INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL

ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIÓLOGICAS

INSTITUTO POLITECNICO
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMIICA
ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
NACONAL
ESCUELA NACIONAL
DE CIENCIAS BIOLOGICAS

INGENIERIA BIOQUÍMICA
“Laboratorio de Ing. Bioquímica”

BITACORA
Profesores: -Silva Elizondo
-Elizabeth Jiménez
-Sergio Meza
-Sakuntara Gozara
Alumno: Rivera Hernández Jorge Oscar

GRUPO: 3IM2
 INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIÓLOGICAS
DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMIICA
ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
PRACTICA No.7:”EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DEL SUSTRATO Y LA PRESENCIA DE
UN INHIBIDOR SOBRE LA VELOCIDAD DE UNA REACCIÓN ENZIMÁTICA”
 INTRODUCCIÓN:
El término cinética enzimática implica el estudio de la velocidad de una reacción catalizada por una
enzima y los efectos que pueden tener factores como los inhibidores.
 CONCENTRACION:
En las reacciones no catalizadas por enzimas la formación de producto depende linealmente de la
concentración de sustrato añadido. A concentraciones relativamente bajas de sustrato, la velocidad de la
reacción aumenta en forma proporcional a la concentración de
sustrato, obteniéndose una relación de tipo lineal. Sin embargo,
a concentraciones más altas de sustrato, la relación proporcional
no se cumple ya que al aumentar la concentración de sustrato, la
velocidad no aumenta considerablemente.
En la Fig. 4 se representa el efecto de la concentración de
sustrato sobre la velocidad de una reacción catalizada
enzimáticamente. Este comportamiento cinético, conocido como
curva de saturación hiperbólica por el sustrato, constituye la Figura 4. Efecto de la concentración de sustrato
norma seguida por la mayoría de los enzimas, los sobre la actividad enzimática. Curva de saturación
denominados enzimas michaelianos. Como principal hiperbólica por el sustrato.
desviación, algunos enzimas muestran curvas sigmoideas, en vez de hiperbólicas, de saturación por el
sustrato (caso de algunos enzimas cooperativos o alostéricos).
El anterior modelo cinético se ajusta a la ecuación:
𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆]
𝑣= =
𝐾𝑚 + [𝑆]
Donde:
𝐾𝑚 : Es la constante de Michaelis e indica la afinidad del enzima por su sustrato,
𝑉𝑚𝑎𝑥 : Es la velocidad máxima e indica la capacidad catalítica. La determinación de los anteriores
parámetros cinéticos (𝑉𝑚𝑎𝑥 y 𝐾𝑚 ) se puede realizar utilizando las representaciones de Lineweaver-Burk
(1/v: 1/ [S]) y de Eadie-Hofstee (v: v/ [S]), (Fig. 5).
 INHIBICIÓN ENZIMÁTICA:
Existen sustancias que pueden impedir que la enzima desarrolle su actividad catalítica, ralentizando o
paralizando la reacción enzimática. A estas sustancias se las denomina inhibidores enzimáticos.
Teniendo en cuenta que las reacciones químicas en la célula están catalizadas por enzimas, es fácil intuir
el papel de muchos inhibidores enzimáticos que actúan como fármacos, antibióticos o conservantes;
otros pueden ser tóxicos, potentes venenos. Por ejemplo, la aspirina (acetilsalicilato) es un analgésico
que inhibe la enzima que cataliza el primer paso en la
síntesis de prostaglandinas, implicadas en la
producción del dolor. Se conocen dos tipos
principales de inhibición: la reversible y a la
irreversible. La primera implica una unión “no
covalente” del inhibidor y, por lo tanto, siempre puede
revertirse. En la inhibición irreversible, el inhibidor se
une al enzima de forma “covalente” y permanente.

Figure 5. Representaciones de Lineweaver-Burk (panel

izquierdo) y de Eadie-Hofstee (panel derecho).
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DEPARTAMENTO DE BIOQUÍMIICA
ALUMNO: RIVERA HERNÁNDEZ JORGE ÓSCAR
GRUPO: 3IM2
 OBJETIVOS:
 Observar el efecto de la concentración del sustrato sobre la velocidad de la reacción
enzimática y determinará la constante de Michaelis-Menten por los métodos conocidos, así
como su aplicación.
 Determinar el tipo de inhibición producido por la anilina sobre la actividad de la invertasa.
 DIAGRAMA DE FLUJO:
INICIO
Adicionar Sacarosa Adicionar Sacarosa
0.005M; pH: 4.5 (0.5, 0.1, Preparar 1 tubo testigo y tubos 0.005M; pH: 4.5 (0.5, 0.1,
0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1) ml problema 𝑃1 , 𝑃2 , 𝑃3 , 𝑃4 , 𝑃5 , 𝑃6 0.2, 0.3, 0.5, 0.8, 1) ml

0.5 m.L de Regulador de 0.5 m.L de Inhibidor en

acetatos 0.005M; pH: 4.7 regulador de acetatos; pH: 4.7


Añadir (0.5, 0.9, 0.8, 0.7, 0.5, 0.2, 0.0) m.L de Agua

Preincubar durante (5min) a temperatura ambiente

Adicionar (0, y 0.5) de enzima 10µg/m.L

Incubar durante (5min) a temperatura ambiente.

Inactivar para los tubos testigo con 0.5 m.L de 3,5-DNS + 0.25m.L de enzima

Inactivar para los tubos problema con 0.5 m.L de 3,5-DNS a cada tubo

Dejar a baño maría por 5min a 92°C (Desarrollo de color)

Enfriar en baño de hielo y diluir con 2m.L de

agua destilada en cada tubo (Dilución)

Leer en un espectrofotómetro a 540 nm

FIN
 BIBLIOGRAFIAS:
 McKee, T., McKee, J.R. “Bioquímica. Labase molecular la de vida”. 3a. Ed.McGraw
 Hill Interamericana. pp. 185(2003) Colowick, S. P., Kaplan, N. “Methods inenzymology”. 1a. Ed. Editorial
Elsevier(1955)
 Nelson D.L y Cox M.M, Lehninger: Principios de Bioquímica, 4ta Edición, Ed.: Omega, 2006, págs.