CROMATOGRAFIA EN PAPEL

KEILA CASTELLANO CHARRASQUIEL

INFORME DE LABORATORIO

DOCENTE:
RAMON LOZADA DEVIA

UNIVERSIDAD DE SUCRE
FACULTAD DE INGENIERIA
INGENIERIA AGROINDUSTRIAL
SEGUNDO SEMESTRE
SINCELEJO-SUCRE
MARZO 24 DEL 2021
 OBJETIVOS
Separar los componentes de la Clorofila presente en las hojas de espinaca
utilizando el método de Cromatografía de Capa Fina (TLC).

MARCO TEORICO
Esta es la práctica de la cromatografía de la clorofila y separación de los colores en
los rotuladores.
La cromatografía en papel es un proceso muy utilizado en los l laboratorios para
realizar análisis cualitativos, ya que, pese a no ser una técnica muy potente, no
requiere de ningún tipo de equipamiento. La fase estacionaria está constituida
simplemente por una tira de papel filtro y la fase móvil por el etanol.
La fase estacionaria está constituida simplemente por una tira de papel filtro. La
muestra se deposita en un extremo colocando pequeñas gotas de la solución y
evaporando el disolvente. Luego el disolvente empleado como fase móvil se hace
ascender por capilaridad. Luego se coloca la tira de papel verticalmente y con la
muestra de abajo dentro de un recipiente que contiene fase móvil en el fondo.
Después de unos minutos cuando el disolvente deja de ascender o ha llegado al
extremo se retira el papel y se deja secar. Si el disolvente elegido fue adecuado y
las sustancias tienen color propio se verán las manchas de distinto color separadas.
Cuando los componentes no tienen color propio el papel se somete a procesos de
revelado.
Hay varios factores de los cuales depende una cromolitografía eficaz: la elección
del disolvente y la del papel de filtro.
Un ejemplo podría ser que utilices un pedazo de papel y le hagas puntos de colores
con plumones permanentes y le pongas un lápiz del lado donde no están los puntos
de colores (esto te servirá como soporte), después en un vaso pon alcohol y coloca
la tira de papel con el lápiz horizontalmente en la parte de arriba para que el papel
no caiga y tienes que esperar para que el alcohol haga efecto en el papel, lo que
sucederá es que a los puntos de colores se les harán unas pequeñas líneas hacia
arriba.
 PROCEDIMIENTO
- Recoger unas cuantas hojas del parque o de espinacas
- Partir en trozos muy pequeños,
- Pasar las hojas partidas al mortero junto con sal gorda y etanol 96º
- Después machacarlas muy bien para poder extraer los distintos pigmentos
de la clorofila
- Filtrar el mosto obtenido, con papel de filtro o tela, y pasarlo a un platico
hondo
- Cortar un pedazo de papel de filtro de forma que queden dos hojas
formando un ángulo
- Colocar el papel suavemente en el líquido verde que se encuentra en el
plato hondo de tal manera que quede en forma vertical
- Dejar correr el solvente (etanol) lo suficiente para que los pigmentos se
separen
- Retirar el papel de filtro del sistema de elución, marcar con la punta de un
lápiz los sitios donde aparecen los colores y hasta donde corrió el solvente y
dejarlo secar
- Observar los diferentes colorees que se desarrollan a los luego de la hoja
de papel de filtro y medir las distancias donde se localizan las manchas y el borde
del solvente.
- Comparar estos colores con los datos de la literatura.
FOTOS DEL EXPERIMENTO

LOS MATERIALES
 CORTANDO LA
ESPINACA EN TROZOS PEQUEÑOS
 AQUÍ YA
MACHAQUE LA ESPINACA JUNTO CON LAS SAL Y UN POCO DE
ALCOHOL(96%)

AQUÍ SE
COLOCA EL PAPEL FILTRO EN EL LIQUIDO OBTENIDO
 SE PROCEDE A SACAR EL
PAPEL

ESTE ES EL RESULTADO FINAL

 DATOS YRESULTADOS
Observar el papel de filtro después de retirarlo y dejarlo secar

Anotar los diferentes colores que se obtienen después de corrida la muestra

VERDE BICHE, VERDE OSCURO Y AMARILLO
Comparar los resultados obtenidos en la práctica con los obtenidos en la literatura

ANALISIS O DISCUSION DE LOS RESULTADOS

El resultado del experimento fue exitoso, se pudo ver los colores que se querían.
Se dio xantophylis, clorofila b.
CONCLUSIONES
Al terminar el experimento se puso a prueba todo lo aprendido en clases. El
experimento fue exitoso y se obtuvo el resultado que se quería, se pudo observar
los clores y se puso a prueba el conocimiento.
RESPUESTAS AL CUESTIONARIO
- ¿Qué es la cromatografía en papel y para qué sirve?
La cromatografía describe un procedimiento químico en el que se separa una mezcla
en sus sus componentes individuales mediante una fase móvil y una fase
estacionaria. La fase estacionaria consta, según el procedimiento, de materia sólida
o un líquido, y la fase móvil de un líquido o gas. La cromatografía usa diferentes
procedimientos, que según el campo de aplicación tiene sus ventajas y desventajas.
Los procedimientos más importantes son la cromatografía en papel cromatografía
en capa fina, la cromatografía en columna y la cromatografía de gases (encontrará
una breve descripción al final de la página). Las aplicaciones prácticas de la
cromatografía se encuentran por ejemplo en la producción, donde se usa la
cromatografía para la limpieza y aislamiento de sustancias. Por otro lado, en la
analítica química se usa la cromatografía para separar mezclas en compuestos
homogéneos. La cromatografía juega un papel importante en muchos sectores, como
la química orgánica, la bioquímica, la química inorgánica, la química ambiental y la
química alimenticia.

- ¿Qué tipo de papel se usa para la cromatografía?

El papel tiene propiedades de intercambio iónico débiles, así como de adsorción. La
mayoría de las propiedades varían de papel a papel, lo que provoca variaciones en
el Rf. Actualmente existen papeles modificados con resinas cambiadores de iones,
alúmina, etc. El aparato que se usa consta de un soporte para el papel, un recipiente
para el disolvente y una cámara hermética para desarrollar el cromatograma. La
cámara hermética es necesaria para evitar la evaporación de los disolventes volátiles
debido a la gran superficie del papel expuesta. Antes de sumergir el papel en el
disolvente de elución se aplica la muestra en forma de punto diminuto con cualquier
objeto que pueda transferir un pequeño volumen. El papel debe estar en equilibrio
con los vapores del disolvente antes de empezar el desarrollo. La cromatografía en
papel se ha aplicado con buen éxito a problemas de química orgánica e inorgánica y
de bioquímica.

- ¿Qué es la cromatografía en papel ascendente y descendente?

Ascendente: el solvente se coloca en el fondo de la cuba y el papel se suspende
colocado en la parte superior de la cuba.
Descendente: el solvente se coloca en un depósito inerte ubicado en la parte superior
de la cuba cromatográfica. En el fondo de la cuba se coloca también un poco de
solvente para asegurar la saturación con el vapor. La parte superior del papel se
sumerge en el disolvente y se tapa herméticamente la cuba (al igual que en la técnica
ascendente). La siembra quedará en la parte superior del papel.
- ¿Cuál es la fase móvil de la cromatografía en papel?
Fase móvil: es un fluido que puede ser líquido, gas o fluido supercrítico que se usa
como portador de la mezcla y que se hace pasar a través de la columna
cromatográfica y la fase estacionaria
- ¿Qué es una fase estacionaria en cromatografía?
Fase estacionaria: material que permanece dentro de la columna cromatográfica
durante la cromatografía y que retiene algún componente de la muestra, posee una
gran área superficial y puede ser un sólido o un líquido dispuesto sobre un sólido
que actúa como soporte.

- ¿Qué se necesita para hacer una cromatografía?

Cromatografía plana (papel

Cromatografía en columna
o capa fina)
1.- Preparación del soporte
1.- Preparación del soporte y fase estacionaria.
y fase estacionaria.
1.1.- Equilibrado de la columna.
2.- Aplicación de la
2.- Aplicación de la muestra. muestra.
Secado.
 3.- Elución:
a) Lavado de componentes no retenidos.
3.- Desarrollo de la
b) Liberación, desplazamiento o elución
cromatografía.
propiamente dicha de los componentes
retenidos.
4.- Recolección de fracciones o análisis del
4.- Secado de la placa.
efluente en continuo.
5.- Revelado y
5.- Análisis, cuantificación o revelado. cuantificación en su caso.

- ¿Qué significan los valores de RF en cromatografía?

El parámetro que se mide en una cromatografía plana se denomina relación de
frentes, Rf, y representa la distancia que recorre un analito sobre la fase estacionaria
respecto a la distancia que recorre la fase móvil en la cromatografía:
Rf A = distancia recorrida por el analito A / distancia recorrida por la FM.
Este parámetro puede tomar valores entre 0 y 1. Cuanto más cercano a 0 es el valor
de Rf significa que el analito tiene afinidad por la fase estacionaria (es muy retenido)
mientras que cuanto más cercano a 1 sea el valor de Rf significa que el analito tiene
más afinidad por la fase móvil, por lo tanto, es poco retenido por la fase estacionaria.

- ¿Cómo se utiliza la cromatografía?

La cromatografía es un método muy utilizado en todas las ramas de la ciencia que
permite la separación, identificación y determinación de los componentes químicos
en mezclas complejas. Ningún otro método de separación es tan potente y de
aplicación tan general. Las cromatografías son procesos que abarcan varias
técnicas separativas, basadas en propiedades físicas de ciertos materiales, que, en
interacción con sustancias o mezclas de sustancias, la/s cual/es guarda/n relación
con las propiedades químicas de éstas, permite descomponer una mezcla y analizar
sus constituyentes. Con el desarrollo de la tecnología, las técnicas cromatográficas
se diversificaron y mejoraron sensiblemente su capacidad para resolver mezclas de
distinta naturaleza
- ¿Cuáles son los tipos de cromatografía que existen?
 Cromatografía de gases
 cromatografía en papel
 cromatografía en capa fina
 cromatografía de intercambio iónico
 cromatografía de líquidos
 cromatografía líquida de alta resolución
 cromatografía de afinidad
 cromatografía hplc
- Consultar que es el Rf y cómo se determina cuantitativamente.
El constante Rf (Factor de retención) es simplemente una manera de expresar la
posición de un compuesto sobre una placa como una fracción decimal y mide la
retención de un componente. Se define como:
Rf = (distancia recorrida por la zona del soluto desde el origen) / (distancia
recorrida por la fase móvil desde el origen)
La distancia recorrida por el compuesto se mide generalmente desde el centro de la
mancha, los cálculos se simplifican si el denominador es 10. Para que los Rf sean
reproducibles deben ser fijadas una serie de condiciones (Espesor de la placa, fase
móvil, fase estacionaria, cantidad de muestra).
El máximo valor de Rf que se puede alcanzar es de 1, lo ideal es un Rf entre 0.55 y
0.7. Para averiguar si dos compuestos son iguales, se colocan ambos sobre la
misma placa y se desarrolla con varios eluyentes. Una vez desarrollados se
calculan los Rf y si son distintos, puede deducirse con toda seguridad que no se
trataba del mismo compuesto. Por el contrario, si los Rf son iguales, los
compuestos pueden ser iguales o no.
 BIBLIOGRAFIA
- https://www.pce-iberica.es/instrumentos-de-medida/instrumentos-
laboratorios/cromatografia.htm.
- https://blog.utp.edu.co/docenciaedwin/files/2014/09/TIPOS-
CROMATOGRAF%C3%8DA.pdf.
- http://labioespoch.blogspot.com/2014/06/cromatografia-ascendente-en-
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- https://ri.conicet.gov.ar/bitstream/handle/11336/75465/CONICET_Digital_
Nro.3655a360-b03b-44c8-8519-
bc747d073f7c_A.pdf?sequence=2&isAllowed=y#:~:text=Fase%20m%C3%
B3vil%3A%20es%20un%20fluido,cromatogr%C3%A1fica%20y%20la%20
fase%20estacionaria.&text=Revelado%3A%20proceso%20de%20separar%
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- http://biomodel.uah.es/tecnicas/crom/inicio.htm.
- https://aulavirtual.agro.unlp.edu.ar/pluginfile.php/43719/mod_resource/cont
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- https://www.coursehero.com/file/p6vf8ett/Constante-Rf-La-constante-Rf-
Factor-de-retenci%C3%B3n-es-simplemente-una-manera-
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denominador%20es%2010.
- https://www.coursehero.com/file/p6vf8ett/Constante-Rf-La-constante-Rf-
Factor-de-retenci%C3%B3n-es-simplemente-una-manera-
de/#:~:text=Se%20define%20como%3A%20Rf%20%3D%20(,si%20el%20
denominador%20es%2010.