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RESUMEN
De actividad enzimtica:
El trmino cintica enzimtica
implica el estudio de la velocidad de
una reaccin catalizada por una
enzima y los efectos que pueden
tener factores como los inhibidores.
Uno de los principales estudios que
se realizan en una enzima es medir
el efecto en la velocidad de la
reaccin cuando se modifican las
concentraciones del sustrato y se
mantienen
constantes
la
concentracin de enzima, el pH, la
fuerza inica del medio, la
temperatura, entre otros. Se evala
la influencia de estos factores en la
reaccin catalizada por enzimas con
la finalidad de determinar los
intermediarios en una reaccin y el
papel que juegan en la reaccin
enzimtica, es decir, para predecir
mecanismos de reaccin. Es
esencial
entender
estos
mecanismos
para
desarrollar
nuevas herramientas moleculares,
por
ejemplo,
para
combatir
enfermedades en las que se conoce
a la enzima que la produce.
Tambin es usual medir la actividad
enzimtica con diferentes sustratos
para entender su especificidad o
bien, medir la actividad de la enzima
de diferentes tejidos u organismos
para entender cmo las diferencias
en actividad estn relacionadas con
la funcin y/o la fisiologa del
organismo del que proceden.
De pH
El pH es un indicador de acides o
basicidad de una sustancia.
Los cidos y las bases tienen una
caracterstica que nos deja poder
KEYWORDS
Enzymatic activity:
Enzyme, ionic strength, pH, reaction
catalyst, substrate.
PH:
Indicator, acidity, basicity, neutral
substance, alkaline, hydrogen.
INTRODUCCION
De actividad enzimtica:
Las clulas poseen compuestos
qumicos
que
controlan
las
reacciones que ocurren en su
interior. La sustancia que controla la
velocidad a la que ocurre una
reaccin qumica sin que la clula
sufra dao alguno ni se destruya se
conoce como catalizador. Las
enzimas son sustancias (protenas)
que actan como catalizadores en
las clulas y hacen posibles las,
reacciones que ocurren en las
clulas disminuyendo la cantidad de
energa de activacin que se
necesita. Las enzimas tambin
controlan la velocidad a la que
ocurre la reaccin para que la
energa se libere a una temperatura
que no haga dao al organismo. Las
miles de reacciones que constituyen
el metabolismo de los seres vivos
estn bajo control de miles de
enzimas.
Diferentes
enzimas
controlan diferentes reacciones. La
sustancia sobre la cual acta una
enzima se llama Sustrato: Al ocurrir
una reaccin el sustrato se
convierte en uno o ms productos
nuevos. Las enzimas no se
consumen en las reacciones y se
pueden volver a utilizar. Sin
embargo una enzima particular
acta solo sobre un sustrato
especfico, as que una enzima solo
puede controlar un tipo de reaccin
MATERIALES Y REACTIVOS
De actividad enzimtica:
Laboratorio: beakers, tubos de
ensayo, bao mara, gradilla, pinzas
para tubos de ensayo, pipetas,
probetas, cinta para rotular.
Figura 1.
0 ml.
Ext. H.
1 ml.
2 ml.
Ext. H. Ext. H.
4 ml.
Ext. H.
2 ml.
H2O2
4 ml.6 ml.
H2OH
2 2O2
2 ml. extracto de
hgado
Parte 3: preparar 3 tubos de ensayo
con 2 ml de extracto de hgado cada
uno. Al primero agregar 2 ml de
H2O2 con calor, al segundo a
temperatura ambiente agregar la
misma cantidad de la misma
solucin y al tercero agregar la
misma cantidad de la solucin pero
este en un bao de hielo de por lo
menos 15 minutos previos. Como lo
muestra la figura 3. Describir lo
observado.
Cmo
afecta
la
temperatura la velocidad de una
reaccin enzimtica?
Figura 3.
Calor
2 ml. H2O2
2 mi. De H2O2
1 ml.
H2O2
2 ml.
H2O2
5 gotas
Amoniaco
5 gotas
Sol. Salina
2 ml.
H2O2
2 ml.
H2O2
Figura 5.
1 ml.
Ext. H.
2 ml. H2O2
5 gotas
cido actico
1 ml.
1 ml.
Ext. H. saliva
2 ml. almidon
Agitar por 3 o 4
minutos y luego
agregar 5 gotas
de lugol.
2 ml.
H2O2
2 ml.
H2O2
1 ml.
saliva
Parte 2:
En un segundo momento se realiz
el mismo procedimiento pero se
hizo una variacin con respecto al
sustrato y el volumen de hgado
quedo en la misma medida (2ml)
aqu la presencia de la enzima fue
con la medida media (2ml).
Parte 3:
Comparacin de colores:
Sustancia
Agua de mar
Orina diabtica
Leche pura
Leche magnesio
Cerveza
Alka seltzer
Limn
Gaseosa
Jugo artificial
Clara de huevo
Azcar
Vinagre
Detergente
Caf
Suero fisiolgico
Valor PH
7
5
7
10
4
7
2
3
3
10
7
2
8
6
5
DISCUSION
Los enzimas son biomolculas
especializadas en la catlisis de las
reacciones qumicas que tienen
lugar en la clula. Son muy eficaces
como catalizadores ya que son
capaces de aumentar la velocidad
de las reacciones qumicas mucho
ms que cualquier catalizador
artificial conocido, y adems son
altamente especficos ya que cada
uno
de
ellos
induce
la
transformacin de un slo tipo de
sustancia y no de otras que se
puedan encontrar en el medio de
reaccin.
Diferentes factores
ambientales pueden afectar a la
actividad enzimtica. Destacaremos
dos: el pH y la temperatura. El pH
es otro factor que influye en la
actividad enzimtica, debido a que
el pH influye en la ionizacin de los
grupos
funcionales
de
los
aminocidos que forman la protena
enzimtica. Cada enzima realiza su
accin dentro de un determinado
intervalo de pH, dentro de este
intervalo habr un pH ptimo donde
la
actividad
enzimtica
ser
mxima. Por debajo del pH mnimo
o por encima del pH mximo el
enzima se inactiva ya que se
desnaturaliza. En la mayora de las
enzimas el pH ptimo est prximo
a la neutralidad, aunque hay
excepciones. La mayora de los
enzimas presentan un pH ptimo
para el cual su actividad es mxima;
por encima o por debajo de ese pH
la actividad disminuye bruscamente.
El efecto de la temperatura
CONCLUSION
ACTIVIDAD ENZIMATICA
Este trabajo permiti que se
aprendiera
que
la
actividad
enzimtica tiene una secuencia para
actuar, en la cual la enzima acta
sobre el sustrato dando un
producto. Tambin se conoci que
la enzima es un catalizador
biolgico que mejora la activacin
qumica en una reaccin.
PH
La medicin del pH es muy
importante en nuestras vidas
cotidianas, tanto para saber el grado
2. Realice
una
breve
descripcin de la forma en
que se puede inhibir la
actividad de una enzima.
R// Factores que afectan la
actividad enzimtica.Concentracin del sustrato.- A
mayor concentracin del sustrato, a
una concentracin fija de la enzima
se obtiene la velocidad mxima.
Despus de que se alcanza esta
velocidad, un aumento en la
concentracin del sustrato no tiene
efecto en la velocidad de la
reaccin.
Concentracin
de
la
enzima.- Siempre y cuando haya
sustrato disponible, un aumento en
la concentracin de la enzima
aumenta la velocidad enzimtica
hacia cierto lmite.
Temperatura.- Un incremento de
10C duplica la velocidad de
reaccin, hasta ciertos lmites. El
calor es un factor que desnaturaliza
las protenas por lo tanto si la
temperatura se eleva demasiada, la
enzima pierde su actividad.
PH.- El pH ptimo de la actividad
enzimtica es 7, excepto las
enzimas del estmago cuyo pH
ptimo es cido.
Presencia de cofactores.- Muchas
enzimas
dependen
de
los
cofactores, sean activadores o
coenzimas
para
funcionar
adecuadamente. Para las enzimas
que
tienen
cofactores,
la
concentracin del cofactor debe ser
igual o mayor que la concentracin
de la enzima para obtener una
actividad cataltica mxima.
3. Est usted de acuerdo con la
interaccin enzima-sustrato
es anloga a lo de una
cerradura y su llave. Explique
su respuesta.
R// Este smil fue utilizado por Emil
Fischer
para
describir
la
complementariedad
geomtrica
entre el sustrato (llave) y la enzima
(cerradura). Cuando el sustrato ha
encajado en el centro activo queda
constituido el complejo enzimasustrato.
Siguiendo la teora si estaramos de
acuerdo, ya que segn esto cada
sustrato es especfico para cada
enzima y viceversa, as como una
llave para una cerradura.
R//
Este factor presenta dos
efectos contrapuestos, por un lado
el aumento de temperatura produce,
de forma general, un aumento en la
velocidad de cualquier reaccin
qumica; pero por otro lado, las
enzimas
experimentan
desnaturalizacin y prdida de
actividad
al
superar
una
determinada temperatura. En este
caso resulta ms difcil determinar
como en el pH una temperatura
ptima, y las curvas de actividad
presentan un incremento inicial de
actividad ms pronunciado para
posteriormente
al
irse
desnaturalizando,
decrecer
la
velocidad de reaccin.
5. A qu se debe que una
enzima actu mejor a un
determinado pH y sea
inactiva a otro? Explique.
R// Todas las enzimas tienen en su
estructura primaria aminocidos con
grupos
radicales
ionizables.
Dependiendo del pH del medio en el
que se encuentren pueden no tener
carga, o por el contrario estar
cargados,
bien
positiva
o
negativamente. Estas cargas sirven
para estabilizar la conformacin
natural de la protena y cuando el
pH las cambia, tambin se modifica
la estructura, llevando en ltimo
extremo a la desnaturalizacin de la
protena, y en el caso de las
enzimas a la prdida de actividad.
Dependiendo del medio dnde deba
ejercer su accin cataltica, cada
enzima tendr su conformacin ms
adecuada, y por lo tanto su mxima
actividad, alrededor de un valor
concreto de pH, que recibe el
nombre de pH ptimo. El cambio,
bien sea hacia valores ms altos o
ms
bajos
provocar
disminucin de la actividad.
una
Preguntas complementarias
De pH:
1. En que rango de pH
considera que es efectivo un
sistema amortiguado: cerca
de su pk o en cualquier
rango. Explique por qu?
R// El pH de una solucin
reguladora depende del pK y de la
relacin
Base/cido.
El
pK
determina el rango de pH til de la
solucin y la relacin Base/cido
define la distancia del pH al pK. La
capacidad reguladora es la mxima
cantidad de cido o base que una
solucin buffer puede neutralizar,
depende del pH de la solucin y de
la concentracin.
2. Porque
el
sistema
bicarbonato en el plasma se
expresa
como
bicarbonato/co2.
R// El bicarbonato es un tampn
fundamental en el organismo y
normalmente est presente en los
fluidos biolgicos como bicarbonato
sdico (siendo el sodio el principal
ion
positivo
en
los
fluidos
extracelulares).
3. En el principal sistema
regulador del pH sanguneo,
bicarbonato/carbnico tiene
caractersticas
especiales
que hacen que no sea un
buen sistema amortiguador in
vitro. Cules son?
R// El pH normal de la sangre se
sita entre 7,35 y 7,45, lo que
corresponde a una [H+] en torno a