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Laboratorio N° 7

Electiva Disciplinar

Actividad enzimática (Reacción con H2O2)

1. Introducción
Las enzimas son conocidas por ser catalizadores biológicos de naturaleza proteica, que
favorecen o aceleran las reacciones bioquímicas. La actividad enzimática es estudiada en
el equilibrio, en donde ya no existe un cambio neto en la concentración del sustrato o de
producto. Igual que en la catálisis convencional las enzimas que actúan como catalizadores
tienen la capacidad de ayudar a disminuir la energía de activación y de esta manera poder
permitir que se produzcan las reacciones. Las enzimas no son consumidas en la reacción y
estas no alteran la naturaleza de la reacción. En la figura se puede observar el
favorecimiento empleando una enzima como catalizador

2. Objetivos
 Evaluar el efecto de la concentración de sustrato
 Determinar la cinética catalítica en reacciones en donde se emplean enzimas
como catalizador
3. Prelaboratorio
 Que es un homogenado
En el fraccionamiento celular La primera fase consiste en romper la membrana
plasmática. Este proceso se denomina homogeneización y la disolución resultante
es un homogenado celular o extracto crudo.
http://www.ehu.eus/biofisica/pdf/practica_2.pdf
 Cuáles son las ventajas y desventajas de emplear la catálisis enzimática
Mayor velocidad de reacción: La velocidad de una reacción catalizada por enzimas es 106 a 1012
veces mayor que la de una no catalizada y varios órdenes de magnitud mayor que la reacción
correspondiente catalizada químicamente.

Condiciones de reacción suaves: Las reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren a


temperaturas bajo los 100ºC, presión atmosférica y pH cercano a la neutralidad. En contraste, las
catalizadas químicamente requieren temperatura y presión elevadas y pH extremos.

Gran especificidad de reacción: Las enzimas tienen una mucho mayor especificidad que las
reacciones catalizadas químicamente respecto de los sustratos y sus productos. En las reacciones
enzimáticas no hay productos secundarios.

Capacidad de regulación: La actividad catalítica de muchas enzimas varía en respuesta a


sustancias diferentes del sustrato.

file:///C:/Users/USUARIO/Downloads/Enzimolog_a%20(1).pdf

 Como se vería afectada una reacción enzimática variando el pH?

Los enzimas poseen grupos químicos ionizables (carboxilos -COOH; amino -NH2; tiol -SH; imidazol,
etc.) en las cadenas laterales de sus aminoácidos. Según el pH del medio, estos grupos pueden
tener carga eléctrica positiva, negativa o neutra. Como la conformación de las proteínas depende,
en parte, de sus cargas eléctricas, habrá un pH en el cual la conformación será la más adecuada
para la actividad catalítica. Este es el llamado pH óptimo.

La mayoría de los enzimas son muy sensibles a los cambios de pH. Desviaciones de pocas décimas
por encima o por debajo del pH óptimo pueden afectar drásticamente su actividad. Así, la pepsina
gástrica tiene un pH óptimo de 2, la ureasa lo tiene a pH 7 y la arginasa lo tiene a pH 10. Como
ligeros cambios del pH pueden provocar la desnaturalización de la proteína, los seres vivos han
desarrollado sistemas más o menos complejos para mantener estable el pH intracelular: Los
amortiguadores fisiológicos.

http://www.ehu.eus/biomoleculas/enzimas/enz22.htm

 Realice un diagrama de flujo de la practica


Materiales y Reactivos

7 Tubos de ensayo Balón aforado de 50 mL


Pipeta Espatula
Pipeteador KMnO4 0,1 N
Bureta H2O2
Vaso de precipitado Catalasa (papa)
Vidrio de reloj H2SO4
HCl NaOH

4. Procedimiento
a)
 Marcar 7 tubos con el tiempo de reacción como 0 seg, 10 seg, 30 seg, 60 seg, 120
seg, 180 seg, 360 seg.
 Adicionar 7 mL de H2O2 al tubo 1
 Adicione 1 ml de catalasa o un trozo de papa si no se cuenta con el reactivo
 Siga la reacción por el tiempo mostrado en la marca del tubo de ensayo
 Una vez termino el tiempo de reacción, adicione 7 ml de H2SO4
 Si se empleó un trozo de papa como fuente de enzima retírela del tubo de ensayo
 Titule la reacción obtenida con una solución de KMnO4 0,1 N hasta obtener un
viraje a rosa (registre sus observaciones)
 Repita el procedimiento con cada uno de los tubos a diferente tiempo de reacción
b)
 Tome 3 tubos de ensayo
 Al primero adiciónele 0,7 ml de H2O2, un trozo de papa y 7 ml de NaOH
 Al segundo tubo 0,7 ml de H2O2, un trozo de papa y 7 ml de HCl
 Al tercer tubo 0,7 ml de H2O2 y un trozo de papa
 Compare el efecto del pH en las tres reacciones
5. Cuestionario
 Cuál es el papel del ácido sulfúrico en el experimento?
 Que otro tipo de muestras pueden emplearse para realizar esta práctica?
 Que sucedería si se realiza la prueba empleando una temperatura de 80°C?
 Determine la cinética de reacción