ESCUELA SUPERIOR POLITÉCNICA DE CHIMBORAZO

FACULTAD DE CIENCIAS
ESCUELA DE CIENCIAS QUÍMICAS
CARRERA DE INGENIERIA EN BIOTECNOLOGÍA
AMBIENTAL

1. TEMA: CURVA DE CRECIMIENTO MICROBIANO POR DENSIDAD

ÓPTICA

INTEGRANTES: CÓDIGO
Lorena Guevara 2849

FECHA DE ENTREGA:
04 de diciembre del 2020
CURSO:
Noveno “A”
PERIODO.
Octubre 2020 - marzo 2021
 2. OBJETIVO

2.1. OBJETIVO GENERAL

 Generar la curva de crecimiento microbiano por el método de densidad óptica.

2.2. OBJETIVOS ESPECÍFICOS

 Comprender el fundamento en el cual se basa el método de densidad óptica
 Describir las diferentes fases de crecimiento microbiano presentes en la curva
 Interpretar los datos de densidad óptica para efectuar la curva de crecimiento

3. FUNDAMENTACIÓN TEÓRICA
3.1. Curva de crecimiento microbiano
l cultivo discontinuo o cultivo batch es el método de cultivo más simple, consiste
en un recipiente cerrado en el que no existe aporte de nutrientes ni egreso de
productos. Cuando se siembran microorganismos en un medio de cultivo
adecuado, la concentración de biomasa aumenta, empleando los nutrientes que le
aporta el medio de cultivo para producir nuevas células. Este proceso continúa
hasta que algún nutriente del medio de cultivo se agota (sustrato limitante), se
produce la acumulación de alguna sustancia inhibidora formada por los propios
microorganismos, etc. el crecimiento se detiene y finaliza el batch. La evolución
del cultivo con el tiempo sigue una curva típica denominada “curva de crecimiento
microbiano”. Los sucesos que tienen lugar durante la misma pueden separarse en
cuatro fases (Fig. 1). (Aguilar et ál, 2015)

Figura 1: Curva de crecimiento microbiano

Fuente: (Aguilar et ál, 2015)

3.2. Parámetros que caracterizan el crecimiento de un cultivo

El conocimiento de la cinética de crecimiento y de la producción de metabolitos
resulta fundamental en el tratamiento cuantitativo de los procesos
biotecnológicos ya que permite predecir el curso de una fermentación, evaluar
las velocidades, el rendimiento y la productividad. El conocimiento de estos
parámetros permite optimizar el proceso productivo. (Aguilar et ál, 2015) Estos
parámetros son:
a) Velocidad específica de crecimiento máxima
b) Tiempo de duplicación o de generación
c) Cálculo del coeficiente de rendimiento
d) Cálculo de la máxima concentración de biomasa

3.3. Métodos para medir el crecimiento microbiano

Recuento microscópico directo: Se utilizan cámaras de recuento especiales

(Neubauer, Petroff-Hausser). Son portaobjetos excavados de volumen
perfectamente conocido cuando se sella herméticamente con cubreobjetos
resistentes. (Sánchez et ál, 2007)

Figura 2: Recuento microscópico directo

Fuente: (Sánchez et ál, 2007)

Método del Recuento en Placa: Se basa en la capacidad de una célula viable de

formar una colonia en un medio de cultivo adecuado Standard (PCA). Por lo
tanto se cuentan colonias, cada una proviene de una sola célula viable. (Célula
viable: capaz de dividirse y formar células hijas.) (Sánchez et ál, 2007)

Figura 3: Método del Recuento en placa

 Fuente: (Sánchez et ál, 2007)

Método del NMP: Se efectúan diluciones decimales de la población inicial, las

que se incuban a temperatura adecuada en tubos conteniendo medios de cultivos
líquidos standards. Se observa el desarrollo de las distintas diluciones. (Sánchez
et ál, 2007)

Determinación del peso seco: A partir de una suspensión celular, se separan las
células por centrifugación, se lavan y secan en estufa hasta peso constante.
(Sánchez et ál, 2007)

Medida de la turbidez de una suspensión celular: Es un método óptico y

representa la técnica más rápida para medir la masa celular de los
microorganismos unicelulares. Esta técnica se basa en el hecho de que pequeñas
partículas difractan (o dispersan) la luz incidente en forma proporcional a su
concentración (dentro de ciertos límites). (Sánchez et ál, 2007)

Figura 4: Medida de la turbidez de una suspensión celular

Fuente: (Sánchez et ál, 2007)

Determinación de la concentración celular: por valoración del contenido de
nitrógeno Entre los principales constituyentes del material celular se encuentran
las proteínas y como el nitrógeno es un componente fundamental de estas, puede
estimarse la población de células en función del contenido de nitrógeno en las
células. El contenido de nitrógeno en la célula es del 12 % en peso seco.
(Sánchez et ál, 2007)

4. METODOLOGÍA
4.1. MATERIALES Y EQUIPOS

 Incubadora
 Microscopio
 Espectrofotómetro
 Autoclave
 Puntas estériles
 Agua destilada
  Guantes de látex
 Cajas de petri
 Erlenmeyer

4.2 PROCEDIMIENTO

Se toma el medio de
Luego se toman
cultivo previo al
Inicio muestras a intervalos
inoculo como blanco
de tiempo conocidos
de absorbancia

Repetir el
Se añade la muestra en
procedimiento para Engiajar la cubeta con
la cubeta y se procede
cada una de las agua destilada para
a la lectura en el
muestras tomadas a eliminar interferencias
equipo
dsitinto tiempo

La medicion se realiza
Si el cultivo presenta Los datos obtenidos se
en un abosrbancia > 1 se someten a un factor de
espectofotometro a
realiza la dilusion de la conversion o se realiza
una longitude de onda
muestra. la curva de calibracion
de 600nm

Conocido el factor de
conversion se
Fin extrapola la curva de
crecimiento

ELABORADO POR: GUEVARA, L. ESPOCH 2020

5. RESULTADOS
Luego de realizar la medida de absorbancia de las muestras tomadas a distintos
tiempos, los datos fueron sometidos a un factor de conversión. Donde se obtuvo que
le factor utilizado para E. coli a 600nm es de 0.6, es decir 0.6x10^9celulas/mL por
cada unidad de absorbancia. Conocido el factor de conversión se obtiene la curva de
crecimiento. Cualquier punto de esta curva puede ser extrapolado a número de
células por mL.
6. CONCLUSIONES

 Se generó la curva de crecimiento microbiano mediante el método de densidad

óptica a través de la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a
través de un cultivo bacteriano.
 El fundamento del método de densidad óptica es el paso de un haz de luz a
través de una suspensión bacteriana, la reducción en cantidad de luz transmitida
a consecuencia de la difracción es pues una medida de masa bacteriana presente.
 Las fases de crecimiento presentes en la curva se desarrollan desde una fase de
adaptación al ambiente, a este intervalo se conoce como fase de latencia o
crecimiento. El cambio en la fase logarítmica o exponencial la bacteria se
divide y duplica su población a intervalos regulares, el número de bacterias
aumenta. Finalmente, los metabolitos del cultivo se agotan o aparece una
sustancia toxica, pasa la llamada fase estacionaria y la fase de muerte, en
donde el número de células que muere se hace mayor.
 Una vez que se obtienen los datos de densidad óptica en los tiempos de interés
se debe utilizar un factor de conversión que nos indica cuantas células por
mililitro equivale a una unidad de absorbancia en caso de desconocerlo se debe
consideras una curva de calibración de densidad óptica contra números de
células o unidades formadoras de colonias. Para estandarizar el número de
células se deben utilizar previamente técnicas como fuente viable y así
determinar el cambio del eje x es decir las células con respecto al eje y, es decir
densidad óptica

7. CUESTIONARIO
¿Cuál es la ventaja y desventaja de realizar el crecimiento celular por este
método?
Ventaja: Preciso, dentro de ciertos límites, rápida y fácil de utilizar. Representa la
técnica más rápida para medir la masa celular de los microorganismos.
Desventaja: es un método poco preciso, que sólo se emplea cuando no hace falta
exactitud.

8. BIBLIOGRAFÍA
 Aguilar, J., Espinoza, M., Cabanillas, J., Ávila, I., García, A., Julca, J.& Linares,
G. (2015). Evaluación de la cinética de crecimiento de saccharomyces cerevisiae
 utilizando un medio de cultivo a base de melaza de caña y suero lácteo.
Agroindustrial Science, 5(1), 37-47.
 Ricardo, M. C. J., Sánchez, L. B. R., & Sifontes, K. F. (2007). Cinética del
crecimiento microbiano en residuos de la industria azucarera por fermentación
en estado sólido para la producción de alimento animal. Revista de Producción
Animal, 19(S1), 41-45.