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4. EVALUACIÓN DE FACTORES QUE

INFLUYEN EN LA ACTIVIDAD
ENZIMÁTICA
INTRODUCCIÓN

L
as enzimas son moléculas orgánicas capaces
de catalizar reacciones bioquímicas mediante
la disminución de la energía de activación que
se requiere para que la reacción se lleve a cabo.
Sin las enzimas, los procesos metabólicos que se
llevan a cabo dentro de las células tardarían mucho
tiempo y por lo tanto los períodos de respuesta de
adaptación al medio extracelular serían muy largos
y tal vez incluso incompatibles con la vida. Muchas
enzimas obedecen la teoría de la cinética
enzimática propuesta en 1913 por Leonor Michaelis
y Maud Menten. En ella se establece que durante
una reacción catalizada por una enzima, ésta Energía de activación en una reacción química.
reacciona reversiblemente con el sustrato para 3fsaIBD0bOo/T4YG3zmnbjI/AAAAAAAAAkc/WNAgayDZutU/s1600/200
Fuente de la imagen: http://4.bp.blogspot.com/-

formar un complejo enzima-sustrato. 70924klpcnafyq_71.Ges.SCO.png

Posteriormente este complejo participa en una

reacción como reactante para dar origen a un producto y a la enzima libre y activa, lista para
participar en una nueva reacción.

Existen varios factores que influyen en la actividad ee una enzima sobre su sustrato, es decir, que
afectan la velocidad con la que aparece producto en una unidad de tiempo. Dentro de estos se
cuentan la concentración de sustrato, la temperatura y el pH.
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Efecto de la concentración de sustrato sobre la actividad enzimática

La teoría de la cinética enzimática propuesta por

Leonor Michaelis y Maud Menten, establece que
durante una reacción catalizada por una enzima,
esta reacciona reversiblemente con el sustrato para
formar un complejo enzima-sustrato.
Posteriormente este complejo participa en una
reacción como reactante para dar origen a un
producto y a la enzima libre y activa, lista para
participar en una nueva reacción.

Se puede afirmar, que la velocidad de una reacción

enzimática depende de la concentración de
sustrato mientras la enzima no se encuentre
saturada.
El estudiar cómo influye este factor en la actividad
enzimática a nivel de laboratorio se torna difícil ya
que la concentración de sustrato varía durante el
Efecto de la concentración del sustrato sobre la
velocidad inicial de una reacción enzimática. Vmáx:
velocidad máxima, Km: concentración de sustrato a
la cual se alcanza la mitad de la Vmáx.
Fuente de la imagen:
http://perso.wanadoo.es/sancayetano2000/biologia/images/Cinenzima.gif

curso de la reacción.
Efecto del pH sobre la actividad enzimática

La estructura tridimensional de una enzima determina su sitio catalítico y, por lo tanto, su actividad,
esta estructura terciaria se encuentra estabilizada por enlaces covalentes y no covalentes que
existen entre los grupos R de los aminoácidos.

Las enzimas poseen grupos químicos ionizables en las cadenas

laterales de sus aminoácidos, y estos grupos pueden tener
carga eléctrica positiva, negativa o neutra, según el pH del
medio.

Existe un pH en el cual la conformación de la enzima será la

más adecuada para ejercer su actividad catalítica, este es el
denominado pH óptimo.

Los cambios de pH modifican las cargas de los grupos R de los pH óptimo.

Fuente de la
aminoácidos e interfiere con su estabilidad estructural imagen:http://bibliotecadigital.ilce.edu.mx/sit
tridimensional lo que provoca una pérdida parcial o total de su es/ciencia/volumen2/ciencia3/059/imgs/f6p43.
gif
actividad.

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

Para toda enzima existe una temperatura denominada temperatura óptima, a la cual la velocidad
de la reacción es máxima. A temperaturas inferiores a la óptima, la frecuencia de choques entre la
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enzima y el sustrato es baja y, por tanto, la velocidad de reacción también lo es, y de igual forma,
si se incrementa la temperatura la frecuencia de choques será mayor y se favorece la reacción.

En general, el aumento de la temperatura acelera la reacción química, por cada 10°C de

incremento, la velocidad de reacción se duplica. Pero, si la temperatura es muy elevada, se
hidrolizan los enlaces que estabilizan su estructura terciaria y cuaternaria, y como consecuencia se
produce la desnaturalización de la proteína con la pérdida de su actividad catalítica.

COMPETENCIA

Explicar cómo los factores evaluados afectan el funcionamiento de una enzima a nivel fisiológico de
manera responsable, teniendo en cuenta los parámetros de la ciencia médica.

DESEMPEÑO DEL ESTUDIANTE

Contrasta el efecto de las variaciones de pH y temperatura con la velocidad de la reacción

enzimática.
Infiere la importancia del mantenimiento del pH y temperatura a nivel biológico para garantizar
la actividad enzimática.
Ilustra mediante un gráfico cómo influyen factores como el pH y la temperatura en la actividad
de la enzima.
Explica ante el grupo cómo se podría afectar la actividad de una enzima por la alteración de
factores como el pH y la temperatura a nivel fisiológico.
 Valora las opiniones de sus compañeros en las reflexiones grupales y las incorpora en su
actuación.

MATERIALES Y EQUIPOS
Solución de HCl de 0,001M
Solución de HCl de 0,01M
Solución de HCl de 0,1M
Solución de HCl de 1 M
Solución de Glucosa de 100 mg/dl
Reactivo GOD-POD para la determinación enzimática de Glucosa
Hielo
Pipeta de 5 ml
Micropipeta de 10-100 µl
Pipeteadores
Puntas amarillas
7 tubos de ensayo
Cubetas para espectrofotómetro
Baño serológico
Espectrofotómetro

PROCEDIMIENTO

Efecto de la temperatura sobre la actividad enzimática

1. Tome 7 tubos de ensayo y rotúlelos como:

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Blanco
Patrón
Muestra
0°C
TA Temperatura ambiente
37°C
80°C
2. Adicione 1 ml de reactivo de glucosa en cada tubo.
3. Incube cada tubo por 5 minutos a la temperatura correspondiente. El blanco no se incuba.
4. Sin sacar el tubo del sitio de incubación adicione 10 µl de solución de glucosa de 100 mg/dl,
mezcle y mantenga a la temperatura seleccionada al menos 5 minutos.
5. Mientras incuba, calibre el espectrofotómetro con el blanco (a 500 nm).
6. Una vez haya incubado los tubos, rápidamente lea la absorbancia en el espectrofotómetro. La
absorbancia en este caso no es directamente proporcional a la concentración de la muestra (en
todos los casos se usó el mismo patrón). En este experimento la absorbancia es un indicador
de la actividad enzimática. Registre los datos obtenidos.

Efecto del pH sobre la actividad enzimática

1. Tome 7 tubos de ensayo y rotúlelos como

Blanco
Patrón
Muestra
0,001 M
0,01M
0,1 M
 1M

2. Adicione 2 ml de reactivo de glucosa en cada tubo. En el Blanco y patrón, adicione solo 1 ml de

reactivo.
3. Adicione a cada tubo la solución de HCL de la concentración con la que rotuló el tubo.
4. Adicionar 10 µl de solución de glucosa de 100 mg/dl, mezcle e incube a 37°C por 5 minutos.
5. Mientras incuba, calibre el espectrofotómetro con el blanco (a 500 nm).
6. Una vez haya incubado los tubos, rápidamente lea la absorbancia en el espectrofotómetro. La
absorbancia en este caso no es directamente proporcional a la concentración de la muestra (en
todos los casos se usó el mismo patrón). En este experimento la absorbancia es un indicador
de la actividad enzimática. Registre los datos obtenidos.

INVITACIÓN AL ESTUDIANTE

Para complementar los conceptos y procedimientos estudiados durante la actividad de aprendizaje

seleccione la(s) pregunta(s) que Ud. desee reforzar, investigue al respecto y confronte sus
resultados con los de sus compañeros.

Grafique los resultados obtenidos en el ensayo sobre cómo influyó el pH en la actividad

enzimática.
Grafique los resultados obtenidos en el ensayo cómo influyó la temperatura en la actividad
enzimática
¿Qué significa que el pH puede afectar la velocidad de reacción de las enzimas?
¿Qué significa que la temperatura puede afectar la velocidad de reacción de las enzimas?
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RESULTADOS Y DISCUSIÓN

La discusión de la práctica se realizará mediante un cuestionario, que encontrará en la plataforma

AVA B_learning UDES, en el enlace con el nombre de la práctica. Allí encontrará las instrucciones a
seguir para desarrollar cada práctica.

PROCESO DE EVALUACIÓN

Durante la práctica de laboratorio al estudiante se le realizará un proceso de evaluación

diagnóstica, continua y sumativa.

BIBLIOGRAFÍA

MATHEWS, Christopher. Bioquímica. Madrid: Pearson. 2002. 3 ed. 1335 p. ISBN 8478290532.
CAMPBELL, Mary K. Bioquímica. 4 ed. México: Thomson. 2004. 725 p. ISBN 0-534-39181-8
MURRAY, Robert. Harper Bioquímica Ilustrada. 17 ed. México: Manual Moderno. 2007. 692 p.
ISBN 970-729-258-X.
BOYER, Rodney. Conceptos en bioquímica. México: International Thomson. 2000. 694 p.
ISBN 970-686-009-6
SALVE MARTÍNEZ, María Luisa., et al. Manual de laboratorio clínico Básico. 3 v. Santafé de
Bogotá: McGraw-Hill / Interamericana. 2001. ISBN 958-41-0119-6.
MEISENBERG, Gerhard. Principles of medical biochemistry. 2 ed. Philadelphia: Mosby Elsevier.
2006. 678 p. ISBN 9780323029421.
MELO RUÍZ, Virginia. Bioquímica de los procesos metabólicos. 2 ed. Barcelona: Editorial
Reverte. 2007. 406 p. ISBN 9686708618.

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