FUNDAMENTOS 321 soluto. La forma de las isotermas de Langmuir puede explicarse mediant un mecanismo teórico bien fundamentado. coexisten sitios ocupados por soluto y sitios vacíos. Las isotermas lineales pueden ser descritas por la ecuación de una recta que pasa por el origen de la forma: 9 = Ky (7. En este caso es preferible manejar los datos experimentales con la forma reciproca de la ecuación 7. Un caso particular de la isoterma de Langmuir se presenta cuand< K¿ es muy pequeña y la adsorción es irreversible. En un momento dado durante 1 adsorción.

Sin embargo.7) Combinando las ecuaciones (7.. o están ocupados por el ion de soluto o están ocupado.9 donde HR representa los sitios de intercambio iónico en estado ñor mal del adsorbente. En equilibrio la constant de desorción está dada por: .6) El número total de sitios activos para la adsorción es constante e igual al número de sitios vacíos más los sitios ocupados o sea: [sitios totales] — [sitios vados] -j.[sitios ocupados] (7.= —7-rr. y NaR representa los sitios de intercambio una ve que ha sido intercambiado el ion de soluto.3) puede ser obtenida a partir de la expresión (7..— KI [sitios ocupados] (7. [sitios total es][soluto] [sitios ocupados]J = — — : 1 F Kd + [soluto] v(7. ADSORCIÓN. y—. Las isotermas de intercambio iónico pueden ser racionalizadas er forma análoga. es decir este mecanismc fundamenta la expresión de Langmuir. por el ion que normalmente está unido a la superficie del adsorbente La expresión final depende del número de iones de soluto que se Ínter cambian por ion de adsorbente.-j..322 CAPÍTULO 7.8 l debido a que q es proporcional a la concentración de sitios ocupados y q0 a la concentración de sitios totales. soluto -f sitios vados ^ sitios ocupados (7-5) En el equilibrio se puede definir una constante de equilibrio de desorción K¿ de acuerdo con la siguiente expresión: k-2 [soluto][sitios vados] I<d . la ecuación (7. En el caso de un intercambio monovalente característico de la resinas sintéticas la adsorción puede ser expresada como: Na+ + HR ^ NaR + //+ (7.8).7) se puede llegar a la expresión: . en este caso los sitios de adsorción en ur momento dado.6) y (7.

10b) no produce u linea recta.2.1. entonces la isoterma no es del tipo Freundlich.7.1 Combinando las ecuaciones (7.11) se puede obtener la cuación: [NaR] = [RT][Na +1 Kd[H+] + [Na- (7.10. FUNDAMENTOS [Na+][HR] [NaR][H+] 32 (7.1: como q es proporcional a [7Va. En el caso de adsorciones iónicas no monovalentes el análisis análo frecuentemente conduce a expresiones tipo Freundlich. Ejemplo 7.10) y (7. Los datos de equilibrio de la adsorción de ASB en Q-Sefarosa presentan en la Tabla 7..ñ] y q0 es proporcional a [R ]. como en el caso de que se utilice una soluci< amortiguadora. adsorción iónica monovalente puede ser descrita por medio de una e presión tipo Langmuir.10a los datos no se ajustan a una isoten lineal. acuerdo con la Figura 7. Encontrar la expresión matemática de la isoterma que mejor ajuí los datos. La gráfica log-log de los datos (Figura 7. siempre y cuando la concentración [H+] pe manezca constante.H La concentración de radicales R totales en la superficie del adso bente está dada por: [R~] = [NaR] + [HR] (7. . Solución: La solución se presenta en forma gráfica en la Figura 7.Adsorción de Albúmina de Suero de Bovii (ASB) a pH = 7 en un adsorbente aniónico Q-Sefarosa.2.

la velocidad de la adsorción o el tiempo necesari para alcanzar una cierta separación (Figura 7.885 1.00 73.00 78.00 5.4 Cinética de la Adsorción El estudio de las isotermas de adsorción nos permite determinar par un sistema soluto-adsorbente dado.81 0.00 2.70 1. columna. La pendient de la recta es igual a 1.00 10. Tabla 7. por lo que q0 = 80 mg/ml.0333 0.) y d tamaño del equipo donde se realizará la operación.0135 0. composición y presión).0229 0. Los datos ajustan la isoterma de Langmuir (Figura 7. Sin embargo.10 -1. con de la configuración del sistema (intermitente.0375 x 10~3.30 4.083 mg/ml.00 0. temperatura. E la mayoría de los casos las interacciones soluto-adsorbente no ocurre instantáneamente.477 1. Todos los derechos reseí vados.37 0.640 1. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.0130 0.25 i/q 0.20 56.70 0.868 1.30 43.2: Datos de equilibrio.10c). La velocidad efectiva de la adsorción depende tanto de las cond cienes de operación (flujo. El estudio de an .85 0.05 30.752 1.60 Log(q) 1. mediante el empleo de coeficientes d transferencia de masa.894 ADSORCIÓN i/y 20.0128 Fuente: Draeger y Chase.0177 0.0125. La oí denada en el origen es 0.324 CAPÍTULO 7. entonces K¿ = 0.2. 1990. 7. y mg/ml q mg/ml Log(y) 0. En el caso que la adsorción sea bastante rápida. etc.50 0.53 -0.00 0. Copyright ©1990.11). el grado de separación que pued ser logrado y la sensibilidad del proceso con respecto a la concentració del soluto.00 -1. el sistema pe manecerá esencialmente en equilibrio y el modelo se simplifica.00 1.00 76. para el desarrollo del modelo de la adsorció es necesario poder establecer.

00 2.00 -0.6 1..2 1.0 1.00 Figura 7. b).isoterma de Freundlich. FUNDAMENTOS 32 80 — 70 — 60 q (mg/ml) 50 40 30 20 10 0.Ajuste de datos. a)..50 log(y) 0.2.Isoterma lineal 2.8 log(q) 1.0 -1 50 -1.4 1.10: Ejemplo 7.7.50 Figura 7.10: Continuación.00 y (mg/ml) 3..1.. ..00 1.00 0.

015 0.010 0.000 I 10 I/y I 15 Figura 7.005 0.020 1/q 0.326 CAPÍTULO 7.c)... .025 0. ADSORCIÓN.Isoterma de Langmuir.10: Continuación.030 0. 0..

Todos los derechos reseí vados. FUNDAMENTOS 327 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T. 1990. de Masa Modelo del Adsorbedor Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 7. Copyright ©1990.2.7. Adaptada de: Wang.11: Diseño de adsorbedores. . Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

. . En los procesos de adsorción se utilizan materiales porosos que ofre cen una gran área por unidad de volumen con el propósito de recupera la mayor cantidad de soluto posible en un volumen dado.. ADSORCIOh bos efectos se divide en dos grandes conceptos : .Resistencia a la difusión en el seno del adsorbente. . . el soluto tiene que pasar del seno de la fase líquida a 1 superficie del adsorbente (Figura 7. es decir con siderando el comportamiento de una partícula de adsorbente o un ele mentó de volumen de un sistema.Resistencia de la película del líquido que rodea el adsorbente.En algunos tipc de adsorbentes el soluto difunde a través del seno del adsorbent< A este fenómeno se le conoce como difusión en la fase del adsoí bente. .. la cual es un proceso finito pero generalmente mí rápido que los procesos anteriores.328 CAPÍTULO 7. .Resistencia a la reacción en la superficie.Resistencia a la difusión dentro del poro. Varias resistencias al movimiento del soluto existen en este preces que pueden visualizarse principalmente como: .Pr mero el soluto difunde desde el seno del líquido a través de 1 película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente.Los efectos de mezclado.El soluto una vez situad en el sitio de adsorción se une a éste por medio de una reaccic de superficie. Mecanismos de Transporteí El estudio de los mecanismos de transporte consiste en establecer la expresiones de la rapidez de la adsorción a nivel local. generalmente la adsorción se efectúa principalmente denti del poro.Los mecanismos de transporte (físicos y químicos).Debido a que el área de 1 superficie interior del poro es mucho mayor que la superficie ext< rior.. Para que un partícula de soluto pueda ser adsorbida en la superficie de un poro de adsorbente.12). por lo que el soluto debe difundir a través del líquido i interior de los poros.

Adaptada de: Levensj 1962.7. FUNDAMENTOS 32 a) Resistencia a la difusión al interior del poro d) Resistencias de la superficie Resistencia de la película de líquido Figura 7. Todos los den reservados. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1962. .2.12: Resistencias en la adsorción.

[M/L3]. [L2/L3].: Coeficiente de transferencia de masa. El parámetro a puede ser correlacionado con la porosidad del leche 6 (volumen del líquido sin incluir el líquido de los poros/volumen de lecho) y el diámetro de la partícula de adsorbente dp de acuerdo a le expresión: (7. R: Velocidad de adsorción referida al volumen del lecho (adsorbente y solución). y*: Concentración hipotética de soluto en el líquido. En este caso la expresión de la velocidad d< adsorción puede expresarse como: R=kLa(y-y*) donde: &£.13 a: Área de adsorbente por unidad de volumen de lecho (adsorbente 3 líquido).Las resistencias an teriores no actúan sólo en serie o en paralelo como puede apreciarse ei la Figura 7. Cuando la resistencia de la película es mucho mayor que la de poro o la de la reacción de superficie. (En la literatura también se utiliza R' = R/e velocidad de adsorciór. [M/L3].330 CAPÍTULO 7. la velocidad de adsorción est. Generalmente 1.14) «p . y: Concentración de soluto en el seno de la fase líquida. ADSORCIÓN Control de la resistencia en la película.. por volumen del líquido). [M/L3t]. Particularmente. la resistencia de la difusión en el por* no puede relacionarse directamente con las otras dos.12. controlada a nivel local por el flujo del soluto a través de la películ que rodea al adsorbente. [M/(T—L2—M/L3 líquido)] (7. en equilibrio cor la concentración de soluto en el adsorbente. resistencia de la película o la del poro o una combinación de ambas controla la velocidad de adsorción local.

Re y Se. .: Para tanques agitados: -2/3 7 18 dp Para columnas: ' \PL^AB (7. [m2/s].15.2. y Sh. FUNDAMENTOS La resistencia de la película por si misma rara vez controla la rapidez de la transferencia de masa.17 (AB En el caso de proteínas se han utilizado las siguientes correlacione para estimar &£. excepto en los casos en que la partícula de adsorbente es pequeña y la difusividad en el poro grande. [Kg/m — s].45/?e1/2Sc1/3 estimándose la difusividad mediante la expresión: = 9. : Viscosidad.19 S/i-2-f 1.16 (7.7.4 x 1(T15 T (7. Para sistemas de adsorción en columnas. fc¿ generalmente se puede correlacionar con una expresión de la forma: Sh = Cl-i.2C (7.C2(Re)a(Sc)b (7. Reynolds y Schmidt dados por las siguien tes relaciones: Sh = kLdf (7. ^2. son los númeroí adimensionales de Sherwood. donde Ci.21 donde: AB'.Difusividad. a Y b son constantes.

La ecuación (7. [L]. [°K]. r: La coordenada radial al interior de la partícula. [(L2/t)].332 T: Temperatura. La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: R=-aDs^\r=Ra (7. CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN Control de la difusión del soluto en el seno del adsorbente. MA\ Peso molecular soluto. q: Concentración de soluto en la fase sólida.q) ? (7. [M/L3].23) or donde Ra es el radio externo de la partícula.24) q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de la fase líquida.La difusión en la fase sólida del soluto una vez que ha pasado del sene del líquido a la fase sólida. Considerando una geometría esférica uniforme el balance de soluto en la partícula está dado por: donde: Da: Difusividad efectiva del soluto en la fase sólida. ips es un factor de corrección .22) suele ser aproximada utilizando una fuerza impulsora lineal de la siguiente forma: | = ^sksa(q* . o en líquidos utilizados para impregnar la partícula porosa. se presenta en algunos sólidos homogéneos permeables como las resinas que se utilizan en intercambio iónico o en adsorbentes con porosos cubiertos con películas móviles.

e.28) La velocidad de transferencia de masa entre las fases puede ser expresada por la ley de Fick como: r=Ra .26) Control de la difusión del soluto en la fase líquida al interior de los poros.. ks es el coeficiente de transferencia de masa (L 3 (total)/área-tiempo).>2. qi\ Concentración de soluto en la fase sólida.e)i¡>sksa(q* .-: Porosidad de la partícula al soluto de interés.27) puede ser escrita como: | dt <9r2 2% r dr (7.a = 600. Con la linearización anterior la expresión de la velocidad de transferencia de masa por unidad de volumen de lecho es: R= (1 .)f (7. [M/L3]. [L3/Z/3]. Dp: Difusividad efectiva del soluto al interior del poro. [M/L3]. ot \ dr2 r or -d-. hasta el sitio de adsorción.27) yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro.q) k*a se correlaciona con la difusividad mediante la ecuación: (7. (7. [ L 2 / t ] .Cuando la velocidad de adsorción está controlada por la difusión del soluto al interior de los poros de la partícula de adsorbente. FUNDAMENTOS 333 Dimensional que se introduce al linearizar la expresión.25) k<. el balance de soluto al interior de la partícula está dado por la expresión: o. Para el caso en que la acumulación del soluto al interior del poro sea mucho menor que la velocidad de la adsorción la ecuación (7.

34) . reversible o irreversible. La ecuación (7.30) donde Y0 es la tortuosidad del adsorbente (una medida de la estructura de los poros) y DAB es la difusión molecular del soluto en un líquido libre de adsorbente. Dos expresiones comunmente utilizadas principalmente para sistemas de intercambio iónico.k2q) (7. kpa puede correlacionarse con la difusividad efectiva del poro mediante la siguiente expresión: f^ (7. En las expresiones cinéticas más utilizadas la reacción de superficie es tratada como una reacción química.334 CAPÍTULO 7.28).Generalmente la reacción de adsorción en la superficie del adsorbente es mucho más rápida que los otros mecanismos y rara vez es el mecanismo controlante. ADSORCIÓN.. q es la concentración promedio de soluto en el adsorbente. para líquidos la difusividad Dp puede ser expresada como: Dp = ^^ *o (7. r) H= ysp'vp ^*f — *j) (<-! <tc\\ (7.33) Control de la reacción de superficie. puede aproximarse utilizando una fuerza impulsora lineal como la siguiente: VA de tal manera que. son: Cinética reversible de primer orden: R = e(kiy .32) donde q* es una concentración hipotética de equilibrio con la concentración de soluto en el seno de líquido . qx es la concentración de la fase sólida en equilibrio con la concentración y A de la solución que se va a tratar y ifrp es un factor de corrección por linearización. de un cierto orden.

FUNDAMENTOS Cinética reversible de segundo orden: R - (7. largas donde se presentan irregularidades en el flujo (canalamiento) o ei el mezclado (espacios muertos. en función d( cual se puede definir un coeficiente aparente de transferencia de mas dado por: (7.2. difusión molecular o dispersión axial).35. de un mezclado imperfecto.13). es el modelo d flujo tapón con dispersión (Figura 7. Esta situación es característica de columna. Es conocido que para flujo laminar de líquidos en lechos empacadc (caso más común) el número de Reynolds basado en el diámetro de h partículas del lecho es menor a 10.7. se agrupa! en el concepto del coeficiente efectivo de dispersión axial. Bajo esta consideración el númei I . es necesario considerar algunos aspectos fundamentales d este fenómeno. donde los efectos de la dis persión axial debida a remolinos y de la difusión molecular. En la construcción de algunos modelos de adsorción no se considerai los efectos de mezclado y de flujo no ideal. Sin embargo. debido . [L2/t]. [L/t]. v: Es la velocidad superficial de flujo. Uno de los modelos más utilizados para describir la desviación de comportamiento ideal del flujo al interior de columnas.36 donde: E: Es el coeficiente de dispersión axial. q0 es la capacidad máxima de adsorción del adsor bente. donde k\ y k% son las constantes cinéticas de adsorción y desorción respectivamente. que en el proceso de escalamiento de columnas este efecto puede se importante. Efectos de Mezclado La velocidad de adsorción efectiva también puede disminuir por efecto.

Copyright ©1962.1 1000 2000 Re = Figura 7. . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.14: Dispersión en lechos empacados.13: Modelo de flujo tapón con dispersión. Todos los derech reservados. 1962. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Pe: 0. 1962. Todos los derech reservados. Adaptada de: Leven. Adaptada de: L venspiel. Copyright ©1962. ADSORCIÓI Perfil plano de velocidad Fluctuaciones debidas a difusión molecular y turbulencia - Figura 7.336 CAPÍTULO 7. piel.

. FUNDAMENTOS 337 de Peclet (el cual es una medida del grado de dispersión en la columna) toma un valor constante de 2 (Figura 7. Sin embargo en algunos sistemas. la cinética de la adsorción puede ser descrita en forma más adecuada utilizando un modelo donde la combinación de resistencias (por ejemplo película y poro) describen en forma más precisa la cinética.36) y (7.14) entonces. Las ecuaciones (7.38) Resistencias Combinadas En la elaboración de un modelo cinético se puede suponer que una resistencia a la transferencia de masa es la controlante. ~^ = r~ + r ( T ' 39 ^ donde K0 es el coeficiente global de transferencia de masa referido a la fase líquida. de tal manera que la expresión de la velocidad de adsorción se puede aproximar a: R = kda(y .7.2. En estos casos. la combinación de resistencias se presenta por medio de un coeficiente de transferencia de masa global que agrupa el efecto de las resistencias individuales. Si se considera como ejemplo el caso de la resistencia de la película y la del poro actuando en serie. lo cual simplifica la solución matemática del modelo de adsorción.y*) (7. para el cálculo del coeficiente global se deben sumar los inversos de los coeficientes individuales (para equilibrios lineales). Pe = ^ = 2 hi .37) donde Pe es el número de Peclet (adimensional). (7.37) permiten obtener una expresión para el coeficiente aparente de transferencia de masa por dispersión. Para el establecimiento del coeficiente global de transferencia de masa es necesario fijar la forma en que las resistencias individuales están relacionadas: en serie o en paralelo.

15: Sistemas de adsorción tipo tanque agitado.— Ad Adsorbente 0 o 0 0 bo Solución 0 o 4. En este tipo de arreglo se cuenta con varias columnas operando en serie.16). Estas columnas pueden ser operadas simulando un sistema a contracorriente mediante el sistema de carrusel (Figura 7. se avanza la posición de la alimentación a la siguiente columna. La columna agotada se descarga y posteriormente se convierte en la columna final de la serie. simulándose una operación a contracorriente. Este tipo de sistemas son poco usados a nivel industrial por incosteables. Este tipo de arreglo se considera útil para el tratamiento directo de caldos . Los equipos industriales de adsorción más empleados son los tipo columna de lecho fijo.338 CAPÍTULO 7.— So o ° 0 cd"^ O 00°° ° 0 00°° o °O o (a) Tanque agitado intermitente 0 °O o*" —V (b) Tanque agitado continuo Figura 7. pero resultan muy útiles en la experimentación de laboratorio para la obtención de datos de diseño. ADSORCIÓN. Las operaciones de adsorción pueden llevarse a cabo en tanques agitados. 4- Adsorbente 0 ° O 0 Oo O4. <^_ _^> <=__ _--> r - 0 0 O ° 0 Q(~\ 0*. En los equipos de lecho fluidizado las partículas de adsorbente se suspenden mediante un flujo ascendente de la solución de interés. Cuando se agota la columna que está siendo alimentada.15). en forma intermitente o continua (Figura 7.

EQUIPOS DE ADSORCIÓN F XA' 339 oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo oooo T y(Ut) F a) Columna de lecho fijo Solución Alimentación • "1 A ~l B 1 c L_ ~l r E de lavado Qdol D L_ L_ 1 ^^^ Se)luc»ón as otada Alimentación Solución de lavado Cido2 T Producto Solución agotada .?°dn0ae Alimentación Cido3 77 T Solución Producto agotada b) Sistema de Carrusel Figura 7.7.3.16: Adsorción en columnas. .

suprimiendo la operación sólido-líquido previa a la adsorción. Con esta misma intención existen desarrollos donde se emplea una combinación de un tanque adsorbedor y uno desorbedor operando en forma continua (Figura 7.17).340 CAPÍTULO 7. con sólidos en suspensión. . ADSORCIÓN.

Reproducida con el permiso de la American Chemical Society.17: Adsorción en caldos completos. 1987. Copyright ©1987.7. EQUIPOS DE ADSORCIÓN Solución agotada 341 y Sólidos celulares Altura de lecho expandido Altura de lecho sedimentado - Solución de lavado J a) Adsorción en lecho fluidizado F Alimen lactón Soluá ande lav¡UlO Solu ción de e ución Etapa de adsorción 0 o dbo °oo 0 ° 0 °n° O O o^cT O~o O° 0^> IX F+ ' v 0 <PoOo~ J> O°OoO "M f XI 0 o d0 V o o 0 ° 0 °n° 0 O Etapa de desorción O F Producto b) Adsorción continua con recirculación de adsorbente Figura 7.3. . Todos los derechos reservados. Copyright ©1990 y con el permiso de Nature Publishing Co. 1990 y Pungor et a/. Adaptada de: Gailliot et a/.

342 CAPÍTULO 7.Etapas necesarias o longitud de una columna. . gran parte de los datos de equilibrio o las . . Las operaciones de este tipo son utilizadas cuando la capacidad del adsorbente es muy alta. En general los arreglos más comunmente empleados son: • El tanque agitado intermitente.Cantidad de adsorbente necesario.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes En una operación de adsorción tipo tanque agitado intermitente el adsorbente se agrega a la solución dentro de un tanque. .11) permite estimar algunos parámetros importantes como: . ADSORCIÓN 7. En esta sección se revisa la integración de estos cuatro aspectos en el diseño de arreglos específicos de sistemas de adsorción.4 Diseño de Adsorbedores El diseño de adsorbedores mediante modelos (Figura 7. 7. Sin embargo. En las secciones 7. A escala industrial estas operaciones son poco utilizadas por incosteables.3 se han revisado los primeros dos aspectos. se agita la suspensión y posteriormente se separa la fase líquida y sólida. debido a que los balances y condiciones de frontera son característicos de cada tipo de arreglo. los balances y las condiciones de frontera. las expresiones de la velocidad de adsorción. • Las columnas empacadas de lecho fijo.4.2 y 7. • El tanque agitado con alimentación continua. Como se estableció en la introducción de este capítulo la formulación del modelo requiere de los datos de equilibrio de sistema.Tiempo necesario para llevar a cabo el proceso.Concentración de soluto al final de la adsorción (pérdidas o eficiencia).

llamada linea de operación. Es importante mencionar que en algunos casos. Asimismo. las operaciones de lavado y elución se realizan en tanques agitados en forma intermitente. Si se proporciona un tiempo de contacto adecuado se alcanza el equilibrio entre las fases. La ecuación (7. por ejemplo: q = Kyn (7.18 puede ser expresado como: FyA + SqA = Fyi + Sq2 (7. respectivamente. si el tiempo de contacto es menor que el necesario para alcanzar el equilibrio la operación no será 100 % eficiente. La expresión de equilibrio es la isoterma que depende de cada tipo * de adsorción. En el caso de adsorciones lentas. y A y 2/2 son las concentraciones de soluto en el líquido al inicio y final del proceso.41) puede arreglarse para expresarse como la ecuación de una línea recta. . Por otro lado. ya sea en forma gráfica o en forma analítica. DISEÑO DE ABSORBEDORES 343 cinéticas de adsorción para otro tipo de diseños son obtenidos en este tipo de arreglos. una alternativa de diseño es utilizar curvas de equilibrio prácticas que tomen en cuenta directamente la eficiencia de etapa. considerando tiempos de contacto menores a los del equilibrio real. Bajo esta consideración el análisis de este tipo de operación se simplifica. q¿ y <?2 son las concentraciones de soluto en el adsorbente al inicio y final del proceso.40) El balance de masa del soluto de acuerdo a la Figura 7. En el análisis que sigue se considera que cada etapa es una etapa ideal. y sólo requiere de la combinación de ¡Jas expresiones de equilibrio y los balances de masa. por lo tanto el adsorbente y la solución están en equilibrio al término de la operación (o bien una etapa real si se utilizan curvas de equilibrio modificadas). Considérese una operación tipo tanque agitado intermitente.41) donde F es la cantidad de la fase líquida y S la cantidad de adsorbente (se suponen constantes como es el caso para soluciones diluidas de caldos biológicos).7.4.

2.18c. 92 = qA + . #2) al final del proceso. Debido a que la curva de equilibrio es muy favorable para este proceso.2/2) (7. Ejemplo 7. sólo cuando la concentración en la solución es muy baja la concentración del soluto en el adsorbente . La estreptomicina se recupera utilizando adsorción por intercambio catiónico.42) se representa en la Figura 7.344 CAPÍTULO 7. '••::••.18: Adsorción intermitente. t=t (b) Sq Curva equilibrio y (c) Figura 7.Adsorción de estreptomicina.42) La solución gráfica de las ecuaciones (7. ADSORCIÓN ^o o o 0 °0'°0 o db o O 0 0 OO t=0 (a) Sq. Se ha observado que 1.40) y (7.. La intersección de la curva de equilibrio con la línea de operación permite calcular las concentraciones de equilibrio (7/2.56 g de este antibiótico pueden ser adsorbidos por cada gramo de resina. donde la curva de equilibrio utilizada para la ilustración refleja una adsorción favorable (n < 1).

Ejemplo 7.QA) = F(yA . Como puede observarse se requiere una gran cantidad de adsorbente. Estimar la cantidad de resina necesaria para procesar 100.615 0 de adsorbente. sin embargo el problema que significa el movimiento continuo de los sólidos. Esto implica que sería adecuada una operación continua ..Adsorción de fenilalanina.4. La adsorción de fenilalanina en un adsorbente de poliestireno (amberlita XAD-2) puede ser descrita por la siguiente isoterma: q = 6.y2) con los valores: <M = 0 q2 = 1.000 1x6 g/l 1-560/0 — 384. conlleva a utilizar con más frecuencia operaciones semi-continuas.56 g/g 7/2 = 0 se puede calcular S: s = s = S FyA <12 100. DISEÑO DE ADSORBEDORES es 345 menor de este valor.000 / de un caldo de fermentación que contiene 6 g/l de estreptomicina en una operación intermitente. Solución: El balance de masa para esta operación es: S(q-2 . estimar: . Si se ponen en contacto 300 g de adsorbente con 2 litros de solución que contiene 15 g/l de fenilalanina.7.3.1 x 10~V'9 donde q tiene unidades de g/g y y de g/l.

02 (15.06 q (g/g) 0.346 CAPÍTULO 7. a) Las composiciones en el equilibrio. a) La curva de operación y de equilibrio se grafican en la Figura 7.0420/0 = 8. Solución: Utilizando el método gráfico el balance de masa para esta operación (ecuación 7.19.19: Solución gráfica del Ejemplo 7. permite encontrar la ecuación de la línea de operación.3.0) o.io 0. por lo tanto: 92 = 0.42).04 0. ADSORCIÓN o. b) El porcentaje de recuperación.6 g/l 2/2 .oo i 10 I 12 I 14 i 16 Figura 7. el punto donde intersectan representa las condiciones al final de la operación.08 0.

Si se utiliza un proceso intermitente en equilibrio. La isoterma de adsorción de esta impureza en amberlita XAD — 2 — CHi — CH<¿ — Br.8.4. La principal impureza en el proceso de obtención de cefalosporina C es la DAC-C.0. : con una concentración de 2 g/l. para recuperar el 90 % de la impureza?.6 ~~l^~ RE = 43 % RE = Ejemplo 7. adsorbente es necesario agregar a 2 litros de una solución de DAC .C . está dada por la siguiente expresión: donde q está en g/g y y en g/l. a un pH de 2. ¿ qué cantidad de f h .Adsorción de Desacetilcefalosporina C (DACC). Del balance de masa se obtiene: en el equilibrio: 92 . Solución: Debido a que la isoterma es lineal se facilita una solución analítica al problema. DISEÑO DE ABSORBEDORES b) El porcentaje de recuperación puede ser expresado como: FyA - 347 FyA y A -y2 15-8.0877/2 ..7. utilizando amberlita XAD-2 modificada.4.

9 g En la adsorción intermitente puede considerarse el proceso de transición del sistema de su estado inicial hasta su estado final..96 A/? = 28 Kg/m 3 Proteína: MA = 150. Datos: Adsorbente: dp = 90 x 10'6 m GÍ = 0. S = 206. Ejemplo 7.348 y de acuerdo a la recuperación deseada.000 daltons Kd = 0. #2 = 0. Se desea predecir la variación de la concentración de ImG en un sistema experimental intermitente (Figura 7.1 M de tris HC1 a pH=7 y a 25° C. El equilibrio del sistema es tipo Langmuir.Adsorción de Inmunoglobulina G (ImG) en protema A inmovilizada en una matriz de agarosa en un sistema intermitente.019 mg/ml q0 = 40 mg/ml Dp = 6x 10~12 m2/s .2 g de soluto/litro del balance de masa. En el siguiente ejemplo se revisan algunos de los casos particulares de la adsorción intermitente.5.20). La adsorción se efectúa utilizando proteína A inmovilizada en una matriz de Sefarosa B en una solución amortiguadora al 0. Este proceso está descrito por el modelo en estado no estacionario del proceso. CAPÍTULO 7. el cual como ya se ha mencionado depende del mecanismo controlante de la adsorción. ADSORCIÓN Combinando las dos expresiones anteriores se puede encontrar la intersección de la curva de operación con la de equilibrio.0174 g de soluto ¡g de adsorbente y-2 = 0.

DISEÑO DE ADSORBEDORES 349 Adsorbente en suspensión Filtro Baño de agua agitado Figura 7. .20: Sistema experimental de adsorción intermitente con agitación..4.

s e = 0. en este ejemplo se desarrolla una solución empleando tres modelos diferentes.99 yA = 0. ADSORCIÓN Solución: p = 1000 Kg / m3 HL = 9. Primero se pueden realizar los cálculos comunes a las tres soluciones.5 x 10~n - . [m2/s] T: Temperatura absoluta.5 x 2 771 S -4 DAB = 5. La difusividad de la proteína puede ser estimada por medio de la siguiente correlación empírica: .5 mg/ml El coeficiente de transferencia de masa de la película puede ser estimado en este sistema intermitente utilizando la siguiente correlación: .Masa molecular de la proteína.350 CAPÍTULO 7.5 x 10~4 Kg/m . a) Cálculo de la difusividad: 1 T DAB = 9. [Daltons]. Solución: Para mostrar el uso de modelos cinéticos.__ = 9.n Q1 0.4 x 10~15 x 298 9. A/9 es la diferencia de densidad entre el adsorbente y el líquido y m es la viscosidad del líquido.31 / 1*1 \PPD AB donde pp es la densidad del adsorbente. [°K] MA'. 1.4 x 10 -15 donde: i: Difusividad molecular.

+ 90 x 10-6 m + 0. B y D.5. ' La relación de equilibrio está dada por una aproximación lineal al equilibrio en el rango O < y < 0.5 x 10-11 = X (1028 £f) kL = 4 x 1(T6 6 Solución 1.. se tiene: (D) . DISEÑO DE ABSORBEDORES b) Cálculo del coeficiente de transferencia de masa: 2 x 5.JA. En esta solución se supone un equilibrio lineal y que el coeficiente de transferencia de masa de la película controla la rapidez de la adsorción.5 x líT11 =£ kL = -2.Equilibrio lineal y control de la película.31 351 1028 x5. de tal manera que: q = 80</* el balance de soluto en el líquido es: (A) eV J = -RV el balance de soluto en el adsorbente es: (B) (C) la transferencia entre las fases: R=kLa(y-y*) combinando las expresiones A.

AL a . kLa \ kLayA (F) í integrando ( G ) con las condiciones: t=O y = yA se puede obtener: c ( donde: e c _Bt kLa K(l-e) (H) (> La ecuación (H) describe la variación de la concentración de soluto en la fase líquida conforme transcurre el tiempo de adsorción t.66 x 10~ 3 5~ J TTL . q = q se obtiene la linea de operación. Cálculos Numéricos: = 6(1~ up 6(1 -0. ADSORCIÓN \ combinando B y C e integrando con las condiciones: y = yA .352 CAPÍTULO 7. q = o y =y .99) 90 x 10~6 m a = 666 m"1 kLa kLa = = 4 x 10~ 6 — x 666 m"1 s 2. j \ \ q = 7f~y(^ ~ y) sustituyendo (F) en (E) y rearreglando: dy .

5 mg/ml) 80(1 -0.553 + 0. DISEÑO DE ABSORBEDORES Utilizando (I): 2.99) C = 1.447 ezp(-6. En esta solución se considera que el equilibrio es de tipo Langmuir y la resistencia controlante está localizada en la película de líquido.66 x 80x(l-.011 x 10'3 í) ^ «E r^r ^ p^ sas?- En la Figura 7.99 2.Equilibrio de Langmuir y película controlante. Solución 2.011 x 10~3 ¿) g k b t* y = ' — = 0.99) 353 + B = 6.66 x lO"3^1 0.224 ezp(-6. tal y como lo predice la expresión anterior con ki — 4 x 10~6 m/s. se presentan los resultados para ki = 1 x 10 m/s para fines de comparación.7.21 se muestra la variación de la concentración de soluto en la fase líquida en función del tiempo de adsorción. Asimismo. La expresión de equilibrio está dada por: q y = °* El balance global de soluto: 1 —£ .mi _ y (H) queda expresada como: 0.011 x 10~3 s~l Utilizando (J): (2.4.66 x 10~3s~1)(0.66 x 10~3 mg/s ..276 + 0.

a) fc¿ = 7 x 10~7 771/5 b) &L = 4 x 10~6 m/s La velocidad de transferencia de soluto por: R = kLa(y .7 I 120. En este modelo se supone que la velocidad de adsorción está conti .0 I 160. En la Figura 7. Solución 3. con el objeto de aproximar más el modelo a los dat< experimentales. pueden ser resueltas utilizando un métod de integración numérico..22 se muestra la curva obtenida utilizanc un valor de ki = 7 x 10~7 m/s.21: Ejemplo 7.354 CAPÍTULO 7..y*) El balance de soluto entre las fases por: dy (C -y Las ecuaciones A.0 200. en lugar del valor obtenido median la correlación.5. ADSORCIÓN 0.Adsorción intermitente de ImG. para obtener la variación de la concentracic con el tiempo. Equilibrio lineal y película controlante.9 0.Equilibrio tipo Langmuir y resistencias cornt nadas poro y película.0 t (min) Figura 7. B y D.

se supone que en la superficie del adsorbente la concentración de proteína en el líquido está en equilibrio con la concentración de proteína en el sólido.2- 0. Equilibrio tipo Langmuir. Cinética lineal.7.\r-Ra = ki(y — yi] \r=¡ 3r El cambio de la concentración en el seno del solvente : P (B) dy £-7T = -kia(y . lada por la transferencia de la proteína a través de la película que rodea la partícula del adsorbente y por la difusión efectiva de la proteína al interior de los poros del adsorbente. Modelo y datos experimentales.Adsorción intermitente de ImG.4. El balance de soluto entre las fases en la superficie del adsorbente: .5.0- "T" 50 1 I ' ' ' ' I ' ' 100 150 M' 200 Tiempo (min) Figura 7. El balance de soluto al interior del poro es: '•»-& (A) donde Ra es el radio de la partícula. Asimismo. 1989. Datos de: Horstman y Chase. DISEÑO DE ADSORBEDORES 355 0. relacionadas por una expresión tipo Langmuir.8- y/y* 0.22: Ejemplo 7.4- 0..yl dt La relación de equilibrio: (C) .

ADSORCIÓN y las condiciones iniciales y de frontera. dqj Kdq0 2 (H) d dyi _ dt e (K¿ + y i) dt 2 (I) combinando el resultado anterior con la ecuación (A). y. 2 dyi rdr l - c - d r Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensiona utilizando el siguiente cambio de variables: T = Dpt Efectuando el cambio de variables se obtiene el siguiente sistema d< ecuaciones: . 7^ = 0 or de acuerdo a la regla de derivación de la cadena.356 CAPÍTULO 7. r\ 7 r\ r =0 (F) v ' dt dyi dt (G) derivando la ecuación (D) dqi Kdq0 dyt (Kd + y.-)2' combinando las ecuaciones (G) y (H).

5.4.6- y/yA I 0.7.23: Ejemplo 7. 2 dr z dz (K) (L) dw dr -3(l-e)NSH e (w — Wi (M) donde NSH es un grupo adimensional dado por: NSH = D (N) Este sistema de ecuaciones puede ser resuelto por integración con diferencias finitas. En la Figura 7.. DISEÑO DE ABSORBEDORES 357 Película-Poro 0. 1989. .4-4 > I' ' ' ' 100 r 1! l' 200 Tiempo (min) Figura 7.23 se presenta la curva obtenida mediante este método.Adsorción intermitente de ImG. Equilibrio Langmuir y resistencias combinadas película y poro. Datos: Horstman y Chase.

donde inicialmente se coloca el adsorbente en solvente puro. 7.4.358 CAPÍTULO 7.24: Sistema de adsorción tipo tanque agitado continuo.Durante la operación el adsorbente se mantiene en el interior del tanque y la corriente agotada se retira continuamente del tanque .24) alimentando al tanque adsorbedor. La operación se efectúa (Figura 7. un flujo F de solución con una concentración de soluto y A. de tal manera que la concentración de soluto a la salida es igual a la . Una aplicación particular de este arreglo es en el procesamiento de caldos de fermentación completos (con una filtración gruesa previa en cribas vibradoras). Una vez que se alcanza cierta concentración de soluto en la corriente de salida. se interrumpe la operación y se recupera el soluto concentrado en el adsorbente. ya que no presenta los problemas de taponamiento con la biomasa como cuando se trata de procesar estos caldos directamente en columnas de lecho fijo. En una primera aproximación para obtener el modelo del proceso del proceso. ADSORCIÓN Figura 7.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo Otro tipo de arreglo utilizado en procesos de adsorción industriales es el adsorbedor tipo tanque agitado con alimentación continua. se puede considerar que el tanque está perfectamente agitado.

la concentración de soluto en la solución será baja por un cierto tiempo.7. Todos los derechos reservados. En el caso general la velocidad de adsorción es intermedia entre los dos casos descritos anteriormente. Por otro lado. Para un adsorbedor continuo tipo tanque agitado el modelo que . Fuente: Belter et a/. DISEÑO DE ADSORBEDORES 359 y(t) Adsorción rápida Tiempo t Figura 7. si la adsorción es muy rápida. El comportamiento cualitativo del sistema puede representarse de acuerdo a la Figura 7. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. lo que se traduce en una operación en estado no-estacionario.25. 1988. En este sistema la cantidad de soluto adsorbido sobre la superficie de adsorbente varía con el tiempo. son ambas funciones del tiempo de operación.25: Concentración en el líquido de salida de un adsorbedor continuo tipo tanque agitado. Por lo tanto. la concentración de soluto en la superficie del adsorbente q y la concentración de soluto en la solución de salida t/. concentración de éste en la solución dentro del tanque. la concentración de soluto en la corriente de salida varía con el tiempo.4. hasta que se alcance la saturación del adsorbente. Copyright ©1988. una vez ocurrido lo anterior la concentración aumentará siguiendo un patrón muy semejante al caso en que no existe adsorción. De acuerdo con la figura aún en ausencia de adsorción.

ADSORCIÓN describe la adsorción.45) donde k es nuevamente el coeficiente de transferencia de masa.44) el balance de soluto en el adsorbente: V(l-e)— = VR donde V es el volumen de la mezcla (solución y adsorbente) en el adsorbedor. respectivamente. y ?/* la concentración . El caso más sencillo que permite obtener un modelo mediante integración analítica. el balance de masa. es el caso donde la velocidad de adsorción puede ser aproximada mediante un modelo lineal y la isoterma de adsorción es lineal. Como se presentó en sección 7. La fracción de volumen de líquido ( sin incluir el líquido en los poros) al volumen total de la mezcla es e.360 CAPÍTULO 7. y es la concentración de soluto en el seno del líquido.2. debe integrar la isoterma de adsorción. la expresión de la rapidez de la adsorción y las condiciones de frontera. De tal manera que la expresión para R depende del sistema particular y debe ser determinada experimentalmente. a es el área de adsorbente por unidad de volumen de mezcla. El flujo de alimentación es F. La velocidad de adsorción de soluto por unidad de volumen de la mezcla de adsorción es R. El balance de masa del soluto en la fase líquida se puede expresar en palabras como: velocidad de acumulación — velocidad de entrada — velocidad de salida — velocidad de adsorción £V< = F(yA dt ~y)-VR (7-43) (7. Para este caso la velocidad de transferencia de masa está dada por: R = ka(y-y*) (7. y A y y son las concentraciones de soluto a la entrada y la salida. la velocidad de adsorción depende de los mecanismos controlantes de la transferencia de masa.

.7. La relación de volumen de líquido a .4. se desea analizar la posibilidad de una recuperación directa del producto por medio de adsorción iónica en un arreglo tipo tanque agitado continuo.rl ^ (7. La isoterma de adsorción lineal se puede expresar como: q = Ky* (7.Recuperación de antibióticos por adsorción. (7.6. Como alternativa a los procesos tradicionales de recuperación de antibióticos. donde el primer paso consiste en una filtración para la eliminación de micelio y esporas. En un estudio piloto se desea estimar el tiempo para obtener el 90% de recuperación de un antibiótico de una corriente de alimentación que fluye a razón de 3 l/h con una concentración de 1 mg/l de antibiótico. (7.45 ) y (7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 361 hipotética de líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente.44).rl * r T2t r2 .46) es: y* -y yA r erii r2 .47) que es la la expresión de la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción. El adsorbente empleado inicialmente está libre de soluto y su constante de equilibrio lineal es 110.46) La solución de las ecuaciones (7.43). en la expresión anterior: 2A -Br2 = 2A A = 1 B = 4+ ^ d + (l-e)K = fcaF eA'(l-e)V Ejemplo 7.

B y C están dadas por: A = 1 3¿ 62. Como primera aproximación se puede considerar que la resisten< controlante es la de la película con un kia = 62.-> / ~ V \ / 1 1\ I /-i /-.JO' V i .46 /T1 Se puede definir el grado de recuperación mediante la siguiente presión: .4 h~l í (0.8)110 C = 10.4(1)(10.63 h~2 Asimismo r\ y r2 están dadas por: l 1 2 2 Y . . El volumen de reacci es de un litro. /„' Fyxdf .47).8 2 B = 84.rrz-r! + 115 f f ^ r -r 2 2 . /o* efectuando la integración.8 (I -0. I ^ "I 0.63 /i' ) i 2 rj = -0. JO Recuperación = f'dt.4 h~l. Solución: Las constantes A.8)(l/) 0.4 ft-*)(3 {) •*-* /./„' Fyoíf Recuperación = — . ADSORCIC volumen total que va a ser empleada es de 0..59 /i' ) . -==_ (-84.362 CAPÍTULO 7.126 /T1 r2 = -84.59 /T (62.59 h~ ) ± v/(84. Jo FyÁdt combinando la expresión anterior con la ecuación (7.8.

se pueden distinguir tres zonas en el lecho de adsorción: . Estas gráficas son llamadas curvas de ruptura. Curva de Ruptura En la Figura 7. . U • Í7 . En la descripción de la adsorción en columna se utilizan gráficas de la variación de la concentración de soluto la salida de la columna con el tiempo.e"0-126*) + 1.8 x 1Q~ 5 (1 . En tin tiempo intermedio (t -f di] cuando aún no se agota la columna.75 h 7.4. Por la parte superior de la columna se alimenta la solución que contiene el soluto de interés.95(1 .f 7.r 1TV ) 2 2 t/ sustituyendo valores.e . se interumpe la operación y se recupera el soluto concentrado.8 ."~~~ 7. Durante su paso por la columna el soluto es adsorbido en el lecho y la solución agotada es obtenida en el fondo de la columna.3 Adsorción en Lecho Fijo La adsorción en lecho fijo es la operación más empleada a escala industrial para la concentración de caldos .1 r 2 . _ t T . La parte de la figura llamada "Lecho de Adsorbente" muestra como se va cargando de soluto el adsorbente del lecho conforme transcurre el tiempo.26 se presenta un esquema de adsorción en una columna de longitud L (la columna se presenta acostada sólo para efectos explicativos).4.r . Este tipo de operación se efectúa en columnas empacadas con adsorbente. Una vez que la concentración de soluto a la salida alcanza una cierta concentración. DISEÑO DE ADSORBEDORES 363 n 2— (e r i t -1)4.(r -r!)V r2t .(e ) / Recuperación = -—-.440f ) '~~ t de donde: t — 1. A esta técnica también se le conoce como Cromatografía Frontal.1)1I .

t) Tiempo Lecho de Adsorbente Solución de Salida t<t (a) (h) (b) ZE ZTM ZNU (c) 0) (d) (k) (e) (I) = t« (m) t>t.7. X(L. (g) (n) Figura. .26: Adsorción de soluto y curva de ruptura en columnas. ADSORCIÓN .364 CAPÍTULO 7. XA .

Se pueden ditinguir tres eventos importantes en esta parte de la figura: Para tiempos menores a ÍR cuando la Zona de Transferencia de Masa aún no llega a la salida de la columna. es muy baja e igual a la mínima detectada por el adsorbente yx (para fines prácticos esta concentración puede tomarse como cero). Este valor es la máxima concentracón de soluto permitida en la solución de salida y representa las pérdidas de soluto tolerables en el proceso. la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y ( L . En la misma Figura 7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 365 La Zona de Equilibrio (ZE) donde el adsorbente se encuentra en equilibrio con la concentración de soluto y A de la solución de entrada. El tiempo ÍR marca la terminación del ciclo de adsorción. En el tiempo de ruptura ÍR la Zona de Transferencia de Masa ha alcanzado la salida de la columna. En caso de continuar la operación la concentración de soluto en la solución de salida seguirá incrementándose hasta igualar la concentración de soluto y A- . La Zona No Utilizada (ZNU) donde no se ha presentado adsorción. En esta zona la concentración de soluto en el adsorbente es constante e igual a q = f(yA). í).26 la parte "Solución de Salida" muestra como varía la concentración de soluto en la solución a la salida de la columna y(Z/. conforme transcurre el tiempo de adsorción. la ZTM se acerca a la salida de la columna y la ZNU tiende a desaparecer. donde la funcionalidad / depende del tipo de equilibrio.¿) .14. Conforme transcurre la adsorción la ZE va ocupando toda la columna. La Zona de Transferencia de Masa (ZTM) donde la concentración de soluto en el adsorbente varía a lo largo de la zona. de tal manera que se ha incrementado la concentración de soluto en la solución de salida alcanzando el valor de diseño ya. de tal manera que la concentración de soluto en el adsorbente es igual a la que tenía inicialmente qx.

y ( L ...-.^.*.Adsorción de lisina. Se desean producir 8000 ton/año de lisina a partir de un caldo que contiene 20 g/l de este aminoácido.. Los datos de equilibrio muestran que q0 — 110 g/l.\ Suponer que en el rompimiento toda la columna está en equilibrio con la solución de entrada..-... ** Ejemplo 7. ADSORCIÓN La curva que describe la concentración de soluto en la solución de salida en el tiempo. se llama Curva de Ruptura. .. .--=.-.. Solución: El balance de masa global en la columna es: FyAAt = q0S despejando Ai y sustituyendo valores se tiene: Ai = Ai = Fy.-^J.000 <?jde una resina cationica cuya adsorción máxima es: q0 = 1..8.... La forma particular que toma la curva de ruptura depende tanto del tipo de equi* ^f^^.. La columna está empacada con 10. ní (10 //mtn)(6 g/l) Ai = 260 min Ai = 4.v3-. O Calcular la duración del ciclo de una colun/na que opera con un flujo dé^flO l/min de una solución que contiene o g/l de estreptomicina.„-.^^^^ .^ librio del sistema que se trate.•••"-.7.---.3 h En la Figura 7. 1989).56 g/g (Payne..'....•**-• ¡J -.-. <t:tr».. '•• .v-^iJU.>.Adsorción en una columna ideal. t ) vs ¿.•*•>*•*<••..^^..i r é®4 ¿f.27 se presenta un esquema de la columna y de la curva de ruptura para este ejemplo. utilizando adsorción por intercambio iónico. como de los mecanismos de transporte involucrados. Ejemplo 7.•-.366 CAPÍTULO 7.í-^v*í--v --•'-•'*•-'*'-•--. .

7.t) F=10l/min y A -6g/i Curva de ruptura ideal o -4.4. í .7.3 Tiempo (h) Figura 7.27: Columna y curva de ruptura para Ejemplo 7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 367 y (i.

368 CAPÍTULO 7. JdLB£^^ %Ja-£ü£3¿a-Jde^^ nálisis frontal).37 x 104 {_ 20? x n / ñó~? S = 9763 * de r**ina h c) Cálculo del volumen del adsorbedor: V = St V = 9763 | x 4 h h V = 39. yA 171 _ _ _ O S A. 000 / Se requieren 3 adsorbedores de 39 m3 cada uno. en el cual cada lecho es lavado y eluído una vez que está completamente agotado. Solución: a) Cálculo del flujo total a procesar (3 turnos 310 días laborables). dia i 24 h 20 f 4 F = 5. . Se estima que el ciclo tiene una duración de 4 horas (adsorción. ADSORCIÓN Estimar las dimensiones volumétricas de un sistema de 3 adsorbedores en carrusel. elución y lavado)...37 x 10 l/h b) Cálculo de la cantidad de resina necesaria en proceso: 6 C* __ ~ 5. 1 U 9 v Ifl ano 3 - v A. o . permite diseñar columnas para lograr ci recuperación. 310 atas oír» año J" v A.. estimar las pérdidas y determinar el tiempo ¿# de cada . producción £4 -—- .

Bajo estas condiciones. de ruptura que es la máxima concentración que se puede tolerar a la salida. mientras que los métodos tercero y cuarto si lo están. Análisis Aproximado Este método es especialmente útil para isotermas de adsorción favorables.4. Para caracterizar la curva de ruptura se seleccionan dos concentraciones. Si se supone que la zona de transferencia de masa (ZTM) se mueve a lo largo del lecho con una velocidad constante i?.Los métodos basados en la teoría de platos.7. . . Esta variedad de métodos se debe principalmente a que las expresiones matemáticas de las curvas de ruptura son difíciles de manejar en algunos casos. .Los métodos aproximados.Los métodos basados en la teoría de equilibrio Los dos primeros métodos no están basados en la obtención de modelos a partir de relaciones de equilibrio y balances de masa. 1982). y la concentración y3 que corresponde a la concentración a la salida cuando el lecho se considera agotado. Una guía general es considerar: yR = Q. DISEÑO DE ABSORBEDORES 369 ciclo. en el tiempo IR . se supone que la adsorción se desarrolla formándose una zona de transferencia de masa dentro de la columna con un perfil de concentración constante que viaja a lo largo de la columna (Figura 7.Los métodos basados en la teoría cinética.9y¿ donde y A es la concentración de soluto en la solución a la entrada.28). Existen diferentes métodos para predecir la forma de la curva de ruptura entre los cuales se encuentran: . así como para estimar dimensiones y arreglos de los equipos para ia fase de adsorción (Yang y Tsao. La concentración yp.lyA ys = 0.

ADSORCIÓN Concentración d« la solución de alimentación = (c) Zona de adsorción i Zona de adsorción Concentración del efluente = tiempo Figura 7.28: Adsorción con patrón constante. .370 CAPÍTULO 7.

49) RJ (7. de tal manera que : En la zona de saturación: q = f(yA) y en la ZTM : donde la funcionalidad dependerá del tipo de isoterma. Por lo tanto se puede establecer que la longitud de la columna que está saturada Zs en el tiempo IR es : Zs = MR . DISEÑO DE ABSORBEDORES 371 existe una zona en la parte superior de la columna donde el adsorbente está saturado y una zona en el fondo de la columna donde se localiza la ZTM. Combinando las expresiones anteriores se obtiene: Í (7.14.i?A¿ donde ti = — IR y L la longitud de la columna. En base a lo anterior la fracción de lecho utilizado O está dada por: f(yA)L ¡(y*) . El tiempo que tarda en salir la ZTM de la columna es A¿ = t$ — tp_.48) (7.50) La longitud de la ZTM ZA está dada por: ZA = L^ (7. considerando simétrica la curva de ruptura.51) IR Se pueden utilizar estas relaciones para estimar la fracción de lecho que está utilizado cuando termina la operación o sea en el tiempo ¿#.

De acuerdo a dicha figura la cantidad de adsorbente está fija en cada etapa y el líquido fluye a través de todas las etapas transportando al soluto. Teoría de Platos Cuando se utiliza la teoría de platos la columna se modela mediante una serie de etapas en equilibrio como se muestra en la Figura 7. En este proceso. Considerando el arreglo que se muestra en la Figura 7. ADSORCIÓN 0=1 -2* (7 52 ' > La fracción de lecho utilizado dada por la ecuación (7. . puede expresarse en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en el líquido = Velocidad de entrada de soluto . la longitud de la columna y la velocidad de alimentación deben permanecer iguales en ambas escalas para mantener el mismo patrón de adsorción.Velocidad de salida de soluto . Esto conduce al diseño de columnas poco esbeltas con poca caída de presión en Jas cuales debe asegurarse una distribución uniforme del líquido. Además. Una limitación del empleo de la teoría de platos es que sólo puede ser utilizada para sistemas con isotermas lineales.372 CAPÍTULO 7. di n dt (7.29. en su forma original esta teoría es de uso limitado por su incapacidad de predecir el número de etapas o la altura real de cada etapa y el efecto del cambio de las condiciones de operación sobre el comportamiento de la columna.29.Velocidad de adsorción de soluto y por medio de la ecuación : n.53) donde: n: Número de etapa. el balance de masa de soluto en la fase líquida en la etapa n. El empleo de esta teoría permite diseñar columnas en forma muy sencilla.52) debe ser obtenida experi mentalmente y puede ser utilizada para escalamiento.

Etapa 2 Figura 7. .4.7.29: Teoría de platos en adsorción. DISEÑO DE ADSORBEDORES 373 Etapa F 1 y.

En cualquier tiempo t=t. e: Volumen de líquido por volumen de etapa.374 CAPÍTULO 7..E)K)V] o bien en términos del volumen de lecho Vc = NV. El modelo supone que cada etapa está en equilibrio de tal manera que para isotermas lineales: qn = Kyn combinando las ecuaciones (7. La ecuación (7. F: Flujo de alimentación (constante entre etapas para soluciones diluidas). ADSORCIÓN V: Volumen de la etapa (vol.4. yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n (masa de soluto por volumen de solvente). yn — O para n = 1.c)K)V}$ = F(yn.54) donde el término en el paréntesis cuadrado de la izquierda de la expresión anterior representa un volumen hipotético. La solución del anterior sistema de ecuaciones se facilita definiendo un tiempo adimensional mediante la siguiente expresión: T = Ft {(e + (1 .55) (7.yn) (7.En el tiempo t = O. .N t/( al i mentación) = y A .54) se obtiene: l(e + (I. .. qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n (masa de soluto por volumen de adsorbente). 2.3.55) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: . adsorbente). del líquido + vol.53) y (7.1 .

59) tiene una media r0 = N y una desviación estándar a A = yN cuando n — N (a la salida de la columna). conduce a una expresión de la siguiente forma: (7. la distribución de Poisson se aproxima a una distribución normal.60) donde: .59) De acuerdo a la definición de media y desviación estándar.59) para el caso de n = N. DISEÑO DE ADSORBEDORES 375 T — NFt ((e + (\ . La forma integrada de la ecuación (7.7. entonces se puede efectuar la siguiente aproximación: dyn _.58) se puede encontrar que la expresión (7.4.e)K]Vc donde N es el número de etapas.57) La ecuación anterior puede ser expresada de forma más compacta manejando su forma diferencial: dyn dr (n-1)! (7._ dr ~ VA exp 1 T -T ' (7. Puede observarse en la Figura 7.58) que representa una distribución de Poisson.30 que conforme se incrementa el número de etapas.56) está dada por: (7.55) queda expresada como: dyn La solución de la ecuación (7.56) yn = (7. La ecuación (7. con ayuda de la ecuación (7.

30: Aproximación de la distribución de Poisson a la distribución Normal.05 - = 100 0.00 \ 50 100 I 150 Figura 7. . ADSORCIÓN 0.5 N= 10 o.io- 0.376 CAPÍTULO 7.

563 0.318 0.974 0.212 0.446 0.982 0.748 0.419 0.771 0.0 377 0.972 0.980 0.671 0.986 0.2 1.966 0. r} vs r para el caso de N = 100.438 0.979 0.447 0.5 1.112 0.902 0.691 0.989 0.572 0.634 0.649 0.995 1.925 0.990 0.503 0.993 0.2 0.834 0.992 0.3: Valores de la función error Erf(x).389 0.999 0.982 0.329 0.4.958 0.938 0.988 0.124 0.936 0. DISEÑO DE ADSORBEDORES Tabla 7.244 0.797 0.984 0.7 0.201 0.870 0.190 0.975 0.910 0.988 0.742 0.830 0.079 0.546 0.1 0.961 0.276 0.934 0.234 0.859 0.627 0.812 0.457 0.993 0.6 0.994 0.529 0.986 0.781 0.807 0.r) dr La ecuación (7.899 0.369 0.619 0.787 0.555 0.011 0.730 0.851 0.698 0.308 0.993 0.802 0.947 0.792 0.977 0.990 0.580 0.995 1.494 0.045 0.287 0.964 0.978 0.5 0.991 0.995 1.880 0.000 0.475 0.776 0.821 0.512 0.611 0.068 0.908 0.000 0.588 0. En la misma figura se presenta la curva para la derivada de la función: _1_ VA dy(L. En la Figura 7.000 y Erf es la función error dada por: -"*dri Los valores de esta función simétrica están dados en la Tabla 7.736 0.685 0.989 0.994 0.985 0.023 0.992 0.9 1.987 0.759 0.954 0.967 0.976 0.9 2.992 0.3 1.949 0.973 0.955 0.168 0.971 0.839 0.724 0.223 0.596 0.297 0.657 0.340 0.31 se presenta la curva de y(L.604 0.754 0.409 0.877 0.862 0.990 0.8 0. 0.157 0.999 0.816 0.952 0.8 1.994 1.940 0.946 0.765 0.521 0.399 0.968 0.359 0.965 0.944 0.855 0.873 0.349 0.7.4 0.0 0.921 0.893 0.825 0.942 0.101 0.981 0.994 1.905 0.970 0.0 1.916 0.428 0.056 0.255 0.1 1.843 0.642 0.884 0.923 0.896 0.146 0.928 0.991 0.997 0.034 0.000 0.975 0.932 0.6 1.866 0.960 0.135 0.987 0.3 0.179 0.951 0.090 0.887 0.995 0.000 0.980 0.847 0.485 0.957 0.000 0.930 0.3.4 1.266 0.60) puede ser expresada en función del tiempo real utilizando la definición de T para obtener: .705 0.998 0.678 0.7 1.664 0.918 0.538 0.984 0.890 0.983 0.717 0.379 0.991 0.711 0.962 0.913 0.

378 CAPÍTULO 7. ADSORCIÓN i — Figura 7. .31: Curva de ruptura por teoría de platos con N=100.

Esta permite caracterizar columnas mediante el ajuste de datos experimentales y la determinación de los parámetros hipotéticos N y HETP dados por la ecuación : HETP = - (7. con este propósito suelen combinarse frecuentemente los resultados de la teoría de platos con los de la teoría cinética que se presenta en la siguiente sección.62) describe la curva de ruptura que predice la teoría de platos.61) o bien como: (T 4\ y(M) = y 1 + Erf t-tt 22<0 (7. Teoría Cinética Los modelos de columnas de adsorción que se enmarcan dentro de la teorías cinética se desarrollan mediante la combinación de balances de masa. relaciones de transferencia de masa entre las fases y las condiciones iniciales y de frontera del sistema.Velocidad de salida de soluto por convección -f.62) \/Ñ donde la desviación estándar a está dada por 4=.Velocidad de entrada de soluto por dispersión .Velocidad .32. DISEÑO DE ABSORBEDORES 379 (7. La ecuación (7. relaciones de equilibrio.63) donde HEPT es la altura equivalente de un plato teórico (de sus siglas en inglés). Sin embargo.4. La teoría de platos no permite predecir la forma de la curva de ruptura cuando cambian las condiciones de operación. Considerando una sección de una columna como la que se muestra en la Figura 7. el balance de soluto en la fase líquida en un elemento de volumen puede ser expresado en palabras como: Velocidad de acumulación de soluto en la fase líquida = Velocidad de entrada de soluto por convección .

380 CAPÍTULO 7. .32: Componentes del balance de soluto en un elemento d< volumen de una columna de adsorción. ADSORCIÓN Entrada de A por convección Entrada de A por dispersión Az Adsorción de A Acumulación de A Salida de A por convección Salida de A por dispersión y(L.t) Figura 7.

d y _ v— _ ft ± (7. y por oti lado de la forma de la curva de equilibrio (lineal. etc. Modelo Cinético : Equilibrio no Lineal Favorable y Fuer Impulsora Lineal. resistencias combinadas.. poro. se deriva por un lado de los diferente mecanismos que pueden controlar la velocidad de transferencia de mas entre las fases (película. se obtiene la ecuación diferencial que describe el balance de soluto en una columna: dy _ JET.4. Además. el modelo puede no considerar los efectos de flujo no ideal contemplados en el térmii de dispersión axial (Tabla 7. Langmuir. es dec de la forma que adopta el término R de la ecuación (7.64) 2 dt dz dz donde E es el coeficiente de dispersión axial basado en el área transversal del lecho (este coeficiente debe distinguirse del coeficiente D el cual está basado en el área transversal sólo del líquido).Velocidad de adsorción de soluto por el sólido. DISEÑO DE ADSORBEDORES 381 de salida de soluto por dispersión . v es h velocidad superficial del fluido (F/A). etc.64). R es la velocidad de transieren cía de masa entre las fases por unidad de volumen del lecho (sólido -\ líquido). La diversidad de modelos existentes para lechos empacados de a cuerdo a la teoría cinética.En algunos casos la acumulación en la (ase líqui .7.).) qi también introduce variabilidad al modelo.4). En un sistema isotérmico y despreciando los efectos radiales este balance puede ser escrito como: Ai dz Edy A dz dividiendo entre AV = A&z y tomando límites. 2 En los siguientes párrafos se presentan algunos modelos particular de la teoría cinética.

67) se obtiene el siguiente par de ecuaciones: .66) y (7. Tipo de Equilibrio Lineal Favorable Desfavorable Irreversible Resistencia Controlante Poro Superficie Película Combinadas Efecto Mezclado Flujo ideal tipo tapón Flujo tapón con dispersión axial es mucho menor que la acumulación en la fase sólida (equilibrios favorables) y la dispersión es despreciable. En estos casos el retardamiento de la curva de ruptura sólo obedece a los mecanismos de transferencia de masa..Si la velocidad de transferencia de masa está controlada sólo por la película de fluido que rodea la partícula de adsorbente entonces. ADSORCIÓN Tabla 7.66) sólo depende del mecanismo controlante de la transferencia de masa.67) combinando las ecuaciones (7.65) y (7.v— = kLa(y -y*) dy (7. A continuación se presentan algunos casos particulares: Caso 1 : Control de la transferencia en la película.65) El balance de masa del soluto sobre el adsorbente se puede expresar como: a — £)TT. Bajo estas condiciones la ecuación (7.4: Algunos factores a considerar en un modelo cinético de adsorción. R = kLa(y .64) se puede escribir como: r> -v— = R oz (7.= -/t \ a r~> (7.65).68) . (7.y*) (7.382 CAPÍTULO 7.DO) /i-r /?/>\ El término R de las ecuaciones (7.

X' Concentración adimensional de soluto en el líquido. <//?: Concentración de referencia del soluto sobre el adsorbente.K T = -y — y VA - 2M y = J_ 9* donde: £: Distancia axial adimensional. T: Tiempo adimensional medido a partir de que la solución alcanza el punto z.25): . Las ecuaciones (7.c) = kLa(y ..69) Estas ecuaciones pueden expresarse en forma adimensional (solución universal) utilizando el siguiente cambio de variables: zkLa v kLa (t .68) y (7. Y: Concentración adimensional de soluto en el adsorbente.69) adimensionalizadas se expresan: Caso 2 : Control de la difusión del soluto en el seno del sólido del adsorbente. yA' Concentración de soluto en el líquido a la entrada de la columna.7.y ' ) (7.En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto en el seno del sólido y de acuerdo a la ecuación (7. DISEÑO DE ABSORBEDORES 383 (I .4.

(7.En este caso la velocidad de transferencia de masa sólo está controlada por la difusión del soluto al interior del poro del adsorbente y de acuerdo a la ecuación (7.q) v-— = (7.= (\-e}il>sksa(q*-q) (I . ( Z£ -v x = Y = q/qR obteniéndose la siguiente expresión : -| = f = ( y *.384 CAPÍTULO 7.73) estas dos ecuaciones pueden ser expresadas en forma adimensional con: = ipsksa [t \ .66) y (7.71) conduce a: -v^..e)^t = (I .r ' (7 74) ' Caso 3 : Control de la difusión del soluto al interior del poro. (7.66) y (7.75) conduce a: dy ^pkpa(q* .75) La combinación de las ecuaciones (7.72) (7.76) .65).65). ADSORCIÓN R= (l-e)VaX<7*-<?) (7.e)^sksa(q* .q) (7.32): R = ^*y q) QR/yA (7.71) La combinación de las ecuaciones (7.

77) Las dos ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional con: zijjpkpd í = T — JM X Y = = obteniéndose la siguiente expresión : = (y* .v— = kda(y .65) se puede aproximar a: dy . C/T Caso 4 : Control de la dispersión.Y) (7.79) Las ecuaciones anteriores pueden expresarse en forma adimensional utilizando el siguiente cambio de variables : zk¿a í = T = v (<-V tí VA .y*) uz y el balance de soluto sobre el adsorebente como: (7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 385 1 n- j ~ (7..4.Si el mecanismo controlante de la transferencia de masa es sólo la dispersión axial.78) c/c. la ecuación (7.7.

Sin embargo. utilizando un coeficiente global de transferencia.85) . como en el caso de las operaciones que se realizan en tanques. Este número se define como la expresión que adimensionaliza la ecuación de balance. Asimismo el análisis puede extenderse para el caso donde exista una combinación de mecanismos controlantes. Debido a lo anterior estas columnas se caracterizan utilizando el número de unidades de transferencia. ADSORCIÓN \ y x = — i Y = — ' obteniéndose la siguiente expresión : _9x dí ' El análisis presentado para cada uno de los casos anteriores puede ser extendido para el caso en que el mecanismo controlante sea la reacción de superficie. como se ha planteado anteriormente este mecanismo generalmente no es el controlante. Las ecuaciones adimensionales de cada uno de los cuatro casos anteriores. permiten definir el concepto de número de unidades de transferencia de una columna de adsorción de acuerdo al tipo de mecanismo controlante.386 CAPÍTULO 7. que es una medida de la dificultad de la operación.82) yA N = z^a v 4) NTUd = — v (7. De acuerdo a lo anterior: NTUL = (7.. Número de Unidades de Transferencia (NTU).En las columnas de contacto diferencial no existen etapas reales de contacto y separación.

gR(l -e) -e) (7. Asimismo se puede citar los resultados que se obtienen cuando la curva de equilibrio es lineal o cuando se usa el modelo de adsorción a contracorriente. la difusión en el seno del adsorbente.88) (7. respectivamente.D. En términos de los grupos adimensionales anteriores.26). es decir: r ) (7-90) No existe una solución general para estas ecuaciones diferenciales.7.p y c/. . Si se utilizan las correlaciones (7. estas ecuaciones han sido resueltas para algunos casos particulares. DISEÑO DE ADSORBEDORES 387 donde los subíndices L. Por otro lado. las concentraciones adimensionales de la curva de ruptura son función de f y r. El mecanismo controlante es aquél cuya NTU sea el menor. 1966).86) yA p (l Wzi/>. Dentro de éstos se puede destacar el caso desarrollado en la literatura para equilibrios favorables llamado "Patrón constante" (Hall et a/. (7. En este caso la curva de ruptura es característica de cada mecanismo controlante. Sin embargo.36).32) y (7. estas mismas expresiones pueden ser utilizadas para el cálculo de parámetros utilizando datos experimentales. la difusión dentro del poro o la dispersión. especifican que el mecanismo controlante es la película.87) (7.4.89) zv Los valores de NTU pueden ser estimados con las ecuaciones anteriores y con correlaciones para cálculo de parámetros de acuerdo a la geometría del sistema y a las condiciones de operación.s. las ecuaciones anteriores pueden expresarse como: NTUL = NTUS = NTUn = NTUd = v (7.

La distribución y el tamaño de las partículas del adsorbente son uniformes.93) (l-e)ff = * Condiciones iniciales y de frontera.No existe dispersión en la columna.92) Velocidad de transferencia de masa.-v^. ADSORCIÓN Estos dos últimos casos se presentan en los siguientes párrafos. Con las consideraciones anteriores el sistema de ecuaciones que describe el comportamiento de la columna. 9 = Ky' Balance de soluto en fase líquida. Este modelo puede ser aplicado cuando se utilizan razonablemente las siguientes consideraciones: . 10 cual permite precisar la metodología del uso de los modelos cinéticos. .R (7. en el caso de que el control de la transferencia de masa esté dado por una resistencia lineal es: Relación de equilibrio.388 CAPÍTULO 7. R = ka(y-y*) Balance de soluto en el adsorbente.La relación de equilibrio es lineal.El proceso es isotérmico.La acumulación de soluto en la fase líquida es despreciable. O . (7. . Modelo Cinético: Equilibrio Lineal y Fuerza Impulsora Lineal en el Líquido. .94) .91) óz (7. (7.. .La fuerza impulsora de la adsorción es lineal. .

95) (7.97) (7.98) con las condiciones: r = 0. V z. x = O.96) Estas dos ecuaciones conjuntamente con las condiciones iniciales y de frontera. pueden adimensionalizarse con las siguientes variables: zka v T = X = •y — fi KyA y K(l . DISEÑO DE ADSORBEDORES 389 t = 0. Y = 0. V r . y = JM La combinación de las ecuaciones (7.7.91)-(7. V = O.4. 9 = 0 ¿ > O.94) conduce a las siguientes dos expresiones: dy_ _ dz (7. z = 0.e) obteniéndose el siguiente sistema de ecuaciones: (7.

Esta gráfica puede ser usada para evaluar ka a partir de datos de laboratorio o predecir curvas de rompimiento utilizando correlaciones.1 0.99).001 10 20 50 200 500 1000 000 Figura 7.2 0.33 se presenta una solución gráfica de la ecuación (7. resistencia lineal.005 0.999 0.7 06 .5 0.98 CAPÍTULO 7.01 0. y J0 es una función Bessel de primera especie y orden 0. Las ecuaciones (7. es importante recordar que las consideraciones del modelo deben ser aplicables al caso particular.9 0. ADSORCIÓN :i 0.390 0.99 0.05 0. Fuente: Vermeulen et al. Todos los derechos reservados. 1973. 1960). Sin embargo.95 0. 0.33: Solución gráfica de la ecuación de la curva de ruptura.002 0.97 ) y (7.4 0. Modelo cinético: equilibrio lineal.02 0.995 0. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. obteniéndose la siguiente expresión para la curva de ruptura: X = 1~ (7. En la Figura 7.8 0.99) donde i = \/—T. Cuando el equilibrio es lineal estos resultados son análogos para cada . Copyright ©1973.3 0.98) han sido resueltas utilizando transformadas de Laplace (Bird et «/.998 0.

DISEÑO DE ABSORBEDORES 391 uno de los casos donde un mecanismo es el controlante. se supone que el adsorbente se mueve hacia arriba a contracorriente del fluido.7. el balance de soluto entre las fases está dado por: y*) (7. de tal manera que la zona de adsorción en la columna permanece estacionaria (Figura 7.86)-(7.99) es cualquiera de los establecidos en las ecuaciones (7. debido a que para un equilibrio lineal Y* — Y = x~X*.0) (7. 1966).En una adsorción de lecho fijo la zona de adsorción se mueve hacia abajo de la columna. En el modelo de adsorción de lecho a contracorriente. Dispersión despreciable.100) que es la curva de operación del sistema.4. Mecanismo de transferencia de masa lineal. Volumen líquido en la columna mucho menor que el volumen procesado. de tal manera que en la parte superior de la columna el adsorbente está en equilibrio con la solución de entrada y en la parte inferior la solución está libre de soluto. El balance de soluto entre la salida de la columna y un punto z está dado por: F(y ..0) = S(g .34).101) dz .64) y las suposiciones del modelo.89). de tal manera que £ o el número de unidades de transferencia que se puede utilizar en la ecuación (7. El modelo supone además: Adsorción isotérmica. De acuerdo a la ecuación (7. Modelo de Adsorción de Lecho a Contracorriente. El modelo supone que la longitud de la columna es infinita.La curva de ruptura tiene igual forma independientemente del mecanismo controlante (Hall et a/. S es un flujo hipotético de adsorbente.

. ADSORCIÓN F S q =0 Figura 7.34: Modelo de adsorción de lecho a contracorriente.392 CAPÍTULO 7.

99). Combinación Teoría de Platos . tiempo de operación.La combinación de modelos obtenidos por medio de la teoría de platos con modelos obtenidos por medio de la teoría cinética. coi los resultados de la teoría cinética con un mecanismo lineal controlant y equilibrio lineal.102) [HTU][NTU] La aplicación de este método requiere una integración numérica de datos de laboratorio para evaluar fca. de tal manera que para cae uno de los casos estudiados se tiene lo siguiente: . L= (y-y*) (7.. de tal manera que: dz = /" (y .4.) entre dos escalas de operación d( interés. de tal manera qu« N = NTU Esta aproximación permite correlacionar la pendiente de la curva c rompimiento con variables de operación. permite mantener la estructura sencilla de la teoría de platos y poder correlacionar el efecto de los cambios en las variables de operación sobre la forma de la curva de ruptura. DISEÑO DE ADSORBEDORES 393 La ecuación anterior puede integrarse para encontrar la longitud necesaria de la columna para lograr un determinado grado de separación. etc.y*) JyA dy integrando se obtiene: dy y o bien. lo cual es útil para establecer las relaciones necesarias para mantener los mismos perfiles de concentraciór (pérdidas.Teoría Cinética (Equilibrio lineal). Una primera aproximación a este enfoque es la combinación de lo resultados de la teoría de platos resumidos en la ecuación (7.62).7. con el cual se pueden efectuar estudios de escalamiento. resumidos en la ecuación (7.

88): yv L En el caso que el mecanismo controlante sea la dispersión.89): .394 CAPÍTULO 7.14). de acuerdo con la ecuación (7. de acuerdo a la ecuación (7. 1/2 por ecuación (7.86).103) ! Cuando el mecanismo controlante de la adsorción está localizado en la película de líquido que rodea a la partícula de adsorbente. de acuerdo con la ecuaciones (7. de acuerdo con la ecuación (7.87): L Sí el mecanismo de control es la difusión del soluto al interior del poro. ADSORCIÓN VA y_ = l l + Erf\ ±-r\ _25_ 2 v/JV (7. N V L Cuando el mecanismo controlante es la difusión del soluto en el seno del adsorbente. v J por ecuación (7.37) y (7.21). entonces.

= 1 para control de la difusión en el sólido.Adsorción de Inmunoglobulina G en proteína A inmovilizada en una matriz de agarosa. es una constante de proporcionalidad.35. = 1 para control de la difusión al interior del poro.7. Ejemplo 7.4. en una columna empacada. el = 0.96 A/9 = 28 Kd f rrr mi 9 = 0. El equilibrio es tipo Langmuir. a partir de una solución que contiene 1.104) V y n n n n donde K.1 mi con una porosidad de 0.. con = 1/2 para control de la película.019 = h 11 —43 ™ . Se utiliza una columna de 1 cm de diámetro empacada con agarosa con proteína A inmovilizada para adsorber ImG. El volumen del lecho es de 2.10~6 m IV. Datos del adsorbente: \-G dp = 90 x.71 mg/ml de esta proteína.9. = O para control de la dispersión. DISEÑO DE ABSORBEDORES 395 Lv N ~ T«P De tal manera que para el modelo combinado lineal se puede generalizar que: N -Kvn¿n+l 4— (7.

5 x 10~4 m —s Dp = 3.1.9 xlO. . b) Estimar a partir de la curva de ruptura la fracción de lecho ocupado cuando y/yA = 0.1.396 Datos solución: pL = 1000 CAPÍTULO 7.35.5 x 1Q- m2 — s Datos de la Columna: Dc = 1 c m A = 0. d) Comparar los resultados experimentales con la predicción del modelo cinético: equilibrio lineal-resistencia lineal.1 2 F = 0. ADSORCIÓN ¡ TU" UL = 9. Se pide: a) Estimar gráficamente el porcentaje de pérdidas si se deja correr la adsorción hasta que y/yA = 0. c) Comparar los datos experimentales con la predicción del modelo de platos.785 cm2 Correlaciones: El coeficiente de transferencia de masa puede ser estimado utilizando la siguiente correlación: 1/3 DAB V PL ) \PLDAB La curva de ruptura experimental se muestra en la Figura 7. suponiendo que el lecho se agota a los 200 min.4 s min 11 DAB = 5.

e) Comparar los resultados experimentales con los del modelo de lecho continuo. Solución. la cual de acuerdo a la curva de ruptura experimental es : (0.9 % b) La fracción de lecho ocupado de acuerdo a !a ecuación (7.a) Las pérdidas se pueden calcular mediante la siguiente expresión: L ydt Pérdidas = -^— En forma aproximada la expresión anterior equivale a el área del triángulo bajo la curva de ruptura en el punto de ruptura.35: Curva de ruptura experimental ImG-Proteina A.0 ) ( 1 1 0 .52): .7. Datos de: Hortsman y Chase.4.9 0 ) Pérdidas Pérdidas = = 0. DISEÑO DE ABSORBEDORES 397 _y VA O ' " 'é¿ ' ' ÍOO 150 200' ' '¿V ' 300 ' ' ' ' t (min) Figura 7.1 . 1989.

d) Modelo Cinético.5 yA t0 = 140 min Para -^ = 0.1 tR = 110 min Con estos dos puntos sobre la curva de ruptura se puede estimar a «-i 110-140 con auxilio de la Tabla 7. 1973): Cálculos: Área de la sección transversal de la columna: .3 se obtiene: <j = 23.62): + ^-/f í t - De la Figura 7.398 CAPÍTULO 7. La curva de ruptura en este caso está dada por la ecuación (7. ADSORCIÓN c) El Modelo platos está dado por la ecuación (7.33 min En la Figura 7.36 se muestra la curva de ruptura de acuerdo a este modelo.35 se pueden obtener dos pares de datos para calcular Para -^ = 0.99) que puede aproximarse a (Vermeulen et -a/.

36: Curva de ruptura.8 0. DISEÑO DE ADSORBEDORES 399 0. Modelo de platos.2 O ~ 200 t (min) 300 Figura 7.6 0.9 c.7. .4. Ejemplo 7.4 0.

3 x 10~5 ^ x 1000 *'"N 1/2 2 + 1.5 x 10-4 lOOO^f x 5.5 x 10-11 sji 90 x 10~6 m x 8.45" x • 9.5 x 10-11 ^ = 3xlO-6s Área por volumen de lecho: kL a = 6(1 - 6(1 -0.785 cm2 F 4 TT x 1 cm2 A = t? = u = 0.4 mtn sa 0.785 cm2 8.400 CAPÍTULO 7.3 x 10~5 — s Coeficiente de Transferencia de Masa: Utilizando la correlación proporcionada se puede calcular x 1Q-6 m) 5.333 m"1 a = . ADSORCIÓN A = A Velocidad superficial: = —¡— 0.35) 90 x 10~6 m a = 43.

Los valores de y* se obtienen con valores de q tomados de la curva de operación y sustituidos la ecuación de equilibrio. El área bajo la curva de la Figura 7. La Tabla 7.346 y de acuerdo a la ecuación (7.3X10-5 ?xig^E 25(1 -0. Utilizando el mismo modelo con K = 33 y ki — 1.13 s~l s Variables adimensionales: _ V 777 401 í (2.e) = Q 10 J -1 /i V 2.35) r = 8 x 10~ (¿-112. en la ecuación de equilibrio.38.35 8.67 cm)(0.5 x 10~5 m/s.37 se muestran los resultados en forma gráfica. 0) y [ yA. ka .37b).37a se observa que el ajuste del modelo a la curva real es muy pobre.3 x 10-5 ^ = 41.67 cmxO. De acuerdo a la ecuación (7. en el rango de O a T/¿. e) Modelo Contracorriente.333 m~l = 0.38b es de 1.6) 3 donde i está dado en segundos. DISEÑO DE ABSORBEDORES Coeficiente de transferencia de masa volumétrico: kLa = 3 x 10~6 — x 43.5 muestra algunos valores de estos cálculos. En la Figura 7. se produce un ajuste más adecuado (Figura 7.8 (í-f) .7.138) el empleo de este modelo implica una integración como la que se muestra en la parte inferior de la Figura 7.13 s'1) (8. La curva de operación que se muestra en la parte superior de la Figura está comprendida entre los puntos (O. L = 'f .102).<l(yA) }• La curva de equilibrio se obtiene dando valores a y. En la Figura 7.4.

5 x 1CT5 m/s .20 50 100 150 200 250 t (min) Figura 7.40.60. Modelo cinético lineal.20 O 50 100 150 t (min) 200 250 Figura 7.o0. Ejemplo 7. Ejemplo 7.402 CAPÍTULO 7.40.37: Curva de ruptura.9d.80.37: Continuación.Modelo cinético lineal. K = 33 y kL = 1.80.o- y_ Xa 0. ADSORCIÓN i.9d.. K = 25 y kL = 3 x 10'6 m/s i.60..

2 L = x 10~5 ^ x 100 cni 2.0500 0.5274 42.5026 42.7. y 1.1000 0.2000 0.7095 1.5273 42.2694 36. en el sentido que no introducen nuevos patrones de comportamiento.8276 08.4258 39.7090 1.0012 0.5150 42.1 202.3498 0. la respuesta dinámica se estima con la suposición que existe .0 005.2 033.0025 0.1 020.0077 0. La forma de los perfiles de concentración y por lo tanto de las curvas de ruptura puede ser modificada considerablemente por efectos cinéticos.4031 12.6657 1.2435 00.0003 0.1594 26.0300 0. Ejemplo 7.8 002.675 cm 0.7009 1.1345 31.5000 0.4870 01.5272 42.0001 q* 42.7 101.7050 0.4.1 010.1243 y* 1.5250 42.2487 00.0001 0. pero éstos siempre son secundarios.6236 1.9 e.4349 04.7 022.9583 i/(y-y*) 111.0100 0.9740 02.00417 s~l (1.0050 q 42.5: Cálculos para el modelo contracorriente. En la teoría de equilibrio en la cual todos los efectos cinéticos se ignoran.3265 14. DISEÑO DE ADSORBEDORES 403 Tabla 7.8 011.346) Teoría de Equilibrio La forma cualitativa de la respuesta dinámica de una columna está determinada completamente por las relaciones de equilibrio.0006 0.7461 00.5261 41.7 002. sino que sólo modifican el comportamiento pronosticado a partir de consideraciones de equilibrio.7099 1.

38: Modelo lecho a contracorriente. .6 Figura 7.2 y (mg/ml) I 1. b) Integración gráfica. Ejemplo 7. a) Curvas de equilibrio y operación.9e.404 CAPÍTULO 7.4 I 1. ADSORCIÓN I 1.

..4.6 i 1.4 i 0.38: Continuación.8 i 1 y (mg/ml) i l 1.2 i 1.8 Figura 7. DISEÑO DE ADSORBEDORES 405 i/y-y* 0.6 i 0.7.4 l 1. .2 i 0.

105) R = (l-£)-J.108) . La utilidad del enfoque de la teoría de equilibrio puede ser ilustrado considerando el caso simple de un sistema en el cual el flujo es ideal y se alcanza el equilibrio local.dq] dy _ dy £) V dy\ 8t ~ ~ dz rearreglando. Bajo estas condiciones la ecuación (7.= O (7.64) se reduce a: e— = — v— con. dy.406 CAPÍTULO 7. Este enfoque ha sido útil para el análisis preliminar de columnas. R (7. dt dy dz W(y) = ----j- (7. Por regla de la cadena: (7. así como para el análisis del comportamineto de sistemas complejos.106) dq dq dy dt dy dt combinando las ecuaciones anteriores se obtiene: dy^ = _ dy__(l_ \^[dy_ _ . flii f) 7i r\ii f\ p. ADSORCIÓN un equilibrio local a través de la columna.107) A partir de la ecuación anterior se puede definir W(y) como la velocidad del frente de concentración de una onda.

formando un patrón llamado proporcional. los tipos de adsorbentes disponibles. 1987). Cuando la isoterma es favorable dq/dy disminuye al aumentar la concentración y la velocidad de onda aumenta. La operación de adsorción puede realizarse en forma intermitente o continua en tanques agitados. En el comportamiento llamado de patrón constante el efecto de compactación de la onda cuando el equilibrio es favorable.5 Sumario La adsorción permite procesar soluciones diluidas para concentrar solutos mediante su inmovilización reversible en sólidos especializados llamados adsorbentes. pero se realiza más frecuentemente en columnas de lecho fijo.5. En el estudio de la adsorción son de fundamental importancia cuatro aspectos: Los mecanismos de adsorción de acuerdo al tipo de interacción soluto-adsorbente. La zona de transferencia de masa tiende a desaparecer debido a que se forman perfiles invertidos ilógicos. La zona de transferencia de masa se ensancha conforme avanza la onda a través de la columna. SUMARIO 407 Cuando la isoterma es desfavorable el término dq/dy de la ecuación anterior aumenta al aumentar la concentración y la velocidad de onda disminuye. La descripción de la dinámica de la adsorción es relativamente compleja y puede ser abordada mediante diferentes enfoques que conducen a diseños que varían desde los puramente empíricos hasta los muy sofisticados. En tales situaciones la onda debe ser sustituida por el frente de choque. . las relaciones de equlibrio de los sistemas y la cinética de la adsorción. 7. se compensa con los efectos dispersivos y la onda no se altera a lo largo de la columna (Ruthven.7.

408 CAPÍTULO 7.4 0.6 si la adsorción se deja a correr 2. 1990.6 0.1.Un volumen de 2 litros de una solución proteica con una concentración de soluto de 0..39: Curva de equilibrio para albúmina.0 1.Calcular las constantes k¿ y q0 para el sistema Albúmina-S Sefarosa FF a pH=5 y T=25C° a partir de la Figura 7.4 1..39. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.5 mg/ml. Todos los derechos reservados. Estimar la concentración final de soluto en el adsorbente. ADSORCIÓN 120 110 100 090 oao 070 q (mg / mi) 060 050 040 030 020 010 0.3..2. Copyright ©1990.6 Problemas 7. 7.6 1.2 1.8 y (mg / mi) Figura 7.2 0. se mezcla con 50 mi de adsorbente en una operación intermitente y se obtiene un 90 % de recuperación.Estimar el porcentaje de pérdidas del Ejemplo 7.5 horas. .8 1. 7. 7. Fuente: Skidmore et al.

.5 m/h y el coeficiente volumétrico de transferencia de masa toma un ..Obtener la ecuación (7. si la velocidad de flujo de líquido permisible es de 1..Se utiliza una columna de intercambio iónico de lecho móvil para separar cefalosporina de un caldo de fermentación que contiene 5 g/l del antibiótico. Este sistema ha sido utilizado en la recuperación de novobiocina (Payne. K y F.35. kL = 10~4 m/5. A = 0.Encontrar la expresión matemática para q(t) en el caso del adsorbedor tipo tanque agitado continuo.015 l/g adsorbente. el procesamiento de caldos completos en columnas puede originar problemas de taponamiento de éstas.a..7. 7..5. Analizar el efecto sobre la curva de ruptura de — 20 % de variación en ki. 7. considerando los parámetros restantes constantes.4.La curva de ruptura de una columna puede simularse adecuadamente mediante un modelo cinético lineal con K = 150.9. Determinar la altura necesaria de la columna para recuperar el 96 % de cefalosporina. 1960) 7. PROBLEMAS 409 7. (Ver Problema 22L4 de Bird. 1989). Sin embargo.6.7.6. utilizando una relación de flujos de 10 a 1. la relación de adsorbente a flujo es S/F = 98 g — h/l y la concentración de la solución a la entrada y A — 2 g/L Considere un tanque perfectamente agitado en el cual la solución y el adsorbente siempre están en equilibrio. y por lo tanto incrementar la recuperación..33 /i.785 cm2 y L = 10 cm.El procesamiento directo de caldos completos para la recuperación de productos extracelulares. y que el equilibrio es lineal con K = 0. 7. 6 = 0. se ha estudiado como una alternativa para disminuir las pérdidas asociadas a varios pasos de recuperación.99). entonces una alternativa es el uso de adsorbedores continuos tipo tanque. Obtener la variación de la concentración de novobiocina en la salida del tanque si el tiempo de residencia en el tanque VL/IF = 0. F = 50 cm 3 /mm.8.Simular el perfil adimensional de un adsorbedor utilizando el modelo de la teoría de platos con ¿0=30 min y: a) N=50 b) N=100 c) N=300 7.

10.En la adsorción intermitente de albúmina en un adsorbente de Sefarosa la curva de equilibrio se puede aproximar en forma lineal a: .= P + (1 -P)exp(-Bt) VA estimar los parámetros P y B.. y a los 30 min de 5.1 g/l.103 7.. La relación de equlíbrio del sistema es: q = 20J/1/2 y la linea de operación está dada por: 9 = 5(y-0.11. Resp.410 CAPÍTULO 7. utilizando una columna de 5 era de diámetro y 50 cm de longitud. Para tiempos muy grandes el valor es de 7. Resp. En esta columna el coeficiente de transferencia de masa volumétrico esperado es de 9 h~l. Considerando el modelo de adsorción intermitente (equilibrio lineal y control de la película) siguiente: ^. ADSORCIÓN valor de 12 h~l.Un nuevo antibiótico se va a separar de un caldo de fermentación mediante una operación de adsorción en lecho fijo. 150 l/h 7.12.39 ( Pungor et a/. L = 0.. 1987).6 ra 7.135 y B = 0.En la adsorción intermitente de /3-galactosidasa la relación de la actividad inicial de la enzima en la solución a la actividad de la enzima en solución a los 10 min es de 2.86. Resp. La alimentación a la columna tiene una concentración de 4 g/l y se desea que la corriente de salida contenga solamente 0.1) Estimar el flujo manejable por la columna. P = 0. La relación de equilibrio del sistema es: q = 25y'/2 donde q está en g/l de resina mientras que y en g/l de solución.755.

6 x 10~6 m/s = 105 x 10~6 m e = 0.14.99 dp = 105 x 10-6 m yÁ = 2 mg/ml Representar gráficamente la variación de la concentración de soluto en la fase líquida con el tiempo de adsorción. 7.3 era F = 1 cra3/ra¿n Mediante el modelo cinético de resistencia en la película y equilibrio lineal.En condiciones de adsorción muy favorables (irreversible)..35 y A = 1 mg/ml Dc = 1 era L = 2.6.) = 5. Bajo estas condiciones y con el control de la resistencia a la transferencia de masa al interior del poro .13. la forma de la zona de transferencia de masa de la columna es independiente del tiempo (patrón constante). suponiendo una sola resistencia controlante y equilibrio lineal. obtener una representación gráfica de la curva de rompimiento del sistema. PROBLEMAS 411 q Los parámetros de la adsorción son: kL = 5 x 10~6 m/5 e = 0. 7.En una columna de lecho fijo empacada con S Sefarosa se realiza la adsorción de albúmina bajo las siguientes condiciones: q = kL dp l3Qy(aprox..7.

.ficar la curva de ruptura para el escalamiento del sistema con qn/yA = 18.412 CAPÍTULO 7.011 cm/s 16. para cada uno de los tres casos anteriores.5 era 0.0.2737Vrt/p . en los siguientes tres casos: al. a)..1 el modelo se ajusta a los datos experimentales con NTUP = 8.¿Que significa el punto de intersección de las tres curvas? .v = 0. ADSORCIÓN (modelo adecuado para algunos procesos de afinidad).020 cm/s a2..Acido.... y está dada por (Arnold et a/.6 18.-1 Cuando se emplea una columna de Sefarosa 4B. permite representar varias condiciones de operación. 1985): X =1 - .v = 0.015 cm/s a3.v = 0.010 cm/s b).Graficar x vs volumen alimentado (Ft — eV) en el rango de 70 a 86 litros. la curva de ruptura adimensional es única.Gra.Arsanílico para adsorber anticuerpos monoclonales bajo las siguientes condiciones: dp = 0. c).1 y una columna de 15 x 60 era .01 era v L e ^ VA = = = = 0.

6..B. 243-254. 22. Ed. W.pattern conditions.N.A. B9-B36. N. Reverte S. Res. y Wilke.7 Bibliografía Arnold. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology. Eagleton.A. Wilson.L. H.F. En: Separations Processes in Biotechnology. Y. 67. 1990. J. Biotechnology Progress.). Draeger. H. 1990. Chem. 1960. John Wiley and Sons. A. Chem.The characterization of affinity columns by pulse techniques. C. Fenómenos de Transporte.7. y Zwarik. Schuler. y Hu. En: Separations for Biotehnology 2. AIChE. y Chase. C.7. 30. 2. 1966.A. London. L. "3* ?§r . IEC Fundamentáis. Elsevier Applied Science. 1988.). 1989.J. Chemical Reaction Engineering.R. Process affinity chromatography. R. Bioseparations of traditional fermentations products. 1. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. Marcel..M. E. y Vermeulen. T. B. (Ed.R.Predicting the performance of affinity adsorbers. Levenspiel. Dekker.A..H. 14. New York. BIBLIOGRAFÍA 413 7. Des. II. Gleason. 370-375. y Lightfoot. Eng. F.L. 325-334. 401-445.. L. K. Modelling the affinity adsorption of immunoglobulin G to protein A inmobilised to agarosa matrices. Blanch. P. (Ed). 212-223. Fluidized bed adsorption for whole broth extraction. Stewart. 13.(Ed. 6. 1985.. J. •f. H.. Belter. Journal. F. Asenjo. G. 145-179.D.L.. Clonis. 1989. y Chase.W.C. New York. Horstmann. 183-207. Hall. O. E. Pore and solid diffusion kinetics in fixed-bed adsorption under constant . Acrivos. 5.. Pyle. D. John Wiley and Sons. Modelling of protein adsorption in liquid fluidized beds. 1990. Gailliot. J. Eng. M.J. 426-489.A.P.E. W. México. 5. New York. Cussler. 22-27. Bird.. 1962. Payne.

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Parte IV Purificación del Producto .

. muy característico de esta operación. que requiere un enfoque fuertemente fisicoquímico. En el capítulo 9 se presenta la operación de precipitación. por lo que es la primera operación tratada en esta parte. En los capítulos 10 y 11.417 Una vez que los caldos biológicos han sido concentrados el paso siguiente dentro de un esquema general de separación. La cromatografía por elución puede analizarse empleando gran parte de los conceptos utilizados para describir la adsorción en lecho fijo. se presentan las operaciones de ultrafiltración y electroforesis dado que sus principios permiten una presentación más unificada. la ultrafiltración y la electroforesis. En esta parte se presentan los principios generales de las operaciones más utilizadas para efectuar esta purificación: la cromatografía por elución. la precipitación. es la purificación del producto de interés.

Una vez colocada la mezcla se hace pasar un líquido que favorezca la desorción llamado eluyente (fase móvil).Capítulo 8 Cromatografía por Elución. Por'ejemplo. El adsorbente constituye la fase estacionaria de la columna. sino que sólo se carga en forma controlada una porción de ésta. Sin embargo.. En la elución por gradiente la composición del eluyente se varía gradualmente. radica principalmente en la dilución del soluto. Esta se efectúa en columnas empacadas con adsorbentes que pueden ser sólidos. si se desea remover dos compuestos orgánicos A y B muy similares que se encuentran diluidos en agua. la operación 419 . en la cromatografía por elución la columna no se satura completamente con soluto. Conforme avanzan los solutos sobre la columna éstos se separan permitiendo su purificación.1 Introducción La cromatografía por elución es un método para separar en sus componentes (resolver) una mezcla de solutos y es empleada con el propósito de puricar productos de interés. En la cromatografía por elución isocrática la composición del eluyente se mantiene constante durante el proceso. 8. En la operación de una columna cromatográfica se aplica una pequena cantidad de muestra en la parte superior de la columna. sólidos porosos o geles. La decisión entre emplear adsorción frontal o cromatografía por elución en una separación. La operación de una columna de cromatografía es similar a la de una columna de adsorción.

• La presión a la que se desarrollan. En la Figura 8. se han desarrollado otros modos intermedios como la cromatografía por desplazamiento y la de recirculación. tipos de adsorbentes. mientras que en la adsorción el soluto se retiene en la columna y posteriormente se eluye concentrado. En la cromatografía por elución el soluto se purifica a expensas de cierto grado de dilución.420 CAPÍTULO 8. la selección apropiada es la cromatografía por elución. llamada cromatograma.3 se revisan los principales equipos utilizados en las operaciones cromatográficas. Entre estos dos casos extremos de separaciones en columna. En la sección 8. Para abordar el tema de cromatografía por elución en la sección 8. si estos mismos compuestos se desean separar entre sí con una alta pureza a partir de una muestra concentrada. las relaciones de equilibrio y cinéticas que son utilizadas en esta operación. siendo el soluto A el más lento y el soluto C el más rápido. En la sección 8.2 de este capítulo se presentan los fundamentos de la cromatografía.2. apropiada es una adsorción frontal. . • La relación de equilibrio.4 se presentan algunos de los modelos para el diseño de equipos cromatográficos que nos permiten predecir y analizar los perfiles de concentración o cromatogramas. Cada soluto tiene diferente grado de retención en la columna de tal manera que la velocidad de avance de cada uno es diferente. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Cinco aspectos fundamentales permiten distinguir las semejanzas y diferencias entre ellas: • El tipo de principio de separación que emplea cada una de ellas.1 se ilustra la separación cromatográfica de una mezcla de tres solutos. • Las características de las matrices que utilizan. describiendo las principales técnicas cromatográficas.2 Fundamentos Existen varias técnicas cromatográficas basadas en la interacción de una fase móvil líquida y una fase estacionaria. 8. Un detector de solutos a la salida de la columna obtendría una gráfica como la de la Figura 8. Por otro lado.

8. Copyright ©1988. Adaptada de: Belter et al. O) Eluyente Eluyente > Tiempo Eluyente "A*M A " A AA A > F^ •f Eluyente 0TO D 0 0 D 0 0 Eluyente < o D aD' 1 D D ° OD1 - D 00°0° O o ooo Figura 8. Todos los derechos reservados. 1588. FUNDAMENTOS 421 Eluyente » Columna empacada con adsorbente Inyección de muestra (componentes O.1: Esquema de una columna de cromatografía. . A.2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.

Copyright ©1988. Tiempo Figura 8. • La cinética de la adsorción. La separación de los solutos es resultado de las diferencias en los coeficientes de partición de cada uno de los solutos de la mezcla entre las fases líquidas (estacionaria y móvil).Cromatografía de filtración en gel o cromatografía por exclusión. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. .Cromatografía líquido-líquido.422 CAPÍTULO 8. Adaptada de: Belter et al.2. Cromatografía Líquido-Líquido En la cromatografía líquido-líquido se utiliza un adsorbente sólido impregnado con un líquido que funciona como fase estacionaria. 8. 1988.Cromatografía por adsorción.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación De acuerdo al principio utilizado para la separación se pueden distinguir < tres tipos básicos de cromatografía por elución: . . Todos los derechos reservados.2: Cromatograma típico. Cromatografía por Filtración en Gel La cromatografía por filtración en gel utiliza partículas fabricadas de geles porosas que actúan como mallas moleculares que permiten separar .

FUNDAMENTOS 423 moléculas en función de su tamaño. Cromatografía por intercambio iónico. .De interacción hidrofóbica.Tanto la cromatografía de interacción hidrofóbica como la de fase inversa. .Se caracteriza por la unión del soluto al adsorbente por fuerzas débiles del tipo de van Der Waals.De afinidad. . Cromatografía de adsorción simple...La cromatografía por afinidad está basada en interacciones altamente específicas entre el soluto de interés y el adsorbente. Cromatografía por afinidad.Física. Existen varias modalidades caracterizadas básicamente por el tipo de adsorbente que emplea. Este tipo de cromatografía es poco selectiva entonces se utiliza poco a nivel analítico.De fase inversa. Este tipo de cromatografía es comunmente empleada en las últimas etapas de los procesos de obtención de proteínas. pero por su bajo costo es utilizada a nivel industrial.2.Por intercambio iónico. Cromatografía de interacción hidrofóbica y cromatografía de fase inversa.La cromatografía por intercambio iónico se basa en la interacción electorostática entre los grupos cargados del soluto y los grupos cargados de los adsorbentes utilizados en ésta. . Cromatografía por Adsorción La cromatografía por adsorción emplea adsorbentes en los que los solutos a separar presentan diferentes grados de retención.. Los adsorbentes utilizados en esta cromatografía . se basan en la interacción entre las regiones hidrofóbicas de moléculas como las proteínas y los grupos hidrofóbicos de los adsorbentes empleados.8. llamadas cromatografía de adsorción: . Este tipo de cromatografía es muy empleada en la purificación de proteínas..

Superosa. 8. Cellulofine y Sephacel) Dextrano (Marca Sephadex) Agarosa (Marcas Sepharosa. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Sílica porosa Vidrio de poro controlado (Marca Spherosill) Hidroxiapatita Polímeros orgánicos sintéticos.424 CAPÍTULO 8./V -bisacrilamida-dextrano (Marca Sephacryl) . Poli-N. los cuales se comercializan en forma de pequeñas esferas cuyo diámetro varía entre 10 y 100 /¿ra. Alrededor del 90 % de las matrices que se emplean actualmente están hechas de materiales que forman geles de alto poder hidratante. En algunos casos estos materiales se modifican químicamente para incrementar su especificidad.2 Matrices Actualmente diversos tipos de materiales o matrices son utilizados para fabricar los soportes (empaques) de las columnas cromatográficas.) Compuestos: polímeros orgánicos-polisacáridos. La Figura 8. En general los materiales de las matrices pueden ser de cuatro tipos: Materiales inorgánicos. presentan grupos químicos llamados ligandos que son altamente específicos para la unión con los solutos..2. Ultrogel A y BíoGel. Poliacrilamida (Marca Biogel P) Polimetacrilato (Marca Spheron) poliestireno Polisacáridos Celulosa (Marcas Whatman.3 muestra la estructura de algunas de las matrices empleadas en cromatografía.

1989.3: Estructuras de matrices.S. c) Agarosa. FUNDAMENTOS 425 CH2OH n B HO n OH OH H H n NH2 C=O I — CHa—CH — CHa—CH — CHz—CH— C=O I HN C= O I NH2 D HN I C=O I CH2— CH — CH2— CH — CH2— CH — I I r I HN c= o c— o NH2 I n Figura 8.2. Fuente: Janson. Reproducida con el permiso de VCH Publishers. Copyright ©1995. . Todos los derechos reservados. a) Celulosa (fi 1-4). d) Poliacrilamida entrecruzada. b) Dextrano (di 1-6).

Esta técnica es poco selectiva por lo que no es mu. Cromatografía de filtración en gel. sílica. Las xerogeles se caracterizan por arrugarse e hincharse en la ausencia y presencia del solvente. respectivamente. . pertenecen a las xerogeles.4). para combinar las ventajas de ambos tipos de materiales. Este tipo de geles son utilizadas en cromatografía de filtración en gel y tienen baja resistencia mecánica. De acuerdo a su comportamiento con relación al solvente.. el volumen de las aerogeles es independiente del solvente.En la cromatografía líquido líquido se emplean partículas de tierras diatónicas impregnadas coi propilen-glicol.En la cromatografía de fil tración en gel se emplean básicamente geles de microporos de dextran o poliacrilamida. a continuación se presentan algunos ejemplos parti culares. Tipo de Cromatografía y Tipo de Matriz Existe una relación directa entre el tipo de cromatografía y el tipo d< matriz empleada.426 CAPÍTULO 8. Las geles microporosas se obtienen por entrecruzamiento puntual de polímeros lineales como el dextrano y la poliacrilamida. Desde el punto de vista funcional se pueden distinguir dos tipos de geles: microporosas y macroporosas (Figura 8. como la agarosa y la poliacrilamida macroreticular. poliestireno y polimetacrilato sor aerogeles.. Este tipo de geles son empleadas en cromatografía de intercambio iónico y de afinidad donde se requieren poros más grandes. pero debido a su bajo costo es utilizada escala industrial. CROMATOGRAFÍA Agarosa-dextrano (Marca Superdex) Agarosa-poliacrilamida (Marca Ultrogel AcA) POR ELUCIÓN. mientra* que las geles de vidrio poroso. Las geles macroporosas se obtienen por entrecruzamiento y agregación de polímeros. Las geles compuestas se forman al introducir geles de microporos en los poros de las geles de macroporos. Por otro lado. utilizada en el laboratorio. se pueden distinguir dos tipos de geles: xerogeles y aerogeles. Las geles de dextrano entrecruzadc (Sephadex) y las de poliacrilamida. Cromatografía Líquido-Líquido.

b) Polímeros entrecruzados como poliacrilamida y dextrano. 1989. FUNDAMENTOS 427 (b) (c) Figura 8. c) Agarosa. Copyright ©1995. Reproducida con el permiso de VCH Publishers.4: Matrices microporosas y macroporosas.8. Fuente: Janson.2. . a) Celulosa. Todos los derechos reservados.

utilizan adsorbentes como alúmina y sílica-gel. dependiendo del grupo iónico (Figura 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN /J-OCH2COO Carboximetil 2 Fosfato -OCH2CH2SO3 Sulfoetil Sulfopropil © XCH2CH3 OCH2CH2N( I CH2CH3 n Dietilamino-etil ' *"' Chfe Chb CH2 CH3 Trietilamino-etil Figura 8.5: Grupos funcionales de adsorbentes iónicos. Como ya se ha mencionado este tipo de adsorbentes son poco selectivos. La cromatografía por intercambio iónico es una de las más utilizadas a nivel industrial para la purificación de diferentes tipos de compuestos. Cromatografía por adsorción. Las resinas utilizadas son de dos tipos: catiónicas y amónicas. pero debido a su bajo costo este tipo de cromatografía también se aplica sólo en separaciones en procesos industriales.428 CAPÍTULO 8.5). ..Los procesos cromatográficos basados en la adsorción simple de solutos en un adsorbente sólido poroso.

se basa en el hecho que cierto tipo de estos colorantes interactúan fuertemente con los grupos aniónicos de las proteínas. La separación se basa en el hecho de que algunas moléculas como las proteínas presentan residuos externos no polares. Las interacciones hidrofóbicas entre la proteína y el ligando del soporte.2. En la cromatografía con iones metálicos. En las técnicas cromatográficas de interacción hidrofóbica y fase inversa. Los colorantes asemejan estructuras biológicas como los cofactores . La cromatografía que utiliza colorantes como ligandos. El tipo de iones más utilizados son el Cu+2 y el Zn +2 .6: Grupos funcionales comunes de la cromatografía de interacción hidrofóbica y de fase inversa. Estos iones interactúan con los grupos cargados de las proteínas como es el caso de los residuos de histidina. el adsorbente contiene iones metálicos inmovilizados sobre el soporte por medio de grupos quelantes como el ácido iminodiacético. para evitar la desnaturalización de las proteínas. y ese es su rasgo distintivo respecto a la cromatografía de interacción hidrofóbica. la fase estacionaria consiste de una matriz con ligandos no polares (Figura 8. FUNDAMENTOS Fenil C6Hs- 429 Octadeál Octil Butil Etil Figura 8.6). Para eluír las proteínas se utiliza una solución con concentración salina baja o un solvente de baja polaridad. En la cromatografía de fase inversa no se utilizan solventes de baja polaridad para eluír.S. se fortalecen utilizando medios con altas concentraciones salinas. por ejemplo: sulfato de amonio a una concentración cercana a la de precipitación de la de la proteína. de tal manera que en soluciones no acuosas estos tienden a interaccionar con los ligandos no polares de los soportes.

. b) Rojo A.S03H S03H SO3H(m/p) H03S SO3H H03S 03H H03S 03H S03H S03H Figura 8. c) Naranja A. a) Azul A.430 CAPÍTULO 8. .7: Colorantes utilizados como ligandos. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.

las relaciones de equilibrio se expresan por medio de isotermas de adsorción o curvas que relacionan la concentración en el equilibrio del soluto en la fase estacionaria y de! soluto en la fase móvil. La ventaja es que son más baratos que dichos cofactores. más fáciles de unir a las matrices y más estables (Figura 8.2. Otro tipo de cromatografía utiliza ligandos biológicos altamente específicos para ciertos sustratos.2.1 se presentan las presiones y el tamaño de partícula características de cada una de ellas.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación De acuerdo al tamaño de partícula y a la presión de operación que emplea. HPLC de sus siglas en inglés). Tipo Baja Moderada Alta Presión (atm) 1 2-50 51-350 Diámetro ((¿m) 90-100 30-50 5-10 NAD y ATP y permiten la interacción con ciertas proteínas. presión moderada y presión alta (la cromatografía líquida a presión alta es característica de la técnica llamada cromatografía líquida de alta resolución. Dichas isotermas son generalmente no lineales mostrando comportamientos tipo Langmuir o Freundlich. Estaí isotermas son iguales a las descritas en el capítulo anterior. 8. . Las diferentes modalidades de la adsorción por afinidad se presentan en la Figura 7. la cromatografía líquida se puede clasificar en cromatografía de presión baja.1: Tipos de cromatografías de acuerdo a su presión de operación.7).8. En la Tabla 8.$.2. FUNDAMENTOS 431 Tabla 8.4 Relaciones de Equilibrio En el análisis de columnas cromatográficas. 8.

432 CAPÍTULO 8.3 a 3. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Generalmente uno o dos de los pasos descritos anteriormente son 1< más lentos.2. a través de la película de líquido. 2. de tal manera que son los que controlan la velocidad glob de transporte del soluto. Reacción reversible del soluto con el adsorbente (la reacción pued involucrar adsorción. 5. vidrio o acero inoxidable. Difusión del soluto dentro del poro del adsorbente. de líquido que rodea al adsorbente. . En el caso de geles blandas la longit necesaria de la columna se alcanza por medio de sistemas de varias columnas cortas. Difusión del soluto del seno del líquido a través de una películ. en el rango de 0.3 Equipo Cromatográfico Los principales equipos cromatográficos son columnas fabricadas plástico. Contradifusión del soluto de la superficie del adsorbente hacia seno del líquido. Este t: de columnas deben ser empacadas utilizando sistemas hidráulicos ( permitan el manejo adecuado del empaque. reacción y desorción de superficie).5 Cinética de la Adsorción Algunos modelos utilizados para describir una operación cromatográfica toman en cuenta las resistencias a la transferencia de masa involucrada? en el proceso. 8. las cuales pueden ser descritas mediante un mecanisrnc de cinco pasos: 1. c diámetros máximos de 1. 4. Contradifusión del soluto en el poro hacia la superficie del adsoí bente.8). 3. Las columnas empleadas en cromatografía HPLC tienen diámet de hasta 80 cm y altura de lecho de 120 era (Figura 8. 8. Las columnas para cromatogra en gel tienen relaciones L¡D muy bajas.5 rn.

Adaptada de: Nicoud y Perrut.3. Todos los derechos reservados.S.8: Columna cromatográfica. EQUIPO CROMATOGRAFICO 433 Salida Distribuidor Bomba Figura 8. Copyright ©1991. 1991. Reproducida con el permiso de Kluwer Acadeiiüc Publishers. .

es conveniente . La suposición de una isoterma lineal se puede justificar en función de que un gran número de sistemas cromatográficos se trabajan con muestras pequeñas. Tres conceptos se combinan para lograr un diseño apropiado de estas columnas cromatográficas: • El modelo de la columna. • Los procedimientos de escalamiento y optimización de la columna. particularmente en el arreglo tipo columna de lecho fijo. Es en esta transición donde los conocimientos ingeníenles juegan un papel muy importante. y puede ser situado en el rango lineal de cualquier tipo de isoterma (en la región de baja concentración). Sin embargo. • Los criterios para la evaluación técnica del comportamiento de la columna: Resolución. 8. de tal manera que el rango de concentraciones en la columna es bajo. ha creado la necesidad de llevar a escala de proceso las técnicas que tradicionalmente se utilizan sólo a nivel laboratorio. debido a que por su simplicidad dichos modelos pueden ser resueltos analíticamente para obtener los perfiles de concentración tipo campana de Gauss. Pureza y Rendimiento.1 Modelos Cromatográficos Varios modelos empleados para el análisis y diseño de columnas cromatográficas que operan bajo condiciones isocráticas. Una de las técnicas que ha recibido más atención en este sentido es la cromatografía. utilizan isotermas lineales para describir las relaciones de equilibrio que se presentan en éstas. 8.4. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. que se observan experimentalmente en algunos cromatogramas. El trabajar con muestras pequeñas permite tener una buena separación de los solutos de la mezcla (resolución) a expensas de un bajo rendimiento o cantidad de muestra que puede ser procesada.4 Diseño de Columnas Cromatográficas La obtención de productos biotecnológicos con grados de pureza y mercados cada vez mayores.434 CAPÍTULO 8.

En el desarrollo del modelo de platos teóricos se supone que la columna se comporta como una serie de etapas en equilibrio. Teoría de platos y Teoría cinética combinadas.10). donde tampoco son aplicables los modelos basados en isotermas lineales. Esta sección sólo se refiere a los principios básicos de la cromatografía por elución isocrática en columna y principalmente a los modelos basados en isotermas lineales. Modelo de Platos Teóricos o Etapas El modelo de platos teóricos es uno de los más usados el análisis de la cromatografía por elución. Cada etapa puede visualizarse como un adsorbedor tipo tanque de volumen constante. El balance de masa del soluto para la etapa ?i puede ser escrito como: .8¿. La teoría cinética. Existen tres enfoques básicos para la obtención de estos modelos cromatográficos de columnas: La teoría de platos. A nivel preparativo la cromatografía por elución se utiliza bajo condiciones de sobrecarga con el propósito de incrementar la productividad de la columna. El solvente fluye de un tanque hacia el otro. principalmente para los sistema cromatográficos muy selectivos como los de afinidad. Bajo estas condiciones la aplicación de los modelos lineales también es limitada. mientras que el adsorbente permanece fijo en su tanque respectivo (Figura 8. Actualmente se cuenta con algunas técnicas cromatográficas que emplean otros principios como es la cromatografía por desplazamiento y la de cambio cíclico de la zona de adsorción. esto puede lograrse incrementando el volumen o la concentración de la muestra (Figura 8. las relaciones de equilibrio varían conforme cambia la composición de los eluyentes y los modelos basados en isotermas lineales no son aplicables directamente.9). DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 435 establecer que este enfoque tiene sus limitaciones . este modelo tiene sus limitaciones en lo que se refiere al diseño y escalamiento de columnas. Cuando la elución es por gradiente. por lo que su uso es cada vez más limitado. Sin embargo.

CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN Figura 8. Fuente: Kno: y Pyper. . Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. a) Analítica.9: Cromatografía analítica y preparativa. Todos los derechos reseí vados. Copyright ©1986. 1986.436 CAPÍTULO 8. c) Sobrecarga de concentración. b Sobrecarga de volumen.

.10: Modelo por etapas.t) Etapa F 1 y. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 437 y(L. Etapa 2 Figura 8.4.8.

Fyn-i . qn: Concentración de soluto en el adsorbente en la etapa n.1) y (8. El modelo supone que cada etapa está en equilibrio y que la relación de equilibrio está dada por una isoterma lineal.3) donde la cantidad entre corchetes es un volumen hipotético de líquido V* = [e + (1 — E)K\VE que contiene al soluto de las fases líquida y sólida (de tal manera que la expresión (8. . para t < O. yn: Concentración de soluto en la solución en la etapa n.. Inicialmente ninguna etapa contiene soluto. F: Flujo de alimentación.2. £ : Volumen del líquido por volumen de etapa.Volumen de la etapa (líquido más adsorbente).. de tal manera que en cada etapa la relación de concentraciones puede ser expresada como: qn = Kyn (8.(1 .F(y n _.Fyn .N . Acumulación en el liquido — Entrada — Salida — Adsorción lo cual pude ser expresado mediante la siguiente ecuación: 7T . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.2) se obtiene: {[e + (1 .3) es equivalente a un balance de masa de un tanque de volumen V* con entrada y salida).e)K] VE] % .1) (8-2) Combinando las ecuaciones (8. La ecuación (8.yn) (8. . yn = O para n = 1.3) puede ser resuelta con las siguientes condiciones: 1.e)VE-£ \it cLt donde: VE'.438 CAPÍTULO 8.

En el modelo de platos teóricos la variación con el tiempo de la concentración de soluto a la salida de la columna.6) La ecuación (8.4.5) o bien como el volumen total del lecho Vc se puede expresar como: Vc = entonces la ecuación (8.4) Ft (£ + (l-e)K]VE (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 439 donde N es el número total de etapas en la columna. 2. de tal manera que: . característica de los cromatogramas que se observan experimentalmente en comatografías de laboratorio donde la cantidad de muestra es pequeña.5) también puede ser expresada de la siguiente forma: r = NFt (l-e)K]Vc (8. La forma integrada es: yn = y A donde el tiempo adimensional r está dado por: T = (8.11). Al inicio de la operación de la columna se inyecta un pulso muy corto de tal manera que: para t = O.4) es la expresión de una distribución de Poisson. yi = yA (lo anterior corresponde a considerar que la masa de soluto que se alimenta a la primera etapa en el tiempo cero es M = V*y¿).8. Para N grandes (mayores a 30) ésta se aproxima a una distribución de Gauss (Figura 8. puede aproximarse con la ecuación de una distribución de Gauss.

io- o.os N=100 o.440 CAPÍTULO 8.11: Aproximación de la distribución de Poisson a la de Gauss.oo 50 I 100 150 Figura 8. . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN N = 10 o.

El parámetro y0 puede ser relacionado con el sistema mediante un balance de masa en toda la columna.8.7) relaciona la concentración y con los parámetros yo ? oA Y TO] Y con la variable r. ÍT^: Desviación estándar del perfil de concentración de soluto. La ecuación (8. TO: Tiempo adimensional para el cual la concentración de salida es máxima (tiempo adimensional de retención). DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 441 (r y = y»exP -Hr-5^ (8-7) donde: y0: Concentración máxima de soluto a la salida de la columna. de tal manera que: .8) M= Fydt (8.10) puede encontrarse en cualquier texto de probabilidad y estadística que la expresión entre corchetes de la ecuación anterior vale uno. y multiplicando y dividiendo por (2 de tal manera que: M= exp dr} (8. yoo M= I Jo la cual puede ser aproximada a Fydt (8.7). De este balance se obtiene la expresión de la masa M de soluto alimentada al sistema. sustituyendo dt por V*dr/F.9) la ecuación anterior se integra combinándola con la ecuación (8.4. Para poder utilizar dicha ecuación es necesario relacionar estos parámetros con el sistema físico particular.

(8.14) Mediante la ecuación (8.13) (8. dado por: 7-n ~~ — * NFt0 (l-e)K]Ve (8. es función del tiempo de residencia del fluido en la columna (V^/F). la porosidad e del lecho y la constante K. es posible relacionar a A y TO con el número de etapas de la columna.12) que es la expresión que se busca para el primer parámetro. yo = (8.\ lizando la ecuación (8.15) como TO = N. y \it\.7) puede ser escrita en términos de las características y condiciones de la columna como: y = yoexp (í-0 2_ N (8.17) . la ecuación (8.5) se puede definir un t0. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.) Finalmente.16) (El tiempo real de retención de un soluto en la columna.4). de tal manera que: (8.442 CAPÍTULO 8. Mediante las definiciones de media y desviación estándar. entonces: t0 = (l-e)K]Ve (8. entonces.11) como M = V*yA.

DISEÑO DE COLUMNAS > CROMATOGRAFICAS 443 La ecuación (8..4.18) (8. de tal manera que: t= V F Vo (8. mediante la siguiente ecuación: HETP= - (8.8.21) Asimismo. Sin . la cual es una medida de la eficiencia de ésta. se puede obtener la altura equivalente de un plato teórico (HETP de sus siglas en inglés) de la columna.20) Aplicación del Modelo de Platos.Las ecuaciones (8.17) es una distribución normal que tiene un máximo en t = t0 igual a: yo = y una desviación estándar: (27TJV) a= x/TV La ecuación (8.17) y (8. y = yoexp (*-') __ N (8. Una vez calculada N y contando con la longitud de la columna L. dichas ecuaciones han demostrado ser útiles en el análisis de la dispersión y la resolución de los picos de un cromatograma.19) F y entonces.20) pueden ser utilizadas para estimar el número de etapas de una columna a partir de datos experimentales de concentración contra tiempo.17) también puede expresarse en términos del volumen V de solvente añadido a la columna. considerando un flujo constante.

N = 2287 Es importante hacer notar que entre más ancho sea el pico del cromatograma. y viceversa.1. Métodos gráficos para determinar N. Una de las más utilizadas emplea la siguiente expresión: W2 (8. El ancho del pico cuando la concentración es la mitad de la máxima es de 1...444 CAPÍTULO 8.17) para determinar el número de etapas teóricas de la columna.5 s. 0. La cromatografía de perfusión-afinidad de alta resolución de Inmunoglobulina G (Fulton et a/. Ejemplo 8.5 = exp 2_ N aplicando logaritmos en ambos lados de la expresión anterior se obtiene. la HETP es una medida de la amplitud de un pico cromatografía) (eficiencia de la columna). CROMATOGRAFÍA POR ELUClól embargo.Existen varias formas para calcular N a partir de un cromatograma gausiano. no pueden ser utilizadas para predecir el número de etapj o la altura equivalente de un plato teórico. Solución: Se puede utilizar la ecuación (8. ni para predecir en forma el cambio de las condiciones de operación de la columna afectí su comportamiento. 1991) produce un cromatograma con un pico cuyo tiempo medio de retención es de 32. Entre menor sea HETP. N será más pequeña y por lo tanto HETP más grande.60 s. Estimar el número de etapas teóricas de esta columna.22) .Cálculo del número de etapas en la cro-1 matografía de Inmunoglobulina G. Sustituyendo valores. mayor eficiencia de la columna. Consecuentemente.

8- 0.2-J 55 Tiempo (min) Figura 8.6- 0. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 445 1.12: Cálculo del número de unidades de transferencia en forma gráfica. .2- JL Xo 0.8.4.4- 0.

sólo si: .22) se puede calcular N. CROMATOGRAFÍA POR donde W es el ancho de la base del cromatograma medido entre las rectas tangentes que pasan por los puntos de inflección del cromatograma.446 CAPÍTULO 8.12 el numero de etapas teóricas obtenidas en la cromatografía de transferrina. W = 49 min — 33 min = 16 min y el tiempo de retención. La teoría de platos es muy utilizada debido a que permite una rápida caracterización y una comparación sencilla entre columnas Ejemplo 8.2. Para iniciar la revisión de algunos modelos cinéticos es conveniente describir cuatro comportamientos generales de una columna cromatográfica operando en modo elución ¡socrática.. Caso 1.13.. Para realizar el cálculo es necesario determinar el ancho del cromatograma. Estimar a partir del cromatograma que se muestra en la Figura 8. t0 = 41 min sustituyendo valores. Este enfoque resulta más complejo que el de la teoría de platos pero permite mejorar la descripción y comprensión de estos sistemas.Un pulso inyectado a una columna no sufrirá ningún cambio a la salida de la columna. relaciones de equilibrio y expresiones cinéticas. Solución: Utilizando la ecuación (8. N = N 16(41 min)'' (16 min)2 = 105 Modelos Basados en la Teoría Cinética Los modelos basados en la teoría cinética describen el comportamiento de una cromatografía mediante los perfiles de concentración de los solutos obtenidos mediante balances de masa. descritos en la Figura 8.Cálculo gráfico del número de etapas teóricas.

Descripción cualitativa del comportamiento de una .4. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 447 Casal Caso 2 Caso 3 Caso 4 Figura 8.13: columna.8.

los cuales presentan diferentes grados de complejidad y difieren entre sí en: . La técnica cromatográfica se basa en el hecho de que diferentes solutos pueden sufrir diferentes retardos en un mismo adsorbente.448 CAPÍTULO 8.Un pulso inyectado a una columna donde exista un cierto grado de flujo no ideal debido a un empaque deficiente o a fenómenos de difusión axial. . pero no exista adsorción. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. pero con cierto grado de dispersión.Los solutos no penetran al interior del adsorbente. La elaboración del modelo de la columna se inicia con el balance de masa de.Los efectos de mezclado que incorporan.La cinética en la superficie del adsorbente. . sufrirá un retardo y un cierto grado de dispersión al pasar por la columna. . presentará un tiempo de retención promedio igual al del pulso del caso 1.Un pulso que contenga un soluto que pueda ser adsorbido.. Caso 3.El número y tipo de resistencias a la transferencia de masa que toman en cuenta. Caso 4.Un pulso inyectado a una columna donde exista adsorción y efectos de flujo no ideal simultáneamente.Los solutos no reaccionan (no se adsorben) con el adsorbente. soluto en la fase líquida en una sección de la misma. . Se han desarrollado varios modelos para predecir los perfiles de concentración de las colunas cromatográficas desde el punto cinético. dt donde: dz2 dz . tendrá un tiempo de retención igual al del caso 3. .El flujo en la columna es idel o tipo tapón.. Caso 2. La dimensión de estos efectos dependerá de de la naturaleza de la adsorción. .. pero una mayor dispersión.El tipo de equilibrio que consideran.

[M/L3 — t]. mientras que las condiciones iniciales son diferentes. la velocidad de transferencia de masa del líquido al adsorbente puede ser expresada como: R = kLa(y . [M/L3]. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS e: Fracción vacía del lecho. E: Coeficiente de dispersión axial. [L3/L3]. z: Distancia axial.Este modelo supone que sólo una resistencias controla la transferencia de masa.¡ 8A.24) A continuación se revisan dos modelos cinéticos de diferente grado de complejidad.25) donde y* es una concentración hipotética en el líquido en equilibrio con la concentración de soluto en el adsorbente (en algunos casos la k^a se toma como un coeficiente que agrupa todas las resistencias. t: Tiempo. y: Concentración de soluto en el líquido. el modelo cinético lineal y el modelo cinético general.. [t]. En el caso que la resistencia en la película sea la controlante. [L2/t]. En este punto es importante recordar que los balances de masa y las relaciones de equilibrio para columnas cromatográficas son iguales que los de adsorción en columna.y*) (8. Modelo Cinético Lineal. ambos consideran relaciones de equilibrio lineales. [L/i\. [L]. . El balance de soluto sobre el adsorbente complementa al balance anterior y puede ser expresado como: /2 = (l_ e )|? (8. R: Velocidad de adsorción de soluto en el adsorbente. 449 v: Velocidad superficial (flujo por área de sección transversal de columna). debido a la dificultad experimental de mediciones que puedan distinguir entre los diferentes mecanismos de control).

y al término entre corchetes se le llama número de unidades de trasferencia NTU (de sus siglas en inglés).El modelo cinético general para describir una columna cromatográfica es más complejo e incluye los efectos de: . entonces la ecuación (8.NTU (8. . El modelo supone además que la dispersión axial y la acumulación en la fase líquida son despreciables. .Resistencia a la transferencia de masa en la película. de tal manera que la ecuación anterior puede ser expresada como: L = HTU.. . L L= ¡ dz = V dy y -y") (8.27) Esta ecuación puede ser integrada para obtener la longitud necesaria de la columna para un determinado grado de separación.Dispersión axial. .26) dv kLa(y-y*) = -v-^ (8.Resistencia a la difusión al interior de la partícula.29) La ecuación anterior puede ser utilizada para calcular la longitud necesaria de una columna cuando se conoce k^a.23) se transforma en: R = -v Combinando las ecuaciones (8.28) al término entre paréntesis cuadrados de la ecuación anterior se le llama altura de una unidad de transferencia HTU (de sus siglas en inglés).450 CAPÍTULO 8. Los modelos cuando la resistencia controlante es otra son análogos.Adsorción reversible de primer orden sobre la superficie de los poros (isoterma lineal). CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Modelo cinético general: Teoría de momentos.26) se obtiene: (8.25) y (8.

es la concentración de soluto en el adsorbente y e.8. Dp: Difusividad del soluto al interior del poro del adsorbente.\r=Ra dp or (8. t j \ _^^^^_ ^ ( § w <jy \ donde </.31) donde: e: porosidad del lecho.4.r. Balance de soluto en el seno del líquido de la columna: 2 dy dy D y c1 d y " (Q Q n \ 6— = £-T-T — v-" ri (0. 3. Ra: Radio de la partícula. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRÁFICAS 451 Estos efectos se integran mediante un modelo pseudocontinuo descrito por el sistema de ecuaciones que se lista a continuación. r: Distancia radial del centro de la partícula a un punto dado en la partícula de adsorbente. l ~dt~ — ¡ip i __^_^_ + _^_ Q i ( "--" ~ ~ '"" ( _ i /1 £». 2. es la porosidad de la partícula de adsorbente al soluto de interés. dp: Diámetro de la partícula de adsorbente. dada por: /"»/1 \ O 6(1 — e) oyi. Balance de soluto interfacial en la superficie del adsorbente: Dp-^-\r=Ra = kL(y . R es la velocidad de transferencia de masa de soluto entre el líquido y el adsorbente por unidad de volumen de lecho. 1. R——i Dp-. yt-: Concentración de soluto en la fase líquida al interior del poro. Balance de soluto al interior del poro: £>.yl)\r=Ra (8.60) ¿ ot oz oz En la expresión anterior.33) .

30)-(8. 1976). La solución en el dominio de Laplace fue utilizada para calcular los momentos del perfil de concentración del soluto dados por las expresiones siguientes: La ecuación para el momento u del perfil de concentración del soluto en un lecho de longitud L es.O y = yA r 2 r 2 =0 >O >O = 0 2 = 0 t > tp £/ = O donde íp = Vp/F es la duración de un pulso rectangular de volumen Vp inyectado a la columna. El sistema de ecuaciones (8.35) de tal manera que el momento absoluto n es.36) . Las condiciones iniciales y de frontera del sistema de ecuaciones anterior son: en: para: í>O t =0 ¿= O O < í < ¿p se tiene: fr = O y =O yi . oo mn= y(t.L)tndt (8.452 CAPÍTULO 8. 4.34) donde &i es la constante cinética de la reacción de superficie en el sentido directo y K es la constante de equilibrio de la reacción de superficie. pero la | solución no pudo ser invertida para obtener la expresión de la concentración a la salida como una función del tiempo. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.L)tndt Jo (8. Adsorción reversible de primer orden en la superficie del adsorbente: (8. rnn m J™y(t.34) fue resuelto en el dominio de de las Transformadas de Laplace (Furusawa et a/.

El primer momento absoluto o tiempo de retención promedio dado por: ^£y(t.L)tdt ^ /o°°y(*. = O y no existe adsorción.39) se reduce a: tp _ Le 2.SA. 453 . el tipo de empaque y de la constante de equilibrio. Se puede utilizar la expresión del primer momento absoluto para estimar la porosidad de lechos cuando el soluto es tan grande que e..L)dt y de acuerdo al modelo general. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS y el momento central n. L e + ( l .e W l + ^l + f ' tp v De acuerdo a la ecuación anterior.39) y de acuerdo al modelo está dado por.El segundo momento central es una medida de la dispersión del pico y está dado por: Í8 40) 4fn (8 ' ' J~y(t. rn J?y(t.L)(t- Jo 2/0 roo / Dos momentos tienen un significado físico y son de particular interés en cromatografía: 1.¿)<ft (8. el tiempo de retención de un soluto en la columna depende del tiempo de residencia del eluyente. .. de tal manera que la ecuación (8.

utilizando pulsos de 1 -mi en una columna de 1. los coeficientes de dispersión que se determinen en una columna de laboratorio pueden ser muy diferentes a los de una columna industrial. Ejemplo 8.41 La ecuación anterior muestra que la dispersión del pico respecto al tiempo de elución o segundo momento central.6 cm de diámetro.454 CAPÍTULO 8. las constantes cinéticas de adsorción y la porosidad de la partícula. Sin embargo. el coeficiente de dispersión y los parámetros del empaque. como la difusividad efectiva de partícula. su uso está restringido a sistemas que presenten isotermas y expresiones de transferencia de masa lineales. la constante cinética de adsorción.Estimación de la porosidad de un adsorbente. el coeficiente de difusión efectiva al interior del poro. es función de varios parámetros como el coeficiente de transferencia de masa en la película. la constante de equilibrio. Otra desventaja del método de momentos es que la solución no se obtiene en el tiempo real y no se puede predecir el efecto de los parámetros o variables de diseño sobre los perfiles de concentración. pero sólo de aquellos que no varian con la escala. El método de momentos elimina la necesidad de una solución numérica del sistema de ecuaciones de conservación de la columna. variando su longitud entre 26 y 31 cm.. 12 (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Los estudios se realizaron bajo condiciones . Una de las principales aplicaciones del modelo es en la estimación de parámetros para diseño. 1985) los tiempos de retención promedio de mioglobulina y albúmina de suero de bovino (ASB).3 . Se determinaron (Arnold et a/. Sin embargo.

35 + (l-0.8 sustituyendo valores para el caso de la albúmina se tiene: 0.692 v La porosidad de la columna se estimó utilizando datos de tiempo de residencia de azul de dextrano (molécula que no penetra en los poros del adsorbente ni se adsorbe) y fue de e = 0.87 = 0.8.52 El adsorbente presenta diferente porosidad dependiendo del tamaño del soluto: BSA (PM=67. v Para Albúmina: _ | = 0. utilizando Sefarosa CL-4B (100 /im).39) se puede expresar como: entonces.35)e¿ £¿ = 0.35)e¿ e¿ = 0.69 = 0. A partir de estos resultados estimar la porosidad del empaque e¿.000) y Mioglobulina (PM = 17. la ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 455 de no-adsorción (columna equilibrada con solución amortiguadora de elución K = 0). = [e sustituyendo valores en la expresión anterior para el caso de la mioglobulina se tiene: 0.4. Los resultados se correlacionaron con L/v y se ajustaron a las rectas: Para Mioglobulina: Mi - 2 = .500) . Solución: En el caso que no existe adsorción (K=0).35+ (1 -0.35.

Se han efectuado diferentes intentos para superar esta limitación de la teoría de platos.El modelo combinado lineal. considerando que ambos modelos describen ui comportamiento gausiano similar.28) y (8.17) se puede obtene el perfil de concentración en función de las variables de operación..4 .El modelo de van Deemter.456 CAPÍTULO 8. de tal manera que de acuerdo a la.42 y combinando esta ecuación con la ecuación (8. todos los desarrollos efectuados han producido expresiones en las que la HETP (medida del grado de dispersión del pico) se relaciona con parámetros que permiten predecir el comportamiento de la columna. . y = yoexp 2v En la ecuación (8.43) la desviación estándar del pico está dada po por otro lado se sabe que: HETP=— yv (8. pero no puede ser usada para predecir el comportamiento de columnas a partir de datos fundamentales. es igualar el número de platos teóricos de la teoríí de platos (N) con el número de unidades de transferencia (NTU) de modelo cinético lineal.29): J N = NTU= !^L v (8. Modelos Combinados: Teoría de Platos y Teoría Cinética Las teoría de plato es sencilla en su desarrollo matemático. Sobre este tipo de enfoque dos tipos de modelos resultan de particular interés: .Una primera aproximación para la obtención de expresiones de HETP en función de variables de operador de la columna. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. ecuaciones (8. Modelo Combinado Lineal.

67 kL = l. = 7r(0. 2 Solución: a) Cálculo de la constante de equilibrio.16) para obtener A'.41 era de diámetro..41 era)' x 25 cm . c) N. b) N y HETP de acuerdo al modelo de platos. sino en función de características físicas del sistema . con silanos como brazos espaciadores y 1-prolina como ligando.8A. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 457 y se puede expresar el HETP no sólo en términos de un parámetro hipotético TV.7 x 10 -5 cm /s.4. sobre N y t0. rellena de partículas esféricas de 0. La fracción vacía de la columna se estimó en 0. HETP = v (8. d) El efecto de variaciones de ±20 % de la longitud de la columna. La viscosidad y densidad pueden ser tomadas como las del agua. cr2 y HETP de acuerdo al modelo lineal combinado. para lo cual es necesario calcular primero el volumen del lecho Vc: V. Se pide calcular: a) La constante de equilibrio del sistema. cuando se utiliza una columna de 25 cm de longitud y 0.Cromatografía de aspartamo.38 y el flujo utilizado fue de 2 cm3/min. el cual puede ser estimado por medio de la siguiente correlación: -0. 1988) en sílica gel modificada. La cinética de adsorción puede suponerse que es controlada por el coeficiente de transferecia de masa de la película. La cromatografía de d-aspartamo (Belter et al. produce un cromatograma en el cual el tiempo de elución del d-aspartamo es t0 = 62 min y la desviación estándar a = 3 razn. Se puede utilizar la ecuación (8.llv La difusividad del d-aspartamo en estas condiciones es 0.46) Ejemplo 8.0045 era de diámetro.

46). cm 2 min . cr2 y HETP con el modelo combinado lineal. De acuerdo con las ecuaciones (8.0. Vc Vc = 0.16) y sustituyendo valores se tiene: tnF K = K = 1 .. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. N N = -\ 622 min2 = 15—^ 6¿ min¿ = 427 N por la definición de HETP dada en la ecuación (8. Para calcular TV se utiliza la ecuación (8.45).458 CAPÍTULO 8.132 cm2 x 25 cm = 3.30 cm3 K = 60 b) Cálculo de N y HETP con el modelo de platos. X v = 0. HETP HETP HETP L^ ~Ñ 25 cm = 427 = 0.38 62 min x 3.132 T7iin _„ 60 s = 0.0585 cm = c) Cálculo TV. Para tal efecto primero se calcula la velocidad superficial v.25 cm .42).30 cm3 rearreglando la ecuación (8.45) y (8.

67 x 10-J — s X El cálculo del área interfacial es: 6(1-g) dp 6(1 .67 cm'1 entonces.38) a = 0. s 468 De acuerdo a la ecuación (8.42 kL s \ 0.46).0045 cm a = 826. a — i.25 ss. x ———* -0.67 cm~1)(25 cm) 0.25 — x 0.25 22.4.0. 62 min \/468 2.0045 cm x 0.01 -f- -0. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 459 El coeficiente de transferencia de masa se calcula utilizando la cor rrelación dada de tal manera que: cm = 1. N = TV = v (5.01 JbL x 0.67 0.7 x 10~5 sai cm = 5.86 .67 x 10~3 sa)(826.8.17 x 0.

.052 cm d) Para resolver este inciso necesariamente se tiene que hacer uso del modelo combinado lineal. = [0. Modelo de van Deemter.460 CAPÍTULO 8. de tal manera que el perfil de concentración del soluto a la salida de la columna también sea gausiano como el de la teoría de platos. Este último fue utilizado en forma simplificada para el caso de un sistema con isoterma de adsorción lineal y una columna larga.6 min De la misma manera se pueden efectuar los cálculos para L — 30 era (+20%). es decir.47). Esta es la ventaja de este tipo de modelo.67 x 10~3 ^f)(826. POR ELUCIÓN.El modelo de van Deemter (van Deemter ti a/. Una columna de 20 cm representa la reducción de un 20 % en longitud de tal manera que: (5.86 min) 2 x 25 cm (63 min)2 = 0.38 + (1-0. CROMATOGRAFÍA De la ecuación (8. El resultado fue obtener una expresión para HETP en función de los parámetros .38) 60] x "-"E cm^x 20 cm rntn t0 = 49. Estos autores combinaron los resultados de la teoría de platos con los del modelo cinético de Lapidus y Amundson (Lapidus y Amundson. HETP HETp = °-^= HETP (2. nos permite hacer predicciones con la variación de ciertos parámetros. 1956) es uno de los más conocidos para cromatografía por elución. 1952).67 cm~ 1 )(20 cm) _____ TV = 374 por otra parte: í.

el segundo término del lado derecho de la ecuación (8. Dado que el modelo de Lapidus y Amundson incluye los efectos de dispersión axial (difusión molecular y mezclado). E = rjDAB + iv (8. [L]. DAB'. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 461 considerados por Lapidus y Amundson para su modelo cinético.4. Demostrar <que para el caso de perfiles de concentración gausianos la teoría de momentos y la de van Deemter producen resultados idénticos. Una versión reciente (Arnold et a/.8. la expresión de van Deemter considera todos estos efectos en tiempo real.47) puede ser despreciado.Coeficiente de difusión del soluto. En la expresión anterior el coeficiente de dispersión axial E se considera que está conformado por dos contribuciones: la difusión molecular en la dirección axial y un término de mezclado que es proporcional a la velocidad. esto es. resistencia a la transferencia de masa en la película y al interior del poro. 1985) de la expresión de van Deemter es: 12 HETP = (8 47) ' donde: t\ Longitud de mezclado..5.Comparación de los resultados de la teoría de momentos con el modelo de van Deemter.48) En el caso de cromatografía líquida de moléculas de tamaño grande (por ejemplo proteínas). Ejemplo 8. ?/: Tortuosidad del lecho. . [L2/t].

Solución: En el caso de perfiles gausianos se cumple que: de tal manera que: HETP = La expresión anterior conjuntamente con las ecuaciones (8.49) .39).462 CAPÍTULO 8. (8. i )momentos — \f* KJi i )van Deemter j La ecuación de van Deemter (8.47) en su versión más popular y simplificada se escribe como: HETP = A + . producen valores bajos de A.41). ya que esto determina la longitud y uniformidad del mezclado. Las partículas de diámetro pequeño. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. cuando se considera que existe equilibrio sobre la superficie del adsorbente (sólo existen las resistencias de la película y del poro) y que el pulso alimentado es de duración corta. (8. (8.+ Cv v donde: El término A es función del tamaño y uniformidad del adsorbente de la columna.48) y las condiciones particulares: tp A = O g conducen a: \íl Hj J.

DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 463 K f El término B se relaciona con la difusión molecular axial. análisis rápido de un componente o una alta productividad. Si la velocidad superficial se incrementa.4.8. es decir. el tiempo para lograr el equilibrio es menor. Para una columna particular es posible encontrar la ecuación de van Deemter efectuando mediciones de HETP a tres velocidades diferentes.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución. Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna. Este término puede ser despreciado en el caso de cromatografía líquida y particularmente cuando el soluto es una molécula grande como una proteína. 8. Este término es función de la geometría de la fase estacionaria. Se observa que existe una velocidad óptima debido a los efectos opuestos de los términos B/v y Cv. Cuando el rendimiento de una operación disminuye conforme la pureza deseada aumenta. de acuerdo al modelo de van Deemter. el término B/v aumenta. estos objetivos no pueden lograrse simultáneamente. esto significa que al ser mayor el tiempo de retención hay más tiempo para que el pulso se disperse por difusión molecular. Pureza y Rendimiento El objetivo de un proceso cromatográfico puede ser alguno o algunos de los siguientes: alta purificación de un componente. a incrementar el HETP. El término C representa la dispersión del pulso debida a la resistencia a la transferencia de masa. el término Cv se incrementa. En la Figura 8. Esto significa que a mayor velocidad superficial en la columna.4. Si la velocidad superficial en una columna disminuye. Consecuentemente la contribución de este término tiende a disminuir la eficiencia de la columna.14 se muestra el efecto de la velocidad superficial en la columna sobre el HETP. . del coeficiente de distribución del soluto y de las velocidades de transferencia.

Copyright ©1982.Este factor es una medida de la afinidad de los solutos por el adsorbente (Figura 8. Todos los derechos reservados. La teoría cromatográfica permite evaluar el comportamiento de una operación mediante el uso de tres criterios: Resolución.464 CAPÍTULO 8. Fuente: Janson y Hedman. Pureza. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. . La resolución de una columna depende de dos factores: La selectividad de la columna.14: Efecto de la velocidad superficial sobre HETP. Resolución En la cromatografía por elución un objetivo puede ser el separar los componentes de una muestra en forma satisfactoria. 1982. no-equilibrio Calidad de empaque Difusión longitudinal U Figura 8.15 a y b ). La medida del grado de separación de dos componentes en una operación cromatográfica se conoce como resolución o eficiencia de separación. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.. Rendimiento.

Puede ser demostrado que cuando esto sucede: Rs = 2( * Q2 "* Ql) > 2 (8. Numera de platos pequefio Factor d« separación bueno Número de platos pequeño Respuesta c) d) Factor de separación pobr Número de platos grande ^ < | >X ^ ^ SS _j Factor de separación bueno Número de platos grande \ ¿ / \ * \ / / / ' ^ A t / / 1* $ ^ | i^O t ' +/ y j/ ^ o<N vo J <.15 c y 8. se intersectan abajo del eje t.15 d). La eficiencia de la columna.. . Si se considera la Figura 8.4.5 es satisfactoria.Este factor está relacionado con el grado de dispersión de los picos (Figura 8.50) W = 4<r (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 465 Factor de separación pobre.Rs es la resolución.8.16 una separación completa de dos picos puede lograrse cuando las rectas que definen la amplitud de la base de los picos W'.51) donde .15: Efecto de la selectividad y de la eficiencia sobre la resolución. v ^ ^^ ^ t i/s Tiempo ^ Figura 8. Generalmente una Rs =1.

Para disminuir el ancho de los picos. (c) Mejorar la selectividad. pero existen algunas lineas generales como las siguientes: 1.16: Medición de la resolución. (b) Optimizar el flujo. 2. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Por ejemplo. (c) Reducir el tamaño de la muestra. .466 CAPÍTULO 8. (a) Empacar más uniformemente la columna y/o disminuir el tamaño de las partículas del empaque. selecionando otra fase estacionaria u otra fase móvil. como en la separación de mezclas de proteínas. (b) Aumentar la cantidad de la fase estacionaria. (a) Incrementar la longitud de la columna L.50) puede ser utilizada conjuntamente con los modelos cromatográficos apropiados para analizar este tipo de acciones y generar las decisiones correspondientes. se puede estimar la longitud necesaria de una columna para alcanzar una determinada resolución. En este caso la mejor forma para mejorar la resolución depende del tipo de cromatografía. Respuesta Tiempo Figura 8. Una resolución adecuada puede ser difícil de obtener cuendo se trata de resolver una mezcla de componentes con propiedades similares. Para incrementar A¿ = t02 — t0\. La ecuación (8.

Calcular la resolución lograda en una columna de filtración en gel en la que se separa un anticuerpo de una impureza y se obtienen los siguientes resultados: Anticuerpo Impureza 7. menor rendimiento puede ser obtenido.42 0.4. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 467 Ejemplo 8. Es posible efectuar un análisis de pureza y rendimiento de columnas.8. Wl = 4<7! = (4)(0.6. Pureza Cuando se tiene una resolución muy baja debido a propiedades muy semejantes entre los solutos de una mezcla o por cuestiones de productividad. empleando los modelos revisados. existe un compromiso entre el rendimiento alcanzable y la pureza deseada. esta resolución es demasiado baja.51).2 h W2 = 4<r2 = (4)(0.175 h) = 0.600 0. Entre mayor sea la pureza requerida.175 43 í0(h) <7(h) y0 Solución: 6.80 82 Se puede calcular el ancho de las bases de los picos W utilizando la ecuación (8.. Considerando que en una operación cromatográfica la masa eluída del soluto j de una mezcla.50).Cálculo de la resolución de una columna.80 h) = 3. en el intervalo de t a t está dada por: .7 h la resolución se calcula con la ecuación (8.

54) = I Fyjdt Jo la proporción de soluto j recuperada en el intervalo de t a. La masa total de soluto j inyectada a la columna está dada por: r (8. se define como la razón de la masa de soluto j obtenida en el intervalo de t a t. yji Concentración del soluto j a la salida de la columna. (8.. PRj. respecto a la cantidad aplicada en la muestra original.468 CAPÍTULO 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.52) la pureza del soluto j.53)] donde n es el número de solutos presentes. SE. entre la masa total obtenida en ese mismo intervalo. SE3 = / Fyjdt jt donde: jí Masa del soluto j eluída en el intervalo de tiempo.dt ti Fyj y¿dt 8.53) y (8. F: Flujo de solvente en la columna. es decir: PRj = Jt ^=JtlFy. . nos permiten calcular y/o predecir (según el tipo de modelo) rendimientos y pureza en columnas. t o rendimiento REj puede entonces expresarse como: fi Fy3dt reo „ . Jo Fyjdt Las ecuaciones (8. Rendimiento El rendimiento de una operación cromatográfica puede ser definido como la cantidad de soluto recuperado en un cierto intervalo.55) combinadas con los modelos que describen los perfiles de concentración en las columnas.

Puede observarse un traslape de los picos de estas sustancias debido a la baja resolución de la operación. si la masa de anticuerpo y la masa de impureza alimentadas a la columna son 1.45 g.7. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRÁFICAS 469 90- Anticuerpo 80706050- Impureza 40-^ 302010- 0 10 t(h) Figura 8.4.7. Solución: Combinando las ecuaciones (8..17) y (8. respectivamente (se usa el subíndice 1 para el anticuerpo y el subíndice 2 para la impureza). Ejemplo 8.17: Perfiles de concentración del Ejemplo 8.17 muestra los prefiles de concentración del anticuerpo y la impureza del Ejemplo 8. .55) se obtiene una expresión para el rendimiento en función del tiempo.Pureza y Rendimiento La Figura 8.63 g y 0. Describir la variación de la pureza y el rendimiento del anticuerpo con el tiempo de operación.8.6.

obteniéndose: = -\Erf J 2 -Erf cuando i — O la expresión anterior pued e aproximarse a: 1 + Erf i — ¿oí La variación de la pureza con el tiempo de operación se obtiene combinando las ecuaciones (8. — 82 REl 82 REl + 43 .42V 1 + Erf [ .17) y (8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.>/2(0.470 CAPÍTULO 8.60 V = 1 + Erf ( 2 . — 1 2 pp. t' - La expresión anterior puede integrarse expresando la integral del numerador como una diferencia de integrales y utilizando la definición de la función error.N/2(0. PRr '/' Fy0i exp [-^l^p-J di + Jt' Fyoi exp [-^l^~J dt utilizando la definición de función error la expresión anterior puede expresarse como: sustituyendo valores en las expresiones desarrolladas se tiene: fíF 1 ILJ\ RE2 'Í-6.53).8)JJ 1 ' í-7.175)J. REi = ü"= 1 y ° iexp i (^oj.

pero no ambos.18: Perfiles de pureza y rendimiento del Ejemplo 8. 8.18.3 Escalamiento y Optimización El escalamiento de una columna cromatográfica consiste generalmente en determinar el diseño de la columna que permita cumplir con una productividad mayor a la de la columna empleada en la obtención de los datos para el el diseño.4. En general las técnicas de escalamiento surgen del reconocimiento de la imposibilidad del diseño de este tipo de equipo mediante modelos . Los resultados sobre los cálculos de los rendimientos y la pureza de anticuerpo se muestran en forma gráfica en la Figura 8.7.4. Se puede constatar en la figura el hecho de que en una operación de separación generalmente se pueden obtener altas purezas o altos rendimientos.o Figura 8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATO GRAFIO AS 471 o.8.

.472 CAPÍTULO 8. En el caso de muestras más concentradas generalmente se producen isotermas no lineales y efectos de interferencia de los solutos en la adsorción. manteniendo la concentración y el tamaño relativo de la muestra. En algunos casos sólo se busca incrementar la producción. En estos casos no puede ser aplicado el concepto de HETP desarrollado para sistemas lineales.Incrementar el flujo volumétrico a procesar. 1. 4. . Cuando se incrementa la concentración y/o el volumen de la muestra se produce una condición de sobrecarga. Son varios los factores a considerar en el escalamiento de columnas cromatográficas dentro de los cuales se pueden destacar los siguientes.Incrementar el volumen de la muestra. Características de flujo: El escalamiento de columnas presenta varios problemas asociados al flujo dentro del lecho: .9). debe también cumplir con las restricciones del proceso en cuanto a pureza. concentración del producto y duración de cada ciclo. Criterio de escalamiento: Existen varias alternativas no excluyentes que pueden servir de base para realizar el estudio de escalamiento como: . El incrementar sólo el flujo volumétrico. permite conservar la linearidad del proceso. estrictamente teóricos (Gibbs y Lighfoot. 2. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. rendimiento. que produce un perfil de concentración no gausiano a la salida de la columna (Figura 8. 3. 1986). Restricciones: El escalamiento además de cumplir con el objetivo fundamental de incrementar la productividad (o al menos la producción).Incrementar la concentración de la muestra. que se traducen en una disminución del grado de purificación obtenible. Objetivo del escalamiento: Generalmente el objetivo de un escalamiento es incrementar la productividad.

1960).El incremento de la longitud de la columna es imposible sin reducir la velocidad de percolación debido a que generalmente las caídas de presión de las columnas de laboratorio están en el límite del colapso de los adsorbentes empleados. 6.8. Método de escalamiento mediante modelos. En el proceso de escalamiento generalmente también se busca optimizar la columna fijando criterios de máxima productividad o mínimo costo. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 473 . Dinámica de la columna. La caida de presión en una columna empacada en régimen laminar está dada por la ecuación de Blake-Kozeny (Bird et a/. Dc y L.4. (8 57) ' 5. . En el proceso de escalamiento es fundamental tomar en cuenta los grupos adimensionales que se derivan de la expresiones diferenciales que describen los perfiles de concentración en la columna. Es importante distinguir dos métodos de escalamiento comunmente empleados en cromatografía: Método de escalamiento directo. Geometría: Los parámetros básicos que define la geometría de una columna y que pueden ser modificados son: c/p.El incremento del diámetro produce problemas de distribucción del flujo y de incremento del gradiante de presión por disminución de soporte por la pared. donde v es la velocidad superficial y está dada por la relación: 4F donde D es el diámetro de la columna. de particular importancia son el tiempo t/t0 y el número de unidades de transferencia NTU o de etapas teóricas N. .

Caso de escalamiento directo de un sistema lineal. 1987). la cual es función de la concentración de entrada principalmente. requiere mantener iguales ?/0. la concentracción máxima de soluto. 21 (¿""O = y0 exp _ N mantener los perfiles iguales durante el escalamiento. Este método permite determinar el tamaño y las condiciones de operación de la escala nueva en forma rápida. para cada uno de los solutos en ambas escalas (escalas 1 y 2). Escalamiento Directo La mayoría de los procesos cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio (Wang.474 CAPÍTULO 8. El número de etapas cuando sólo un mecanismo controla la rapidez de la adsorción puede ser expresado como: . El perfil de concentración de los solutos a la salida de la columna debe mantenerse igual en ambas escalas. 1990). lo que permite mantener la linearidad del proceso. puede considerarse igual en ambas escalas. consiste en seleccionar como parámetro de escalamiento un incremento del flujo de la columna. En este caso lineal los perfiles gausianos están dados por la relación ya conocida. A continuación se presenta caso particular de escalamiento directo con el proposito de ilustrar este método. o sea y0l = y0in donde los subíndices I y II se refieren a cada una de las escalas.. TV y t/t0. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.Uno de los enfoques más utilizados en el escalamiento de columnas cromatográficas. Si el escalamiento es sólo a través del incremento de flujo. Una limitación de este método es la escasa información que genera sobre los mecanismos cinéticos controlantes. el método de escalamiento directo se parte de un diseño óptimo desarrollado generalmente a nivel laboratorio (puede ser teórico) y se supone que los fenómenos difusionales no varían dentro del rango de escalas que se estudia. Estas restricciones requieren que la dinámica de la columna no cambie. Generalmente las restricciones son de igual pureza y rendimiento en ambas escalas (Cowan ti a/.

con una columna de menor volumen y conservando la misma caída de presión (Wankat y Koo. Esto permite aumentar la producción (no la productividad).56).58) Asimismo. Sin embargo. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 475 N = ^ (8.4. sin embargo esto también conduce a un cambio en el valor de N. Como tercera alternativa se puede considerar mantener dp igual para ambas escalas e incrementar v y L. de tal manera que la relación L/v sea igual en ambas escalas. dp y L. También se puede considerar incrementar Dc y dp. La solución comúnmente empleada consiste en usar columnas poco esbeltas (gordas) con dp . Para reducir los costos asociados a la inversión inicial en las columnas.58) o mecanismo controlante de la cinética.59) v Como primer alternativa se puede considerar incrementar Z)c. De tal manera que el proceso . lo que permite mantener t0 y N constantes entre las escalas. L y v iguales a las de la columna de escala laboratorio. es preferible utilizar cada columna en varios ciclos procesando alícuotas del material inicial. de acuerdo a lo que establece la ecuación (8.8. el tiempo de retención está dado por: t0 = [e + (l-e)K](8. es posible realizar el escalamiento y obtener una mejor resolución. en casi todos los casos de un sólo mecanismo controlante. independientemente del valor que tome n en la ecuación (8. En el caso de que en el proceso de escalamiento pudiera disminuirse el diámetro del empaque utilizado a nivel laboratorio d p . al aumentar el área de flujo o diámetro de columna. entonces el problema de optimización de la columna escalada se traduce en encontrar el diámetro de columna que produce el menor costo del producto. 1988). de tal manera que su razón se mantenga constante. sin embargo. incrementar simultáneamente L y v produce un efecto dramático sobre la caída de presión. no es posible hacer este cambio sin alterar el perfil de concentración dado que el valor de N cambia con todos estos parámetros.

se utiliza una columna cromatográfica de 5 cm de diámetro y 15 cm de longitud.7. escalas I y II). Solución: a) De acuerdo a la ecuación desarrollada en el Ejemplo 8. Con el propósito de separar una proteína de sus sales acompañantes. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN de escalamiento y el de optimización. 0.8. 1987). La alimentación consiste en una solución diluida que contiene una mezcla de solutos. Guarido la columna se opera a 10 cm/h se produce una separación caracterizada de la siguiente manera (Janson y Hedman. b) Si se desea incrementar la productividad de la columna mante niendo la misma geometría y suponiendo que la etapa controlante es te que la desviación estándar es proporcional a v~í. 1 + Erf ( t-t 0\ sustituyendo valores. 80 % de la cual es transferrina y 20 % sales (como NaCl). se desarrollan simultáneamente (Janson y Hedman.. empacada con sefacril S-200 superfino (dextrano).476 CAPÍTULO 8. 1982): Transferrina t0 (min) 41 <j (min) 4 Sales 88 4 Se pide: a) Calcular el tiempo necesario para obtener el 90% de rendimient< de transferrina. Ejemplo 8.1 + Erf i -41 2x4 . calcular la velocida de alimentación máxima y el tiempo del ciclo necesario para obtener u rendimiento de 99% de transferrina con 98% de pureza (transferrina^ y sales=2.Optimización de una columna.90 = .

477 ¿90% =46.4.8) (REu). . como a oc t>~2 ? se pueden desarrollar la siguientes relaciones: = (-)* \viij utilizando la ecuación (8. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS de tal manera que. se obtiene: ton Sustituyendo valores se puede establecer el siguiente sistema de ecuaciones: (0.8.59).7.1 min b) De acuerdo a las expresiones también desarrolladas en el Ejemplo 8. la pureza de la transferrina en la masa total colectada en un intervalo de tiempo está dada por: masa de transferrina masa 7T~j total (masa de transferrina)(RE\) (masa de transferrina](RE\] -f (masa de sal^RE?) PR\ - Por otro lado.

Calcular cr// y ton para ambos solutos. . Suponer una t?//. !_ 2 1 2 12. puede ser diferente. .65 410 880 VJ1 Erf | LJf» "\ El sistema anterior puede ser resuelto mediante el método de cálculo siguiente: . La Figura 8. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. Calcular t de la ecuación de rendimiento de transferrina.19 muestra los perfiles de los solutos para el caso base y la situación nueva. De acuerdo a lo anterior el resultados es: vtl = 93 cm t = 7. También es importante hacer notar que para otro tipo de cromatografía la expresión de la desviación estándar utilizada en este ejemplo.3 veces la velocidad en la columna. siempre y cuando el mecanismo controlante se mantenga en ambas situaciones. .4 min Esto representa aumentar 9. La suposición de v¡¡ será correcta cuando ésta sea del 98 %. Calcular el rendimiento de sal. . Con los datos anteriores calcular la pureza de la transferrina.478 CAPÍTULO 8. Los resultados sugieren que a nivel laboratorio la optimización consiste en incrementar la velocidad manteniendo una resolución o pureza adecuada. . El análisis anterior es válido.65 12.

000- 1> 2.000- 3.0001.000 Escala I Escala I 10 20 30 40 50 t (min) 80 90 100 Figura 8.5001.4.19: Perfiles de concentración del Ejemplo 8.8.5000. DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFICAS 479 4.5002.500§ 3.8.0000. .

aspecto que también impacta el costo. el escalamiento directo conduce a la utilización de una fracción muy pequeña del lecho cromatográfico. 1988). así como el impacto que sobre los perfiles producen los cambios en: . Esto se debe a que las resistencias por difusión dentro de la partícula y los fenómenos de dispersión son menores con partículas pequeñas. Cuando se utiliza este enfoque. Los modelos desarrollados son utilizados para predecir los perfiles de concentración a la salida de la columna. Escalamiento Mediante Modelos La mayoría de los sistemas cromatográficos han sido escalados directamente de los sistemas analíticos de laboratorio.La geometría del sistema: Dc.Química del sistema: Tipo de eluyente.La operación del sistema: Flujo. Los casos de escalamiento directo no lineal escapan al alcance de este trabajo pero existen varias publicaciones especializadas que pueden ser consultadas (Wankat y Koo. los experimentos que se realizan más que tener como objetivo desarrollar una optimización de la columna. En la Figura 8. aún cuando producen buena resolución. Las limitaciones del escalamiento directo han conducido a tratar de incorporar metodologías ingeníenles al diseño de las columnas. dado que el objetivo en éstos es incrementar la productividad y no la resolución de todos los componentes.480 CAPÍTULO 8. Este enfoque conduce a utilizar partículas muy pequeñas (5-100 //m) que incrementan el costo del proceso. poca dispersión y tiempos cortos de ciclo . CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN. están orientados a la validación del modelo y a la obtención de los parámetros del mismo. concentración.20 se presenta la metodología para el escalamiento mediante el uso de modéleos de columnas. . Estas partículas pequeñas no siempre son las más adecuadas en un proceso industrial. Por otro lado. . por medio de una simulación por computadora. . volumen y tamaño de muestra. . tipo de adsorbente y tipo de isoterma. L y dp.

20: Metodología para escalamiento y optimización de columnas. Todos los derechos reservados. de Masa Modelo Cromatografía) Simulación • Perfiles de Concentración Dinámicos •Método de Operación 'Concentración Alimentación •Rujo •Tamaño Partícula •Temperatura • Tiempo del Cido • Productividad Figura 8.4. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1990. . DISEÑO DE COLUMNAS CROMATOGRAFÍAS 481 Relaciones de Equilibrio Coeficientes de T. Copyright ©1990. Adaptada de: Wang.8.

de tal manera que sea posible obtener un diseño óptimo bajo restricciones de costos. Las columnas cromatográficas han sido escaladas principalmente a partir de columnas de laboratorio. pero existe creciente necesidad de apoyar el diseño de las columnas mediante el empleo de modelos. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.482 CAPÍTULO 8. Existen varias formas para llevar a cabo una operación cromatográfica que dependen del tipo de adsorbente empleado y las condiciones en las que se realiza. .5 Sumario La cromatografía por elución se utiliza para obtener productos biotecnológicos con un alto grado de pureza. tiempo de ciclo. Las operaciones cromatográficas se desarrollan generalmente en columnas empacadas fabricadas en diversos tipos de materiales y operadas tanto a presiones moderadas como a altas presiones. pureza y concentración. 8.Modo de operación. productividad. . Los modelos cromatográficos presentados en este capítulo son particularmente útiles cuando se trata de seguir este enfoque de escalamiento.

500 8.4. 8.2. R: 45. La columna se puede considerar que tiene 8..El ancho W de un pico es de 50 s y el tiempo de retención es de 50 min. respectivamente.8.3. R: 0. son de 800 y 815 5.6 Problemas 8.100 etapas teóricas para ambos compuestos.—-.. Calcular el número de platos teóricos de la columna bajo estas condiciones.42 (b) Suponiendo que los tiempos de retención son iguales..49).Los tiempos de retención de los compuestos A y B.Obtener una expresión para la v óptima y la altura equivalente de un plato teórico (HETP) mínima. estimar el número de etapas para obtener una resolución de 1.-—N* esta ecuación se conoce como la ecuación fundamental de la cromatografía lineal. donde: — _ u i K! -f- AI 1: Soluto 1 .1. demostrar que: a-1 F . a partir de la ecuación (8.. (a) Calcular la resolución para estos compuestos en la columna.i Rs .600 8. R: 57.6.Utilizando el modelo de platos teóricos y considerando iguales la altura equivalente de un plato teórico para dos solutos que se desea separar.. PROBLEMAS 483 8.

¡ donde el subíndice 2 corresponde al soluto más lento. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.7. k'2: Factor de capacidad del soluto 2. K-2'. 8.Utilizando la expresión del problema 8.1. Rs = 1.Constante de equilibrio del soluto 2. e: Porosidad del lecho.6. La altura equivalente de un plato teórico para la mioglobulina está dada por: 6. ¡ Demostrar que bajo estas condiciones. k'\ Factor de capacidad promedio.2 x l(T 5 -M. estimar la resolución que se obtiene en una columna de 50 c??i. entonces: W\ — W-¿. 1 I •i | 8.5.17 x 10~4 m/s Resp. K\: Constante de equilibrio del soluto 1.4.484 2: Soluto 2 CAPÍTULO 8. Estimar la resolución esperada si la columna tiene un diámetro de 7..58 8. se determinó que los factores de capacidad de los solutos son: kASB — 0... si en una columna de 20 era la . El volumen de la muestra es de 10~7 m3 y la velocidad superficial en la columna es de 2.En el caso de la cromatografía líquida de alta resolución puede considerarse que el ancho de los picos es igual.13u donde HETP está en metros y v en m/s. mediante una columna de laboratorio de cromatografía líquida de alta resolución (HPLC).8 y kMg = 1. a: Selectividad k{: Factor de capacidad del soluto 1.5 x 10~3 m y una longitud de 0.En la separación de albúmina de suero de bovino (ASB) y mioglobulina (Mg).6 ni.

Calcular el volumen para obtener un rendimiento del 95% de lincomicina A. La cromatografía se desarrolla utilizando agua como eluyente.8 (considere como única variable la longitud de la columna).2%. se colecta el 2..Una mezcla contiene 70% de una droga y 30% de una impureza. 650 y 700 litros de elución.7 h y la desviación estándar de 0. esta medición con dextrano no incluye el volumen de . b).5 y 0. R: 780 1 8.065 Kg de Sephadex G-100 cuyo poder hidratante es de 0.Una columna de laboratorio ( Ghose.Repita la simulación para una proporción 90:10% 8. rendimiento y pureza. PROBLEMAS 485 resolución obtenida es de 0.Cuando se procesa una mezcla de Lincomicina A y B.. el cual tiene una concentración de ASB de 5 Kg/m3 y 10 Kg/m3 de glucosa. respectivamente.05 x 10~4 m3 y el de glucosa de 2. El volumen de elución (V0) de la ASB es de 1. 15.05 x 10~4 m3 (en cromatografía en gel donde la cantidad de líquido en los poros de la matriz es considerable.9.8% y 50% de lincomicina A a 600. d). respectivamente.003 m3/Kg de gel seca.Simular el efecto de variar la proporción de soluto a 50:50% sobre los perfiles de concentración. 1990) de 0.6. en una columna de partículas de celulosa. pureza y rendimiento dados por las condiciones del problema utilizando la computadora.Simular los perfiles de concentración. se empaca con 0. produciéndose un lecho empacado de 100 cm de altura. los tiempos de retención son de 9.Calcular el rendimiento de la droga si desea separarse mediante cromatografía y obtener una pureza del 99%... c). El volumen vacío de la columna (e V] se midió utilizando el polímero de alto peso molecular dextrano y fue de 1.10. R: 1.7 y 8.2 /i.02 m de diámetro.8. a)..95 x 10~4 m3.. Cuando esta mezcla se corre en una columna de laboratorio.. La columna se utiliza para separar una mezcla de albúmina de suero de bovino (ASB) de glucosa.27 8. El volumen utilizado de muestra es de 2 x 10~6 ra3.8.

. d). (V0)A = 2.486 CAPÍTULO 8. b). El volumen de los poros V¿ puede ser calculado con la expresión: K = aWr B donde a es la masa seca de gel y WT la capacidad hidratanten de la gel.16) con la (8.06 m de diámetro y 3 m de lecho manteniendo la relación de volumen vacío a volumen total constante (¿K/K) = c¿e? y 1a realción de volumen de los poros a volumen total constante. 1. . Determinar los volúmenes de elución de la ASB y de la glucosa en la nueva columna. La masa del adsorbente a emplear en la segunda columna.834 x 10~3 m3 b). considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. \§j Ky de. dicho líquido V¿). Resp.Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica.11. a). a). Resp. CROMATOGRAFÍA POR ELUCIÓN.39) para su uso en cromatografía en gel. Se desea escalar la operación de esta columna a una columna de 0. Demostrar que en cromatografía en gel el modelo de van Deemter conduce a: _ Vc(l-e)ep ~ V. ¿Cuál es el significado físico de A'p?.76 Kg 8. Comparar la ecuación (8. adsorbente}. El coeficiente de partición de los solutos A (ASB) y B (glucosa) está dado por: donde Vc es el volumen total del lecho de la columna y Kp¿ y K son los coeficientes de partición. c).

PROBLEMAS 487 p: Productividad promedio.0.6. La operación se efectúa de tal forma que se inyecta una muestra cada 2. [h]. [§/Kg].. [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo]. Estimar el impacto del costo del adsorbente sobre el producto. en el rango de O < P < 0.12. regenerante y eluyente sobre el producto. considerando los siguientes parámetros: S: Costo del adsorbente. [ciclo/h]. c).5 y 1.Se desea efectuar un análisis económico de una operación cromatográfica. t: Tiempo de vida del adsorbente. [ciclo¡h]. a). 0. CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto. [h]. Resp. CT'.00//f<7 y tiene una vida de 2.000 h. CR: Impacto del costo del regenerante sobre el producto. Impacto del costo del adsorbente. [$/Kg de adsorbente]. CA: Impacto del costo del adsorbente sobre el producto.625//f <jr de producto 8. [§/Kg]. n: Duración del ciclo.1.05 c). . [Kg de producto/Kg de adsorbente — ciclo].5 h y la productividad promedio P es de 0. CE'.8. t: Tiempo de vida del adsorbente. b). Obtener una expresión del impacto del costo del adsorbente sobre el costo del producto. Graficar CA vs P para valores de S/nt de 0. En una operación cromatográfica el adsorbente tiene un costo de $10. [§/Kg]. Impacto del costo del eluyente sobre el producto. n: Duración del ciclo.02 Kg deproducto/Kg de adsorbente — ciclo. CA = $0. L = nt: Número de ciclos en la vida del adsorbente. [$/Kg]. P: Productividad promedio.

Demostrar que: 8. [§/Kg de adsorbente — ciclo de regeneración]. CROMATOGRAFÍA POR R: Costo del regenerante.22 g/l a los 820 s y una concentración de 0. Resp.5 cm Resp. Estimar el número de etapas teóricas y la altura equivalente de una etapa teórica..15.14. TV = 47 y HETP = 0. [$/Kg de adsorbente — ciclo]. Lft'. la cual se eluye con un flujo de 5 cra 3 /ram.13.En una separación cromatográfica de albúmina y hemoglobina se aplica una muestra que contiene un gramo de cada una de estas proteínas. y C de la ecuación de van Deemter para la columan empleada. Ciclos por ciclo de regeneración. B = O. si la columna utilizada tiene una longitud de 16. A = 0.488 CAPÍTULO 8. C = 14 s 8. B.26 Estimar los parámetros A.015 HETP (cm) 0.10 g/l a los 670 s.. M: Costo de eluyente.005 0.En una separación cromatográfica se obtiene un pico de hemoglobina con una concentración máxima de 0.010 0.En la cromatografía de ASB se obtienen los siguientes datos: v^f 0. obteniéndose dos picos con las siguientes características: ..19 0.05 cm.35 cm 8.12 0.

9 x 10~7 cm2/s. PROBLEMAS Albúmina Hemoglobina Conc..4. Para albúmina RE = 0.10 g/l 670 s 489 Calcular el rendimiento y la pureza de la albúmina a los: a). €i = 0. Resp.5 8.17.El valor experimental para la difusión en el poro en una matriz de agarosa es de 3. //: Viscosidad del solvente=0.22 g/l 820 3 0.5 cm de altura y 2. 1. máxima Tiempo de elución Conc.200 s b).La porosidad de un lecho medida con azul de dextrano es de 0.16. T: Temperatura=293 °K. Resp.1307v (M1/3 + 1245) CÍ/21 V uM1/3 / L ' J J donde: Ai: Peso molecular de la mioglobina= 16890 Da.5 cm de diámetro con un flujo de 5 cm3/mw su tiempo de retención es de 680 s.11 g/l 600 s 0.04 *g/cm? . Calcular la porosidad interna del empaque de la columna para esta proteína.01 g/cm — s Cf. Comparar este valor con el que se obtiene mediante la correlación para este tipo de geles (Boyer y Hsu. Cuando se corre albúmina en una columna de 16. 600 5 c).34 x 10'10 (-7777^ 1 exp [-0.775 8. Concentración de polímero en la partícula de adsorbente^ 0.8.6.25 g/l 680 s 0.. en un tiempo t Tiempo t 0. 1992): Dp = 8. 500 s b).1 y PR = 0.

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.en forma continua.utiliza es sencillo.1 Introducción Algunos productos biotecnológicos presentan solubilidades que varían con la temperatura. Puede realizars. El equipo que . La precipitación de proteínas y la subsecuente recuperación del precipitado. Las ventajas de usar la precipitación para la concentración y purificación de solutos SOD. Esta propiedad puede ser utilizada para concentrar y purificar estos productos mediante la operación de precipitación. las siguientes: 1.Capítulo 9 Precipitación 9. 2. por lo que es una operación que se usa con frecuencia al inicio de un proceso de bioseparación. 3. En la precipitación se concentra el soluto de una solución convirtiendolo en sólido mediante la acción del agente precipitante. Los agentes precipitantes seleccionados no deben producir desnaturalización del soluto y deben proveer una mayor estabilidad del soluto en el precipitado que en la solución. entre otras. la fuerza iónica y con la constante dieléctrica del medio. Teóricamente la precipitación debe producir un soluto concentrado y puro. son de las operaciones más importantes para la recuperación y purificación de proteínas tanto a nivel laboratorio como a escala industrial. el pH. 493 . Es una operacicn que se adapta fácilmente a gran escala.

9. un agente que altere el pH de la solución". un solvente orgánico como etanol.494 CAPÍTULO 9. Se dispone de diversos agentes precipitantes y en muchos casos éstos son baratos. Principio Agente Precipitante Disminución de la solubilidad Sales (Sulfato de Amonio) pH (Precipitación isoeléctrica) Solventes (etanol) Polímeros no iónicos Desnaturalización selectiva. Afinidad Ligandos 4.2 se revisan los fundamentos de la precipitación incluyendo algunos métodos para la precipitación de proteínas. La precipitación por disminución de la solubilidad de la proteína de interés se efectúa por medio de un agente precipitante. En la Sección 9. . PRECIPITACIÓN Tabla 9. Este puede ser una sal neutra como el sulfato de amonio.2 Fundamentos La precipitación de proteínas puede realizarse empleando diferentes principios (Tabla 9. acetona o éter. En la sección 9.4 se presentan algunos aspectos del diseño de dichos equipos.3 se hace mención de los equipos utilizados en esta operación y en la Sección 9.1: Pincipios de la precipitación de proteínas. Este capítulo se enfoca a la precipitación de proteínas debido a su gran interés biotecnológico. o algún polímero como el polietilenglicol.1).

2. La proteína permanece en solución cuando termodinámicamente es más favorable estar rodeada por el solvente que estar en un agregado con otra proteína formando una fase sólida.1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad El hecho de que las proteínas sean moléculas anfotéricas se debe a que sus superficies (Figura 9. . En esta sección se revisan los tres métodos básicos de precipitación: • Precipitación por Disminución de la Solubilidad. La protema puede insolubilizarse ya sea cambiando las características de su superficie.2. las proteínas que presentan mayor hidrofobocidad (por contar con mayor cantidad de aminoácidos hidrofóbicos en su superficie) precipitan más fácilmente que las de menor hidrofobocidad.1) presentan regiones hidrofóbicas. o cambiando el solvente que la rodea. y regiones hidrofílicas cargadas ya sea positiva o negativamente. Particularmente. cuando se agrega un agente precipitante a la solución. FUNDAMENTOS 495 En la desnaturalización selectiva se producen cambios en la conformación de las proteínas contaminantes con el propósito de aislar en la solución la proteína de interés. En el primer caso las proteínas tienen una baja solubilidad y en el segundo caso una alta solubilidad.9. Como el cambiar las características de la superficie de la molécula puede implicar cambiar la proteína misma. • Precipitación por Afinidad. pH y algunos solventes orgánicos. utilizando como agentes precipitantes temperatura. De lo anterior se desprende que la estructura de la proteína determina su solubilidad. Debido a su naturaleza anfotérica cuando una proteína se encuentra en solución acuosa produce complejas interacciones con la solución que la rodea. 9. • Precipitación por Desnaturalización Selectiva. Un tipo reciente de precipitación lo conforman los métodos que se basan en la capacidad que tienen las proteínas de formar complejos mediante la interacción de los sitios activos de éstas con ligandos específicos.

. . Los métodos utilizados para la precipitación de proteínas que se revisan en esta sección y que están basados en la disminución de la solubilidad por alteración del solvente son: . Se realiza agregando altas concentraciones de sales a la solución en leí que se encuentra la proteína para producir su precipitación. generalmente se opta hacer cambios en el solvente que alteren la solubilidad de la proteína.496 CAPÍTULO 9. . Precipitación con Sales Una de las técnicas más ampliamente utilizadas para la purificación de enzimas es la llamada precipitación por insolubilización por salado o "salting out". PRECIPITACIÓN wm Regiones hidrofóbicas Figura 9.1: Esquema de la distribución de carga y de zonas hidrofóbicas en una molécula de proteína típica.Precipitación con polímeros no iónicos.Precipitación con solventes.Precipitación isoeléctrica. .Precipitación con sales.

forman agregados y precipitan más . Mecanismo: Una descripción simplificada del mecanismo de insolubilización por salado está basada en el hecho de que la adición de las sales elimina el agua de la protema hidratada. FUNDAMENTOS 497 Insolubilización por salado [Sal] Figura 9. la primera del lado izquierdo de la figura.2 muestra una curva característica de la solubilidad de una proteína como una función de la concentración de la sal en el medio. La Figura 9. Aquellas proteínas que presentan mayor número de regiones hidrofóbicas sobre su superficie. En esta figura se pueden apreciar dos regiones. 1990). donde la solubilidad de la proteína se incrementa con la concentración de la sal. El punto máximo de esta curva es característico de cada tipo de proteína.2: Efecto de la concentración de sal en la solubilidad de proteínas: Regiones de solubilización por salado e insolubilización por salado. y la otra donde la solubilidad de la proteína disminuye a medida que la concentración de sal aumenta llamada región de insolubilización por salado o "salting out". llamada región de solubilización por salado o "salting-in".2. dejando las regiones hidrofóbicas en libertad de combinarse intennolecularmente (Glatz.

PRECIPITACIÓN Figura 9.498 CAPÍTULO 9. 1994): Cuando las moléculas de proteína están en solución las moléculas de agua presentan un ordenamiento como el que se muestra en la Figura 9. Una descripción más detallada de la precipitación con sales es la siguiente (Scopes. Si la precipitación de proteínas utilizando sales se presenta como una serie de tres procesos. de tal forma que en el primer proceso se considere la disolución de la proteína en agua. esta disolución puede ser representa por: . Debido a esta propiedad hay proteínas que pueden permanecer en solución a altas concentraciones de sal.3: Ordenamiento de las moléculas de agua frente a las regiones hidrofóbicas de la molécula de proteína.3. Este ordenamiento lo produce el contacto entre regiones hidrofóbicas de la proteína con la solución acuosa. Este ordenamiento es inestable termodinámicamente comparado con el que presentan las proteínas sin solvatar conjuntamente con las moléculas de agua libre. rápidamente que aquellas que presenten pocas regiones hidrofóbicas.

El proceso completo puede describirse de la siguiente manera: P-P' + (ni + ni)H20 + (AB)aai-* P . En el tercer proceso se agrega una sal a la solución.P' + A+ •niH2O 4. Esto es: (AB)ml + (ri! + n2)H2O -> A+ . se producen agregados de proteína y éstos precipitan.3) para esta reacción A//° es positiva. .5) La Figura 9.4 muestra un esquema del efecto de una sal en la precipitación de proteínas (insolubilización por salado) basado en el proceso descrito anteriormente. el cambio en la entalpia se espera que sea aproximadamente el inverso del que presenta el proceso de la ecuación (9. Puesto que la proteína es soluble no ocurre el agregado dado por la ecuación (9.niH2O + B' • n2H2O (9. En este segundo proceso se tiene que A5° es grande y positiva.1) donde nH2O representa el agua ordenada alrededor de los residuos hidrofóbicos de la proteína P (el proceso tiene una AS° y una AG° negativas y por lo tanto una A//° también negativa).2). AG° a bajas concentraciones de sal será positiva para una proteína soluble en agua.B~ • n2H2O (9.2) son atrapadas por la sal.P') + (ri! + n2)H2O (9. FUNDAMENTOS 499 P + nH2O -> P • nH2O (9. A (7° puede ser pequeño y su signo depende de la magnitudes de AS0 y A//°.4) (9.1).2) donde (P — P') representa el agregado de proteína que puede ser formado. se considera a dos moléculas de proteína en disolución que podrían unirse al interactuar a través de sus residuos hidrofóbicos. las moléculas de agua liberadas de acuerdo al proceso hipotético de la ecuación (9.9. De esta unión se liberaría agua por medio de la siguiente reacción: P •niH20 + P' • n2H2O -+(P.2. En el segundo proceso que es hipotético.

Los cationes polivalentes como el calcio o e magnesio disminuyen los valores de m. PRECIPITACIÓN + Sal Solución salina (Agregado que Precipita) Figura 9. independiente del pH y de la temperatura.5) es la ecuación de una recta con pendiente m y ordenada al origen A. En este modelo la solubilidad de la proteína está dada por: log S = A — m[conc. . Uno de los más ampliamente utilizados es el de Cohn. Ecuación de la Precipitación con Sales: El mecanismo de precipitación descrito anteriormente proporciona una explicación para la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. Debido a lo anterior los modelos de precipitación son de carácter empírico. pero varía con el tip< de sal y de proteína. m: Pendiente de la curva de insolubilización por salado.6' la ecuación (9. Las sales que contienen aniones polivalente tales como sulfates y fosfatos tienen valores de ra mayores qui las sales univalentes. sin embargo la teoría de este fenómeno aún está en desarrollo. de sal] (9. es característica de cada proteína e independient< del tipo de sal.4: Esquema de la precipitación de proteínas por insolubilización por salado. Esta e. En esta ecuación: S: Solubilidad de la proteína a un valor dado de concentración salina A: Constante que depende fuertemente del pH y la temperatura Esta constante usualmente toma un valor mínimo en el punt( isoeléctrico.500 CAPÍTULO 9.

FUNDAMENTOS 501 o- TJ 1 -H -2- 50 2.5) para dos casos. (-f) solubilidad en una mezcla de enzimas de músculo de conejo: aldolasa. gliceraldehido fosfatasa deshidrogenasa y lactato deshidogenasa en proporciones 3:3:3:1.9. Todos los derechos reservados.4 70 % Sat. Se observa para este último caso una ligera desviación respecto al comportamiento teórico. En esta figura se observa que el comportamiento lineal depende de la concentración inicial de la enzima. Naturaleza'de la Sal: La naturaleza de la sal que se utiliza en el proceso descrito por la ecuación (9. Copyright ©1994. 1994.8 M Figura 9.5: Solubilidad de aldolasa de músculo de conejo a pH 7.2. Fuente: Scopes.5 permiten apreciar el grado de ajuste del modelo dado por la ecuación (9. Los datos experimentales que se presentan en la Figura 9. el de una enzima pura y el de una mezcla de enzimas. solubilidad de la enzima pura.6 se muestra otro ejemplo experimental de precipitación de proteína que obedece la ecuación (9.0 en solución de sulfato de amonio: (o). piruvato kinasa. 2.3) es un aspecto muy importante .0 60 2.5) (la escala de las ordenadas es logarítmica). En la Figura 9. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.

2. Copyright ©1983. ( + ) 25.5- Fuerza iónica ( moles/1) 0.502 CAPÍTULO 9.4. Concentraciones iniciales de enzima (unidades/mi): (A) 5. . Adaptada de: Bell etal.1 4 5 6 30 40 50 60 % de saturación Figura 9.6: Efecto de la concentración de enzima en la insolubilización por salado de fumarasa por sulfato de amonio a 6°C. Todos los derechos reservados. 1983 Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. (o) 15.2. PRECIPITACIÓN E 10 T3 'E D í '« 1 1-1 0.

4. Ejemplo 9.. Las sales que producen mejores resultados. Los aniones son más efectivos en el siguiente orden (Series de Hofmeister): citrato'3 > tartato'2 > SO'2 > F~ > IO^ > H2PO~ > CH3COO.> Cl~ > C/03 > Br~ > N0~ > CIO~ > I~ 2. Seleccionar una sal que sea barata debido a las altas concentraciones que requiere el método. se obtuvieron los siguientes resultados (Scopes. Añadir la sal en forma sólida y no como solución. 5. En un experimento de precipitación de la enzima piruvato quinasa con sulfato de amonio a pH 7. esto es.1. Los cationes son efectivos en el siguiente orden: NH+ > K+ > Na+ 3. Las sales que producen enlaces e interactúan directamente con la proteína tienen efectos desestabilizadores. para minimizar la dilución. Seleccionar una sal que produzca un precipitado cuya densidad sea diferente a la de la solución para facilitar su separación. son aquellas que producen deshidratación de las regiones hidrofóbicas y fomentan la hidratación de las regiones polares de la proteína. sin interaccionar directamente con ésta. una mayor precipitación de la proteína.Determinación de la solubilidad de piruvato quinasa de músculo de conejo.9. Existen reglas heurísticas para seleccionar la sal más adecuada para un proceso de precipitación. FUNDAMENTOS 503 que debe considerarse.2. algunas de ellas son las siguientes: 1. 1994): .

24 a).540 — 4. se tiene que la solubilidad de la enzima a una concentración 2.540 y m = 4. b).50 2. los valores experimentales se ajustan por mínimos cuadrados y se abtiene que A = 10. Solución: a).04 CAPÍTULO 9.37 2.7 muestra la gráfica correspondiente. Determinar los parámetros de la ecuación de solubilidad A y m. La ecuación de solubilidad para la enzima piruvato quinasa está dada por: logS" = 10.salina] b). Sustituyendo el valor de la concentración salina en la expresión anterior.60 2.316 1.162 2 3 4 Concentración sulfato de amonio (M) 2. 1 PRECIPITACIÓN S (mg/ml) 0.43.34 M de sulfato de amonio es: S = 1.salina] donde A es la ordenada al origen y m es la pendiente de la curva.079 0. Calcular la solubilidad de la enzima para una concentración !. Para determinar los valores de los parámetros de la ecuación anterior. Dato No. . De acuerdo a la ecuación (9.5) la solubilidad de la enzima está lada por: log S = A — m[conc.4918 mg/ml Precipitación Isoeléctrica Otra técnica para precipitar proteínas se basa en la disminución de su solubilidad en el punto isoeléctrico. La Figura 9.258 3.34 M de sulfato de amonio.43 x [conc.

Existe un pH llamado pH isoeléctrico al cual la carga neta de la proteína es cero.8 M Figura 9. Debido a esto existe una repulsión electrostática entre las moléculas ocasionando que su solubilidad se incremente. En estas condiciones la solubilidad de la proteína es mínima.Las atracciones electrostáticas son bloqueadas por pequeños agregados de moléculas. y en consecuencia las moléculas de proteína tienden 'a unirse y a precipitarse. Mecanismo: Las proteínas por su naturaleza anfotérica presentan una carga neta negativa a pH altos y una carga neta positiva a pH bajos. A este pH la molécula es incapaz de desplazarse en un campo eléctrico.7: Variación de la solubilidad de la enzima piruvato quinasa en función de la concentración de sulfato de amonio. Todos los derechos reservados.En punto isoeléctrico el efecto de las fuerzas electrostáticas entre las proteínas es casi nulo. A este tipo de precipitación se le llama precipitación isoeléctrica. las moléculas proteicas poseen una carga eléctrica neta del mismo signo. 1994. . . FUNDAMENTOS 505 -2 - 2. .9. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag.0 2.2.Cuando la proteína se encuentra a un pH diferente de su pH isoeléctrico. Fuente: Scopes. En la Figura 9.8 se muestra el tipo de interacciones que se presentan entre moléculas cargadas: .4 70 % saturación 2. Copyright ©1994.

La Figura 9. Cada proteína tiene un pH isoeléctrico característico por lo que la precipitación isoeléctrica puede utilizarse como una operación de pu•ificación de proteínas.idad de proteína no precipitada con respecto al pH. Selección del agente precipitante. . repulsión. La precipitación isoeléctrica :omunmente se realiza a pH's ácidos. c). La principal desventaja de usar ácidos es su >otencial de producir daños irreversibles a la proteína. clorhídrico y sulfúrico son aceptables :n productos alimenticios. éste es el pH isoeléctrico. cabe hacer notar que hay algunas )roteínas como las globulinas.2 ¡e muestran pH's isoeléctricos de algunas proteínas. b). En la Tabla 9. En esta figura Duede observarse que existe un pH al cual la fracción de proteína no precipitada es mínima.9 muestra una curva típica de la variación de la can. Sin embargo. debido a que los ácidos son baratos r varios de ellos como el fosfórico.506 CAPÍTULO 9. que presentan una solubilidad conside•able aún cuando se encuentren en su pH isoeléctrico. atracción nínima a pH isoeléctrico.8: Representación esquemática del efecto de las fuerzas electrostática sobre la proteína: a). PRECIPITACIÓN •f \ Baja interacción * + en el punto isoeléctrico Figura 9. atracción.

.ración inicial del extracto acuoso. Todos los derechos reservados. expresada como una fracción de la concen.2 pH igura 9.4 0. 7 . 1983.6 0.2.8 0. FUNDAMENTOS 507 0.proteína de soya jue permanece en solución. Copyright ©1983.9: Efecto del pH sobre la concentración de . Fuente: Bell et al. leproducida con el permiso de Springer-Verlag.

2 6. Este efecto se debe principalmente a que el solvente presenta una constante dieléctrica menor que la del agua. lo cual produce un incremento en las fuerzas de atracción entre cargas opuestas y una disminución en el grado de ionización de los radicales de la proteína.6 6.6 4.3).0 Precipitación con Solventes La precipitación de las proteínas de una solución también puede realizarse mediante la adición de un solvente orgánico ligeramente polar.0 5.508 CAPÍTULO 9.6 11. Otra forma de explicar la precipitación por solventes (Figura 9.0 5.0 9. conjuntamente con una inmovilización parcial de las moléculas . Cuando se agrega un solvente orgánico como etanol o acetona. se producen agregados de moléculas proteicas que tienden a precipitar. Proteína Pepsina Ovoalbúmina Seroalbúmina Ureasa (3 -Lactoglobulina 71 . a una solución acuosa de proteínas (a un pH y temperatura dados).Globulina Hemoglobina Mioglobina Ribonucleasa Lisozima pH ~ 1. y en consecuencia una disminución de la solubilidad de ésta. PRECIPITACIÓN Tabla 9. lo cual significa que los iones en solución acuosa presentan interacciones más débiles que en otros medios.8 7.10) consiste en considerar un desplazamiento global del agua por el solvente.0 4.2: pH's isoeléctricos de algunas proteínas. Mecanismo: El agua se caracteriza por su alta constante dieléctrica (Tabla 9.

se lleva a cabo a temperaturas tan bajas uno —100(7.7) donde Ds es la constante dieléctrica de la mezcla solvente-agua. este tipo de precipitación debe trabajarse a tempe. la precipitación de proteínas de plasma imano utilizando etanol. FUNDAMENTOS Tabla 9.2. cuación de la precipitación con Solventes: La expresión que tlaciona el cambio en la solubilidad de una proteína en su punto oeléctrico con un cambio en la constante dieléctrica del medio es una cpresión empírica (Bell et a/.3: Constantes dieléctricas de algunos líquidos a 20°(7.4 2.turas bajas. S0 es la solubilidad extrapolada. agua por la hidratación del solvente. Por ejemplo. lisma que varía dependiendo de la cantidad de solvente agregada.0 21. El solvente puede desplazar las oléculas ordenadas de agua de las regiones hidrofóbicas estimulando precipitación de la proteína.9 . Debido a que la influencia de la constante dieléctrica es muy sensible la temperatura.0 24. elección del solvente: La mayor desventaja de la precipitación con )lventes es la desnaturalización que puede sufrir la proteína por acción . K > una constante que toma en cuenta la constante dieléctrica original el medio acuoso.0 33. 1983) que está dada por: log S = log S0 -f — (9. Líquido Agua Metanol Etanol Acetona Benceno Hexano 509 D 80. Trabajar con temperaturas por arriba de 10°C provoca jsnaturalización de la proteína.3 1.

1994. Fuente: Scopes. Todos los derechos reservados. PRECIPITACIÓN Solvente orgánico Región hidrofóbica Figura 9. . Copyright ©1994.510 CAPÍTULO 9.10: Representación esquemática de las interacciones electrostáticas de agregación entre las proteínas en presencia de un solvente orgánico. Reproducida con el penniso de Springer-Verlag.

1971) considera. y sugieren que los polímeros excluyen a las proteínas de parte de la solución y reducen la cantidad efectiva de agua disponible para su solvatación. de tal manera que es importante seleccionar adecuadamente éste. sin embargo existen dos modelos que permiten una buena comprensión de este fenómeno. ya que algunos de ellos como los alcoholes son altamente inflamables y el uso seguro de los mismos ocasiona incrementos en los costos. Debe ser seguro. El modelo de Laurent (Juckes.9. 1989) conducen a una ecuación de solubilidad de la misma forma que la ecuación (9. Debe tenerse muy en cuenta la flamabilidad del solvente principalmente cuando se trabaja a gran escala. No debe reaccionar con las proteínas. FUNDAMENTOS 511 del solvente. Los modelos desarrollados por Ogston y Laurent (Clark. Precipitación con Polímeros no Iónicos La precipitación de proteínas también puede realizarse utilizando polímeros neutros como el polietilenglicol (PEG) en lugar de sales o solventes. El modelo de Ogston se basa en la teoría termodinámica y concluye que los sistemas (proteína en solución acuosa-polímero) pueden ser explicados en términos de los coeficientes de interacción proteínapolímero. El modelo propuesto por Laurent se basa en un mecanismo de exclusión geométrica de regiones hidratadas de la proteína por el polímero. Algunos factores que deben considerarse en la selección del solvente son: El solvente debe ser completamente miscible en agua. Debe ser un buen agente precipitante. a la proteína como una .2. Dichos polímeros de elevado peso molecular son solubles en agua y sus soluciones presentan viscosidades moderadas. Mecanismo: El mecanismo por el cual ocurre la precipitación cuando se utilizan estos polímeros no está claramente establecido. y proteína-proteína de las especies presentes.5).

por lo tanto. PRECIPITACIÓN esfera y al polímero como un cilindro. rp: Radio del cilindro del polimero.303 V rp ) donde v es el volumen parcial específico del polímero. [//]. [L]. supone que la proteína es incapaz de distribuirse dentro del polímero y.512 CAPÍTULO 9. la fracción de volumen excluido Ve> y la fracción de volumen disponible Vd> están dadas por las siguientes expresiones: VO = 1 .10-KC) donde: C es la concentración del polímero y — / (9.10 -KC como la solubilidad de la proteína es proporcional a la fracción de volumen disponible: = x . que la solubilidad (S) de la proteína es proporcional sólo al volumen disponible (V¿) dado por: Vd = exp [-7r/(ra + r p ) 2 ] donde: rs: Radio de la molécula de proteína.8) [i]. Considerando que el volumen total (Vt) es igual al volumen disponible (Vd) más el volumen excluido (K). el volumen excluido por peso del polímero (W) está dado por: | = 1(1 . 1: Longitud total de la molécula de polímero por unidad de volumen (9.9) i \ 3 2.

Considera que el potencial químico de la proteína //t en «encía de un polímero. La ecuación anterior de ser escrita en forma más conveniente como: logS^logk-KC o bien como: logS^X-KC jen X.9) proporciona un resultado similar (Juckes. 1) al que se obtiene utilizando el volumen disponible expresado en :cuación (9.7).-mj) donde: Proteína Polímero °: Es el potencial químico de la proteína en el estado estándar : Es la constante de los gases ideales ': Es la temperatura absoluta til Es la molalidad de la proteína ij\ Es la molalidad del polímero «•: Es el coeficiente de interacción proteína-proteína (9. La ecuación (9. + R!T(lnm¿ + c¿t-m¿ + c¿.FUNDAMENTOS 513 donde k es una constante de proporcionalidad.9) es equivalente a la ecuación corresidiente a la precipitación por insolubilización por salado. El modelo de Ogston que se deriva de una simplificación termodinica establece que la proteína permanece en solución siempre que potencial químico en solución sea menor que su potencial en la fase icipitada. (9. está dado por: pi = fí0.11) .10) que es la ecuación de una recta con pendiente K y ordenada en el El uso de la ecuación (9.

13 donde: RT En este sistema puede suponerse que el término fS es mucho má pequeño que In5 entonces la ecuación (9. .11 puede ser rearreglada en forma más conveniente como: (9. 1973): (9. El grado de ajuste del modelo depende de 1 concentración de la enzima.14 que resulta ser análoga a la ecuación de insolubilización por saladc La ecuación (9. / el coeficiente de interacción proteína-proteína y a c coeficiente de interacción proteína-polietilenglicol. Después de ésto el potencial permanece constan te. de tal manera que cuando la concentrado de la enzima es alta es necesario considerar en la ecuación el términ de interacción proteína-proteína fS para un mejor ajuste. PRECIPITACIÓ1 Ciji Es el coeficiente de interacción proteína-polímero Cuando la molalidad del polímero rrij se incrementa.12) puede ser escrita como: \nS = X-aC (9.10) puede ser escrita corn (Foster et al. en e que solamente las interacciones polietilenglicol-proteína y proteína proteína son significativas. Se puede apreciar que la cor centración de PEG requerido para reducir la solubilidad depende de 1 concentración de enzima. la ecuación (9. La ecuación (9. La Figura 9.11 muestra el comportamiento de la solubilidad de 1 alcohol deshidrogenasa en función de la concentración de PEG. el potencia químico se eleva y el sistema reacciona insolubilizando proteína inician dose la precipitación. C la concentración d polietilenglicol.12 donde S es la solubilidad de la proteína.13) puede ser utilizada para calcular la solubilidad d la proteína a diferentes concentraciones del polímero.514 CAPÍTULO 9. En un sistema polietilenglicol y proteína en solución acuosa. a de niveles de concentración de la enzima.

5- 1.5- 0. Copyright ©1973. Todos los derechos reservados. 1973.0- 0.5- 6 10 14 6 10 Concentración de polietilenglicol ( % w/v) 14 Figura 9. . a) log (S) vs C. Fuente: Foster.11: Relación entre la solubilidad S de la alcohol deshidrogenasa y la concentración C de PEG a dos concentraciones de la enzima: (ü) 8 mg/ml.0- 1. b) log (S) + fS vs C. FUNDAMENTOS 515 1. et al. (o) 75 mg/ml.5- 1.p.2. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Lie.

a diferencia de la precipitación por .2. 9. 1983) que se requieren bajas concentraciones de polietilenglicol para precipitar proteínas de alto peso molecular. los polímeros no ] iónicos generalmente pueden ser eluídos durante el paso de la proteína I por un intercambiador iónico. mientras que para precipitar proteínas de bajo peso molecular las concentraciones deben ser mayores.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva Los métodos de precipitación por disminución de la solubilidad son efectuados a condiciones moderadas de tal manera que la proteína de interés no se desnaturalice.516 CAPÍTULO 9. pH. Si la proteína que se desea purificar presenta estabilidad en condiciones extremas de temperatura. El polietilenglicol es un polímero disponible en varios grados de ' polimerización y presenta una viscosidad moderada. Varios tipos de polímeros pueden ser efectivos en la precipitación de las proteínas el incoveniente es que algunos pueden generar una alta viscosidad que 5 dificulta su manejo. Se ha observado también (Bell et a/. de tal manera que se eliminen por desnaturalización las proteínas contaminantes y se obtenga una buena recuperación de la proteína deseada. Además. PRECIPITACIÓN Selección del Polímero: Es importante seleccionar adecuadamente el polímero que se utilice como agente precipitante. El polietilenglicol de peso molecular 4000 o mayor es más efectivo en la precipitación de proteínas que el de bajo peso molecular. El objetivo de la desnaturalización selectiva es crear las condiciones en las cuales la proteína de interés no se desnaturaliza o su desnaturalización es mínima. . o en solventes orgánicos. salado en la cual debe eliminarse la sal antes de seguir con cualquier i operación de fraccionamiento por intercambio iónico. puede utilizarse esta propiedad en las primeras etapas del proceso de purificación sujetando a la solución de proteínas a estas condiciones extremas. Una ventaja adicional de la precipitación con polímeros no iónicos es que éstos estabilizan la proteína y permiten realizar la precipitación a temperatura ambiente.

17) . [t~1]. [°K]. [KJ /mol}. T: Temperatura. (9. [M/L3]. (9. [t~l].g.15) La dependencia del proceso de desnaturalización con la temperatura está dada por: (9-16) de tal manera que la influencia de la concentración de proteína y la temperatura sobre el cambio en la concentración está dado por: P] donde: k0: Constante característica. Cuando esto sucede. Sin embargo. R: Constante de los gases ideales. k: Velocidad específica de desnaturalización. t: Tiempo. [t]. El proceso de desnaturalización de la proteína por efecto de la temperatura puede ser descrito como un proceso de primer orden de acuerdo a la siguiente expresión: = -k[P] donde: [P]: Concentración de proteína disuelta. hay proteínas que se mantienen estables a temperaturas altas. [KJ /mol —° K}. puede usarse la temperatura para desnaturalizar y precipitar proteínas contaminantes y aislar la proteína de interés. E: Energía de activación de la desnaturalización.2. FUNDAMENTOS Desnaturalización por Temperatura 517 En general las proteínas son muy sensibles a la temperatura.

lo importante es determina. 1994. Todos los derechos reservados Las proteínas tienen energías de activación relativamente altas de ta manera que presentan una variación muy significativa de la velocidac de desnaturalización con la temperatura. que produzca por un lado 1 . Fuente: Scopes. regla general el primer paso es el más lento e involucra el rompirnient< de los enlaces que le dan la conformación a la proteína. se desnaturalizan completamente las enzima Pl y P1.13 muestra un esquema teórico de las posibles curva de desnaturalización para diferentes enzimas. siendo ésta estable a temperaturas de hasta 58°. cuando la energía d< activación es de E — 400 kj mol~l.1^ muestra un diagrama teórico del porcentaje de proteína que permanecí estable después de 10 minutos de incubación.12: Diagrama teórico de proteína que permanece estable después de 10 min de incubación. La Figura 9.y en grado substancial la P3 y la P4. Cuando la enzima d> interés es la P5. cual es la energía de activación del paso más lento o controlante.518 CAPÍTULO 9. Copyright ©1994. si L solución se calienta a 57°. con E — 400 kj rao/"1. Esto significa qu es posible seleccionar una temperatura. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. Po. La Figura 9. PRECIPITACIÓN 1-s 45 50 55 Temperatura (°C ) Figura 9. El mecanismo de desnatu ralización puede involucrar varios pasos.

Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. lesnaturalización completa de una enzima y por otro permita que otra >ermanezca estable. La elución se calienta hasta una temperatura dada. Fuente: scopes. Por lo tanto. FUNDAMENTOS 519 100- 1-s 50- 25- 40 45 50 55 60 Temperatura (°C ) 'igura 9. Copyright ©1994. se requiere contar con sistemas de enfriamiento idecuados.13: Esquema teórico de las posibles curvas de desnaturalizaión por temperatura de diferentes proteínas. . Es conveniente realizar el calentamiento en presencia de sulfato le amonio en la solución. debido a que éste estabiliza las proteínas e nhibe la actividad de las proteasas. se mantiene por un )eríodo de tiempo a dicha temperatura y enseguida se enfria rápidanente. que como es sabido se incrementa :on la temperatura. 1994. para lograr bajar adecuadanente la temperatura y evitar así que ésta pueda dañar a la proteína de nterés. sobre todo en tanques agitados. La precipitación con temperatura puede ser riesgosa debido a que os daños que se ocasionen a la enzima de interés son irreversibles.2.

De acuerdo a la forma integrada de la ecuación (9.. La desnaturalización de una protema tiene una energía de activación de 400.Cinética de desnaturalización .14). x — = exp(-kt) •In cuando la desnaturalización es del 50 % la constante k está dada por: k = -ln(0.. O í mol-°¡\ • J „r- 1 \ x O¿<JJ ^^1T x/ j/ .. Cuando esta proteína se mantiene a 50° C por u n lapso de lOmin se desnaturaliza en un 50 %.155 x 10~3 s~l b). PRECIPITACIÓN Ejemplo 9.15) se obtiene: ^323 °K kT 'E /323 -T\l R V 323T )\ 6.Calcular la temperaratura a la cual la proteína sólo se desnaturaliza el 10 % en lOmin..0693 min~l k = 1.14) es: P / .La forma integrada de la ecuación (9.9) = 6.5) ln(0.58 - 400000 -^-7 1/323 .T\\ mol oqi O.2. ^323 °K kT ^323 °K ln(0. a). b)..000 J/mol.Calcular la constante de la velocidad específica de desnaturalización.520 CAPÍTULO 9. Solución: a).5) lOmin k = 0.58 kr combinando el resultado anterior con la ecuación (9.

1994. la utilizado esta propiedad para purificarlas mediante la precipitai por desnaturalización selectiva de sus proteínas contaminantes. . Las fuerzas internas obligan a la molécula a abrirse provodo su desnaturalización. la temperatura es: T = 46°C' snaturalización por pH 3Ído a que ciertas proteínas de interés son estables a pH's extremos. •oducida con el permiso de Springer-Verlag. Todos los derechos reservados.14).0 ura 9. Fuente: Scopes.FUNDAMENTOS 521 H. Este proceso es esencialmente similar al que ocurre la desnaturalización por temperatura. La velocidad de desnaturalización a pH's extremos ya sea ácidos o icos depende del tiempo que tarde la proteína en abrirse y perder conformación. Copyright ©1994.14: Esquema de la desnaturalización de una proteína por :to del pH. La desnaturalización por pH ocurre tanto por la formación en la lécula de proteína de regiones con cargas iguales que tienden a resrse. como por el rompimiento de las fuerzas de atracción que le dan :onformación a la proteína (Figura 9.

9. En el caso de pseudoafinidad los ligandos utilizados son colorantes o metales. El pH y la temperatura de la solución deben definirse y manejarse cuidadosamente (pues también actúan sobre la proteína de interés) con el fin de maximizar el rendimiento y la pureza de la proteína de interés.a 25°C.3 Precipitación por Afinidad La precipitación de proteínas por afinidad es un método de precipitación selectivo que se basa en la capacidad que tienen las proteínas para unirse con ligandos por medio de sus sitios activos. o un anticuerpo. y de lograr la máxima precipitación de las proteínas contaminantes. En la Figura 9.522 CAPÍTULO 9. La simple adición de ligandos a una solución proteica generalmente no es suficiente para que ocurra la precipitación. un inhibidor. El aumento de temperatura permite que la cantidad de solvente utilizada sea menor que la empleada en la precipitación convencional de proteínas. Una proteína estable en solventes orgánicos es la alcohol deshidrogenasa de levadura. la temperatura de la solución se mantiene entre 20 y 30°C con el fin de acelerar el proceso. En el caso de la afinidad bioespecífica el ligando puede ser un sustrato.2. mediante la precipitación de proteínas contaminantes con estos solventes. Este tratamiento permite desnaturalizar las proteínas contaminantes y obtener la deshidrogenasa. Es necesario que el ligando propicie un estado de agregación de los complejos ligando- . Después de un tiempo de incubación a esta temperatura la solución se enfría. acetona o cloroformo para desnaturalizar proteínas. Cuando se utilizan solventes orgánicos como etanol. PRECIPITACIÓN Desnaturalización por Solventes Orgánicos La estabilidad que presentan algunas proteínas en una solución con solventes orgánicos es una propiedad que ha sido utilizada en procesos de purificación.15 se muestra la desnaturalización de la enzima gliceraldehido fosfato deshidrogenasa con varios alcoholes a una temperatura de 30°(7 y un tiempo de incubación de 30 minutos (Scopes. 1994). Esta enzima puede ser purificada mediante un tratamiento con 33% vol/vol de etanol.

1-pentanol. Scopes. 1-butanol. FUNDAMENTOS 523 10 Figura 9.2. (ü). Reproducida con el permiso de Springer-Verlag. (•).9. 1994. 1-propanol.15: Desnaturalización de gliceraldehido fosfato deshidrogenasa: (o). (O). (+). 2-propanol. Copyright ©1994. (<). . metanol. Todos los derechos reservados. etanol.

1994. a). Agregado en forma de cadena constituido por un anticuerpo policlonal y una proteína monomérica. El principio de precipitación por inmunoafinidad se ha generalizado .16a presenta un agregado producido por la unión de un anticuerpo policlonal y una protema monomérica.16 se presentan dos sistemas de precipitación por afinidad. llamado inmunoprecipitado. PRECIPITACIÓN1 a) b) Figura 9. b) Agregado en forma de red producido por un anticuerpo policlonal y una proteína tetramérica o por ligandos bis-NAD y una proteína tetramérica. El tipo de agregados que se forman depende del tipo de ligando y de la proteína. Fuente: Scopes.18b. Este tipo de agregados se producen en forma natural en el caso de los sistemas antígeno-anticuerpo. Este ligando se une con las proteínas o enzimas y forma agregados. Reproducida con el permiso de Spriiiger-Verlag. proteína. En el caso de que las proteínas sean oligoméricas se originan redes como la que se muestra en la Figura 9. La precipitación por afinidad bioespecífica ocurre sólo cuando se agrega un ligando específico a la solución de proteínas.524 CAPÍTULO 9. En la Figura 9.16: Representación esquemática de la formación de agregados por inmunoafinidad y por afinidad. La Figura 9. Copyright ©1994. Todos los derechos reservados.

esta sección enfoca a dos aspectos: .17 se muestra un esquema de otro enfoque de la ?cipitación por afinidad. La limitación de este enfoque de la precipitación radica en que se lica únicamente a proteínas oligoméricas. el cual ya ha sido aplicado a escala industrial. insiste en sujetar el ligando a un polímero obteniéndose así agentes iltifuncionales (macroligandos) que se unen con la proteína de interés forman agregados. Se ha reportado un rendimiento del 85% la recuperación de la enzima lactato deshidrogenasa (Luong et a/. 3 Equipo de Precipitación operación de precipitación puede realizarse en diferentes tipos de ictores entre los que se encuentran los reactores intermitentes. 4 Diseño de Precipitadores el diseño de un proceso de precipitación debe tomarse como base el nportamiento cinético de las partículas en solución. En base a lo anterior.í. EQUIPO DE PRECIPITACIÓN 525 ra el uso de otro tipo de ligandos que no son anticuerpos y que se >ducen de manera artificial. dando origen a un nuevo enfoque en la jcipitación por afinidad al utilizar ligandos bifuncionales bis-NAD. 1984).18). 37).16b. En la Figura 9. y es necesario llevar a cabo rias pruebas experimentales para determinar cuál es la concentración tima de bis-ligando a la que ocurre la precipitación de la totalidad la proteína. tubues y continuos tipo tanque agitado (Figura 9. El conocimiento este comportamiento permite hacer la selección adecuada de la geo>tría en que se realizará el proceso. Esta técnica de precipitación por afinidad ha tenido m éxito en la precipitación de deshidrogenasas utilizando como pretitante el ligando Bis-NAD . Posteriormente se produce la precipitación del nplejo ligando-proteína al agregar sal a la solución o al cambiar el [ de la misma (Janson. tos ligandos se enlazan covalentemente a los sitios activos de las )teínas oligoméricas y forman redes semejantes a la que se muestra la Figura 9.

de la precipitación del comgando-proteína al agregar una sal o cambiar el pH de Ja solución. b). . formación del |o ligando-proteína.526 CAPÍTULO 9.producía Cambia tn «I pH d* U solución Precipitado maerotiga'ido • producto S*pv«ción ¿«Ipredudo o 0 ¿b o o o O 9. precipitación del complejo.17: Representación esquemática.-. o 0 0 ° o a Formaoibod» agregado* maoofigafldo . disode la protema del macroligando. PRECIPITACIÓN A// Extracto crudo p. c). ición del macroligando a la solución proteica. d).

a) Intermitente b) Tubular c) Continuo tipo tanque agitado.•?•. como las que originan sus cargas eléctricas.18: Tipos de reactores utilizados en la precipitación de ínas. . a una solución proteica las moléculas presentan por efecto de su ía cinética un movimiento al azar que produce choques entre sí. Cinética de la Precipitación. En este apartado se revisan los aspectos . 1 Cinética de la Precipitación ecipitación de proteínas puede efectuarse ya sea desnaturalizando desnaturalizar éstas. Nucleación: Al disminuir la solubilidad de la proteína se inicia la precipitación al formarse en el seno de la solución pequeñas partículas (núcleos).cos relacionados con la precipitación sin que ocurra desnaturalin de la proteína. que las moléculas de proteína queden asociadas al chocar se ree eliminar tanto las barreras producidas por las moléculas de agua is rodean. ira facilitar su estudio la cinética de la precipitación se divide en fruientes fases: Mezclado inicial: La solución proteica se mezcla con el agente precipitante para eliminar las barreras.: (c) í^S VÜ£^^ V Producto a 9.DISEÑO DE PRECIPITADORES 527 Alimentación ^ C2 Alimentación to (b) (a) P /->--v£:-. Diseño del Precipitador.

Se forman las partículas primarias de tamaño entre 0. La frecuncia de las colisiones está limitada por la velocidad de difusión de las moléculas y no por el mezclado. El f tiempo requerido para obtener una mezcla homogénea esta dado por: donde: D: Coeficiente de difusión. se requiere que : éste se difunda rápidamente para obtener una mezcla homogénea.528 CAPÍTULO 9. En la descripción anterior las fases de crecimiento 3 y 4 son llamadas también crecimiento pericinético y agregación ortocinética. solvente o polímero no iónico) a la solución de proteínas. PRECIPITACIÓN 3. [cm2/s]. Crecimiento influenciado por el flujo: El mezclado favorece el crecimiento del agregado formándose partículas en el rango de 1 a 100 5. 1: Diámetro promedio de los remolinos ocasionados por la agitación. Mezclado Inicial Una vez que se agrega el agente precipitante (sal. De acuerdo a la teoría de difusión de remolinos el diámetro de éstos está dado por: donde: . [cmj.1 y 10 4. Crecimiento limitado por difusión: En esta fase los núcleos van creciendo conforme la proteína difunde del seno de la solución hasta los núcleos. Floculación: Los agregados se juntan formando los grandes flóculos. respectivamente.

[cm2/s]. i/: Viscosidad cinemática. Crecimiento Limitado por Difusión o Crecimiento Pericinéico. puede ser escrita de acuerdo a la teoría de Smoluchowski por un proceso de egundo orden: . Considerando un tiempo de nucleación instantáneo la integración e la ecuación (9. En algunos casos como en los sistemas oloidales esta etapa es instantánea.4. por lo que el tiempo en que esto curre puede despreciarse.— = k* y^ yio (9.-. En esta fase la velocidad con que disminuye la concentración e partículas de soluto suspendidas en el seno del líquido. Combinando las ecuaciones (9.17) y (9. En esta fase del proceso se inicia la formación de las equeñas partículas de precipitado (núcleos) que aparecen después de gregar el agente precipitante. [g/cm3]. Este tiempo es una ledida del tiempo necesario para tener una mezcla homogénea. DISEÑO DE PRECIPITAD ORES p: Densidad de la solución.21) . íucleación. (9 20) - yi\ Concentración de partículas de soluto ¿ en el tiempo t. [HP/cm3]. [mol/I]. En esta etapa las partículas de precipitado e encuentran dispersas en el líquido. [s] k: Constante del proceso. 529 P/V: Razón de potencia por unidad de volumen del sistema de agitación.18) se pueden estimar tiernas de mezclado mediante parámetros del sistema.19) conduce a: -. [I/mol — s].í =ks/-2 donde: t: Tiempo.

se puede obtener la siguiente expresión: M = M0 + M 0 y io kí donde: M0: Peso molecular del soluto. sólo depende de la difusividad y el diámetro de la partícula de soluto. (9. el valor de la constante no se altera pues la disminución en D tiene como causa un incremento en la misma proporción del diámetro de la partícula d.23) aún cuando esto suceda.20) y (9.20) puede escribirse en términos del peso molecular promedio del precipitado utilizando un balance de masa.22) se representa gráficamente en la Figura 9. D. De aquí que esta etapa esté limitada por la velocidad de difusión.20) describe una recta con ordenada al origen \/yi y pendiente k.21).-0k. de acuerdo con la teoría de Smoluchowski.24) donde: á. El valor del coeficiente de difusión de la ecuación anterior es un valor promedio de todas las partículas en el sistema. La ordenada al origen es M0 y el valor de la pendiente está dada por M0í/. es el número de Avogadro. es el coeficiente de difusión. De acuerdo a la ecuación (9. Si se conocen 7/to y M0 puede estimarse k.22) combinando las ecuaciones (9. La ecuación (9. De acuerdo a esta teoría k está dada por: k = SnDdN (9. de tal forma que a medida que la partícula crece el valor del coeficiente de difusión disminuye. la ecuación (9.19. La constante k del crecimiento pericinético. Esto es: y¿M = yloM0 (9.530 CAPÍTULO 9. Debido a que es difícil medir la concentración y.23) La ecuación (9. es el diámetro de la partícula. PRECIPITACIÓN donde y to es la concentración inicial del soluto i. y TV. de . M: Peso molecular promedio de las partículas de precipitado.

Estos choques también pueden ocasionar rompimiento de los agregados. la determinación experimental de k puede ser aplicada a diversos sistemas. La difusión puede limitar el crecimiento de partículas pequeñas. pero es menos importante en el crecimiento de partículas grandes.4. En una suspensión agitada de partículas esféricas de tamaño uniforme de diámetro e?. el movimiento del fluido provocará que las partículas choquen y formen agregados. El crecimiento de las partículas estará limitado tanto por el movimiento del fluido como por la concentración de partículas. Es decir.9. tal manera que el producto Dd permanece constante.m aproximadamente.19: Representación esquemática de M vs t para determinar experimentalmente el valor de la constante k. está dada por: . Crecimiento Limitado por el Flujo o Agregación Ortocinética. DISEÑO DE PRECIPITAD O RES 531 m = pendiente Figura 9. Generalmente el tiempo de formación de las partículas primarias es mucho menor que el tiempo global del proceso de precipitación. y en consecuencia k permanece constante. En el proceso de precipitación cuando se agita una suspensión de partículas cuyo diámetro es mayor que una fj. la velocidad con que disminuye la concentración inicial de esas partículas debido a los choques que forman agregados.

Esta fracción esta dada por: 7TC?2 (9. Este coeficiente puede ser estimado estudiando la velocidad con que decrece el número de partículas durante el crecimiento pericinético.26) se obtiene una ecuación en la cual no esta involucrado el diámetro de las partículas y es dt fP/V\ ~ 1/2 (9. Se ha encontrado que en ausencia de fuerzas repulsivas entre las partículas. La constante k de la ecuación (9.29) .27) En la ecuación (9. por lo que para su integración se considera una fracción constante f de volumen de partículas del soluto a volumen de la solución.26) en esta ecuación a representa un coeficiente que indica la eficiencia del choque. indica la frecuencia con que un choque da lugar a un agregado. Si se sustituye la expresión de k en la ecuación (9.26) el diámetro d de las partículas depende del tiempo. —— = -aNd3 dt 3 P" (9.532 CAPÍTULO 9.28) si ce esta ecuación se despeja d3 y se sustituye en la ecuación (9.24) está dada por: 1/2 [ pv (9.24) se obtiene: v. la eficiencia de la colisión es proporcional a la (velocidad de corte)~°'18 y aproximadamente proporcional a d~°-73. Sin embargo. dicho término se hace menos importante conforme aumenta el tamaño de las partículas. PRECIPITACIÓN Ii = k V? Í>1 (9 2^ \&-¿\J) idealmente la ecuación anterior debería incluir un término para tomar en cuenta el crecimiento pericinético.

Debido a lo anterior la fase loculación generalmente se realiza a bajas velocidades de agitación L ocasiones sin agitación. Aún cuando hay pocos datos . Todas estas etapas determinan el tiempo . integrando la ecuación (9. : . La floculación espontanea de la suspensión puede ser estimulada por lición de agentes floculantes. D ara determinar el coeficiente de eficiencia de colisión a. l)n un proceso de precipitación en el cual el crecimiento de las ículas está limitado por el flujo. Durante la agregación ortocinética el crecimiento es función directa mezclado. culación.spera antes de que la floculación comience. La aglomeración o floculación de las partículas de pretado es la última fase del proceso de precipitación. tiena seguir las líneas de corriente del fluido con lo que disminuye la >abilidad de la colisión. en este caso la velocidad de floculación enderá del mezclado del agente con la solución de proteínas. debe conrarse que éste depende no sólo del tamaño de las partículas sino bien de la velocidad de corte del fluido. Sin embargo.DISEÑO DE PRECIPITADORES malmente.28) se tiene: 533 (~¿~J *} /p/vY'2] } (9 30) - londe j/io es la concentración inicial de soluto en la solución bajo consideraciones del modelo. Lo anterior se debe a que partículas que aparentemente pueden ir directo a una colisión. proceso conocido como envejecimiento del ipitado.2 Diseño de Precipitadores )roceso de crecimiento de las partículas en la precipitación puede T limitado por varios mecanismos. el cambio en la concentración de s tiene un decaimiento exponencial. este mismo mezclado puede causar el pimiento de los flocules formados. de la 'Cidad de difusión y de la unión del agente floculante a la superficie a molécula de proteína. Estos aspectos deben arse en consideración en el diseño del precipitador.

534 CAPÍTULO 9. Posteriormente se deja en reposo toda la noche. Otro arreglo básico es el vaso de precipitados agitado magnéticamente (Chan et a/. En un precipitador intermitente todas las partículas son sometidas a fuerzas de corte similares. . Precipitador Intermitente En un precipitador intermitente la proteína está expuesta a un rango de condiciones creadas por el agente precipitante durante el tiempo en que éste se agrega a la solución.Precipitador Continuo. Para disminuir este efecto el agente precipitante debe agregarse lentamente y bien dispersado. puede suponerse que para proteínas que precipitan rápidamente. PRECIPITACIÓN para definir la relación que existe entre las condiciones de mezclado inicial y el tamaño de partícula. dado que .18) y (9.Precipitador intermitente. Cuando la velocidad de crecimiento pericinético es alta con respecto a la velocidad del proceso global de precipitación. 1986). En el escalamiento de un proceso de precipitación lo que interesa es que la cinética que se observa a nivel laboratorio sea la misma que la que se presente a gran escala. A nivel laboratorio es muy usado el precipitador intermitente que consiste en un tubo de ensayo que se agita en vortex por un corto tiempo inmediatamente después de agregar el agente precipitante. las ecuaciones (9. y cuando éstas son controladas. como generalmente es el caso de la precipitación de proteínas. la velocidad de mezclado de los reactantes afectará el tamaño inicial de la partícula y las características de su crecimiento posterior. entonces las condiciones inicíales de precipitación del material son diferentes a las condiciones finales. existiendo dos arreglos básicos: . De tal manera que en el diseño del precipitador deben tenerse muy en cuenta las condiciones de mezclado en las que se realizará la precipitación. se producen partículas primarias más grandes que las obtenidas en los precipitadores tubulares.29) establecen que la cinética de precipitadóra a nivel laboratorio y a gran escala será la misma siempre que la razón P/V permanezca constante entre ambas escalas.

3. b).cm2/s3 = 1000 / -0. La concentración de la caseína en la solución alimentada ?/.032 g/cm3 = 1. a y t/> no ibian con la escala. el metro.08 ue el tiempo en que se realiza la nucleación es instantáneo. D es de x 10~7 cm2/s.0 es de g/l. la viscosidad cinemática í/. Precipitación de Caseína. d es de 0. El tiempo en que el crecimiento está limitado por la difusión y oncentración de partículas al final de este tiempo. El peso molecular M de la caseina-a es de 27. La caseína a de bovino es una proteína que precipita en presencia de -uro de calcio a concentraciones 0. Solución: Se tienen los siguientes datos: = 1.008 M. A partir ia información anterior estimar: a). El proceso se va a realizar un tanque agitado con una potencia P de 1.367 g/cm3.000.032 g/cm3 y i viscosidad cinemática v de 0.0 HP y un volumen V 1000 /.002 x 10~4 cm y el coeficiente de difusión.1 g/l = 27. Se va a precipitar caseína artir de una solución que presenta una densidad ps de 1. El tiempo para alcanzar un tamaño de partícula de 50 //m. Ejemplo 9. Se estima que el coeficiente de aglomeración a tiene un valor de 0..01 cm2/s = 1 HP = 746 x 107 g .01 era 2 /s. DISEÑO DE PRECIPITADORES 535 densidad de la solución /o.367 g/cm3 = 0. la densidad precipitado pp medida a nivel laboratorio es de 1.000 .

23) para obtener: .46 s) mol .17) y (9.08 a).536 CAPÍTULO 9. combinando las ecuaciones (9.12 x 10 -13 mol .18) y sustituyendo valores s< tiene: 3 \ 1/2 t = 4D \P/VJ -.7 x 10. w ~7 cm 8(7r)(8. El tiempo t corresponde al tiempo en el cual e crecimiento está limitado por la difusión.Ol sai) 746xlo r£^2Í 6 3 4(8.002 x 10~4 cm D = 8. PRECIPITACIÓN d = 0.17).5 x 10 0.= — + (SxDdN)t de tal manera que: 27000 7 ..1/2 t = 1 1.02 x 10¿J 1 3.1 103 cm3 (0. i = 1.46 s La concentración de partículas T/¿ al final de este tiempo se determin.5 x lQ-7 cffil) 10 cm t = 3.9 x 101 -(3.^ mol 9 8.20) y (9.5 x 10~7 cm2/s a = 0.El tiempo requerido para un mezclado homogéneo está dadc por la ecuación (9. combinando las ecuaciones (9.3 cm" mol 1 entonces.002 x 10~4cm) x 6.032 -^ (o.

y el peso molecular promedio M de las partículas de 50 fim es: M = M = M = 5.0. 27.29): In J de acuerdo al balance expresado en la ecuación (9.367 o ^r cm3 0.31 x 1CT5 sustituyendo estos valores se tiene: .39 x 10 l6 9 1Q23 rnolec 4 TT (50 x 10 4 ) o mol entonces.El tiempo necesario para obtener partículas de 50 //m de diámetro está dado por la ecuación (9. DISEÑO DE PRECIPITADORES 537 la concentración final es mucho menor que la inicial.000 yio 5.10 g i¡) = 7.4.21). b)..39 x 1016 13 WMI — = 5 x 10~ yio la fracción de volumen de soluto en la solución es: w ^ / = —: 103 1.

032 t - 4474 5 el paso controlante en esta precipitación es el crecimiento ortocinético. Para'visualizar el diseño de precipitadores continuos. El mismo corrimiento se observa cuand hay variación en el grado de mezclado en un tanque agitado.31xlQ-5\ / ^ * /4bxiu ' I 106 cm 3 x 1. Las fuerzas d( corte a las que están sujetas las partículas pueden ser las que produc< el flujo laminar. la proteína se ubica rápidament< a las condiciones finales en que ocurre la precipitación. aún cuando la velocidad media de corte puede excede a la de un tanque agitado. se puede part de un sistema sencillo donde se cuenta con una suspensión diluida ( . Las condicione de corte son muy parecidas a las de un precipitador intermitente.538 CAPÍTULO 9. y la partículas estarán sujetas a las fuerzas de corte durante el tiempo d residencia en el reactor (Glatz. que pued ser debido a diferencias locales en el pH. provocadas por la forma com se agrega el sulfato de amonio. 1990) . alcanzándose a mismo tiempo las condiciones finales de precipitación. Los resultados anteriores sugieren que un factor importante a cor siderar en el diseño del reactor. En un reactor continuo tipo tanque agitado la proteína es puesta ei contacto instantáneamente con el agente precipitante.Q8x7. 1983] Puede observarse que existe un desplazamiento en la curvas. PRECIPITACIÓN ln(5 x 1Q-13) 1/2 _ /4xO. es la agitación que se proporciona a 1 solución en la que se encuentra la proteína de interés. Precipitadores Continuos En un reactor tubular cuando se tiene un buen mezclado en el punte donde se agrega el agente precipitante. La Figura 9.20 muestra la influencia del tipo de reactor sobre 1 curva de insolubilización por salado de la fumarasa (Bell et a/. Esto es part cularmente importante cuando se desea escalar el proceso debido a 1 relación que hay entre potencia y agitación.

38 1 y solución rUrada de sulfato de amonio. o Contacto intermitente con solución saturada de fato de amonio.0 10..0 Fuerza iónica ( mol" 1 ) 7 SO 8 70 9 80 60 % de saturación $ura 9.0 1. DISEÑO DE PRECIPITADORES 539 15. . Copyright ©1983. V=0. V Contacto intermitente con sulfato amonio sólido.20: Influencia del tipo de contacto sobre la curva de insolubiición por salado de fumarasa. •reducida con el permiso de Springer-Verlag. 1983. Bell et a/.87 solución saturada de sulfato de amonio. < Contacto continuo r = 918 s V=1. ü Contacto continuo r = 96 s . Todos los derechos reservados.

[número de núcleos// — h]. Iagg.32 V J^ / (9. EB. c. g. r.540 CAPÍTULO 9.m/h].33 donde: B°: Velocidad de nucleación. [h]. a. q. crecimienti y agregación a partir de datos experimentales. Medida del crecimiento ortocinético.31 (9. ks. [fj. cr: Sobresaturación aparente.índice de agregación.]. Las correlaciones empí ricas que se obtienen son de la siguiente forma: til = kG exp veIu9T (9. u: Velocidad de agitación.]. h. [KJ/mol]. PRECIPITACIÓN 20 g/l) y velocidades de agitación moderadas. s: Constantes empíricas. e. d. G: Velocidad de crecimiento pericinético. [adim. ko y k¿: Constantes cinéticas. b. EG y E A.Energías de activación. [mol/I]. p. /: Fuerza iónica. . Bajo estas condiciones es posible utilizar balances poblacionale para derivar expresiones de las velocidades de nucleación. r: Tiempo de residencia promedio. [rpra]. [Unidades consistentes. f. de tal manera que e rompimiento de los agregados pueda ser despreciado (Rohani y Chen 1993).

[núm/L3].. En el caso de una precipitación continua la sobresaturación .. cuando existe agregación el índice toma el valor de cero. En el estudio cinético de la precipitación de proteína a partir de una tción obtenida de una pasta de una semilla oleaginosa.34) donde: 0: Número de partículas por unidad de volumen en el precipitado.DISEÑO DE PRECIPITADORES A su vez el índice de agregación está dado por: TT 541 (9.de definirse como: /n o c \ (9'35) donde Ce y Ca son las concentraciones proteicas a la entrada y salida precipitador. Cuando la agregación es total el índice toma el valor de uno. se obtuvieron correlaciones empíricas siguientes: B° = 4. ^: Número de partículas formadas por nucleación en un tiempo de residencia. La definición de sobresaturación en un proceso de precipitación es ipleja.4. lagg = 1. G = 0. [núm/¿3].Precipitación isoeléctrica de proteínas de una aginosa.2exp RT J . Ejemplo 9.

314 — F x 295°K mol—°h -2860 ^ m l ((0.004 (0.048 /¿.008 ) /a55 . u= 270 rpm.Estimar el número de partículas por unidad de volumen en el precipitado.048)-0-833) X-Y G = no o ^m 93.Estimar la velocidad de nucleación.314 mcp/-°/\ x 295°/T *•* ((0.Aplicando las correlaciones correspondientes se tiene: B" = 4 .7 exp' ° 8..99 b). b). 7=0. r = 0.314 -470 mo 7_ 0 ^ x 295 A ° ' ((0.. Solución: a).0.027)-°.003 (270) 0 .027)-°-1 (270)°-905(0..6746) 0 .027)-°-091(270)0-625(0. 8 x 1 0 " exp 1654 ° 8.027 rnol/¡ y T=295°K. . la velocidad de crecimiento y el índice de agregación cundo la precipitación se efectúa a las condiciones siguientes: a =0.De acuerdo a la ecuación que define al índice de agregación.6246)°-67(0.542 CAPÍTULO 9.048) 0 ..2 exp 8.0 —— h Iagg = 1.67 x 1015 ^^ / —h G = 0.6246)5'723(0.048)-°-215) ?° = 1. PRECIPITACIÓN a).6246.007 (0.

5 Sumario La precipitación es una operación empleada tanto para la concentración como para la purificación de soluciones proteicas. SUMARIO 543 Np Np Np = B°r(l-Iag3) = fl. Existen varias formas de realizar una operación de precipitación.67 x 1015 ^^\ (0.5.99) = 8.oi6 xlO 1 1 ^ 9. dependiendo del tipo de agente precipitante que se utilice y el principio que se emplee. . De tal manera que la precipitación puede realizarse por disminución de la solubilidad. Los equipos empleados en la precipitación pueden ser intermitentes o continuos en diseños convencionales. El diseño de estos equipos se realiza mediante una combinación de experimentos y modelos cinéticos de cierto grado de complejidad.048 h) (1 .0. por desnaturalización selectiva y por afinidad.9.

Resp A=5.65 23.Una proteína se desnaturaliza el 50 % cuando se calienta a 50°C por lOmin.7 y m=-0.2.244 9.En la precipitación de alcohol deshidrogenasa con sulfato de amonio utilizando un volumen de 30 mi.87 Obtener los parámetros A y m de la curva de precipitación para la actividad de la enzima en U/ml.000 650.000 200.80 21..28 17.6 Problemas 9.51 min .000 Proteína total (mg) 29.87 8. en determinaciones realizadas en el sobrenadante se obtuvieron los resultados siguientes: % de Saturación (NH4)2S04 50 45 40 35 25 Actividad Específica 180.000 430. 1.000 440.. PRECIPITACIÓN 9. Resp.1. Estimar el tiempo de calentamiento para que la desnaturalización sea sólo del 10 %.544 CAPÍTULO 9.

505-516. The Formation of Protein Precipítales and their Centrifugal Recovery. Biochemica et Biophysica Acta. and Dunnill. 26. Marcel Dekker. M. 281-286. 229. State of the art and future prospects. Clark. Large-scale affinity purification. Tibtech. . Advances in Biochemical Engineering. 2. 147-179. 1973. 387-393. K. M. T. 31-38.E. 1984.7.). I.A. Janson. Springer-Verlag. y Chen. H. J. 1989. D.Y. 1971. 1983. P.7 Bibliografía Bell. Hoare. 1993. 1-72. Dunnill. New York. P. Recent developments in downstream processing based on affinity interactions. M. SpringerVerlag. En: Separation Processes in Biotechnology. Fractionation of proteins and viruses with polyethylene glycol. New York. C. The kinetics of protein precipitation by different reagents. y Lilly. Scopes.D. The precipitation of enzimes from cell extracts of Saccharomyces cerevisiae by polyethylene glycol. AIChE. M. 689-698. Glatz. 1990.). Precipitation. A. M. New York. Foster. 3. Juckes. Trends in Biotechnology. M. En: Chemical Engineering Problems in Biotechnology.. J. 41-71. Shuler. J. R. W.9. Protein Purification: Principies and Practice. P. Chan. 27. Aggregation and precipitation kinetics of cañóla protein by isoelectric precipitation. 5. 535546. J. Rohani... 71. BIBLIOGRAFÍA 545 9. 329-356. New York. S. L. 1987. L y Male. Hoare. 1994. Biochemica et Biophysica Acta. M. Nguyen. The Canadian Journal of Chem. Thermodynamics of protein partitioning in aqueous two phase system. Eng. (Ed. Biotechnology and Bioenginnering. P. Asenjo.R. 317. R.Y. 1986. y Dunnill. (Ed. B. M. En: Downstream Processing. Luong.

bido a ésto los volúmenes a tratar son menores que los correspondites a las primeras etapas del proceso. Es importante hacer notar que los principios básicos de estas oraciones son comunes. el mecanismo mi>scópico de flujo (y rechazo) no es explicado en este enfoque.Jltrafiltración D. 547 . ultrafiltración (UF) es una operación que emplea membranas espejes en diferentes tipos de arreglos para separar macromoléculas en ución de contaminantes más pequeños. neralmente se realiza una descripción fenomenológica donde la memina se considera como una caja negra.l Introducción . Este ¿amiento es característico del enfoque de los fenómenos de transrte.ión. debido a la fuerza originada por el gradiente de presión. En esta etapa los caldos sujetos a purificación contienen al uto de interés en forma más concentrada y pura que el caldo original. Para describir un proceso de membrana es necesario poder estable• el movimiento relativo de los componentes de la mezcla a través de membrana. La ultrafiltración forma parte de un conjunto de "operaciones de ¡mbrana" empleadas en diferentes etapas de los procesos de biosepa. por medio de un gradiente presión. La ultrafiltración es utilizada en la etapa de purificación de caldos )lógicos. es decir.

. En la sección 10. 10.La fuerza impulsora del proceso. 1986).2 Fundamentos Para el tratamiento de la operación de UF es conveniente establecer primero el marco donde se desarrolla. Se presenta una discusión sobre las condiciones óptimas de operación de un sistema en el marco de la mecánica de fluidos y los esquemas de operación más frecuentes en los sistemas de UF.2. Se presenta también en esta sección la teoría de la ultrafiltración que permite analizar el efecto de los diversos parámetros sobre el comportamiento de esta operación. esta sección hace énfasis en tres aspectos: « Los procesos de membrana.1 Procesos de Membrana Actualmente existen varios procesos que emplean una membrana parí lograr una separación dada (Me Gregor. • Flujo cruzado o tangencial • La teoría de UF. Se resalta la importancia que tiene la operación en flujo tangencial para este tipo de sistemas. 10. La sección 10. .2 de este capítulo se efectúa una descripción general de los diferentes procesos de membrana existentes con el propósito de establecer las principales similitudes y diferencias de éstos con respecto a la ultrafiltración. Asimismo.548 CAPÍTULO 10.3 se se describen las características más importantes de los principales equipos utilizados en los procesos de membrana.El tipo de membrana que emplean. Estos procesos s< pueden caracterizar en forma general en base a: . ULTRAFILTRACIÓN En la sección 10. En este sentido.4 presenta los fundamentos del diseño de equipos de UF haciendo énfasis en el cálculo de áreas y tiempo de UF de dichos sistemas. es conveniente revisar los fundamentos teóricos de la operación que facilitan su uso y correcta aplicación.

12.1: Principales características de los procesos de membrana.300 2-10 2-10 2-5 X X X X X X X X X X X X X X X X X X 0.104 300.0.8.400 Ac.10* 10J . MF Fuerza impulsora Presión de operación (KPa) fipo de membrana Flux Ifm2 — h flango de retención Especie Peso molecular D Hongos Levaduras Bacterias Coloides Virus Proteínas 10* . Osmosis Inversa (01). Todos los derechos reserdos. Microfiltración (MF). El rango de tamaño de partícula que retienen sus membranas. Gradiente de concentración Diálisis (D).4 .106 Enzimas 10* .0.1.500 [on inorgánico 10 . 1990.10* 300.100 AP UF AP 100-500 Microporosa Asimétrica 10-200 oí AP 700-20. Orgánico 100.1 0.4 Adaptada de: Fane y Radovich. De acuerdo al tipo de fuerza impulsora los principales procesos de embrana (Tabla 10.10J Azúcar 200 .1) se pueden clasificar de la siguiente forma: Gradiente de presión.2 .106 Antibióticos 300 .000 Semipermeable Asimétrica 1-20 D ACDiálisis Simétrica - 100-500 Microporosa Simétrica 50-1000 Tamaño mn 10J . Copyright ©1990. ¡producida con el permiso de Marcel Dekker Inc.6. FUNDAMENTOS 549 Cabla 10.10-5 30 .10b Polisacárido 10* .2 0. Ultrafiltración (UF).8 0. .

el cual es el peso molecular del soluto globular .1 mm que presenta aberturas progresivamente mayores. ULTRAFILTRAC1ÓN O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos AP Alimentación_jo u-o Ao 0^o ^ u —• 0 ao<ÉoA° ^[_Retenido 0 0 ° A O^. ^ A n • o ^ o o ^ o w o w 00 o w o o p A ° <^^ ^^ ^^ ™ A ™ ^ > Permeado \ 4 Membrana Figura 10. moléculas pequeñas y solventes (Figura 10.1).550 CAPÍTULO 10. que facilitan el paso del solvente y los solutos que logran pasar la película (Figura 10.1 a 1.Gradiente de Voltaje Electrodiálisis (ED).1 .m de espesor y bajo la película una subestructura microporosa de 0.2). Las membranas anisotrópicas son las más utilizadas en UF debido a que las membranas microporosas convencionales poseen una estructura tortuosa que provoca retención irreversible de partículas dentro de la matriz lo que dificulta su limpieza y reuso. de . Las membranas utilizadas en UF se caracterizan por su Peso Molecular de Corte (PMC).5 fj. \ j \ • Ultrafiltración La ultrafiltración utiliza membranas microporosas generalmente asimétricas o anisotrópicas para separar macromoléculas y partículas.1: Esquema de ultrafiltración. Las membranas anisotrópicas tiene dos capas características: una película delgada y densa de 0. .

Fuente: Santos. 1991. convencionales con 'ducida con el permiso de Kluwer Academic Publishers. et el.2: Comparación de membranas Dtrópicas.FUNDAMENTOS 551 Membrana Anisotrópica Filtro Microporoso ira 10. Todos los dere- . eservados. Copyright ©1991.

000.1000 l/m2 . y es del orden de 160 . Las capacidades características son del ordei 10 — 200 //m 2 — h (al flujo volumétrico por unidad de área de membí se le conoce como flux y se utiliza para especificar equipos de UF) Microfiltración La microfiltración emplea membranas con poros más grandes qu( utilizados en UF. ya sean de tipo convencional o asimétricas. lo cual repres< la retención de partículas de 1 a 10. presiones características de la ultrafiltración son moderadas en el re de 100 a 500 KPa. Un r característico de la MF es que puede manejar flujos mucho mayores la UF del orden de 50 .3: Esquema de microfiltración.552 CAPÍTULO 10.3) se emplea generalmente para separar de ca biológicos partículas mayores de 1 /zm como coloides y células. .500 KPa.000 nanometros de tamaño.h. El rango de pre de operación también es restringido debido a las características d< equipos que se emplean. ULTRAFILTRAd <O Partículas • Macromoléculas o Microsolutos Alimentación_ro-o—omo omo ^u ^o—0 A 0 — ^ [_Retenid Permea< Membrana Figura 10. La mi filtración (Figura 10. que es retenido en un 90 % por la membrana. tualmente tiende a desplazar a la filtración convencional y a la trifugación como técnica de recuperación celular.000 para la mayoría de las membranas de UF. El PMC varía entre 5i 1.

Esta operación se utiliza para separar solutos de sus soluciones.5) emplea membranas de poro muy pequeño (menor que las membranas de UF). invertir el flujo espontáneo. es decir. La fuerza impulsora es un gradiente de presión que debe vencer la presión osmótica normal de las soluciones.2.4) utiliza membranas semipermeables que permiten el paso sólo del solvente (generalmente agua). Las presiones •utilizadas en esta operación son relativamente altas del orden de 700 a 20. Los flujos característicos en la Oí son del orden de 1 — 20 l/m2 — h. para separar éste de solutos de bajo peso molecular. Las membranas utilizadas en Oí son películas no porosas que permiten el paso del solvente a través de espacios entre los polímeros que conforman la membrana.000 KPa. Los iones no pueden estar solvatados en estos pequeños espacios y por lo tanto no son transportados.10.4: Esquema de osmosis inversa. en base a su peso molecular y posiblemente a su conformación y carga. FUNDAMENTOS 553 Partículas Macromoléculas Microsolutos Alimentación ro-o—5— ° 0 0 0 u 0 00 0 ° 0 0 o °—ó O 0 0 0 0 0 0 0 0 o o ^Permeado Membrana Figura 10. El o los solutos a separar de la solución de . Osmosis Inversa La osmosis inversa (Figura 10. Diáli SIS I La diálisis (Figura 10.

causado por las diferentes velocidades de transporte de cada uno de ellos. Est efecto es conocido como "Polarización de la Concentración" . sólo por la acción de un gradiente de concentración. UF y 01.En los procesos de diálisis disminuye el gradiente de concentració efectivo. Esta polarización actúa de dos formas: . produce un Incremento de la concei tración de solutos en la proximidad de la membrana (Figura 10.En los'procesos de MF.6 .2. 10. ULTRAFILTRACIÓN Partículas Macromoléculas Microsolutos AC Al i mentado n_jó-ü CZ>° Corriente Purificada o 0 O 0 0 0° o o 0° o o o o0 o o 0°°0 o o 0 ° O 0 0 oo 0 ' r Dializado Membrana Figura 10.554 CAPÍTULO 10.5: Esquema de diálisis. En los procesos de electrodiálisis la operación de diálisis se efectúe bajo la acción de un campo eléctrico. . El papel fundamental de la membrana es impedir el paso de macromoléculas o partículas de la alimentación al dializado permitiendo e! paso del solvente y de solutos más pequeños. alimentación fluyen hacia la solución de lavado o dializado a través de la membrana. disminuyendo por lo tanto el flux de impurezas.2 Flujo Cruzado o Tangencial En los procesos de separación por membrana se producen gradientes d< concentración de los solutos en la proximidad de la membrana.

FUNDAMENTOS 555 Rux de Agua Ce Membrana 10. Fenómeno de larización. ya que el uerzo cortante del fluido estimula el desplazamiento de las partículas la superficie de la membrana.. Todos los derechos reser- lo cual por un lado puede incrementar el flux de soluto. y por otro disminuir el flux del solvente debido a un aumento de la resistencia al flujo producida por esta barrera de concentración. >roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. temperatura. puede ocasionar una resistencia adicional debido a que puede estimular la interacción del soluto con la membrana ocasionando que esta se incruste con soluto. concentración de la solución y velocidad igencial. Es importante señalar que la teoría de la ultrafiltración es .2. El flux de solvente a través de la membrana puede ser incrementado .nificativamente utilizando flujo cruzado o tangencial en lugar del jo de extremo-cerrado convencional (Figura 10.7).3 Teoría de la Ultrafiltración teoría de la ultrafiltración está orientada a tratar de predecir el flux un sistema dado en ^función de los parámetros de operación como i: presión. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985. En los sistemas flujo cruzado la alimentación fluye en forma paralela a la membrana nimizando el efecto de la polarización de la concentración. K2. Asimismo. 1985b.6: Gradiente de concentración durante la UF.

de aplicación limitada.8 como: P 4.P . bajo limitaciones de rangos de presión y temperatura tolerados por los equipos.7: UF convencional y de flujo cruzado.P (10. ULTRAFILTRACIÓNI Filtración Convencional Filtración de Flujo Cruzado Figura 10.556 CAPÍTULO 10. APTM = P0 . el cual puede ser definido en referencia a la Figura 10. La predicción del flux o la interpretación y extrapolación correcta de las mediciones experimentales de éste. pero es útil en la interpretación y extrapolación de los datos experimentales. se enfocan a resolver este problema de diseño. El principal parámetro de diseño de un sistema de UF para concentrar una solución es el área necesaria para lograr una concentración determinada en un tiempo dado. así como de guía para la operación de los equipos. Predicción del Flux La fuerza impulsora de un proceso de UF es el gradiente de presión transmembrana (APTM).1) o bien.

Figura 10. Esta última ontrolada restringiendo la válvula . Todos los derechos reser- donde: PTM: Gradiente de presión transmembrana.e contrapresión a la salida de la dad de UF.: Presión de salida del retenido. FUNDAMENTOS Pi •** ^r1 v 557 Po ~~TK Permeado Retenido Válvula de Contrapresión Retenido Módulo deUF Pí Alimentación Bomba Filtrado gura 10.. Copyright ©1985. roducida con el permiso de Elsevier Science Inc. . el hecho de que las presiones de .Gradiente de presión del flujo tangencial. En este arreglo la bomba debe ser dimensionada para proveer la )cidad de flujo cruzado necesaria a. : Presión de entrada de la alimentación. •: Presión de salida del permeado o filtrado. Fuente: Tutunjian. Le.8 muestre. 1985b.sí como la APTM. P = PÍ — P0'.2.8: Relación de presiones en UF.

02 Kg/cm2 1 7 4.68) Kg/cm2 = 1. es decir.1) para calcular APTM. Q Gasto volumétrico J =v = —= : A área ..70 Kg/crri2 La válvula de salida de la unidad se ajusta de tal manera que la caída de presión del flujo tangencial es de 0. Se obtienen resultados análogos a los anteriores cuando se utilizan equipos operando con flujo cruzado constante (Figura 10.1 02 APTM = ' ' Kg/cm2 = 1. Conociendo que AP .36 Kg/cm2 £t Un comportamiento típico de un proceso de ultrafiltración de una macromolécula se muestra en la Figura 10.9. ULTRAFILTRACIÓN entrada y salida a la unidad. Primero es necesario calcular P0.1.558 CAPÍTULO 10. Estimar APTM. Solución: Se puede utilizar la ecuación (10. Sin embargo.10). la cual muestra la variación de flux del permeado J (L3/L2 — ¿) con el gradiente de presión transmembrana (APTM) para soluciones de concentración en el rango de O a 65 % en celdas de ultrafiltración agitadas (sin flujo cruzado).70 .0.PÍ . En UF se utiliza la variable J para describir el flux de permeado c velocidad del permeado a través del lecho filtrante. mientras que en la filtración convencional se utiliza la variable v para el mismo efecto.68 Kg/cm2 y la presión del permeado despreciable. pueden ser moni toreadas con el empleo de manómetros.Cálculo de APTM La presión de alimentación a una unidad de UF es de 1. Ejemplo 10. al aumentar la velocidad de flujo cruzado U se produce un incremento en el flux J.P0 entonces P0 = (1.

8 % Solución Salina r 0. Todos los derechos reser- .2. oducida con el permiso de Elsevier Science Inc.10: Efecto de la presión. Fuente: Belfort. Todos los derechos •vados.9: UF de albúmina en una celda.5 % Protelna (1830 RPM ) 6 5 % Protelna ( 880 RPM ) APTM (Atm ) 'igura 10. Fuente: Le y Howell.66 % Proteica (1830 RPM ) 3. 1985.0 0 1 2 APTM (Kg/crn) 3 ura 10. de la velocidad de recirculación y a concentración sobre el flux.5 1. Copyright ©1987. •oducida con el permiso de John Wiley and Sons.0 % Protelna (1830 RPM ) 6. T = 60 Linea A 1. 1987.0 J cm/h 0.5 0. FUNDAMENTOS 559 '0. Copyright ©1985.

2) donde: .Región II. cuando se utiliza la ecuación de D'arcy como se hiz< en el caso de la filtración convencional (Capítulo 3) se obtiene la si guíente expresión: (10. Por medio de la termodinámica de los procesos irreversibles. Modelo General del Flux La descripción fenomenológica del flux en un proceso de ultrafiltración. donde J es función de APTM y U.560 CAPÍTULO 10.10) para una solución de una concentración dada. Por otro lado.. . se ha efectuado por varios caminos con resultados análogos. es conveniente dividirlos en dos regiones separadas por un gradiente de referencia APTM ++ : . ATT: Contrapresión osmótica.Localizada a la derecha de APTM ++ . donde J sólo es función de U (independiente de APTM). J: Flux de permeado. ULTRA FILTRACIÓN La predicción del flux a que hace referencia el título de esta sección consiste en encontrar relaciones que permitan describir y predecir el comportamiento experimental al que se hace referencia.Localizada a la izquierda de APTM ++ .. Para analizar los resultados experimentales (Figura 10.crATr) donde: Lp: Coeficiente de permeabilidad. la ecuación del flux de solvente que se obtiene es: J = L P (APTM . cr: Coeficiente de rechazo del soluto por la membrana.Región I.

561 El coeficiente de rechazo en un instante dado durante el proceso de í está dado por: 1 (10. De acuerdo a las ecuaciones (10. = 1: Retención completa del soluto por la membrana.2.5: Resistencia de la capa de soluto de polarización. Concentración de soluto en el seno de la solución.6) para efectuar una descripción ilitativa de las observaciones experimentales (Figura 10. .2) y (10.3) se transforma en: Se puede utilizar la ecuación (10. en dicho caso el modelo ge:al de flux en la forma de la ecuación (10.3). Dado que la presión osmótica para macromoléculas en solución y ra dispersiones coloidales es muy baja.4) B donde: 'p: Concentración de soluto en el permeado.10) que se lizan en un proceso de UF: En soluciones diluidas la resistencia Rs puede considerarse nula.. FUNDAMENTOS ^: Resistencia de la membrana. Si además se considera Rm constante. = 0: Retención nula del soluto por la membrana. entonces J varía linealmente con APTM (línea A). . 'B. : Coeficiente de retención del soluto por la membrana.

Un balance de soluto en estado estacionario (UF continua) en una película diferencial en la interfase fluido-membrana puede ser expresado como: Movimiento Movimiento convectivo de difusivo del soluto hacia la = soluto de la interfase interfase al seno del fluido -f Movimiento convectivo de soluto fuera de la interfase . Los sólidos retenidos representan la resistencia controlante. de tal manera que J es independiente de APTA/. se puede considerar que Rs > Rm. en el capítulo de filtración convencional. En esta película el perfil de concentración es función de APTM.11). Los incrementos en APTM producen incrementos en Rs tales. de tal manera que J tiende a un valor máximo conforme aumenta APTM. Considerando como única variable la APTA/. ULTRAFILTRACIÓN . . los incrementos en APTM producen un aumento en Rs. los perfiles de concentración en estado estacionario se irán incrementando conforme se incremente APTM (Figura 10. se puede considerar que Rm > Rs. que no se produce un incremento en J.En la región II donde APTM > APTM ++ . Modelo de polarización con película (Región I). Esta región es más sensible a la velocidad del flujo cruzado por actuar ésta directamente sobre RsEl uso del modelo general para la predicción del flux requiere poder expresar Rs en términos de parámetros medibles como se hizo en el caso de la resistencia de la torta RT..Para la región I donde APTM < APTM ++ . es decir la resistencia de la membrana es controlante Es una zona donde J depende de APTM.562 CAPÍTULO 10.Otro enfoque para obtener el modelo del flux propone que el fenómeno de polarización de la concentración sólo se presenta en una película delgada del fluido en la proximidades de la membrana (Teoría de la capa límite). Los intentos que se han efectuado en este sentido son de uso limitado para el caso de UF de proteínas y coloides.

. FUNDAMENTOS 563 Flujo de Permeado Flujo Alimentación x=o APTMi Cw Incremento de APTM y del x=6 Flux APTM APTM3 Figura 10. ): Espesor de la capa límite de concentración.\0. CB ' Concentración de soluto alimentación. Cw • Concentración de soluto en la 3ared de la membrana. Cp : Concentración de soluto en el permeado.11: Variación del perfil de concentración en estado estacionario con el gradiente de presión transmembrana.2.

ULTRAFILTRACIÓN (10.7) se transforma en: J* = AD •» In —yy p —— /1 n o \ (10.Difusividad del soluto en la solución.564 CAPÍTULO 10.\n^(10. Separando variables e integrando a lo largo de la capa límite con: x = O. el coeficiente DAB/& se sustituye por un coeficiente de transferencia de masa ks. x: Coordenada espacial.7) donde: * : Constantes en estado estacionario.8) Si la membrana presenta un coeficiente de rechazo total Cp = O. C = CB C — C^r O — l-'M' La ecuación (10.10) . a (1()_9) dado que el espesor de la película 8 generalmente es desconocido. r — A •L — V . APTM: Constante.8) se simplifica a: J> = ^B. de tal manera que: J* = k. entonces la ecuación (10. DAB'.

se agrupan en ipos adimensionales como el Reynolds. . el Schmidt y el Sherwood. c: Número de Schmidt. [L/t]. [M/L3].e: Número de Reynolds. (10.s: Flujo laminar: Y * ~V/3 o bien en términos de números adimensionales. Densidad.: Diámetro del tubo. [L]. Para flujo en tubos circulares las siguientes ecuaciones son aplica. donde los parámetros que afectan el Desor de la capa límite de la transferencia de masa. [L].12) UB: Difusividad del soluto.2.. El coeficiente de insferencia de masa ks puede ser estimado por medio de correlaciones perimentáles de la literatura. : Velocidad promedio del fluido en el tubo. [L/t2]. . : Viscosidad. : Longitud del tubo. [M/L — t]. i \ ^/^ ^-ReSc] 2L/ J ( Flujo turbulento: donde: . FUNDAMENTOS 565 El modelo de película permite analizar la dependencia del flux J* a los parámetros físicos y geométricos que afectan 8.11) Sh = 0.023#e°-83Sc°-33 (10.

Para Flujo Turbulento: r oc U0'83 (10.El flux J* considerando U constante. J'ocfy) (10.11) y (10.El flux J* varía con í/3 en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento. En la región II: .11) y (10. .566 Sh: Número de Sherwood. es proporcional a In l/Cs.13) (10.El flux J* aumenta al aumentar C^ la cual a su vez aumenta con APTM. ULTRA FILTRACIÓN Es importante hacer notar que de acuerdo a las ecuaciones (10. entonces.15) \ljj donde 7 es el esfuerzo cortante del fluido sobre la membrana.12) permiten interpretar los resultados experimentales de los procesos de UF: En la región I: .12): Para flujo laminar: t/V /3 o bien cuando se usa el esfuerzo cortante definido como: (10. CAPÍTULO 10.14) L.El flux J* aumenta al aumentar U .16) El modelo de polarización de película conjuntamente con las ecuaciones (10. .

Modelo de polarización en película y capa de gel (Región ).15 se presentan los datos graneados en la forma de ecuación 10. la ecuación (10.14. Se puede observar que conforme se incrementa la . Los datos de flux en //m 2 — h de la UF de una solución proteica se íestran en la Tabla 10. te gel actúa en serie con las otras resistencias.De acuerdo con el modelo de polarización en película (ecuación .12)). el aumento de Cw con APTM tiene límite CG. De acuerdo o anterior. FUNDAMENTOS 567 J* es proporcional a Inl/C^ cuando la velocidad de recirculación constante. Uno de los modelos más empleados para la región II propone que en i soluciones macromoleculares. J* aumenta al aumentar U.17.10) el flux J puede ser incrementado aumentando la concentración soluto en la membrana C\v (aumentando APTM). Estos datos se presentan en forma gráfica en la Figura 10.10). se serva que en la región II (Figura 10.ntos en APTM se contrarrestan con incrementos en la resistencia de capa de gel.2. Varía con U* en flujo laminar y con U0'83 en flujo turbulento.10) se transforma en: donde CG es la concentración límite que es una constante para un tema dado..2. ks es el coeficiente de transferencia de masa dado por las relaciones ya presentadas (ecuaciones (10. existe un límite para este >o de correlación.13). implica que en la región II de la UF los incre. Estos resultados se muestran en forma gráfica en la Figura 10.. Este modelo llamado lodelo de capa de gel". donde la solución forma una "capa de gel" (Figura 10. Solución: En la Figura 10.12. Ejemplo 10. de tal manera que J se mantiene constante. Estiir ks y CG para esta operación.2: Cálculo de CG y ks.11) y (10. Sin embargo.

.568 CAPÍTULO 10.83 In J Laminar Turbulento l n ( R e o U o Y) Figura 10. ULTRAFILTRACIÓN (b) U2 J lnC t (c) A 0. Todos los derecho reservados. 1987. Copyright ©1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. concentración y velocidad de recir culación sobre el flux. Fuente: Belfort.12: Efecto de la presión.

00 18.00 0.2.33 1.66 2.00 37. FUNDAMENTOS 569 Flujo de agua J.00 2 Concentración % peso 1 10 20 5 00.2. Membrana Capa Límite de Fluido Película deGel gura 10.66 .00 33.33 47..66 1.50 22. Todos los derechos er vados.33 0. Fuente: Tutunjian.00 21.00 22.2: Datos de UF para Ejemplo 10. Copyright ©1985.00 00.00 1.00 17.00 00.20 7.40 8.00 37.50 23.33 54.00 36.80 7. producida con el permiso de Nature Publishing Co.00 30.50 17.00 36.00 7. 1985a.60 8.00 8.13: Gradiente de concentración durante la polarización con 1.00 52. Tabla 10.00 23.00 0. APTM Kg/cm 0.66 50.

Copyright ©1985. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. . Todos los derechos res vados. Datos Ejemplo 10.2.14: Variación del flux con el gradiente de presión transmer brana y con la concentración. 1%PROTEINA 5% PROTEINA 10%PROTEINA A PTM (Kg/cm2) Figura 10. ULTRAFILTRACIÓ.570 CAPÍTULO 10. Fuente: Tutunjia 1985b.

15 con el eje de las abscisas de tal manera que. . 28-8 3-2 m2-h .15: Flux vs \nCB.2. FUNDAMENTOS 571 10 o O Figura 10. o ¿j ) L _ ft <.es igual a la pendiente de las curvas en la zona de formación del puede ser estimada con dos puntos sobre la recta. CG = 30 % Cálculo de ks.2. ) Cálculo de CG>'G puede ser obtenido gráficamente de la intersección de las curvas Figura 10. en la cual x J varía sólo con CB y es independiente de APTM. entración C# y la APTM. se llega a una región donde la variación ux se comporta de acuerdo al modelo de película de gel. Datos Ejemplo 10.

posteriormente empieza a disminuir la rapidez de aumento. que en la ultrafiltración el flux J se puede controlar por medio de la. La expresión del flux en la región II es por lo tanto: 30 = 201n Se puede resumir en base a la discusión de los dos modelos anteriores. El flux aumenta linealmente con APTM en su fase inicial.16). lo cual implica un incremento en el esfuerzo cortante sobre la superficie do la membrana. El flux puede mejorarse incrementado la velocidad del flujo cruzado. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. y finalmente cuando ocurre la polarización J se hace independiente de APTM y permanece constante . Fuente: Brocklebank.CAPÍTULO 10. 1990. El análisis anterior también permite describir el comportamiento típico de los procesos de UF intermitentes (Figura 10. . APTM y la velocidad de flujo cruzado.J6: Variación del flux con el tiempo. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados. ULTRAFILTRACIÓN 60 50 Flux i m'-h 40 30 20 10 O 1 2 3 Tiempo (h) Figura 10.

EQUIPOS ustación de la Membrana 573 de los problemas que se observa durante la operación de un sisL de UF es la reducción progresiva en el flux manejable conforme snta el tiempo de uso de las membranas. sin embargo estos incrementan los costos de operación y dislyen la vida útil de los equipos. Existen Amiento físicos (retrolavado) y químicos para desincrustar memas. es decir. 3 Equipos equipos utilizados en los procesos de membrana generalmente on con flujo cruzado o tangencial y presentan dos características ntivas: Utilizan una membrana apropiada para el tipo de proceso. general la membrana debe reunir algunas características impor- na alta permeabilidad hidráulica. ]\ equipo modular conjuntamente con el equipo periférico constila unidad de ultrafiltración.1 Membranas arte central de los procesos de membrana es la membrana misma. Este fenómeno llamado rustación de la Membrana" debe distinguirse del fenómeno de posición de la membrana. . 11 fenómeno de incrustación se refiere a la interacción de algunos so. Presentan diferentes geometrías en arreglos tipo modular. permitir altos flujos de permeado bajo gradientes de presión razonables. Parte importante del equipo periférico bomba de alimentación y el tanque de almacenamiento. con la membrana que afectan la porosidad de la misma. 3. Un arreglo o de un sistema de UF se muestra en la Figura 10.17.

retener especies d determinado peso molecular. es decir. .3 se presenta una lista de algunos materiales y cara terísticas <!<• las membranas. Un peso molecular de corte preciso. ULTRAFILTRAClÓfi Retenido Recirculación •OO Permeado AJ¡ mentación £=* Figura 10. Copyright ©1988.Larga vida activa. R educida <. 10. El la Tabla 10. . _ Buena resistencia mecánica. . Fuente: Belter e al. 1988.<>ii <:l permiso de John Wiley and Sons. Recientemente se han desarrollado membranas < materiales cerámicos y metálicos.17: Sistema de UF típico (intermitente).3. Todos los derech< reservados.2 Módulos Los módulos utilizados en los equipos de separación con membrana p sentan diferentes geometrías que se pueden dividir en dos tipos básio . química y térmica.Capacidad de esterilización. pero permitir el paso de las de menc peso molecular.Baja tendencia a incrustamiento. Los materiales que se utilizan en la fabricación de membranas g neralmcrite son derivados de polímeros naturales como la celulosa o < polímeros sintéticos.574 CAPÍTULO 10.Facilidad de limpieza. .

1990.1 nm 3-10 2-12 1-14 1-14 1-14 1-13 75 . Los arreglos de hojas pueden ser de: Hoja plana.3. Módulos de hojas.1. Copyriglit ©1990. MF Rateriales: Acetato de celulosa Poli amida Polisulfona Politetrafluro Etileno Polipropileno Cerámica Poliester Sstructura: $ de Porosidad ¡uperficial: Tamaño de poro: 575 UF X X X oí X X X D X X X X X X X X Asimétrica Simétrica 30-70 0. Módulos de tubos y carcaza. Tubos normales. .3 . Los módulos de tubos y carcaza pueden presentar dos tipos de tubos: Tubos de fibras huecas. Hoja plegada.1 .3: Características típicas de las membranas.3 nm Adaptada de: Brocklebank. Todos los derechos reserlos. Hoja enrollada en espiral. Droducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 130 140 130 140 150 X Asimétrica Asimétrica - - Simétrica 1-10 1-20 nm 10-20 0. EQUIPOS Tabla 10.

Módulos de Hoja Enrollada en Espiral Los módulos de hojas enrolladas en espiral (Figura 10. Como consecuencia este tipo de módulo se recomienda para caldos relativamente limpios o en combinación con un prefiltro. Los filtros de hoja plana pueden ser desmontados para su limpieza y permiten restituir hojas defectuosas. por lo que son empleados para manejar soluciones viscosas. Los módulos de hoja plana pueden ser utilizados tanto en MF como en UF. .18).19) utilizan un diseño de membranas con espaciadores tipo malla separando la membrana.576 CAPÍTULO 10. Este tipo de módulos pueden trabajar a presiones mayores que los otros tipos. Módulos de Hoja Plana Los filtros de hoja plana (Figura 10. ULTRAFILTRACIÓN . Su principal ventaja es su versatilidad. son muy similares a los filtros convencionales de marcos y placas. . Son más difíciles de limpiar y frecuentemente debe descartarse toda la unidad aún cuando sólo parte del módulo esté dañado. Fuente: Tutunjian. Copyright ©1985. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos reservados. A y Membrana Macrosolutos Retenidos • * Malla Separadora Solvente y Microsolutos Figura 10. Este tipo de arreglos producen un flux mayor que los de hoja plana debido a que presentan una mayor área por unidad de volumen. 1985b. Una desventaja es que su área por unidad de volumen es menor en relación a los otros tipos de módulos y producen un flux moderado.18: Módulo de UF de hoja plana.

Copyright ©1986. EQUIPOS *• *. . • Macrosolutos Retenidos 577 Membrana Solvente y Microsolutos Malla Separadora Cubierta Externa Espaciadores Flujo de permeado Flechas que indican el flujo de permeado Figura 10.3.10. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. 1986. Fuente: Hanisch. Todos los deredios reservados.19: Módulo de UF de hoja enrollada en espiral.

y presentan propiedades similares a los de hoja enrollada en espiral.5 cm. Fuente: Dziezak. con varios tubos unidos en sus extremos a un cabezal común (Figura 10. Todos los derechos reservados. Flujo de Permeado Alimentación ULTRAFILTRACIÓN Material de Soporte Membrana Figura 10. lo que les confiere una alta resistencia mecánica y térmica.21).20) permiten un arreglo tubular con área ampliada. 1990. Han sido recomendados para procesar materiales «viscosos y para la obtención de concentraciones celulares elevadas.578 CAPÍTULO 10.20: Módulo de UF de hoja plegada. Módulos de Tubos y Carcaza Este tipo de módulos presenta una geometría similar a los intercambiadores de calor de tubos. . Los tubos son fabricados utilizando polímeros o cerámica. Módulos de Hoja Plegada Los módulos con membranas en forma de hoja plegada (Figura 10. Copyright ©1990. Normalmente la alimentación fluye a presión a través del cabezal de entrada por el interior de los tubos .6 y 2. de tal manera que el permeado se colecta en la parte externa de los tubos a través de la carcaza y el retenido sale por el extremo opuesto de los tubos a través del cabezal de salida. Reproducida con el permiso del Instituía of Food Teclmologiests. El diámetro de los tubos varía entre 0.

10. En la Tabla 10.4 Diseño de Procesos de UF Para el diseño de un proceso de UF se deben considerar cuatro aspectos principales: • El objetivo de la UF. sin embargo los diámetros de los tubos son muy pequeños: de 0. sin embargo presentan algunas limitaciones en cuanto a su rango de operación (presión y temperatura). DISEÑO DE PROCESOS DE UF 579 Alimentación Salida de Retenido Salida de Permeado Figura 10.11 cm de diámetro) son especialmente útiles para separar células así como para el manejo de materiales viscosos. • El diseño de la unidad de UF.4 se presenta un resumen de las principales características de los módulos empleados en las operaciones de membrana. así como en su facilidad a la esterilización. Módulos de Tubos de Fibra Hueca Los módulos de tubos de fibra hueca (Figura 10. Las fibras grandes (0. . menor es su capacidad de manejo de sólidos.21: Módulo de UF de tubo y carcaza.10. • La mecánica de fluidos del sistema.22) son muy parecidos a los de tubos y carcaza convencionales.4. Entre más pequeño sea el diámetro interno. • El método de operación apropiado.02 a 0. Este tipo de módulos es probablemente el más empleado tanto en MF como en UF.11 cm.

Copyright ©1990.580 CAPÍTULO 10. 1990. Reproducida con el permiso del Institute of Food Technologiests. Fuente: Dziezak.22: a) Módulo de UF de fibra hueca. . Todos 1 derechos reservados. b) Fibra individu. ULTRAFILTRACIÓK Alimentación Cilindro Cabezal Permeado m Figura 10.

. Diafiltración Cuando se desea separar macromoléculas de moléculas pequeñas como sales. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. la solución retenida es el producto deseado (Figura 10.000 Baja Retrolavado Módulo 581 Característica Densidad de empaque Área (m^/m 3 ) Tolerancia a solidos suspendidos Facilidad de limpieza Remplazo Adaptada de: Fane y Radovich.4: Características de los módulos de UF. Hoja plana Moderada 200-400 Moderada Regular Hojas o módulo Tipo de módulo Hoja Tubo y carcaza enrollada Moderada Baja 150-300 300-900 Baja Regular Módulo Buena Buena Tubos Fibra hueca Alta 9000-30. DISEÑO DE PROCESOS DE UF Tabla 10. 10. Copyright ©1990.10A.4.1 Objetivo de la UF Un sistema de UF puede ser empleado con distintos propósitos entre los cuales se pueden mencionar los siguientes: . azucares o alcoholes por medio de la UF de una solución. Concentración En la UF donde el objetivo es la concentración de una solución.23). 1990.Diafiltración de una solución con solutos indeseables pequeños. Esta operación es conocida como diafiltración (Figura 10. .Purificación de una solución que contiene solutos indeseables grandes. .Concentración de una solución diluida. el permeado que sale del sistema es reemplazado con agua desionizada o bufer. Todos los derechos reservados.24).

. Copyright ©1985. Figura 10. 1985b. Adaptada de: Tutunjian. 19851 Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.24: Diafiltración por UF.582 CAPÍTULO 10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Todos los derechos res< vados. Fuente: Tutunjian. Todos los derechos re. ULTRAFILTRACíÓf • • • «— 1 UF » * * r_r • • • • • Figura 10. vados. Copyright ©1985.23: Concentracón por UF.

Fuente: Tutunjian. existen limitantes en cuanto a la operación de los equipos.1). La mayoría de los equipos de UF deben operar abajo de 7 Kg/cm2 de presión. Algunos procesos combinan las operaciones descritas anteriormente. Teóricamente el flux puede incrementarse tanto como sean incrementados estos parámetros. como es el caso de la operación de concentración con diafiltración.4. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. APTM = i + -Pt Si se supone que la presión de salida del permeado es O. 10. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 583 Figura 10. Copyright ©1985. Todos los derechos reservados.2 Mecánica de Fluidos En un sistema de UF el flux es función de APTM y de la velocidad del flujo cruzado.25). Purificación La UF donde el objetivo es recuperar el permeado que contiene un solvente de interés o una solución con solutos de bajo peso molecular se conoce como purificación (Figura 10.7 Kg/cm2. 1985b.25: Purificación por UF. mientras que los equipos de fibras huecas sólo toleran presiones de hasta 2.10. De acuerdo a la ecuación (10.4. entonces la ecuación anterior puede rearreglarse de la siguiente forma: . Sin embargo.

584 U' CAPÍTULO 10. Bajo esta condición. para una combinación de P. b) Flux máximo. Se desea optimizar el flux de un sistema de UF a partir de los dato de la Figura 10.-Mecánica de fluidos en UF. b) La combinación APTM y AP que permita el máximo flux. -_ Q = 29.P0 La ecuación (10.26. se fija como la presión máxima de operación de equipo.. . L figura 10.y P0 Esto ocurre generalmente donde se inicia la formación de la película d< gel.— (io.**• donde AP tiene unidade§^de~J^/^em'^y Q de l/min (área fija).18) permite optimizar la relación de APTM coi AP.3. El flux será óptimo para una cierta combinación d< AP y APTM . .41 AP .5 se presentan algunos valores de este rango. Ejemplo 10.7 Kg/cm2. a disminuir APTM. AP disminuye y p0 lo tanto la velocidad del flujo cruzado del fluido. La presión de entrada al sistema es fija e igual 1. El flujo cruzado se correlaciona con la caída presión d acuerdo a la siguiente expresión. al aumentar APTM. donde: AP = Pt .i 8 . Por el contrario.27 muestra la región de operación factible en base a este datos. ULTRAFILTRACIÓ* i AP APTAf = />•. Solución: a) Región de operación factible. visto de otra manera. En la Tabla 10. Se pide: a) Encontrar la región de operación factible.7 Kg/cm tanto la AP como la APTM se restringen a un rango posible de valore: en función de la presión de salida P0 la cual puede ser regulada median! la válvula de salida. Al fijar la presión de entrada Pt a un valor máximo de 1. AP aumenta y por lo tanto aumenta U la velocida< del flujo cruzado. cuando la P.

1985b.70Kg/cm2 AP = 1.02 Kg/cm2 AP = 0.37 Kg/cm2 AP = 1. Presión de entrada fija y la velocidad de recirculación variable.68Kg/cm 2 JA l/min 3 2 AP =0.27: Región de operación factible. 4j AP = 170 Kg/cm2 AP = 1.3.34Kg/cm 2 1-1 APTM (Kg/cm2) Figura 10. Adaptada de: Tutunjian.34 Kg/cm2 APTM (Kg/cm2) Figura 10. Ejemplo 10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc . Adaptada de: Tutunjian.68 Kg/cm2 JA l/rnín 3 2 1-1 A P = 0.02 Kg/cm2 AP=0. 1985b.37 Kg/cm2 AP = 1.10.26: Variación del flux con APTM. Datos Ejemplo 10. Todos los derechos reservados. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 585 4j AP =1. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.4.3. Copyright ©1985. n . Copyright ©1985. Todos los derechos reservados.

son funciones de la concentración de la solución de alimentación.02 Kg/cm2 APTM = 1.19 20 2.36 0.27 se puede observar que para cada combinación de PÍ con P0 o AP con APTM.19 Kg/m2 JA = 2.00 00 0.70 1.00 0.02 30 2.02 1.68 1. De esta manera la concentración del .70 1.9 l/min En un sistema de UF tanto la región factible de operación como la combinación P.70 1.3 Métodos de Operación Los sistemas de UF pueden ser diseñados para operar en forma intermitente o en forma continua. existe un flux factible alcanzándose un máximo cuando: AP = 1.70 1/min AP APTM Q JA 50 2.70 1.02 1. es bombeada a la unidad de UF y regresada al tanque hasta alcanzar la concentración final deseada. En una operación intermitente sin recirculación (Figura 10.80 1.36 1.40 0.70 Po 0. y P0 que optimiza el flux.70 En la Figura 10.3.37 1. Datos del Ejemplo 10.70 1.85 40 2. la solución que inicialmente está contenida en un tanque de proceso.4. Operación Intermitente Las operaciones intermitentes se pueden efectuar con y sin recirculación interna.70 1.586 CAPÍTULO 10.70 0.34 0. 10.5: Cálculo de la región de operación factible.00 1. ULTRAFILTRACIÓN Tabla 10.68 1.28).30 1.34 10 1.53 0.901. Kg/cm2 Pi 1.

29) emplea dos bombas. Todos los derechos reservados. Copyright ©1985. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. Fuente: Tutunjian. La velocidad de alimentación debe mantenerse alta. a la vez que el flux decrece proporcionalmente a ésta. se convierte en una operación intermitente de diafiltración. el retenido es retirado continuamente del sistema a la concentración final deseada. Una de recirculación para proveer la velocidad de flujo cruzado óptima y la bomba de alimentación. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 587 UF Tanque de' Proceso Permeado Bomba I Figura 10. En estado estacionario el flux es cons- . Operación Continua La diferencia entre una operación intermitente y una continua es que en esta última.4. de tal manera que la concentracón en el circuito de recirculación sea cercana a la concentración del tanque alimentador. Cuando al tanque de proceso se le alimenta solvente para lavar la solución la operación intermitente respectiva. producto en el tanque aumenta gradualmente durante el proceso. Esto generalmente se logra manteniendo una relación de 20 veces la velocidad de alimentación a la de permeación. La desventaja principal de los sistemas intermitente es que generalmente requieren más tiempo de residencia (lo cual puede afectar al producto) y tanques de proceso más grandes. 1985b.J0.28: UF intermitente sin recirculación. La operación intermitente con recirculación interna (Figura 10.

Fuente: Gravatt y Molnar.29: UF intermitente con recirculación. Todos los derechos reser vados. 1986. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.588 CAPÍTULO 10. . Copyright ©1986. ULTRAFILTRACIÓN Agua de Diafiltracion Permeado Bomba de Alimentacio'n Bomba de Recirculacion Figura 10.

. 1985b. por lo que el diseño requiere de datos experimentales específicos del sistema. hasta una concentración final determinada.4. la predicción de coeficientes de transferencia de masa y del flux es limitada. Copyright ©1985. 10.10. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc.4 Diseño de la Unidad de UF El problema del diseño de la unidad de UF consiste en determinar el área de UF necesaria para procesar una cantidad de una solución de concentración conocida en un tiempo dado. Adaptada de: Tutunjian.30: UF continua de una y varias etapas. Para contrarrestar esta limitación de la operación continua generalmente los sistemas utilizados son de etapas múltiples (Figura 10.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 589 • 0 1 0 » UF Retenido Alimentación —a-* Bomba Etapa 1 Bomba de Permeado Recirculación 0^1 Etapa 2 Etapa 3 Retenido Bomba Permeado Permeado Permeado Figura 10. Todos los derechos reservados. Generalmente para situaciones de interés práctico.30). tante y mínimo.

y expresada con ayuda de la ecuación (10.20) de la siguiente forma: CBJ exp .19) combinada con la expresión del flux dada por: donde A es el área de UF.19) La ecuación anterior integrada entre los límites y v y vQ r* \-j B /~i ^*Bo V =V conduce a: CB V = V0 exp 'CB dC B (10. puede ser integrada entre O y ¿.20) La ecuación (10. considerando la concentración de soluto en el permeado Cp constante._ Bo B P '--1% J(CB-CP) ( . A continuación se presentan las ecuaciones de diseño de algunos arreglos típicos de los sistemas de UF. se puede expresar como: (10.590 CAPÍTULO 10. obteniéndose un volumen de permeado Vp.Jc B c -c J dCB ¡C s r . se procesa hasta alcanzar un volumen final Vj con una concentración final CBJ. Un balance de soluto en el sistema. ULTRA FILTRACIÓN En el caso de los sistemas de diafiltración otro parámetro importante es la cantidad de solvente de lavado que es necesario agregar. Concentración Intermitente En un sistema de concentración intermitente el volumen inicial de solución V0 con una concentración inicial CBO.

lo cual puede realizarse calculando el área bajo la curva de los datos experimentales graneados como: ~JVS J 1 1 j Para realizar estudios de escalamiento también puede utilizarse la | expresión experimental de la variación delfluxcon CB obtenida en equipos de laboratorio.23).UF intermitente.4. y por las ventajas que ofrece para su limpieza por retrelavado. el tiempo de operación es de 20 h.22) simplifica a: (10. etc. entonces la equación (10.23. Se desea concentrar de 2 a 10 % en peso 10 m3/dia de una solución de un polisacárido. Este cálculo requiere la evaluación de la parte derecha de la ecuación (10. b) Calcular el número de tubos necesarios (diseño modular).23) La ecuación (10.2 ra. Los datos de laboratorio muestran que para una AP =1. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 591 Cuando el rechazo es total Cp^^O. conjuntamente con la ecuación 10. por considerarse más conveniente este tipo de arreglo para el flux proyectado. .4. Como el tiempo muerto (descarga.) de la unidad es de 4 h. Se realizan pruebas de laboratorio utilizando una unidad tubular de 0. Ejemplo 10..012 x 1. c) El flux promedio.í 10. limpieza.5 Kg/cm2 el gasto volumétrico en la recirculación es de 8 l/min y el flux en //m 2 — h está dado por la expresión: = 81n 'B a) Calcular el área de UF necesaria.23) puede ser utilizada para calcular el área necesaria para realizar una concentración de CBO a CBJ en un tiempo / o para calcular dicho tiempo dada el área de UF disponible.

1/2 A = 1000 >i ^ n > l n15 \\CB/I En la Figura 10.31 se muestra la curva que se obtiene al gr 1/J vs \¡CB.00 0.40 Figura 10.31: Curva de 1/J vs l/CB.35 0.40 0. ULTRAFILTRAC) 0.15 0.10 0.04 m 2 A = 40 m2 .05 0.4 Solución: a) Cálculo de área: Con los datos y la ecuación (10.10 0. Datos de Ejemplo 10.592 0.25 0.20 0.20 CAPÍTULO 10.30 I/Ce 0.30 1/J 0.23) se obtiene la expresión: .La integral de la expresión anterior es igual al áre< esa curva. de tal manera que: A = 1000 x 0.

0. si el sistema consta de una sola etapa. 10.012 m x 1. Debido a que un sistema continuo opera todo el tiempo a la concentración de salida deseada. el área de UF necesaria es mucho mayor que si se opera en varias etapas en cascada.2 m = 884 tubos = 593 N N N c) Cálculo del flux promedio: Mediante un balance de soluto se obtiene primero el volumen final de la solución: V0C0 = VjCf de tal manera que.4.000-2000) I 40m2x20/i 1U Ví = prom ~ — Jprom m* — Concentración Continua Los sistemas de UF continuos se utilizan para procesar volúmenes considerables o cuando se tiene una alimentación continua. DISEÑO DE PROCESOS DE UF b) Cálculo del número de tubos N: Área total Área por tubo 40 m2 = TT x 0.000x2/ —lo— vf = 2000 / con estos datos se puede calcular el flux promedio: (10. . Debido a esto los sistemas de multietapas continuas son los más utilizados.

Si un sistema de UF presenta varias etapas de igual área. V r r .24) El flux en la etapa n está dado por una expresión de la forma: . tendiendo a alcanzar el flux promedio de un sistema intermitente. Entre más etapas presenta la cascada mayor es el flux promedio de ésta. r) * * f.32. el área de cada etapa puede calcularse utilizando balances de masa solamente.n n c. Sin embargo. i ir /i\ fc 1r " e.594 CAPÍTULO 10. para un flujo de entrada F0. ULTRAFILTRACIÓN F r ° ir ^ C0 Av . con una concentración de la solución de entrada C0 y una concentración de salida deseada Cn. conforme la concentración de soluto aumenta en cada etapa el flux de permeado disminuye.\ i r _ . 1985b). En el sistema de UF continua que se muestra en la Figura 10. donde el área por etapa disminuye conforme la concentración de soluto aumenta. es decir el volumen de solución disminuye. cada etapa está constituida por una o varias unidades de UF en serie o paralelo. El problema de diseño consiste en determinar el área de UF de cada etapa. de tal manera que. este efecto disminuye conforme aumenta el número de etapas. Generalmente es más económico utilizar de tres a cinco etapas (Tutunjian. Si se supone un coeficiente de rechazo a = 1 para todas las etapas.32: UF continua de etapas múltiples. \r C2 i Figura 10. El flujo Fn puede calcularse efectuando un balance de masa de soluto en toda la cascada. ^ t. Fn = ^ (10. Algunos cascadas de UF operan con áreas diferentes en arreglos tipo pirámide.

cuando se conoce el área de cada etapa. o bien el área necesaria para un número de etapas prefijado.28) Con el sistema de ecuaciones (10. Las pruebas experimentales muestran que el flux puede estimarse con la expresión Calcular: a) El área necesaria para un procesamiento intermitente y el flux promedio. b) El área necesaria para un procesamiento continuo de 5 etapas y el flux promedio. en forma iterativa descendente se calcula el número de etapas necesarias hasta alcanzar el valor de la concentración de soluto de la solución de entrada. Fn_1 = JPn + Fn (10.5.4. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 595 (10.27) Por medio de un balance de soluto en la etapa n se calcula la conI centración de soluto en la etapa previa.. (10. Ejemplo 10.26) Efectuando un balance global en la etapa n se puede calcular el flujo de la etapa previa. Se desea procesar 5000 l/h de una solución proteica para concentrarla de 2 a 20% en peso. í Pn = AJn (10.24)-(10.25) n • El flujo de permeado Pn en la etapa n se puede calcular para un Í área A de diseño con.Comparación de UF intermitente y continua.10. .28).

üO m2 — h b) En la Tabla 10. El área total es : = (5)(32.24)-(10.6 se presentan los cálculos utilizando las ecuaciones (10. o 20 h '==- OO. ULTRAFILTRACIÓN c) La variación del área total de la UF con el número de etapas. . . Utilizando la ecuación (10.7. La Figura 10.375 m 2 n I m -h 2 c) Utilizando el procedimiento del inciso b) se realizan los cálculo para obtejier la Tabla 10.375 m2 Acont El flux promedio es: r _ 4500 l/h _ "" ~ 164.000 X i A>ntermitente •^intermitente = — 10.875 m2 satisface la condición de diseño.28).23) se puede llegar a la siguiente expresión: *1/2 Aintermitente — 10.875) m2 = 164. donde la relación Área/etapa = 32.33 muestra estos resultados en forma gráfica.596 CAPÍTULO 10.0134 m 134 772. Solución: a) Área UF intermitente.000 x 0. El flux promedio está dado por: c nnn DU Jprom ~ 5000x2 1 7 _ n 134 m 2 .

44 37.00 238.h) 8.89 2.81 Total Jn (l/h) Pn 266.44 27.4.66 27.00 Tabla 10.37 147.51 2.flO. Datos ejemplo 10.6: Área para procesamiento continuo en 5 etapas.7: Cálculos para diferentes número de etapas.74 Flux promedio (//m 2 .77 Área total (m 2 ) 555.98 5 32.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 597 ¡Tabla 10.55 1538.14 3461.11 18.h) 8.97 1245.00 766.94 164.44 191.38 30.00 Cn (% en peso) 20.79 4.11 16.89 46.57 901.22 3 63.5 Número de Área por etapas totales etapa (ra 2 ) 1 555.04 7.45 .00 13.00 (//m 2 .88 10 14.59 547.17 2216.59 1314.5 Fn n 5 4 3 2 1 0 (1/h) 500.87 23.500. Datos del Ejemplo 10.69 5000.61 4.00 2 119.

ULTRAFILTRACIÓN O 4 6 N (Etapas) 8 10 Figura 10. . Datos del Ejemplo 10.5.33: Variación del área de UF con el número de etapas.598 CAPÍTULO 10.

P: Flujo de permeado. Ci\ Concentración de impureza en el tanque. el balance en el sistema del soluto que se desea eliminar.30) donde VD es el volumen de solvente de diafiltración.10A. [L3/t]. Considerando que el soluto de interés es totalmente rechazado por la membrana y la impureza totalmente permeable.30 puede integrarse con los límites.24) se alimenta continuamente solvente de lavado al tanque de alimentación y se mantiene el volumen del retenido constante. dado que VR es constante el flujo de permeado puede igualarse al flujo de solvente.29) donde: VR: Volumen retenido en el tanque. [M/L3].31) La ecuación* anterior puede ser rearreglada expresando el flux de permeado como: . está dado por: al = -PC¡ (10. = Ci VD — O VD = VD obteniéndose la siguiente expresión: (10. DISEÑO DE PROCESOS DE UF Diafiltración Intermitente: Volumen Constante 599 En la diafiltración intermitente a volumen constante (Figura 10. [L3]. obteniéndose la siguiente expresión: (10. La ecuación 10. C = C0 C. de tal manera que el flujo de alimentación es igual al flujo de permeado.

Ejemplo 10.34) se obtiene: Ci = C /0 exp -£*— VR (10. El flux del sistema está dado por: CB [™? .Diafiltración intermitente a volumen constante.32) y combinando las ecuaciones (10.35) puede ser utilizada para calcular el área de diafiltración necesaria para lograr un determinado grado de eliminación de impurezas. I c) El volumen de solvente de diafiltración para el inciso b). 1984). Solución: .33) V VR ) dado que el flux de permeado también puede expresarse de la siguiente forma: J = ks\n-~ al combinar las ecuaciones (10.32) para obtener: „ „ í-JAt\ C/ = C/0exp -TT— (10.33) y (10.h a) Calcular el efecto sobre la pureza de la solución de la razón del volumen de diafiltración a volumen de retenido o índice de lavado.35) V J La ecuación (10. b) Calcular el área de diafiltración necesaria para lograr una pureza del 99% en un tiempo de 10 h.600 CAPÍTULO 10.31) y (10.. ULTRAFILTRACIÓN J = -T7 (10.6. Se desea purificar por diafiltración intermitente a volumen constante 5000 / de una solución que contiene 15% en peso de proteínas y 3% de sal (O'Sullivan et a/.34) (10.

b) Utilizando la ecuación (10.00 1. Esta operación se repite hasta alcanzar la pureza deseada. de tal manera que: VD VD VD = JAt = (201n^)(108m 2 )(10/i) 15 = 15.932 0.8.41 15.41 0.8: Efecto del volumen de diafiltración sobre la concentración de impurezas. Datos del Ejemplo 10.32) puede ser usada para calcular V¿>. y lavar hasta alcanzar nuevamente el volumen VR.10 15.15 15.6 VD/VR 0 1 2 3 4 c.00 16.996 a) Utilizando la ecuación (10.10 0.15 0.973 0. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 601 Tabla 10.35) y los datos se tiene: 0.4.05 = exp de donde se obtiene: 5000 / A = 108 m2 c) La ecuación (10.10.000 / QH Diafiltración Intermitente Repetida Una forma alternativa de diafiltración intermitente consiste en adicionar un volumen de líquido de lavado al tanque de proceso que contiene un volumen VR de solución. 3.31) se pueden obtener los resultados que se presentan en la Tabla 10.05 CB CÍ + CB 15 15 15 15 15 Pureza 18.833 0. .05 = c7+fe 0.990 0.

Diafiltración Continua en Cascada En la diafiltración continua en cascada el líquido de lavado se adiciona continuamente en cada etapa (Figura 10. la concentración de ésta a la salida de cada etapa y en el permeado es la misma. Cuando la concentración de la especie retenida es constante.36) } donde: Cin\ Concentración de impurezas después de n lavados. VR: Volumen de retenido. n: número de lavados. VDT'.34). . (7/0: Concentración inicial de impurezas.37) La concentración de soluto a la salida de la etapa n puede ser expresada como: donde: C¡n: Concentración de impureza en la etapa n. VDT C '° + rf% (10.= l. ULTRA FILTRACIÓN El balance de masa para esta operación puede ser expresado cornol C ^ 7T. .Volumen total de líquido de lavado empleado. si la membrana no retiene la impureza.602 CAPÍTULO 10. de tal manera que el balance de masa para la primera etapa puede ser expresado (con Q = P) como: (10. Este tipo de arreglo es útil para procesar volúmenes considerables o cuando por inestabilidad del producto se requieren tiempos de operación cortos. existe un flux constante en cada etapa (flujo de líquido de lavado igual al flujo de permeado). Además.

F Cu —\\- FC'n Figura 10. Como el flux de permeado en cada etapa está dado por: J J~VD ~Tt (10.34: Diafiltración continua en cascada.39) se puede rearreglar de la siguiente forma: At = J . F: Flujo de alimentación (retenido).4. Q: Flujo de líquido de lavado.40) la ecuación (10.•0. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 603 Q Q FCk. La ecuación (10. P: Flujo de permeado.39) donde VD es el volumen de lavado alimentado a una etapa y VR el volumen de retenido alimentado al sistema en un tiempo dado.38) también puede expresarse como: ^ Cío (10.

Ejemplo 10.7..604 CAPÍTULO 10.31) y (10.4( el área necesaria para efectuar una determinada purificación disminu^ al incrementar el número de etapas.Comparación entre la diafiltración interm tente y la continua.39) para efectuar es análisis.e'2) x 100 = 86. De acuerdo a la ecuación (10. El producto At es mínimo cuando el lado derecho de la ecuació (10.5 % . o bien el incremento del númei de etapas reduce la cantidad de líquido de lavado y el área necesar por etapa. De acuerdo a la ecuación (10.40) es mínimo. Solución: Se pueden utilizar las ecuaciones (10. ULTRAFILTRAClÓi donde A es el área de UF por etapa.39) al aumentar el índice de lavad VD/VR se incrementa la purificación. definiendo las siguientes expresiones del grado de eliminad de impurezas: Para la operación intermitente: CIo-CIn Para la operación continua: Cío — C¡n Cío De acuerdo a lo anterior si VDT/VR — 2 el % de eliminación impurezas es: Operación intermitente: (1 . Se desea efectuar un análisis comparativo entre la diafiltración i termitente y la continua para determinar que operación requiere men volumen de lavado (menor área) para alcanzar un mismo porcentaje ( eliminación de impurezas.

4% En la Tabla 10. 1:Intermitente 2: continua 1 etapa 3: continua 2 etapas 4: continua 3 etapas. por lo que en el caso de la operación continua dicho volumen se reparte equitativamente entre las etapas.7% Operación continua 2 etapas: 1x 100 = 75. x 100 = 78.4.35. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 605 100 8 Figura 10. Operación continua 1 etapa: 1- 1 x 100 = 66.9 se presentan los cálculos para otras relaciones de l°s cuales se muestran en forma gráfica en la Figura 10. Datos Ejemplo 10.0% Operación continua 3 etapas: 1f) 3 . .35: Comparación de diafiltración intermitente y continua.10. Es necesario hacer notar que VDT es gl volumen total de líquido de lavado.7.

sin embargo la cant dad de líquido de lavado también es la máxima bajo estas condición (ecuaciones 10. sin embargo.4 98. Diafiltración a Contracorriente En la diafiltración a contracorriente (Figura 10. entonces cuando ésto sea el objetivo de la operacic debe seleccionarse este tipo de operación. el flux se maximiza.1 99.8 96.2 98. ULTRAFILTRACIÓ Tabla 10. % de eliminación de impurezas Continua intermitente 1 2 3 0.606 CAPÍTULO 10.5 66.39).0 100. don< .0 0.9: Comparación de diafiltración intermitente y continu Datos Ejemplo 10.7 75.0 0.0 98.7 93.31 o 10.9 97.0 0.8 85.0 88.0 78. 1990).3 100. la cantidad de líquido de lavac disminuye.8 VDT/VR 0 2 4 6 8 10 La operación intermitente es la que requiere menor volumen c lavado (área). sin embargo el flux también disminuirá dado que éste var inversamente a la concentración del soluto impermeable CB (ecuacic 10. Estos hechos conducen a un problema de optimización.0 90.9 92. en e tos casos se requiere decidir cuando efectuar la diafiltración. si el caldo se concentra valor deseado y posteriormente se lava.34).2 80.0 88. Operaciones Combinadas: Concentración-Diafiltración / Algunos caldos requieren tanto ser concentrados como lavados. Por otro lado. Si es ise inicia con el caldo inicial.9 96.36) es posible lograr ur mayor purificación con menos líquido de lavado. esto d pende de la concentración alcanzable de la especie no permeable (Fai y Radovich.0 86.7.

Se desea concentrar 10 veces 1000 / de un caldo que contiene 2% en peso de proteína y 5% en peso de sales.05%. Copyright ©1990. [l/h] Encontrar el tiempo de diafiltración óptimo. Fuente: Fane y Radovich. El flux para el sistema está dado por la relación experimental.. Solución: Empleándola ecuación (10.36: Diafiltración a contracorriente. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. de tal manera que se obtenga una concentración final de 20% en peso de proteína. .QA. Se desea también reducir la concentración de sales al 0. Todos los derechos reservados. Ejemplo 10.31) se puede calcular la relación del volumen de líquido de diafiltración a volumen del caldo. la diafiltración deberá efectuarse en un punto intermedio entre la concentración inicial y final de retenido. 1990. DISEÑO DE PROCESOS DE UF 607 Agua de Lavado 20 1 Alimentación 100 t i 1 50 ni •mi w ti 1 50 7 J + Retenido Libre de Producto 10 f Perneado (Producto) 110 Recuperación de Producto 97% Dilución del Producto 868 Figura 10.8.Operaciones combinadas de UF.

608 CAPÍTULO 10. Concentrar 2 veces hasta 20% de proteína.10 se muestra el efecto del factor de concentración sobre los diferentes parámetros. / Los resultados anteriores conducen a proponer el siguiente esquema de Concentración . observándose un mínimo en X = 5 con t = 1. t = 500 l n ^ La ecuación anterior puede expresarse en términos de "X" o veces que se concentra la solución original de 1000 / y 2% de proteína.85 h.37 muestra la variación del tiempo de filtración en el factor de concentración. 5 In Esta relación debe ser utilizada independientemente del volumen de caldo VR. Concentrar 5 veces hasta 10% de proteína y 5% de sales. Utilizando la expresión de flux se puede calcular el tiempo de diafiltración de acuerdo a la siguiente expresión: JA o bien. VR depende del grado de concentración previa a la diafiltración. Se supone que el tiempo total de concentración no se afecta por el esquema de diafiltración que se adopte. y la Figura 10. Por otro lado. ULTRA FILTRACIÓN — VR VR = In = Ci 0.6- En la Tabla 10.05% de sales.Diafiltración: 1. 2. 3.05 VD . . t = 4. Diafiltrar hasta 0.

89 608.89 405. X % VR(') M/) CB ( ) JA (l/h) t(h) 1 1000.08 11 90.07 10 100.00 4600.62 2.33 1533.00 496.DISEÑO DE PROCESOS DE UF 609 Figura 10.00 16.04 752.00 2.8.20 8.34 3.00 920.00 1301.85 5 200.00 150.18 22.40 418.00 328.00 4.00 2.00 .41 2 500.67 766.86 657.00 1.53 2.77 4.05 20. Datos del Ejemplo 10.73 9 111.10: Operaciones combinadas.11 18.14 14.00 4 250.00 2300.8.00 1.11 511.00 460.63 1.39 7 142.00 954.33 6.37: Operación de UF combinada.52 202.00 3.04 3 333.00 2.00 575.00 10.47 6 166.00 1150.67 12.00 261.00 2.20 8 125.91 102. Tabla 10. Datos del Ejemplo 10.

para estimar áreas de 1< equipos. . mediante el uso de membranas especializadas para lograr la separado deseada. Las operaciones pueden ser efectuado en forma intermitente o continua ya sea para concentrar. Los equipos de ultrafiltración presentan características distintiva en arreglos modulares de varios tipos que operan bajo la modalidad c flujo cruzado de la alimentación. las etapas necesarias o el tiempo requerido de un proceso. El diseño de los equipos de ultrafiltración está basado en una con binación de la teoría y la experimentación.5 Sumario La ultrafiltración se utiliza para concentrar y purificar caldos biológico. purificar diafiltrar una solución. ULTRAFILTRACIÓI 10.610 CAPÍTULO 10.

2.6 ik- Problemas fo.5 40 7. 10.J.s) x 105 5 15.En la concentración de una solución de factor VIII antihemofílico itilizando módulos de fibra hueca (Mitra y Ng. está dada por: C= -sG e donde e es la base de los logaritmos naturales.Demostrar que la concentración de un soluto impermeable a la cual el tiempo de diafiltración es mínimo en un proceso combinado.l.Se desea concentrar 75.0 20 11. b) Calcular el área total para una operación continua en cascada con 3 etapas de igual área.0 50 6.. El tiempo de proceso es de 12 horas y la expresión experimental del flux es: 40^ J = 12 In ~C~B I m — ¿ a) Calcular el área mínima para una operación intermitente a volumen constante. 1986) se obtuvieron los siguientes datos: Cs(m<7/m/) J(ml/cm2 .1 10 12. PROBLEMAS 611 0. 410 m 2 ..5 J Estimar ks y CG10. 321 m 2 b) Resp..000 / de una solución proteica del 2 al 15% en peso y reducir su contenido de sales 5 veces.0 30 8. a) Resp.3.

b) El flujo que es procesado por unidad. b) Calcular el flux promedio de la operación. Determinar: a) El tiempo requerido para procesar cada lote considerando un tiempo muerto de cuatro horas por dia. El coeficiente de retención de la Cefamicina C en la unidad puede considerarse igual a cero.. 0.24 l/min 10. a) Resp. El flujo de permeado promedio que produce cada unidad es de 76 l/min. VD = 53. a) Calcular la concentración final del caldo. c) El tiempo necesario para el primer paso del proceso. JA = 74.. d) El porcentaje de recuperación de Cefamicina C en el primer paso. Para obtener una recuperación del 98 % de Cefamicina la operación se efectúa en dos pasos: i) Primero se reduce el volumen del caldo a la tercera parte.. ii) Posteriormente se diafiltra a la velocidad final de permeación del primer paso.h 10. la solución se concentra 5.4.612 CAPÍTULO 10. 66% e) Resp.El flujo de permeado por unidad en la di afilt ración. El caldo que contiene sólidos en suspensión se procesa en un sistema que consta de cuatro unidades de UF de 268 m2 cada una. 5 h/lote b) Resp.5 l/min c) Resp.0316 m2 de área. ULTRAFILTRACIÓN 10. f). 47.547 / b) Resp. a) Resp.En una unidad tubular de UF donde se concentra a razón de 2 l/min una solución que contiene 30 mg/l de una proteína de peso molecular de 300. megatherium en una unidad de fibra hueca de 0. el flux está dado por: J = 5 x 10~ 4 In 100 cm 3 cm¿ — s .455 / f) Resp.3 veces en 14mm.Una planta produce Cefamicina C mediante una fermentación a un ritmo de 28 lotes de 57.Al procesar en forma intermitente 2.5..6.77 g/l de B.9 / de un caldo que contiene 23.000 Da.00 / cada semana. 125 min d) Resp. 319 //m 2 . e) El volumen de diafiltración.

. 1. d: Diámetro del tubo en cm Determinar: a) La presión a la salida del tubo.6. . PROBLEMAS 613 La presión de entrada a la unidad es de 2 atm.264 atm b) Resp.ooiLcy donde: AP: Caída de presión en atmósferas. 0. a) Resp. La caída de presión ía lo largo del tubo está dada por: o. L: Longitud del tubo en cm.h c) Resp.132 atm 146 //m 2 .00 0.Se desea comparar dos tipos de membranas para desalar y concentrar una solución de proteasas (Ghose.. b) La caída de presión transmembrana.00 El volumen a procesar es de 10 2 m3 con una concentración de 0. El tubo presenta un fcliámetro interno de 2 cm y una longitud de 50 cm.7.99 0. 1990). Los coeficientes de retención de las membranas son los siguientes: Membrana Soluto Proteasas PM-10 Sales Proteasa PM-30 Sales Coeficiente 0.. 10.80 0.1 Kg/m3 de proteasas y 4 x 102 mol/m3 de NaCO?. Determinar para cada tipo de membrana: a) El volumen necesario de agua destilada para eliminar el 99 % de sales por diafiltración a volumen constante. c) El flux de permeado. Q: Flujo cruzado en cm3/s.

a) Resp. Respuestas para la membrana PM-10. d) Las pérdidas de proteasas al concentrar 10 veces la solución diafiltrada.6 x 1(T2 m3 b) Resp.614 CAPÍTULO 10.0955 Kg/m e) Resp.69 % .5 x 10~5 m3 c) Resp. 6. e) El porcentaje de pérdidas totales de proteasas. c) La concentración de proteasas al final de la diafiltración. 4. ULTRAFILTRACIÓN b) Las pérdidas de proteasas durante la diafiltración. 4. 3 0.

). Marcel Dekker. Vol. A. 1990. (Ed.A.A.). 1988. G.G y Radovich. Me Gregor. T. W. 1990. 229-264. H. New York. Downstream processing plant and equipment. 10. Recovery of an extracellular antibiotic by ultrafiltración.M. Membrane separations technology: An overview. 8.). (Ed. BIBLIOGRAFÍA 615 10. J. Me Gregor. 9. y Molnar. 61-88.. Sep. John Wiley and Sons.Y. 3.). (Ed. Asenjo. 19. Asenjo. J. Hanisch. M. Dziezak. J. 89-97.L. y Hu. Membrane separation technology offers processors unlimited potential. Permagon Press. Marcel Dekker. Me Gregor.A. En: Membrane Separations in Biotechnology. (Eds. Me Gregor. (Ed. W.E.P. Ultrafiltration. D. 383-409. 9. Brocklebank. 25. En: Separation Processes in Biotechnology. En: Separation Processes in Biotechnology.A.R.7 Bibliografía Belfort. Advanced Biochemical Enginnering.John Wiley and Sons. 1. 1990. (Ed. Cell harvesting.C.10. Bungay. 209-262 Ghose. Marcel Dekker. Le M. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology.7. 1986. 108-113. En: Membrane Separations in Biotechnology. Cussler. 1-35. G. 237-270. W. . 4.).S. Gravatt. Marcel Dekker. J. 1985 .P. En: Comprehensive Biotechnology. y Belfort. E. 1986. Marcel Dekker. New York.C. Membrane Systems. P. Selection and use of ultrafiltration membranes. Ellis Horwood. New York. En: Membrane Separations in Biotechnology. Belter. New York. Murray M.K. New York. (Ed. T. 617-740. 1.C.C.D. Food Technology. Bioprocess Computations in Biotechnology. New York. 1990.). W. New York. 1986.) New York. 1987. y Howell. W. W. J. Fane. 239-297.

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3 se presenta una descripción general de este tipo de equipos. la carga y la naturaleza anfotérica de éstas juega un papel fundamental. Sin embargo.1 Introducción Electroforesis es el movimiento de las partículas cargadas contenidas en un medio debido a la influencia de un campo eléctrico. La electroforesis constituye una de las técnicas más poderosas para la purificación de moléculas biológicas. Estos aspectos fundamentales de la electroforesis se revisan en la sección 11. La electroforesis no está limitada a la escala analítica. Actualmente existen varios tipos de equipo en diversos arreglos que permiten el uso de esta técnica a escala preparativa. En la separación de proteínas por medio de un campo eléctrico. La sección 11. que han conducido al desarrollo de diferentes formas y técnicas para el desarrollo de las separaciones electroforéticas. existen otros factores tanto microscópicos como macroscópicos que afectan el movimiento de una partícula en un campo eléctrico. sin embargo pueden ser aplicados igualmente a otro tipo de proteínas. así como a ácidos nucleicos. células o partículas coloidales.2 de este capítulo. En la sección 11.4 presenta una discusión sobre los principios básicos 617 . Gran parte de la teoría y de los equipos de electroforesis han sido desarrollados para la separación de proteínas globulares.Capítulo 11 Electroforesis 11.

Dichas matrices tienen la propiedac de constituir medios porosos altamente hidratados que proporcionar resistencia mecánica. despué de un tiempo apropiado para desarrollar la electroforesis. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Fuente: Ivory. las matrice son teñidas para observar los componentes de la muestra.618 CAPÍTULO 11. Todos los derechos reservados. separándose los componentes de la mezcla sobn la matriz. y disminuyen los efectos del calor generado por e paso de corriente al aplicar el gradiente de potencial a la celda.1). En este método se coloca una pequeña banda de muestra de la solución que contiene el soluto de interés. la cual se encuentra inmersa en un electrolito que sirve como bufer. Copyright ©1990. sobre una matriz generalmente rectangular. ELECTROFORES1S y Inicio 15 minutos (i] | 30 minutos gQ Soluto Aniónico Soluto Catiónico Figura 11. Cuando esta técnica se utiliza con fines cualitativos. 1990.2 Fundamentos La forma mas sencilla de realizar una operación de electroforesis es el método de electroforesis de zona (Figura 11. del diseño de equipos de electroforesis. En la discusión de la operación de electroforesis es importante con siderar cuatro aspectos fundamentales: . 11.1: Electroforesis de zona en una gel anticonvectiva. de celulosa. almidón. En la electroforesis de zona cada componente de la mezcla se muev< a diferente velocidad. agar o poliacrilamida.

2. FUNDAMENTOS 619 • La naturaleza de la carga de la partícula que se mueve en el campo eléctrico. Tal como se muestra en la Figura 11. despreciando efectos gravitacionales y difusivos. L 1.2 Teoría Electrocinética La velocidad de migración de un soluto a través de un líquido conductor por la acción de un campo eléctrico.1. la carga neta de una protema depende entre otros factores del pH al que ésta se encuentre. así como el punto isoeléctrico de ésta.2. constituyen el tercer aspecto.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas 3n las proteínas su carga se origina principalmente de la ionización de ms numerosos grupos amino y carboxilo. está influenciada por algunos fenómenos físicos mi- . La carga que adquiere una proteína en determinado pH. Los grupos carboxílicos —COOH en medios ambientales básicos son ionizados para formar grupos carboxilatos —COO~. Existe un pH particular para cada proteína donde la carga neta de ésta es cero. En esta sección se hace uso del caso de las cargas que se presentan en las proteínas globulares. a este pH se le conoce como punto isoeléctrico. A un pH relativamente bajo existen más grupos —NH^ y —COOH y la proteína tiene una carga neta positiva. 11.2. a un pH relativamente alto la proteína tiene más grupos —NH<¿ y —COO~ y se encuentra cargada negativamente. que es el campo de estudio de la teoría electrocinética. • El cuarto aspecto se refiere a las técnicas y diversas formas en que es posible realizar una operación electroforética. • Los fenómenos de dispersión de la muestra que se observan en las operaciones electroforéticas.///.2. • El segundo aspecto lo constituye el estudio de los parámetros más importantes para describir la velocidad de migración de la partícula. son dos propiedades que se utilizan para la correcta separación electroforética de proteínas. Los grupos amino —7V//2 sn medio ambientes ácidos son protonados produciendo grupos amoaio —TV.

establece que la fuerza que actúa . despreciando los efectos difusivos y gravitacionales. Modelo de una Esfera Cargada Sumergida en un Medio Continuo Un modelo sencillo para el tratamiento de la electroforesis consiste en considerar a la partícula de soluto.El modelo de una esfera cargada sumergida en un medio continuo. . Dos modelos básicos de gran utilidad son: I .El modelo de la doble capa. ELECTROFORESIS + 10 8. y las fuerzas de relajación y de retardamiento que se producen en el ambiente iónico que rodea al soluto. Un balance de las fuerzas que actúan sobre la partícula cuando ésta se mueve a una velocidad constante (en equilibrio). los cuales varían en su grado de complejidad. 1 -10 4 PH e Figura 11. croscópicos como: la carga de la partícula. como si se tratara de una esfera sumergida en un medio continuo de solvente. la fuerza de arrastre que se opone al movimiento de la partícula. La teoría electrocinética que ha sido desarrollada para el tratamiento de estos aspectos ha conducido a la elaboración de varios modelos.2: Cambio de la carga neta de un proteína con el pH.620 CAPÍTULO 11.

2.500 Coulombio/Mol-equiv].11. Si la partícula está en equilibrio es posible combinar las ecuaciones (11. ~Ñ"\ Número de Avogadro. de tal manera que: (11.1).3) •/' o donde: z\\ Valencia de la partícula o carga puntual. [L/t].3) para obtener: En la expresión anterior N0 puede ser expresada en función de la constante de Boltzman ks y la constante de los gases ideales R para obtener: .1) La fuerza de arrastre FK en el caso de un flujo viscoso lento alrededor de una esfera (flujo reptante) está dada por (Bird et a/. F\ Constante de Faraday. [L]. [Voltio /cm]. (11. 0 ° iMoí— equiv* E: Campo eléctrico.].2) donde: v : Velocidad de la partícula. [. es decir: FK = -FE (11./V'oneJ. FUNDAMENTOS 621 sobre la partícula debida al campo eléctrico.2) y (11. La fuerza eléctrica FE es proporcional tanto al campo que actúa sobre la partícula así como a su carga. es igual a la fuerza de arrastre de la partícula. ¡i: Viscosidad líquido. [M/L — t]. [96. d: Diámetro de la esfera. 1964): (11.

permite visualizar las interacción de una partícula sólida cargada. Modelo de la Doble Capa El modelo de la capa doble desarrollado en base a la teoría de los ele trolitos fuertes de Debye y Hückel. como predice modelo d esfera en la forma de la ecuación (1 1. Estos grupos cargad' atraen especies de la solución que presenten cargas contrarias (coione . la difusividad DAB está dada por: Combinando las ecuaciones (11. m=~ (11.5) y (11 . con su microambiente iónico. 1 ELECTROFORESIS De acuerdo a la ecuación de Stokes-Eistein para un flujo reptante alrededor de una esfera. Las partículas como las proteínas cuando se encuentran present en soluciones de electrolitos desarrollan cargas.6) se tiene: La movilidad m de una partícula en un campo eléctrico se definí como la velocidad de la partícula por unidad de campo eléctrico. la movilidad está dad. h sido empleado para explicar estos efectos. por: Se ha observado experimentalmente que la movilidad de una part cula no depende sólo de su carga intrínseca.8 En este caso particular del modelo de esfera. El ambiente iónico que s^ form alrededor de la partícula en solución tiene una influencia importan! sobre la movilidad y las propiedades electrostáticas de la partícula.9). I modelo de la doble capa para interfases sólido-líquido electrolito.622 CAPÍTULO 11.

coiones solvatados o contraiones solvatados). constituida por moléculas del solvente ligeramente ligadas y iones totalmente hidratados. El modelo de la doble capa propone que este conjunto de cargas genera dos regiones o capas con diferente grado de movilidad (Figura 11. formando una capa altamente hidratada. Se considera a esta capa la responsable de la disminución del campo eléctrico intrínseco de la partícula. Esta longitud varía inversamente con la raíz cuadrada de la fuerza iónica / (Castellan. Actualmente no existen suficientes bases teóricas que permitan calcular el potencial Z en función de la carga de la partícula y su determinación es de carácter empírico. en las proximidades de la superficie de corte se genera una segunda capa de carga contraria (cuya naturaleza no es rígida). relativamente fija. y está dada por: = * E c--? . A o c 4= (11. El potencial Z es el potencial eléctrico medido en la superficie de corte de la partícula. de un espesor aproximado de 10° A Esta capa que envuelve a la partícula misma constituye la superficie de corte del complejo formado. Utilizando la teoría de Debye-Hückel ha sido calculado el radio medio de la capa difusa o la longitud de Debye A.3). 1971). A esta segunda capa se le conoce como capa difusa o capa de Gody-Chapman. es proporcional al potencial Z de la partícula y no a su carga intrínseca. El radio de la capa difusa también tiene una influencia importante sobre la movilidad de la partícula. moléculas polares o moléculas con dipolos inducidos. FUNDAMENTOS 623 contraiones.2. Dependiendo de la carga neta que se genere dentro de la superficie de corte por acción del rearreglo de cargas.10) \/7 donde la fuerza iónica es una medida de la concentración y valencia de los iones que rodean la partícula. En la primera región (capa de Sterm) la atracción que ejerce la partícula sobre las especies es más fuerte. es decir. El modelo de la doble capa permite interpretar el hecho que la velocidad de migración de una partícula cargada en un campo eléctrico.11.

ELECTROFORESIS Superficie cargada \ >> Cap* interna de Helmholtz c*p* externa de Helmholtz Superficie de corte Agua de Hidratación Capa difusa de Gouy-Chapman Capa de Stern Distancia Figura 11. . 1990. Adaptada de: Ivory. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.624 CAPÍTULO 11. Copyright ©1990.3: Esquema de la doble capa cerca de una superficie cargada.

tal como el desarrollado para obtener la ecuación (11.12) siendo FK la fuerza de arrastre sobre la partícula esférica formada por la superficie de corte. FUNDAMENTOS donde: d'.11. 625 En la mayoría de los casos prácticos A es menor a 1000°A. . es decir a concentraciones salinas bajas. es conveniente considerar tres casos particulares: . se puede considerar la situación en la cual el espesor de la capa difusa es intermedio. de tal manera que: FK = 3TTfídcv (11.Entre los dos extremos anteriores. Modelo de la doble capa: Movilidad en soluciones diluidas. el espesor de la capa difusa es muy bajo (~ 2 °A) y su presencia también puede ser ignorada. . Para analizar los efectos del espesor de la capa difusa sobre la movilidad de la partícula. y al potencial Z que es una medida de la carga aparente de la misma. de tal manera que su presencia puede ser ignorada. Z{\ Valencia de la especie i. la capa difusa es grande pero muy diluida en contra iones. De acuerdo con la Ley de Coulomb la fuerza entre dos cargas está dada por: .9). como los característicos de los líquidos fisiológicos (0.Para soluciones diluidas la movilidad en función del potencial Z puede calcularse por medio de un balance de fuerzas sencillo.15M). Concentración de la especie i.Para fuerzas iónicas bajas.2. de tal manera que en equilibrio FK = -FE (11.En ambientes de fuerzas iónicas altas.13) La fuerza eléctrica FE que actúa sobre la partícula es proporcional al campo que actúa sobre ésta.

67T/Í (11.14) en este caso: q\: Carga aparente de la partícula. .16) se obtiene: FE = etrcE y las ecuaciones (11.13) y (11. [coulombio].626 CAPÍTULO 11. e: Constante dieléctrica del medio. m = _£í. qi: Carga correspondiente al campo. y es aplicable cuando la relación de radio de corte a longitud Debye es muy pequeña (rc/X « 1).12). El campo aplicado a la partícula puede ser expresado como: (11.14).15) y (11.15) donde rc es el radio de corte de la partícula y q\ es la carga neta de la partícula en la superficie de corte.16) -— e r2 combinando las ecuaciones (11. (11.17) de tal manera que la movilidad m = v/E está dada por la ecuación conocida como de Hückel. [coulombio].18) (11. r: Distancia entre las cargas.17) conducen a: — 6?r/¿t. ELECTROFORESIS £ rA (11. (11. [Coulombio2/new — m 2 ]. [m].19) Esta movilidad es menor a la esperada si sólo se considera la carga real de la partícula. = 6^E (11. El potencial Z está dado por: (11.

0. Estimar el campo sobre la superficie de un protón utilizando los siguientes datos: 1.5 x 10* V_ m e V_ 1.5 x 10 cm El campo que produce el protón debido a la relación de la carga con la distancia es muy grande.Cuando la capa difusa presenta una longitud intermedia en el rango.2.Cálculo del campo que genera un protón.6 x 10 I9 coulombio r = 31 x 1(T 1 6 10 m new — m coul2 = 9 x 10 Solución: El campo está dado por la ecuación siguiente: E= sustituyendo los datos se tiene: ' ' E = 9 x 10 .01 < -f < 1000 Á . Una batería de 100 V produce un campo de sólo 10 V/cm.1.m' coul2 1..6 x 10~19 (31 x 10-10)2 m 2 £7 = = 1. FUNDAMENTOS 627 Ejemplo 11. Modelo de doble capa: Movilidad en soluciones de concentración intermedia y alta..1.

5 Fuerza Iónica 0. tal y como se representa en la Figura IIA Esta variación ha sido correlacionada utilizando modelos basados e la ecuación de Henry. tambié es función de la relación del radio de corte a la longitud de Debye.4: Variación de la movilidad con el radio de la capa difusa. los modelos predicen una soluci< asintótica donde: (i) = 3/2 de tal manera que: . E decir. m= (11.19). se observa experimentalmente una variación en la movilidad predi cha por la ecuación (11.2Í 67T/I Algunos modelos predicen reducciones en la movilidad de Hückel c hasta 60% en el rango aproximado de 0.6 < Y < 6 A Para relaciones de rc/X » 1.5 .628 CAPÍTULO 11. ELECTROFORESIS 1. la cual establece que la movilidad de la partícul además de ser función del potencial Z y de la fuerza de arrastre.01 10 100 1000 Figura 11.

11.21) que es una movilidad 50% mayor que la predicha por la ecuación de Hückel. existen varios fenómenos que provocan la dispersión de la . Cuando la partícula emigra en dirección opuesta a su carga neta.Fuerza de relajación.5).2. La fuerza de retardamiento se origina por el movimiento de solvente provocado por el movimiento de contraiones de la capa difusa. Sin embargo. se conoce como fuerza de relajación.Fuerza de retardamiento.11. han servido de base para generar diversos modelos empíricos de amplio uso. es decir se obtenga una resolución apropiada.2. A nivel microscópico esta variación de la movilidad ha sido explicada utilizando el modelo de doble capa para proponer otros efectos conocidos como: . Sin embargo. La fuerza opuesta al movimiento de la partícula que se genera. . FUNDAMENTOS 629 m= ef D7T// * 2 m = -^47T/X (11. Los contraiones de la capa difusa tienden a emigrar en dirección opuesta creando un campo que se opone al movimiento de la partícula.3 Fenómenos de Dispersión Cuando se realiza una operación de electroforesis se requiere que los solutos presentes en la solución de interés se separen formando bandas bien definidas. se presenta una distorsión de la capa difusa (Figura 11. generándose un esfuerzo viscoso adicional sobre la superficie de corte de la partícula. Los modelos electrocinéticos en general han presentado dificultades para predecir con exactitud los resultados de las separaciones electroforéticas.

5: Representación esquemática del efecto de relajación. Copyright ©1986. ELECTROFORESIS Carga neta + O Cátodo (-) t Ánodo (+) R E Campo Fuerza de Relajación Figura 11. .630 CAPÍTULO 11. Adaptada de: Rudge y Ladisch. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1986.

Solución: . se desea estimar: a). Difusión En una electroforesis generalmente existe algo de dispersión de la mezcla debida a la difusión molecular.000) y colágeno (PM= 345.000). 1986).El tiempo de doblado del ancho original de la banda de muestra que es de 0.08 era. la desviación estándar de una muestra dispersada sólo por difusión está dada por: a = T/WABt (11.2. en un medio cuya viscosidad es de 0...22) En el caso de proteínas la difusión puede ser estimada empleando la ecuación de Polson (Horstmann y Chase.Dispersión de proteínas. término que engloba tanto los efectos de difusión molecular. D =9Axl " °~nm&r> (1L23) donde: T: Temperatura. Para la electroforesis a 25°C de ovalbiímina (PM= 45. Algunos de estos efectos se describen a continuación. //: Viscosidad de la solución.000). ImG (PM=150. como los efectos microscópicos de mezclado que se agrupan en la llamada difusividad de remolino.001 Kg/m — s. Ejemplo 11.La variación de la dispersión por difusión con el tiempo. MA> Peso molecular del soluto. b). [°K]. FUNDAMENTOS 631 muestra.11. [Kg/m — s]..2. De acuerdo a Jorgenson y Lukacs (Rudge y Ladisch. sin embargo este fenómeno normalmente no es la causa principal de la dispersión. 1989).

038 0. Estos resultados se muestran en f< gráfica en la Figura 11.000 150.027 0.2: Cálculos de dispersión.053 0.106 0.23). En la Tabla 11.632 CAPÍTULO 11. Ejemplo 11.2 se presentan los resultados de los cálculos < dispersión en función del tiempo.25 0.151 0.038 0.1 se presentan los resultados de los cál< de difusividades de acuerdo a la ecuación (11.087 0.00 4.00 2.00 0.093 0. i(h) 0.99 x 1Q-7 Tabla 11.00 3.065 0.123 0. el coeficiente de dispersión disminuye dispersión es menor.120 0.000 0.2.00 Dispersión (cm) Ovalblímina ImG Colágeno 0. Proteína Ovalbúmina ImG Colágeno PM 45.075 0.138 0. b).8 h para doblar el ancho inicial.88 x 10-7 5.27 x 10~7 3. ELECTROFOREí Tabla 11.00 5.062 0.6.23) se puede calcul dispersión.168 a).031 0.50 0.107 0.000 0.1: Cálculo de difusividades de proteínas.130 0.076 0...107 0. En la Tabla 11.000 Difusividad (cm 2 /s) 7.000 345. Ejemplo 11. si la muestra con ImG.046 0.Mediante las ecuaciones (11.054 0.000 0.De acuerdo a los resultados anteriores. Se puede puntualizar que conforme aurr el tamaño de la proteína.2.75 1.22) y (11. muestra contiene ovalblímina el doblado de la longitud de la ban .044 0. ésta tardará alrededor de 1.053 0.

5 1 1.040.160.5 3 3.140.5 4 4.12- 1 0. .5 5 Tiempo (h) Figura 11.080.2.6: Dispersión de proteínas por difusión en electroforesis.02- 0 0.100. FUNDAMENTOS 633 0.060.5 2 2.11. 1) Ovalbúmina 2) ImG 3) Colágeno.

puede provocarse una distorsión en "forma de puntas" de la interfase. Una forma de disminuir el grado de dispersión en una operación intermitente consiste en disminuir el tiempo de operación. Para atenuar este efecto en la interfase delantera la muestra debe presentar una menor movilidad que el bufer. lo que se traduce en el desplazamiento neto de solvente hacia uno de los polos (en dirección opuesta al movimiento electroforético). mientras que en la posterior es conveniente que la movilidad de la muestra sea mayor. Este efecto microscópico puede alterar el patrón de flujo macroscópico dependiendo de la configuración de la celda electroforética. corriente eléctrica se hace pasar a través de un medio con una determinada resistencia parte de la energía se convierte en calor. Efectos Iónicos Regulatorios La diferencia de movilidad entre el soluto de interés y los iones del bufer donde se efectúa la electroforesis. . El bufer puede presentar una menor conductividad que la muestra por efecto de los iones que contiene.634 CAPÍTULO 11. ELECTROFORESlS efectúa en una hora aproximadamente. alterando el desplazamiento de la muestra. Gradientes de Conductividad Si la conductividad de la muestra es mayor que la del bufer. Esta es el resultado del movimiento de la capa difusa de iones en la proximidad de la superficie cargada fija de la celda por acción del campo eléctrico. cuando el campo se incrementa arriba de un valor crítico. Electroósmosis Otra causa de dispersión en una operación electroforetica es la electroósmosis. puede generar dispersión durante la electroforesis. Sobrecalentamiento: Efectos Térmicos Cuando una.

Entre menor sea el valor Ra menor es el efecto de la convección natural. [L/t2]. El grado de convección se caracteriza por el número adimensional de Rayleigh Ra el cual está dado por: fía \¿±z donde: /: Longitud característica de la geometría del aparato de electroforesis (en una celda es el espesor del gel).24) ésto se puede lograr de varias formas. los gradientes de temperatura pueden originar movimientos convectivos libres debido a la acción de la gravedad sobre los gradientes de densidad que se originan. [L].2.: Viscosidad del medio. Esta es la principal causa de mezclado en electroforesis. Esto tiende a disminuir la convección al disminuir la longitud característica /. dañar el gel o estimular la evaporación de solvente. En equipos industriales que operan en forma continua se utilizan membranas porosas para separar regiones de electroforesis de diferente pH. De acuerdo con la ecuación (11. g: Aceleración de la gravedad. Sobrecalentamiento: Efecto de Convección Libre Si la electroforesis se desarrolla en un medio líquido en ausencia del gel de soporte. La existencia de gradientes térmicos puede desnaturalizar solutos lábiles. [M/L4]. La más empleada a nivel laboratorio es el incremento de la viscosidad mediante el uso de geles de soporte. FUNDAMENTOS 635 fenómeno conocido como efecto de Joule. . [L2/t]. : Gradiente de densidad en la dirección z. a: Difusividad térmica del medio.11. ¡j. de tal manera que la cantidad de muestra está limitada por este espesor. [M/L — t]. En una operación electroforética el calor generado es proporcional al cuadrado del campo aplicado y al cuadrado del espesor del gel.

1989). Los geles de agarosa tienen una estructura porosa altamente hidratada con poca carga que asemeja un medio líquido. log(PM) = A. Los geles de poliacrilamida están formados de polímeros más entrecruzados que producen poros más pequeños. A partir de 1959 fueron introducidos los geles de poliacrilamida (PAG de sus siglas en inglés) y de agarosa. Este tipo de gel es muy utilizado en análisis de ácidos nucleicos. Las cadenas desnaturalizadas migran a una velocidad proporcional al logaritmo de su peso molecular PM.636 CAPÍTULO 11.4 Medios y Modos de la Electroforesis La electroforesis ha evolucionado en forma considerable a partir de los trabajos pioneros de Ame Tiselius en 1937 y el desarrollo de la teoría de los electrolitos fuertes de Debye y Hückel en 1923. A mediados de los cuarenta fue introducido el uso de geles cuyo comportamiento es superior a los materiales anteriores por su menor tamaño de poro y menor carga superficial. Una variante de la técnica PAGE es la PAGE-SDS. En 1939 fueron introducidos los primeros materiales anticonvectivos como: papel filtro. . Este gel es muy empleado en el análisis electroforético de proteínas. técnica conocida como PAGE (de las siglas en inglés de electroforesis en gel de poliacrilamida). fibra de vidrio y almidón granulado. 1990). Medios Anticonvectivos Se han utilizado diferentes medios para realizar las operaciones electroforéticas. Inicialmente éstas se realizaban en medio líquido en celdas especiales (Lehninger. Actualmente existen diferentes medios y formas para efectuar una separación electroforética (Ivory.Bm donde A y B son constantes y m es la movilidad.2. En ésta se agrega sulfato de dodecil sodio a la solución amortiguadora que provoca la desnaturalización de las proteínas. ELECTROFORESIS 11.

La resolución que se puede lograr considerando sólo estos parámetros ha sido mejorada imponiendo a los sistemas restricciones adicionales como el uso de geles porosos que incrementan la separación por filtración o la utilización de gradientes de pH que orientan a las especies de acuerdo a su punto isoeléctrico.2. La separación completa de los componentes de la mezcla no puede ser alcanzada mediante este tipo de electroforesis. Electroforesis de interfase móvil. . Al aplicarse el campo eléctrico cada proteína migra. posteriormente se añade una columna de solución con bufer. de la muestra a la zona de bufer. FUNDAMENTOS Modos de la Electroforesis 637 En un proceso electroforético la velocidad de migración de las especies.La electroforesis de interfase móvil o electroforesis libre fue desarrollada por Ame Tiselius en 1937.7). cuya clasificación es difícil. ¡3 y 7. pero que en términos generales se pueden dividir en (Bier et al.Enfoque isoeléctrico (IEF). 1983): . La proteína más rápida se coloca al inicio del patrón de migración en el brazo ascendente y la más lenta al final del brazo descendente de la celda. utilizando el índice de refracción. depende de su carga. formando una interfase. Este tipo de modificaciones ha dado origen a una amplia gama de técnicas electroforéticas analíticas y preparativas. .[1.Isotacoforesis (ITP). tamaño y forma. logrando por primera vez resolver las globulinas sanguíneas en los tipos a. y de las propiedades del medio. . sólo el soluto más rápido puede obtenerse en forma pura. Esta técnica utiliza una celda en forma de tubo en U (Figura 11.. Cada banda se detecta en función de la velocidad de migración de la proteína particular. Inicialmente se coloca dentro de la celda la solución que contiene la mezcla proteica en el bufer adecuado. .Electroforesis de zona (ZE).Electroforesis de interfase móvil (MBE).

ELECTROFORESIS Buffer \ Frontera Ascendente Frontera Inicial Frontera Descendente Figura 11. Electroforesis de interfase móvil.7: Representación esquemática de la celda de Tieselius. .638 CAPÍTULO 11.

En los desarrollos recientes la electroforesis de interfase móvil actúa como una celda donde la banda de muestra aplicada es semi-infinita. Tomada de: Ivory. Figura 11.2. FUNDAMENTOS Compartimiento . en un orden impuesto por sus moví- . entonces es posible lograr la su resolución completa.X del Ánodo 639 Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No. formando una banda finita. Electroforesis de zona.En la electroforesis de zona descrita al inicio de la sección 11. de Componentes Fase No. El resto de la celda se carga con electrolito rápido que permanezca siempre al frente de la migración y permita disminuir la dispersión de la muestra (Figura 11.. (antes y después). Isotacoforesis. la muestra es pequeña y diluida. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. En estado estacionario todos los constituyentes se mueven a la misma velocidad. Copyright ©1990. 1990. Electrolito de Alta Movilidad 1-5 1-4 1-3 1-2\ / 1 No.En una separación por isotacoforesis la muestra se inserta entre un electrolito rápido y uno lento (Figura 11. de tal manera que sólo pueden separarse solutos de igual carga.9).8: Electroforesis de interfase móvil de cinco componentes iónicos.2. Para solutos con carga positiva deberá colocarse en el ánodo.8). Este tipo de electroforesis puede ser empleada para resolver mezclas de cargas diferentes.11. Todos los derechos reservados. La colocación de la muestra depende del polo hacia al que va migrar..

. Copyright ©1990. En el medio continuo de pH las moléculas como las proteínas se ordenan conforme a su punto isoeléctrico.9: Isotacoforesis de cinco especies iónicas(antes y después). en la Tabla 11. 5 5 Í4l '—' 4 4 HFl '—' 3 3 2 Un '—' 2 \ / m — 1 1 Electrolito de Alta Movilidad Fase No. ELECTROFORESIS Electrolito de Baja Movilidad Electrolito de Alta Movilidad Frontera de Fase No. lidades. Enfoque isoeléctrico.10). Figura 11. mientras que las otras operaciones son controladas por la velocidad de transporte.3 Equipos Actualmente existe un buen número de equipos para realizar electroforesis a escala preparativa. 11.3 se presentan las principales . 1990. es decir al migrar llegan a un punto donde su carga neta es cero y por lo tanto su movilidad es nula. con la ventaja de que cada banda contiene sólo un tipo de electrolito (el ancho de la banda es una medida de la concentración de la especie en la muestra original).640 CAPÍTULO 11. Tomada de: Ivory. El enfoque isoeléctrico es una operación gobernada por el equilibrio.Cuando la separación electroforética es por medio de enfoque isoeléctrico (IEF) se requiere un gradiente de priven el medio donde se realiza la electroforesis (Figura 11. Electrolito de Baja |II 5 Movilidad ¡ Componente No. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.

3.11. Tomada de: Ivory. • Equipos electrocronialográíicos.10: Enfoque isoeléctrico de solutos polianfolíticos (antes y después). Copyright ©1990. A nivel laboratorio y en algunos equipos a escala preparativa. Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. . 1990. características de algunos de ellos. Para evitar el uso de geles se han diseñado equipos donde la electroforesis se realiza en medios líquidos. Todos los derechos reservados. la forma que se ha empleado para minimizar el problema de la dispersión de la muestra por convección. y donde la longitud característica / del número de Rayleigh se reduce empleando películas delgadas o mediante el uso de membranas. debido que al finalizar la operación se requiere recortar las regiones de gel donde se localizan las bandas y extraer por electroelución o algún otro método los solutos de interés. Estas técnicas han sido caracterizadas como tediosas y costosas. Otro tipo de equipos combina la electroforesis con la cromatografía para eficientar las separaciones. EQUIPOS 641 Ánodo /"p\ ^ ^ f\ \-S Cátodo Ánodo pl: Punto Isoeléctrico Cátodo Figura 11. • Equipos de flujo libre con recirculación. ha sido el uso de geles como medios de soporte. De manera general los diversos equipos de electroforesis existentes se pueden dividir en tres tipos: • Equipos de flujo libre.

Si 35 Rápido Si 20 Rápido 30 Rápido Reproducida con el permiso de Nature Publishing Co.3: Características de algunos equipos de electroforesis. Detector 15. ELECTROFORESIS Tabla 11. Operación 7.2-500 mg/día Continuo 25 X 10 ceí/mí 500 X 106 ce///» Si 6 Continuo 5 X 10 ceí/mí 100 x 106 ce///i Si 6 Si No U V / V i s . Si No SI 10 cm 100-300 V/cm 12. Introducción 4. Variable Si 90 Lento U V / V i s Var. Producción típica 13. Tipo 1. Campo Típico 10.000 Si No No No No Si No No Intermitente Si Si No No Película con recirc. Tamaño típico de la muestra 12. Técnicas Electroenfoque SDS-PAGE PAGE A garosa Celes Isotacoforesis Zona Escalón de campo 6. Película con flujo libre Bender y Hobein Elphor VaP 22 1987 80. 1991. .000 Si No No No No Si Si Si Continua No No Si No Película con flujo libre Hirschmann AGE 710 1986 140.642 CAPÍTULO 11. Todos los derecho: reservados.000 Si No No No No Si No No Intermitente No Si Si No Rectangular 250 mm 2 Rectangular 60 mm 4 cm 100-150 V/cm Anular 627 mm 2 Rectangular 150 mm 2 4 cm 250-375 V/cm 2h \ \ mg-g proteína 5-500 mg/corr. 5. Colector de fracciones Número de fracciones Proceso de colección Adaptada de: Eby. Compañía 2. Dimensión de U celda Geometría Sección transversal Longitud de separación 9. Enfriamiento 14. Estabilización del flujo Rotación Membranas Película Gel 8.5 cm 50-100 V/cm 3-5 h 100 pg . Copyright ©1991. Tiempo de operación típico 11. Precio dU. P r o t e i n Techs RF3 1990 30. Nombre 3.000 No No No No No No Si No Continua No No Si No Tipo tambor Bio-Rad Rotofor Prep IEF 1987 7.1 g 0.

mientras que el exterior gira a velocidades hasta de 150 rpm. EQUIPOS 643 11. La estabilización de los flujos se logra empleando distancias pequeñas de migración o estabilización rotacional. .12).Tipo anular. Uno de los usos principales de este tipo de equipos es en la separación de células y virus. .11). Película Delgada Los equipos de electroforesis de película delgada han sido estudiados desde los años cincuenta (Hamel y Hunter. En las partes laterales de este arreglo se sitúan los electrodos en forma de placas. Existen dos arreglos básicos de este tipo de equipo: . La muestra emigra horizontalmente conforme pasa por la cámara.Tipo película delgada. El calor generado es removido por medio de refrigerantes que enfrían las paredes laterales. En tales sistemas se inyecta una corriente continua y puntual de muestra sobre una película de bufer que se mueve verticalmente en flujo laminar entre dos placas (Figura 11. En estos sistemas el cilindro interno es fijo y funciona como cátodo. Electroforesis Anular La electroforesis de flujo libre también se ha conducido en arreglos anulares basados en el diseño de Philpot-Harwell (Figura 11. Este movimiento permite neutralizar los efectos convectivos radiales. el medio no se recircula.3.1 Equipos de Flujo Libre En los equipos de flujo libre a diferencia de los equipos que presentan recirculación. Los solutos forman bandas discretas de acuerdo a sus movilidades electroforáticas. partículas sub-celulares y componentes de membrana. y son eluídos continuamente por el fondo de la cámara y colectados por medio de una bomba de canal múltiple. La muestra y el bufer son inyectados en la base del anillo y se mueven axialmente hacia el colector múltiple situado en la parte superior.11. 1990).3.

Todos los derechos reservados.644 CAPÍTULO 11. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. . Tomada de: Gobie y Ivory. ELECTROFORESIS z (lateral) ' y (transversal) x (axial) Alimentación Buffer Electrodos Figura 11. 1986. Copyright ©1986.11: Esquema de un equipo de electroforesis de flujo continuo en una celda de electroforesis.

.11. Todos los derechos reservados. Copyright ©1990. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1990.3. Tomada de: Hamel y Hunter.12: Esquema de un equipo de flujo libre en un arreglo anular. EQUIPOS 645 Fracciones Recuperadas Anillos colectores de fracciones Campo eléctrico transverso Anillo de carga de muestras Entrada del Buffer Figura 11.

Existen diferentes tipos de arreglos para estos equipos como: . y gira a 1 j-pni.13: Celda de electroforesis tipo tambor rotatorio.13) consta de una cámara cilíndric dividida en 20 compartimientos por medio de 19 discos de membrana de poliéster. . con poros de 10 /i. A) Entrada y salida de refrigerante B) Ánodo C) Cámara de electroenfoque D) Cátodo E) Brazo de enfriamiento F) Venteo G) Cubierta.3. ELECTROFORESIS Figura 11.Los equipos de película delgada con recirculación desplazada.646 CAPÍTULO 11. BioRad 11.La celda tipo tambor. de tal maner que la operación es conocida como enfoque isoeléctrico con recircí lación (RIEF de sus siglas en inglés).Los equipos de película delgada con recirculación. . La rotación de la cámara y la membranas permiten enfocar apropiadamente las zonas. lo cual se efectúa por medio de vacío. Cada cámar posee un'a posición para alimentar la muestra y una para descargar!. . Celda Tipo Tambor La celda tipo tambor (Figura 11.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación En los equipos de flujo libre con recirculación el medio líquido donde se efectúa la electroforesis se recircula continuamente. Este tipo de equipo es operado con gradientes de pH.

es la electroforesis en película delgada con recirculación desplazada. El enfriamiento se realiza por medio de un tubo de cerámica por el cual fluye el líquido de enfriamiento por el interior del tambor. de tal manera que su migración neta es alterada. En este sistema la muestra es inyectada continuamente en un canal de la celda y reinyectada en forma desplazada. Película Delgada con Recirculación Desplazada Una variante del arreglo físico anterior empleado en electroforesis de zona (Figura 11.11. La operación se efectúa utilizando un gradiente de pH sobre la cámara y sólo el 6% de la muestra permanece en la cámara en un tiempo dado. cuando este desplazamiento sea lo suficientemente grande.15).3 Equipos Electrocromatográficos Otra alternativa para disminuir los problemas convectivos en la electroforesis son los sistemas que utilizan medios con partículas como las . 11. Película Delgada con Recirculación Una variante de los equipos de enfoque isoeléctrico con recirculación separa físicamente las funciones de enfriamiento y estabilización del fluido (Figura 11. EQUIPOS 647 El campo eléctrico se provee por medio de dos electrodos situados en los extremos de la cámara.3. En este arreglo la solución que va a fraccionarse es recirculada continuamente entre la celda de canales múltiples donde se realiza la electroforesis y un intercambiador de calor de canales múltiples.3. El flujo en la celda es laminar ya que está dividida por membranas formando canales de flujo muy delgados.14). Los solutos más lentos tenderán a migrar en el sentido del desplazamiento de la alimentación. y en dirección contraria cuando el soluto tenga una movilidad tal que logre tener un desplazamiento mayor que el provocado por el movimiento de la recirculación. Típicamente una separación se realiza después de cientos de ciclos en aproximadamente dos horas.

ELECTROFORESIS Figura 11. . Todos los derechos reservados. 1986. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1) Bomba 2) Celda de enfoque 3) Intercambiado! 1 4) Monitor de pH 5) Monitor UV 6) Control de la bomba 7) Interfase de datos 8) Centro de carga 9) Control UV Adaptado de: Bier.648 CAPÍTULO U. Copyright ©1986.14: Esquema de un equipo electroforético con recirculación.

La parte superior de la columna se empaca .15: Esquema de un equipo electroforético de película delgada con recirculación desplazada. y se eluye mientras el lecho rota. Su desarrollo actual es a nivel de prototipos y se pueden mencionar dos tipos: . Copyright ©1990. la muestra se alimenta en forma continua en un punto de un lecho anular. Tomada de: Ivory. Todos los derechos reservados. EQUIPOS 649 Alimentación uuuuuu Purga Componente de Baja Movilidad Sección de cambio Componente de Alta Movilidad Figura 11. Electrocromatografía de Efectos Opuestos En la electroforesis cromatográfica de efectos opuestos (CACE de sus siglas en inglés). que presenta dos secciones de diferente resolución (Figura 11. . Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc.16).Los equipos de Electrocromatografía anular rotativa continua.Los equipos de electrocromatografía de efectos opuestos. El campo es aplicado axialmente. Electrocromatografía Anular Rotativa Continua En los equipos de electrocromatografía anular rotativa continua (CRAE de sus siglas en inglés) (Figura 11.3. y se desarrolla en una columna empacada de cromatografía por pxclusión. usadas en cromatografía. 1990. el campo eléctrico es antiparalelo al movimiento convectivo forzado.11.17).

Copyright ©1990.16: Esquema de un equipo de electrocromatografía anular rotativa continua. . ELECTROFORESIS Alimentación Multicomponente V= reo Figura 11.650 CA PíTVLO 11. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. Todos los derechos reservados. Tomada de: Hamel y Hunter. 1990.

Con un manejo adecuado de la intensidad del campo.17: Electrocromatografía de efectos opuestos. de tal manera que éste se mueva más rápidamente en la parte superior. EQUIPOS 651 Compartimiento del Buffer Anión ico Tapón de Poliacrilamida Entrada del Bufler acarreador Lecho de Gel de Exclusión Zona de Acumulación del producto • Flujo del Buffer Migración Electroforética Movimiento í i Lecho de Gel de Inclusión Tapón de Poliacrilamida WW - ^ Salida del Buffer acarreador Compartimiento del Buffer Catiónico Figura 11. . pero su productividad está limitada por el calentamiento y la caída de presión.1L3. Todos los derechos reservados. Este arreglo produce separaciones de alta pureza y concentración. el soluto de interés puede tener un movimiento neto siempre hacia el centro de la columna y acumularse en esa región. Copyright ©1990. Reproducida con el permiso de la American Chemical Society. 1990. Tomada de: Hamel y Hunter. con gel excluyente del soluto de interés y la parte inferior con gel incluyente. mientras que los contaminantes salen por alguno de los extremos.

652

CAPÍTULO U.

ELECTROFORESiS

11.4

Diseño

El tratamiento de la electroforesis al igual que las columnas cromatográficas puede ser abordado empleando: • La teoría de platos. • La teoría cinética.

11.4.1

Teoría de Platos

La teoría de platos es útil para comparar el comportamiento de un mismo equipo para diferentes aplicaciones, y entre la misma aplicación en equipos diferentes. Como se estableció anteriormente la desviación estándar en equipos electroforéticos cuya principal causa de dispersión es la difusión molecular está dada por: (11.25) donde: D: Dispersión axial. [L2/t]. t: Tiempo. [i\. a: Desviación estándar. [L]. La ecuación (11.25) se puede expresar en términos de parámetros electroforéticos introduciendo la expresión: u = rnE = m — donde: v: Velocidad del soluto. [L/t]. m: movilidad. [L2/ Voltio — t}. E: Campo. [Voltio/ L}. (11.26)

11.4. DISEÑO V: Voltaje. [Voltio]. L: Longitud de la celda. [L] dimensionalmente: t=-

653

v

(11.27)

entonces se combinan las ecuaciones (11.25), (11.26) y (11.27) para obtener:

De acuerdo a la teoría de platos, la eficiencia de la separación puede definirse como la dispersión por unidad de longitud,
2

~ LJ Las ecuaciones (11.28) y (11.29) conducen a:

(11.29)

1DL HETP=—— mV
como:

(11.30)

L = (HETP)(N)
entonces

(11.31)

(11-32) De estos resultados es importante notar que TV es independiente de L. Asimismo, /V puede incrementarse aumentando V. Por otro lado, HETP aumenta al aumentar L. Esto implica que las distancias cortas de migración son las más eficientes para la separación. La resolución de dos componentes del sistema cuando su coeficiente de dispersión es el mismo está dado por (Rudge y Ladisch, 1986):

R=4 V 2D

654

CAPÍTULO 11. ELECTROFORESIS
donde mi y m<¿ son las movilidades del soluto 1 y 2, respectivamente

y:'
771 =

mi + m 2 2

De acuerdo a la expresión (11.33) el voltaje incrementa la resolución. Ejemplo 11.3.- Resolución de una mezcla de proteínas. Se desea separar dos enzimas mediante una electroforesis en gel a 4°C. El coeficiente de dispersión axial es de 2 x 10~7 cm2/s. La movilidad es de 3.38 x 1(T5 cm?/V - s y 1.33 x 10~5 crn2/V - s, respectivamente. Para realizar la separación se utiliza una celda de 2 cm donde se aplica un campo de 1.8 V/cm por un lapso de 7.5 h. Se pide estimar: a) La distancia que viaja cada soluto. b) La eficiencia de la separación de cada soluto. c) La resolución de la separación. Solución: a).- La distancia puede ser calculada mediante la expresión

L = vt — mEt
de tal manera que:

= 3.38 x 10~5 -f^— x 1.8 — x 7.5 h x V —s cm
=
1.64 cm

cm

V

.

3600 s

y,
¿2 =

1.33 x 10-* .,cm' x 1.8 -ü x 7.5 h x V — cm cm

L2

= 0.64 cm

11.4. DISEÑO La separación entre los solutos es:
LI — Z/2 = 1 era

655

b).- De acuerdo a la ecuación (11.30),

HETP = (HETPh
(HETP)i

mE
2 (2 x 10~7 22!)

=

3.38 x 10-5 gal x U

= 6.57 x 1(T3 era
2 (2 x 10-7 ss¿\ 2 i/ 1.33 x io-5 ^ x 1.8 £

(HETP)2 (HETP)2

= =

1.67 x 10~2 era

c) Utilizando la ecuación (11.33) se puede calcular la resolución. Primero es necesario calcular la movilidad promedio,
I | I j
ífe,

ra

_ _
m

4 ¥

i

=

mi + = 2 (3.38 + 1.33) x 10-5 &£.
¿J

2

-

2

ra = 2.334 x 1(T5 ^~V —s de tal manera que, 1 /2.334 x 10~5 ^ x 1.8 ^7 x 2cra
4 \ 2 x 2 x 10-7 '

(3.38- 1.33) x 10-5 f^-2

2.334 x 10-5

R = 3.18

656

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESIS

11.4.2

Teoría Cinética

En un proceso electroforético la velocidad de migración depende de la carga, tamaño y forma de la partícula de interés, así como de las propiedades del medio. La resolución puede ser incrementada mediante gradientes de pH, filtración molecular, o modificaciones del flujo. Esto a dado origen a una diversidad de procedimientos para optimizar las separaciones electroforéticas. Actualmente se cuenta con un teoría unificada para tratar los diversos modos electroforéticos (ZE, MB, ITF e IEF) (Bier ti a/, 1983), lo cual demuestra que las ecuaciones que rigen estos procesos son idénticas. Las diferencias aparentes surgen de las diferentes condiciones iniciales y de frontera de cada caso. A continuación se presentan algunos modelos particulares.
Película Delgada con Alimentación Continua

En el caso de la electroforesis en película delgada con alimentación continua, el soluto está sujeto a fuerzas difusivas, convectivas y electroosmóticas, que determinan su patrón de elución. En estado estacionario y para E constante, el balance de masa de soluto en este tipo de arreglos es:
de de de
d^c

donde vx es la velocidad parabólica axial y vz es la velocidad osmótica lateral. S0(x) es un término que describe la distribución del flujo de soluto inyectado. La ecuación (11.34) es una ecuación difusiva, convectiva tridimensional, cuya forma más sencilla es su solución asintótica (Gobie y Ivory, 1986).
Electrocromatografía

En el caso de electrocromatografía en columna si se supone que mE es independiente de la concentración, en ausencia de electroósmosis el modelo empleado es:

11.5. SUMARIO

657

rearreglando,

01.36)
donde R es la acumulación de soluto en la fase sólida y vx es la velocidad del flujo convectivo. Este resultado indica que las soluciones a la ecuación de diseño de las columnas cromatográficas, pueden ser aplicadas a la electrocromatografía, sustituyendo vx por vx -f mE.

11.5

Sumario

La electroforesis es una operación que permite la purificación de solutos por la acción de un campo eléctrico. Uno de los problemas que se presenta normalmente en las operaciones electrofcréticas es la dispersión que sufre la muestra conforme la operación se desarrolla. Para abordar esta dificultad se han desarrollado diversas formas y medios para efectuar la operación, lo cual se ha traducido en una variedad de equipos disponibles a escala preparativa. El diseño de los equipos de electroforesis se realiza mediante enfoques similares a los utilizados en cromatografía de columna, y actualmente su desarrollo es incipiente y basado fuertemente en las pruebas de laboratorio.

658

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORES1S

11.6

Problemas

11.1.- La movilidad relativa de /2-galactosidasa respecto a la de citocromo c en un gel de PAGE-SDS es de 0.2, mientras que la de actina es de 0.6. Los pesos moleculares de estas proteínas son de 130,000 para la /3-galactosidasa y de 45,000 para la actina (Condeelis, 1977). Estimar la movilidad relativa de ASB (albúmina de suero de bovino) en el mismo gel si su peso molecular es de 68,000. Resp. 0.42 11.2 La electroforesis capilar de alta resolución (HPCE) es una poderosa técnica analítica que maneja muestras menores de 1 ¡j,g (Frenz y Hancok, 1991). Estimar el número de platos de una columna de HPCE donde la movilidad del soluto es de 10~8 m 2 /V — s, el voltaje aplicado es de 30 KV y el coeficiente de dispersión de 10~10 m2/s. Resp. 1.5 x 106 platos. 11.3.- Se desea separar dos proteínas en una celda electroforética aplicando un gradiente de potencial de 1.2 V/cm. Bajo las condiciones de la electroforesis la movilidad de las proteínas es de —1.2 x 10~4 y 2.1 x 10~4 cm2/V — 5, respectivamente. Estimar el tiempo de separación de estas proteínas si inicialmente se colocan formando una banda de 0.4 cm de espesor. Resp. 0.51 h 11.4.- La movilidad electroforética de las células de glóbulos rojos humanos es independiente de las razas, edad, sexo y varios otros factores. Esta propiedad permite tomar a este tipo de células como un patrón electroforético (Brinton y Lauffer, 1959). Estimar la movilidad de glóbulos rojos en un medio M/15 de fosfatos a pH=7.4, si la viscosidad del medio puede tomarse como la del agua, el potencial Z es de 0.0168 Voltios y la constante dieléctrica es de 9.8 x 10~9 coulombio'2/N - m2. Resp. 1.31 (¿m — cm/V — s

11.7. BIBLIOGRAFÍA

659

11.7

Bibliografía

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660

CAPÍTULO 11.

ELECTROFORESlS

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Parte V Operaciones de Acabado

663

Las operaciones finales en un proceso de bioseparación son las operaciones de acabado del producto. Estas operaciones permiten incrementar la pureza del producto, facilitar su manejo y mejorar su apariencia. En esta parte, se revisan dos de las operaciones de acabado más utilizadas en los procesos biotecnológicos. En el capítulo 12, se trata la operación de cristalización que es muy empleada tanto en la obtención de productos biotecnológicos tradicionales como los antibióticos, como en la obtención de productos provenientes de la tecnología del r-DNA como las proteínas terapéuticas. En el capítulo 13 se presenta la operación de secado la cual se utiliza como fase terminal de los procesos de cristalización, o bien para el secado de caldos en la producción masiva de algunos productos.

Capítulo 12 Cristalización
12.1 Introducción

La operación de cristalización consiste en separar un soluto de una solución mediante la formación de cristales de éste en el seno de la solución. Una vez formados los cristales se separan de la solución obteniéndose el soluto con un alto grado de pureza. Durante el proceso de cristalización los cristales deben formarse primero y luego crecer. Al fenómeno de formación de pequeños cristales se le llama nucleación y a la formación capa por capa del cristal se le llama crecimiento. La sobresaturación es la fuerza impulsora tanto de la nucleación como del crecimiento de los cristales. Si la solución sólo está saturada los cristales no se transforman ni crecen, mientras que si está subsaturada éstos tienden a disolverse. La cristalización es ampliamente utilizada a nivel industrial para recuperar sales como cloruro de sodio y sulfato de amonio a partir de soluciones acuosas. Algunas sustancias orgánicas como la sacarosa y la glucosa también son obtenidas mediante procesos que involucran una operación de cristalización. Varios productos biotecnológicos de uso masivo como algunos antibióticos y ácidos orgánicos, así como algunos productos terapéuticos, son comercializados en forma de cristales. Esta diversidad de procesos se traduce en una gran variabilidad en la capacidad de los cristalizadores
665

666

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

industriales que oscila de gramos a cientos de toneladas por día. La cristalización es una operación ampliamente utilizada en los procesos biotecnológicos debido a que ofrece las siguientes ventajas: - Se puede obtener en una sola etapa un producto de una pureza de hasta un 99 %. - Se puede controlar la cristalización de tal manera que se produzcan cristales uniformes que faciliten su manejo, empaque y almacenamiento. - La cristalización mejora la apariencia del producto para su comercialización. - Es una operación que puede llevarse a cabo a temperaturas moderadas. Frecuentemente la operación de cristalización va acompañada de un lavado de los cristales en un equipo de separación sólido-líquido y de un secado final, en un arreglo como el mostrado en la Figura 12.1. El diseño apropiado del cristalizador es esencial en el funcionamiento de todo el arreglo anterior debido a que el tamaño de los cristales y la concentración de estos en la solución de salida, son determinados en gran medida en la operación de cristalización; a su vez estos parámetros determinan el diseño del separador sólido-líquido y del secador. La cristalización es en gran medida un arte mas que una ciencia; sin embargo, el conocimiento actual de los mecanismos de formación y crecimiento de los cristales, y de la fuerza impulsora de éstos, la sobresaturación, permite abordar el crecimiento de cristales de una manera más científica. La estrategia para el diseño de cristalizadores comprende el establecimiento de las relaciones de equilibrio, la forma de operar del cristalizador (el método para generar la sobresaturación) y el estilo de cristalizador que se va emplear. Una vez obtenido el diseño conceptual del cristalizador, el problema de diseño restante consiste en determinar el diseño funcional que permita satisfacer los requerimientos de tamaño de cristal mediante el estudio cinético del sistema (Figura 12.2).

12.1.

INTRODUCCIÓN

667

Alimentación -

Solvente de lavado

Fase

-soiwnt*

., .. H-Soluto disiMlto liquida 1-impur.as

Solvente

Producto seco

Figura 12.1: Esquema de un sistema de cristalización. Adaptada de: Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados.

668

CAPÍTULO 12.

CRISTALIZACIÓN

Equilibrio - Selección del solventa - Sobresaturación

Modos de Operación - Generación de sobresaturación -Presión - Temperatura - Composición

Tipo de Cristalizador - Flujo de vapor - Presión de operación -Tratamiento déla suspensión -Tamaño del producto

Cinética Diseño Funcional -Diámetro •Tiempo de residencia -Velocidad de circulación -Materiales -Equipo auxiliar

Figura 12.2: Estrategia de diseño de un cristalizador. Adaptada de Moyers y Rousseau, 1987.
Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. Todos los derecho reservados.

2.2. FUNDAMENTOS

669

Para abordar los aspectos relacionados con la cristalización en la ección 12.2 de este capítulo se revisan los fundamentos de la cristaliación: el equilibrio, los modos como se puede efectuar una operación le cristalización y la cinética de la cristalización. En la sección 12.3 e describen los equipos de cristalización más empleados. El diseño de :ristalizadores se presenta en la sección 12.4.

12.2

Fundamentos

Para evaluar el uso de la cristalización como alternativa para la purificación de un producto es necesario contar con determinada información básica relacionada con el producto y sus soluciones como: • Tipo de cristales que forma el producto. • Pureza de los cristales que forma el producto. • Equilibrio: Solubilidad y sobresaturación de soluciones del soluto en agua u otro solvente. • Modos de operación posibles para generar la sobresaturación de la solución del soluto. • Cinética: Velocidad con que se originan (nucleación) y crecen los cristales en la solución. • Distribución de tamaños en poblaciones de los cristales.

12.2.1

Tipos de Cristales

Un cristal es un sólido compuesto por átomos, iones o moléculas dispuestos en un arreglo tridimensional ordenado y periódico, o retícula espacial. La distancia entre los átomos del cristal de cualquier material es constante y característica de dicho material. Los ángulos entre las caras de los cristales también son característicos y dan origen a cinco tipos básicos de cristales y a siete sistemas cristalográficos. En el

CRISTALIZACIÓN sistema más sencillo. Desde el punto de vista industrial el término "habitat del cristal" se refiere a los tamaños relativos de las caras del cristal. normalmente después de la separación de los cristales de la solución. > masa de impureza B en el producto masa de impureza B en la fase liquida no (12.670 CAPÍTULO 12. Los cristales esféricos son los más fáciles de manejar. ancho y alto) como los tres ángulos característicos son iguales. hexagonal monoclínico. ortorrómbico. . los cristales en forma de disco son difíciles de lavar durante su centrifugación y difíciles de filtrar. de acuerdo a la siguiente ecuación: ^=fi donde: ( 12J ) masa de soluto A en el producto masa de soluto A en la f a s e liquida de manera similar para la impureza B. triclínico y trigonal. 12. lo que hace necesario lavar los cristales. El habitat de un cristal es de gran importancia: los cristales largos como agujas se rompen muy fácilmente durante su centrifugación y secado. los cristales formados sólo contienen un componente alcanzado purezas hasta de 99. el sistema cristalográfico cúbico.2. Además de este tipo de impureza. tanto las distancias características (largo.2 Pureza de los Cristales La mayoría de las soluciones cuando forman cristales a velocidades de crecimiento moderadas y a condiciones constantes.8 %. parte de la solución queda adherida a la superficie del cristal. Las impurezas de los cristales generalmente son debidas al atrapamiento de líquido en el cristal en pequeñas bolsas u oclusiones. La separación alcanzada en una cristalización puede ser caracterizada mediante la distribucción del soluto y las impurezas entre las fases. Otros tipos de sistemas difieren de este comportamiento originando los sistemas tetragonal.

Las curvas de solubilidad representan la solubilidad de soluciones saturadas a diferentes temperaturas. y consecuencia de la igualación de sus potenciales químicos.3). 12. . Los datos experimentales de equilibrio sirven de base para la evaluación de las diversas opciones que existen para llevar a cabo un proceso de cristalización ya que permiten entre otras cosas: .Establecer el rango de temperatura y presión de operación.Conocer la concentración del líquido de salida del cristalizador.2. FUNDAMENTOS 671 El grado de separación o selectividad del proceso es más efectivo conforme (3 aumenta.3 se pueden describir algunos comportamientos generales de la solubilidad de las sustancias en función de la temperatura. En estas curvas la solubilidad se expresa comúnmente en porciento de peso de soluto a peso de solvente. . . de las condiciones de temperatura y presión a las que se realice la cristalización.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación Solubilidad Las relaciones de equilibrio para los sistemas de cristalización se presentan en forma de curvas de solubilidad (Figura 12. El factor de cristalización E (análogo al factor de extracción) depende de la naturaleza del sistema solvente-solutoimpurezas. . Esta solubilidad es la máxima que puede alcanzar la solución en forma termodinámicamente estable. La saturación es resultado del equilibrio entre la fase sólida y la fase líquida.Determinar si el sólido que se cristaliza sólo contiene el soluto de interés.2.Seleccionar el solvente.Determinar la recuperación máxima posible de la operación. y del grado de saturación (sobresaturación) con que se realice la operación.12. Con ayuda de la Figura 12. .

.3: Curva de solubilidad. 1988. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1988. Todos los derech reservados. Tomada de: Belter ti al.672 CAPÍTULO 12. CRISTALIZACIÓN 150 h Glutamato Monosódico % peso Acido Adípico 90 Temperatura °C Figura 12.

Los datos experimentales se ajustaron a la recta dada por: S= 146. FUNDAMENTOS 673 . Fracción mol de soluto en la saturación. La solubilidad de 1-serina también fue obtenida a partir de la teoría de las soluciones ideales que es aplicable a sistemas donde existe similitud química entre el soluto y el solvente. Se determinó la solubilidad de 1-serina (Charmolue y Rousseau. . Ejemplo 12. pero no es factible obtener cristales de hexametilentetramina por este mismo método. Tm: Temperatura de fusión en grados Kelvin.12.Algunas sustancias como el ácido adípico y el glutamato monosódico muestran una gran dependencia de su solubilidad con la temperatura. . El conocimiento del comportamiento de la solubilidad de una sustancia es básico en la selección del modo para realizar su cristalización: Es factible obtener cristales de ácido adípico por enfriamiento de una solución de éste.1. A//^: Entalpia de fusión en el punto de fusión.50°(7. 1991) en agua en el rango de 35 .Solubilidad de 1-serina.Otras sustancias como el ácido fumárico muestran un incremento moderado en solubilidad con respecto a la temperatura.13 + 80. .. y se expresa como: donde: X>2'.834 T donde T es la temperatura en grados centígrados y S es la solubilidad de la 1-serina en g/lOOO g de agua.2.Existen sustancias como la hexametilentetramina cuya solubilidad no varía apreciablemente con la temperatura.

son los pesos moleculares del agua y la 1-serina .230. A partir de la informacin anterior comparar los resultados experimentales con los derivados de la teoría de las soluciones ideales para 1-serina.89 exp [4.674 CAPÍTULO 12.4 se muestra una comparación de los datos experimentales de solubilidad de 1-serina con los que predice la teoría de las soluciones ideales. con estos valores la expresión anterior puede ser escrita como: 5-5.987 g—mol—°J\ ¡ OK n ~X~2 ~ x 501°/\ \N f ~ ' ) I/sol ""-1 7 . respectivamente. X2 donde MI= 18 y M2=105. CRISTALIZACIÓN T: Temperatura en grados Kelvin. Para 1-serina la temperatura de fusión Tm es de 501° K y la entalpia de fusión A//^ se ha estimado en 4. Solución: Sustituyendo valores en la ecuación de las soluciones ideales se tiene: i A 1 4..89 combinando ambas expresiones. la solubilidad teórica de la 1-serina es: O — 5.82-^-7 ' g—mol ca 1. \ \ de tal manera que: A 2 = exp La solubilidad S en g/1000 g de agua puede obtenerse mediante la expresión: S = (M /1000A / >\-ñ.838.838.1.1 En la Figura 12.82 cal/g-mol. .25 (^ .230.1)] .

12. y la región de sobresaturación. La curva de solubilidad (Figura 12.La región metaestable. 1991. Todos los derechos reservados. Miers a fines de los años veinte. formando lo que se conoce como solución sobresaturada. . Tomada de: Charmolue y Reproducida con el permiso del American Institute of Chemical Engineers. FUNDAMENTOS 675 Temperatura *C Figura 12. donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales ya existentes (sembrados o formados por nucleación) pero no forma cristales nuevos o núcleos. actualmente es bien conocido que bajo diferentes condiciones una solución puede contener más soluto que el correspondiente a la saturación.2. 1991. Rousseau.5) separa dos regiones: la región de subsaturación donde una solución es capaz de disolver más soluto a las condiciones dadas.A. El comportamiento de las soluciones en la región de sobresaturación fue descrito por H. . Sin embargo. Copyright ©AIChE Sobresaturación Pudiera pensarse que una solución con una concentración de soluto mayor a la de saturación forma inmediatamente cristales pequeños o núcleos.4: Solubilidad de 1-serina. Estos estudios han conducido a dividir la región de sobresaturación en tres zonas cuya delimitación no es muy precisa. El estudio del fenómeno de sobresaturación es fundamental en el diseño de cristalizadores.

sino también por los parámetros del proceso como el grado de agitación. CRISTALIZACIÓN Región sobresaturada Región subsaturada Peso de soluto Solubilidad Región de operación intermitente Región de operación continua Temperatura Figura 12.5: Zonas de sobresaturación. donde el soluto en exceso a la concentración de equilibrio se deposita en cristales existentes y forma nuevos cristales o núcleos . El conocimiento de la región de sobresaturación permite determinar regiones de operación.676 CAPÍTULO 12. de tal manera que la sobresaturación generada sirva para el crecimiento de los cristales ya existentes (sembrados) y no exista formación de cristales nuevos. a) Metaestable b) Intermedia c) Lábil. A diferencia de la solubilidad de equilibrio.La región intermedia. el grado de sobresaturación se mantiene en la región metaestable.La región lábil. con el propósito de lograr un tamaño de cristal lo más uniforme posible. los limites de estas tres zonas se controlan no sólo por el equilibrio. donde la formación de cristales nuevos o núcleo ocurre en forma espontanea a partir de una solución que no contiene cristales o semillas. . En el caso de una operación intermitente. . .

. el cual proporciona una área adecuada para remover la sobresaturación mediante el crecimiento de los cristales. de tal manera que el número de cristales que se retiran en la corriente de salida sea igual al número de cristales generados por nucleación. FUNDAMENTOS 677 En una cristalización continua la sobresaturación debe ser mantenida en el limite inferior de la región intermedia. .2.Sobresaturación por evaporación térmica al vacío.2.Sobresaturación por evaporación térmica. . o directamente utilizando un líquido refrigerante inmiscible con la solución y con propiedades termodinámicas que minimicen el trabajo de compresión necesario. En este tipo de operación la evaporación de solvente es mínima. de tal manera que sólo se retiren cristales de un mismo tamaño. Además es necesario proveer un mecanismo de clasificación de cristales. el enfriamiento de la solución a tratar permite la formación de cristales con altos rendimientos y bajo consumo energético. Esto se logra utilizando un lecho fluidizado de cristales. 12. La selección del modo de operación está fuertemente influenciada por las características de la solubilidad en equilibrio del sistema.Sobresaturación por enfriamiento evaporativo. Este enfriamiento puede realizarse en forma externa mediante un intercambiador. Una vez que se ha seleccionado el modo de operación del cristalizador es posible desarrollar los balances de masa y energía del sistema. Sobresaturación por Enfriamiento Cuando la solubilidad del soluto varía sensiblemente con la temperatura.12. .Sobresaturación por enfiamiento. Los principales modos para generar la sobresaturación (Figura 12.6) son los siguientes: .4 Selección del Modo de Operación El modo de operación en una cristalización es la técnica empleada para generar la sobresaturación de la solución.

1987.6: Modos para generar sobresaturación. Copyright ©1987. • Alimentación Vapor Producto Figura 12. I Refrigerante r j V — ^ .Vacio Alimentación -»• V Y Refrigerante Producto y < / * \ Alimentación / ( i Cond«nsado 1 «_ V/ / \ f k. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. . CRISTALIZACIÓN i k » V t ( f~ — 1 n— 1 —-V. A) Enfriamiento B) Enfriamiento evaporativo C) Evaporacin térmica D) Evaporación térmica al vacío.678 CAPÍTULO 12. Todos los derechos reservados. Adaptada de: Moyers y Rousseau.

Sobresaturación por Evaporación Térmica al Vacío En este modo la alimentación tiene una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador y al entrar se enfría adiabáticamente. Este modo es empleado para la cristalización de solutos cuya solubilidad tiene una dependencia intermedia respecto a la temperatura.2. Nucleación La velocidad de nucleación afecta el tamaño que los cristales pueden alcanzar en un cristalizador intermitente.12. A niveles elevados de sobresaturación ambos fenómenos compiten por el soluto disponible. Sobresaturación por Evaporación Térmica En este modo se transfiere calor al sistema para evaporar solvente y generar la formación de cristales por "salting out". Existen dos mecanismos de formación de cristales: . Paralelamente se transfiere calor al sistema para evaporar solvente con auxilio de un sistema de vacío. La alimentación entra a una temperatura mayor que la mantenida en el cristalizador enfriándose adiabáticamente dentro de éste. y el crecimiento de éstos.2. Este modo también es aplicable cuando la solubilidad del soluto es muy sensible a la temperatura. 12. Este modo se emplea sólo cuando la solubilidad del soluto es insensible a la temperatura. Conforme mayor sea la velocidad de nucleación menor es el tamaño de los cristales obtenidos. La fuerza impulsora de ambos fenómenos es la sobresaturación.5 Cinética de la Cristalización Los fenómenos cinéticos asociados a la cristalización son la nucleación o formación de cristales nuevos. En el caso de una cristalización continua el aumento de la velocidad de nucleación se traduce en un mayor tiempo de residencia de los cristales. FUNDAMENTOS Sobresaturación por Enfriamiento Evaporativo 679 En este modo el enfriamiento se produce con auxilio de un sistema de vacío.

Es la formación de cristales nuevos como resultado de la presencia de cristales ya crecidos de soluto. se piensa que el cristal libera pequeños cristales que se formaron durante el proceso de secado y que dan origen a nuevos cristales. . y puede originarse por medio de varios mecanismos: . los mecanismos para controlar la nucleación secundaria pueden establecerse con relativa facilidad a ese nivel.Sembrado. ya sean impurezas o cristales del mismo material previamente sembrados. bombas y agitadores. Por tal motivo la nucleación secundaria es la más empleada a nivel industrial. Esto se muestra en la Figura 12.680 CAPÍTULO 12. Cuando la solución sobresaturada fluye sobre la superficie de los cristales se considera que puede despegar segmentos de cristal. . . Ante la carencia de una descripción matemática detallada que englobe los diferentes mecanismos de nucleación posibles.Nucleación primaria. Al colocarse cristales del material en una solución sobresaturada.7 en forma cualitativa. la velocidad .Nucleación secundaria. que pueden a su vez originar nuevos cristales. La velocidad de nucleación es función de la sobresaturación y del mecanismo que la origina. En general se observa que la dependencia de la velocidad de nucleación primaria con la sobresaturación es de mayor orden que la de la velocidad de nucleación secundaria. CRISTALIZACIÓN .Esfuerzo cortante.Contacto. Consiste en la producción de cristales nuevos mediante el rompimiento de los cristales por choques entre sí o con las diferentes partes del equipo: tanque. Por otro lado. En la nucleación primaria el cristal nuevo se origina espontáneamente a partir de la solución sobresaturada (nucleación homogénea) o bien se origina a partir de un material insoluble. La mayoría de los cristalizadores operan en la región de baja sobresaturación para que el crecimiento del cristal sea regular y el producto puro.

2.12. 1987. .7: Influencia de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación. FUNDAMENTOS 681 Velocidad de nudeación primaria Número Tiempo Velocidad de nudeación secundaria Sobresaturación Figura 12. Copyright ©1987. Todos los derechos reservados. Adaptada de: Moyers y Rousseau. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.

[M/L3]. dado que estas resistencias actúan en serie. N: Número de núcleos por unidad de volumen de solvente. [M/L3]. c: Concentración de soluto en la solución. i: Parámetro empírico.8 se muestra el proceso donde un cristal cúbico ideal crece por adición de pequeños cubos sobre su superficie.4) donde: B: Velocidad de nucleación. El crecimiento de un cristal es un proceso de adición capa por capa.volumen de solvente].682 CAPÍTULO 12. c*: Concentración de saturación del soluto. [M/L3]. la velocidad de crecimiento de un cristal se puede expresar en forma empírica como: = KcA(c-c') en la ecuación anterior Kc está dada por: (12. kn: Parámetro empírico. CRISTALIZACIÓN de nucleación generalmente se expresa por medio de una correlación empírica de la siguiente forma: dN B= — = kn(c-c*)1 (12. Crecimiento El crecimiento de cristales es un fenómeno cuya fuerza impulsora también es la sobresaturación. [Núcleos/í. c — c*: Sobresaturación. [M/L3]. El crecimiento sólo puede ocurrir en la superficie del cristal y las resistencias involucradas en el crecimiento son la de la difusión del soluto hasta la superficie del cristal y la resistencia a la integración del soluto a la superficie del cristal.5) . En la Figura 12.

A: Área del cristal. t: Tiempo. [L2]. c — c*: Sobresaturación. [L/t]. ki. [M/L3].6) donde: Mc: Masa de un cristal. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.2.: Coeficiente transferencia de masa en la película. 1973. ks: Velocidad específica de integración del soluto a la superficie del cristal. Copyright ©1973. a diferencia de la expresión de la velocidad de nucleación cuyo orden es variable. [t]. FUNDAMENTOS 683 Figura 12. Todos los derechos reservados. Kc: Coeficiente global de transferencia de masa. [L/. . [L/t]. [M].12. Es importante hacer notar que la expresión de la cinética del crecimiento es de primer orden.8: Crecimiento de un cristal. Tomada de: Bennett. JL kL J_ ks (12.t].

partiendo de la siguiente relación conocida: Mc = PcVc (12. con una velocidad expresada en longitud por unidad de tiempo. Esta longitud puede ser determinada por varios métodos.7) puede ser expresada en función de esta longitud característica de la siguiente manera: Mc = pc(<f>vl3) (12. es función de algunos parámetros como la agitación y la viscosidad del medio.7) donde pc y Vc son la densidad y el volumen de un cristal. Cuando la velocidad de agitación es alta el término I/&L es el que puede ser despreciado. y puede cambiar dramáticamente durante un proceso de enfriamiento. CRISTALIZACIÓN En sistemas no agitados la velocidad de crecimiento está controlada por la difusión y el término l/ks se cancela de la ecuación (12. En base a lo anterior la ecuación (12. (12. De igual manera el área del cristal puede relacionarse con la longitud característica mediante: A = <]>Al2 donde ^ es un factor geométrico de área.6). por tal motivo la velocidad de crecimiento de un cristal generalmente se asocia a una longitud característica medible. respectivamente. mientras que k$ generalmente es un función exponencial de ésta. Si se supone que el cristal mantiene una similitud geométrica durante su crecimiento. una longitud característica del cristal que sea seleccionada mantendrá un proporción constante con las otras dimensiones.684 CAPÍTULO 12. Por otro lado. mientras que ks no lo es. Se puede asociar la velocidad de crecimiento de un cristal expresada en unidades de masa por unidad de tiempo. ki varía ligeramente con la temperatura. El coeficiente &/. siendo el más utilizado el del tamizado de los cristales bajo estudio. Uno de los objetivos de la cristalización es producir cristales de tamaño uniforme. con su volumen.9) .8) donde (f>y es un factor geométrico que relaciona la longitud característica / del cristal.

6 tv = 1 /= ¿ . Solución: a) El área de la esfera de diámetro d es: A = xd2 el volumen.12. de tal manera que: V = ~ o b) En el caso de un cubo de lado L..Longitud característica y factores geométricos.2. FUNDAMENTOS 685 Ejemplo 12.2. Determinar la longitud característica y los fatores geométricos de volumen y área para: a) Una esfera. A = 6L* V = L3 de tal manera que: <Í>A . b) Un cubo.

8) y (12.10) o bien. (12.5) con las ecuaciones (12.13) Las ecuaciones (12. Ley Delta L: AL Se ha demostrado experimentalmente que todos los cristales de un material que son geométricamente similares. Es decir este tipo de cristales cumplen con la ecuación (12. Ambos fenómenos dependen de la sobresaturación pero son independiente del tamaño de los cristales ya formados.11) puede escribirse en forma simplificada de la siguiente manera: donde kg es la constante cinética de crecimiento de un cristal.13). cuando crecen en una misma solución crecen a una velocidad constante e igual para todos los tamaños de cristal. La velocidad de crecimiento expresada en función de una longitud característica se simboliza como (7.686 CAPÍTULO 12.9) para obtener una expresión de la velocidad del crecimiento de un cristal en función de una longitud característica. cuando la velocidad es medida en función de una longitud característica. respectivamente. CRISTALIZACIÓN Se puede combinar la ecuación (12.4) y (12.11) PcJ \¿$Vj\ ' La ecuación (12. r)(c-c*) UrC/ (12. .13) describen la velocidad de formación y crecimiento de cristales. de tal manera que: G = kg(c-cf) (12.

La distribución de tamaños de una población de cristales. FUNDAMENTOS Número Volumen N¡ Tamaño de cristal.2. I Figura 12. reservados.6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales Para caracterizar una operación de cristalización también es necesario describir la distribución del tamaño de los cristales en una suspensión o "magma".2. Este tipo de distribución es necesaria para realizar los balances de masa y energía en los cristalizadores.12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Un punto sobre la curva relaciona a ¡i con yVt-. donde lt es una longitud dada de cristal y Nr es el número cíe cristales por unidad de volumen de solvente con una longitud entre O y I i. Adaptada de: Belter et al.9. 1988. Copyright ©1988. Todos los derechos 12.9: Curva de densidad poblacional. . La p e n d i e n t e de la curva p e r m i t e obtener la densidad poblacional // q u e es u n a m e d i d a d e l n ú m e r o d e c r i s t a l e s p u r u n i d < t d de v o l u m e n e n un i n t e r v a l o diferencial de l o n g i t u d : es decir. generalmente se describe por medio de una curva de densidad poblacional como la que se muestra en la Figura 12.

Los casos particulares de interés son: Para k = O. Para k = 2. f ck * l n(l)dl (12-15) donde n(l] es la densidad poblacional para el tamaño /. lim A TV dN CRISTALIZACIÓN (12 14 A/^OA/ di ' ' El uso apropiado de la variable densidad de población n permite estimar importantes características de una población de cristales. de la longitud total de los cristales de una población.»„ (12. *> = r~ \yu/ J0 n l dl fln(l)dl () Para k = 1. el momento fraccionario ^ 2 es 1a fracción que representa la suma del área de los cristales de tamaño entre O y /. el momento fraccionario ¡JL\ es la fracción que representa la suma de las longitudes de los cristales de tamaño entre O y /. De acuerdo a la definición de momentos de una distribución. mediante los momentos fraccionarios de esta distribución. el momento fraccionario k de la distribución de tamaós de cristales está dado por: n= fllkn(l)dl Jo o . . f oo / 2 2 I n(l)dl . el momento fraccionario //o representa la fracción del número de cristales de una población que tiene un tamaño entre O y/.18J . </>AJo . del área total de una población de cristales.688 CAPÍTULO 12.

3 Equipo de Cristalización La selección del tipo de cristalizador está influenciada tanto por el volumen de producción como por el modo de operación seleccionado. 12. ./3 es la fracción que representa la masa de los cristales de tamaño entre O y /.1 Cristalizadores Intermitentes Los cristalizadores intermitentes son tanques agitados con sistemas de vacío y enfriamiento (Figura 12. p <t> fll3n(l)dl v ..3. El ciclo de la cristalización dura entre 2 y 8 horas.3.3. de la.2 Cristalizadores Continuos Existen tres tipos básicos de cristalizadores continuos: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido (también llamado cristalizador con clasificarión de la suspensión o tipo Oslo).1Q^j (JZ iy 12.12. En general los equipos de cristalización pueden operar en dos formas: • Intermitente • Continua.'n .~ roo n 3 . masa total de una población de cristales . La mayoría de los productos biotecnológicos que involucran una cristalización se obtienen en forma intermitente.10). el material cristalizado se retira del cristalizador para lavarse y secarse. 12. pc(l)v J0 I n(l)dl (19 ./ 3 — ' c I v Jo f. Al final del ciclo. EQUIPO DE CRISTALIZACIÓN 689 Para k = 3. el momento fraccionario .

Todos los derechos reservados.690 CAPÍTULO 12. CRISTALIZACIÓN Condensador barométrico" Vapor Agua Vapor Eyector de dos etapas Alimentación Agitador de propela Válvula de descarga Figura 12. Adaptada de: Bennett. Copyright ©1988. 1988. .10: Cristalizador intermitente. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.

3.11: Cristalizador-Evaporador con circulación de líquido. Cristalizador-Evaporador con Circulación de Líquido En el cristalizador-evaporador con circulación de líquido (Figura 12. 1988. m ¡ • > .12. ¡¡i--''O < ' < Í ! • • . . M .11) la sobresaturación se produce por evaporación. Los cristales más grandes sedimentan y son retirados por el fondo del cristalizador.n í a e n . a i i / a d o r c o n R e m o c i ó n < ! ' • P r o d ^ c í n M e «"íado v S n s p c n s i i > : ! M c / e j ^ .a i l ' i í i ' u r a í l ' . . i. El líquido sobresalurado fluye hacia la parte inferior del cristalizador a través de un tubo de bajada y después hacia arriba a través de un lecho fluidizado de cristales que permite una liberación efectiva de la sobresaturación. La alimentación concentrada y caliente se mezcla con la corriente de recirculación y se bombea a la cámara de evaporación donde el solvente se evapora adiabáticamente con ayuda de un sistema de vacío. Cristalizador al Vacío y Circulación Forzada de Magma Í'J c n s t a . EQ UlPO DE CRISTA LIZA ClON 691 Alimentación Figura 12. .¡ ¡ h'l ' M S \! ' a. Copyright ©1988. . Adaptada de: Bennett. i l : f a i ü b i ' 1 ! ! conocido r ( M i ) u c n . i i / a d o r al vacío v c i r c u l a c i ó n (orzada de. Todos los derechos reservados. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc. c u * •: . Los cristales más finos pueden ser retirados por la parte superior para incrementar el tamaño de los cristales.

Cristalizador con Tubo de Tiro y Mampara En el cristalizador con tubo de tiro y mampara (Figura 12. La suspensión en la superficie del cristalizador libera parte .13). . Una mampara externa al tubo de tiro permite formar una zona de sedimentación externa. No condontabtos CRISTALIZACIÓN Enfrxted* V*p<K I Intercambiado? Figura 12. 1988. mediante un impulsor grande que se mueve a bajas velocidades. apropiado para retener los cristales en crecimiento.12: Cristalizador al vacío y circulación forzada de magma . Adaptada de: Bennett. Copyright ©1988. Todos los derechos reservados. La alimentación mezclada con la corriente de finos se hace pasar por un intercambiador de calor y se introduce por la parte inferior del cristalizador. los cristales de mayor tamaño que sedimentan en el fondo del cristalizador son impulsados hacia la región superior donde se efectúa la evaporación y se origina la sobresaturación. a partir de la cual los cristales finos pueden ser retirados para incrementar el tamaño del cristal. La alimentación se mezcla con la corriente de salida del cuerpo principal y se hace pasar por un intercambiador donde se eleva su temperatura entre 2 y 6° C.del solvente produciéndose la sobresaturación. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.692 CAPÍTULO 12.

diseño y optimización.12. con las variables de operación y la configuración de los cristalizadores. Adaptada de: Bennett. Sin embargo. 12. DISEÑO DE CIUSTALIZAUÜItM Figura 12. los balances de masa y los balances de energía. existen aún varias limitaciones debido a lo complejo que resulta describir de manera racional la forma como se relacionan los fenómenos de nucleación y crecimiento de cristales. en el diseño de tres sistemas de interés en c r i s t a l i z a c i ó n : * (Yista. Todos los derechos reservados. Copyright ©1988.bzadur c . en aplicaciones a situaciones de importancia i n d u s t r i a l . Reproducida con el permiso de Me Gravv Hill Inc.13: Cristalizador con tubo de tiro y mampara.4. 1988. En esta.4 Diseño de Cristalizadores Actualmente se han logrado avances importantes en la modelación de cristalizadores para su análisis. sección se describe como se c o m b i n a n los balances poblacionales de cristales.

El cristalizador contiene un volumen V de solvente.14 muestra un esquema de un cristalizador continuo perfectamente agitado operando en modo "cristalización por enfriamiento". En estos balances se supone que los cristales son lo suficientemente numerosos y pequeños.4. con una concentración de soluto disuelto por volumen de solvente y y una distribución de tamaño de cristales caracterizada como n.1 Cristalizador Continuo La Figura 12. Balance Poblacional Los balances poblacionales de cristales consideran que el número de cristales es una cantidad balanceable.14: Esquema de un cristalizador continuo. Como el cristalizador está perfectamente agitado el flujo volumétrico de solvente a la salida F también está caracterizado por y y n. de tal manera que su distribución de tamaño puede considerarse una función continua de la longitud característica o tamaño del cristal.694 CAPÍTULO 12. 12. CRISTALIZACIÓN Q •*• Figura 12. La distribución del tamaño de los cristales a la entrada está dada por n^. El cristalizador es alimentado continuamente con un flujo volumétrico de solvente F¿ que presenta una concentración y A de soluto disuelto por volumen de solvente. Se supone además en el siguiente caso que no ocurre rompimiento ni aglomeración .

que está sujeto a las siguientes restricciones: . por lo que: .} es igual a [La velocidad de e n t r a d a de cristales de t a m a ñ o en el rango di en la a l i m e n t ación.} menos [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador salen del rango de tamaño di.] más [El número de cristales por unidad de tiempo que al crecer en el cristalizador entran al rango de tamaño di. del número de cristales de tamaño en el rango di.12.} lo cual se expresa matemáticamente como: j-t(Vn) = FAnA -Fu.Suspensión Mezclada. (RPMSM).] menos [La.4.El cristalizador opera en estado estacionario. al interior del cristalizador. El balance poblacional de cristales en el cristalizador continuo considerando sólo los cristales en un rango de tamaño di — l¿ — / i .20) La ecuación anterior ha sido resuelta para algunos casos de interés particular como el que se describe a continuación. velocidad de salida de cristales de tamaño en el rango di del cristalizador. puede expresarse en palabras como: [La variación con el tiempo.V^^- (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES (>95 de cristales.La ecuación (12.20) ha sido resuelta para un caso p a r t i c u l a r de cristalizador continuo bien agitado llamado: Remoción de Producto Mezclado .. Cristalizador Continuo con Remoción de Producto Mezclado .Suspensión Mezclada (RPMSM).

22) .696 CAPÍTULO 12.24) se transforma en : 0 (1.El crecimiento de cristales al interior del cristalizador sigue la ley de A/.21) . es decir dG aT = ° (12. .(12.25) puede ser expresada como: (12.23) en base a lo anterior.26) al r Cuando / es muy pequeña (tiende a cero) la densidad poblacional n(0) se deriva preferentemente de la nucleación de nuevos cristales.25) como el tiempo de residencia promedio en el cristalizador está dado por: r = ¥r entonces la ecuación (12. . entonces.20) puede expresarse de la siguiente manera: d(nG) dG ^dn fin -~~ = n-¿T + G— = G— oí oí oí oí (12. el último término de la ecuación (12.El volumen es constante.= O (12.27) . CRISTALIZACIÓN nA=0 (12.No existe variación del número de cristales por aglomeración o rompimiento. Si estas restricciones se aplican la ecuación (12.20) con las ecuaciones (12.El cristalizador está perfectamente agitado y no existen pérdidas de solvente.24) ' . G^ + U.

mediante datos de densidad poblacional obtenidos en un cristalizador RPMSM. La ordenada en el origen conjuntamente con el valor de G permiten determinar B°.30) puede ser utilizada para: .27). la ecuación (12. Existen varias técnicas para obtener la distribución de tamaño de partículas de una población.La ecuación (12.) \GT ) o bien. presentarán una pendiente m = (—l/Gr) y una ordenada en el origen igual a \n(B°/G).28) puede utilizarse como condición de frontera para la integración de la.30) puede rearreglarse para ser expresarse como: (12.oui Como todo modelo la ecuación (12. Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM. Para tal efecto.31) De acuerdo con la ecuación anterior los datos experimentales de Inra vs / ajustados a una linea recta. obteniéndose la ecuación: n = n°exp( ~. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 697 áE fío n(0) = n° = -j|. ecuación (12. „ — /"» "xp i/ ^j _ ~vri ii (12. varía con cada una de ellas.= — (12. Dos técnicas son de particular interés: . Los procedimientos para determinar n a partir de los datos que se generan con las técnicas.12.Estimación de parámetros en un cristalizador RPMSM.30) puede ser utilizada para obtener velocidades de nucleación y crecimiento de cristales. ..29) n 9 Ifh ^i^. El tiempo de residencia en el cristalizador y la pendiente permiten determinar G.Diseño de cristalizadores RPMSM.28) 71 La ecuación (12.4.

conforme la población de partículas fluye por el sensor. : Fracción de la masa total de cristales retenida en una malla. . Mediante estas determinaciones es posible obtener densidades poblacionales en forma directa o indirecta. .14) mediante la siguiente expresión: n= A//9C<M3 (\¿. lavados.Densidad de cristales en el magma (masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión). arreglados verticalmente de mayor a menor tamaño de malla. Los cristales del magma bajo estudio requieren cierto tratamiento previo: deben ser filtrados. bloqueo de luz o conductividad eléctrica. secados y durante su manejo debe evitarse su rompimiento. Una vez que se ha cribado la muestra es necesario determinar n a partir de los datos de la masa de cristales acumulada en cada malla.6¿) donde: T'.El analizador electrónico de partículas. Una vez que se coloca la muestra en el cilindro superior.Los analizadores de mallas consisten en un conjunto de cilindros cortos sin tapa superior y con una malla en el fondo. dispersión de la luz.El analizador electrónico de partículas. el sistema se somete a movimiento mecánico. CRISTALIZACIÓN . para determinar el tamaño de las mismas mide el cambio de alguna propiedad como difracción de la luz. La dimensión característica que se le asigna a cada partícula es la correspondiente al diámetro de una esfera equivalente al volumen medido... de tal manera que éste es el parámetro que se correlaciona con las mediciones del instrumento.El analizador de malla. lo cual puede realizarse de acuerdo a la ecuación (12. El cambio de tales propiedades es función del volumen de la partícula.698 CAPÍTULO 12. Funcionan en seco o en húmedo y proporcionan una distribución acumulativa de peso. Analizador electrónico de partículas. dependiendo del equipo. de tal manera que se genere un fenómeno de cribado. Analizador de mallas.

699 A/: Intervalo de abertura de malla donde se retienen los cristales. Entre la malla 14 y la malla 20 los cálculos a realizar son: A/ = 1. la densidad de la urea es de 1. Solución: De acuerdo con la ecuación (12.19 mm +0.32) se obtiene: .38 h.31) es necesario generar una gráfica de Inn vs /.32).Factor geométrico de volumen. donde la masa de cristales en la suspensión es de 450 g/dm3. El denominador contempla la masa de un cristal de tamaño promedio / y el intervalo A/.3. en la columna (2) el porcentaje de masa acumulada en la malla respectiva.841 mm A/ = 0.. <f)v'. pc\ Densidad de los cristales.016 mm de tal manera que mediante la ecuación (12. en la columna (3) la fracción masa acumulada entre mallas y en la columna (4) la abertura de la malla en mm.841 mm 2 / = 1.1 se presentan los datos del análisis de mallas practicado a la muestra: en la columna (1) el tamaño nominal de la malla. Ejemplo 12. para lo cual es necesario utilizar la ecuación (12.4.32) representa la masa de cristales de tamaño promedio /. El factor geométrico de volumen <j>v puede considerarse igual a la unidad._ 1.Análisis de la cristalización de urea.12.19 mm-0.349 mm . Se desea calcular la velocidad de nucleación y crecimiento en una cristalización a partir de una muestra de cristales de urea obtenida en un cristalizador RPMSM. En la Tabla 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES /: Longitud de la abertura de la malla. El numerador de la ecuación (12.335 g/cm3 y el tiempo de residencia de 3.

044 20 28 35 48 65 100 4.254 0. (6).316 31.09 16.297 0.061 Fondo 2.000 10.703.508 0.42 18.349 mm)(1.044) (0.3.016 0.210 0.19 15.200 18.2 0.07 0.4 0. 1973.4 0.566. Los datos de In n vs / se presentan en la forma gráfica en la Figura 12. Los parámetros de la recta ajustada son: Pendiente = —9.5 0.865. Copyright ©1973.349 0.61 Los cálculos para las otras mallas aparecen en la Tabla 12.190 Longitud promedio 7 (mm) Incremento A/ (mm) (?) (8) " n Inn 0.4 1.016 mm)' Vloo0mm3 número de cristales = 40.6 0.070 3.149 0.1 en las columnas (5). masa AW Tamaño abertura malla (mm) 1.246 40.61 13. (450 ¿:r)(0.75 17.000 36.718 0.841 0.15.087 24.335 ^)(1)(1.5 Fuente: Bennett.242 0.359 0.180 0.000 70.1: Datos y cálculos del Ejemplo 12.595 0.581 533.025 0.795. Todos los derechos reservados. Malla (1) 14 (2) (3) (4) (5) (6) %de masa acumulada Frac. CRISTALIZACIÓN Tabla 12. Reproducida con el permiso de Me Graw Hill Inc.123 0.05 mm: ordenanda en el origen = 19.765 .581 mm — dm3 ) = 10.700 CAPÍTULO 12. (7) y (8).175 0.420 0.155 15.074 7.144 14.

o Figura 12.4. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 701 222018 ln(n) 16 14 12 10 0.0 0.2 0.6 0.15: Cristalización de urea. .8 i.4 I (mm) 0.12.

3 ¿ —k . ta „• = 3.702 CAPÍTULO 12.838x10» mm — c/77?. B° = (3. _ _ 1 m. \ o.838 x 108 númer° dí C"*3 'eS mm — dm y la velocidad de nucleación es: . se obtuvieron valores de \& velocidad de crecimiento y nucleación mediante análisis con mallas a diferentes tiempos de residencia. manteniendo la masa total .0327 k / = l..4.31). a) Velocidad de crecimiento. De acuerdo a la ecuación (12.-de tal manera que: G = --_ ' (3. De acuerdo a la ecuación (12.38 h) \ ' b) Velocidad de nucleación.255xlOTnii"ter° J Ejemplo 12.Orden de nucleación.28). B° = n°G como: lnn° = 19. CRISTALIZACIÓN Con estos datos es posible calcular la velocidad de crecimiento y nucleación de los cristales. Combinando estudios de laboratorio y estudios piloto.765 entonces.

DISEÑO DE CRISTALIZADORES Tabla 12. Los datos obtenidos se presentan en la Tabla 12.2: Datos del Ejemplo 12.092 0. Todos los derechos reservados. Considerando los datos anteriores. B° = kn(c-c*y combinando estas expresiones se obtiene B° = kN (G)' G = kg(c-c*) (12. Copyright ©1987.23 g/cm3 y el factor geométrico de volumen <f>y = 1.12:4. 1987.4. La densidad de los cristales es de 1.729 Fuente: Moyers y Rousseau.042 0.33) donde: k /ir N La expresión obtenida en forma logarítmica se expresa como: . Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.4) y (12. \ ^ ^ cm3 — min i 315 630 1.2.260 0.84 g/cm3.13). Solución: De acuerdo con las ecuaciones (12.019 13. de cristales por unidad de volumen constante e igual a 0.960 6. derivar una expresión de la variación de la velocidad de nucleación con la velocidad de crecimiento.993 9. Corrida T (min) 1 2 3 0 703 r< ( M™ \ ImtJ DO / num.

16 se presenta la gráfica correspondiente a los datos de la Tabla 12.4In(B') Q3_ 9.69. ln B° — ln kjy -f i ln G de tal manera que los datos de ln B° vs ln G se pueden ajustar a una recta de pendiente i y ordenada en el origen ln &/vEn la Figura 12.98.66 = de tal manera que. .8-4 -3.08.59.6 -3. de la cual se obtiene: 0.8 -2.2.19.4.46 10.4 -3.704 CAPÍTULO 12.2 ln(G) -3.8 -3.6 -2.4 Figura 12.16: Orden de nucleación del Ejemplo 12.29.0 -2. CRISTALIZACIÓN 9.

de tal manera que la densidad poblacional dada por la ecuación (12.33). Esto se realiza efectuando un análisis de mallas a la escala de interés para obtener G y B°. Diseño de cristalizadores RPMSM. 2 y 3 de la población de cristales. 1. Varias características de diseño de un cristalizador se derivan del uso de la distribución poblacional dada por la ecuación (12. Momento Cero: Fracción del número total de cristales de tamaño entre O y /. ya que es dependiente de la escala. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 705 El valor de 0. se pueden determinan los momentos O.29) el número total de cristales por unidad de volumen está dado por la expresión: NT = I n° exp ( — ) di Li T .16) y la ecuación (12.4. A continuación se presentan algunas de ellas: 1) Momentos.46 indica una dependencia moderada de la velocidad de nucleación respecto a G (o a la sobresaturación). El parámetro &/v es necesario determinarlo en una corrida a nivel piloto o a escala real.. Contando con la expresión de la densidad poblacional y en conjunción con las expresiones de momentos.29) está completamente determinada a las condiciones de operación dadas. Dado que i es específico del sistema se supone que este valor no cambia con la escala y puede determinarse mediante experimentos de laboratorio (cristalizador de 4 a 8 dm3).29) y de los parámetros G y B° que se obtienen mediante experimentación. Con estos valores y la i determinada en el laboratorio se obtiene UN mediante la ecuación (12. De acuerdo a la ecuación (12. Esto es característico de moléculas grandes e indica que el mecanismo de nucleación no es muy sensible a la sobresaturación y que la nucleación secundaria es la dominante.12.En un RPMSM el tiempo de residencia r es constante y la relación B°¡G también es constante. A continuación se ejemplifica lo anterior mediante el cálculo del momento 0.

36) — 1 — exp(—X) donde X es una longitud adimensional dada por: X = ¿ Empleando un procedimiento similar al anterior se pueden obtener los otros momentos./ Ni = Ni = n°G> de tal manera que la fracción del total de la población es: (12.34) El número de cristales por unidad de volumen de tamaño entre O y / es: . La longitud de cristal a la cual la densidad de la masa de cristales es máxima se llama tamaño de cristal dominante //> La masa de cristales por unidad de volumen de solvente en un rango de tamaño de los cristales está dada por: . la cual puede resolverse para obtener.706 CAPÍTULO 12. En la Tabla 12.3 se presentan las expresiones de los momentos restantes. NT=n°Gr CRISTALIZACIÓN (12. 2) Tamaño de cristal dominante.35) fracción J fracción = n°Gr (12.

40) derivando con respecto a / la ecuación (12.41) .3 la masa total de cristal por unidad de volumen es: MT — 6(j>vpcn°(GT^ combinando las dos expresiones anteriores se tiene: (12.( l + X)e.39) conducen a: dW di / (12. Las ecuaciones (12.38) dW di n 6(<7r) n< 4 (12.40) e igualando a O se obtiene: ID (12.4.A 1 longitud de n°(Gr}¿ los cristales l-(l + X+¿X')e-A 2 área de los 2^n°(Gr) 3 cristales masa de los ^vpcn°(GrY 3 l .37) de la Tabla 12.12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 707 Tabla 12.39) donde W es la fracción masa de cristales.3: Momentos de un cristalizador RPMSM (X = l/Gr).O + X + ^ + p^Je-* cristales dM = pc<j>vl3ndl (12.29) y la (12. Momento I Significado I Total I Fracción \-e~A número de n°Gr 0 cristales l .

y además puede ser medida independientemente de la distribución de tamaño de cristales.5.5.3). Debido a lo anterior MT puede ser utilizada para corroborar velocidades de nucleación y crecimiento estimadas mediante análisis de mallas.0327 mm/h y B° = 1. Comparar la densidad experimental del magma con la estimada a partir del análisis de mallas.38 h.708 CAPÍTULO 12. (Datos del Ejemplo 12. La masa de cristales por unidad de volumen de solvente MT es función de los parámetros cinéticos n° y G (Tabla 12. 3) Coeficiente de variación. Los resultados de los análisis de mallas generan los valores de G = 0. 4) Densidad del magma..Evaluación de G y B°. Este procedimiento se muestra en el Ejemplo 12.3).335 g/cm3 y el tiempo de residencia es de 3. El coeficiente de variación es una medida de la dispersión de la densidad de masa alrededor del valor ID y está dado por: En el caso de la distribución para el RPMSM este valor es aproximadamente del 50%. Solución: De acuerdo a la Tabla 12. Ejemplo 12. Tal dispersión es muy amplia para ser aceptable para algunos productos cristalinos como el azúcar común.3.255 x 107 número/dm? — h. CRISTALIZACIÓN Este tamaño característico de los cristales frecuentemente es utilizado como base para el diseño de cristalizadores. En un cristalizador experimental la densidad medida de cristales en el magma es de 450 g/dm3. La densidad de los cristales es de 1. MT = 6 .

056 mm/h.. 709 sustituyendo valores.769 g/cm3 y de acuerdo a su forma <f>y = 1.38 h\ = 458 9 MT dm3 El valor experimental de MT = 450 g/dm3 y el calculado de 458 g/dm3 sugieren consistencia de los datos. La suspensión de cristales es retirada a un flujo de 50 dm3/h.12.255 x 107 = 6 x 1 x 1. MT a cm3 1. El siguiente ejemplo muestra como una vez obtenidos los parámetros cinéticos.x cm3 103 mm3 0. b) El número de cristales con un tamaño menor o igual al tamaño dominante. Los cristales presentan una densidad pc de 1.Cristalización de sulfato de amonio.4. Los estudios cinéticos indican que la velocidad de nucleación es de de 1.335 — x ——.0327 ^ n 4 mm \ (0.0327 ^p x3. Ejemplo 12.88 x 107 número/'dm3 — h y la velocidad de crecimiento G es 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES o bien. . éstos pueden ser utilizados para caracterizar una cristalización. Un cristalizador RPMSM de 100 dm3 es alimentado a 50 dm3/h con una solución sobresaturada de sulfato de amonio.6. Estimar : a) El tamaño de cristal dominante. c) La fracción del número de cristales totales con un tamaño igual o menor que el tamaño dominante.

. e) Predecir la fracción masa de cristales por tamaño (utilizar tamaños de mallas estándares). / \ (B0T)(\-e~x) N N = nurn 1. Solución: a) De acuerdo a la ecuación (12. CRISTALIZACIÓN d) La densidad de la suspensión . -f..88 x 10 -— 3 7 dm .3. N = TV = ndl (total de cristales)(fracción en el rango) de acuerdo a la Tabla 12. TV = (n0GT)(l-e~x) y X = -^ = 3 con n° = B°/G A^ = sustituyendo valores.57 x 107 ""'" .336 mm x ' 10 ° dm3 50 ^r b) El número de cristales TV de tamaño igual o menor a ID es: o 6¿en. x -51 .710 CAPÍTULO 12. ID = 0.41) el tamaño de cristal dominante es: ID = 3Gr /„ = (3)10. .e~ 3 50 ^ I = 3.h 100 dm3 \ .056 (o.

\ X 0. .4 se presentan los resultados obtenidos al utilizar la expresión anterior.e~3) = 0.056 = h 50 4s£ MT = 560 -pam-3 e) De acuerdo a la Tabla 12. Las velocidades de crecimiento y nucleación. la fracción masa de cristales con tamaño menor o igual a / es: Fracción masa = 1 .3.12. w x fr = (6)(1) (1.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva En un cristalizador RPMSM el control de la distribución de tamaño de los cristales es muy limitada. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 711 c) De acuerdo a la Tabla 12. están determinadas por las variables de operación y la geometría del cristalizador.3 la densidad de la suspensión está dada por: MT = 6</>vpcn°(GT)4 sustituyendo valores con n° — B°/G.769 mm / <7 \ / ero- \ / 1-88 x 107 3^ 1000 mm 3 .4.4.95 d) De acuerdo a la Tabla 12. 12.3 la fracción de cristales de tamaño en el rango O < / < /D es: (1 .(1 -f X + -X2 + -X3)e~x 2 6 de tal manera que la fracción de masa retenida en la malla de tamaño / es / v-2 Y3\ Frac. masa retenida = ( 1 -f X -\ 1 1 e~ \ 2 6/ En la Tabla 12. .

En el caso de un modelo combinado de remoción ideal de finos y gruesos llamado modelo R-Z . Malla Tamaño 20 A Y — l ~ Gr ( mm) 0.4 7.841 Masa retenida.149 5. CRISTALIZACIÓN Tabla 12.6 95.Modelo de remoción de gruesos.595 0.65 1. % 5.Modelo de extracción de líquido. La remoción de gruesos consiste en remover los cristales cuyo tamaño sea mayor al especificado.75 2.51 28 35 48 100 0.4: Resultados Ejemplo 12. .420 0. La extracción de líquido consiste en la remoción de líquido libre de cristales del cristalizador. Esto provoca un aumento de la densidad de cristales al interior del cristalizador y un aumento en el tiempo de residencia de éstos. los balances poblacionales conducen (Moyers y Rousseau.Modelo de remoción de finos.31 3. lo cual altera el tiempo de residencia de los materiales que salen del cristalizador. .712 CAPÍTULO 12.4 Los cristalizadores continuos pueden hacerse más flexibles mediante el uso de dispositivos para la remoción selectiva de cristales.297 0.3 48.33 22. Los efectos de cada dispositivo de remoción pueden ser descritos en términos de la función de densidad poblacional n. Después de ser retirados los cristales se redisuelven y alimentan nuevamente al cristalizador.6 inciso e). El objetivo principal en la remoción de finos es la remoción continua de cristales cuyo tamaño sea menor al especificado.3 72. 1987) a las tres expresiones de intervalo siguientes: . La función de estos dispositivos puede visualizarse más fácilmente en términos de los modelos idealizados: . Esto permite obtener cristales de mayor tamaño.

cuando Z = 1 no existe remoción de gruesos.1 Gr 713 (12..Para / > lc —•. lc: Tamaño máximo aceptable de los cristales. produce una distribución de cristales con tamaño de cristal dominante alto y bajo coeficiente de variación. 4.43) 2.Para // < / < l 3. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 1. Z: índice de remoción de gruesos. 12.12.17 en un proceso de cristalización el rendimiento estará dado por: .donde: //: Tamaño mínimo aceptable de los cristales.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos En la optimización de un proceso de separación es necesario calcular la eficiencia en la recuperación de producto como función de las variables de diseño.4.Para/ < //: —.. Cuando R = 1 no existe remoción de finos.. Un cristalizador con remoción tanto de finos como de gruesos. De acuerdo con la Figura 12. R: índice de remoción de finos.

= donde: a ~ S Rc F fí * s1 *-a (12.17: cristalizador continuo general. Por lo tanto. CRISTALIZACIÓN Vapor » R» ntación Q <— -? 1 í Suspensión: Solución S Rc Cristales C Figura 12. [M/i\. Otra variable que puede ser controlada en una cristalización es el flujo másico de solvente a la salida 5*. El flujo de solvente Fs y la fracción masa libre de soluto /?a.714 CAPÍTULO 12. Rend.46) Fs: Flujo másico de solvente en la alimentación. 5: Flujo másico de solvente en la suspensión de salida. Ra: Masa de soluto por masa de solvente en la alimentación. Rc: Masa de soluto disuelto por masa de solvente en la solución de salida. es la solubilidad del soluto en el solvente a la temperatura de operación. [M/i\. La fracción masa libre de soluto del soluto disuelto fíc. generalmente se fijan por las operaciones previas a la cristalización. [M/Mj. mediante los diferentes modos de operación de los cristalizadores: . C: Flujo másico de cristales en la suspensión de salida. Rse: Masa de solvente evaporada por masa de solvente alimentada. [M/t]. [M/M]. el rendimiento puede ser controlado en cierto grado. [M/M]. mediante un control de la temperatura o cambiando el tipo de solvente.

. de tal manera que ambos efectos contribuyen a incrementar el rendimiento de la operación. la cantidad de solvente evaporado y las condiciones dentro del cristalizador. . el diseñador puede controlar la presión para fijar la temperatura y por lo tanto /?c.En los sistemas con evaporación o en los sistemas combinados de enfriamiento adiabático con evaporación.En los sistemas con evaporación S disminuye debido a la corriente de vapor producido y el rendimiento se incrementa. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 715 . así como administrar calor externo para controlar 5.48) se puede obtener la ecuación para el flujo de solvente.4.Cuando la cristalización es sólo por enfriamiento. La conclusión de la discusión anterior es que para una Fs y Ra dados.17 el balance de masa total está dado por: Fs + FsRa = FsRse + 5 + C/+ SRc El balance de soluto está dado por: (12. A continuación se presenta este procedimiento.47) (12.49) Combinando las ecuaciones (12.12. y una relación de solubilidad dada. .47) y (12. el modo de la cristalización determina la recuperación máxima de soluto alcanzable.48) y el balance de solvente por: Fs = FsRse + S (12. .En el modo de enfriamiento adiabático la cantidad de vapor liberada está fijada por los balances de energía. el único control sobre el rendimiento es la temperatura. Para sistemas binarios es posible desarrollar expresiones para el rendimiento y las composiciones de las corrientes en función de: las condiciones de entrada. De acuerdo a la Figura 12.

53) y (12.52).R~ Las ecuaciones (12.Cristalización por Enfriamiento Indirecto En este caso no existe evaporación de solvente por lo que: fl« = 0 y las ecuaciones (12.49) se puede obtener una ecuación para el flujo másico de cristales. = -—— rafia (12. . C = Fs[Ra .51) en la (12.48) y (12.52) sustituyendo la ecuación (12.51) y (12..51) El rendimiento dado por la ecuación (12.716 CAPÍTULO 12.(1 . -(l-ft. = ft.56) .46) puede también ser expresado como: C Rend.55) se simplifican para los modos de operación particulares que se describen a continuación. La fracción masa de cristales en la suspensión de salida ST es: combinando (12.53) y (12. 1. ñend.53) permite calcular el rendimiento mediante los datos de diseño Ra.54) se obtiene: i + fi. Ra (12 53) La ecuación (12.)*.55) se expresan como: (12.ric Combinando las ecuaciones (12. CRISTALIZACIÓN S= 1 -\. de equilibrio Rc y de operación Rae.Rae)Rc] (12.

12A.53) y (12. = Rse (12.Cristalización Sólo por Evaporación En este caso la fracción masa de soluto en la alimentación es igual a la fracción masa en la solución de salida.] más [Entrada convectiva de calor.59) ST = -R"Rse p 1 + Ra — Rse (12.60) (12.55) se expresan como: Rend. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 717 Rend. Este balance puede ser expresado en palabras como: [La velocidad de salida de calor por evaporación del solvente.] más [Calor liberado por cristalización por "salting out"] • y mediante la ecuación: FsRse\v = Fs(Ra+FsRcRseX} (12.61) 3.57) (1258) 2. Ra = Rc y las ecuaciones (12.Cristalización por Evaporación Adiabática sin Reflujo En este caso a diferencia de los dos casos anteriores. además de los balances de masa se requiere efectuar un balance de energía para determinar la cantidad de solvente evaporado en el cristalizador..62) .. = RaD Rc Ra (12.] es igual a \ [El calor liberado por la cristalización de enfriamiento.

Generalmente es aceptable suponer que esta concentración corresponde a la de saturación. de tal manera que las ecuaciones de enfriamiento adiabático son: _ \¡(Ra . A/: Calor de cristalización del soluto. \v: Calor de evaporación del solvente. [cal/M — grado]. La solución alimentada al cristalizador contiene 0. en oposición a los sistemas tipo I donde la concentración de salida Rc es mayor que la de saturación debido al lento crecimiento en estos sistemas.379 g de soluto por g de solvente y se alimenta a una temperatura de \00UC.Rsf)Rc •tta (12 63) ' ST = "~ 1 + Hc — tiae " í ° c (12.(1 . [cal/M]. En las columnas (1). [cal/M].718 donde: CAPÍTULO 12. El calor de .7. CRISTALIZACIÓN AT: Temperatura de alimentación menos temperatura del cristalizador.5 se muestran los datos de equilibrio para el sistema a cuatro presiones absolutas diferentes. Se desea analizar la variación con la presión de operación del rendimiento y la concentración de sólidos en la corriente de salida de un cristalizador. Los sistemas en los cuales ésto ocurre se llaman sistema tipo II o de rápido crecimiento. (2) y (3) de la Tabla 12. Ejemplo 12. Cp: Capacidad calorífica de la alimentación.Re) + CPAT(l + Ra) "~ A. .Balances de masa y energía en un cristalizador adiabático. [grados].A/ + Rc Ra ..65) Las ecuaciones anteriores pueden ser resueltas si se conoce la concentración de soluto disuelto en la suspensión de salida Rc.

5.969 0.835 0.12. (6) ST g cristales g totales 0.100 0. g solv.043 0. evap. Copyright ©1987.419 0. g cristales g soluto alim. alim. El rendimiento y la fracción masa se calculan utilizando las ecuaciones (12.5.582 0. (5) Rend. Estos valores aparecen en las columnas (5) y (6) de la Tabla 12.65).316 0. respectivamente. Contando con la cinética de la cristalización es posible evaluar la sensibilidad de . Calcular la fracción masa de cristales a la salida del cristalizador y el rendimiento bajo cada una de las presiones de operación.374 0. el calor de fusión del cristal es de 33.556 cal/g—°C.3 cal/g y la capacidad calorífica de la solución de 0.5: Datos y solución del Ejemplo 12. Balances y Cinética En el diseño de un cristalizador es necesario combinar las expresiones de la cinética de la cristalización con los balances de masa y energía.7.63) y aparece en la columna (4) de la Tabla 12. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.347 0. Solución: Considerando un sistema de cristalización tipo II.502 0.890 0. 1987. Todos los derechos reservados. Presión mm de Hg (1) 160 135 90 60 (2) T °C 65 60 50 40 (3) RC g soluto g solvente (4) Rse g solv. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 719 Tabla 12. vaporización del solvente es de 100 cal/g.64) y (12.400 0.944 0.028 0.4. Tanto la fracción masa de cristales como el rendimiento aumentan al disminuir la presión de operación.453 Fuente: Moyers y Rousseau. el flujo másico de evaporación adiabática de solvente puede calcularse utilizando la ecuación (12.072 0. El uso de la cinética de la cristalización para el análisis y diseño provee una nueva dimensión a las técnicas de diseño disponible.

Diseño de un cristalizador continuo. .699(6') Ü46 num cm — min 3 donde G está en unidades de ¡mi¡rain y k^ en .720 CAPÍTULO 12.84 g/cm3 generaron la expresión cinética siguiente: = 42. Los estudios realizados a nivel laboratorio y a nivel piloto en un cristalizador RPMSM.. .Sembrado.95. Los datos y condiciones de operación se presentan en la Tabla 12.Operación en serie.Tiempo de residencia.El rendimiento debe ser mayor a 0.6 y los datos de equilibrio se presentan en la Tabla 12.8. CRISTALIZACIÓN la distribución de tamaño de cristales a las diferentes parámetros de operación: .75% de la masa de los cristales debe tener un tamaño mayor a 100 .5. Se desea diseñar un cristalizador para producir 455 kg/h de un compuesto. .Temperatura.7. Ejemplo 12. . manteniendo constante MT en 0. .La fracción de masa de cristales ST a la salida debe ser de 0. .Remoción de finos. . Los criterios de diseño son los siguientes: .Remoción de gruesos.Densidad de la suspensión.

23.6: Datos y condiciones de operación del Ejemplo 12. 0.556 cal/g — o. . Tabla 12.028 0. Todos los derechos reservados. Fuente: Moyers y Rousseau.3 cal/g.8. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 721 Tabla 12. 1. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons . Composición alimentación Temperatura alimentación Calor específico de la suspensión y solución Calor de evaporación del solvente Calor de cristalización Gravedad específica de los cristales Gravedad específica del líquido Factor volumétrico del cristal n O7Q g solvente ' 100°C.8. 0.4.018 Fuente: Moyers y Rousseau. Copyright ©1987.100 0. 100 cal/g.072 0. 1987. Copyright ©1987. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons.043 0. 1. Todos los derechos reservados.2.7: Datos de equilibrio del Ejemplo 12. 33. 1987.84. Presión mmHg 160 135 90 60 40 T Cristalizador °C 65 60 50 40 30 masa soluto masa solvente Rc 0.

8 el modo de cristalización por enfriamiento indirecto. a) Balances de masa y energía. pero ni aún a 40°C (60 mm de Hg) satisface 1? condición de ST — 0. . El modo de operación de enfriamiento adiabático también alcanza el rendimiento deseado.5.64) y (12.46 Solución: El diseño del cristalizador se efectúa mediante los siguientes pasos: a) Elaboración de los balances de masa y energía. Considerando un sistema de cristalización tipo II y dos modos de cristalización: enfriamiento indirecto y enfriamiento adiabático.57) y (12. (12. no permite cumplir con la especificación de diseño que establece una fracción masa de cristales a la salida ST = 0.0. En base a lo anterior se selecciona el modo de operación adiabáticc con adición de calor externo para producir una solución más concentrada.58) para enfriamiento indirecto. los cálculos de rendimiento y fracción masa de los cristales a la salida del cristalizador.8. de tal manera que es factible la cristalización por enfriamiento.722 CAPÍTULO 12. b) Estudio cinético: Efecto del tiempo de residencia. CRISTALIZACIÓN cm 0 — mtn . sobre la distribución de tamaño de cristales.5. punto de corte de finos // y proporción de remoción de finos. aún cuando se alcanza el rendimiento deseado.63).7 sugieren una alta sensibilidad de la solubilidad del soluto a la temperatura. Los resultados correspondientes se presentan en la Tabla 12. se pueden realizar mediante las ecuaciones (12. De acuerdo a los balances de la Tabla 12. c) Dimensionamiento y especificación de equipo. Los datos de equilibrio de la Tabla 12. y mediante las ecuaciones (12.65) para enfriamiento adiabático.

ST = Ra — (1 — Rse)Rc 1 + Ra — Rse sustituyendo valores.f = 0. Rend.12.043 1 + 0.74 0. ST ST 0.8: Balances de masa y energía para Ejemplo 12.20 0.89 0.24 0.55). T°C 65 60 50 40 30 Enfriamiento Indirecto Enfriamiento Adiabático Rend.5.379 .8.7).4. en un cristalizador con calentamiento externo.22 0.83 0.5 = masa de cristales masa total .25 0.18 puede desarrollarse de la siguiente manera: En la corriente de salida.81 0.379 . se sugiere emplear una temperatura de operación de 50°C. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 723 Tabla 12.35 0.98 Considerando la conveniencia de una temperatura de operación intermedia que permita operar el condesador sin el uso de un agente condensante refrigerado.5 = 0.89 0. La presión de operación será entonces de 90 mm de Hg (Tabla 12.93 0.(1 . El balance de masa del sistema de acuerdo a la Figura 12.40 0. 0. 0.51 0. Una vez tomada la decisión anterior se puede calcular Rse mediante la ecuación general (12.Rse) x 0.95 0.Rse se obtiene: R.94 0.26 0.65 Este resultado indica que es necesario remover el 65% del solvente que entra para cumplir con ST = 0.32 0.45 0.97 0.

724 CAPÍTULO 12.76 FsRa El flujo de solvente evaporado es: .379 g/g -£bRc=0.76 kg de soluto disuelto h El balance global de soluto es: FsRa = de tal manera que: 455 ^ + 18.8.18: Diagrama de flujo Ejemplo 12. Q V1 Soí Suspensión • =0. kg de solvente _ = 436. CRISTALIZACIÓN SO'C .76 li p s _ _ ~ 0. R« =0. 455 O5 — — (5 + Sfíe) + 455 f como fíc = 0. T= 500C) entonces .65 g/g \/ Alimentación 100*C * F.7.379 ^ kg Fs = 1250 ^ // = 473.043 g/g k * C =455 Kg/h Figura 12.043 (Tabla 12.24 SRr = 18.

379 .3 g x x cal kg kg 1000 q k 9j x 0.5 h El rendimiento de acuerdo a la ecuación general (12.x 33.043) l + 0. = Rg — (1 ~ RSe)Rc RO.4.96 El balance de energía permite calcular el calor adicional necesario.043 7^ x 0. = 0.65 -r.53) es: Rend.(1 .0.379 kq 7 % x 33.12. y está dado por: Salida de calor por evaporación del solvente = -f+ + Calor liberado durante la cristalización Entrada de calor por convección Calor liberado por Salíing — Out Calor suministrado y en forma de ecuación como: FsRse\v = FsRcRse\f de tal manera que: Q = 1250^ hr n«* 0. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 725 FsR*r = 812.379 . — 0.nn -~.65 .65) x 0.3 — x ——kg kg g kg Q = 1.556 ka x (100 - 0.818 x 10 cal .0. 0.x 100 Cal kg g x 100 °9 -— kg (0.043 Rend.379 Rend.

87 -^- . la masa de cristales por unidad de volumen de solvente en la suspensión está dada por: MT = -nr-rr455 [1250-(1250xO. CRISTALIZACIÓN Los balances de masa y energía permiten determinar los requerimientos para cumplir con dos criterios de diseño: 1) Rend. > 0. De acuerdo a los balances de masa. El tamaño de cristal varía con tiempo de residencia y con el sistema de remoción de gruesos y finos.5 El problema de diseño restante consiste en determinar como cumplir con la distribución de tamaño de cristales.726 CAPÍTULO 12.G5)] 0.95 2) ST = 0. que de acuerdo al criterio de diseño al menos el 75% de la masa de cristales debe tener un tamaño mayor a 100 /¿m. Para explorar la influencia del tiempo de residencia en el tamaño de cristal deseado.84 -^r MT = 0. b) Estudio Cinético. se pueden combinar las expresiones siguientes: B° = kN(G? MT = *-£ / MT \$< para obtener la siguiente ecuación que permite relacionar r con G.

I e ¿ o / Frac.46 3 6x1. Se selecciona el tiempo de residencia de 315 min para continuar el diseño.9 se muestran los resultados del resto de los cálculos del efecto de la variación del tiempo de residencia sobre la velocidad de crecimiento.699 ( y".+ ^^.46 X~r __ (»• 87 mzn x """ / \ 0.2.1 .85): . ) (za«a) ' Vcrn.x 107 m¿n) V mtn / ^ = 2.328 '"" la longitud adimensional es: A v x (107 min) • ' v = 100 (0. masa = 1 Frac.85)2 . (2.4. masa .328 -«?.12.32 V En la Tabla 12. Una disminución mayor del tiempo de residencia podría evitar . el parámetro X y la fracción masa de cristales de longitud menor a 100 /im De acuerdo a estos resultados el tamaño de los cristales disminuye al aumentar el tiempo de residencia.85 1 + 2.3) está dada por: / 1 o 1 -A Y Frac. masa = 0. _. i 3." —min/ V ¿íw / G = 0.85 + ^-^.23 x 42.85 La fracción de masa menor a 100 f¿m es: (2. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 727 La fracción masa de cristales menores a / = 100 /¿m (Tabla 12. Esto se debe al mayor impacto de la sobresaturación sobre la velocidad de nucleación que sobre la velocidad de crecimiento.í 1 + X -f -X2 + -X3 } e~x \ ¿ Para r = 107 mzn.

8 4.019 0.8 3.328 0.009 X Adim 2. la fracción de cristales menor a 100 //ra también disminuye.9: Efecto del tiempo de residencia sobre la fracción masa de cristales menor a 100 um.52 0. se debe analizar el impacto del sistema de remoción de finos sobre ese parámetro de diseño.8 y una // = 60 /¿m son seleccionadas para el diseño final. Este comportamiento se muestra en la Figura 12.68 el consumo de la sobresaturación. La masa de cristales en el interior del cristalizador se puede obtener a partir del flujo y el tiempo de residencia en el cristalizador.728 CAPÍTULO 12. la fracción de cristales menor a 100 /¿m disminuye.2 4.32 0. Una R = 1.19.7 min 107 315 630 1260 2520 Frac. de tal manera que: ka 455 -± n Masa de cristales = (315 mm) mi . Existen varias opciones para remoción de finos que se derivan de las posibles combinaciones entre el tamaño de corte lj y el índice de remoción R. Es obvio que conforme // aumenta a R constante.094 0. T G um/min 0. provocando que este sistema de tipo II se conviertiera en un tipo I.4 3. Asimismo conforme R aumenta a // constante. masa < 100 nm 0. La figura también muestra tres combinaciones de // y R que permiten cumplir con la tercer condición de diseño que establece que el 75 % de la fracción masa de cristales tenga una longitud mayor a 100 fim.60 0. Una vez analizado el impacto del tiempo de residencia sobre el tamaño de los cristales.042 0.44 0. c) Dimensionamiento. CRISTALIZACIÓN Tabla 12.

Todos los derechos ¡servados.19: Sensibilidad del tamaño del producto al tamaño de corte e finos. . masa de cristales l< 100 Jim igura 12.. eproducida con el permiso de John Wiley and Sons. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 729 Tamaño de corte de la trampa de finos _______ 20 Hm 40 ¿im 60 Hm Frac. Tomada de: Moyers y Rousseau. Copyright ©1987. 1987.

La Figura 12. Sin embargo. . Masa de suspensión = Masa de suspensión = El volumen de la suspensión es: (2388. la forma de generar la sobresaturación o modo de operación determina en gran medida el rendimiento y la distribución del tamaño de cristales en la operación intermitente.5 4a kg 4.75 kg 0.84 -*.4. 'j f i 2388.5 kg susp.4 Cristalizadores Intermitentes La cristalización intermitente es muy utilizada en la fase de acabado de la producción de antibióticos. — 1 ZO _9_ v 1000 cm3 ' cm3 X dm3 v kg * 1000 g + 2388. CRISTALIZACIÓN Masa de cristales — 2.75 kg La masa de la suspensión en el interior del cristalizador es: .388.x l^fni 5 cm. la operación intermitente tiene una mayor .730 CAPÍTULO 12.75 kg) * s. cuyos volúmenes de producción son bajos (menores a 50 tons/dia) y la alimentación disponible es intermitente.3 arn- x ^_ 1000 g = 4786 dm3 455 4786 dm3 kg — 0.75 kg r 0..20 muestra el diseño conceptual del cristalizador. 777. ácido cítrico y varios otros productos de peso molecular intermedio. Al igual que en la cristalizcición continua.095 Productividad — Productividad El área de la sección transversal del cristalizador deberá considerar el tamaño de corte de finos que se desea separar. 12.

Tomada de: Moyers y Rousseau.'2. Reproducida con el permiso de John Wiley and Sons. Copyright ©1987. 1987. reservados. Todos los derechos .20: Diseño conceptual que satisface las condiciones de diseño del Ejemplo 12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 731 Vapor Flecha Cuerpo del cristalizador Tubo de tiro Mampara Tubo de circulación Alimentación Condensado Producto Condensado Figura 12.8.4.

CRISTALIZACIÓN dependencia de la forma como se genera la sobresaturación. .Enfriamiento a velocidad controlada para optimizar el tamaño de cristal y la pureza. y mediante el control de las condiciones de mezclado y enfriamiento.Pureza de los cristales.Rendimiento potencial de la operación. Para obtener la información relativa a la nucleación. . Esto se evita mediante el sembrado de cristales.Enfriamiento con una fuente externa de temperatura constante. Por otro lado. Debido a lo anterior. . El desarrollo de modelos y el análisis de los cristalizadores intermitentes está limitado por la disponibilidad de datos cinéticos de velocidad de crecimiento de cristales y de de nucleación. .Enfriamiento a sobresaturación constante. . En términos generales los métodos de diseño y análisis de cristalizadores intermitentes están menos desarrollados que los de los cristalizadores continuos.Curva de solubilidacl-temperatura. existe un creciente interés en los experimentos intermitentes dado que se puede obtener más información en un solo experimento y de 1 cierta forma son más fáciles que los RPMSM. .Permeabilidad del lecho de cristales. . Los experimentos con cristalizadores intermitentes sembrados permiten generar expresiones cinéticas de crecimiento cuando se suprime la nucleación.732 CAPÍTULO 12. se requiere efectuar mediciones de distribución de tamaño. \ > Uno de los principales problemas de los cristalizadores intermitentes es mantener la distribución de tamaño de cristales entre una corrida y otra. Cuando ésta se genera por enfriamiento existen varias formas de realizarlo: . el diseño de operaciones de cristalización intermitente requiere la generación de información experimental para determinar aspectos como: .Enfriamiento a velocidad de transferencia de calor constante.

disminuyendo continuamente desde su valor inicial hasta su valor al final del proceso.Distribución de tamaño de cristales. Por esta razón el enfoque de diseño utilizado en los cristalizadores continuos es poco útil para los cristalizadores intermitentes. Una de las desventajas de la cristalización intermitente sin control de la velocidad de enfriamiento. Esta curva es empleada para diseñar el sistema de control. Conforme aumenta el área de los cristales la velocidad de generación de sobresaturación por enfriamiento también se aumenta. la temperatura final o el tiempo de operación. mediante experimentos donde se varía: la concentración inicial de soluto. generando un exceso de nucleación con la consecuente disminución de tamaño de cristal dominante. Esto puede ser minimizado mediante un control de temperatura que permita una velocidad de enfriamiento variable. En enfoque emírico se supone que al inicio de la cristalización tocios los cristales tienen el mismo tamaño y se busca determinar leí dinámica . En la cristalización intermitente con enfriamiento controlado. inicialmente la generación de sobresaturación por enfriamiento es lenta debido a que los cristales son aún pequeños.12. así como efectos de incrustamiento sobre las paredes de enfriamiento que reducen la transferencia de calor. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 733 .4. Esto se debe a que las velocidades de enfriamiento son más altas al inicio del proceso. En los cristalizadores con control de temperatura se ha utilizado un enfoque empírico para determinar la curva de enfriamiento del sistema (la variación de la temperatura con el tiempo dentro del cristalizador) debido a que es difícil establecer la cinética del sistema. como la velocidad de nucleación #°. Cristalización Intermitente: Enfriamiento Controlado y Nucleación Suprimida Los balances poblacionales para cristalizadores intermitentes son más complejos debido a que tanto la velocidad de crecimiento de los cristales 6?. son función de la sobresaturación que es variable en el proceso intermitente. consiste en que este modo de operación produce generalmente un producto de baja pureza y baja uniformidad.

734 CAPÍTULO 12.67) (12. En este caso la variación de la masa de soluto de sobresaturación y el consumo de masa por nucleación pueden ser despreciados. Con este propósito es necesario realizar un balance de la cantidad de soluto de sobresaturación dentro del cristalizador el cual puede ser descrito en palabras como: [La variación de la masa de soluto de sobresaturación] es igual a [La variación de la masa de soluto de sobresaturación por efecto de la temperatura] más [La velocidad de consumo de soluto por crecimiento del cristal] más [La velocidad de consumo de soluto por nucleación] Las cristalizaciones intermitentes generalmente se desarrollan en la región metaestable para controlar el tamaño del cristal minimizando la nucleación. variable que depende de • la velocidad de crecimiento. * ( ÁT fjf f> fi \ ———: I cristal/ (12.Mas<?i total de los cristales sembrados. simplificándose el balance anterior a los dos primeros términos del lado derecho.5) y (12.68) = ÍJ-Mls + Gtf donde: MS. . Este balance puede ser expresado con ayuda de las ecuaciones (12.6) de la siguiente forma: ^ donde ÁT es el área de todos los cristales. Esto requiere que los cristales sean sembrados para iniciar el crecimiento. CRISTALIZACIÓN que debe seguir la temperatura para mantener una velocidad de crecimiento constante. ls: Longitud de los cristales sembrados. por lo tanto.

69) sustituyendo las ecuaciones (12.74) donde tf e§ el tiempo necesario para alcanzar l¡.73) donde T0 es la temperatura a la cual los cristales inician su crecimiento.72) puede ser integrada para obtener: M¿ V de* dT Gt Gt (12. Esta expresión puede simplificarse si se considera un intervalo corto de temperatura donde la variación de la solubilidad sea constante. A partir de la ecuación (12. de* _ de* dT ~dt ~ ~dT~dt combinando (12. (12. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 735 en la ecuación (12. en este caso la ecuación (12.68) y (12.68) G es la velocidad lineal de crecimiento del cristal dada por la ecuación (12.12.70) (12.70) y (12.72) dT La ecuación anterior permite obtener la variación de temperatura para mantener una velocidad de crecimiento de cristales constante. La ecuación anterior puede expresarse adimensionalmente utilizando la expresión de la longitud final del cristal. es decir.11).69) en la ecuación (12.66 ) se obtiene : de' dado que c* es función de la temperatura. + Gtj (12. lf = l.71).71) dt (12. /~i _ 1 — ~dt (c-c*) (12.4.74) se define un tiempo adimensional T dado por: .

78) combinando las expresiones (12.736 CAPÍTULO 12.76) en (12. T = Tn- V de* dT (12. de acuerdo a la ecuacio (12.76) sustituyendo (12.77) de acuerdo a la ecuación (12. (12.75) y se define una longitud adimensional 77 que caracteriza las veces que se incrementa la longitud del cristal respecto a su tamaño inicial dada por: I If-ls 1.79) suponiendo que la densidad de cristales pc permanece constante se puede derivar la siguiente expresión: M.81 y la ecuación (12.77) la masa final de los cristales menos la masa sembrada de los cristales está dada por: (12.78) se obtiene la expresión adimensional: T —-lo T J- 1 + r / r +-(7?r) 2 (12.80 la cual puede ser simplificada para ls bajos.79) se puede aproximar a: . Gt CRISTALIZACIÓN T = (12.75) y (12.76) como: 1 Mf T/3 (12.73) se obtiene: Mí. (12.77) y (12. M.

Cristalización intermitente de ácido succínico. Solución: Utilizando la ecuación (12.La potencia por unidad de volumen. de la agitación y de la geometría del cristalizador.La velocidad de punta del agitador.12. Obtener la curva de enfriamiento para ácido succínico en el intervalo de enfriamiento de 30 a 20°(7 y un tiempo de operación de 120 min. Ejemplo 12. Estos criterios plantean mantener constante entre las escalas algunos parámetros como: .La velocidad mínima del agitador que permita mantener la suspensión. varios criterios de escalamiento se fundamentan en los aspectos de mezclado. DISEÑO DE CRISTALIZADORES 737 fc^r T —T r3 (12 82) - que es la expresión de la curva de enfriamiento que permite mantener un crecimiento constante y evitar la nucleación inicial excesiva. .La agitación. Dado que generalmente el mecanismo de nucleación controlante a escala industrial es la nucleación secundaria. . .82).. .4. Escalamiento de Cristalizadores Intermitentes Para realizar el escalamiento de cristalizadores intermitentes se requiere desarrollar una expresión de la velocidad de nucleación como función de la velocidad de enfriamiento.9.

21: Curva de enfriamiento del Ejemplo 12.21 se presenta la curva de enfriamiento que genera la expresión anterior . que permite purificar un soluto mediante la formación de cristales. Inicialmente la temperatura permanece constante luego baja abruptamente. 1991).9. Existen varias formas para generar la sobre- . 12. La fuerza impulsora de la cristalización es la sobresaturación de la solución.5 Sumario La cristalización es una operación de acabado ampliamente utilizada a nivel industrial. Este comportamiento es característico de de la cristalización intermitente con control de temperatura (Qiu y Rasmuson. CRISTALIZACIÓN T-C 26- 20 40 60 80 Figura 12.738 CAPÍTULO 12. 30 -T 30-20 T En la Figura 12.

Existen varios tipos de cristalizadores que pueden ser operados ya sea en forma continua o intermitente. SUMARIO 739 saturación en la solución de interés.12. . energía y poblacionales que se realizan en este tipo de equipos. Ambos fenómenos se asocian con la cinética de la cristalización.5. El diseño de los cristalizadores intermitentes se ha desarrollado en forma más empírica que el de los continuos. La sobresaturación que se logra en el cristalizador es la fuerza impulsora tanto de la nucleación (origen de los cristales) como de su crecimiento. El diseño de los cristalizadores continuos está apoyado por los balances de masa. las cuales se basan ya sea en el enfriamiento de la solución o en su calentamiento al vacío.

16 18 20 30 40 50 70 100 140 Fondo malla (rara) 1.6 Problemas 12.42 89.045 x 7 10 num/l -h e) Resp. En esta región la variación de la .12 39. 240. cuando el cristalizador operaba en estado estacionario.42 22.. 1991) en un cristalizador RPMSM de forma cilindrica de 15. e) La densidad experimental de cristales.740 CAPÍTULO 12.22 1. con las siguientes características: Tamaño de abertura de Malla No.464 g/crn3 y un factor geométrico de volumen de 0. d) La velocidad de nucleación de cristales.04 / de solvente. a) Resp.600 0. CRISTALIZACIÓN 12. 0.82 235.En el estudio cinético de la cristalización por enfriamiento de NaiSO¿H<2O (Graber y Taboada. 491 g c) Resp.622 h.850 0. Calcular: a) La masa total de cristales en la muestra. c) La velocidad de crecimiento de cristales. El tiempo de residencia fue de 0.553.50 Los cristales tienen una densidad de 1. 253.106 Masa en la malla (9) 9.2 era de diámetro y 39 era de altura.02 7. 1.150 0..8 g/l 12.14 54.68 g / l f) Resp.22 0.212 0.000 0. se obtuvo una muestra de cristales contenidos en 2.180 1.322 mm/h d) Resp.2.12 32.1.300 0.425 0.Se realiza una cristalización intermitente enfriando una solución de ácido cítrico de 60 a 40°C. f) La densidad estimada de cristales. b) La variación del número de cristales con el tamaó de cristal.

11 b) Resp.7 cal/g°C.82) a) Resp. con factores geométricos de área y volumen de 3.546 Kg de una solución acuosa que contiene 47 Kg de FeSO* por cada 100 Kg de agua.5 Kg de FeSO^ anhidro por cada 100 Kg de agua. El tamaño final del cristal es de 1. b) La velocidad de crecimiento de los cristales. La solubilidad del sulfato a la temperatura final es de 30. El calor .2 g/cm3.6°c para obtener cristales de FeSÜ4 • 77/20. 1992). 2. PROBLEMAS 741 solubilidad de equilbrio del ácido cítrico es de 0. b) Estimar el rendimiento de la operación cuando se evapora el 3 % del peso total de la solución.9 % 12.3. c) El tiempo necesario del proceso. La sobresaturación esperada durante la cristalización es de 0. 81.77). 78. La sal cristaliza como decahidrato y presenta una solubilidad a la temperatura final de 21.4. respectivamente.7 x 10~5 g/cm3. 10.Una solución salina que pesa 10.52.54 g/cm3. La capacidad calorífica promedio de la alimentación es de 0.042 cm/h c) Resp. d) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12. a) Resp.. La concentración de cristales sembrados es de 7.5 % b) Resp. 0.4°C hasta 26.000 /¿m.000 Kg con 30% en peso de Na^COs se cristaliza en forma intermitente por enfriamiento hasta una temperatura de 20°C..12.1 y 0.En una cristalización intermitente se procesan 4. a) Estimar el rendimiento de la operación cuando no existe evaporación de agua. El crecimiento de los cristales está controlado por la difusión con un coeficiente de transferencia de masa de 4.6.18 h 12. La densidad de los cristales es de 1.5 Kg de Na^COs anhidro por 100 Kg de agua. enfriándose de 54.006 g/cm3 —°C (Bohlin y Rasmuson. Los cristales al sembrarse tienen una longitud característica inicial de 90 //m. e) La expresión de la curva de enfriamiento de acuerdo a la ecuación (12.5 x 10~5 cm/s Calcular: a) El incremento adimensional del tamaño de cristal 77.

Una solución que contiene 200 g de ácido cítrico por cada 100 g de agua. para las mallas 20..Obtener la distribución teórica de cristales de la corrida 2 del Ejemplo 12. a una temperatura de 20°C. Resp.5.742 CAPÍTULO 12. 150 y 200.. Estimar la cantidad de agua que es necesario evaporar para obtener una recuperación del 90% en esta operación. -108. Calcular: a) La masa anhidra de cristales. 100. a) Resp.7. 47 % c) Resp. cuando se desea incrementar la longitud característica del cristal de 100 a 1000 /¿?n. 4. se somete a un proceso de cristalización intermitente al vacío. 33. 35. Resp.59 g/g de agua. Resp.42 % de masa retenida en la malla 65. b) El rendimiento de la operación. 115. CRISTALIZACIÓN de cristalización de los cristales hidratados puede considerarse igual a —4. c) El calor removido cuando no hay evaporación de agua. 683.4.4 Kcal/gmol. 65. suponiendo que no existe nucleación y que la densidad del cristal permanece constante.25 g/l 12.2 Kg b) Resp. 28.6.258 Kcal 12. 0. 48. 12. A esta temperatura la solubilidad del ácido es de 0.89 % .Estimar la masa de cristales que se requiere sembrar en un cristalizador intermitente para alcanzar una densidad de cristales de 250 g/l..

W. 1988.7. Graber. y Tabeada.H.G. Application of controlled cooling and seeding in batch crystallization. 1121-1128. y Rousseau. . 1992.7 Bibliografía Belter. Me Graw-Hill. y Rasmuson. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. 1991. H. A.W. New York. New York. R. 70. Eng. A.E.W. Crystallization operations.E.C. of Chem. En: Handbook of Separation Process Technology.). C.A. Mayo 23. Eng. R. Charmolue. Nucleation and growth of succinic acid in batch cooling crystallizer. 120-126. R. Quinta edición. 102-105. En: Chemical Enginner's Handbook. Spring. y Rousseau.L. 1-58 Bennett. 273-305 Bennett. 578-643 Qiu. C. Rousseau. y Chilton. R. E. T.C. M.C. Chem. Education. 118-127. 1988. New York. y Hu. P. AIChE Journal 37. 1973. 8. Moyers. Cussler.. (Ed. R. Eng. M. Perry. laboratory. 5th Ed. 11.H. 9.12. John Wiley and Sons. Y. 1991. 1987. Chem.C. Bohlin.Serine obtained by methanol addition in batch crystallization. R. The Canadian J. Crystallization: An interesting experience in the Ch. 10. 1991. Miscellaneous Separation Processes.A. BIBLIOGRAFÍA 743 12. 17. (Eds. Matching crystallizer to material. 12931304. y Rasmuson. AIChE Journal 37.) John Wiley and Sons. W. L.

En la práctica de secado el solvente generalmente es agua y el medio hacia donde ésta se elimina es aire. el análisis del secado se basa fundamentalmente en los sistemas aire-agua. reducir su volumen o recuperar el solvente. En la sección 13. En el caso de productos biológicos una limitante en la selección del método de secado. se revisan los conceptos básicos del equilibrio (de los sistemas agua-aire. sin embargo los resultados que se logran pueden ser generalizados a otros sistemas. Siendo el secado una operación limitada por el equilibrio en la sección 13. las expresiones básicas para el cálculo de la velocidad de secado y la velocidad de desactivación de compuestos térmicamente lábiles. se revisan las formas de efectuar una operación de secado y.1 Introducción El secado es el último paso en la recuperación de ciertos productos biotecnológicos.Capítulo 13 Secado 13. Por esta razón. Tiene como propósito estabilizar el producto. Asimismo.2 sobre fundamentos.3 sobre equipo. se presentan los principales tipos de secadores utilizados en los procesos 745 . de tal manera que las alternativas para estos materiales son más limitadas. preservar su actividad. Existen varias formas de secar un material. es la temperatura que puede soportar el material de interés sin perder actividad. Consiste básicamente en la reducción del contenido de solvente del producto por medio de una evaporación o una sublimación.

2.746 CAPÍTULO 13. pued ganar o perder humedad dependiendo de la presión de vapor que ejerz el agua del sólido. entonces el sisterr estará en equilibrio. Cuando la presión de vapor del agua del solio iguale la presión de vapor de la corriente de aire. • La velocidad de secado que determina el tiempo para llevar a cabo la operación. Además. se requiere el conocimiento de la cinética de secado que depende de la velocidad de transferencia de calor y de la velocidad de evaporación. es la velocidad de desactivación del material de interés por efectos térmicos. en el caso centran su humedad aumenta. Asimismo. es necesario conocer las diferentes formas en que puede ser conducida una operación de secado. Una cinética necesaria de considerar en esta operación que no tiene paralelo en otras.4. entonces el sólido pierde humedad. SECADO biotecnológicos. . Los principios de diseño de algunos tipos de secadores se presentan en la sección 13.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas Si un sólido húmedo se expone a una corriente continua de aire. 13. • Los efectos colaterales del secado. 13.2 Fundamentos El análisis de la operación de secado requiere conocer las relaciones de equilibrio que implica la distribución de agua entre dos fases: la sólida del material a secar y la gaseosa del aire seco que sirve como medio para tal efecto. y de la presión de vapor de la corriente del air< Si la presión de vapor del agua del sólido es mayor que la presión d vapor del aire. De acuerdo a lo anterior en esta sección se revisan los siguientes aspectos de la operación de secado: • Las relaciones de equilibrio que limitan la operación. • Los métodos diponibles para realizar la operación.

2.1 y en el eje de las abscisas la humedad del sólido definida como: . FUNDAMENTOS 747 Curva de humedad en et equilibrio ligada / ligada / Humedad . en algunos caldos los solutos alteran sus propiedades o forma enlaces con sustancias orgánicas. / el equilibrio / w w Contenido de humedad. En la Figura 13. Kg humedad / Kg sólido seco Figura 13. presión de vapor del agua pura.1: Curva de equilibrio para secado de un sólido. El agua libre se caracteriza por ejercer una presión de vapor igual a la del agua pura. La presión de vapor que ejerce la humedad contenida en un sólido depende de la forma de la humedad. Se distinguen dos zonas características: la zona de humedad no ligada y la zona de humedad ligada. El agua ligada se caracteriza por ejercer una presión de vapor menor a la del agua pura.13. (13. Este tipo de agua se localiza en los espacios entre las células de los materiales o en los capilares de precipitados porosos. En el eje de las ordenadas se gráfica la humedad relativa del aire definida como: Hr = presión parcial del agua en el aire.1 se presenta una curva de equilibrio típica de un material biológico a una temperatura dada. Este comportamiento lo presenta el agua cuando está contenida en el interior de células. En la mayoría de los materiales biológicos se pueden distinguir dos formas del agua contenida en el sólido: agua libre y agua ligada. el tipo de sólido y la temperatura.

Las relaciones de equilibrio vapor de agua-aire se presentan en forma de cartas psicométricas como la de la Figura 13. ya que en un proceso de secado esta cantidad puede considerarse constante. De tal manera que la Hr permanece constante e igual a la unidad. La zona de humedad no ligada que se muestra en la Figura 13. las propiedades térmicas y las relaciones de equilibrio del solvente en el sólido y del aire que se utilice para secar. las relaciones de equilibrio de los sistemas aire-agua pueden ser utilizados para tal efecto. Un sólido con tal humedad estará en equilibrio con aire cuya presión parcial de vapor sea igual a la del agua pura. dado que éste generalmente es calentado antes de usarse. algunos de ellos referidos a la masa de aire seco. -Humedad. estas relaciones de equilibrio agua-aire son requeridas para describir el comportamiento del aire que se utiliza en la operación de secado. la cual ha sido desarrollada a la presión de una atmósfera. cuya humedad relativa sea igual a la unidad. la humedad del sólido puede ser mayor pero su presión de vapor es constante e igual a la del agua pura. Asimismo. Para utilizar adecuadamente la carta psicométrica es necesario manejar varios términos. SECADO masa agua masa seca de sólido esta definición es útil cuando la masa de sólido es constante. En la zona de humedad no ligada.1 comprende desde cero humedad hasta una humedad tal que la presión de vapor del sólido es igual a la del agua pura. A continuación se describen diez de estos términos. masa agua (13 3V masa añ'e seco Utilizando la ecuación general de los gases ideales se puede expresar la ecuación (13. es decir. En la operación de secado se requiere conocer.2. La humedad H de una mezcla aire-agua se define como la masa de vapor de agua por unidad de masa de aire seco.3) como: _ a= P-r-P \M . a diferentes temperaturas y presiones. 1. Debido a que el agua no ligada se comporta como agua pura.748 CAPÍTULO 13.

04 0.2: Carta psicométrica agua-aire. FUNDAMENTOS 749 0.10 0.12 0.2.02 O 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100 Figura 13. . Presión de una atmósfera.13.

. El porcentaje de humedad se define como la relación porcentual de la humedad con respecto a la humedad de saturación. SECADO Se puede deducir de la ecuación anterior que la humedad sólo depende de la presión parcial del agua y de la presión total del sistema.1).-Porcentaje de humedad..agua. Esto puede ser demostrado combinando las ecuaciones (13. 2. (13. MA'. Una mezcla aire-agua está saturada a cierta temperatura y presión. es decir %H = -^.6) Hs 4.6).4). PT\ Fresón total de la mezcla aire.750 donde: PA' Presión parcial del agua en el aire.5) y (13. 3. MB'. « •» y comparar este resultado con la ecuación (13. de tal manera que: donde P¿§ es la presión de vapor del agua pura a la temperatura y presión dadas y HS es la humedad de saturación.-Relación entre % H y Hr. -Humedad de saturación. cuando la presión parcial del agua en la mezcla es igual a la presión de vapor del agua pura .x 100 (13. Es necesario advertir que el porcentaje de humedad no es igual al porcentaje de humedad relativa. CAPÍTULO 13.Peso molecular del aire (29 g/mol).Peso molecular del agua (18 g/mol).

%H = 68. H.6) y los resultados anteriores. .5 mm de Hg (760.17.. El aire de una habitación tiene una temperatura de 20°(7 y la presión es de una atmósfera. (c) El porcentaje de humedad.13. % H.1.4). Aplicando la ecuación (13.1).5). (b) La humedad de saturación. 17. H = 12 mm de Hg (760 . Solución: (a) La humedad H puede calcularse. % Hr. HS. FUNDAMENTOS 751 Ejemplo 13. Calcular: (a) La humedad. (d) El porcentaje de humedad relativa.aplicando la ecuación (13.4% (d) Aplicando la ecuación (13.Cálculo de humedad a partir de datos de presión de vapor.5) mmde Hg 18 Kc Kmol 29 Kmol Hs = 0.01 Kg de agua Kg de aire seco (b) En tablas de vapor puede encontrarse que a 20°C la presión de vapor de agua es de 17.12) mm de Hg 18 29 Kc Kmol Kg Kmol H = 0.5 mm de Hg.2. La presión parcial del agua en el aire es de 12 mm de Hg.0146 Kg de agua Kg de aire seco (c) Mediante la ecuación (13.

La curva de 50 .0129 0.1 se presenta la presión de vapor para el agua pura a varias temperaturas en el rango considerado.752 CAPÍTULO 13.1400 90 84. Estos valores son obtenidos de tablas de vapor. Construir una gráfica de la humedad de una mezcla aire-agua en el rango de O a 100 °C.7577 3 2.1 se encuentran los datos de HS calculados mediante la ecuación (13.0324 0.5800 75 70.9400 60 38.3958 3.33 KPa).1521 0.1275 %Hr e 17. considerando una presión total de una atmósfera y la presión parcial del agua en la mezcla como la correspondiente a la presión del agua pura a cada temperatura. „ x 100 Ejemplo 13.2) representa la solución gráfica de este ejemplo. El valor de Hs tiende a infinito conforme la presión de vapor se aproxima a la temperatura de ebullición del agua.. Solución: En las columnas (1) y (2) de la Tabla 13. T(°C) PAS (KPa) 0.Curva de 100 % de humedad.3816 1. SECADO Tabla 13.1: Datos y solución del Ejemplo 13. En la columna (3) de la Tabla 13.0340 33 19.0640 18 5.5) a una presión total de una atmósfera (101. La curva de 100 % de humedad cíe la carta psicométrica (Figura 13.5500 95 rr "d ( Kg de agua \ \Kg aire seco J 0.0047 0.2.5 mm de tig %Hr = 68.2.57% = ^ .

. o Cs = CB + HCA donde: (13. Estimar el punto de rocío de una mezcla aire-agua con 20 % de humedad que se encuentra a 55°C y a una atmósfera de presión.7) Cs'.Capacidad calorífica del vapor de agua. Cuando una mezcla en su punto de rocío se enfría más alia de este punto.5°C en el eje T.023 tendrán el mismo punto de rocío. El punto de rocío de una mezcla aire-agua es la tempertura a la cual dicha mezcla (sin estar en contacto con agua) se satura al ser enfriada a presión total constante. de tal manera que se puede calcular el punto de rocío de una mezcla utilizando la carta psicométrica. y es el calor necesario para incrementar un grado centígrado la temperatura de una mezcla aire-vapor de agua. 1. Solución: Sobre la carta psicométrica (Figura 13.2. 5.3.Calor húmedo de la mezcla en KJ/Kg aire seco —° K. En este proceso la humedad de la mezcla no cambia. 6. El calor húmedo es la capacidad calorífica de la mezcla aire-vapor de agua.13.2) se localiza el punto 55°C y 20 % humedad.005 KJ/Kg aire seco —° K. el vapor de agua condensa formando una neblina o rocío.Cálculo del punto de rocío de una mezcla aire-agua.88KJ/ Kg vapor —° K.Capacidad calorífica del aire seco. 1. FUNDAMENTOS 753 % de humedad de la carta psicométrica puede trazarse tomando la mitad de la distancia vertical entre la curva de saturación y el eje de la temperatura.-Punto de rocío. unidad de energía. Todas las mezclas con humedad de 0. a cada temperatura. Ejemplo 13. KJ: Kilojoules. por Kg de aire seco de la mezcla. horizontalmente se avanza hacia la curva de 100 % humedad y se lee la temperatura de rocío de 26.-Calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua. CB'. C A'. .

9).884)(0. Utilizar el valor calculado para estimar el calor necesario para incrementar 15 grados la temperatura de 5 Kg de aire seco y su vapor acompañante. Q = 5 Kg de aire seco x 1. SECADO Dado que las capacidades caloríficas pueden considerarse constantes en el intervalo normal de temperaturas.8).005+ (1. puede ser calculada con la siguiente expresión: Q = mBCs&T (13.. la ecuación (13.4. Calcular el calor húmedo de una mezcla aire-vapor de agua que se encuentra a 55°C y presenta una humedad //=0. Solución: a) El calor húmedo puede calcularse utilizando la ecuación (13.08) Kg aire seco —° K CS = 1.884// KJ Kg aire seco —° K (13. Cs = 1. KJ — b) El calor necesario puede calcularse utilizando la ecuación (13.754 CAPÍTULO 13.156 — — x 15 °K : Kg aire seco —° K Q = 86.Cálculo del calor húmedo de una mezcla aire-agua.156 A g aire seco —° A .005 + 1.7) puede expresarse como: Cs = 1.7 KJ Q = 363 Kcal .8) Cuando no existe cambio de estado (evaporación o condesación) el calor necesario para incrementar la temperatura AT grados de una masa mjg de aire y su vapor acompañante.08 Kg de agua /Kg de aire seco.9) Ejemplo 13.

T0) + H\0 (13. Efectuando un balance de energía en la mezcla aire-vapor se obtiene. FUNDAMENTOS 755 7.502 KJ/Kg y la ecuación (13.. (13.-Curvas de saturación adiabática.005 + 1. En éste.Entalpia total. si se toma como temperatura de referencia TS este balance se expresa como: .3. una mezcla airevapor de agua a una temperatura T y una humedad //. El volumen húmedo es el volumen total de una mezcla aire-vapor de agua por Kg de aire seco a la presión de una atmósfera. está dada por el calor sensible de la mezcla aire-vapor de agua más el calor latente del vapor de agua a la temperatura T0. se pone en contacto con agua a una temperatura TS (menor que T).13.10) 8.0045677) (T + 273) (13. entalpia a la entrada = entalpia a la salida. Considérese un proceso como el que se muestra en la Figura 13.11) Cuando T0 — Q°C el calor latente \0 =2.00283 + 0. La entalpia total de un Kg de aire seco y su vapor acompañante referida a una temperatura T0. esto puede expresarse como: Ent.2.. = (1. = CS(T .884#)T + 2502# en la ecuación anterior T está en °C.11) se expresa como: f kJ 1 : [Kg aire seco] Ent. De acuerdo a la ley de los gases ideales el volumen húmedo puede calcularse mediante: m3 mezcla Kg aire seco VH = (0. de tal manera que la mezcla aire-vapor al alcanzar el estado estable sale con una humedad saturada HS a una temperatura TS (el aire cede calor sensible para evaporar el líquido). No fluye calor hacia dentro o hacia fuera del sistema y al fenómeno se le denomina proceso adiabático.Volumen húmedo.12) 9.

Solución: a) Sobre la carta psicométrica se localiza la temperatura y humedad que representa a la mezcla original. m ¡ ) i ¡~n i ) \ ^ Ts Figura 13.Ts) + Hs\s combinado las ecuaciones (13.2) han sido construidas utilizando la ecuación (13. Entonces esta mezcla se humidifica .8) y (13.14) Las curvas de saturación adiabática de la carta psicométrica (Figura 13. estimar: a) La temperatura y humedad final si la mezcla alcanza un 90 % de humedad.Ts) + H\s = CS(TS ..13) T . Se tiene una mezcla aire-vapor a 80°C con una humedad de 0. Ejemplo 13. ' I Salida del gas frió \**N X HS-TS Agua de reposición H 2 0 • . b) La temperatura y humedad final si la mezcla sale saturada.032 Kg de agua / Kg aire seco.5.13) se tiene: H-Hs _ _Cs_ _ (1. CS(T .3: Proceso adiabático.Saturación adiabática.005+ 1. localizadas sobre la misma linea de saturación adiabática.14). En el caso que el contacto no sea suficiente para alcanzar H$ y TS a la salida. SECADO Entrada del gas „ _ H.884#) (13. la mezcla presentará una temperatura y una humedad menor.Ts ~ ~ Xs ~ ~ \s (13.756 CAPÍTULO 13. T \ Jr x '' / A . Si este aire se enfria y humidifica adiabáticamente.

y con auxilio de la carta psicométrica. a la lectura normal del termómetro se le llama temperatura de bulbo seco).2. es posible determinar con relativa facilidad la humedad de mezclas aire-vapor de agua. Para determinar temperaturas de bulbo húmedo se puede utilizar un termómetro cuyo bulbo se recubre con una tela impregnada de agua. siguiendo una curva de saturación adiabática. se puede leer: Ts = 4Q°C Kg de agua Kg de aire seco Hs = 0.13. La lectura final de estado estacionario es la temperatura de bulbo húmedo (en contraposición. La temperatura de bulbo húmedo es la temperatura de estado estable que alcanza una pequeña masa de agua cuando se pone en contacto con una corriente de aire en condiciones adiabáticas. Si el aire no está saturado se produce un descenso en la lectura del termómetro debido a la evaporación de agua de la tela. hasta el cruce con la curva de 90 % de humedad donde se lee: T = 43°C H = 0.Temperatura de bulbo húmedo. es que mediante mediciones de temperaturas de bulbo húmedo y bulbo seco. FUNDAMENTOS 757 y enfría adiabáticamente. Para sistemas aire-agua (únicamente) la descripción del proceso adiabático del bulbo húmedo puede realizarse en forma satisfactoria mediante la ecuación de saturación adiabática. .049 Kg de agua Kg de aire seco b) Continuando sobre la misma linea de saturación adiabática hasta la intersección con la curva del 100 %. El termómetro se sujeta mediante una cuerda y se hace girar en el aire.05 10.. La importancia práctica del análisis anterior.

. sus propiedades físicas. Son utilizados para secar partículas que no toleran altas temperaturas como proteínas unicelulares y enzimas.Método no adiabático.Determinación de humedad. su tolerancia a la temperatura y los requerimientos de proceso en cuanto a la forma de operación ya sea intermintente o continua.. Los métodos de secado se pueden clasificar de acuerdo a la forma de transferir calor y eliminar el solvente en dos tipos: . Los secadores por aspersión y los secadores de tipo instantáneo operan de acuerdo a este método.2. Una mezcla de aire-vapor de agua tiene una temperatura de 70°C.01 Kg agua/Kg aire seco.758 CAPÍTULO 13. Generalmente los secadores no adiabáticos operan a presión reducida y se emplean para el secado . Recorriendo la curva de saturación adiabática de 30°C hasta la temperatura de bulbo seco de 70°C. se puede leer la humedad de 0. Calcular la humedad de la mezcla. Métodos no Adiabáticos o por Conducción En el secado no adiabático el calor se proporciona en forma indirecta por conducción a través de una pared metálica. 13. Método Adiabático Este método consiste en adicionar calor por medio de aire caliente. La temperatura de bulbo húmedo de esta mezcla es de 30°C. SECADO Ejemplo 13. Solución: Se puede suponer que la temperatura de bulbo húmedo es igual a la temperatura de saturación adiabática.6.Método adiabático.2 Métodos de Secado El método de secado que debe ser utilizado en un bioproceso depende del tipo de producto.

capa exterior'seca e impermeable. se presentan daños que afectan la calidad del producto. Cuando se seca un sólido ocurren dos procesos fundamentales y en forma simultánea: . .3 Velocidad de Secado En el diseño de secadores. donde las temperaturas de secado deben ser menores a 60° C. El fenómeno de endurecimiento se presenta cuando la velocidad de secado es muy alta y el sólido forma una capa interior húmeda y una. 13. un caso de secado no adiabático. Debido a que el conocimiento de los mecanismos básicos del secado no es completo. El secado por congelamiento.13. Los mecanismos de transferencia de masa están intimamente relacionados con el tipo de sólido a secar (homogéneo. se efectúa por sublimación de agua congelada empleando bajas presiones y temperaturas.2.2. mientras que la forma de transferir calor depende del método de secado (adiabático o no adiabático). y como vapor del sólido al aire. además de las relaciones de equilibrio.Se transfiere calor para evaporar un líquido. FUNDAMENTOS 759 de cristales y precipitados. frecuentemente es necesario efectuar mediciones experimentales de la velocidad de secado. etc).2. que impide la evaporación y el secado .Se transfiere masa: como líquido o vapor al interior de sólido. Los factores que controlan la velocidad de estos procesos determinan la velocidad del secado. 13.4 Efectos Colaterales del Secado Cuando el secado de un material no se realiza apropiadamente. deshidratación química y desnaturalización. Se emplea para secar proteínas terapéuticas que no toleran temperaturas arriba de las ambientales. granular. es necesario establecer relaciones que permitan determinar la velocidad del secado o el tiempo de secado. En el caso de productos biotecnológicos los daños típicos que se presentan en el secado son: endurecimiento.

[cal ¡mol —° K]. El tercer tipo de daño es la desnaturalización que sufren las proteínas en el secado. Generalmente es más conveniente utilizar una combinación de una temperatura baja con un tiempo alto de secado. R: constante de los gases ideales. de acuerdo a la siguiente expresión: ai donde: Pr: Medida de la concentración de la proteína no desnaturalizada. SECADO apropiado.16) que indica que entre menor sea la temperatura y el tiempo de secado menor es el grado de desnaturalización.760 CAPÍTULO 13. E: Energía de activación del material. Este fenómeno puede evitarse desminuyendo la velocidad de secado. la temperatura y el tiempo. La integración de la ecuación (13. para evitar una desnaturalización excesiva.15) entre los límites: t = t0 Pr = Pr0 •"»-"•. . [t~1]. T: Temperatura absoluta. La deshidratación química consiste en la eliminación de agua de la estructura molecular del producto y también se origina por una velocidad de secado alta. [°K]. k0: constante característica del material.15) t =t produce la expresión: Pr = Pr (13.^ ---) Pr RTJ (13. [cal /mol]. Este proceso generalmente sigue una cinética de primer orden que depende de la concentración de agua.

Pr i o In — .99 —E 1 30 min ™n"T' ' resolviendo las expresiones anteriores se obtiene: E = 23.2. se desnaturaliza en un 28 %.7. ^ 90 min Pr \ 1.22 x 10 min~ exp .91 se desnaturaliza sólo el 9 % de la enzima. I mi. i «o exp I . se desnaturaliza 63 % de la enzima.99 mo°^oK x 277° K I Pr0 -ET Pr Pr 1 = 1-10 Pr o i = 0.13. 761 Cuando se seca a 37°C por 10 min una pasta concentrada de la enzima catalasa.Desnaturalización de catalasa. = ^ — Pr0 . Estimar el grado de desnaturalización si el material se seca por 90 min a 4°C.28 Pr0 \ 1. Solución: Utilizando la ecuación (13.63 Pr. « « „ \ 10 min ¡ ™l moí-°A' ' In — ° — = &0 exp | v Pr0 . . « . utilizando la misma ecuación. ™ FI -E . Pr I —23453 caí \ 15 l In —2. .0. mol k0 = 3.16) se pueden obtener dos ecuaciones que permiten determinar los parámetros k0 y E. .453 —.0. FUNDAMENTOS Ejemplo 13.= 3. Cuando se seca a 20°(7 por 30 min. .. con T = 4°(7 y t=90 min.22 x 1015 min~l Con estos parámetros se puede estimar el grado de desnaturalización.

762

CAPÍTULO 13. SECADO

13.3

Equipo de Secado

El equipo de secado es muy variado. Los empleados en los procesos biotecnológicos se pueden clasificar de acuerdo al método de secado empleado en: • Secadores adiabáticos. • Secadores no adiabáticos.

13.3.1

Secadores Adiabáticos

Los principales tipos de secadores adiabáticos (Quinn, 1983) son: - El secador por aspersión. - El secador instantáneo. - El secador de lecho fluidizado.

Secador por Aspersión
En los equipos de secado por aspersión (Figura 13.4) es posible secar soluciones o suspensiones de sólidos, rociando éstas en un recipiente a través del cual se hace pasar una corriente de aire caliente. Los secadores por aspersión son utilizados para la producción de grandes volúmenes de productos termolábiles como enzimas, levaduras y proteínas. Uno de los componentes claves del secador por aspersión es el atomizador que permite formar pequeñas gotitas de la mezcla, incrementando notablemente el área de secado, de tal manera que el tiempo del secado sea menor que el tiempo que dura la gota en alcázar la pared del recipiente. Existen dos tipos básicos de atomizadores: Los tipos disco giratorio (15,000 a 24,000 rpm) y los tipos de eyector a presión. El primero es más empleado en los procesos biotecnológicos debido a que presentan menos problemas de taponamiento y ofrece la posibilidad de controlar el tamaño de la gota controlando la velocidad del disco.

13.3. EQUIPO DE SECADO

763

Alimentación

X*Xx'

~NvO»

V\

Calentador de aire

Figura 13.4: Secado por aspersión. Tomada de: Brocklebank, 1990.
Reproducida con el permiso de Marcel Dekker Inc. Copyright ©1990. Todos los derechos reservados.

764

CAPÍTULO 13. SECADO
Salida de aire

Calentador de aire

Figura 13.5: Secador instantáneo. Las capacidades de los secadores por aspersión son muy variadas. Las capacidades de evaporación varían de 1 Kg/h hasta 2 Ton/h de agua, con dimensiones típicas de 2 x2 x3.5 m para los modelos pequeños y de 10 x 5 x 12 ra para los modelos intermedios. Secador Instantáneo Los secadores instantáneos o flash (Figura 13.5) son utilizados para secar sólidos de baja humedad o sólidos difíciles de manejar por formar partículas muy pequeñas o ser muy pegajosos en forma seca (proteínas y almidón). En un secador instantáneo el material sólido que se va a secar se alimenta conjuntamente con aire caliente a un ducto, a través del cual el sólido viaja y se seca por acción del aire. Al final del ducto la corriente

13.3. EQUIPO DE SECADO

765

de aire-sólido se separa por acción de un ciclón. Parte de la corriente es recirculada para secar las partículas grandes que son más difíciles de secar. Si debido a su tamaño las partículas de la alimentación no pueden ser transportadas por el secador, el secador puede incorporar un molino desintegrador a la entrada del ducto de secado. Secador de Lecho Fluidizado El secador de lecho fluidizado (Figura 13.6) puede ser utilizado para secar rápidamente materiales sólidos que permitan su fluidización por medio de una corriente de aire caliente (Treybal, 1980). El material se alimenta a un lecho soportado por una malla inferior y se le hace pasar una corriente de aire caliente, de tal manera que las partículas del sólido se separan y forman una suspensión fluida, que permite su transporte hasta el punto de descarga. Los secadores de lecho fluidizado continuos pueden ser circulares, cuadrados o rectangulares en su sección de flujo. Pueden alcanzar capacidades de hasta 10 Ton/h de producto seco, mientras que los intermitentes son utilizados en escalas más pequeñas del orden de 500 Kg/carga.

13.3.2

Secadores no Adiabáticos

Los secadores no adiabáticos requieren un sistema de calentamiento y generalmente trabajan con sistemas de vacío. Los principales secadores no adiabáticos utilizados en biotecnología son: el tipo charola, el de doble cono, el tambor rotatorio y el liofilizador (De Vivo, 1983). Secador de Charola Los secadores de charola (Figura 13.7), son utilizados a escala piloto o para producciones bajas de productos de alto valor económico, suceptibles a temperaturas elevadas o a daño por manejo mecánico excesivo. En el secador de charola la muestra se coloca en las charolas y éstas dentro de una cámara. Las charolas son calentadas por medio de chaquetas de vapor y la cámara cuenta con un sistema de vacío, lo cual permite el secado de la muestra a condiciones moderadas.

766

CAPÍTULO 13. SECADO
Alimentación de los sólidos

Salida de los sólidos secos

Figura 13.6: Secador de lecho fluidizado.

Conexión de vado

Puerta

Charolas

—(Conexiones para _T~ calentamiento

JJ,

¿J,

Figura 13.7: Secador de charola.

13.3. EQUIPO DE SECADO

767

Secador de Doble Cono
El secador de doble cono es un secador giratorio al vacío (Figura 13.8), que tiene dos conos unidos por sus bases por medio de un cilindro corto. Este recipiente gira sobre un eje para inducir el movimiento del material y evitar zonas de sobrecalentamiento. El secador cuenta con un sistema de vacío para facilitar el secado. Este tipo de secador es ampliamente utilizado en la obtención de productos biotecnológicos a escala industrial.

Secador Tipo Tambor Rotatorio
El secador tipo tambor rotatorio (Figura 13.8b) es un recipiente cilindrico horizontal que no gira y el movimiento del material se realiza por acción de agitadores internos que remueven el material de las paredes calientes del tambor.

Liofilizadores

Los liofilizadores son utilizados para obtener sólidos secos de alto valor comercial. Se emplean cuando los sólidos muy lábiles o frágiles para ser tratados por un método convencional de secado o una filtración, o bien son muy solubles (sales de sodio) de tal manera que no pueden ser obtenidos por precipitación o cristalización. La liofilización ha sido empleada para la obtención de enzimas, hormonas y otro tipo de proteínas de uso farmacéutico. En un proceso de liofilización (Figura 13.9) la solución a secar con una concentración entre 5-25 % peso/volumen se alimenta a un sistema de filtrado (0.2 (¿m) para ser esterilizada y entrar al secador que opera en forma estéril. En el proceso de secado la solución primero se congela, y posteriormente se deshidrata mendiante un sistema de calentamiento y un sistema de vacío, acoplados de tal manera que el agua de la muestra siempre esté en forma sólida y su pérdida sea sólo por sublimación.

768

CAPÍTULO 13.

SECADO

conexiones para calentamiento conexión de vacío

motor

(a)

válvula de descarga

agitador

alimentación

conexión
de vacjo

\

motor válvula de descarga

(b)

Figura 13.8: a) Secador de doble cono b) Secador de tambor rotatorio.

13.4. DISEÑO DE SECADORES
placa de P--" calentamiento

769

muestra congelada chaqueta refrigerada cubierta seca núdeo congelado

producto seco

Figura 13.9: Proceso de liofilización.

13.4

Diseño de Secadores

Los métodos para el diseño de equipos de secado están íntimamente relacionados con la forma en que se transfiere el calor en el equipo y con el grado de complejidad de la descripción del mismo. Dos tipos de diseño de secadores son de particular importancia: • Diseño de secadores adiabáticos. • Diseño de secadores no adiabáticos.

13.4.1

Diseño de Secadores Adiabáticos

El diseño de un secador requiere de la determinación de valores experimentales. Para obtener experimentalmente la velocidad de secado de un material sólido, se procede a colocar una muestra en una charola, de tal menera que sólo se exponga la superficie del sólido a la corriente de aire que se utilice para secar. La variación de la humedad del sólido puede medirse por medio de una balanza. Las condiciones de secado deben ser constantes y aproximadamente iguales a las que se utilizarán a gran escala. La Figura 13.10 muestra una curva típica de un secado experimental. La Figura 13.10a muestra la variación del contenido de humedad de

770

CAPÍTULO 13.

SECADO

Tiempo

Contenido de agua

Figura 13.10: Curva de secado experimental. Tomada de: Porter ti a/, 1973.
Reproducida con el permiso de Me Graw Hill inc. Copyright ©1973. Todos los derechos reservados.

sólido (W) con el tiempo. Diferenciando estos datos se puede obtener la velocidad de secado y granearla contra el contenido de humedad como aparece en la Figura 13.10b, o contra el tiempo. Revisando la forma de las curvas de la Figura 13.10 se observan dos regiones: La región A-B de las curvas, donde la humedad del sólido desciende linealmente y la velocidad de secado se mantiene constante, llamada región de velocidad de secado constante; y la región B-C de las curvas donde la humedad decrece en forma más lenta y la velocidad de secado desminuye con el tiempo, llamada región de velocidad de secado decreciente. Las regiones características del secado pueden ser racionalizadas en

13.4. DISEÑO DE SECADORES función de los conceptos: - Agua libre en el sólido. - Agua ligada en el sólido.

771

En la región de velocidad de secado constante, se presenta la evaporación del agua libre, de tal manera que su movimiento a través del sólido por capilaridad o difusión es más rápido que su velocidad de evaporación. El secado se efectúa por evaporación de agua de la superficie saturada del sólido a través de la película estancada de aire localizada sobre éste. Cuando esta superficie empieza a perder el 100 % de saturación la velocidad de secado desminuye. El agua ligada empieza a evaporarse dentro del sólido, y el vapor a difundirse a través del sólido hasta el aire. Este proceso es más lento y por lo tanto retarda la velocidad de secado. Debido a la situación descrita anteriormente, el tiempo de secado de un proceso debe ser calculado sumando los tiempos de los períodos de secado constante y de secado decreciente. Velocidad de Secado constante Cuando el calor de evaporación en el período de velocidad de secado constante es proporcionado por aire caliente, se establece un equilibrio dinámico entre la velocidad de transferencia de calor del aire al sólido y la velocidad de evaporación. Bajo estas condiciones la superficie del sólido alcanza la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo. De acuerdo a la Figura 13.11 la velocidad de transferencia convectiva de calor q (energía / tiempo) está dada por: q = \\A(T-Ti) donde: h: Coeficiente de transferencia de calor entre la superficie del sólido y la película estancada de aire sobre ésta (análogo a los coeficientes de transferencia de masa), [cal/L2 —° —t}. A: Área expuesta al secado. [Z/ 2 ]. (13.17)

772

CAPÍTULO 13. SECADO

gas

T. H, C

Cj.Tj.Hj

Humedad hada la superficie

Figura 13.11: Transferencia convectiva de calor. T: Temperatura en el seno del aire. [°]. TÍ: Temperatura en la superficie del sólido. El flux másico de agua puede ser expresado como:

J = k(d - C)

(13.18) (13.19)

J = kp(Hi-H) donde:
J: Flux de agua. [M/L2 - t]. C{\ Concentración de agua en la superficie del sólido. [M/L3]. C: Concentración de agua en el seno del aire. [M/L3].

k: Coeficiente de transferencia de masa en la película estancada de aire sobre el sólido. [L/t]. p : Densidad de aire seco. [M aire seco/L3 de mezcla].
p: l/VH

El balance de agua en el sistema puede expresarse como:
m

dW = -JA dt

(13.20

13.4. DISEÑO DE SECADORES

773

donde m es la masa de sólido seco utilizado y W la humedad del sólido. Combinando las ecuaciones (13.19) y (13.20) se obtiene: (13.21)

dt

m

este resultado es difícil de utilizar debido a que generalmente las humedades no son medidas directamente. Entonces las humedades de la ecuación (13.21) se expresan en función de temperaturas combinando esa ecuación con el balance de energía. En un proceso adiabático la transferencia de calor del aire al sólido es igual al total del calor latente de evaporación, de tal manera que: Calor transferido = (Calor latente de evaporación) (Masa evaporada) o bien, q = XJA (13.22)

Combiando las ecuaciones (13.17), (13.21) y (13.22) se puede obtener la siguiente expresión:

esta ecuación es equivalente a la ecuación (13.21), pero está expresada en función de dos temperaturas fácilmente medibles: la temperatura de bulbo seco del aire T y la temperatura de saturación adiabática o temperatura de bulbo húmedo Tt. Se puede calcular el tiempo de secado en el período de velocidad de secado constante integrando la ecuación (13.23) entre los limites siguientes: t=O W = W0 t = tc W=WC obteniéndose:

,, \\A(T -

(13.24)

774

CAPÍTULO 13. SECADO

donde tc es el tiempo para alcanzar la humedad crítica del sólido que es la humedad a la cual termina el período de velocidad de secado constante. Para el cálculo de tc es necesario calcular h. Este coeficiente depende de la geometría del secador: En el caso de secado con flujo de aire paralelo a la superficie de un sólido y una temperatura entre 45 — 150°C, el coeficiente de transferencia de calor puede ser evaluado con la ecuación, h = 0.0204 G°-8 donde: G: Flux másico de aire. [Kg/h — m 2 )]. h: Coeficiente de transferencia calor. [Watts¡m2 —° A']. En el caso de gases en flujo turbulento y sistemas aire-agua, también puede ser utilizada la analogía de Reynolds la cual establece una relación directa entre el coeficiente de transferencia de masa y el coeficiente de transferencia calor de la siguiente forma:
k = -^ pCp (13.26)

(13.25)

donde: k: Coeficiente de transferencia de masa dado por la ecuación (13.18). p: Densidad másica total del gas. Cp: Capacidad calorífica. [cal/M—0]. La ecuación (13.24) puede ser utilizada en forma combinada con la ecuación (13.25) o con la (13.26).

13.4. DISEÑO DE SECADORES Velocidad de Secado Decreciente

775

En el período de secado de velocidad constante generalmente se evapora la mayor parte del agua contenida en el sólido, pero puede implicar sólo una pequeña fracción del tiempo total de secado. Por otro lado, el período de velocidad de secado decreciente puede involucrar una evaporación menor de agua pero una mayor fracción del tiempo total de secado. En el período de velocidad de secado decreciente la evaporación del agua (ligada) es más difícil, la velocidad de evaporación depende de su movimiento por difusión o capilaridad al interior del sólido en forma de vapor o en forma de líquido. El análisis detallado del período de velocidad de secado decreciente es complejo y su descripción se realiza en forma aproximada. Uno de los modelos más sencillos para describir este período establece una relación lineal de la velocidad de secado con la humedad, de la siguiente forma:
dt

= -aW

(13.27) v ;

donde a es una constante. La ecuación (13.27) puede integrarse entre los límites:
t = te t =t W =WC W =W
1

obteniéndose la ecuación siguiente: *-*« = -ln^
W

(13.28)

El tiempo total de una operación de secado puede calcularse sumando las ecuaciones (13.24) y (13.28):

En el diseño de secadores el cálculo del tiempo de secado permite su dimensionamiento adecuado. En el caso de los secadores por aspersión, el tiempo de secado debe ser menor al tiempo que dura la partícula en alcanzar la pared del secador, de tal manera que cuando esto ocurra la partícula ya este seca y deslice suavemente por la pared del secador. Es decir, el tiempo de secado determina el diámetro del secador.

776

CAPÍTULO 13. SECADO
Ejemplo 13.8 .- Secado en la región de velocidad constante.

Un material granular insoluble se va a secar en una charola de 45.7 x 45.7 x 2.54 cm. El material ocupa completamente la charola y se puede considerar que los lados y el fondo de la bandeja están aislados, de tal manera que el calor sólo se transmite por convección desde una corriente de aire que fluye paralela a la superficie a una velocidad de 6.1 m/s. El aire está a una temperatura de 65.6 °C y tiene una humedad de 0.010 Kg de agua/Kg de aire seco. Estimar la velocidad de secado del sólido. Solución: Para el cálculo de la velocidad de secado se utiliza la ecuación (13.23):

m dW

h

El empleo de esta ecuación requiere calcular T t , h y A. a) Cálculo de T¿. Para una humedad de H = 0.010 y una temperatura de bulbo seco de 65.60C, mediante la carta psicométrica y utilizando la linea de saturación adiabática se puede encontrar, TÍ = 28.9°C b) Cálculo de h. Se puede utilizar la ecuación (13.25) con G = vp. Para el cálculo de la densidad del aire se necesita calcular el volumer húmedo del aire. Utilizando la ecuación (13.10), , m3 de mezcla = (0.00283 + 0.00456//)(T + 273) Kg de aire seco m3 de mezcla = v(0.00283 + 0.00456 x0.01)(65.6 +273) ——; : M [Kg de aire seco

VH

VH VH

= 0.974

m3 de mezcla Kg de aire seco

La densidad de 1.0 Kg de aire seco y 0.01 Kg de agua acompañant
es:

13.4. DISEÑO DE SECADORES

777

_ 1_+0.01 El flujo másico es:

G =

s/ \
h — m2

m

G = 22,770

El coeficiente de transferencia de calor es:

h = 0.0204(22,770)°'8 Watts
h = 62.45

m2 -° K

c) Cálculo de A El calor de evaporación se obtiene de tablas de vapor a T, = 28.90C, este valor es: A = 2,433^ Kg y de acuerdo a la ecuación (13.23),
m dW dt
m c?VF A dt
es:

62.45

x x ^ x (65.6 - 28.9)°A' 2 , 4 3 3 x 1000 J

'

/^ de agua h — m2

el área de transferencia de acuerdo a las dimensiones de la charola

A = 0.457 m x 0.457 m /I = 0.209 m 2

Si se desea producir 316 Kg/h de antibiótico. de tal manera que la velocidad de secado es: dW Kg de agua m—¡— = 0. para secar una solución de antibiótico que contiene 25 % (Kg/Kg) de sólidos y se encuentra a una temperatura de 20°C. el cual sale con 5 % de humedad y a 60°C.50 % G Calentador de aire 316 JSSL de antibiótico h T = 60°C. SECADO F-(Kg/h) 25% (Kg/Kg) 758C Aire T=15 8 C H . en un arreglo como el que se muestra en la Figura 13.709 dt h Ejemplo 13. Se requiere utilizar un secador por aspersión. El aire de salida tiene una temperatura de 750C.4 Kcal/Kg — ° C y la temperatura de referencia es de 0°C.778 CAPÍTULO 13. . estimar: a) El flujo de alimentación.Secado de un antibiótico. y es calentado hasta 150°C en un intercambiador de calor utilizando vapor en forma indirecta.. La capacidad calorífica de los sólidos es de 0.12: Secador por aspersión. El aire que entra al secador es tomado de la atmósfera a 15° (7 y con 50 % de humedad.12. H= 5% Figura 13.9.

c) El flujo de aire necesario y la humedad de aire a la salida. 67(# 2 -#i) = 884 n HI puede encontrarse con los datos del aire de entrada y la carta pisicométrica de la Figura 13.005 — Kg de aire seco El balance de energía está dado por: [Entalpia de la alimentación] + [Entalpia del aire a la entrada]: . #1 .13. Agua evaporada Agua evaporada = Agua a la entrada — Agua en el producto = 1200 —. Kg _ —r.0. Solución: a) El flujo de alimentación puede ser calculado mediante un balance de sólidos.75 h ) V Kg Kg\ f n. Entrada de sólidos = Salida de sólidos ( F} í f) 9*» "^ ~~ ~ ——' i / 01.05 — h J\ Kg ) Agua evaporada = 884 -r— h c) La humedad del aire a la salida y el flujo de aire. pueden calcularse mediante un balance de masa y un balance de energía.- "^ \ f r> r\r ^^ SO ^aOS \ Kg totales J hJ \ F = 1200 I<9 h \ Kg totales J b) La cantidad de agua evaporada puede calcularse mediante un balance de agua en los sólidos. DISEÑO DE SECADORES 779 b) La cantidad de agua evaporada en el proceso.2.0.4.

005)} KJ Kg de aire seco J \4.780 CAPÍTULO 13. o.05 (60 .0)'C Kg de agua —°L = 8.187 KJ .75 „ — h ) \ Kg ) Kcal \ Kg de agua —°C = 15.005)] (150) (2502)(0.005 + (1. [Entalpia del producto] -f [Entalpia del aire a la salida] La entalpia de la alimentación está dada por: {a de sólido SECADO 0. {[1.300 I<Cal l5-0)'g h La entalpia del producto es: desóhdo 316 ..4 K9 Kg sólido -° KQ\ ( Ka de aqua\ 1200 -± 0.12).152.C J (6o -ore — Kg 316 .95 0 ] I o.884)(0.4—solido. o.8^ h La entalpia del aire a la entrada puede calcularse utilizando la ecuación (13.

. .187 KJ Kcal 18 G + 631. Este tipo de secado se efectúa al vacío para remover rápidamente el vapor formado.005 + (1. hacia el sólido que se desea secar.Secadores no adiabáticos giratorios.13. La velocidad de secado debe ser tal que evite la formación de zonas de sobrecalentamiento que dañen el material. DISEÑO DE SECADORES = 39.4.2 Diseño de Secadores no Adiabáticos En los secadores no adiabáticos la velocidad de secado depende de la velocidad de transferencia de calor.0341 Kg de aire seco 13.884)(//2)] (75)+ Kg de aire secoJ y4.3 GH-2 = h El balance de energía puede ser expresado como: (15.320 2 = 0. a través de una pared. Dos tipos de secadores no adiabáticos son de particular importancia: .33 G Kcal h 781 de igual manera la entalpia de aire a la salida es: {[1.300) + (39.4.3 GH2) resolviendo simultáneamente las ecuaciones de balance de masa y energía se obtiene: G = 30.8) + (18 G + 631.33 G) = (8152.Secadores no adiabáticos de torta estacionaria.

Conforme el sólido se seca el frente desciende. De acuerdo con el modelo el secado del sólido se logra cuando la distancia Z es igual a cero. SECADO límite del sólido sólido húmedo M Calor Figura 13.30) donde: . Secado de Tortas Estacionarias Para calcular el tiempo de secado de sólidos en charolas o en liofilizadores se puede utilizar un modelo aproximado. Este calor permite que el agua se evapore a partir de una superficie móvil localizada a una distancia Z. aumentando la zona seca.782 CAPÍTULO 13. De acuerdo con la Figura 13. se transfiere por la pared del recipiente y a través del sólido. no se transportan en el interior del sólido.13: Secado de tortas estacionarias. el calor para producir la evaporación (o la sublimación) del agua. El tiempo para lograr lo anterior se puede obtener realizando balances de energía.13. Este modelo implica que tanto el agua líquida ligada como la no ligada. Arriba de esta superficie el sólido está seco y abajo de ella húmedo. Suponiendo que la velocidad de secado es lenta. de tal manera que el calor transferido de la pared hacia el sólido es igual al valor de estado estacionario (constante) dado por: q = \iA(T0-Tz) que para el caso de sólidos puede ser expresada como: (13.

32) e integrando entre los limites. [cal/L — t—°]. A: Calor de evaporación. T0: Temperatura en la base de la charola. K: Conductividad térmica. [L2].13A. q: Flujo de calor.32) donde: A: Área de la sección transversal de la charola. todo el sólido está seco y Z — O. [cal/M]. [°]. t =t se obtiene: Z= Z (13. Combinando las ecuaciones (13. [M/L3]. 783 El calor transferido puede ser relacionado con el movimiento del frente de secado por medio del balance de calor en estado estacionario: [Calor transferido] = (Agua e vaporada) (Calor de evaporación) o en forma de ecuación: (13. [°j. [cal/t]. p0: Concentración de agua ligada y no ligada por volumen de sólido mojado. TZ' Temperatura en el frente de secado. [cal/ L2 — t—°].33) al final de la operación cuando t = t j .31) y (13. la ecuación (13.33) se puede expresar como: . DISEÑO DE SECADORES h: Coeficiente de transferencia de masa.

Secado Giratorio La descripción del secado en equipos giratorios como los secadores de tipo tambor o los de doble cono.784 CAPÍTULO 13. La carga de materia se mueve constantemente. es decir: Í A Piloto V / Industrial 3 Esta ecuación supone que las condiciones a nivel piloto son iguak a las de nivel industrial: Las temperaturas. expresándola de la siguiente manera: Z [ (2K(T. Si el espesor se dobla el tiempo de secado se incrementa cuatro veces. de tal manera que las partículas contactan h superficie caliente en forma intermitente y en repetidas veces. durantí su residencia en el equipo de secado. se mantiene constante al cambiar de escala. es más compleja. como porcentaje o fracción de la zona seca 0.34) Este resultado indica que el espesor de la torta es un factor importante en el tiempo de secado. La ecuación (13. los niveles de vacío.33) también puede utilizarse para calcular la evolución del secado con el tiempo. y ' porcentaje del volumen total que es ocupado por el sólido. por el área de secado por unidad de volu men.w )'] (13 35) ' El análisis anterior es sencillo y útil como punto de partida en el diseño de secadores no adiabáticos. El diseño de este tipo de secadores se basa en determinaciones ex perimentales a nivel piloto y un escalamiento considerando que el pro ducto del tiempo de secado. .-TZ)\Y 0 -T i -I = 1 p. SECADO [K(T0-TZ)\ (13.

En el secado adiabático se agrega aire caliente directamente sobre el material que se desea secar. el secador instantáneo y el de lecho fluidizado. . El secado no adiabático se realiza mediante un calentamiento indirecto del material de interés. SUMARIO 785 13. Existen diversos equipos de secado. Consiste en una reducción del contenido de humedad de los sólidos con el propósito de mejorar su estabilidad.5. Las formas de realizar una operación de secado se clasifican en adiabáticos y no adiabáticos. tambor rotatorio y los liofilizadores.13. El diseño de los secadores está basado en una combinación de la teoría de secado y datos experimentales obtenidos directamente con el material de interés. Los secadores adiabáticos más utilizados son el de aspersión.5 Sumario El secado es una operación empleada en la preparación final de los productos. reducir su volumen y preservar su actividad. de doble cono. Entre los no adiabáticos se pueden citar los secadores tipo charola. los cuales se pueden clasificar mediante la forma en que se realiza el secado.

.Se desea secar aire con temperatura de bulbo seco de 37. (a) Calcular la humedad y porcentaje de humedad iniciales. (b) Calcular la humedad y el porcentaje de humedad finales.3.6 Problemas 13. Resp.9 °C.75 m/min.6°C y una temperatura de bulbo húmedo de 32. hasta su humedad crítica de 0. Resp.786 CAPÍTULO 13.2 Kg de agua/Kg de sólido seco. se encuentra a 32.2.Una mezcla ai re-vapor de agua tiene una temperatura de bulbo seco de 65...Una torta de filtrado se coloca en una charola de 30.765 Kg de un alimento mediante.2 °C.6 °C y su temperatura de bulbo seco es 48.%H = 60% 13. H = 0.0115 Kg de agua/Kg de aire seco.5. Resp.5 x 2. se obtuvieron los siguientes datos: .3 h 13. El aire fluye en forma paralela a la superficie con una velocidad de 45.2 °C y a una atmósfera de presión.5 % (b) 68. enfriando primero a 15. Se seca por la parte superior con aire cuya temperatura de bulbo húmedo es de 26.186 m 2 de área.4.7 °C.0175 Kg de agua/Kg de aire seco 13.En el secado de una muestra de 3.. (a) 67. t = 13. Estimar el tiempo para pasar el sólido de una humedad inicial de 0. Calcular: a) El porcentaje de humedad del aire de la habitación. b) El porcentaje de humedad relativa.54 cm.09 Kg de agua/Kg sólido seco.8 °C y temperatura de bulbo húmedo de 26. (b) H = 0.1.6 °C para condensar vapor de agua y después calentándolo a 23.. SECADO 13. Calcular la humedad de la mezcla.5 x 30.El aire de una habitación tiene una humedad H de 0.9 °C.un flujo de aire sobre la superficie superior de una charola d< 0.9 % 13.021 Kg de agua Kg aire seco. Resp.

d) Estimar la humedad crítica. f) Estimar el tiempo para disminuir la humedad del sólido de 0.05 Kg/Kg] f) Resp.4 2.0 4.699 4.4 0.404 4.13.17 Kg/Kg] e) Resp.2 3.150 4.0 Peso (Kg) 4. b) Obtener la velocidad de secado en cada punto y granearla contra la humedad del sólido.241 4. e) Estimar la humedad de equilibrio. c) Resp.944 4.09 Kg/Kg. 0.6. c) Estimar la velocidad de secado en el período de velocidad constante. d) Resp.978 3.0 7. PROBLEMAS Tiempo (h) 0.885 4.808 4.25 a 0.8 1.0 0. 0.2 5.0 12.m2.019 3.1 h .0 9.955 787 a) Granear los datos de humedad del sólido W contra el tiempo. 0.996 Kg/h . 4.554 4.

Principies. Brocklebank. New York. 317-330. De Vivo.). (Ed. New Jersey. J. John Wiley and Sons.788 CAPÍTULO 13. R. 1988. En: Chemical Engineer's Handbook. M. 20. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook.L. 723-791. 617-740. Process Design.. D. Vogel. W. and Equipment. (Ed. H. McCormick. Nonadiabatic drying. H. J. 19. 12. New York.E. and Equipment. P.. En: Fermentation and Biochemical Engineering Handbook. 5th Ed.). Asenjo. (Ed. (Eds..L. Operaciones de Transferencia de Masa. Noyes Publications.). Principies. Me Graw Hill. 1973.A. Bioseparations: Downstream Processing for Biotechnology. E. . y Hu. Process Design. Quinn. México. Treybal. Me Graw Hill. Gassolid systems. Porter.E.A. 11.C. y Chilton C. Marcel Dekker. New Jersey. Adiabatic drying.C. y Wells. 331-362. Cussler.H. R. 1983. En: Separation Processes in Biotechnology. 1-121. SECADO 13. 307-333. New York. P. 11. 2 ed.7 Bibliografía Belter. Downstream processing plant and equipment.Y. J. 1990. 1980. H. Vogel. Perry.H. 1983.). Noyes Publications. 12. R.F.P.J. Lucas.

En las operaciones de liberación de producto es muy importante la naturaleza de la membrana y pared celular. en este apéndice se presenta una descripción general de la estructura y función de las células y sus principales compuestos.3 se presentan las principales moléculas biológicas: proteínas.l Introducción En los procesos de bioseparación los productos finales pueden ser células enteras. En la sección A. las cuales 789 . Con el propósito de resaltar algunas características básicas de los productos biotecnológicos. Finalmente en la sección A.2 Células y Virus En 1938 Matthias Schleiden y en 1939 Theodor Schwann establecieron que las plantas y los animales están compuestos de células. selección y manejo de las operaciones de bioséparación.2 de este apéndice se abordan algunos conceptos básicos sobre la estructura celular.Apéndice A Material Biológico A. precipitación. A. lípidos. azúcares y ácidos nucleicos. sólo para citar algunos ejemplos. en la sección A. compuestos extracelulares o compuestos intracelulares. electroforésis es necesario conocer las cargas externas de los productos. El conocimiento de las características básicas de estos productos es fundamental para el diseño. en la adsorción.4 se establece la forma como puede describirse el crecimiento celular.

a pesar de no constituir propiamente organizaciones celulares. Sólo se forman células nuevas a partir de células preexistentes. operando bajo el principio de máxima economía en cuanto a partes y procesos. permite afirmar que un organismo vivo es un sistema abierto.790 APÉNDICE A. Recientemente el hombre ha sido capaz de modificar el contenido genético de las células mediante la transferencia controlada de genes. Todos los seres vivos están compuestos de células y productos celulares. 1961). 2. por medio de catalizadores orgánicos que ellos mismos producen (Lehininger. desde los unicelulares hasta los vegetales y mamíferos. En la actualidad la teoría celular comprende dos ideas básicas: 1. isotérmico. de moléculas orgánicas autoensamblables. Los virus constituyen también una entidad biológica de gran importancia biotecnológica. 1989). En esta sección se revisan las características básicas de cuatro tipc de organizaciones biológicas que participan en las bioseparaciones: • Células procarióticas • Células eucarióticas • Células recombinantes • Virus . el cual promueve múltiples reacciones secuenciales para la transferencia de energía y para la síntesis de sus componentes. Los organismos vivos pueden clasificarse dependiendo de la estructura y complejidad de sus células en procariotes y eucariotes. Dentro de estas categorías se han agrupado desde los más simples hasta los más complejos. creando las células recombinantes. MATERIAL BIOLÓGICO son la unidad básica de los seres vivos (Brachet. El conocimiento actual de los organismos vivos. autorregulables y autoreplicables.

A. zona nuclear. en ellas se lleva a cabo la traducción del mensaje genético para realizar la síntesis de proteínas. Bacterias Las bacterias son los organismos procarióticos de gran importancia biotecnológíca. Es en las moléculas de DNA donde se almacena la información genética que le permite a la célula reproducirse y vivir. péptidos y lipoproteínas. El citosol es todo el material celular contenido por la membrana.1 Células procarióticas Las células procarióticas son las primeras células que surgieron de la evolución biológica. membrana. Los ribosomas son estructuras supramoleculares conformadas por dos subunidades. es una estructura que encierra a toda la célula incluyendo la membrana plamática y aparece en algunas células procarióticas. CÉLULAS Y VIRUS 791 A. Los granulos están compuestos de polisacáridos y funcionan como almacenes de combustible. y su función es darle protección a la célula La membrana plasmática de las células procarióticas delimita a la célula y está compuesta por un 45% de lípidos y un 55% de proteínas. son tan sencillas que poseen únicamente una membrana celular y no contienen núcleo. Aún cuando existen miles de especies diferentes de . coli) que es una procariote típica. así como sus principales componentes: pared celular. Esta membrana es una característica común a todas las células y tiene funciones únicas. La Figura A.2. ribosomas y granulos. Las dimensiones típicas de estas células van de 0. La región nuclear está desprovista de membrana. Dentro de los organismos procariotes se encuentran las bacterias y las algas cianófitas. Está compuesta de polisacáridos. razón por la cual en ocasiones el material nuclear (ácido desoxirribonucleico o DNA) puede agruparse en más de una región.5 a 3 finí. La pared celular o membrana externa.2.l muestra la estructura de una célula de Escherichia coli (E. entre las que destaca su papel como barrera altamente selectiva en la regulación del transporte de moléculas hacia adentro y hacia afuera de la célula.

MATERIAL BIOLÓGICO Figura A. . a) pared celular b) membrana plasmática c) zona nuclear d) ribosomas e) granulos f) citosol. coli).l: Estructura típica de una célula procariote (E.792 APÉNDICE A.

En el segundo caso cobra especial importancia el conocimiento que se tenga sobre las estructura de la pared y de la membrana celular. En particular. y temperaturas entre O y 92°C'.0 firn de ancho por 2 a 3 //ra de largo. CÉLULAS Y VIRUS 793 bacterias. proteínas y nucleótidos. 1985). Metabolitos primarios como aminoácidos. así como el de la ubicación del producto. se pueden presentar dos casos: que la bacteria excrete el producto como parte de su metabolismo.5 a 1. Metabolitos secundarios como antibióticos. sin embargo presentan una gran diversidad fisiológica que les ha permitido desarrollarse en una gran variedad de habitats. . o que el producto permanezca dentro de la bacteria. a las que presentan forma esférica se les llama cocos y presentan un diámetro del orden de 1 fim. las células de estos organismos se caracterizan por presentarse solamente en una de tres formas diferentes: esférica o elipsoidal. Los productos que se obtienen mediante la fermentación con células procariotes pueden ser: Biomasa o protema unicelular.A. A las que tienen forma de bastón se les llama bacilos y tienen dimensiones del orden de 0.2 se presenta una comparación de las principales características de estas bacterias(Tortora et a/. Las diferencias morfológicas entre las bacterias no son muchas. Productos finales como solventes y ácidos. ya que el proceso de bioseparación que se diseñe debe contemplar la ruptura de la célula.l se presentan algunas de las células procarióticas que se utilizan para producir productos finales y metabolitos. En el estudio de la pared celular de bacterias se ha empleado la técnica de tinción de Gram que ha permitido clasificar a las bacterias en bacterias Gram positivas (Gram-(-) y bacterias Gram negativas (Gram). cilindrica o de bastón y helicoidal o de espiral. pigmentos y polisacáridos. 1989). Al utilizarse una bacteria para obtener un producto biotecnológico.2. En la Tabla A. En la Tabla A. siendo capaces de desarrollarse tanto en condiciones aeróbicas como anaeróbicas (Millis. soportando pH's en el rango de 1 a 11.

ammoniagenes B. B. eriytkreus 5. B. Todos los derechos resé vados. Copyright ©1985. subtilis E. canamyceticus S. B. lincolnensis 5. coli. gluiamicum " " " " Lactasa Penicilin acilasa Peuiciliiiase B. circularía A. griseus S. carotovora M.eniform. aureojaciens B.Glucanasa Glucosa isomerasa C. 1985. subtillis ammoniagenes subtillis ammoniagenes L. coli E. ovalis L. coli E.l: Productos obtenidos de organismos procarioticos Producto Organismo Producto Enzimas Amilasa Asparagiiiasa Catalasa Fumarasa (3. megaterium B.794 APÉNDICE A. polymyxa B. coagulants E. subtilis B. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. . fluorescens Antibióticos de Bacilos Colistina Gramicidina S. mussouriensis B. mobilis Fuente: Millis.is Nucleótidos Acido guanílico Acido Xantílico Polisacáridos Dextran Xantana B. venezuelae 5. brevis B. Bacitracin Antibióticos de Estreptomices Cloranfenicol Eritromicina Kanamicina Lincomicina Estreptomicina Tetraciclina 5. B. lysodeikticus B. subtilis Organismo Ácidos (orgánicos) Acético Glucónico Láctico 2-Oxoglucónico Ácidos (amino) Glutámico Isoleucina Leucina Lisina Valina A. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. aceti P. lich. delbrueckii P. campestris Solventes/combustibles Acetona Etanol C. acetobutylicum Z. mesenteroides X.

CÉLULAS Y VIRUS 795 Tabla A.2: Características comparativas de las Bacterias Gram-f y Gram-.2. Característica Reacción Gram Gram-Positiva Gram-Negativa Puede ser decolorada Retiene el cristal violeta y permanece y permanece roja de color púrpura Gruesa (multicapa) Delgada (simple) Virtualmente no tiene Bajo Abundantes Ausente Ausente Exotoxinas primarias Alta Alta Marcada Alta Alto Alto Ausentes Presente Presente Endotoxinas primarias Baja Baja (requiere pretratamiento) Mucho menos marcada Baja Capa de peptidoglucano Contenido de lipopolisacáridos Contenido de lípidos y lipoproteínas Ácidos teicoicos Espacio periplásmico Membrana exterior Producción de toxinas Resistencia a rompimiento físico Rompimiento de la pared celular por lisozima Suceptibilidad a detergentes amónicos Resistencia a secado .A.

2. Son células de mayor tamaño que las proca riotes alcanzando diámetros hasta de 20 jum. En las paredes de las células Gram-positivas la capa de peptidoglucano es mucho más gruesa que en las células Gram-negativas. entrecruzadas covalentemente por medio de cadenas peptídicas. En las células eucariotica: las funciones se llevan a cabo en organelos. protozoarios y hongos. En estas últimas la capa de peptidoglucano se encuentra localizada en el espacio periplásmico enlazándose covalentemente a las lipoproteínas de la capa exterior de la pared celular. algunas de las más relevantes son las siguientes: . las cuales no atacan a los péptidos que contienen D-aminoácidos como los que se encuentran en la estructura de la pared (D-alanina. los organismos superiores como los vegetak y los animales. La unidad básica que se repite en la estructura del peptidoglucano es la de disacárido constituido por N-acetil-D-glucosamina y el ácido Nacetilmurámico.796 APÉNDICE A. recibe el nombre de peptidoglucano o mureína. en ambas existe un rígido esqueleto que está constituido por cadenas polisacáridas paralelas.célula animal y célula vegetal.3 se presentan esquemas de células eucarióticé típicas: .2 Células Eucarióticas La célula eucariótica tiene un alto nivel de organización y presenta une estructura muy compleja. animales. La estructura del peptidoglucano de la pared celular bacteriana es resistente a la acción de las enzimas que hidrolizan los péptidos.2) poseen una característica molecular común. El espacio periplásmico esta constituido por una sustancia semejante a un gel.(Figura A. cada uno de los cuale realiza una función específica y está limitado por una membrana propia Son células que tienen un núcleo verdadero. ya que éste esta confinadpor la membrana nuclear. Este rígido armazón. De este tipo de célula están constituidos además. puede verse en la figura qi existen algunas diferencias esenciales entre las células vegetales y 1. A. En la Figura A. MATERIAL BIOLÓGICO Las paredes celulares de las bacterias Gram-f y Gram. Dglutamina). que contiene una alta concentración de enzimas degradativas y proteínas de transporte. Los microorganismos constituidos de célula eucariotes son: algas.

2: Estructura de la pared celular bacteriana. . a) bacterias Grarn-).b) bacterias Gram-.A.2. CÉLULAS Y VIRUS 797 pared celular capas de peptidoglucano (a) fosfolípido proteina capa de peptidoglucano lipoproteína lipopolisacarido fosfolfpido pared celular S membrana plasmática (b) fosfolípido Figura A.

3 se presenta una descripción de las estructuras celulares comunes a todas las células eucarióticas.798 APÉNDICE A. y sus funciones. mientras que los mohos se utilizan en le producción de ácido cítrico y antibióticos. En la Tabla A. la velocidad de crecimiento en las células animales es baja Su crecimiento presenta inhibición por contacto. En el caso de las células eucariotes además de las células de organismos superiores. Las células vegetales presentan cloroplastos. constituida por celulosa. El cultivo de células animales presenta problemas que aú: no se solucionan del todo y se encuentra en una etapa de desarrolle .4 se presen tan algunos productos obtenidos a partir de algunas célula eucariote: (levaduras y mohos). Recientemente también las células eucarióticas animales han sid( utilizadas en los procesos biotecnológicos. por ejemplo en \¿ producción de bebidas y pan. cuya función es similar a la de las células procarióticas: brindar protección a la célula. MATERIAL BIOLÓGICO En las células vegetales existe una rígida pared celular. Las células animales no presentan pared celular. Las levaduras son ampliamente usadas. A diferencia de las células mi crobianas. En la Tabla A. que son los organelos en los cuales se lleva a cabo la captura de la energía solar y la conversión de la misma en energía química durante el proceso fotosintético. interesan particularmente los hongos. Las células animales presen tan varias formas dependiendo del tipo de tejido al cual pertenecen ^ su diámetro aproximado es de 20 //m. En la sección anterior se prestó atención especial a las bacterias pues este tipo de microorganismos es de particular interés en la biotecnología. Los mohos son hongos superiores con estructuras vegetativas llamadas miscelios. Los hongos son microorganismos de dos tipos: mohos y levaduras. Las levaduras tienen forma elipsoidal y miden de 1 a 5 fj. Con frecuencia la células animales se cultivan o crecen formando tumores y actualment se están desarrollando nuevas técnicas tanto para su cultivo como par su cosecha. presentan un diámetro entre 5 — 1 5 fim y una longitud entre 50 — 5000 /ira.m. Los cloroplastos están ausentes de las células animales.

CÉLULAS Y VIRUS 799 Cuerpo de inclusión Citoplasma Vacuola Membrana celular Tilacoides Cloroplasto Figura A.A. b) célula vegetal.3: Células eucariotes típicas: a). . célula animal.2.

hongos y algas) Lisosomas Vacuolas .3: Estructuras comunes de las células eucarióticas y sus funciones. Transporta y almacena material ingerido. regula el paso de materiales hacía dentro y fuera de la célula. desperdicios y agua. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. Contiene al citoplasma. contiene nucléolo y cromosomas Cuerpo granular dentro del núcleo. Sitio de síntesis de lípidos y de proteínas de membrana. ayuda a mantener la forma celular. algunos unidos al RE. otros libres en el citoplasma Compuesto de saculacioiies membranosas planas Sacos membranosos (en animales) Sacos membranosos (en plantas. Estructura Descripción Función Núcleo Celular Núcleo Nucléolo Gran estructura rodeada por una doble membrana. que acarrean proteínas en proceso de secreción. empaca (para secreción) y distribuye proteínas a vacuolas y a otros organelos. Control de la célula Lugar de síntesis ribosómica. Cromosomas Sistema de Membranas de la Célula Membrana Celular Membrana limitante de la Célula viva Retículo endoplasmático (RE) Red de membranas internas que se extienden a través del citoplasma Ribosomas Aparato de Golgi Granulos compuestos de RNA y proteínas. las secreciones y desperdicios celulares. Síntesis de polipéptidos (proteínas) Modifica. Contiene enzimas que degradan material ingerido. ensamble de subunidades del ribosoma Contienen genes (unidades de información hereditaria que gobiernan la estructura y actividad celular).800 APÉNDICE A. consta de RNA y proteínas. origen de vesículas intracelulares de transporte. comunica a la célula con otras. Compuestos de un complejo de DNA y proteínas llamado cromatina.

A. niger A. A. chrosogenum A. ochraceus. nigricans. niger. oryzae. oryzae.ei A.2. 11 y 15 C. niger M.4: Productos obtenidos de organismos eucariotes Organismos Ácidos Cítrico Furnárico Glucónico Antibióticos Cefalosporina (C y P) Zeranol Penicilinas Enzimas a— Amilasa Catalasa Glucosa oxidasa Invertasa Lipasa Proteasa .Neutra Solvente/combustible Etanol A. lunata. A. niger S. cereviseae Conversión de esteroides Deshidrogenación en 1 y 2 C. cereviseae A. R. niger Vitaminas Riboflavina Adaptada de: Millis.Acida .ieh. oryzae A. acremonium F. A.Alcalina . radicóla Hidroxilación en F. niger C. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. oryzeae. A. niger A. oryzae. A. oryzae S. rn. A. 7. A.9. Todos los derechos reservados. niger R. A.A. Copyright ©1985. CÉLULAS Y VIRUS 801 Tabla A. javanicum 6. nigricus A. oryzae. 1985. niger A. gossypii . graminearum P.

3 Células Recombinantes La manipulación de la molécula de DNA utilizando técnicas de inge niería genética ha permitido transformar células silvestres en célula recombinantes.2. interferones.802 APÉNDICE A. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. Reproducida con el permiso de Elsevier Science Inc. sólo que a las células recombinantes se le ha transferido o adicionado uno o más genes. Copyright ©1985. vacunas. Todos los derechos reservados.5: Productos obtenidos de células animales Producto Interferón Urokinasa Vacunas virales: Influenza Enfermedad de Newcastle Rubéola Fiebre amarilla Adaptada de: Millis. insulin humana. con el propósito que 1 célula exprese la información que está codificada en tales genes. Los microorganismos más utilizados para producir células recomb nantes son las bacterias y en particular la E. A. coli. entre otros. De est manera. 1985. activador del plasminógeno tisular. por medio del cultivo de células recombinantes ha sido posibl la obtención de productos tales como hormona de crecimiento. . La organización celular de la recombinante es la mism que la de la célula natural.5 se presentan algunos productos obtenidos a partir de este tipo de células. anticuerpos monoclonales. Linea celular Leucocitos humanos Riñon humano Fluido Fluido Fluido Fluido de de de de embrión embrión embrión embrión de de de de pollo pollo pato pollo En la Tabla A. Debido a la simp cidad de las células procarióticas y a su alta velocidad de crecimient ha sido posible aplicar exitosamente en estas células las técnicas de ingeniería genética.

03 — 0. Su tamaño varía entre 0. A.000. Son las moléculas orgánicas más abundantes en la célula. constituyen el 50% o más de su peso seco. El virus carece de membrana y no tiene citoplasma. .6 se listan algunas proteínas de estos tipos y se especifican sus funciones. Los virus constituyen un material biológico cuya única función es la autoreplicación.000 daltons. lo cual ocurre únicamente cuando parasitan a una célula. De acuerdo a su conformación las proteínas pueden clasificarse en fibrosas y globulares. BIOMOLECULAS. 3 Biomoléculas.1 //m y su importancia radica en que son ampliamente utilizados en la producción de vacunas. En esta sección se estudia la estructura y principales propiedades de cuatro tipos de moléculas constituyentes de las células: • Proteínas • Carbohidratos • Lípidos • Ácidos nucleicos A. En la Tabla A.000 y 40. Cada protema tiene en su forma nativa una forma tridimensional característica llamada conformación. El peso molecular de éstas oscila entre 5.4 Virus.2. Existen muchas clases diferentes de proteínas y cada una de ellas se especializa en una función biológica diferente. Su genoma puede estar constituido por DNA o RNA pero nunca por ambos y constar de una o dos cadenas.3.1 Proteínas Las proteínas son polímeros de alto peso molecular formadas por subunidades llamadas aminoácidos. 803 A. El genoma se encuentra encerrado dentro de una cápsula constituida de proteína.A. En general los virus se clasifican por sus características morfológicas.3.

fluido sinovia! .6: Clasificación de las proteínas por su función biológica Tipos y ejemplos Enzimas: Hexoquinasa Citocromo c DNA-polimerasa Proteínas de reserva: Ovoalbúmina Caseína Ferritina Proteínas de transporte: Hemoglobina Mioglobina Seroalbúmina /?i-Lipoproteína Localización o función Fosforila glucosa Transfiere electrones Replica y repara DNA Proteíiia de la clara de huevo Proteína de la leche Reserva de hierro en el bazo Transporta O-¿ en la sangre de los vertebrados Transporta O-¿ en el músculo Transporta ácidos grasos en la sangre Transporta I/pidos en la sangre Proteínas contráctiles: Miosina Dineína Proteínas protectoras en la sangre de los vertebrados: Anticuerpos Fibrinógeno Trombina Toxinas: Toxina diftérica Venenos de serpiente Gosipina Hormonas: Insulina Hormona adrenocorticotrópica Hormona del crecimiento Proteínas estructurales: Proteínas de recubrimiento viral Glucoproteíiias a-Queratina Colágeno Elastina Mucoproteíiias Filamentos estacionarios en las miofibrillas Cilios y Bájelos Forman complejos con proteínas extrañas Precursor de la fibrina en la coagulación sanguínea Componente del mecanismo de coagulación Toxina bacteriana Enzimas que hidrolizan los fosfoglicéridos Proteína tóxica de la semilla de algodón Regula el metabolismo de la glucosa Regula la síntesis de corticoesteroides Estimula el crecimiento de los huesos Cubierta alrededor del cromosoma Recubrimientos celulares y paredes Piel plumas uñas pezuñas Tejido conectivo fibroso (tendones. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. carflago) Tejido conectivo elástico (ligamentos) Secreciones mucosas.804 APÉNDICE A.

también los anticuerpos. las proteínas se dividen en simples y conjugadas. 7% de hidrógeno. Las simples son aquellas que por hidrólisis producen solamente aminoácidos y contienen generalmente 50% de carbono. Dependiendo de su composición. sino también algunos componente orgánicos o inorgánicos. 23% de oxígeno. 16% de nitrógeno y de O a 3% de azufre. Ejemplos de esta clase de proteínas son el colágeno. De acuerdo a la naturaleza química de este grupo las proteínas conjugadas se clasifican en los seis grupos que se muestran en la Tabla A. Todas las enzimas son proteínas globulares. la a—queratina y la elastina.3.7: Clasificación de las proteínas conjugadas Proteína Conjugada Nucleoproteína Lipoproteína Glicoprote/na Hemoproteína Flavoproteína Metaloproteína Grupo Prostético Acido nucleico Lípido Oligosacárido Hierro Nucleótido de flavina Metal 805 Las proteínas fibrosas son insolubles en agua y en soluciones salinas diluidas. lo que sugiere que la función de cada una de ellas puede estar determinada por la secuencia de aminoácidos de su cadena polipéptidica. Las proteínas globulares por regla general son solubles en agua y tienen una función activa dentro de la célula.A. Todas las proteínas que se conocen tienen funciones diferentes dentro de la célula y están constituidas por únicamente 20 tipos de aminoácidos. 1991). físicamente son muy resistentes y constituyen los elementos estructurales básicos del tejido conjuntivo de los animales superiores. BIOMOLECULAS. Tabla A. algunas hormonas y muchas proteínas de transporte como la hemoglobina. . En consecuencia es importante conocer la estructura de los aminoácidos que las constituyen. Las conjugadas son aquellas que por hidrólisis producen no solamente aminoácidos. La porción no aminoácida de la proteína conjugada se denomina grupo prostético.7 (Palmer.

Aminoácidos con grupos R polares: Un grupo R polar tieri carácter iónico y es hidrofílico. Los a— aminoácidos se han clasificado en base a la polaridad de sus grupos R. enteramente covalente y es hidrofobia). isoleucina. puesto que el grupo amino está sobre el átomo de carbono a. excepto la prolina. De acuerdo a esta clasificación existen dos clases principales de aminoácidos: con grupos R no polares y con grupos R polares. Los grupos polares pueden s< . Aminoácidos con grupos R no polares: Un grupo no polar e. MATERIAL BIOLÓGICO H I R-C-COOH I NHa Figura A.806 APÉNDICE A.4 muestra la estructura general de los 20 aminoácidos que se encuentran en las proteínas. el grup> R del último contiene azufre y los dos restantes contienen un anill aromático dentro del grupo R. es más soluble en agua que un n polar debido a que en soluciones acuosas su estructura puede ser e.4: Fórmula de la estructura general de los a— aminoácidos encontrados en las proteínas Aminoácidos La Figura A. valina. triptofano y metionina Los grupos R de los primeros cinco son hidrocarburos alifáticos. es decir. prolina. Todos los aminoácidos encontrados en las proteínas son a— aminoácidos. es relativamente in soluble en soluciones acuosas y soluble en solventes orgánicos com< el hexáno. fenilalanina. tabilizada por puentes de hidrógeno. Todos ellos tienen un grupo carboxilo libre y un grupo amino libre. Los aminoácidos no polares o hidrofóbicos son: alanina leucina. Los aminoácidos se caracterizan además por una cadena lateral o grupo R sustituido en su carbono a.

Presentan carga negativa debido a que cada uno de ellos posee en el grupo R un segundo grupo carboxilo que se encuentra completamente ionizado y. Polares sin carga : En este grupo se encuentran los aminoácidos: serina. la asparagina y la glutamina cuya polaridad proviene de sus grupos amídicos.3. En la Figura A.5 se muestran las formas: no ionizada y de ion híbrido de los aminoácidos. Los aminoácidos tanto en forma cristalina como en solución. El comportamiento ácido-base de los aminoácidos se formula en términos de la teoría de Brónsted-Lowry. neutros. Esto se traduce en altas constantes dieléctricas y altos puntos de fusión. Propiedades ácido-básicas de los aminoácidos. Todos ellos tienen seis átomos de carbono y son: lisina. BIOMOLECULAS. treonina y tirosina que deben su polaridad a sus grupos hidroxilo. Dentro de estos aminoácidos. En gran medida la comprensión del comportamiento de las proteínas está basada en el conocimiento de las propiedades ácido-base de los aminoácidos que la constituyen. la cisteína cuya polaridad proviene de la presencia de un grupo sulfhidrilo y finalmente la glicocola. básicos o ácidos. 807 1. pero a pH 7 menos del 10% de ellas poseen carga positiva. que en muchos casos se considera como no polar. La histidina presenta un grupo funcional imidazol y posee propiedades límites. presentan una estructura ionizada que genera considerables momentos dipolares. arginina e histidina. cuando un aminoácido en forma de ion híbrido cristalizado se disuelve . Polares con carga positiva (básicos): En este grupo se encuentran los aminoácidos que poseen carga neta positiva a pH 7. 2. A pH 6 más del 50% de las moléculas de histidina poseen un grupo R cargado positivamente. la cisteína y la tirosina son los que presentan una polaridad más marcada. 3.A. De acuerdo con esta teoría. Polares con carga negativa (ácidos): Los aminoácidos que presentan carga neta negativa a pH 7 son los ácidos aspártico y glutámico. por lo tanto. cargado negativamente.

en agua. s< encuentran unidos entre sí formando las llamadas cadenas peptídicas La estructura primaria como se muestra en la Figura A. es la s€ cuencia de aminoácidos que forma el esqueleto covalente de dichas ca denas. 5: Formas de un aminoácido: a) no disociada b) de ion híbrido. 1989): como ácido: H3N+CH(CH3)COO~ <-* H+ + H2NCH(CH)3COQcomo base: H+ + H3N+CH(CH3)COQ. Los aminoácidos que forman las proteínas. Niveles Estructurales de la Proteína Comúnmente se emplean cuatro términos para designar los diferente. estructura terciaria y estructura cuaternaria. niveles estructurales de la proteína: estructura primaria. puede actuar como un ácido (donador de protones) o como una base (aceptor de electrones). si se disuelve alanina en agua ésta puede actuar en alguna de las siguientes formas (Lehninger. MATERIAL H | BIOLÓGICO R— C— COOH NH2 R —c— COO Figura A. Est .«-> H3N+CH(CH3)COOH las sustancias que poseen esta propiedad son anfóteras y se denominar anfólitos. Por ejemplo. con el grupo a— animo de el siguiente aminoácido de la cadena. Estructura Primaria. estructura secundaria. 6 a). Un enlace peptídico une el grupo a— carboxilo de un aminoácid.808 H I APÉNDICE A.

6: Niveles estructurales de la proteína: a) Estructura primaria b) Estructura secundaria c) Estructura terciaria d) Estructura cuaternaria. BIOMOLECULAS.3. 809 a) Estructura primaría: s«cu«ncfa d* aminoácidos R« R* R« R H H O H H O H H O H H O b) Estructura secundaria: hélice y laminar aminoácido c) Estructura terciaria.A. d) Estructura cuaternaria. . Figura A.

En esta estructura los grupos R quedan fuera de la cadena y cada cadena presenta en un extremo un grupo a—amino libre y en el otro extremo un grupo carboxilo libre. Estructura Secundaria: La estructura secundaria de una proteína (Figura A. La direccionalidad del ordenamiento se pierde con la presencia de ciertos aminoácidos en este arreglo regular y se pasa a otro nivel estructural. se ha encontrado que cada cadena polipeptídica tiene solamente una forma característica de doblamiento en esos puntos. La estructura secundaria es característica en las proteínas fibrosas. Este actúa en algunas proteínas como enlace transversal entre dos cadenas polipeptídicas separadas o entre curvaturas de una misma cadena.6 b) se refiere al ordenamiento regular y periódico que presenta al menos parte de una cadena polipeptídica a lo largo de una dirección. conduce a que exista un gran número de diferentes posibles estructuras de la cadena originadas por la libre rotación alrededor de los enlaces en ese punto de doblamiento. a este arreglo específico se le llama estructura terciaria. dos aminoácidos que . Estructura Terciaria: El hecho de que existen aminoácidos que pueden ocasionar el cambio de dirección de la cadena. el cual es estabilizado por puentes de hidrógeno entre los grupos R de la misma cadena. Sin embargo. Existe una amplia evidencia experimental que indica que el enlace peptídico es el único enlace covalente que existe entre los aminoácidos que forman la cadena. Sin embargo. puede presentarse otro tipo de enlace covalente que es el enlace disulfuro de la cisteina. por lo que se comunmente se dice que sólo se unen los residuos. MATERIAL BIOLÓGICO es un enlace covalente altamente estable en el cual el grupo imino (NH-) del enlace no posee tendencia significativa a ionizarse o a captar protones en el intervalo de pH entre O y 14 y el enlace C-N (que posee 40% de carácter de enlace covalente doble) del enlace peptídico es relativamente rígido y no puede girar libremente. Debe notarse que debido al giro de la cadena peptídica.810 APÉNDICE A. Este tipo de estructura es estabilizada por los enlaces que se presentan entre los residuos aminoácidos de diferentes partes de la cadena. Cuando dos aminoácidos se unen por medio de este enlace se pierde una molécula de agua.

Se denomina conformación nativa y es la que le confiere actividad biológica y estabilidad a la proteína. 811 estén muy separados entre sí en la estructura primaria. entre éstas se encuentran: enlaces covalentes (simples y dobles).A. pueden quedar espacialmente juntos en la estructura terciaria. ya sean globulares o fibrosas poseen dos o más cadenas polipeptídicas. Ese hecho sugiere que la secuencia de aminoácidos de la cadena polipeptídica contiene la información necesaria para especificar su conformación nativa. siendo el efecto más visible de esto un descenso en su solubilidad. regiones neutras y regiones no polares. negativamente. Conformación: A la estructura combinada secundaria. interacciones de . y que es posible que la proteína recupere su conformación nativa mediante un proceso llamado renaturalización. éstas presentan características anfotéricas. Las cadenas polipeptídicas de una protema poseen solamente una conformación en condiciones normales de temperatura y pH. terciana y cuaternaria de una proteína se le llama conformación.3. La mayoría de las proteínas grandes. interacciones electrostáticas. la forma en que se disponen en el espacio las cadenas polipeptídicas individuales de una proteína que posee más de una cadena. efectos dipolares (puentes de hidrógeno). Se ha encontrado que la desnaturalización no afecta los enlaces covalentes de la secuencia peptídica (estructura primaria). Por lo tanto las interacciones que mantienen la conformación de la proteína son diversas y complejas. En estas condiciones se dice que la proteína está desnaturalizada. Cuando las proteínas globulares se exponen a pH extremos o a altas temperaturas pierden su conformación y consecuentemente su actividad. Estructura Cuaternaria: La estructura cuaternaria se refiere a la estructura tridimensional completa de una proteína. Las proteínas mantienen su actividad biológica sólo en un estrecho rango de temperatura y pH. Enlaces que Mantienen la Estructura de la Proteína Debido a los aminoácidos que conforman las proteínas. BIOMOLECULAS. Esto es. de tal manera que en su superficie existen regiones cargadas positivamente.

La fuerza (F1) entre dos grupos (A y B) en una solución diluida está dada por la Ley de Coulomb: ZAZBe2 Dr* donde Z¿ y Zg son los números de unidades de carga acarreados por el grupo A y B respectivamente. La interacción electrostática ocurre entre pares de grupos en el mismo medio. sea bastante estable. Si dos átomos comparten dos pares de electrones entre ellos entonces se forma un enlace covalente doble. r es la distancia entre los grupos y D es la constante dieléctrica del medio . éstos están involucrados en el mantenimiento de la estructura terciaria de la proteína. Cuando un par de electrones es compartido por dos átomos se forma un enlace covalente. Otro mecanismo que contribuye a la estabilidad de las moléculas de proteína. la fuerza electrostática es mucho mayor. Por otra parte. En este caso. la distancia es menor y el enlace es mucho más rígido. Otros enlaces covalentes que se presentan son los enlaces disulfuro (S-S-) de la cistina. Las estructuras terciaria y cuaternaria de la proteína pueden involucrar interacciones electrostáticas entre aminoácidos con grupos R que . Por lo antes mencionado puede esperarse que la estructura primaria de la proteína. lo que ocasiona que las moléculas no puedan rotar alrededor del enlace. la cual está constituida de residuos de aminoácidos unidos entre si por enlaces covalentes peptídicos. Las características más importantes de estas interacciones son las siguientes: Enlaces Covalentes. La distribución de los electrones entre los átomos produce una fuerza neta de atracción electrostática que mantiene unidos a los átomos y les proporciona una gran estabilidad. son las interacciones electrostáticas que se presentan entre los grupos cargados de éstas. Interacciones Electrostáticas. e es la carga eléctrica del electrón. MATERIAL BIOLÓGICO van der Waals e interacciones hidrofóbicas.812 APÉNDICE A. La distancia entre los átomos que están involucrados en este enlace es de 2 a 4 A (Angstroms). el enlace covalente permite que los átomos unidos por él puedan girar libremente en torno al enlace. en este enlace cada átomo aporta un electrón.

terciaria y cuaternaria de la proteína. por ejemplo entre lisina y ácido glutámico. como ya se dijo antes. ocasionando que se intensifique la fuerza de atracción entre las moléculas de agua.5 y 5 A°. La distancia a la cual ocurren este tipo de enlaces está entre 1. BIOMOLECULAS. Efectos Dipolares En la formación de enlaces covalentes ocurre con frecuencia que el par de electrones no está igualmente compartido entre los dos átomos. En contraparte a su baja energía de enlace. Enlaces de van der Waals. así como también entre los diferentes residuos aminoácidos de una misma cadena. en particular. Cuando la proteína se encuentra en solución acuosa se pueden establecer enlaces de hidrógeno entre los diferentes péptidos de ésta y el medio. el cual se forma entre átomos de oxígeno (carga parcial negativa) de un grupo. Sin embargo. lo cual contribuye a incrementar la estabilidad de las estructuras secundaria. El enlace más importante de este tipo es el enlace de hidrógeno o puente de hidrógeno. Debido a este efecto las moléculas de agua presentan una alta estabilidad ya que todas ellas se unen por puentes de hidrógeno. 813 tengan cargas opuestas. Los enlaces de hidrógeno son relativamente débiles comparados con los covalentes.A. mientras que los enlaces covalentes H-O de la misma poseen una energía de enlace de 110 Kcal/mol.5 Kcal/mol.3. el puente de hidrógeno presenta un efecto coligativo. sino que los electrones pueden asociarse más con uno de ellos que con el otro. cabe mencionar que en un medio acuoso un grupo cargado establece enlaces con el agua más fácilmente que con cualquier otro grupo cargado de la proteína. Este efecto origina que el átomo con mayor densidad electrónica tenga una carga parcial negativa y pueda formar enlaces electrostáticos débiles con otro átomo que tenga una carga parcial positiva. El . Los enlaces de hidrógeno en agua líquida poseen una energía de enlace de aproximadamente 4. produciéndose así una distribución asimétrica de carga entre los átomos llamada efecto dipolar. la molécula de agua. y átomos de hidrógeno (carga parcial positiva) en el otro. Una molécula polar es capaz de atraer a otras moléculas que normalmente no presentan momento dipolar. Hay muchas moléculas que tienen un momento dipolar eléctrico permanente.

la~ estructura más estable para una proteína en solución acuosa será aquella que posibilite la formación del mayor número de enlaces de hidrógeno entre ésta y el medio acuoso que la rodea. La fórmula general de los carbohidratos es ((7//20) n . con n > 3. A. los aminoácidos que presentan grupos R no polares (hidrofóbicos) no pueden establecer puentes de hidrógeno con el agua y con frecuencia forman regiones hidrofóbicas constituidas por varios aminoácidos no polares. Los carbohidratos se dividen en: monosacáridos.814 APÉNDICE A. la adherencia. oligosacácridos y polisacáridos. MATERIAL BIOLÓGICO campo eléctrico de la molécula polar produce una distribución asimétrica de densidad de cargas en la otra molécula. Los enlaces que resultan de estos efectos dipolares son llamados enlaces de van der Waals. Son mucho más débiles que los enlaces covalentes y de ellos depende además. Funcionan como elementos estructurales y en particular los polisacáridos funcionan como almacenes de combustible. . Ahora bien. Estos enlaces juegan un importante papel en el tipo de estructura tridimensional que adopta la proteína.3. Su radio de acción va de 10 a 1000 °A. Consecuentemente. la cohesión y la viscosidad. los cambios de fase. de tal manera que se crea un dipolo inducido en el mismo sentido al de aquella. El resultado es una fuerza de atracción entre ellas. disacáridos. la tensión superficial. Las moléculas de agua se unen entre sí por medio de enlaces de hidrógeno y son muy estables. Enlaces no polares o Hidrofóbicos Los enlaces hidrofóbicos se realizan estre especies no polares y se explican mejor en el marco de los sistemas proteína-solvente. las cuales normalmente se encuentran en el interior de la estructura proteica.2 Carbohidratos Los carbohidratos o sacáridos son compuestos que se encuentran en todos los seres vivos. Esto hace que este tipo de enlaces sea muy importante en la estabilidad de la estructura terciaria de la proteína.

Los monosacáridos de tres carbonos son llamados triosas.8 se presentan los monosacáridos más comunmente encontrados en la naturaleza.glucosa 5 CHjOH CH2OH OH )H Figura A.glucosa.glucosa Los monosacáridos o azúcares simples son los carbohidratos más pequeños y contienen de tres a nueve carbonos. En la Tabla A. Un derivado importante de los monosacáridos es el ácido N . debido a que es el principal componente de los ácidos nucleicos tanto en su forma natural como oxidada (desoxiribosa). En solución la D.8).glucosa se presenta comunmente con una estructura en forma de anillo como la que se muestra en la Figura A. La D-glucosa puede existir en dos formas isoméricas diferentes: a— Dglucosa y la (3— D.glucosa.7.8: Estructura química de: a) Ribosa b) Desoxirribosa Monosacáridos: D. Otro monosacárido de interés es el azúcar de cinco carbonos llamado D. BIOMOLECULAS.Ribosa (Figura A.acetil- .7: Estructura química de la D. 815 Figura A. Uno de los monosacáridos más importantes es la D. los de cinco pentosas y los de seis carbonos se denominan hexosas.3.A.

MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A.8: Monosacáridos presentes en los sistemas biológicos Aldosas derivadas de aldehido CHO Clase Triosa (tres carbonos) Cetosas derivadas de ke tonas CHiOH HCOH CH2OH D-Gliceraldehido Pentosa (cinco carbonos) CHO C =O \ \ CH-zOH Dihiroxiacetona CH-¿OH C =0 HCOH HCOH HCOH CH^OH D-Ribosa Hexosa (seis carbonos) í7//0 HC 1OH HCOH HCOH CH2OH D-Flibulosa CHO \ HCOH HOí 7W HOí 7// HC1OH CH2OH D-Galactosa CH2OH \ C =O i 1 HOCH i 1 HCOH i 1 HCOH 1 CH?OH D-Fructuosa HOí 7// HC 1OH HC 1OH CH?OH D-Glucosa CHO \ HOCH i 1 HOCH \ \ HCOH i 1 HCOH i 1 CH2OH D-Manosa .816 APÉNDICE A.

BIOMOLECULAS. la celulosa y el glucógeno. en forma general a polisacáridos. En las células hepáticas el glucógeno aparece en forma de granulos. interviene el monosacárido D-glucosa.(l —> 4). Está constituido por el aminoazúcar N .glucosa. excepto en los puntos de ramificación donde el enlace que se presenta es a(l —> 6) glucosídico. Es el principal componente de la madera y el algodón.glucosa unidas entre si por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. trisacáridos y.glucosa con enlaces a(\ —* 4) glucosídicos y» en los puntos de ramificación los enlaces son a (I —> 6) glucosídicos. Se encuentra en cantidades importantes en el hígado (10% de su peso húmedo). el ¡3(1 —> 4) y el a(l -> 6) Polisacáridos En la síntesis de la mayoría de los polisacáridos como el almidón. unidas entre sí por enlaces a(l —> 4) glucosídicos. Mediante este tipo de enlaces los monosacáridos dan origen a los disacáridos. Los monosacáridos pueden unirse entre sí mediante enlaces llamados glucosídicos. La amilopectina forma cadenas ramificadas constituidas por unidades de D. parecido al almidón en estructura. Los enlaces glucosídicos más comunes son: el o. Se presenta en forma de cadenas mucho más ramificadas que las de la amilopectina. La celulosa es un polímero lineal de la D. También es un polisacárido de la D. El glucógeno. es el principal polisacárido de reserva de las células animales. El almidón es la forma principal de almacenamiento de energía en muchas plantas.A.3. La celulosa es componente estructural de las paredes celulares y es el polisacárido más abundante en el reino vegetal. 817 murámico que es la unidad estructural más importante del esqueleto polisacárido de las paredes celulares bacterianas.glucosa que posee enlaces /?(! —* 4) glucosídicos. La a— amilasa son cadenas largas no ramificadas del monosacárido D. . se encuentra en dos formas: la a— amilasa y la amilopectina.acetil-D-glucosamina unido mediante enlace éster al ácido D-láctico.

el cloroformo y el éter.Acilglicéridos .Terpenos .3. Los lípidos se clasifican.Ceras - Glicerina 3 fosfato de glicerilo Esfingosina Alcoholes no polares de elevado peso molecular Simples (insapouificables) . en lípidos com piejos y lípidos simples (Tabla A. Desempeñan importantes funciones biológicas como: a) Componentes estructurales de las membranas. así come también las grasas.Esteroides . la especificidad de especie y la inmunidad de los tejidos. Los primeros se caracteriza] . las cuales sirven como almacenes de combustible Los lípidos además se presentan formando parte de moléculas más com plejas como las lipoproteínas y los glucolípidos.Esfingolípidos . Debido a esta característica los lípidos se encuentran presentes en fases biológicas no acuosas.Fosfoglicéridos . b) Formas de transporte y almacenamiento del combustible catabólico c) Componentes de la superficie celular relacionados con el reconocimiento de las células.818 APÉNDICE A. MATERIAL Tabla A.3 Lípidos Los lípidos son moléculas biológicas prácticamente insolubles en el agua y pueden extraerse de sus fuentes mediante solventes no polares como el benceno.9: Clasificación de los lípidos Tipo de L'pido Esqueleto BIOLÓGICO Complejos (saponifícables) . Dentro de las lípidos se encuentran las hormonas y las vitaminaí que son sustancias que presentan una alta actividad biológica.9).Prostraglandinas A. de acuerdo a su estructura.

Un ácido graso insaturado se forma cuando se reemplaza un enlace saturado (-C — C—} por un enlace doble (—C = C—). los ácidos grasos pueden ser saturados o insaturados. 819 CH3 — ( CH2 )„ — C Figura A.9 muestra la fórmula general de los ácidos grasos saturados. BIOMOLECULAS. Entre los ácidos grasos saturados más comunes se encuentran el ácido palmítico (C\o) y el ácido esteárico (Cis). Los ácidos grasos saturados presentan cadenas hidrocarbonadas que pueden existir en un número infinito de conformaciones debido a que los enlaces simples que unen los átomos de carbono pueden girar libremente. Dependiendo de su cadena hidocarbonada. los sitios donde se unen los átomos de carbono por medio de un enlace doble presentan un doblamiento rígido en la cadena. y entre los insaturados está el ácido oleico (Cis)Los ácidos grasos saturados e insaturados difieren en sus configuraciones estructurales. Este no es el caso de los ácidos grasos insaturados.A. Los ácidos grasos más abundantes encontrados en las plantas y en los animales poseen un número par de átomos de carbono. las cadenas hidrocarbonadas tienen entre 14 y 22 átomos de carbono. La Figura A. En este tipo de ácidos.9: Fórmula general de los ácidos grasos saturados porque contienen ácidos grasos como componentes y también reciben el nombre de lípidos saponificables porque pueden producir jabones al reaccionar con álcalis. Los segundos no contienen ácidos grasos en su estructura y por lo tanto son no saponificables. La forma de cadena extendida que adopta este tipo de ácidos grasos es la de mínima energía. lo que provoca que la cadena hidrocarbonada sólo presente dos tipos de configuraciones en sus enlaces dobles: . Ácidos Grasos Los ácidos grasos se encuentran en grandes cantidades en los sistemas biológicos como componentes de los lípidos complejos.3.

sin embargo el grupo carboxilo que presentan es hidrofílico.agua.lOc) se forma una monocapa con el grupo polar hidratado y la cola orientada hacia el aire. 11 a. bicapas y micelas lipídicas: Los lípidos son biomoléculas prácticamente insolubles en el agua. MATERIAL BIOLÓGICO la configuración cis y la configuración trans. Este tipo de sistemas de bicapas tienen algunas propiedades físicas similares a las de las membranas protoplasmáticas y son objeto de estudio como modelos de membranas naturales. En la Figura A. aparecen en las células y en los tejidos en cantidades menores que los lípidos complejos y algunos de ellos tienen una intensa actividad biológicas. Todos los esteroides se originan del escualeno (Figura A . Dentro de los primeros se encuentran algunas vitaminas y dentro de los segundos algunas hormonas.lOd) son estructuras vesiculares formadas por bicapas completamente cerradas. 10). como se muestra en la Figura A. Los fosfoglicéridos forman también bicapas para separar dos compartimentos acuosos. Lípidos Simples Los lípidos sencillos no contienen ácidos grasos como componentes estructurales. ésto se debe a que su larga cadena hidrocarbonada no es soluble en soluciones acuosas. mientras que las cabezas polares (hidrofílicas) están expuestas en la superficie. En la interfase aire . Debido a lo anterior. Los liposomas (Figura A. Monocapas. 10a se observa como se forman en agua los agregados llamados micelas. En este tipo de estructuras las colas hidrocarbonadas se orientan en forma opuesta al medio acuoso y forman una fase hidrofóbica interna. las cabezas polares y las colas hidrofóficas dan lugar a diversos arreglos (Figura A.lOb. que se forman por exposición de suspensiones de fosfoglicéridos en agua con oscilación sónica.agua (Figura A.820 APÉNDICE A. o en agua. l l b ) . Hay dos clases de lípidos sencillos: los terpenos y los esteroides. cuando un lípido polar (por ejemplo un fosfoglicérido) es colocado en una interfase aire . Dentro de éstos se encuentran las hor- . Tanto las vitaminas como las hormonas son muy importantes en el funcionamiento normal de la célula y son requeridas por ésta en cantidades muy pequeñas. Los esteroides son lípidos que presentan una estructura básica general que se muestra en la Figura A.

a) Micelas formadas en el agua. BIOMOLECULAS.3. 10: Sistemas estables fosfoglicérido-agua. 821 Pared Agua Aire WLULLILÜUM Agua Agua Figura A.A. c) Monocapa en la interfase aire-agua d) Sección transversal de un liposoma. . b) Bicapa de fosfoglicérido que separa dos compartimentos acuosos.

' Figura A. CH. CH. CH.822 APÉNDICE A. MATERIAL BIOLÓGICO <?H. CH.11: Estructura de algunos esteroides: a) Estructura básic general b) Estructura del escualeno c) Estructura del colesterol . I HC—(CH2)3-CH-(CH. b CH.)2 CH. Cf C Cl C-CH—CH2-CH1-¿-CH-CH2-CH2-C-CH-CH2-CH2-CH= C-CH2-CH-CH-C-CH2— CH.

la progesterona y las hormonas adrenocorticales. las cuales son controladores extremadamente potentes de las velocidades de reacción en los sistemas biológicos.3. Singer y G. A. en forma de partículas muy pequeñas cuyo diámetro y peso permanece constante. los estrógenos (hormonas sexuales femeninas). en los cuales se fusionan las propiedades físicas de las dos biomoléculas. Los sistemas de membranas pueden llegar a constituir hasta el 80% de la masa celular seca total en algunas células eucarióticas. Las hormonas pueden ser efectivas a niveles de 10~18 M en tejidos humanos.3. L. Este tipo de lipoproteínas transportan lípidos insolubles en agua entre los diferentes órganos por medio de la sangre. Este modelo establece que los fosfolípidos de las membranas se hallan ordenados en bicapas formando una matriz fluida de cristales líquidos y postula que las proteínas de la membrana son globulares.J. Sistemas de Lipoproteínas Los sistemas de lipoproteínas son sistemas que se forman de la asociación de lípidos y proteínas específicas. BIOMOLECULAS. En estos sistemas los lípidos y las proteínas se mantienen unidos mediante enlaces hidrofóbicos que se establecen entre las componentes no polares de estas biomoléculas.lie) es un esteroide muy importante. El modelo mas usado de la estructura de membrana es el modelo del mozaico fluido de S. Nicolson. El colesterol (Figura A. Los principales tipos de lipoproteínas son: lipoproteínas de transporte y sistemas de membranas. es el precursor de muchos otros esteroides dentro de los cuales se incluyen: los andrógenos ( hormonas sexuales masculinas).4 Ácidos Nucleicos Los ácidos nucleicos son macromoléctilas en forma de cadena cuya función esencial es el almacenamiento y la transferencia de la infor- . Este modelo explica satisfactoriamente muchas de las propiedades y características de las membranas. Las lipoproteínas de transporte son complejos característicos del plasma sanguíneo. 823 monas.A. en particular su alta resistencia eléctrica y su relativa impermeabilidad respecto de moléculas muy polares.

En los ribonucleótidos la base esta unida a la pentosa D-ribosa. Al igual que los aminoácidos son los componentes estructurales de las proteínas. Hay cinco bases nitrogenadas (Figura A. MATERIAL BIOLÓGICO Base HO HO—P-0—CH. una molécula de ácido fosfórico.12. El nombre de desoxirribonucleótidos deriva de que la base esta unida a la pentosa 2-desoxi-D-ribosa (Figura A. Nucleótidos Las unidades estructurales del DNA se denominan desoxirribonucleótidos y las del RNA se llaman ribonucleótidos. Existen dos tipos de ácidos nucleicos: el ácido desoxirribonucleico (DNA) y el ácido ribonucleico (RNA). cada nucléotido está constituido por tres componentes: una base nitrogenada heterocíclica que es un derivado de purina o de pirimidina. guanina. 12: Estructura general de los nucleótidos: a) Ribonucleótido b) Desoxirribonucleótido mación genética.0 OH OH H H Figura A. 13) que pueden formar parte de un nucléotido: adenina. Las diferencias químicas y físicas entre desoxirribonucleótidos radican en las diferentes bases que los constituyen. ti mi na. 12) se une . Como puede observarse en la Figura A. 12). citosina y uracilo. . una pentosa y.824 APÉNDICE A. Son componentes fundamentales de la célula y constituyen entre el 5 y el 15% de su peso seco. la diferencia entre los ribonucleótidos estriba en la base que los conforma. El grupo fosfato que constituye los nucleótidos (Figura A. los nucleótidos son los componentes estructurales de los ácidos nucleicos. Las primeras dos son purinas y las tres restantes son pirimidinas. De igual manera.

13: Estructura de las bases de los nucleótidos. (1) Adenina (2) Guanina (3) Uracilo (4) Timina (5) Citosina .>¿.A.3. BIOMOLECULAS.CH -C./ NH2 'C^i^CH rfV H 5 Figura A. 825 Purinas NH. Nf^C^\ Pirimidinas O HNlT«>CH N H 1 ^N' H O U o 1 HNf^cA I I «.

entonces la secuencia de la otra cadena se determina automáticamente. Watson y Crick concluyeron que si la secuencia de bases de una cadena está dada. Cada cadena consiste de grupos fosfato di-ester unidos a residuos de ¡3—D-desoxirribofuranosa (Ddesoxirribosa). El diámetro de la doble hélice es de 20 °A y una vuelta se completa cada 34 A. H. Todos los ribonucleósidos y desoxirribonucleósidos aparecen en las células no solamente en forma de monofosfatos. Consecuentemente estaba planteado un mecanismo de copiado para la transferencia del material genético. Propusieron que dicha estructura está constituida por dos cadenas helicoidales antiparalelas. Se ha considerado que la estructura del DNA propuesta por Watson y Crick. por medio de enlaces 3'-5' (Figura A. De la complementaridad de la unión de las bases. producto de sus grupos fosfóricos. Cuando el grupo fosfato de un nucleótido se separa por hidrólisis. para la adenosina se tiene el 5'-monofosfato de adenosina (AMP). Watson y F. la estructura residual recibe el nombre de nucleósido. El sistema ATPADP es el sistema principal para la transferencia de energía química en la célula. Cada vuelta de la cadena consta de aproximadamente 10 nucleótidos. mediante los pares de bases: adenina (purina) con timina (pirimidina) y guanina (purina) con citosina (pirimidina). C. Crick postularon una estructura para el ácido desoxirribonucleico. El ADP y el ATP son ácidos relativamente fuertes que en su disociación producen tres o cuatro protones respectivamente. MATERIAL BIOLÓGICO mediante un enlace áster al átomo de carbono 5 de la pentosa. El desarrollo cíe los postulados anteriores ha conducido a lo que se ha . DNA En 1953 J.14c).826 APÉNDICE A. D. sino también en forma de difosfatos o trifosfatos. Propusieron además que las cadenas se mantienen unidas entre si por medio de puentes de hidrógeno entre las bases purinas y pirimidinas en sus formas tautómericas (Figura A. 14). es uno de los hechos más sobresalientes en el campo de la ciencia hasta nuestros días.14b y Figura A. cada una de ellas enrrollada alrededor del mismo eje. En particular. el 5'-difosfato de adenosina (ADP) y el 5'-trifosfato de adenosina (ATP).

827 Pares de bases complementarías BaM (b) Esqueleto de azúcar-fosfáto Timina \ x°~—/ H x „ ¿~c^ ^-N n-^fS \ t \ M "--.A.3. BIOMOLECULAS. b) Estructura de la doble hélice c) Bases purinas y pirimidinas unidas por puentes de hidrógeno.</ Puente de hidrógeno / 8 Adenina (a) Desoxirribosa (c) Figura A. 14: Esquema del Acido Desoxirribonuleico: a) Estructura de una sola cadena. .

cada una de las cuales tiene una cadena de la doble hélice original y una cadena nueva. La adición de cada nucleótido se realiza en la dirección 5' —> 3'. MATERIAL BIOLÓGICO denominado dogma central de la genética molecular. La replicación completa del DNA sólo ocurre durante la división celular. • Transcripción: Es el proceso mediante el cual se realiza el copiado del mensaje genético contenido en el DNA al RNA mensajero. pero existen con mucha frecuencia otros momentos de la actividad celular en los cuales se copia sólo una parte de la información genética. El proceso de replicación del DNA es esencialmente el mismo en todos los organismos vivos. Replicación del DNA: El proceso de replicación del DNA permite que la información genética sea perpetuada mediante su paso de una generación a otra. que establece que la información genética fluye del DNA al RNA y de éste a la proteína. A este tipo de replicación se le llama replicación semiconservativa. Esta traducción se lleva a cabo en los ribosomas. La síntesis de las cadenas nuevas ocurre por la adición de nucleótidos complementarios a las cadenas que sirven de molde. • Traducción: Es el proceso que permite traducir las unidades de información genética o codones a secuencias de aminoácidos en una cadena peptídica.828 APÉNDICE A. siendo más complejo en los organismos superiores. El inicio de la replicación del DNA es un proceso que antecede al fenómeno de la división celular y consiste en la separación de las dos cadenas de DNA. mismas que actúan como moldes de dos cadenas nuevas (Figura A. La replicación del DNA produce dos dobles hélices. . Esto sucede cuando se transcribe por ejemplo. El dogma central establece tres procesos: • Replicación: Es el primer proceso y es el proceso mediante el cual el DNA produce moléculas hijas idénticas a la progenitura. el gene que tiene codificada la información para sintetizar una determinada proteína. La traducción del mensaje genético da origen a la síntesis de proteínas. 15).

BIOMOLECULAS. Fuente: Watson et a/. . Todos los derechos reservados.H.3. 829 Figura A. 15: Replicación semiconservativa de la molécula de DNA: Cada cadena de la doble hélice progenitora sirve como molde para generar dos cadenas hijas idénticas a ella. 1983 Reproducida con el permiso de W. Copyright ©1983. Freeman and Co.A.

en la dirección 5' —> 3' y solamente una de las cadenas del DNA es copiada en una molécula de RNA mensajero en un tiempo dado. está constituido por una sola cadena de nucléotidos. se copiarán de acuerdo a la demanda de proteínas que tenga el organismo. el DNA no es el molde directo que se usa en la síntesis de proteínas sino que la información codificada en el DNA se trascribe al RNA y es éste el que actúa como molde para la síntesis proteica. Por lo tanto existen 64 codones (permutaciones) de tres bases cada uno para los 20 . Sin embargo. La información para la síntesis de un aminoácido está codificada en tres nucléotidos. El proceso de transcripción se realiza observando las siguientes dos reglas: siempre ocurre. El proceso por el cual se lleva a cabo esta transcripción se muestra en la Figura A. Ahora bien. MATERIAL BIOLÓGICO La Transcripción del Mensaje Genético: El RNA Los genes estructurales que almacenan la información para la síntesis de proteínas. 16 muestra la estructura de un segmento de ácido ribonucleico (RNA).830 APÉNDICE A. Es importante hacer notar que existe una base en el RNA que no aparece en la cadena de DNA. Las bases que constituyen la cadena de mRNA son dos purinas: adenina y guanina y dos pirimidinas: citosina y uracilo. por una parte existen solamente 4 diferentes nucléotidos y por otra. se trascribe a una molécula intermediaria que puede moverse en el citoplasma: el mRNA o mensajero. Esta base es el uracilo (U). La información genética codificada en el DNA en su secuencia de nucléotidos. indica el orden o secuencia de los aminoácidos en la cadena peptídica. El orden en el cual aparecen los nuclétidos en la cadena de mRNA sintetizada. el cual es químicamente muy similar a la timina y en el apareamiento de bases para la síntesis del RNA ocupa el lugar de ésta. Esto es. Este mecanismo ha permitido explicar cómo la síntesis de proteínas que se efectúa en el protoplasma puede ser controlada por el DNA localizado en el núcleo. A este grupo de tres nucléotidos se le llama codón o triplete. La Figura A. cuando en la cadena de DNA aparece una adenina en la cadena de RNA se agrega un uracilo. se tiene que las proteínas están constituidas por 20 tipos de aminoácidos diferentes. al igual que la replicación del DNA. 17. Este a diferencia del DNA. En la figura se puede observar además que la pentosa que forma parte del esqueleto de la cadena es una ribosa.

16: Estructura de un segmento de ácido ribonucleico RNA Cadenas Cadena de RNA Figura A. BIOMOLECULAS.3.A. 17: Transcripción del mensaje genético por medio de la síntesis de una cadena de mRNA . 831 Base Base RNA Figura A.

También existen codones que actúan como señales de terminación del mensaje genético. En este proceso intervienen además otros tipos de RNA: el rRNA y el tRNA. 11 se muestran los significados de las abreviaturas para los aminoácidos y para las bases nitrogenadas. de tal manera que existen aminoácidos que son codificados por más de un codón.832 APÉNDICE A. MATERIAL BIOLÓGICO Tabla A. 18 muestra . En la Tabla A. La Figura A. El primero es un ácido ribonucleico que se encuentra localizado en los ribosomas y el segundo es un RNA de trasferencia (tRNA) que actúa como adaptador en el ordenamiento lineal de los aminoácidos específicos conforme a la secuencia del ni RNA. 10. es un codón de terminación del mensaje aminoácidos. 10: Código genético Codón Aminoácido Fen Leu " Leu Codón Aminoácido Ser Codón Aminoácido Tir Codón Aminoácido Gis TTT TTC TTA TTG CTT CTC CTA CTG ATT ATO ATA ATG GTT GTA GTA GTG TCT TCC TCA TCG CCT CCC CCA CCG ACT ACC ACÁ ACG GCT GCC GCA GCG TAT TAC TAA TAG CAT CAC CAÁ CAG Term* His Gln TGT TGC TGA TGG CGT CGC CGA CGG AGT AGC AGA AGG GGT GGC GGA GGG Term Trp Arg Pro He Met Val Tre AAT AAC AAA AAG GAT GAC GAA GAG Asii Lis Asp Glu Ser Arg Gli Ala Term. Traducción del Mensaje Genético: Síntesis de Proteínas Cada molécula de mRNA da origen a una o varias cadenas peptídicas. El proceso de traducción del mensaje del mRNA se realiza en los ribosomas. El conjunto de codones constituye el código genético universal y se muestra en la Tabla A.

Este anticodón esta formado por las tres bases complementarias al codón específico que aparece en la cadena de mRNA. 833 Tabla A. . En este proceso se van agregando sucesiva y ordenadamente (vía los tRNA) los aminoácidos correspondientes a cada codón presente en la cadena de mRNA. elongación y terminación. En este momento termina la síntesis y la cadena peptíclica es liberada. La síntesis de la cadena polipeptídica ocurre en la dirección: extremo amino (—NH^) a extremo carboxilo (COOH}.A. La traducción concluye cuando aparece un codón de terminación en el mRNA. Por esta razón. La traducción del mensaje consta de tres fases: iniciación. Como puede verse en la Figura A. En la parte inferior del segundo lazo se localiza un triplete denominado anticodón. BIOMOLECULAS. Los mRNA pueden ser traducidos simultáneamente por muchos ribosomas. una sola molécula de mRNA sirve para generar varias copias de la misma cadena peptídica (Balbás y Bolívar. Prácticamente todas las proteínas inician con el codón AUG que codifica para metionina.18a la estructura del tRNA presenta tres lazos. Una vez que se inicia la síntesis ocurre la elongación.ll: Especificación de las bases y los aminoácidos Nucleótidos G= A = T= C— Aminoácidos Ala Asn Asp Arg Gis Fen Gli Gln Glu His = = = = = = = = = = Guanina Alanina Timina Citosina Alanina Asparagina Acido aspártico Arginina Cisteína Fenilalanina Glicina Glutamina Acido glutámico Histidina Ile Leu Lis Met Pro = = = = = Ser ^ Tir = Tre = Trp = Val = Isoleucina Leucina Lisina Metionina Prolina Serina Tirosiiía Treonina Triptofano Valí na como se realiza este proceso y la forma estructural del tRNA. 1989). A este triplete se le llama codón de iniciación y con frecuencia es eliminado después de la síntesis.3.

. c) Elongación de la cadena peptídica. a) Estructura del tRNA.834 APÉNDICE A.18: a). b) Iniciación del proceso de síntesis. Estructura del tRNA y síntesis de una cadena peptídica. MATERIAL BIOLÓGICO Aminoácido (a) <D Ribosoma Aminoácido (b) Subunidades ribosomales de inicio segundo codon (C) trr (d) Figura A. d) Terminación del proceso de síntesis.

Ruptura mecánica del DNA en condiciones controladas. Esto es. debe conocerse la ubicación de sus genes y su secuencia nucleotídica.A. Un método que permitas romper y unir enlaces fosfodiéster de moléculas de DNA. 1989) debe poseer las siguientes características : Adecuada caracterización funcional. La mayoría de estas enzimas reconocen secuencias de bases simétricas o palindrómicas en el DNA. Caracterización estructural completa. Existen cuatro métodos para generar fragmentos de DNA: La digestión de la molécula de DNA con enzimas de restricción. Dentro de los vectores más usados se encuentran los plásmidos y algunos DNAs virales. Para que el vector de clonación sea fácil de manejar (Balbás y Bolívar. A este tipo de moléculas se les llama vehículos moleculares de clonación o vectores. En ingeniería genética el método más común para fragmentar el DNA es la digestión por enzimas de restricción.3. la ingeniería genética requiere de los siguientes elementos: 1. y capaz de replicar también el DNA que se le haya unido. no debe ser degradado. Para llevar a cabo la recombinación in vitro de una molécula de DNA. . DNA Recombinante: Recombinación in vitro 835 Las moléculas de DNA recombinante (rDNA) son construidas en el laboratorio por medio de la ingeniería genética. Síntesis química a partir de desoxirribonucleótidos. Esto es. El tamaño del vector debe ser pequeño con el fin de aumentar la eficiencia de entrada a la célula huésped Presentar estabilidad dentro del huésped. Una molécula de DNA capaz de autoreplicarse. 2. A partir de moléculas de RNA. BIOMOLECULAS.

Presentar múltiple sitios únicos de restricción dentro de los genes que se utilizan como marcadores. La transformación. mismo que a su vez da lugai a una célula recombinante. Los vectores más usados por su simplicidad y facilidad de manejo son los plásmidos. 4.836 APÉNDICE A. Un proceso mediante el cual se pueda introducir la molécula de rDNA a la célula receptora. Un método que permita seleccionar de un gran número de células a aquellas que han adquirido la molécula de rDNA. con el fin de obtener grandes cantidades del vehículo por célula. En la Figura A. MATERIAL BIOLÓGICO Es muy conveniente que el vector contenga genes que puedan usarse como marcadores para seleccionar las células recombinantes de las silvestres. Existen tres mecanismos mediante los cuales una molécula de rDNA puede ser introducido a la célula receptora: La conjugación. 3.19 se observan dos caminos paralelos que se unei para formar la molécula recombinante. Los plásmidos son pequeños DNAs circulares que se encuentran en forma natural fuera del genoma de algunas células y que se replican autónomamente. Debe ser capaz de incrementar (amplificar) su número de copias. Un proceso muy usado en la ingeniería genética es la transformación. La transfección. Este proceso conlleva la entrada del vector a la célula a través de la pared y membrana celulares. Por una parte se extrae ui . 19 se presenta un esquema de el proceso mediante el cual se produce un DNA recombinante. Una vez dentro la molécula de rDNA puede replicarse autónomamente o recombinarse con el genoma de la célula receptora. En la "Figura A.

.3. Fuente: Watson et a/.H. BIOMOLECULAS. 1983 Reproducida con el permiso de W. Copyright ©1983. Todos los derechos reservados. 19: Representación esquemática de la clonación molecular del DNA utilizando un plásmido como vector.A. Freeman and Co. 837 plasmido fragmentado con enzimas d« restriocio'n \ DNA ^ /fragmentado X / con enzimas /~~~?~^ de restricción DNA pasajero marcador '(resistencia a antibióticos) Figura A.

l). todas la células están sujetas a las mismas condiciones de temperatura (T).) dx (A. lo anterior puede expresare como: — = f(T.0. tiempo que dura esta fase se interpreta como el tiempo que tardan ] .. A este DNA se le llama DNA pasajero o exógeno. misma que se replicará y contendrá la información clonada. Independientemente de que el producto de interés sea intracelular (poi ejemplo una proteína).838 APÉNDICE A. La molécula de rDNA se introduce dentro de la célula huésped y ocurre la transformación.: En la Figura A. La célula así obtenida es una célula recombinante. A. extracelular (metabolitos secundarios) o la ce lula misma. etc.4 Crecimiento Celular. MATERIAL BIOLÓGICO plásmido de la célula seleccionada y se fracciona específicamente utilizando endonucleasas de restricción.. En este punto se obtiene una molécula de DNA recombinante o (rDNA).20 se muestra un esquema del comportamiento típi< que sigue el crecimiento celular en un cultivo intermitente sujeto a L condiciones dadas por la ecuación (A. este DNA se rompe de la misma manera que el plásmido.. En un cultivo de células microbianas de tipo intermitente. Las fases se originan por 1 cambios que experimenta la población celular debido a cambios en medio.S. del DNA fraccionado de la célula de interés. concentración de oxígeno (O). E crecimiento celular en este tipo de cultivo depende de las condicione mencionadas y puede ser expresado en términos del cambio con respect al tiempo de la concentración de células. Enseguida tanto el plásmido como el DNA fragmentados se ponen en contacto y ocurre la recombinación. es necesario cultivar las células con el fin de obtener e producto deseado. En esta figura se observa varias fases en la curva de crecimiento.PH. En la fase lag se observa un crecimiento casi nulo de las células. Por otra parte. pH concentración de sustrato ( S ] . se toma el DNA que se desea insertar o clonar.

839 (c) Figura A. En este momento se considera que las células mueren debido a que no pueden mantener su metabolismo o por autolisis. En la fase estacionaria el crecimiento celular cesa y la biomasa permanece constante. Se considera que en esta fase las células ya adaptadas crecen rápidamente debido a que en el medio encuentran todos los requerimientos nutricionales y ambientales para reproducirse.20: Representación esquemática del crecimiento celular en cultivo intermitente. Cuando el crecimiento celular en un cultivo intermitente está limitado sólo por la cantidad de sustrato inicial. CRECIMIENTO CELULAR. a) Fase lag b) Fase exponencial c) Fase estacionaria d) Fase de declinación o muerte células en adaptarse al medio de cultivo. este tipo de compuestos no esta asociado al crecimiento celular y muchos de ellos tienen importancia comercial. la curva de crecimiento puede expresarse con auxilio de la ecuación de Monocl que describe la relación entre la velocidad especia fica de crecimiento y la concentración . Cabe mencionar que en la segunda fase (exponencial) la células sintetizan compuestos que les permiten crecer (duplicarse) y mantenerse vivas en el medio de cultivo. La fase exponencial es la de máximo crecimiento y la biomasa alcanza su valor más alto. Finalmente en la fase de declinación o muerte las células empiezan a morir y la biomasa disminuye. Después de esta fase se tiene la fase exponencial en la cual se observa un crecimiento muy rápido de la biomasa hasta un determinado tiempo. la terminación de la misma se considera que sucede por la carencia de algún nutriente o porque alguno de los productos que la célula secreta al medio inhibe el crecimiento poblacional. A este tipo de compuestos se le llaman metabolitos primarios.A A. En la fase estacionaria la célula excreta al medio productos llamados metabolitos secundarios.

5 fJ>max En la Figura A. La expresión para /u se obtiene integrando la ecuacic (A. J\ § " | ~ J (A.3) para un caso particular.840 APÉNDICE A. MATERIAL BIOLÓGICO de sustrato. estableciéndose la siguiente expresión para el crecimiento celular: donde: x: Concentración de biomasa. [M/L3] Ka: Concentración de sustrato para /í = 0.2) de la siguiente forma: dx 'Xl td = fr' JO / donde: .^"1] y la ecuación de Monod: . [M/L3] t: Tiempo.: Velocidad específica de crecimiento. [t] fj. Puede observarse en la figura que la J velocidad máxima de crecimiento /ímar es el valor asintótico de la curv.3 donde: l¿max' Velocidad máxima de crecimiento. del tiempo en el cual la ma¡ celular se duplica. [t~l] S: Concentración de sustrato limitante.21 muestra la representación gráfica de la ecuació (A. y Ks es el valor de S cuando /z = fimax/2Con frecuencia la velocidad del crecimiento celular se describe e términos del tiempo de doblado esto es.

22 1 Figura A.21: Representación esquemática de la variación de la veloc dad específica de crecimiento (/u) con el sustrato (S).4. el paso siguiente es realización del mejor proceso para obtener el producto con la actividí y pureza deseada. con el menor costo posible. El establecimiento ( dicho proceso es el objetivo del estudio de las Bioseparaciones.A. Una vez qi se ha realizado el cultivo de la célula y se tiene el producto de Ínter dentro de la célula misma o en el caldo de cultivo. . CRECIMIENTO CELULAR. 84 0.0 Ks»0. Xi =: Masa celular al tiempo t = O t¿: Tiempo de doblado para obtener: In2 por lo tanto el tiempo requerido para que la masa celular se dupliqi esta dado por: A. VEl cultivo de las células se lleva a cabo en dispositivos llamad» biorreactores los cuales deben diseñarse con el fin de proporcionar éstas las mejores condiciones físicas para su desarrollo.

y Kurtz. Microbiology: An Introduction. España. Ediciones Omega. Lehninger. 1989. 3ra Edición. New York. J. En: La Célula Viva. Scientific American. 1. Palmer. D. 1985. 11-30. Recombinant DNA a short course. 1991. 1989. México. J. La célula viva.Books. 5 Bibliografía Brachet. 31-35 Tortora. G. N. 1953. T. Molecular Structure of Nucleic Acids: A structure for deoxyribose nucleic acid. Tooze. D. Bioquímica. Selecciones de Scientific American. The organisms of biotechnology.L. Watson. Millis. L. En: Comprenhensive Biotechnology. New York.J. A. .842 APÉNDICE A. y Crick. Murray. Ellis Horwood Ltd. Permagon Press. (Ed. J. Nature. D. New York. C. M. H.R. 2. The Benjamin/Cummings Publishing Co. y Case.. Editorial Blume.-J. 7-18. Watson. F. B.Y. 1961. Inglaterra. 1983. MATERIAL BIOLÓGICO A.). 737. C.-Understanding Enzymes.. Funke.

NO LO MALTRATES POR FAVOR U.USUARIO: ESTE EJEMPLAR ES NUEVO. Tejeda O R. B. M. R I. L BIBLIOTECA O A. Montesinos O R. Guzmán .

Rosa Ma. Roberto Guzmán Z. Arizona.Bioseparaciones Armando Tejeda M. de Matemáticas Universidad de Sonora Hermosillo. México. México. Sonora. Department of Chemical Eng. Montesinos C. Centro de Investigaciones Científicas y Tecnológicas Universidad de Sonora Hermosillo. Editorial Unisón Hermosillo. USA. México. <» c •"- University of Arizona Tucson. Sonora. . Sonora. Depto.

1 1.4 Diseño 2. .4. Características de los Bioprocesos . Sumario Problemas Bibliografía 1 Introducción 2 Selección del Proceso 2.7 Bibliografía .4 1.1 Desarrollo de un Caso Base 2.2 Síntesis de Proceso 2.4.1 Mercado y Especificación del Producto 2.2.5 Sumario 2.2 El Proceso 2.2 1.3 1.2. . .5 Evolución de los Bioprocesos .6 Problemas 2.Contenido I El Proceso de Bioseparación 1.1 Introducción 2.2 Fundamentos 2.3 Equipo 2.

3.2 Sedimentación por Acción de la Gravedad 4.4.2 Equipos de Sedimentación Centrífuga 4.3.115 116 119 120 120 121 132 132 141 148 153 157 158 . .7 Bibligrafía 110 4 Centrifugación 4.1 La Filtración como parte de los Sistemas de BSL 72 3.3 Sedimentación Centrífuga 4. .2 Filtración Continua 98 3.5 Sumario 105 3.2. .1 Equipos de Filtración-Centrífuga 4.1 Introducción 4.4.3 Equipo de Filtración 80 3.1 Introducción 69 3.2 Pretratamiento de Caldos para BSL 74 3.2.3.3 Escalamiento 4.2 Centrífuga de Discos 4.6 Problemas 111 111 112 112 .4.1 Filtración Intermitente 85 3.1 Diseño de Centrífugas Tubulares 4.4.2.3 Teoría de la Filtración 77 3.2.106 3.4 Factor G 4.6 Problemas .2 Fundamentos 71 3.4.4 Filtración Centrífuga 4.3.1 Ley de Stokes 4.2 Filtros Continuos al Vacío 81 3.1 Filtros Intermitentes a Presión 80 3.4.4 Diseño de Equipo de Centrifugación 4.2 Fundamentos de la Centrifugación 4.4 Diseño de Equipo de Filtración 84 3.2.5 Sumario 4.2. 65 3 Filtración 69 3.2.3 Equipo de Centrifugación 4.vi CONTENIDO II Remoción de Insolubles y Ruptura Celular.

4.5 Sumario 5.3.2.1 Estructura de la Pared Celular 5.3 Selección del solvente 242 6. . .3 Métodos de Rompimiento Celular 5.4.2.4.3 Equipo de Rompimiento Celular 5.3 Microfluidizador 5.2.3.1 Introducción 227 6.4 Extracción en Dos Fases Acuosas Inmiscibles .2 Homogeneizador de Alta Presión 5. . .1 Tipos de Sistemas de Extracción Líquido-Líquido 229 6.2 Equipo de Extracción Continua 258 6. 243 6.1 Extracción Intermitente 264 6.3.2.2 Fundamentos 5.6 Problemas 5.2 Extracción Continua 273 .3.4 Diseño de Equipo de Rompimiento 5.2 homogeneizador de Alta Presión 5.2 Sistemas Celulares de Secreción 5.4 Diseño de Equipo de Extracción 263 6. .2.3.1 Introducción 5.7 Bibliografía III Concentración del Producto 223 6 Extracción 227 6.7 Bibliografía 1 vii 162 165 165 166 167 168 169 174 178 178 190 196 199 200 212 215 218 221 5 Rompimiento de Células 5.2.4 Métodos de Permeabilización 5.CONTENIDO 4.2.2 Química de la Extracción Líquido-Líquido .1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5.1 Equipo de Extracción Intermitente 257 6.4.2 Fundamentos de la Extracción 228 6.3 Equipo de Extracción 256 6.2.1 Molino de Perlas de Alta Velocidad 5. 229 6.

2.2.1 Introducción 307 7.1 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Intermitentes 342 7.2 Purificación del Producto Introducción Fundamentos 8.2 Tipos de Adsorbentes 310 7.5 6.4.2.4.2 Adsorbedores Tipo Tanque Agitado Continuo . .4.3 Adsorción en Lecho Fijo 363 7. 422 424 431 431 432 432 8 Cromatografía por Elución.2.2 Fundamentos 309 7.4 Cinética de la Adsorción 324 7.7 6.2.7 Bibliografía 413 IV 8.3 .5 Cinética de la Adsorción Equipo Cromatográfico 415 419 419 420 .2.2. 8.3 Equipos de Adsorción 338 7.4. 307 7.6 Problemas 408 7.vni CONTENIDO 6.1 Tipos de Adsorción Según el Tipo de Interacción Soluto-Adsorbente 310 7.3 Tipo de Cromatografía de Acuerdo a la Presión de Operación 8.1 Tipos de Cromatografía Líquida según el Principio de Separación .2.2 Matrices 8.2.4 Relaciones de Equilibrio 8.1 8.4 Diseño de Adsorbedores 342 7.3 Relaciones de Equilibrio 319 7.6 6.3 Extracción Fraccionaria Sumario Problemas Bibliografía 292 298 299 304 7 Adsorción. 1C 8. 358 7.5 Sumario 407 7.

2.3 Equipo de Precipitación 9. 495 516 522 525 525 527 533 543 544 545 547 547 548 548 554 555 573 573 574 579 581 .6 Problemas 9. Pureza y Rendimiento 8.2 Módulos 10.2.2 Flujo Cruzado o Tangencial 10.1 Modelos Cromatográficos 8.3 Escalamiento y Optimización 8.7 Bibliografía 9 Precipitación 9.3.1 Introducción 9.2 Fundamentos 10.4.4.2 Criterios de Evaluación Técnica del Comportamiento de las Columnas: Resolución.4 Diseño de Procesos de UF 10.2 Precipitación de Proteínas por Desnaturalización Selectiva 9.4 Diseño de Precipitadores 9.3 Teoría de la Ultrafiltración 10.5 Sumario 8.6 Problemas 8.2 Diseño de Precipitadores 9.2.1 Introducción 10.2.4.1 Objetivo de la UF ix 434 434 463 471 482 483 490 493 493 494 .1 Precipitación por Disminución de la Solubilidad 9.3 Equipos 10.2 Fundamentos 9.CONTENIDO 8.1 Procesos de Membrana 10.1 Membranas 10.4.5 Sumario 9.4.3 Precipitación por Afinidad 9.2.3.2.1 Cinética de la Precipitación 9.4.7 Bibliografía 10 Ultrafiltración 10.4 Diseño de Columnas Cromatográficas 8.

2.2.2.2 Fundamentos 12.3 Fenómenos de Dispersión 629 11.4 Diseño 652 11.6 Problemas 10.2.2 Teoría Cinética 656 11.4 Medios y Modos de la Electroforesis 636 11. 665 669 669 670 671 677 679 12 Cristalización 12.2A Selección del Modo de Operación 12.x 10.4. .5 Sumario 657 11.2.3 Equipos 640 11.3 Equipos Electrocromatográficos 647 11.3.2.4.1 Teoría de Platos 652 11.1 Tipos de Cristales 12.4 Diseño de la Unidad de UF 10.1 Carga y Punto Isoeléctrico de las Proteínas .3.2 Fundamentos 618 11.1 Introducción 12.4.6 Problemas 658 11.2 Pureza de los Cristales 12.7 Bibliografía 659 V Operaciones de Acabado 661 665 .5 Sumario 10. 619 11.3 Equilibrio: Solubilidad y Sobresaturación 12.7 Bibliografía CONTENIDO 583 586 .3.2 Equipos de Flujo Libre con Recirculación 646 11. .1 Equipos de Flujo Libre 643 11.2 Mecánica de Fluidos 10.3 Métodos de Operación 10.2.5 Cinética de la Cristalización .2. .4.2 Teoría Electrocinética 619 11.589 610 611 615 11 Electroforesis 617 11.1 Introducción 617 11.4.

2.2.2.2.1 Secadores Adiabáticos 13.5 Sumario 738 12.1 Cristalizadores Intermitentes 689 12. 689 12.4 Diseño de Cristalizadores 693 12. 13.4 Diseño de Secadores 13.4.2 Células y Virus A.3.7 Bibliografía 743 13 Secado 13.3.2 Cristalizadores Continuos con Remoción Selectiva 711 12.4.4 Efectos Colaterales del Secado .3 Equipo de Secado 13.1 Células procarióticas A.3.3.4 Cristalizadores Intermitentes 730 12.6 Distribución de Tamaño en Poblaciones de Cristales687 12.2 Métodos de Secado 13.2. .6 Problemas 13.l Introducción A.1 Introducción .3 Equipo de Cristalización 689 12.5 Sumario i .2 Secadores no Adiabáticos 13. 13.3 Velocidad de Secado 13.2 Diseño de Secadores no Adiabáticos 13.4.1 Cristalizador Continuo 694 12.6 Problemas 740 12. 13.3 Balances de Masa y Energía en Cristalizadores Continuos 713 12.2 Cristalizadores Continuos .7 Bibliografía A Material Biológico A.2.1 Diseño de Secadores Adiabáticos 13.CONTENIDO xi 12.2 Fundamentos 13.2. .4.4.2 Células Eucarióticas 745 745 746 746 758 759 759 762 762 765 769 769 781 785 786 788 789 789 789 791 796 .4.1 Equilibrio y Propiedades Térmicas 13.

2 Carbohidratos A.3 Células Recombinantes A.3.3.xii A.3.2.3 Biomoléculas A.1 Proteínas A.3.2.4 Crecimiento Celular A.4 Virus A.3 Lípidos A.4 Ácidos Nucleicos A.5 Bibliografía CONTENIDO 802 803 803 803 814 818 823 838 842 .