Microbiología General.

(Laboratorio metodos de medición de masa microbiana.)

Profesora:
Beatriz Álvarez.

Estudiantes:
Irene Vidal
Isabella Tovar.

Universidad de Córdoba
Sede Berastegui
Ciénaga de oro- Córdoba
2020-2
 LABORATORIO METODOS DE MEDICIÓN DE MASA MICROBIANA
1. Realice un cuadro sinóptico sobre ventajas y desventajas de las
técnicas de Medición del Crecimiento Microbiano en Cámara de
Neubauer, Medición del Crecimiento Microbiano por Densidad óptica, y
Medición del Crecimiento Microbiano por Peso Seco Celular
 CAMARA DE NAUBER.

CAMARA DE NAUBER.

VENTAJAS DESVENTAJAS

La ventaja de este tipo de no se difieren los

recuento son el equipo sencillo y microorganismos vivos de los
escaso que se requiere muertos

la rapidez para obtener los es tedioso

resultados

no es útil para recuento de

la facilidad para observar la poblaciones con baja
morfología de los concentraciones de
microorganismos presentes. bacterias.
  Medición del Crecimiento Microbiano por Densidad óptica.

Medición del Crecimiento Microbiano

por Densidad óptica.

Ventajas. Desventajas.

Precisas, dentro
Requiere la
de ciertos límites, construcción de una
rápidas curva de calibración.

 Medición del Crecimiento Microbiano por Peso Seco Celular

Peso Seco Celular

Desventajas
Ventajas

esta técnica es utilizada este método es que

para grandes volúmenes componentes volátiles de la
de muestra célula pueden perderse por
el secado y puede existir
alguna degradación.

debido a que diferencias

del orden de los
miligramos representan También la muestra seca puede
el peso de una gran recobrar humedad durante el
numero de bacterias. pesado, principalmente si el
ambiente tiene una humedad relativa
alta.
2. A partir de una suspensión densa de levadura Kloeckera apiculata en
caldo YNB, se prepararon 10 diluciones a las que se mide la
absorbancia (600 nm), y se determinaron la densidad celular y el peso
seco, obteniéndose los siguientes resultados:

 Elabore un gráfico de células/mL vs. absorbancia

 Elabore un gráfico de mg de células/mL vs. absorbancia

 Explica la utilidad de estas dos gráficas
3. Posteriormente, se inoculó un matraz con 100 ml de caldo ynb con
aproximadamente 106 levaduras/ml. El matraz se incubó a 37°c con una
agitación de 100 r.p.m. periódicamente se extrajeron submuestras de 2 ml del
matraz para medida de la absorbancia:

Realiza la curva de crecimiento de la levadura. Diferencia las

diferentes etapas de la curva
4. Consulte y explique otros métodos utilizados para la medición del
crecimiento microbiano
Determinación de ácidos nucleicos.
Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una
población microbiana. S e determina la cantidad existente de un
determinado acido nucleico generalmente ( DNA ) y a partir de este dato se
estima la masa de la población.
Determinación de nitrógeno.
Es una técnica que permite determinar indirectamente la masa de una
población bacteriana.
Existen distintas para determinar la cantidad de nitrógeno que contiene una
muestra con relación con el compuesto que se requiera determinar. Puede
analizarse el nitrógeno no proteico mediante el NO3-, NO3-, NH4+, el
nitrógeno proteico mediante absorción de UV, Reacción de Biuret, Reaccion
de Lowry, o el nitrogeno total mediante la digestión Kjeldahl.

Método turbidímetro.
Son muy usados en la práctica cotidiana de laboratorio. L a base común de
estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz dispersa o
transmitida a través de un cultivo microbiano. Las suspensiones dispersan la
luz al igual que cualquier partícula pequeña suspendida en agua (efecto
tindall) la dispersión de la luz es dentro de ciertos limites, proporcional a la
masa del cultivo.
 Cuantificación de células bacterianas mediante la medida indirecta de
turbidez.

La turbidez se presenta en una muestra porque las células presentes allí

dispersan la luz que atraviesa la solución. A mayor número de células
presentes habrá mayor dispersión de luz y por lo tanto habrá un aumento de
la turbidez. Esta puede medirse con un fotómetro ( nefelómetro ) siendo sus
unidades fotométricas.

Cuantificación de ATP por bioluminiscencia.

El adenosin trifosfato (ATP) es una sustancia que esta contenida

típicamente en la biomasa de origen animal, vegetal y microbiano.
Determina directamente la presencia de material biológico en superficies, en
líquidos u otras muestras.
Por lo tanto puede ser usado como indicativo directo de la cantidad de
microorganismo especifico en estudio de crecimiento bacteriano.
Est tcnic consiste en la reacción del ATP con la LUCIFERINA en presencia
de la enzima luciferasa, presente en las luciérnagas (Roman, 2006).

La cantidad de ATP puede ser usada como control microbiológico en la

industria de alimentos, como indicador de la cantidad de material biológico
sobre las superficies en contacto con los alimentos y como controles de
higiene en otros campos donde sea primordial proporcionar una medida del
estado de limpieza y eficiencia.

5. Que son los colorantes supravitales y para que se usan

Las tinciones vitales y suprevitales: son aquellas que se practican sobre

células que están vivas, mediante la introducción de colorantes en la
circulación de un organismo.
Ejemplos: el verde Jano, el azul metileno, el azul de crecilo, violeta el azul
de Prusia. Son teñidas para diferenciarse de las demás.