PRACTICA No 6

PROTEINOGRAMA ELECTROFORETICO
1. EVALUACION DE CONOCIMIENTOS PREVIOS

No sé Lo sé Soy capaz
Nada Poco de
Lo sé en
explicarlo
forma
N   ÍTEM regular

(+ ó -)

1 ¿De qué está compuesto una proteína?

2 ¿Qué cargas tiene la proteína?

3 ¿Qué es electroforesis de proteínas?

4 ¿Qué son las globulinas?

5 ¿Qué es la albumina?

2. FUNDAMENTO

La expresión de proteínas es la cantidad de

proteínas que elabora una célula para ser liberada
al torrente sanguíneo. El estudio de la expresión
proteica puede brindar información sobre un tipo
específico de patología. La electroforesis de las
proteínas del suero o proteinograma es un método
semicuantitativo de análisis de las proteínas,
frecuentemente solicitado en muchos laboratorios
clínicos. Diversas enfermedades cursan con alteraciones cualitativas o cuantitativas de la
sangre, orina o líquido cefalorraquídeo u otros líquidos biológicos. Aprovechando sus
características fisicoquímicas, pueden separarse distintas fracciones que se comportan
análogamente frente a la electroforesis, pero con funciones biológicas muy diferentes. A
pesar de ello, las alteraciones de las distintas fracciones reconocidas en el proteinograma
tienen gran interés diagnóstico por su asociación con diferentes enfermedades.
Para la separación de las proteínas del suero se han utilizado a lo largo del tiempo
diferentes soportes (papel, acetato de celulosa, agarosa) que han ido mejorando la calidad
de la separación. En estos métodos se depositaba la muestra sobre el soporte y se sometía
a éste a una corriente eléctrica de tal manera que las proteínas se separaban en función
de su carga eléctrica; posteriormente, se sumergía el soporte en un colorante (negro
amido, rojo Congo, azul d Coomassie) para que éste se fijase a las diferentes fracciones
electroforéticas y, posteriormente, se cuantificaban de forma semicuantitativa en un
densitómetro.
Recientemente, se dispone de un sistema de realización de los proteinogramas, utilizando
una técnica diferente, denominada electroforesis capilar, donde la muestra se hace pasar
por un capilar y las proteínas se separan debido a un fuerte voltaje electroosmótico y las
bandas se estiman mediante la medición a 214 nm del enlace peptídico.
La introducción de esta tecnología ha permitido aumentar la calidad del proteinograma y
una mayor rapidez, comodidad y precisión.

3. VALORACION DEL PROTEINOGRAMA

Hay que tener presente que el proteinograma proporciona la información
correspondiente a las proteínas mayoritarias de cada banda y que, por tanto, la
información que parece aportar sobre una proteína específica puede estar distorsionada
en presencia de concentraciones aumentadas de las otras proteínas que comparten la
zona de migración. La valoración cuantitativa de cada una de las principales proteínas
plasmáticas se realiza por otros procedimientos analíticos (electroforesis capilar).
En el proteinograma realizado por electroforesis capilar y/o acetato de celulosa se definen
las siguientes bandas:

3.1. Banda de la Prealbúmina

Es una banda difusa, por delante de la albúmina, poco visible y que está constituida por
dos proteínas con un gran interés para la valoración nutricional como son la prealbúmina
y la proteína fijadora del retinol. Por sus bajas concentraciones, se requieren técnicas
inmunológicas para valorar su cuantía. En electroforesis de acetato de celulosa no se
observa esta banda.

3.2 Banda de la Albúmina

Es la banda más importante del proteinograma, representando más del 50% del mismo en
condiciones normales. Está integrada por la proteína más abundante del plasma. Su
interés se centra en las hepatopatías (cirrosis) y nefropatías (síndrome nefrótico), donde
está disminuida.
Se eleva en situaciones de deshidratación y por prolongación del tiempo del torniquete a
la hora de la extracción de la muestra. Una alteración cualitativa sin significado patológico
que se puede presentar es la bisalbuminemia, que puede tener un origen genético o
adquirido (generalmente debido a la toma de medicamentos).

3.3 Banda de la α1-globulina

Esta banda está formada por un conjunto de proteínas como la a1-antitripsina, la a1-
glucoproteína, la transcortina, la a1-lipoproteína, y la a-fetoproteína, siendo las dos
primeras las que representan el mayor porcentaje de la misma. Esta banda se eleva en los
procesos inflamatorios agudos, por lo que las proteínas que la integran se denominan
reactantes de fase aguda. Mayor interés tiene su disminución, ya que indica un déficit de
a1-antitripsina, sobre todo en la deficiencia homocigota (PiZZ) en donde la concentración
plasmática de esta proteína está por debajo del 10-15% de su concentración en los sujetos
sanos (MM). En ausencia de proceso inflamatorio agudo, los sujetos homocigotos SS y los
heterocigotos MS, MZ y SZ tienen alrededor del 50% de las concentraciones encontradas
en los sujetos con el fenotipo MM.

3.4 Banda de la α2-globulina

Las tres principales proteínas que la integran son la a2-macroglobulina, la haptoglobina y
la ceruloplasmina. Se comportan también como reactantes de la fase aguda positivos; la a-
2 macroglobulina tiene una función de antiproteasa sérica; la haptoglobina se une a la
hemoglobina en los procesos hemolíticos intravasculares donde está disminuida y la
ceruloplasmina tiene una misión transportadora del cobre, siendo sus concentraciones
bajas en la enfermedad de Wilson.

3.5 Bandas de las β-globulinas

Las proteínas más importantes son la transferrina, la hemopexina, la b-lipoproteína y el c3
nativo. La transferrina se eleva en situaciones de déficit de hierro y desciende en el
síndrome nefrótico y las hepatopatías; la hemopexina desciende en las anemias
hemolíticas y se eleva en las reacciones agudas; el c3 desciende en el LES activo y se eleva
como reactante de fase aguda positivo.
En esta banda pueden aparecer otras extras correspondientes a la hemoglobina de los
sueros hemolizados, el fibrinógeno (cuando el proteinograma se realiza con plasma) y las
gammapatías monoclonales, sobre todo IgA.

3.6 Banda de la γ-globulina

Está formada por las tres principales inmunoglobulinas: IgG, IgA e IgM; en ausencia de una
gammapatía monoclonal, su estimación electroforética solamente aportará información
sobre la concentración sérica, sobre todo de la IgG. Su elevación puede ser policlonal,
donde todas las inmunoglobulinas se elevan dando lugar a una curva simétrica, o bien
monoclonal donde aparece un pico correspondiente a la síntesis de una sola cadena de
inmunoglobulinas. La elevación policlonal de la IgA da lugar a lo que se llama puente βγ-
globulina.
Las elevaciones policlonales suelen deberse a una activación de la inmunidad humoral,
inducida por múltiples mecanismos patológicos, como las infecciones, las enfermedades
autoinmunes, las hepatopatías y los procesos inflamatorios agudos y crónicos.
Las elevaciones monoclonales se deben, sobre todo, al mieloma múltiple, la enfermedad
de Waldeströn, la enfermedad de las cadenas pesadas y, con mucha frecuencia, a las
denominadas gammapatías monoclonales de significado incierto (GMSI)

4. PATRONES ELECTROFORETICOS ASOCIADOS A DIVERSAS ENFERMEDADES

La expresión de las proteínas séricas se ven alteradas en el embarazo y en las siguientes

patologías clínicas:

- Cirrosis hepática
- Síndrome nefrótico
- Inflamación
- Gammapatía monoclonal
- Anemia ferropenica
- Inanición
- Paraproteína
- Respuesta inmediata a estrés
- Respuesta tardía a estrés

5. GLOSARIO DE TERMINOS

AMINOACIDOS
Son moléculas orgánicas con un grupo amino (-NH2) en uno de los extremos de la molécula y
un grupo carboxilo (-COOH) en el otro extremo. Son la base de las proteínas, sin embargo tanto
estos como sus derivados participan en funciones celulares diversas.

PROTEINAS

Constituyen un tipo de biomoléculas formadas por cadenas de aminoácidos unidos por

enlace peptídico, con gran variedad estructural y enorme diversidad de funciones biológicas.
Posee grupos aminos y carboxilos, pueden actuar negativa o positivamente en función del
medio en que se hallen inmersas.

ELECTROFORESIS
Método de separación de moléculas sobre un soporte en un campo de corriente eléctrica, de
tal manera que la separación se da en función de su carga, peso y tamaño. Actualmente
existen muchos tipos (agarosa, poliacrilamida, papel, acetato de celulosa y en disolución)
PROTEINOGRAMA
Es una electroforesis de las proteínas del suero. El proteinograma es un método
semicuantitativo o cuantitativo de análisis de las proteínas del suero a través de
electroforesis en acetato de celulosa o electroforesis capilar.

PREALBUMINA

Proteína producida en el hígado. La prealbúmina ayuda a transportar las hormonas tiroideas y

vitamina A por el torrente sanguíneo. También ayuda a regular la manera en que el cuerpo usa
la energía. Si los niveles de prealbúmina están más bajos de lo normal, eso puede ser un signo
de desnutrición.

ALBUMINA

GLOBULINAS
Son un grupo de proteínas que se sintetizan en el hígado. Existen alfa-1-globulinas, alfa-2-
globulinas, beta-globulinas y gamma-globulinas.

6. CAPACIDADES A DESARROLLARSE DURANTE LA PRÁCTICA

- Define electroforesis
-Identifica la expresión de proteínas mediante un simulador de electroforesis online.
-Interpreta proteinogramas normales y alterados.

7. MATERIALES
- simulador de la expresión de proteínas: https://phet.colorado.edu/sims/html/gene-
expression-essentials/latest/gene-expression-essentials_es_PE.html.
- simulador del proceso de electroforesis de proteínas en gel de poliacrilamida:
http://biomodel.uah.es/lab/SDS-PAGE/inicio.htm
- simulador de proteinograma electroforético en acetato de celulosa:
http://biomodel.uah.es/lab/acetato/sericas.htm
6. DESARROLLO DE LA PÁCTICA
Haciendo uso del simulador de electroforesis en acetato de celulosa para un
proteinograma sérico normal vs. Anormales, responder las siguientes preguntas.

responde las preguntas según los resultados del proteinograma.

1. ¿Cuál es la proteína más lenta en la electroforesis?

albúmina    globulinas α1    globulinas α2    globulinas β    globulinas γ  

2. ¿Cuál es la proteína con un menor punto isoeléctrico?

albúmina    globulinas α1    globulinas α2    globulinas β    globulinas γ  

3. ¿Qué ocurre si aumentamos el volumen de muestra aplicado?
Las bandas se separan...
   mejor  peor  igual

4. y al mismo tiempo... La intensidad de las bandas y la altura de los picos en el

densitograma...

  es mayor  es menor  no cambia

5. ¿En qué patología se produce un mayor aumento de las gammaglobulinas?

síndrome nefrótico  anemia ferropénica  cirrosis hepática  infección

6. ¿Qué fracción proteica se eleva más en una infección?

albúmina    globulinas α1    globulinas α2    globulinas β    globulinas γ

7. En la respuesta a estrés, al pasar de la etapa temprana a la tardía, ¿qué fracción
proteica se eleva?

albúmina    globulinas α1    globulinas α2    globulinas β    globulinas γ

8. y ¿qué fracción proteica se reduce?

albúmina    globulinas α1    globulinas α2    globulinas β    globulinas γ

9. En la inanición hay una reducción generalizada de todas las proteínas. Modificando el
volumen de muestra aplicado a la tira de acetato, investiga si alguna fracción proteica
se ve más afectada que las demás o bien todas se reducen por igual.

todas por igual  la albúmina se reduce menos que el resto  la albúmina se

reduce más que el resto   las globulinas β se reducen más que el resto   las
globulinas α1 y α2 se reducen más que el resto
10. Un paciente refleja la siguiente analítica: 72 g/ℓ de proteína total, 53% de albúmina,
2,4% de α1, 9,1% de α2, 24% de β, 11,4% de γ. ¿Cuál puede ser su situación?

sano  infección  cirrosis  anemia ferropénica  paraproteína 

estrés  síndrome nefrótico

PREGUNTAS DE INVESTIGACIÓN
1 ¿De qué está compuesto una proteína?
2 ¿Qué cargas tiene la proteína?
3 ¿Qué es electroforesis de proteínas?
4 ¿Qué son las globulinas?

5 ¿Qué es la albumina?