INGENIERÍA DE BIORREACTORES

D.C. MIGUEL ANGEL ZAMUDIO JARAMILLO

REPORTE DE PRÁCTICA DE LABORATORIO #1

“DETERMINACIÓN DE CONCENTRACIÓN CELULAR POR PESO SECO”
Delgado Landa Jennifer Paola
Departamento de Ingeniería Química y Bioquímica del Instituto Tecnológico de Morelia. Correo Electrónico: jenniferpaola98@gmail.com

Resumen
En la presente práctica fue posible el realizar diversas suspensiones de levadura las cuales se hicieron pasar a través de un
microfiltro que fue previamente secado y pesado para posteriormente someterlo a secado con la suspensión filtrada incluida
para determinar el peso final seco transcurrido tras 4 h. Dichas suspensiones fueron además determinadas las
concentraciones presentes a partir de la medición de su absorbancia.

los métodos indirectos en los cuales no requieren

Información la observación directa al microscopio de los
microorganismos ni su incubación para su
Keywords:
Peso seco, determinación de biomasa, suspensiones, crecimiento (Arnaíz C., et. al., 2000).
microorganismos, absorbancia. Como bien menciona John Pringle para cada
Objetivo objetivo que se busca se debe utilizar un tipo
distinto de medición. Si por un lado se busca el
 El alumno determinará la concentración determinar la turbidez de diversas suspensiones
celular de una muestra por medio de la se utiliza un método de absorbancia, mientras
técnica de peso seco y mediante una curva que si se desea el número total de biomasa se
de absorbancia vs peso seco. determina por medio de peso seco.

Introducción
La determinación de la biomasa es uno de los
factores más importantes dentro de los
bioprocesos. Dicha determinación permite la
comprensión de la eficiencia de cada proceso.
Permite además establecer tasas de producción,
de consumo de nutrientes y cálculos de balances
de masa dentro de los procesos biológicos.
Son varios los métodos utilizados para la
cuantificación de la biomasa pudiendo
clasificarlos en métodos directos e indirectos.
Dentro de los métodos directos encontramos los
que utilizan métodos de observación de los
microorganismos como el conteo en cámara de
Neubauer o de Petroff-Hauser. Teniendo además
Materiales y métodos
Como paso inicial durante la práctica se
realizaron diversas soluciones a distintas
concentraciones del microorganismo de interés,
en este caso de levadura de pan. Para ello se
rotularon 4 tubos a los cuales se les añadieron
0.012, 0.021, 0.031 y 0.050 g de levadura a cada
uno respectivamente. Enseguida de esto, se
realizó la disolución de dicha materia en 50 mL
de agua destilada.
Para la determinación de peso seco del
microorganismo se inició esperando al completo
secado de los microfiltros (que fueron
introducidos en el secador por parte del personal

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de servicio de laboratorio justo al inicio de la
PESO SECO PESO SECO
TUBO LEVADURA VOLUMEN CONCENTRACIÓN
MICROFILTRO MICROFILTRO ABSORBANCIA
NO.1 EN POLVO (g) FILTRADO (mL) BIOMASA (g/mL)
INICIAL (g) FINAL (g)
práctica). 1 0.01200 0.69700 0.69900 3.00000 0.00067 0.45300
2 0.02100 0.69800 0.70200 2.20000 0.00182 0.58500
Mientras dichos microfiltros pasaban por el 3 0.03100 0.69900 0.70500 2.50000 0.00240 0.67900
4 0.05000 0.70100 0.70600 1.50000 0.00333 0.87800
proceso de secado se procedió a realizar la
determinación de biomasa por el método de
absorbancia.
En donde se llenaron celdas de plástico de cada
una de las soluciones preparadas hasta la marca
indicada en la celda y se llevó a cabo la medición
de la absorbancia en el espectrofotómetro a una
longitud de onda de 600 nm. Durante este
proceso se utilizó como blanco una solución de
agua destilada carente de microorganismos.
Transcurrido el tiempo de secado, se sacaron los
microfiltros del secador uno por uno para así
determinar el peso seco de cada uno, tomando
para ello el primer dato registrado por la balanza Gráfico 1. Curva de absorbancia vs peso seco de la levadura
analítica considerando que posteriormente se panificadora.
registraría un peso humedecido del filtro. Seguido
de esto, se pasó 1 mL de cada una de las La presente gráfica posee congruencia al tener
suspensiones preparadas a través de un una R2=0.9779, considerando entonces que la
microfiltro para cada suspensión (en el apartado relación entre el método de determinación de
de resultados y discusión se registra el verdadero biomasa por absorbancia y el de determinación
valor filtrado de cada suspensión) y mediante su por peso seco presentan una relación lineal. Con
acomodo en una bandeja de papel se introdujeron ello decimos que los resultados obtenidos a partir
en el secador una vez más. 4 h tras dicho paso se entonces de la interpolación de la gráfica o el uso
determinó el peso seco de cada uno de los de la ecuación (obtenida por regresión lineal y
microfiltros. mínimos cuadrados en el programa de Excel)
para el cálculo de la biomasa a partir de su
Resultados y discusión medición en el espectrofotómetro sería de alta
Durante la práctica se tomaron los siguientes fiabilidad.
valores mostrados en la Tabla 1 de levadura
utilizada, el peso inicial y final del microfiltro Se procedió además a realizar la comparación con
(transcurridas las 4 h) así como el volumen los demás equipos de laboratorio con respecto a
filtrado a través del microfiltro en (mL). Dichos los valores obtenidos.
valores permitieron el cálculo de la concentración
de biomasa por cada mililitro filtrado a través de
los microfiltros (peso seco). A partir de los pesos
secos y las absorbancias medidas de cada una de
las soluciones de levadura mostradas en la misma
tabla.

Tabla 1. Valores registrados durante la práctica de

laboratorio.

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Gráfico 2. Comparación de curva de absorbancia vs peso
seco de la levadura panificadora en los diferentes equipos
de laboratorio.
Se puede observar claramente el variado
comportamiento de las gráficas obtenidas por los
equipos. En el caso del equipo 1 y 4 poseen una
tendencia bastante irregular en sus resultados
teniendo un coeficiente de determinación de
0.7017 y 0.816 respectivamente. Lo cual resulta
en una baja fiabilidad de la relación obtenida. Por
otro lado, si bien la relación aún carece de
exactitud se puede decir que el coeficiente de
determinación para los equipos 2 y 3 es
considerablemente bueno, de 0.988 y 0.9731
respectivamente.
Comparando los resultados además con
determinaciones por peso seco de la levadura de
pan reportados en la literatura encontramos que
Angulo-Montoya et. al., reportan un
comportamiento similar al hacer la comparación
entre peso seco y la absorbancia a 600 nm. Por lo
que se cree la determinación realizada en la
presente práctica fue correcta.
Gráfico 3. Comparación de peso seco contra la
absorbancia a 600 nm. Tomado de Angulo-
Montoya et. al., 2013.
El método de determinación de biomasa por
pesado en seco es simple de realizar, pero
requiere de mucho tiempo y es hasta cierto punto
laborioso. A pesar de ser ampliamente utilizado,
puede ser sumamente erróneo si las células
contienen materiales insolubles como el
encontrado comúnmente en los procesos de
fermentación. Además de esto, dicho método no
distingue entre las células viables de las muertas
(Madrid y Felice, 2005), lo cual disminuye su
confianza y las áreas de aplicación en la que
puede ser la mejor opción de determinación de
biomasa.
Además de estas desventajas reportadas,
pudimos encontrar dentro de la práctica que
existen múltiples factores que afectan la
determinación de biomasa a partir del peso seco.
La primera de ellas es la falta de exactitud que
poseen las balanzas analíticas dentro del
laboratorio, las cuales ya sea que no se
encuentran debidamente calibradas, carecen de
sensibilidad durante el pesaje o inclusive no
poseen la cantidad de decimales necesarios para
realizar una medición adecuada.
Se pudo notar además el que el pesado de los
microfiltros inicialmente no fuera el correcto,
esto debido a que debía ser pesado
inmediatamente después de sacarlo del secador,
con el propósito de que no tuviera humedad
durante la medición. Pero fue notable el hecho de
que muchas de las veces el traslado del
microfiltro desde el secador hasta la balanza era
tardado, a pesar de destinarse 3 personas para el
pesado, ya que la conglomeración de personas de
otros equipos dificultaba la logística de dicha
acción. Por lo que sería recomendable realizar
una mejor distribución de los equipos y las
balanzas a utilizar con el propósito de agilizar el
procedimiento y obtener mediciones más
certeras.
Otro inconveniente encontrado dentro de la
práctica resulta en el pasado de las suspensiones
a través de los microfiltros, los cuales
probablemente no estaban correctamente lavados
y no pasaban los volúmenes requeridos para la
práctica. Por ello se recurrió a pasar volúmenes
menores a través de ellos como en el caso de la
solución de 0.021 g de levadura en la cual sólo fue
posible filtrar 2.2 mL de solución. Como se ve
claramente existe una disminución del volumen
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filtrado a medida que aumenta la concentración
de las suspensiones utilizadas.

Conclusión
Dentro de la presente práctica fue posible
distinguir las diversas ventajas y desventajas que
presentan los métodos de determinación de
biomasa de los microorganismos. Por lo que
como Ingenieros Bioquímicos nos veremos en la
necesidad de utilizar métodos quizá no muy
exactos en nuestra área de trabajo debido a falta
de material y recursos, o inclusive por la
simplicidad de dichos métodos. Sin embargo, es
de vital importancia el conocer las posibles áreas
de error en cada método para así tener el debido
cuidado en la medición o inclusive poder mejorar
las deficiencias encontradas.

Por lo que el conocimiento de la determinación

de biomasa por peso seco sirve como base de
conocimiento de los otros métodos, donde a pesar
uno de los más sencillos es también uno de los
más utilizados dentro de los artículos de
investigación revisados.

Referencias
Angulo-Montoya C., Ruiz-Barrera O., Castillo Y.,
Marrero Y., Mancillas P.F., Díaz D., 2013.
Dinámica de crecimiento y metabolitos
producidos en la fermentación de la levadura
Candida norvegensis. Revista Cubana de Ciencia
Agrícola 47 (2): ISSN 0034-7485

Arnaíz C., Isac L., Lebrato J., 2000.,

Determinación de la biomasa en procesos
biológicos. Universidad de Sevilla

R.E. Madrid y C.J. Felice. 2005. Microbial

Biomass Estimation. Critical Reviews in
Biotechnology. 25: 97-112.

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