Anexo 1 - Guía para el desarrollo de la tarea 2.

Este anexo tiene la finalidad de brindar una guía para la solución de la Tarea 2.

Nombre del estudiante: Heriberto Mejía Arrieta

Código: 73008897

Programa: Ingeniería de Alimentos

Ejercicio 1 – Cromatografía plana.

Tabla 1. Ejercicio 1.1 -Identificación y definición de conceptos de Cromatografía Plana.

1. Concepto
Cromatografía de Papel.
Cromatografía de Capa Fina:
2. Respuesta
Respuesta: se denomina de esta forma a la
cromatografía plana que emplea celulosa
como fase estacionaria
Respuesta: La fase estacionaria está
extendida sobre un soporte solido inerte de
vidrio, platico o aluminio. La muestra para
analizar se aplica por medio de un tubo
capilar sobre la superficie de una capa fina
adsorbente en forma de banda o punto

Fase Estacionaria. Respuesta: sustancia sólida, o líquida

sostenida por un soporte inerte, con la cual
interactúan de diversas maneras los
componentes de la muestra a analizar. Ing.
Adriana G. Corzo. - Cátedra de Química
Orgánica y Biológica. Facultad de Ciencias
Forestales – U.N.S.E.
Fase Móvil. Respuesta: Es un líquido (o mezcla de
líquidos), un gas o un fluido supercrítico que
fluyen a través del sistema cromatógrafo
(papel, columna o placa) arrastrando los
solutos.
Ing. Adriana G. Corzo. - Cátedra de Química
Orgánica y Biológica. Facultad de Ciencias
Forestales – U.N.S.E.
Métodos de Revelado. Respuesta: Cuando la muestra no es
coloreada se usan métodos de revelado, los
cuales nos permitirán visualizar los
componentes presentes. Estos pueden ser no
destructivos, por ejemplo, UV y
destructivos, por ejemplo, ácido sulfúrico.

Desde la literatura suministrada en la Unidad de estudio y el artículo asignado por el

docente, realice el siguiente análisis:
Título: Evaluación del color de los alimentos, consumo y determinación del tipo de
color mediante cromatografía de capa fina
Autor: Fereshteh Farzianpour

Descripción de la técnica de Cromatografía Planar:

Las muestras fueron analizadas por cromatografía de capa fina.

 Eluyentes: ácido clorhídrico, ácido sulfúrico, amonio.
 Materiales: jeringa Hamilton, tubo de capilaridad (tubo de hematocrito), lana
blanca, tanque de solvente, agua destilada, campana, baño de baño María,
Matraces Erlen Mayer.
 Disolvente se utilizó el ácido acético y butanol
 Adsorbente se realizó sobre placas de gel de sílice

Descripción de la técnica por cromatografía de capa fina

1. Se activó el gel de sílice colocando las placas en una incubadora con una
temperatura de 90-100 ° C durante 8-10 min para eliminar su humedad y activar
el gel de sílice. Luego, se sacó la placa y se dejó enfriar.
2. Las placas preparadas se clasificaron horizontalmente con lápiz desde una
dirección y se especificaron distancias de 3 cm en esta regla con lápiz.
3. Se tiñó una pequeña cantidad de la solución de color separada en la placa con
contactos cortos, de modo que el diámetro de cada mancha de color no exceda
de 2-3 mm. Debajo de cada mancha, se anotaron los detalles y el secado de las
manchas se facilitó con un secador de pelo. Si la densidad del color era baja en
una mancha, se repitió la tinción para obtener el color deseable.
4. Densidad. Junto con los colores separados, se utilizaron colores estándar para
comparar e identificar los colores.
5. Preparación del tanque de TLC sobre placa de gel de sílice, la cromatografía es
ascendente y el disolvente se coloca en el fondo del tanque. Para ello, el tanque
se lavó primero a fondo y luego se vertieron en el tanque los disolventes butanol
normal, agua destilada y ácido acético (en la relación de 20: 12: 5) y se agitaron.
6. La placa teñida se colocó dentro del tanque, se puso tapa del tanque y cuando
el frente del solvente se acerca a casi 4 cm del extremo superior de la placa, la
placa se sacó del tanque y se dejó secar completamente bajo una campana.

Información tomada studio de investigación de Fereshteh Farzianpour et al. / American Journal of Applied
Sciences, 10 (2): 172-178, 2013

https://docs.google.com/document/d/1-o-AJTq0-vmk9ytRhHqFeD048V-i-xhioyx2P-Q1RsM/edit
 Información tomada de
:https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43719/mod_resource/content/2/Cr
omatograf%C3%ADa.pdf

Cromatografía ascendente en capa fina

Figura tomada http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm

Análisis de la aplicación y desarrollo de la técnica de Cromatografía Planar:

Las muestras se aplican en forma de manchas circulares sobre uno de los extremos de
la placa. Tras el desarrollo, la identificación de cada componente de la mezcla se realiza
midiendo el desplazamiento relativo de cada mancha en la placa respecto a un
compuesto patrón o al frente del disolvente, definiéndose para cada banda sus valores
de Rf respectivamente, En este paso se midió el valor Rf (medida de la distancia
recorrida por los colores de muestra en relación a la distancia recorrida por los colores
estándar). Sin embargo, existen diferentes tablas sobre viajes de varios colores en el
plato en diferentes disolventes. Se debe considerar que las condiciones ambientales
tales como temperatura, presión atmosférica, flujo de aire y frescura de los eluyentes
influyen en la distancia recorrida por los colores.

Información tomada studio de investigación de Fereshteh Farzianpour et al. / American Journal of Applied
Sciences, 10 (2): 172-178, 2013

https://docs.google.com/document/d/1-o-AJTq0-vmk9ytRhHqFeD048V-i-xhioyx2P-Q1RsM/edit
Identificación de técnicas de revelado y análisis de datos:

En este paso se midió el valor Rf (medida de la distancia recorrida por los colores de
muestra en relación a la distancia recorrida por los colores estándar), la distancia
recorrida por los colores, se identificó el tipo y nombre de los colores. Los datos se
analizaron con SPSS versión 16.

Análisis de datos:
 La mayor frecuencia de encargados de las instalaciones se observó en el grupo
de edad de 31 a 40 años, mientras que la mayoría de los encargados tenían nivel
de educación secundaria y tenían una trayectoria laboral de 1 a 5 años.
 La mayoría de los productos de pastelería, poolak y rock las muestras de dulces
contenían colores. Además, como se indica que el amarillo ocaso fue el color
consumido con más frecuencia entre los colorantes alimentarios permitids y no
se utilizó carmín índigo en las muestras.
.
Referencias Bibliográficas complementaria (Norma APA):
 https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43719/mod_resource/conten
t/2/Cromatograf%C3%ADa.pdf

 https://docs.google.com/document/d/1-o-AJTq0-vmk9ytRhHqFeD048V-i-
xhioyx2P-Q1RsM/edit

 studio de investigación de Fereshteh Farzianpour et al. / American Journal of

Applied Sciences, 10 (2): 172-178, 2013

 http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm

 Ing. Adriana G. Corzo. - Cátedra de Química Orgánica y Biológica. Facultad de

Ciencias Forestales – U.N.S.E.
Tabla 2. Ejercicio 1.2 – Cálculo Rf
1. Pregunta 2. Respuesta
Descripción del ensayo Respuesta:
planteado en el Artículo
(Referido sólo a la Determinación de los aromas de la vainilla en los productos
Cromatografía Planar): alimenticios principalmente en industria de panadería,
confitería, productos lácteos, entre otros, con el objetivo de
lograr mejor separación de vainillina y etil vainillina, ya que
esta no se encuentra de forma natural.
Estos resultados se determinan por medio de la técnica de
cromatografía plana con análisis de cromatografía de capa
fina.

Valores para 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

Determinación Rf 𝑅𝑓 =
𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑒𝑙 𝑠𝑜𝑙𝑣𝑒𝑛𝑡𝑒
(dimensión
cromatoplaca; distancia 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎
recorrido por eluyente; 𝑅𝑓 =
7𝑐𝑚
frente de solvente;
Distancia recorrida por la
muestra)
Tabla(s) Resumen Rf

Fases y reveladores Estacionaria: placas de Sorbfil PTSKh-P-V

Para la fase móvil, estaban buscando cual era mejor y más

reproducible por lo que hicieron el mismo procedimiento con
diferentes fases móviles.
Móvil: Chloroform–ethylacetate–PrOH (96:2:2),
Chloroform, Benzene–ethyl acetate (8:2), Benzene–ethyl
acetate (9:1), Benzene–EtOH (9 : 1), Benzene–AcOH (9 : 1),
Benzene–ethyl acetate (9 : 1), Benzene–ethyl acetate (95 : 5),
Hexane–acetone (8 : 2), Hexane–ethyl acetate (8 : 2),
Hexane–ethyl acetate (9 : 1).

Soporte: Se utilizó un soporte de polímero de marca

AO Sorbpolimer, Russia (10*10 cm)
 Al igual que para la fase móvil, los autores (Gerasimov et al,
2003), usaron una gama de reveladores para identificar el
mejor.
Reveladores: mezcla de heptanona, etanol y ácido sulfúrico.
(una relación de volumen/volumen 4: 5: 1),
Vapores de yoduro, DNPH, DMABA, Acetona– Ácido
sulfúrico -etanol en diferentes volúmenes.

Desarrollo para Para determinar los valores de Rf, tenemos que tener la
determinar valores Rf (de distancia que recorrido el eluyente en la placa.
requerir calcular valor de
recorrido de la muestra, Tamaño de la placa = 10 cm * 10 cm
plantear el cálculo
correspondiente). Frente del eluyente en el densitograma = 7 cm (el cual es la
distancia total que recorre la fase móvil en la fase
estacionaria).

Ahora de acuerdo al artículo, los densitogramas más

representativos o que presentan mejores resultados son los
que tienen como fase móvil : (a) hexano-acetato de etilo
(9: 1), (b) hexano-acetona (8: 2) y (c) benceno-acetato de etilo
(95: 5) donde el pico 1 es vainillina, el pico 2,
etilvainillina, el pico 3 aldehído anísico; el 4 heliotropina y el
pico 5 pertenece al aldehído cinámico

Distancias que recorre la muestra según los densitogramas

a. Vainillina para hexano-acetato de etilo (9: 1) = 2,5 ±2
cm
b. Etilvainillina para hexano-acetato de etilo (9: 1)= 3.5
±2 cm
c. Vainillina para hexano-acetona (8: 2)= 3,5 ±2 cm
d. Etilvainillina para hexano-acetona (8: 2)= 4,9 cm ±
2cm
e. Vainillina para benceno-acetato de etilo (95: 5)= 3,6
±2 cm
f. Etilvainillina para benceno-acetato de etilo (95: 5)=
4,5 ±2 cm
Calculamos Rf con base a los valores por los densitogramas
2,5 𝑐𝑚
𝑎. 𝑅𝑓 = 7 𝑐𝑚 = 0,35 ±2

3,5 𝑐𝑚
b. 𝑅𝑓 = = 0,5 ± 2
7 𝑐𝑚

3.5 𝑐𝑚
c. 𝑅𝑓 = = 0,5 ±2
7 𝑐𝑚

4,9 𝑐𝑚
d. 𝑅𝑓 = = 0,7 ± 2
7 𝑐𝑚

3,6 𝑐𝑚
e. 𝑅𝑓 = = 0,51 ± 2
7 𝑐𝑚

4,5 𝑐𝑚
f. 𝑅𝑓 = = 0,64 ± 2
8 𝑐𝑚

Hay que tener en cuenta que estos valores son aproximados

según los densitogramas, según el artículo estas placas fueron
realizadas seis veces y promediado cada distancia que recorrió
la muestra.

No obstante, se puede despejar la distancia recorrida por la

muestra a partir de la ecuación del Rf

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎

𝑅𝑓 = (ec 1)
7 𝑐𝑚

𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑟𝑒𝑐𝑜𝑟𝑟𝑖𝑑𝑎 𝑝𝑜𝑟 𝑙𝑎 𝑚𝑢𝑒𝑠𝑡𝑟𝑎 = 𝑅𝑓 ∗ 7 𝑐𝑚 (ec 2)

Usando la (ec 2) tenemos que las distancias recorridas para la

vainillina y la etilvainillina son respectivamente

Solventes Distancia de la Distancia de la etil

vainillina vainillina
Chloroform–ethyl 0.817*7 cm = 5,72 cm 0.918*7 cm = 6,43 cm
acetate–PrOH (96
:2 : 2)
Chloroform 0.679*7cm = 4,75 cm 0.833*7cm = 5,83 cm
Benzene–ethyl 0.850*7cm= 5,95 cm 0.929*7cm= 6,50 cm
acetate (8:2)
Benzene–ethyl 0.708*7cm = 4,96 cm 0.833*7cm = 5,83 cm
acetate (9: 1)
Benzene–EtOH (9 : 0.863*7cm = 6,04 cm 0.942*7cm= 6,59 cm
1)
Benzene–AcOH (9 0.772*7cm= 5,40 cm 0.851*7cm= 5,96 cm
: 1)
Benzene–ethyl 0.613 *7cm= 4,29 cm 0.763*7cm= 5,34 cm
acetate (9:1)
Benzene–ethyl 0.402 *7cm= 2,81 cm 0.559* 7cm= 3,91cm
acetate (95 : 5)
 Hexane–acetone (8 0.396 *7cm= 3,2 cm 0.525*7cm= 3,7 cm
: 2)
Hexane–ethyl 0.337*7 cm= 2,4 cm 0.509*7cm= 3,6 cm
acetate (8 : 2)
Hexane–ethyl 0.244 * 7 cm= 1,8 cm 0.433*7cm= 3,1 cm
acetate (9:1)
Los valores en Amarillo fueron las fases con las que
aproximamos las distancias en base a los densitogramas,
demostrando que sus valores son estimados y promediados.

Ahora calculamos Rf, con la siguiente ecuación

Δ𝑅𝑓 = |𝑅𝑓𝑣 − 𝑅𝑓𝐸𝑉 | ecu 3

 Δ𝑅𝑓 = |0,817 − 0,918| = 0,101
 Δ𝑅𝑓 = |0,679 − 0,833| = 0,154
 Δ𝑅𝑓 = |0,850 − 0,929| = 0,079
 Δ𝑅𝑓 = |0,708 − 0,833| = 0,125
 Δ𝑅𝑓 = |0,863 − 0,942| = 0,079
 Δ𝑅𝑓 = |0,772 − 0,851| = 0,079
 Δ𝑅𝑓 = |0,613 − 0,763| = 0,15
 Δ𝑅𝑓 = |0,404 − 0,559| = 0,155
 Δ𝑅𝑓 = |0,396 − 0,525| = 0,129
 Δ𝑅𝑓 = |0,337 − 0,509| = 0,172
 Δ𝑅𝑓 = |0,244 − 0,433| = 0,189
Estos cálculos concuerdan con los valores dados en el artículo.

Relación Fase Móvil, La relación entre la fase móvil y la muestra es de gran

Muestra y valor Rf. importancia en la cromatografía planar, ya que dependiendo
de la capacidad de elución de la muestra problema se debe
tener en cuenta la polaridad o apolaridad de la fase móvil con
la que esta será arrastrada por la placa, por tal motivo siempre
es importante determinar las polaridades delas muestras
problemas, y así determinar cuál es la fase móvil a convenir y
que sea eficiente en el ensayo, el resultado de la interacción
de ambas sustancias da como resultado el Rf, el cual es el
único valor cuantitativo que nos puede mostrar la selectividad
y la resolución que puede presentarse.
Importancia Rf en El Rf es la única herramienta cuantitativa para determinar
ensayos de compuestos en muestras sin el uso de instrumentos
Cromatografía Planar especializados como equipos de densitometría (Harris, 2012).
El Rf en la cromatografía planar es de gran importancia ya
que, esta cromatografía (planar), nos demuestra la probable
existencia o no de un determinado compuesto químico dentro
de una muestra problema a partir de técnicas sencillas como
la inclusión de patrones que incluyan el compuesto problema,
para determinar la presencia de un determinado compuesto
(esto se puede visualizar con un valor de Rf similares o
iguales, demostrando la existencia del compuesto en la
muestra total) (Skoog, Novena edición).

Sin embargo, y a pesar de que el Rf, nos da fiabilidad de

resolución y selectividad, no siempre es de rigor científico,
por lo que se le considera, un método preliminar, ya que no
ofrece una confianza absoluta y analítica de esta existencia,
por lo que suele ir acompañada de la cromatografía en HPLC,
densitometria u otras técnicas asociadas.

Referencias Bibliográficas:

Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (3a.ed.--.).

Barcelona: Reverté.
https://books.google.com.ec/books?id=H-
_8vZYdL70C&printsec=copyright#v=onepage&q&f=false

Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R.

(2015). Fundamentos de química analítica (9a. ed. --.).
México D.F.: Cengage Learning.
https://docs.google.com/document/d/1YynNYfO_DzWqFR
Bz2WRwxj4L6sg2kKOrH3Ip90kMuoo/edit
 Ejercicio 2 – Cromatografía en Columna.
Tabla 3 – Ejercicio 2 – Cromatografía de Columna.
Titulo Artículo Aplicaciones de la cromatografía de columna, papel,
capa fina y de intercambio iónico en muestras de
purificación: una mini revisión.

Autores Ebere EC, Obinna IB, Wirnkor VA

Año 2019

Descripción General de El artículo es una pequeña revisión de las

contenido artículo. aplicaciones que tienen las técnicas de
cromatografía de columna, la cromatografía de
papel, la cromatografía de capa final, para las
purificaciones de sustancias, y como estas
cromatografías en las que interaccionan la fase móvil
y la fase estacionaria, son versátiles y baratas para
diferentes campos como la farmacéutica, y la
biología molecular.
Parámetros a tener en cuenta en La técnica cromatográfica de columnas es uno de los
Cromatografía de Columna métodos más convenientes y ampliamente utilizados
(según artículo de revisión) para purificar compuestos. A menudo, las reacciones
sintéticas producirán múltiples productos y la
cromatografía en columna se puede utilizar para
aislar cada uno de los compuestos para su posterior
examen.

La cromatografía en columna es extremadamente

valiosa al sintetizar o aislar nuevos compuestos, ya
que es muy poco lo que se necesita saber sobre un
compuesto y sus propiedades físicas antes del
proceso de purificación.

Uno de los factores más importantes en este tipo de

cromatografía es la polaridad de las fases, ya que la
muestra eluirá y dependiendo de que tipo de muestra
sea (polar o apolar) esta se quedará mayor o menor
tiempo dentro de la columna. Es decir este método
separa los compuestos basados en la polaridad. Al
explotar las diferencias en la polaridad de las
moléculas, la cromatografía de columnas puede
separar fácilmente los compuestos por la velocidad a
la que los compuestos atraviesan la fase estacionaria
de la columna

Un uso importante de la cromatografía en columna

es el aislamiento de compuestos en una mezcla y la
purificación en el sector biológico que va desde aceites
hasta sólidos.
Ebere EC, Obinna IB, Wirnkor VA. Applications of Column,Paper, Thin Layer and
Ion Exchange Chromatography in Purifying Samples:Mini Review. SF J Pharm Anal
Chem. 2019; 2(2): 1018. ISSN 2643-8178
https://www.google.com.co/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&ved=2ahUKEw
inlMa7mqrvAhVDrFkKHcO_BB0QFjABegQIARAF&url=https%3A%2F%2Fscienceforeca
stoa.com%2FArticles%2FSJPAC-V2-E2-
1018.pdf&usg=AOvVaw3c2fVgtdtN9vLcba9lm2XZ

Análisis Comparativo entre la Cromatografía de Columna y la Cromatografía

Plana.
(Tener en cuenta características, manejo de las muestras, tipos de fases, factores
intervinientes en la separación, Afinidad, Longitudes del sistema, velocidades de
elución, entre otros)
Recuerde soportar análisis en fuentes de información debidamente referenciadas.
Cudro Comparativo

Cromatografía Plana Cromatografía Columna

la fase estacionaria es una sustancia la fase estacionaria es sólida y la fase móvil

adsorbente sólida recubierta de
placas de vidrio similar al principio
de cromatografía en papel, y la fase
móvil se desplaza hacia arriba por
acción capilar a través de la fase
estacionaria (placa delgada
empapada con el disolvente);
Para el caso de las fases, ambas
cromatografías dependen en gran
medida de la polaridad de las fases
tanto estacionarias como móviles.
Sin embargo la capa fina es
realizada por capilaridad (la
capacidad de una muestra de
ascender en la placa a determinada
velocidad)
es líquida. La columna está preparada
mezclando la sílice con un disolvente
adecuado y se vierte en una columna de
vidrio. El embalaje se puede lograr
generalmente por dos métodos; seco y
húmedo. En el método seco al principio la
columna se llena de sílice en polvo seco. A
continuación, se pasa a través de la fase
móvil un disolvente adecuado hasta que toda
la sílice esté húmeda y se haya sedimentado,
mientras que en el método húmedo se
prepara primero una mezcla de sílice y
disolvente y, a continuación, se vierte sobre
la columna utilizando un embudo hasta que
la sílice se deposita en ella (Eberec et al,
2019).
la de columna se realiza por elución
esperando que atraviese toda la columna de
vidrio (Harris, 2012).
 Para el caso de las longitudes, en
capa fina las longitudes suelen ser
menores ya que usualmente la fase
estacionaria (o la placa de sílice o
alúmina), es de un tamaño un poco
menor a las columnas de vidrios
fabricadas por las compañías
químicas. Así que los valores que
arroje en distancia tal vez no sean
los mismos (Rubinson, 2000).

los componentes se diferenciarán en la polaridad del eluyente afecta las

solubilidad y en la fuerza de su
adsorción, de forma que unos
componentes se desplazarán más
que otros;
velocidades relativas con las que los
diferentes componentes de la mezcla se
mueven en la columna. Los disolventes
polares compiten más eficientemente con las
moléculas polares de una mezcla por los
lugares polares del adsorbente (Operaciones
en el laboratorio de química; universidad de
Barcelona).

Referencias Bibliográficas

http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm

Operaciones en el laboratorio de química; universidad de Barcelona

http://www.ub.edu/oblq/oblq%20castellano/cromatografia_tipus.html

Ebere EC, Obinna IB, Wirnkor VA. Applications of Column,Paper, Thin Layer and
Ion Exchange Chromatography in Purifying Samples:Mini Review. SF J Pharm Anal
Chem. 2019; 2(2): 1018. ISSN 2643-8178
https://www.google.com.co/url?sa=t&rct=j&q=&esrc=s&source=web&cd=&ved=2a
hUKEwinlMa7mqrvAhVDrFkKHcO_BB0QFjABegQIARAF&url=https%3A%2F%
2Fscienceforecastoa.com%2FArticles%2FSJPAC-V2-E2-
1018.pdf&usg=AOvVaw3c2fVgtdtN9vLcba9lm2XZ

Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (3a.ed.--.). Barcelona: Reverté.

https://books.google.com.ec/books?id=H-
_8vZYdL70C&printsec=copyright#v=onepage&q&f=false

Análisis Instrumental. J.F. Rubinson y K.A. Rubinson Prentice Hall, 2000.

https://books.google.com.co/books?id=7rHcAAAACAAJ
 Ejercicio 3 – Cromatograma y velocidad de migración de solutos.

Tabla 4 – Ejercicio 3.1 – Definición de Conceptos de Velocidad de Migración solutos.

1 Parámetro Cálculo 2 Formula 3 Definición 4 Campo
Cromatográfico aplicación
Número de Platos N = L /H Respuesta: Es Determinaciones,
Teóricos. una medida de la separaciones y
N= número de platos eficiencia de la cuantificaciones
teóricos columna. La de compuestos
L= Longitud del eficiencia de las químicos en
empacamiento de la columnas matrices liquidas,
columna cromatográficas que puedan ser
H= altura del plato se incrementa a leidas a partir de
medida que el HPLC, o
Para los picos número de cromatografía
gaussianos Platos N liquida
aumenta y
conforme la
altura de plato H
se reduce.
Asimetría El factor de En general, es una
asimetría, medida de la
definida como la calidad de la
relación entre columna.
distancia desde
la línea central
del pico a la
pendiente de
bajada, entre la
distancia desde
la línea central
del pico a la
pendiente de
subida.
Factor de Capacidad El factor de
capacidad k´ es
′( la cantidad más
𝑘 𝐶𝑆 𝑉𝑆 )(𝐶𝑀 𝐶𝑀 ) =
𝐾𝑉𝑆 𝑉𝑀 importante en
cromatografía en
Columna.
Relaciona el
equilibrio de
distribución de la
muestra dentro
de la columna
con
Las propiedades
termodinámicas
 de la columna y
con la
temperatura.
Factor de Muestra las En la
Selectividad diferencias de cromatografía en
𝐾′𝐵 afinidad por los columna es muy
𝑎= solutos de las utilizado ya que
𝐾′𝐴
fases este factor de
Para aplicar la involucradas. selectividad
fórmula, el También depende de la
componente A debe describe el grado temperatura de la
eluir antes que el B. de separación de columna y de las
Por tanto, el factor de dos componentes polaridades de las
selectividad es (A y B) en una la fases móviles y
siempre mayor que columna: estacionarias.
uno.

Factor de Eficiencia Esta se puede Valor utilizado

calcular con el para mejorar la
número de resolución en la
platos, ya que cromatografía.
esta busca
ajustarse para
acortar y
optimizar el
tiempo en la
columna.
Número de Platos Nef, Refleja el Es usado en la
Efectivos número de veces cromatografía
Nef = L/H = (t´R/σ)2 que el soluto se liquida para
reparte entre las determinar la
dos fases eficiencia del
durante su paso cromatograma o
a de un pico
través de la especifico del
columna mismo.
Altura del Plato N = L /H La altura del La altura del plato
plato H, es la es una buena
N= número de platos distancia que el forma de expresar
teóricos soluto se mueve la eficiencia de la
L= Longitud del mientras se lleva Columna en
empacamiento de la a cabo un unidades de
columna reparto. longitud, sin
H= altura del plato especificar la
longitud de la
columna, en
cromatografía.
Resolución 𝑡𝑅1 − 𝑡𝑅2 El grado de La resolución es
𝑅𝑆 =
(𝑊𝑏1 + 𝑊𝑏2 )/2 separación o usada en todas las
resolución de cromatografías ya
 tr= tiempo de dos bandas que es uno de los
retención de los dos adyacentes se valores
máximos, el 1 eluye define como la cuantitativos que
primero. distancia entre determina que tan
los picos de las resuelto o
Wb =ancho de la línea bandas (o despejado y puro
base de los máximos. centros) dividida este un pico que
entre el ancho determine una
promedio de muestra en
Las bandas. específico.
Referencias Bibliográficas
Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (3a.ed.--.). Barcelona: Reverté.
https://books.google.com.ec/books?id=H-
_8vZYdL70C&printsec=copyright#v=onepage&q&f=false

Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2015). Fundamentos de
química analítica (9a. ed. --.). México D.F.: Cengage Learning.
https://docs.google.com/document/d/1YynNYfO_DzWqFRBz2WRwxj4L6sg2kKOr
H3Ip90kMuoo/edit

Gimiera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Introducción

a la cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 25-27) Madrid, ES: Editorial
Universidad Autónoma de Madrid. Recuperado el 23 de mayo de 2019 de
https://ebookcentralproquestcom.bibliotecavirtual.unad.edu.co/lib/unadsp/reader.actio
n?docID=3226641&ppg=26

Análisis Instrumental. J.F. Rubinson y K.A. Rubinson Prentice Hall, 2000.

https://books.google.com.co/books?id=7rHcAAAACAAJ

Tabla 5. Ejercicio 3.2 – Coeficiente de Distribución

1 Concepto 2 Definición 3 Fórmula
Soluto Respuesta: Sustancia que se Pigmento y grasas
encuentra disuelta en otra.
Solvente Respuesta: es una sustancia Octanol y Agua
química en la que se
disuelve un soluto, siendo
esta la de mayor proporción
en una solución.
Solución Respuesta: es una mezcla Una mezcla de Octanol +
homogénea de compuestos Agua + (Soluto escogido ya
químicos compuesta por sea el pigmento o la grasa).
soluto y solvente. Las
soluciones químicas pueden
presentar los tres estados de
la materia: líquida, física y
gaseosa.
Hidrófilo Respuesta: un compuesto El agua es un compuesto
que se caracteriza por tener Hidrófilo.
una fuerte afinidad por el
agua y los solventes polares.
Hidrófobo Respuesta: aquellas Los aceites son ejemplo de
sustancias que son repelidas compuestos o sustancias
por el agua o que no se hidrófobas
pueden mezclar con ella.
Mezcla Respuesta: Es la
combinación de dos o más
sustancias puras, que
pueden ser sólidas, líquidas
o gaseosas, y las cuales no
entran en reacción química
ni se transforman. Autores: Julián Pérez Porto y
Ana Gardey
Inmiscible Respuesta:
se dice que las sustancias
con características
inmiscibles son aquellas
que en alguna proporción no
son capaces de formar una
fase homogénea

4 Concepto 5 Definición 6 Fórmula

Coeficiente de Respuesta: Es cuando un
Distribución soluto entra al sistema
cromatografico e K = CS/CM
inmediatamente se reparte o
se distribuye entre la fase
móvil y la estacionaria.
Es el cociente entre la
concentración de todas las
sustancias, ionizadas y no
ionizadas, en el líquido 1
(n-octanol) y la
concentración de las
mismas sustancias en el
líquido 2 (agua).

Referencias Bibliográficas:
Gimiera, G. M. J., Quintana, M. M. D. C., & Da, S. D. C. M. D. (2012). Introducción
a la cromatografía líquida de alta resolución. (pp. 25-27) Madrid, ES: Editorial
Universidad Autónoma de Madrid. Recuperado el 23 de mayo de 2019 de
https://ebookcentralproquestcom.bibliotecavirtual.unad.edu.co/lib/unadsp/reader.ac
tion?docID=3226641&ppg=26
Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2015). Fundamentos de
química analítica (9a. ed. --.). México D.F.: Cengage Learning.
 https://docs.google.com/document/d/1YynNYfO_DzWqFRBz2WRwxj4L6sg2kKO
rH3Ip90kMuoo/edit

7 Relación de Conceptos
Cuando el coeficiente de distribución tiene un valor mayor, la concentración del soluto
en el solvente apolar es menor que la concentración del soluto en un solvente polar.

Tabla 6. Ejercicio 3.2- Factor de Retención

1 Cromatograma 1 2 Cromatograma 2
Factor de retención (k´) 10 5
Fase más densa (solvente) Menos densa Menos densa
Soluto (pigmentos y grasa) Más densa Más densa

3 concepto 4 Definición
Cromatograma Respuesta: es una imagen que traduce visualmente una
pantalla o en un papel la evolución en función del tiempo
de un parámetro que depende de la concentración
instantánea del soluto a la salida de la columna
Tiempo de Retención (tR) Respuesta: Responde al tiempo que transcurre el proceso
de elución de los compuestos de la muestra.
Tiempo muerto (tM) Respuesta: Son picos pequeños haciendo relación a
especies que no fueron retenidas.
Ancho de banda (W) Respuesta: relación con la forma y la separación de los
picos cromatográficos que se reflejan en el
cromatograma.
Señal en un Respuesta: Las señales son los denominados picos y
Cromatograma conjunto de picos.
Referentes bibliográficos (Norma APA)

Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2015). Fundamentos de
química analítica (9a. ed. --.). México D.F.: Cengage Learning.
https://docs.google.com/document/d/1YynNYfO_DzWqFRBz2WRwxj4L6sg2kKOr
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Análisis Instrumental. J.F. Rubinson y K.A. Rubinson Prentice Hall, 2000.

https://books.google.com.co/books?id=7rHcAAAACAAJ
Tabla 7. Ejercicio 3.2 – Cromatograma
1 Compuesto pico P 2 Compuesto pico G
Tiempo de Retención (tR) 15,61 min 14,42 min
Ancho de banda (W) 1,23 min 1,38 min
Tiempo de Retención
corregido (tR´) 𝒕′𝒓=𝒕𝒓−𝒕𝒎 t′𝒓=𝒕𝒓−𝒕𝒎
𝒕′𝒓 =15,61−0,36 𝒕′𝒓 =14,42−0,36
𝒕′𝒓 =15,25 𝒕′𝒓 =14,06

Factor de retención (k’) (𝑡𝑟 − 𝑡𝑚 ) (𝑡 𝑟 − 𝑡 𝑚 )

𝐾′ = 𝐾′ =
𝑡𝑚 𝑡𝑚
( 15,61 − 0,36) (14,42 − 0,36)
𝐾′ = 𝐾′ =
0,36 0,36
𝐾 ′ = 42,36 𝐾′ = 39,06
Número de platos teóricos 𝑡𝑟 2 𝑡𝑟 2
(N) 𝑁 = 16 ( ) 𝑁 = 16 ( )
𝑤 𝑤
15,61 2 14,42 2
𝑁 = 16 ( ) 𝑁 = 16 ( )
1,23 1,38
𝑁 = 2577 𝑁 = 1747
Altura de plato (H) 𝐿 𝐿
𝐻= 𝐻=
𝑁 𝑁
38 38
𝐻= 𝐻=
2577 1747

𝐻 = 0,014 𝐻 = 0,021

Factor de selectividad (α) 𝐾2

𝜎=
𝐾1
39,06
𝜎=
42,36

𝜎 = 0,92

Resolución (Rs) 2(𝑡𝑟2 − 𝑡𝑟1 )

𝑅𝑆 =
(𝑊1 + 𝑊2 )

2(14,42 − 15, 61)

𝑅𝑆 =
(1,23 + 1,38)
𝑅𝑆 = −0,91

Resolución con relación al 𝐾 𝐾

factor de retención 𝑅𝑆 = 𝑅𝑆 =
1+𝐾 1+𝐾
39,06
42,36 𝑅𝑆 = = 0,975
𝑅𝑆 = 1+42,36 = 0,97 1 + 39,06
Resolución con relación a 𝜎−1
la selectividad 𝑅𝑠 =
𝜎
0,92−1
𝑅𝑠 = 0,92 = -0,086
Resolución con relación a √𝑁 √𝑁
la eficiencia 𝑅𝑠 = 𝑅𝑠 =
4 4
√2577 √1747
𝑅𝑠 = 𝑅𝑠 =
4 4
𝑅𝑠 = 12,69 𝑅𝑠 = 10,44
Es sabido de acuerdo al cromatograma mostrado en la guía de trabajo, que el pico G,
sale de último, por tanto teóricamente debe tener un tiempo de retención mayor al pico
P, justamente como se muestra en el cromatograma planteado

Por tanto el valor de P debe ser menor al valor del pico G

PICO P PICO G
(tR) 14,42 min 15,61 min
(W) 1,23 min 1,38 min
Tiempo de t′𝒓=𝒕𝒓−𝒕𝒎 𝒕′𝒓=𝒕𝒓−𝒕𝒎
Retención 𝒕′𝒓 =14,42−0,36 𝒕′𝒓 =15,61−0,36
corregido 𝒕′𝒓 =14,06 𝒕′𝒓 =15,25
(tR´)
Factor de (𝑡 𝑟 − 𝑡 𝑚 ) (𝑡𝑟 − 𝑡𝑚 )
retención 𝐾′ = 𝐾′ =
𝑡𝑚 𝑡𝑚
(k’) (14,42 − 0,36) ( 15,61 − 0,36)
𝐾′ = 𝐾′ =
0,36 0,36
′
𝐾 = 39,06 𝐾′ = 42,36
Número de 𝑡𝑟 2 𝑡𝑟 2
platos 𝑁 = 16 ( ) 𝑁 = 16 ( )
𝑤 𝑤
teóricos (N) 14, 42 2 15,61 2
𝑁 = 16 ( ) 𝑁 = 16 ( )
1,23 1,38
𝑁 = 2577 𝑁 = 1747
Altura de 𝐿 𝐿
𝐻= 𝐻=
plato (H) 𝑁 𝑁
38 38
𝐻= 𝐻=
2577 1747

𝐻 = 0,014 𝐻 = 0,021
Factor de 𝐾2
selectividad 𝜎=
𝐾1
(α) 42,36
𝜎=
39,06

𝜎 = 1,08

Resolución 2(𝑡𝑟2 − 𝑡𝑟1 )

(Rs) 𝑅𝑆 =
(𝑊1 + 𝑊2 )

2(15,61 − 14, 42)

𝑅𝑆 =
(1,23 + 1,38)
𝑅𝑆 = 0,91

Resolución 𝐾
con 𝐾 𝑅𝑆 =
𝑅𝑆 = 1+𝐾
relación al 1+𝐾
factor de 39,06 42,36
𝑅𝑆 = 1+42,36 = 0,97
𝑅𝑆 = = 0,975
retención 1 + 39,06

Resolución 𝜎−1
con 𝑅𝑠 =
𝜎
1,08−1
relación a la 𝑅𝑠 = 1,08 = 0,074
selectividad

Resolución √𝑁 √𝑁
con 𝑅𝑠 = 𝑅𝑠 =
4 4
relación a la √2577 √1747
eficiencia 𝑅𝑠 = 𝑅𝑠 =
4 4
𝑅𝑠 = 12,69 𝑅𝑠 = 10,44
Tabla 8. Ejercicio 3.2 – Características de un Cromatograma

1 Pregunta 2 Respuesta
A partir del valor de tiempo de retención Que la solución que refleja el pico G
en el análisis cromatográfico realizado, demoro más en salir en el sistema
¿qué se puede concluir? Cromatografico, que el pico P, por lo que la
columna permitió que el pico G se viese
más resuelto en comparación con el pico P,
es decir el cromatograma mostrado posee
buena resolución gracias a la selectividad
de la columna.
A partir del número de platos obtenido A partir del cálculo de los platos, se puede
en el ejercicio, ¿qué se puede concluir? determinar la eficacia de la columna usada,
en este caso el número de platos es
considerablemente elevado para ambos
picos, por lo que podría reflejar una buena
elección de la columna cromatografía.
A partir de la Altura de plato del ejercicio La altura del plato es una buena forma de
desarrollado, ¿qué se puede concluir? expresar la eficiencia de la Columna en
unidades de longitud, sin especificar la
longitud de la columna. Para una
columna eficiente H, es un número
pequeño, por lo que se demuestra la
eficiencia en los cálculos realizados.
¿Qué relación tiene la resolución con el Para que la separación de dos componentes
factor de retención, la selectividad y la en una mezcla deben influir tres factores en
eficiencia? la resolución porque si los solutos no se
retienen no hay separación, a mayor
selectividad mejor separación y a mayor
número de platos teóricos, mejor la
separación.
Citas de fuentes de información (Normas APA):

Skoog, D. A., West, D. M., Holler, F. J., & Crouch, S. R. (2015). Fundamentos de
química analítica (9a. ed. --.). México D.F.: Cengage Learning.
https://docs.google.com/document/d/1YynNYfO_DzWqFRBz2WRwxj4L6sg2kKOr
H3Ip90kMuoo/edit

Harris, D. C. (2012). Análisis químico cuantitativo (3a.ed.--.). Barcelona: Reverté.

https://books.google.com.ec/books?id=H-
_8vZYdL70C&printsec=copyright#v=onepage&q&f=false