PRÁCTICA NO 13

EFECTO DE ATROPINA Y PILOCARPINA SOBRE LOS RECEPTORES MUSCARÍNICOS

1. EVALUACIÓN DE CONOCIMIENTOS PREVIOS

No sé Lo sé Soy capaz de
Nada Poco Lo sé en explicarlo
forma
N   ÍTEM regular

(+ ó -)

1 ¿Qué es la acetilcolina?

2 ¿Qué es un anticolinérgico ?

3 ¿Qué es una vasoconstricción colinérgica??

4 ¿Para qué se usa atropina?

5 ¿Qué es un agonista colinérgico?

2. FUNDAMENTO

A pesar de que Langley y Dale habían postulado ya el concepto de neurotransmisor químico

a principios del siglo XX, fue Otto Loewi quien en 1921 demostró, mediante un sencillo
experimento, la existencia de un mediador químico al estimular la inervación autonómica del
corazón de una rana. Esta sustancia fue caracterizada químicamente en 1929 y se le
denominó acetilcolina, pues su estructura química resulta ser de gran simplicidad, un éter
del ácido acético y la colina. Éste fue el inicio de la gran aventura científica de la señalización
química de una célula a otra y del descubrimiento de los neurotransmisores

Los receptores muscarínicos están presentes en diversos órganos y tejidos en la periferia

(tejido cardiaco, músculo liso y glándulas exocrinas) y dentro del sistema nervioso central. En
el cerebro, los receptores muscarínicos están presentes en terminales sinápticas, regulando
la liberación de neurotransmisores autorreceptores y heterorreceptores. Poseen, asimismo,
una localización somatodendrítica en diversos tipos de neuronas, tanto colinérgicas como de
otros tipos. Estos receptores se pueden clasificar, según su afinidad por pirenzepina, en dos
tipos, denominados como M1, que son de alta afinidad y predominantes en el cuerpo
estriado, el hipocampo y la corteza cerebral, y los de tipo M2, de baja afinidad y localizados
en la corteza cerebral.

Por su parte, los M3 han sido identificados mediante la utilización de [3H]-4-DAMP.

La autorradiografía de los M4 y M5 aún no ha sido desarrollada; sin embargo, se han
realizado estudios de biología molecular, mediante los cuales se han identificado al menos
cinco genes diferentes denominados m1, m2, m3, m4 y m5, que codifican para receptores
muscarínicos. Los subtipos m1 y m2 parecen coincidir con los M1 y M2, caracterizados por su
afinidad a pirenzepina. Los m3 y m5 presentan afinidad con [3H]-4-DAMP, en tanto que el
m4 es de alta afinidad a pirenzepina.

Estos receptores pertenecen a la denominada superfamilia de receptores acoplados a

proteínas G; todos son receptores de membrana con una estructura común, con siete
dominios transmembranales y los extremos, tanto amino como caboxilo terminal, dentro y
fuera de la neurona, respectivamente.
El tercer bucle intracelular es el más largo y constituye el nexo de unión con las proteínas G,
cuyo acoplamiento es necesario para la activación de los mecanismos efectores.
Así, los sistemas de receptores dependientes de proteínas G están formados por tres
proteínas distintas: la proteína receptora o de reconocimiento, la proteína G y la proteína
efectora.
Los receptores acoplados con proteínas G, entre los que se encuentran los muscarínicos,
pueden ejercer gran variedad de acciones intracelulares, según el tipo de proteína G a la que
se encuentren acoplados, que incluyen respuestas rápidas o lentas, con activación/inhibición
de diversas vías de mensajeros intracelulares o segundos mensajeros. Las cuatro vías
principales están mediadas por AMP cíclico,GMP cíclico, iones Ca++ y por productos de la
hidrólisis de fosfato de fosfatidilinositol.

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3. CAPACIDADES A DESARROLLARSE DURANTE LA PRÁCTICA

 Enuncia el tipo y localización de los receptores muscarínicos en el ser humano

 Explica el mecanismo de acción de la acetilcolina y atropina sobre el receptor

muscarínico

 Explica los efectos farmacológicos de los agonistas colinérgicos.

 Interpreta el efecto de acetilcolina y atropina sobre presión sistólica (ABP), presión

diastólica (ABP) y ritmo cardiaco (HR) de la rata del simulador

5. DESCRIPCIÓN DE LOS PROCEDIMIENTOS

Utilizaremos el simulador RatCVS, que se describe a continuación

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Descripción:
RatCVS es una simulación de una preparación experimental de rata picada para investigar las
acciones de los fármacos en el sistema cardiovascular. RE Shipley desarrolló el modelo
experimental de "rata picada" a fines de la década de 1940 para investigar la acción de los
fármacos sobre la presión arterial y la frecuencia cardíaca. Se utilizó ampliamente en las
décadas posteriores para caracterizar la acción de los fármacos que actúan sobre el sistema
cardiovascular y los tipos de receptores que median las respuestas a los fármacos y sigue
utilizándose hasta el día de hoy.
"Descabello" se refiere a la destrucción de las vías de la médula espinal mediante la inserción
de una varilla de metal en la columna vertebral, cortando todas las conexiones nerviosas
entre el cerebro y el sistema cardiovascular. En una rata normal, el sistema reflejo del
barorreceptor central complica enormemente la interpretación de los cambios observados
en la presión arterial y la frecuencia cardíaca causados por la administración de un
fármaco. Cualquier aumento de la presión arterial inducido por fármacos provoca una
disminución refleja de la frecuencia cardíaca, lo que dificulta separar el efecto directo del
fármaco del reflejo indirecto. Al eliminar estos reflejos barorreceptores centrales, el
descabello facilita mucho el estudio de los efectos de los fármacos. Además, el alambre de la
médula espinal permite la estimulación eléctrica selectiva de las vías del nervio simpático
hacia el corazón y la vasculatura.

Esta simulación le permite observar trazos de presión arterial, presión ventricular izquierda,
presión venosa, frecuencia cardíaca y fuerza contráctil en un registrador gráfico simulado,
aplicar una variedad de medicamentos diferentes y observar sus efectos

Técnica operatoria

TUTORIAL: respuesta cardiovascular a la estimulación nerviosa y administración de

acetilcolina y atropina por vía intravenosa en la rata anestesiada y desmedulada.

A. Unos 10 s después de comenzar el registro, una vez estabilizadas las medidas, inyecta 20
µg/kg de acetilcolina (menú Standard Drugs  Acetylcholine) y observa la variación en las
constantes del animal. Mide el tiempo que tarda en recuperar los valores basales. Cuando
esto suceda, procede a estimular eléctricamente el nervio vago (menú Nerve stimulation 
Vagus nerve). En cada caso, anota los resultados obtenidos al pasar el cursor en forma de
cruz por el registro y razona tus observaciones:

B. Repite de nuevo el proceso (File  New rat) y, 5 s después de haber inyectado la misma
dosis de acetilcolina, administra 0,5 mg/kg de atropina (Standard Drugs  Atropine). Anota
los resultados y razona tus observaciones:

C. Selecciona una nueva rata (File  New rat) y repite el proceso invirtiendo el orden de
adición de los fármacos, es decir, primero la atropina y después la acetilcolina. Prueba

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distintas dosis, anota los resultados y represéntalos gráficamente en forma de histogramas
utilizando una hoja excel sin olvidar etiquetar los ejes y hacer constar las unidades:

Presión arterial (ABP) Presión arterial (ABP) Ritmo cardíaco

sistólica diastólica (HR)
Intervención
[latidos/min]
[mm Hg] [mm Hg]
(beats/min)
Control – antes del fármaco      
Después de acetilcolina (ACh)
     
20 µg/kg
Cambio debido a ACh 0 0 0
       
Tras estimulación nervio vago      
Cambio debido a estim. vagal 0 0 0
       
Atropina (ATR) 0,5 mg/Kg      
Después de ACh 20 µg/kg en
     
rata atropinizada
Cambio neto 0 0 0
 
Tras estimulación nervio vago
     
en rata atropinizada
Cambio neto 0 0 0

6. PREGUNTAS PARA EL ANALISIS DE LOS DATOS OBTENIDOS

1. ¿Qué manifestaciones produce la administración de acetilcolina? Indica por qué

2. ¿Por qué se antagonizan las manifestaciones colinérgicas con atropina?
3. ¿Por qué se usa atropina en caso de envenenamiento por organofosforados?

7. BIBLIOGRAFÍA

- Staff of the Department of Pharmacology, University of Edinburgh. Pharmacological

Experiments on Isolated preparations. 2nd Ed. E&S Livingstone. Edinburgh. 1971.
- Staff of the Department of Pharmacology, University of Edinburgh. Pharmacological
Experiments on Intact preparations. 2nd Ed. E&S Livingstone. Edinburgh. 1970.
- Borges, R.; Grafenstein, HV. and Knight, DE. (1989).Tissue selectivity of endothelin. Eur. J.
Pharm. 165, 223-230.

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